UNIVERSITAS KATOLIK INDONESIA

PERCOBAAN PENETAPAN TOKSISITAS AKUTTujuan Praktikuma. Menjelaskan prinsip cara penentuan LD50 ( lethal dose 50 ) suatu obat dan arti hasil penentuan tersebut.b. Mengetahui cara cara penentuan perbandingan efek obat.Percobaan ini terdiri dari 2 bagian, yaitu:

1. Penetapan toksisitas akut (LD50) obat2. Penentuan perbandingan kekuatan obat anestesi umumPenetapan toksisitas akut (LD50) obat

I. Hewan coba, alat dan obat yang digunakan

Hewan coba: Mencit 16 ekor untuk tiap kelompok mahasiswaAlat-alat: - Spuit 1 cc untuk setiap meja

- Kapas

Obat-obatan: - Larutan prokain dalam 4 tingkat dosis - Larutan lidokain dalam 4 tingkat dosis

II. Tata kerja

Penetapan toksisitas akut

Untuk menentukan dosis letal suatu obat kita dapat mencari :

1. Dosis terkecil yang membunuh hewan coba ( Minimal Lethal Dose )2. Dosis yang membunuh 100% dari sekelompok hewan coba ( Lethal Dose 100 / LD 100)3. Dosis yang membunuh 1% dari sekelompok hewan coba ( Lethal Dose 1 / LD 1 )MLD, LD100 dan LD1 ternyata mempunyai variasi yang besar, sebab itu tidak dapat digunakan sebagai pegangan untuk menentukan toksisitas akut. LD50 yaitu dosis yang menyebabkan kematian pada 50% hewan coba, adalah angka yang mempunyai variasi relatif rendah. Karena itu LD50 sebagai ukuran toksisitas akut paling tepat.

Yang kita lakukan di sini adalah penetapan LD50 obat obat anestesi lokal. Jika dilakukan penetapan LD50 suatu obat baru maka perlu perbandingan dengan obat segolongan yang sudah kita kenal. Penetapan LD50 ini dilakukan menurut metode Thompson-Weil di mana confidence level adalah 95%. Untuk tiap meja disediakan 16 mencit dengan berat kurang lebih 20 gram, dibagi 4 kelompok, masing masing kelompok terdiri dari 4 ekor mencit. Setiap kelompok diberi dosis tertentu. Dosis yang diberi pada setiap kelompok merupakan suatu kelipatan biometrik. Mencit ditimbang untuk perhitungan dosis individu setiap mencit. Obat disuntikan subkutan di antara scapula dengan dosis seperti pada tabel 1. Setelah 2 jam keempat kelompok diobservasi, apakah ada kematian dari mencit percobaan tersebut. Kematian pada kelompok 1,2,3 dan 4 dicatat dan nilai ini disebut r-values. Dari r-values dapat dicari nilai f dan delta f (Tabel 2 ).Untuk menghitung LD50, digunakan rumus di bawah ini :

log LD50 = log D + d (f + 1)2 log m = 2 d.df

Hasil akhir terdapat Range yaitu :Log LD50 2 log m

D = dosis terkecil yang digunakan

d= logaritma kelipatan

K = jumlah kelompok mencit 1. Dalam percobaan ini (4-1)=3

f= dicari pada tabel 2, untuk K=3

df= cari pada tabel 2, untuk K=3

Setiap kelompok terdiri dari 4 ekor mencit dan setiap meja terdapat 4 kelompok.

TABEL 1Dosis prokain dan lidokain untuk masing masing kelompok

ProkainLidokain

KelompokDosis mg/kg BBKelompokDosis mg/kg BB

I400I200

II600II300

III900III450

IV1350IV675

Contoh perhitungan :

Bila saudara menggunakan prokain, dan ternyata setelah observasi selama 2 jam, kelompok I dan II tidak ada yang mati, kelompok III 2 ekor mencit mati dan kelompok IV 4 ekor mati. Jadi r values = 0,0,2,4.

Maka perhitungan LD50 adalah sebagai berikut :

Log LD50 = log D + d (f+1)

D= 400 mg/kg BB

d= log kelipatan dosis, dalam contoh ini 1,5

Untuk r values = 0,0,2,4 pada tabel 2 diperoleh f = 1

df = 0,28868

Jadi log LD50 = log 400 + log 1,5 (1+1)

log LD50 = 2,602 + 0,352 = 2,954

LD50 = 899,4976 mg/kgBB

Untuk mengetahui range LD50 dapat digunakan rumus sebagai berikut :

Log LD50 2 d.df

2,954 2 log 1,5 x 0,28868

2,954 0,1016 = (2,8524 3,0556)

Buat anti log dari harga 2,8524 dan 3,0556 maka ditemukan harga LD50 antara (711,869 1136,58) mg/kg BB.

Tabel 2Hubungan antara kematian masing-masing kelompok dengan f (df), dimana n=4 dan K=3

Nilai rfdelta fNilai rfdelta f

0,0,2,4

0,0,3,4

0,0,4,4

0,1,1,4

0,1,2,4

0,1,3,4

0,1,4,4

0,2,2,4

0,2,3,4

0,2,4,4

0,3,3,4

1,0,2,4

1,0,3,4

1,0,4,4

1,1,1,4

1,1,2,4

1,1,3,4

1,1,4,4

1,2,2,4

1,2,3,4

2,0,2,4

2,0,3,4

2,0,4,4

2,1,1,4

2,1,2,4

2,1,3,4

2,2,2,4

3,0,2,4

3,0,3,4

3,1,1,4

3,1,2,4

0,0,3,3

0,0,4,3

0,1,2,31,00000

0,75000

0,50000

1,00000

0,75000

0,50000

0,25000

0,50000

0,25000

0,00000

0,00000

1,00000

0.66667

0,33333

1,00000

0,66667

0,33333

0,00000

0,33333

0,00000

1,00000

0,50000

0,00000

1,00000

0,50000

0,00000

0,00000

1,00000

0,00000

1,00000

0,00000

1,00000

0,66667

1,000000,28868

0,25000

0,00000

0,35355

0,38188

0,35355

0,25000

0,40825

0,38188

0,28868

0,35355

0,38490

0,35136

0,22222

0,47140

0,52116

0,52116

0,47140

0,58794

0,60854

0,57735

0,57735

0,57735

0,70711

0,81650

0,91287

1,00000

1,15470

1,42421

1,41421

1,82574

0,47140

0,22222

0,608580,1,3,3

0,1,4,3

0,2,2,3

0,2,3,3

0,2,4,3

0,3,3,3

1,0,3,3

1,0,4,3

1,1,2,3

1,1,3,3

1,1,4,3

1,2,2,3

1,2,3,3

2,0,3,3

2,0,4,3

2,1,2,3

2,1,3,3

2,2,2,3

0,0,4,2

0,1,3,2

0,1,4,2

0,2,2,2

0,2,3,2

0,2,4,2

0,3,3,2

1,0,4,2

1,1,3,2

1,1,4,2

1,2,2,2

1,2,3,2

0,2,3,1

0,2,4,1

0,3,3,1

0,1,4,10,66667

0,33333

0.66667

0,33333

0,00000

0,00000

1,00000

0,50000

1,00000

0,50000

0,00000

0,50000

0,00000

1,00000

0,00000

1,00000

0,00000

0,00000

1,00000

1,00000

0,50000

1,00000

0,50000

0,00000

0,00000

1,00000

1,00000

0,00000

1,00000

0,00000

1,00000

0,00000

0,00000

1,000000,52116

0,35136

0,58794

0,52116

0,38490

0,47140

0,70711

0,35355

0,91287

0,79057

0,70711

0,88976

0,91287

1,41421

1,15470

1,82574

1,82574

2,00000

0,57735

0,91287

0,57735

1,00000

0,81650

0,57735

0,70711

1,15470

1,82574

1,41421

2,00000

1,82574

1,82574

1,15470

1,41421

1,41421

Dikutip dari: Biometric, 1952

PENENTUAN PERBANDINGAN KEKUATAN OBAT ANESTESI UMUM

I. Hewan coba, alat dan obat yang digunakan

Hewan coba: 2 ekor mencit untuk setiap rombongan mahasiswa

Alat-alat: - Gelas kimia 600 ml

- Plastik untuk menutup gelas - Karet gelang

- Semprit disposabel

Obat-obatan: - Eter

500 ml - Kloroform 500 ml

Untuk tiap rombongan mahasiswa disediakan tiga bekerglas dari 600 ml, dan di dalamnya diletakkan sepotong kapas. Masukkan seekor mencit ke dalam tiap bekerglas, kemudian bekerglas tersebut ditutup dengan selembar plastik.

Berilah pada tiap-tiap bekerglas tanda yang sesuai dengan anestetikum tersebut di bawah ini, dengan memakai semprit tuberkulin menembus plastik di atas sepotong kapas di dalam bekerglas.

Pada percobaan ini digunakan 2 macam obat, yaitu :

1. Eter

2. Kloroform

Mencit mencit diobservasi dengan teliti. Obat diberikan sebanyak 0,2 ml. Teruskan pemberian anestetikum tiap 5 menit sampai semua hewan mati. Catatlah hasil saudara pada tabel 3, dan hasil hasil dari kelas dalam tabel 4.

TABEL 3KEKUATAN RELATIF OBAT OBAT ANESTESI UMUMAnestetikumWaktu O PermulaanEksitasiKematianAnestetikum yang dipakai (n)

Wkt xIntervalWkt xInterval

Eter

Kloroform

0 = jam pemberian dosis pertama

X= ialah jam timbulnya efek

Interval = dinyatakan dalam menit n= jumlah anestetikum yang diberikan

TABEL 4PENETAPAN VARIASI DARI DOSIS LETALIS OBAT ANESTESI

A. EterB. Kloroform

dosis letal (ml)dosis letal (ml)

X1= rata rata dosis letal eter

X2= rata rata dosis letal kloroform

SD1= standar deviasi eter

SD2= standar deviasi kloroform

n1= jumlah mencit yang digunakan untuk percobaan dengan eter

n2= jumlah mencit yang digunakan untuk percobaan dengan kloroform

df= n1 + n2 2

df= degrees of freedom

X1 X2

t = SD12 + SD22 n1 n2

__

( X X)2

SD = ___________

n - 1

Perbedaan dosis letal agaknya menunjukkan pula perbedaan dalam kekuatan kedua obat anestesi. Pertanyaan yang ingin kita jawab ialah: Apakah perbedaan ini disebabkan oleh perbedaan kekuatan khasiat obat (perbedaan bermakna) atau variasi saja?

Jika kedua obat itu berkhasiat sama kuatnya, masih akan terlihat perbedaan antara kedua harga rata rata; yang disebabkan faktor kebetulan. Untuk menjawab pertanyaan di atas, dihitung dahulu harga t menurut rumus.

Harga t yang didapat dari rumus di atas, dibandingkan dengan tabel distribusi dari t (tabel 6). Pertama dicari harga sebesar (n1 1) + (n2 1) pada kolom degrees of freedom. Kemudian diantara harga-harga t yang terdapat pada degrees of freedom ini dicari t yang paling mendekati t yang telah dihitung. Harga t yang telah ditemukan secara demikian, terletak dalam kolom yang sama dengan harga t (probability) tertentu. Apabila harga p yang didapat secara di atas sama besar atau kurang dari 0,05, maka perbedaan kekuatan antara kedua obat anestesi adalah bermakna. Istilah tabel 5 dengan data mengenai jumlah ml masing masing obat anestesi yang menyebabkan kematian.

TABEL 5PERBANDINGAN DOSIS LETAL RATA RATA

Obat anestesiJumlah mencit (n)Dosis letal rata rata dalam (ml)

Eter

Kloroform

P adalah kemungkinan terjadinya t bila percobaa dilakukan berulang kali. Misalnya nilai t = 2,074

Di dalam statistik ada suatu kesepakatan bahwa suatu kejadian yang sama terjadi 5 kali atau kurang dari pengulangan seratus kali dianggap kejadian yang berbeda bermakna dan bukan karena kebetulan.

Maka dikatakan bila p 0,05, suatu perbedaan adalah bermakna.Tabel 6Distribusi dari T

Degrees of freedomProbability

0.050.020.010.001

112.70631.82063.657636.619

24.3036.9659.92531.599

33.1824.5415.84112.924

42.7763.7474.6048.610

52.5713.3654.0326.869

62.4473.1433.7075.959

72.3652.9983.4995.408

82.3062.8973.3555.041

92.2622.8213.2504.781

102.2282.7643.1694.587

112.2012.7183.1064.437

122.1792.6813.0554.318

132.1602.6503.0124.221

142.1452.6252.9774.140

152.1312.6022.9474.073

162.1202.5842.9214.015

172.1102.5672.8983.965

182.1012.5522.8783.922

192.0932.5392.8613.883

202.0862.5282.8453.850

212.0802.5182.8313.819

222.0742.5082.8193.792

232.0692.5002.8073.768

242.0642.4922.7973.745

252.0602.4852.7873.725

262.0562.4792.7793.707

272.0522.4732.7713.690

282.0482.4672.7633.674

292.0452.4622.7563.659

302.0422.4572.7503.646

312.0402.4532.7443.633

322.0372.4492.7383.622

332.0352.4452.7333.611

342.0322.4412.7283.601

352.0302.4382.7243.591

362.0282.4342.7193.582

372.0262.4312.7153.574

382.0242.4292.7123.566

392.0232.4262.7083.558

402.0212.4232.7043.551

602.0002.3902.6603.460

1201.9802.3582.6173.373

1.9602.3262.5763.201

_1150788807.doc

_1029927934.doc