pengaruh suhu dan waktu penyimpanan terhadap …
TRANSCRIPT
PENGARUH SUHU DAN WAKTU PENYIMPANAN
TERHADAP KADAR VITAMIN C SERTA UJI AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN PADA INFUSED WATER BUAH KIWI
(Actinidia deliciosa (A. Chev) C.F Liang & A.R Ferguson)
MENGGUNAKAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis
SKRIPSI
diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Program Sarjana (S1) pada Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari
Oleh:
SANDRA AMALIA PONTOH
D1A130839
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS AL-GHIFARI
BANDUNG
2017
LEMBAR PENGESAHAN
JUDUL : PENGARUH SUHU DAN WAKTU PENYIMPANAN
TERHADAP KADAR VITAMIN C SERTA UJI
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA INFUSED
WATER BUAH KIWI (Actinidia deliciosa (A.Chev) C.F
Liang & A.R Ferguson) MENGGUNAKAN METODE
SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis
PENYUSUN : SANDRA AMALIA PONTOH
NIM : D1A130839
Setelah membaca skripsi ini dengan seksama, menurut pertimbangan kami telah memenuhi
persyaratan ilmiah sebagai suatu skripsi
Bandung, September 2017
Pembimbing I Pembimbing II
Ginayanti Hadisoebroto M.Si., Apt. Endah Kartikawati, S.Pd., M.Sc
i
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat
dan anugerah-Nya sehingga penulis akhirnya dapat menyelesaikan penulisan
skripsi yang berjudul “PENGARUH SUHU DAN WAKTU PENYIMPANAN
TERHADAP KADAR VITAMIN C SERTA UJI AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN PADA INFUSED WATER BUAH KIWI (Actinidia Deliciosa
(A.Chev) C.F LIANG & A.R FERGUSON) MENGGUNAKAN METODE
SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS”.
Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk menyelesaikan studi
Program Sarjana pada Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Jurusan
Farmasi Universitas Al-Ghifari Bandung.
Dalam mempersiapkan, menyusun dan menulis skripsi penulis mendapat
bantuan, bimbingan dan motivasi dari berbagai pihak, maka pada kesempatan ini
penulis menyampaikan terima kasih kepada :
1. Bapak Dr. H. Didin Muhafidin, S.I.P., M.Si., selaku Rektor Universitas Al-
Ghifari.
2. Bapak Ardian Baitariza, M. Si., Apt selaku Dekan FMIPA Universitas Al-
Ghifari.
3. Ibu Ginayanti Hadisoebroto, M. Si., Apt selaku Ketua Jurusan Farmasi
Universitas Al-Ghifari.
ii
4. Ibu Ginayanti Hadisoebroto, M. Si., Apt dan Ibu Endah Kartikawati, SPd.,
M.Sc selaku Dosen Pembimbing yang telah meluangkan waktu serta
memberikan arahan, bimbingan dan masukan bagi penulis dalam
penyelesaian skripsi ini.
5. Segenap dosen pengajar, staf sekretariatan serta rekan-rekan laboran
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Universitas Al-Ghifari atas
bantuannya dalam menyelesaikan skripsi ini.
6. Orangtua, adik-adik dan suami tercinta, terima kasih atas doa, kasih sayang,
semangat serta dukungan moril maupun materil yang telah kalian berikan
sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
7. Seluruh teman-teman Farmasi Universitas Al-Ghifari, atas kebersamaan
yang telah dilalui bersama.
Akhir kata semoga Allah SWT memberikan rahmat-Nya kepada semua
pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Penulis
menyadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna, untuk itu penulis sangat
mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari pembaca yang diharapkan
dapat memperbaiki skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat memberikan sumbangsih
yang bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
Bandung, September 2017
Penulis
iii
ABSTRAK
Berbagai efek buruk bagi kesehatan yang ditimbulkan oleh minuman instan
seperti minuman bersoda dan minuman kaleng berperasa telah menjadikan infused
water sebagai alternatif minuman yang ramah bagi kesehatan sehingga aman
untuk dikonsumsi sehari-hari. Infused water dengan tambahan potongan buah
yang kaya vitamin C dan antioksidan salah satunya adalah infused water buah
kiwi (Actinidia deliciosa (A.Chev) C.F Liang & A.R Ferguson). Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui pengaruh waktu dan suhu yang berbeda terhadap
kadar vitamin C pada infused water buah kiwi serta mengetahui aktivitas
antioksidan dari ekstrak buah kiwi. Aktivitas antioksidan diperoleh dengan
menggunakan metode penangkal radikal bebas DPPH (1,1 difenil-1-pikrilhidrazil)
dan penetapan kadar vitamin C dilakukan menggunakan metode spektrofotometri
UV-Vis pada panjang gelombang 264 nm. Uji aktivitas antioksidan dan
penetapan kadar vitamin C pada infused water buah kiwi menggunakan vitamin C
sebagai pembanding. Hasil penetapan kadar vitamin C dalam infused water buah
kiwi menunjukan bahwa kadar vitamin C yang tertinggi pada suhu 24-270C
adalah pada jam ke 12 yaitu 61 mg, dan pada suhu 2-50C adalah pada jam ke 6
yaitu 44 mg. Hasil uji aktivitas antioksidan larutan ekstrak diperoleh IC50 sebesar
217,41 ppm dan nilai IC50 vitamin C sebesar 7,8 ppm.
Kata Kunci : Infused Water Buah Kiwi, Vitamin C, 2,2 difenil-1-pikrilhidrazil,
Spektrofotometer UV-Vis, Antioksidan
iv
ABSTRACT
Various adverse effects to health caused by instant drinks such as soft drinks and
canned beverages can make infused water as an alternative health-friendly
beverage so it is safe for everyday consumption. Infused water with additional
pieces of fruit rich in vitamin C and antioxidants one of them is infused water kiwi
fruit (Actinidia deliciosa (A.Chev) C.F Liang & A.R Ferguson). This study aims to
determine the effect of time and temperature different to levels of vitamin C in
kiwi fruit infused water and to know the antioxidant activity of kiwi fruit extract.
Antioxidant activity was obtained by using the DPPH free radical retardant
method (1,1 diphenyl-1-picrylhydrazyl) and the determination of vitamin C
content was performed using UV-Vis spectrophotometric method at 264 nm
wavelength. Test the antioxidant activity and the determination of vitamin C levels
in the infused water of kiwi fruit using vitamin C as a comparison. The result of
determination of vitamin C content in infused water of kiwi fruit showed that the
highest vitamin C level at 24-27 0C was at 12
th time that is 61 mg, and at
temperature of 2-5 0C was at 6
th time that was 44 mg. Result of antioxidant
activity test of extract that obtained IC50 equal to 217,41 ppm and IC50 vitamin C
value equal to 7,8 ppm.
Keywords: Infused Water Kiwifruit, Vitamin C, 2,2 diphenyl-1-picrilhidrazil, UV-
Vis Spectrophotometer, Antioxidant
v
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ......................................................................................... i
ABSTRAK ......................................................................................................... iii
ABSTRACT ........................................................................................................ iv
DAFTAR ISI ....................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ............................................................................................. ix
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... x
BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang ................................................................................ 1
1.2 Identifikasi Masalah ........................................................................ 3
1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................ 3
1.4 Manfaat Penelitian .......................................................................... 3
1.5 Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................... 4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA....................................................................... 5
2.1 Infused Water .................................................................................. 5
2.2 Buah Kiwi ....................................................................................... 6
2.2.1 Klasifikasi .............................................................................. 7
2.2.2.Morfologi ............................................................................... 8
2.2.3 Kandungan ............................................................................. 8
2.2.4 Manfaat .................................................................................. 8
2.3 Vitamin C ........................................................................................ 9
2.3.1 Fungsi Vitamin C ................................................................... 9
2.3.2 Analisis Kadar Vitamin C .................................................... 10
2.4 Radikal Bebas ............................................................................... 12
2.5 Antioksidan ................................................................................... 13
vi
2.5.1 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH ............... 13
2.5.2 IC50 ....................................................................................... 15
2.6 Spektrofotometri UV-Vis .............................................................. 15
2.6.1 Teori Spektrofotometri UV-Vis ........................................... 15
2.6.2 Komponen Spektrofotometri UV-Vis .................................. 16
2.6.3 Penggunaan Spektrofotometri UV-Vis ................................ 17
BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ..................................................... 19
3.1 Bahan Penelitian ........................................................................... 19
3.2 Alat Penelitian ............................................................................... 19
3.3 Metode Penelitian ......................................................................... 19
3.3.1 Pengumpulan Tanaman ........................................................ 19
3.3.2 Determinasi Tanaman .......................................................... 20
3.3.3 Proses Pengolahan Sampel................................................... 20
3.3.4 Penyiapan Larutan Iodin 0,1 N ............................................ 21
3.3.5 Analisis Kualitatif Vitamin C .............................................. 22
3.3.6 Analisis Kuantitatif Vitamin C ............................................ 22
3.3.6.1 Pembuatan Larutan Induk Vitamin C 100ppm ........ 22
3.3.6.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Vitamin C
................................................................................ 22
3.3.6.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Vitamin C ................... 22
3.3.6.4 Penentuan Kadar Vitamin C pada Infused Water Buah
Kiwi ........................................................................ 23
3.3.7 Uji Aktivitas Antioksidan .................................................... 23
3.3.7.1 Pembuatan Ekstrak ................................................... 23
3.3.7.2 Pembuatan Larutan Uji ............................................ 24
3.3.7.3 Pembuatan Larutan DPPH 40ppm dan Larutan Baku
Pembanding Vitamin C .......................................... 24
3.3.7.4 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
40ppm ..................................................................... 24
3.3.7.5 Pengukuran Absorbansi Vitamin C.......................... 25
vii
3.3.7.6 Pengukuran Absorbansi % Penghambat Sampel ..... 25
3.3.7.7 Pengukuran IC50 (Inhibition Concentration 50%) ... 26
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................ 27
4.1 Hasil Determinasi Tanaman ........................................................ 27
4.2 Hasil Uji Kualitatif Vitamin C .................................................... 27
4.3 Hasil Uji Kuantitatif Vitamin C .................................................. 28
4.3.1 Panjang Gelombang Maksimum Vitamin C ........................ 28
4.3.2 Hasil Kurva Kalibrasi Vitamin C ......................................... 29
4.3.3 Hasil Pengukuran Absorban Sampel.................................... 30
4.4 Hasil Uji Aktivitas Antioksidan .................................................. 33
4.4.1 Hasil Pemekatan ................................................................... 33
4.4.2 Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum DPPH . 33
4.4.3 Hasil Pengukuran Absorbansi dan Persentase Penghambatan
Vitamin C terhadap Radikal DPPH ................................... 34
4.4.4 Hasil Pengukuran Absorbansi dan Persentase Penghambatan
Sampel terhadap Radikal DPPH ........................................ 36
4.4.5 Hasil Pengukuran IC50 ........................................................ 36
BAB V. SIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 38
5.1 Simpulan ...................................................................................... 38
5.2 Saran ............................................................................................ 38
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 39
LAMPIRAN ...................................................................................................... 42
viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Infused Water ................................................................................... 6
Gambar 2.2 Buah Kiwi ........................................................................................ 7
Gambar 2.3 Struktur Vitamin C ........................................................................... 9
Gambar 2.4 Reaksi Antara DPPH dan Antioksidan .......................................... 14
Gambar 2.5 Diagram Spektrofotometri UV-Vis ................................................ 16
Gambar 4.1 Reaksi Vitamin C dengan Iodium .................................................. 27
Gambar 4.2 Panjang Gelombang Maksimum Vitamin C .................................. 28
Gambar 4.3 Kurva Kalibrasi Vitamin C ............................................................ 29
Gambar 4.4 Hasil Pemekatan ............................................................................. 33
Gambar 4.4 Panjang Gelombang Maksimum DPPH ......................................... 34
Gambar 4.5 Larutan Vitamin C Pembanding + DPPH ...................................... 35
Gambar 4.5 Kurva Baku Regresi Linier Kadar Vitamin C terhadap Radikal DPPH
........................................................................................................ 35
Gambar 4.6 Kurva Regresi Linier Ekstrak Buah Kiwi terhadap Radikal
DPPH……………… ...................................................................... 36
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 3.1 Rancangan Percobaan Kombinasi Antara Faktor Variasi Suhu (S) dan
Faktor Variasi Waktu (W) ................................................................. 21
Tabel 4.1 Hasil Uji Kualitatif Vitamin C dan Sampel ....................................... 28
Tabel 4.2 Hasil Pengukuran Absorban Larutan Baku Vitamin C pada Panjang
Gelombang Maksimum 264 nm ........................................................ 29
Tabel 4.3 Hasil Perhitungan Kadar Vitamin C pada Infused Water Buah Kiwi
Suhu 24-27 0C .................................................................................... 30
Tabel 4.4 Hasil Perhitungan Kadar Vitamin C pada Infused Water Buah Kiwi
Suhu 2-5 0C ........................................................................................ 31
Tabel 4.5 Hasil Rendemen Ekstrak .................................................................... 33
Tabel 4.6 Hasil Pengukuran Absorban Vitamin C terhadap Radikal DPPH ..... 35
Tabel 4.7 Hasil Pengukuran Absorban Infused Water Buah Kiwi terhadap Radikal
DPPH ................................................................................................. 36
Tabel 4.8 Persamaan Garis Linier dan Nilai IC50 Sampel ................................. 37
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran I. Diagram Alur Penelitian ........................................................... 42
Lampiran II. Hasil Determinasi Tanaman ..................................................... 43
Lampiran III. Pemekatan Ekstrak ................................................................... 44
Lampiran IV. Pembuatan Larutan Uji Aktivitas Antioksidan ........................ 45
Lampiran V. Analisis Kualitatif Vitamin C ................................................... 46
Lampiran VI. Perhitungan Kadar Vitamin C ................................................... 47
Lampiran VII. Perhitungan IC50 ........................................................................ 50
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang sifatnya sangat tidak stabil
dan sangat reaktif, serta merusak jaringan. Adanya elektron yang tidak
berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif untuk mencari
pasangannya, dengan cara menyerang dan mengikat molekul yang ada di
sekitarnya. Radikal bebas berasal dari luar tubuh maupun dihasilkan selama
proses metabolisme dalam tubuh (Hernani dan Rahardjo, 2005). Senyawa radikal
bebas dapat terbentuk akibat proses kimia yang terjadi dalam tubuh, seperti proses
oksidasi, metabolisme sel, olahraga berlebihan, peradangan dan terpapar polusi
(asap kendaraan, asap rokok, makanan, dan radiasi sinar matahari). Radikal bebas
dapat mengganggu kesehatan kita seperti mulai dari kerusakan sel atau jaringan,
kanker, penyakit hati, jantung, penuaan dini, dan kardiovaskuler (Hernani dan
Rahardjo, 2005).
Aktivitas radikal bebas dapat diredam oleh antioksidan. Antioksidan
adalah suatu senyawa yang dapat menghambat terjadinya reaksi oksidasi, dengan
cara mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif (Winarsi, 2007).
Vitamin C stabil dalam suasana asam tetapi mudah rusak oleh oksidasi,
alkali, panas dan logam seperti zat besi dan tembaga. Vitamin C bagi tubuh adalah
sebagai antioksidan yang bekerja menghalangi beberapa kerusakan yang
2
disebabkan oleh radikal bebas dan menghambat reaksi oksidasi pada tubuh yang
menyebabkan terjadi radikal bebas yang sangat aktif dan dapat merusak struktur
fungsi sel namun reaktivitas radikal bebas dapat dihambat oleh sistem antioksidan
yang melengkapi sistem kekebalan tubuh (Winarsi, 2007).
Berbagai efek buruk bagi kesehatan yang ditimbulkan oleh minuman
instan seperti minuman bersoda dan minuman kaleng berperasa telah menjadikan
infused water sebagai alternatif minuman yang ramah bagi kesehatan sehingga
aman untuk dikonsumsi sehari-hari (Stone, 2014). Infused water adalah air putih
yang diberi tambahan potongan bahan alami seperti buah, sayur, atau herba yang
mengandung antioksidan sehingga memberikan cita rasa alami dan manfaat untuk
kesehatan (Soraya, 2014).
Karakter buah yang cocok untuk dijadikan infused water adalah buah yang
tidak mengandung alkohol. Beberapa jenis buah yang disarankan untuk dijadikan
infused water adalah jeruk, lemon, strawberry, anggur, kiwi, melon dan apel
(Murtie dkk., 2014).
Salah satu alternatif antioksidan alami yang cukup potensial adalah buah
kiwi (Actinidia deliciosa (A.Chev) C.F Liang & A.R Ferguson). Kandungan
nutrisi dalam 100 g buah kiwi adalah air 83%, karbohidrat 15 g, protein 1 g,
Vitamin C 92,7 mg, Vitamin E 1,5 mg, (USDA: 2016). Antioksidan pada buah
kiwi antara lain vitamin C, klorofil a dan b, β karoten, dan beberapa senyawa
fenolik.
Berdasarkan potensi yang dimiliki buah kiwi sebagai antioksidan alami
serta kandungan vitamin C, maka buah kiwi banyak dipilih untuk dijadikan
3
infused water. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh waktu dan
suhu air terhadap kadar vitamin C pada infused water buah kiwi menggunakan
metode Spektrofotometri UV-Vis dan aktivitas antioksidan buah kiwi dengan
menggunakan pereaksi DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).
1.2 Identifikasi Masalah
Berdasarkan uraian di atas, maka identifikasi masalah dalam penelitian ini
adalah :
1. Apakah pengaruh suhu dan waktu penyimpanan dapat mempengaruhi
kadar vitamin C dan aktivitas antioksidan dalam infused water buah kiwi ?
2. Berapa nilai IC50 ekstrak buah kiwi jika dibandingkan dengan IC50 vitamin
C ?
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini sebagai berikut :
1. Mengetahui pengaruh suhu dan waktu penyimpanan dapat mempengaruhi
kadar vitamin C dan aktivitas antioksidan dalam infused water buah kiwi.
2. Mengetahui nilai IC50 ekstrak buah kiwi jika dibandingkan dngan IC50
vitamin C.
4
1.4 Manfaat Penelitian
Penelitian ini dilakukan untuk memberikan informasi ilmiah mengenai
pengaruh suhu dan waktu penyimpanan terhadap kadar vitamin C dan aktivitas
antioksidan yang terkandung di dalam infused water buah kiwi.
1.5 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei hingga Juli 2017 di
Laboratorium Instrumen, Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Al-
Ghifari, Bandung.
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Infused Water
Infused water adalah air putih yang diberi beberapa potongan buah, sayur,
dan herbal sehingga air putih yang tadinya tawar memiliki aroma, rasa dan warna
yang khas sesuai dengan bahan-bahan yang dilarutkan (di infus) pada air putih
tersebut. Beberapa jenis buah yang dapat dijadikan infused water adalah jeruk,
lemon, strawberry, anggur, kiwi, melon dan apel. Buah-buahan ini mengandung
antioksidan dan zat gizi seperti mineral, serat dan vitamin A, B, C, D, E, K dan
polifenol (Hindah, 2014).
Disisi lain jus atau minuman berkarbonasi dalam kemasan memang
memiliki rasa yang nikmat dan warna yang menarik, tetapi dengan pilihan
material organik tertentu, warna dan aroma dari air dalam infused water disulap
menjadi lebih menarik, bercitarasa dan bernutrisi, sehingga infused water
memiliki nilai jauh lebih baik daripada minuman dalam kemasan. Terlebih
minuman kemasan umumnya ditambahkan pengawet dan memiliki kandungan
gula yang relatif tinggi. Kelebihan infused water dibandingkan minuman dalam
kemasan adalah bebas tambahan gula dan pengawet buatan (Feri, 2016).
Beberapa manfaat dari infused water yaitu :
a. Sebagai detoksifikasi
b. Menyegarkan tubuh
c. Mengganti fungsi ion tubuh
6
d. Sebagai antioksidan
e. Mengoptimalkan metabolisme tubuh
f. Memperlancar pencernaan
g. Meningkatkan daya tahan tubuh
h. Sebagai alternatif bagi yang tidak suka makan buah
i. Menjaga fokus pikiran
Gambar 2.1. Infused Water
2.2. Buah Kiwi
Buah kiwi mulai dibudidayakan pada tahun 1970 dan saat ini Jepang
memproduksi 40.000 ton buah kiwi per tahun. Selandia Baru merupakan negara
eksportir utama buah kiwi. Buah tersebut diberi nama kiwi karena kulitnya
menyerupai bulu burung kiwi, burung nasional Selandia Baru. Buah kiwi
berbentuk oval dengan panjang kira-kira 5-8 cm, diameter 4-6 cm. Kulit buah
kiwi berwarna coklat hijau. Buah kiwi mempunyai tekstur yang lembut dan
memiliki aroma yang unik (Gambar 2.1). Buah kiwi tumbuh di lereng
pegunungan kawasan hutan atau di antara semak-semak pohon yang rendah
7
(Oryza, 2011), memiliki lebih dari 60 spesies dari genus Actinidia (Ferguson,
1990). Spesies buah kiwi yang paling umum di dunia adalah Actinidia deliciosa
dan Actinidia chinensis (Rassam dan Laing, 2005).
Gambar 2.2. Buah Kiwi
2.2.1. Klasifikasi
Taksonomi tanaman kiwi dapat diklasifikasikan sebagai berikut (Ferguson,
1990):
Kerajaan : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoiopsida
Ordo : Ericales
Keluarga : Actiisiaceae
Genus : Actinidia
Spesies : Actinidia deliciosa (A.Chev) C.F Liang & A.R Ferguson
8
2.2.2. Morfologi
Buah kiwi pada umumnya berbentuk oval, dengan ukuran panjang 5-8 cm
dan memiliki diameter 4-5 cm. Kulit buah memiliki warna hijau gelap dan
keemasan dengan memiliki daging buah berwarna hijau terang atau kuning emas,
serta memiliki barisan biji berwarna hitam kecil yang bisa di konsumsi. Buah ini
memiliki tekstur lembut dan memiliki aroma bau yang sangat unik. Kiwi juga
memiliki bulu di bagian permukaan kulit dan terkadang tidak memiliki bulu.
2.2.3. Kandungan
Kandungan gizi buah kiwi per 100 gram mengandung energi 255 kj,
gula 8,99 g, serat 3 g, lemak 0,52 g, protein 1,14 g, lutein dan zeaxanthin 122 µg,
thiamin (vitamin B1) 0,027 mg, riboflavin (vitamin B2) 0,025 mg, niasin (vitamin
B3) 0,341 mg, vitamin B6 0,63 mg, folat (vitamin B9) 25 µg, vitamin C 92,7 mg,
vitamin E 1,5 mg, vitamin K 40,3 µg, kalsium 34 mg, besi 0,31 mg, magnesium
17 mg, natrium 3 mg, zinc 0,14 mg, mangan 0,098 mg, air 83,05 g (Shastri, 2012).
2.2.4. Manfaat
Antioksidan pada buah kiwi antara lain vitamin C, β karoten, klorofil a
dan b, dan senyawa flavonoid. Buah kiwi mengandung banyak fitonutrien serta
vitamin dan mineral yang baik untuk kesehatan. Beberapa manfaat mengkonsumsi
buah kiwi adalah serat sebagai pengendali gula darah, mencegah asma,
perlindungan terhadap degenerasi makula, mengurangi kadar lemak darah
(Whofoods, 2012).
9
2.3. Vitamin C
Vitamin C atau asam askorbat merupakan salah satu vitamin yang larut
dalam air, sedikit larut dalam alkohol dan gliserol, tetapi tidak dapat larut dalam
pelarut non polar seperti eter, benzen, kloroform, dan lain-lain. Vitamin C
berbentuk kristal putih, tidak berbau, bersifat asam dan stabil dalam bentuk
kering. Memiliki berat molekul 176,13 dan struktur yang mirip dengan struktur
monosakarida tetapi mengandung gugus enadiol yang berfungsi dalam sistem
perpindahan hidrogen yang menunjukkan peranan penting dalam vitamin ini.
Rumus molekul C6H8O6 (Zhang, 2013). Vitamin C juga mudah teroksidasi
terutama jika terpapar cahaya, logam seperti zat besi dan tembaga, pemanasan,
suasana alkalis secara reversibel membentuk asam dehidroaskorbat dan
kehilangan 2 atom hidrogen. Selanjutnya secara berurutan akan berdekomposisi
lagi menjadi beberapa molekul asam dalam larutan sampai menjadi asam oksalat
dengan pH di atas 4 (Tjitro, dkk., 2000).
Gambar 2.3. Struktur Vitamin C (Zhang, 2013)
2.2.1. Fungsi Vitamin C
Vitamin C adalah pereduksi kuat bagi tubuh berperan sebagai
antioksidan yang bekerja menghalangi beberapa kerusakan yang disebabkan oleh
radikal bebas dan menghambat reaksi oksidasi dalam tubuh yang merusak struktur
10
fungsi sel (Winarsi, 2007). Vitamin C dianggap berperan pula untuk memulihkan
radikal tokoferol quinin menjadi tokoferol tereduksi yang mempunyai efek
sebagai pencegat (interceptor) radikal bebas membran sehingga fungsinya
kembali membaik. Re-reduksi radikal askorbat terjadi secara spontan (dengan
jalan bereaksi sesamanya) atau oleh bantuan NADPH sebagai kofaktor pereduksi
(Wardani, 2012).
Sebagai antioksidan, vitamin C bekerja sebagai donor elektron dengan
cara memindahkan satu elektron ke senyawa logam Cu dan vitamin C juga dapat
menyumbangkan satu elektron ke reaksi biokimia intraseluler dan ekstraseluler.
Menurut Levine tahun 1995 vitamin C mampu menghilangkan senyawa oksigen
reaktif di dalam sel neutrofil, monosit, protein lensa dan retina (Susanto dkk.,
2009). Sedangkan pada jaringan dalam organ tubuh seperti ginjal, liver dan lensa
mata, mengandung vitamin C dengan kadar 10-50 kali lebih besar dibandingkan
dengan yang ada di dalam plasma. Jaringan-jaringan ini diketahui berperan untuk
imun dan sistem endokrin. Pada fungsi sistem imun vitamin C berperan untuk
meningkatkan sistem imun dengan menstimulasi produk interferon (Winarsi,
2007).
2.2.2. Analisis Kadar Vitamin C
Terdapat beberapa metode untuk mengetahui kadar vitamin C diantaranya
adalah metode titrasi dan metode spektrofotometri.
1. Metode Titrasi
Metode titrasi terdiri dari :
11
a. Iodium
Metode ini paling banyak digunakan, karena murah, sederhana, dan
tidak memerlukan peralatan laboratorium yang canggih. Titrasi ini
memakai iodium sebagai oksidator yang mengoksidasi vitamin C
dan memakai amilum sebagai indikatornya (Wijanarko, 2002).
b. Titrasi 2,6 D (dichloroindophenol)
Metode ini menggunakan 2,6 D dan menghasilkan hasil yang lebih
spesifik dari titrasi iodium. Pada titrasi ini, persiapan sampel
ditambahkan asam oksalat atau asam metafosfat, sehingga
mencegah logam katalis lain mengoksidasi vitamin C. Namun,
metode ini jarang dilakukan karena harga dari larutan 2,6 D dan
asam metafosfat sangat mahal (Wijanarko, 2002).
c. Titrasi asam-Basa
Titrasi Asam-Basa merupakan contoh analisis volumetri, yaitu suatu
cara atau metode yang mnggunakan larutan yang disebut titran dan
dilepaskan dari perangkat gelas yang disebut buret. Bila larutan
yang diuji bersifat basa maka titran harus bersifat asam, dan
sebaliknya (Sastrohamidjojo, 2005).
2. Metode Spektrofotometri
Untuk metode spektrofotometri larutan sampel yang berupa vitamin C
pelarut yang digunakan adalah aquadest dengan panjang gelombang 265
nm diletakkan pada sebuah kuvet yang disinari oleh cahaya UV dengan
panjang gelombang yang sama dengan molekul pada baku pembanding.
12
Analisis menggunakan metode ini memiliki hasil yang akurat
(Sudarmaji, 2007).
3. HPLC (High Performance Liquid Chromatoraphy)/KCKT
(Kromatograpi Cair Kinerja Tinggi)
Teknik HPLC merupakan suatu metode kromatografi cair-cair yang
dapat digunakan baik untuk keperluan pemisahan maupun analisis
kuantitatif. Analisis kualitatif dengan teknik HPLC didasarkan pada
pengukuran luas area standar. Pada prakteknya, metode pembandingan
area standar dan sampel kurang menghasilkan data yang akurat apabila
hanya melibatkan suatu konsentrasi. Oleh karena itu, dilakukan dengan
menggunakan teknik kurva kalibrasi. Untuk analisis vitamin C
menggunakan HPLC fase gerak yang digunakan adalah methanol pro
HPLC dan aquadest dengan perbandingan 60:40, dengan menunjukkan
peak rata-rata waktu retensi 1,419 menit Setelah itu campuran tersebut
disaring dengan menggunakan filter 0,45 µm yang dibantu dengan
pompa vakum (Wiji, 2010).
2.3. Radikal Bebas
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang mengandung satu atau
lebih elektron yang tidak berpasangan pada orbital terluarnya dan bersifat reaktif.
Suatu atom atau molekul akan tetap stabil bila elektronnya berpasangan, untuk
mencapai kondisi stabil tersebut, radikal bebas dapat menyerang bagian tubuh
seperti sel, sehingga dapat menyebabkan kerusakan pada sel tersebut dan
13
berimbas pada kinerja sel, jaringan dan akhirnya pada proses metabolisme tubuh.
Radikal bebas dapat berasal dari tubuh makhluk itu sendiri sebagai akibat
aktivitas tubuh seperti aktivitas autooksidasi, oksidasi enzimatik, organel
subseluler, aktivitas ion logam transisi, dan berbagai sistem enzim lainnya
(Darmawan dan Artanti, 2009).
Radikal bebas dalam tubuh pada dasarnya berperan dalam pemeliharaan
kesehatan karena sifatnya yang reaktif untuk mengikat atau bereaksi dengan
molekul asing yang masuk ke dalam tubuh. Ketidakseimbangan antara radikal
bebas dengan antioksidan dalam tubuh dapat menyebabkan terganggunya sistem
metabolisme, hal ini diakibatkan karena sifat radikal bebas yang dapat menyerang
lipid, DNA (Deoxyribo Nucleic Acid), dan protein komponen sel dan jaringan
(Darmawan dan Artanti, 2009).
2.4. Antioksidan
Dalam pengertian kimia, antioksidan adalah senyawa pemberi elektron,
sedangkan dalam pengertian biologis antioksidan merupakan molekul atau
senyawa yang dapat meredam aktivitas radikal bebas dengan mencegah oksidasi
sel (Syahrizal, 2008).
Antioksidan berfungsi sebagai senyawa yang dapat menghambat reaksi
radikal bebas penyebab penyakit karsinogenis, kardiovaskuler, dan penuaan dalam
tubuh manusia. Antioksidan diperlukan karena tubuh manusia tidak memiliki
sistem pertahanan antioksidan yang cukup, sehingga apabila terjadi paparan
14
radikal berlebihan, maka tubuh membutuhkan antioksidan eksogen (berasal dari
luar) (Apriandi, 2011).
2.4.1. Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil)
Aktivitas antioksidan suatu senyawa dapat diukur dari kemampuannya
menangkap radikal bebas. Radikal bebas yang biasa digunakan sebagai model
dalam mengukur daya penangkapan radikal bebas adalah DPPH yang merupakan
senyawa radikal bebas yang stabil sehingga apabila digunakan sebagai pereaksi
dalam uji penangkapan radikal bebas cukup dilarutkan. Jika disimpan dalam
keadaan kering dengan kondisi penyimpanan yang baik akan stabil selama
bertahun-tahun (Amelia, 2011).
Metode DPPH adalah metode yang paling sering digunakan untuk
skrining aktivitas antioksidan dari berbagai tanaman obat. Metode peredaman
radikal bebas DPPH didasarkan pada reduksi dari radikal bebas DPPH yang
berwarna oleh penghambat radikal bebas. Prosedur ini melibatkan pengukuran
penurunan serapan DPPH pada panjang gelombang maksimalnya, yang sebanding
terhadap konsentrasi penghambat radikal bebas yang ditambahkan larutan reagen
DPPH. Aktivitas tersebut dinyatakan sebagai konsentrasi efektif (effective
concentration), EC50 atau konsentrasi inhibisi (inhibitory concentration), IC50
(Amelia, 2011).
15
Gambar 2.4. Reaksi antara DPPH dan Antioksidan
2.4.2. IC50
IC50 adalah bilangan yang menunjukkan konsentrasi ekstrak yang
mampu menghambat aktivitas suatu radikal sebesar 50% (Molyneux, 2004).
Untuk menentukan IC50 diperlukan persamaan kurva standar dari % inhibisi
sebagai sumbu y dan konsentrasi fraksi antioksidan sebagai sumbu x. IC50
dihitung dengan cara memasukkan nilai 50% ke dalam persamaan kurva standar
sebagai sumbu y kemudian dihitung nilai x sebagai konsentrasi IC50. Semakin
kecil nilai IC50 menunjukkan semakin tinggi aktivitas antioksidannya (Molyneux,
2004). Dalam hal ini diharapkan bahwa radikal bebas dapat ditangkap oleh
senyawa antioksidan hanya dengan konsentrasi yang kecil.
2.5. Spektrofotometri UV-Vis
2.5.1. Teori Spektrofotometri UV-Vis
Spektrofotometri UV-Vis adalah pengukuran panjang gelombang dan
intensitas sinar ultraviolet dan cahaya tampak yang diabsorbsi oleh sampel. Sinar
ultraviolet dan cahaya tampak memiliki energi yang cukup untuk mempromosikan
elektron pada kulit terluar ke tingkat energi yang lebih tinggi. Spektrofotometri
16
UV-Vis mengacu pada hukum Lambert-Beer. Apabila cahaya monokromatik
melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya tersebut akan diserap,
sebagian dipantulkan dan sebagian lagi akan dipancarkan (Dachriyanus, 2004).
2.5.2. Komponen Spektrofotonetri UV-Vis
Gambar 2.4. Diagram Spektrofotometri UV-Visible
Komponen-komponen spektrofotometri UV-Vis meliputi :
1. Sumber sinar
Sebagai sumber sinar digunakan lampu deuterium atau lampu hidrogen
untuk pengukuran UV dan lampu tungsten digunakan untuk daerah
visibel.
2. Monokromator
Monokromator digunakan untuk mendispersikan sinar ke dalam
komponen-komponen panjang gelombangnya yang selanjutnya akan
dipilih oleh celah (slit). Monokromator berputar sedemikian rupa
sehingga kisaran panjang gelombang dilewatkan pada sampel sebagai
scan instrumen melewati spektrum.
17
3. Sistem Optik
Optik-optik dapat didesain untuk mencegah sumber sinar sehingga
sumber sinar melewati 2 kompartemen, suatu larutan blanko dapat
digunakan dalam satu kompartemen untuk mengoreksi pembacaan atau
spektrum sampel. Yang paling sering digunakan sebagai blanko dalam
spektrofotometri adalah semua pelarut yang digunakan untuk melarutkan
sampel atau pereaksi (Rohman, 2007).
2.5.3. Penggunaan Spektrofotometri UV-Visible
2.5.3.1. Analisis Kualitatif
Data spektrum UV-Visibel secara tersendiri tidak dapat dipergunakan
untuk identifikasi kualitatif obat atau metabolitnya. Akan tetapi jika digabung
dengan cara lain seperti spektroskopi infra merah, resonansi atau magnet inti, dan
spektroskopi massa, maka dapat digunakan untuk maksud identifikasi atau
analisis kualitatif suatu senyawa tersebut. Data yang diperoleh dari spektroskopi
UV-Visibel adalah panjang gelombang maksimal, intensitas, efek pH dan pelarut
yang kesemuanya yang dapat diperbandingkan dengan data yang sudah
dipublikasikan (Gandjar dan Rohman, 2007).
2.5.3.2. Analisis Kuantitatif
Dalam aspek kuantitatif, suatu berkas radiasi dikenakan pada cuplikan
(larutan sampel) dan intensitas sinar radiasi diteruskan dan diukur besarannya.
Radiasi yang diserap oleh cuplikan ditentukan dengan membandingkan intensitas
18
sinar yang diteruskan dengan intensitas sinar yang diserap jika tidak ada spesies
penyerap lainnya. Intensitas atau kekuatan cahaya sebanding dengan jumlah foton
yang melalui suatu satuan luas penampang per detik (Gandjar dan Rohman,
2007).
Hukum Lambert-Beer :
A = log 𝑙𝑜
𝑙𝑡 = ε . b . c = a . b . c
Dimana ;
A : serapan
lo : intensitas sinar datang
lt : intensitas sinar yang diteruskan
ε : absorbtivitas molekuler (mol.cm.lt -1
)
a : daya serap (g.cm.lt -1
)
b : tebal larutan / kuvet
c : konsentrasi (g.lt-1
.mg.ml-1
)
19
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Bahan Penelitian
Bahan utama yang digunakan adalah buah kiwi. Bahan lain yang
digunakan dalam penelitian ini adalah : serbuk vitamin C, serbuk radikal DPPH
(1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), kristal KI, Kristal I2, aquadest, etanol 96%. Bahan
habis pakai : alumunium foil, kertas saring, kertas perkamen.
3.2 Alat Penelitian
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah Spektrovotometri UV-Vis
(Shimadzu Corporation Uv-1800), beaker glasss, lemari pendingin, labu ukur,
gelas ukur, tabung reaksi, batang pengaduk, cawan penguap, water bath,
timbangan digital, oven, vial cokelat, mikro pipet, mikro filter.
3.3 Metode Penelitian
3.3.1 Pengumpulan Tanaman
Buah kiwi yang akan digunakan adalah buah kiwi hijau yang diperoleh
dari Pasar Induk Caringin, Bandung.
20
3.3.2. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman akan dilakukan di Herbarium Jatinangor,
Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Departemen Biologi, Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjajaran, Jatinangor, Sumedang.
3.3.3. Proses Pengolahan Sampel
Buah kiwi sebanyak 100 g dibersihkan dari pengotor, dikupas, kemudian
diiris dimasukkan ke dalam beaker glass yang berisi aquadest sebanyak 500 mL.
Kemudian direndam dengan kombinasi suhu lemari es (20-5
0C) dan suhu ruangan
(240-27
0C) dan lama penyimpanan untuk setiap pengambilan sampel adalah 0, 2,
4, 6, 12, dan 24 jam. Sampel yang diuji diperoleh dengan cara filtrasi. Metode
filtrasi dipilih karena memudahkan pada saat pembacaan absorbansi oleh
spektrofotometri (Karinda dkk., 2013)
Tabel 3.1. Rancangan Percobaan Kombinasi Antara Faktor Variasi
Suhu (S) dan Faktor Variasi Waktu (W)
No. Kombinasi
Perlakuan Variasi Suhu (
0C)
Variasi Waktu
(Jam)
1 S1W1 24-27 0
2 S1W2 24-27 2
3 S1W3 24-27 4
4 S1W4 24-27 6
5 S1W5 24-27 12
6 S1W6 2-5 24
7 S2W1 2-5 0
8 S2W2 2-5 2
9 S2W3 2-5 4
10 S2W4 2-5 6
11 S2W5 2-5 12
12 S2W6 2-5 24
21
3.3.4. Penyiapan Larutan Iodin 0,1 N
Ditimbang 2,5 g kristal KI lalu dilarutkan dalam 25 mL aquadest.
Kemudian ditimbang 12,67 g kristal I2 dan dimasukkan ke dalam larutan KI
sedikit demi sedikit sampai semuanya larut. Campuran dimasukkan ke dalam labu
ukur 1000 mL dan ditambahkan aquadest sampai tanda batas (Karinda dkk.,
2013).
3.3.5. Analisis Kualitatif Vitamin C
Sebanyak 2 mL larutan sampel, 2 mL larutan vitamin C sebagai larutan
standar, masing-masing ditambahkan 1-3 tetes pereaksi iodin. Hasil positif untuk
senyawa vitamin C ditunjukkan dengan hilangnya warna iodin (Aina dan
Suprayogi, 2011).
3.3.6. Analisis Kuantitatif Vitamin C
3.3.6.1. Pembuatan Larutan Induk Vitamin C 100 ppm
Vitamin C ditimbang sebanyak 5 mg kemudian dimasukkan ke dalam
labu ukur 50 mL dan dilarutkan dengan aquadest sampai tanda batas.
3.3.6.2. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Vitamin C
Dipipet 1 mL larutan induk vitamin C 100 ppm dan dimasukkan ke
dalam labu ukur 10 mL ditambahkan dengan aquadest sampai tanda batas dan
dihomogenkan untuk mendapatkan konsentrasi 10 ppm. Kemudian larutan discan
pada panjang gelombang 200-400 nm dengan menggunakan blanko aquadest.
22
Nilai panjang gelombang maksimum merupakan panjang gelombang yang
memberikan serapan terbesar dan sama pada setiap konsentrasi.
3.3.6.3. Pembuatan Kurva Kalibrasi Vitamin C
Kurva kalibrasi vitamin C diperoleh dengan mengencerkan larutan
standar induk yang dibuat dengan mengambil 0,25; 0,5; 0,75; 1; 1,25; dan 1,5 mL
dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL ditambahkan dengan aquadest hingga
tanda batas untuk mendapatkan konsentrasi 2,5 ppm, 5 ppm, 7,5 ppm, 10 ppm,
12,5 ppm, dan 15 ppm. Kemudian diukur serapan masing-masing pada panjang
gelombang maksimum yang telah diperoleh. Dibuat kurva kalibrasi dan
persamaan linier untuk uji kuantitatif dari sampel yang mengandung vitamin C.
3.3.6.4. Penentuan Kadar Vitamin C pada Infused Water Buah Kiwi
Pengujian sampel berdasarkan pada metode penentuan kadar vitamin C
dengan spektrofotometri (Wardani, 2012). Sampel vitamin C berupa minuman
infused water buah kiwi yang akan dianalisa dan dipersiapkan terlebih dahulu,
selanjutnya sampel disaring agar mempermudah pada proses pembacaan filtrat.
Sampel diambil berdasarkan waktu-waktu yang telah ditetapkan sesuai prosedur
pengambilan dan dilakukan pengenceran dengan mengambil 1 mL filtrat sampel
kemudian diencerkan ke dalam labu ukur 10 mL dan dihomogenkan. Sampel
diambil sebanyak 3 mL kemudian dilakukan pengukuran absorbansi terhadap
sampel dengan spektrofotometer pada panjang gelombang maksimum yang
diperoleh. Lalu tinggi absorbansi yang ditampilkan pada layar dicatat dan dicari
konsentrasi vitamin C pada sampel dengan menggunakan persamaan garis regresi
23
dari hasil kurva kalibrasi. Pengukuran sampel dilakukan sebanyak tiga kali
ulangan.
3.3.7. Uji Aktivitas Antioksidan
3.3.7.1. Pembuatan Ekstrak
Setelah dilakukan pengukuran kadar vitamin C maka dipilih salah satu
sampel yang memiliki kadar vitamin C paling tinggi untuk dilakukan ekstraksi.
Sebanyak 100 g buah kiwi yang telah direndam selama 24 jam disaring hingga
jernih kemudian dipekatkan dengan menggunakan cawan penguap diatas water
bath dan dihitung rendemen fraksi.
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐹𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 𝐾𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑆𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑥 100%
3.3.7.2. Pembuatan Larutan Uji
Ekstrak buah kiwi ditimbang sebanyak 20 mg, 40 mg, 60 mg, 80mg
dan 100mg kemudian dilarutkan dengan aquadest hingga 100 ml sehingga
diperoleh konsentrasi 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm, 800 ppm dan 1000 ppm.
3.3.7.3. Pembuatan Larutan DPPH 40 ppm dan Larutan Baku
Pembanding Vitamin C
a. Pembuatan larutan DPPH 40 ppm yaitu sebanyak 4 mg serbuk DPPH
dilarutkan dengan etanol 96% sampai 100 mL. Larutan DPPH
tersebut ditutup dengan alumunium foil agar terlindung dari cahaya
dan segera digunakan (Evi, dkk., 2007).
24
b. Pembuatan larutan baku pembanding vitamin C yaitu sebanyak 5 mg
asam askorbat dilarutkan dalam aquadest 50 mL sehingga diperoleh
konsentrasi 100 ppm. Kemudian dibuat larutan seri dengan
konsentrasi 2, 4, 6, 8 dan 10 ppm dipipet 0,2 mL, 0,4 mL, 0,6 mL, 0,8
mL dan 1 mL masukkan ke dalam labu ukur 10 mL kemudian
tambahkan aquadest hingga tanda batas.
3.3.7.4. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH 40 ppm
Sebanyak 2 mL larutan DPPH 40 ppm ditambahkan 1 mL etanol 96%
dimasukkan dalam tabung reaksi homogenkan dan diamkan selama 30 menit
ditempat terlindung cahaya. Sebagai blanko digunakan etanol 96% sebanyak 3 ml.
Kemudian dilakukan pengukuran panjang gelombang maksimum dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm (Rahayu, dkk.,
2010).
3.3.7.5. Pengukuran Absorbansi Vitamin C
Larutan vitamin C sebanyak 2 mL dan larutan DPPH sebanyak 3 mL,
dihomogenkan dan diamkan selama 30 menit. Kemudian ukur absorbansi pada
panjang gelombang maksimum DPPH, sebagai blanko digunakan larutan 3 mL
etanol 96% dan 2 mL vitamin C.
3.3.7.6. Pengukuran Absorbansi % Penghambat Sampel
Sampel filtrat infused water buah kiwi yang telah dipekatkan
dilakukan pengenceran menggunakan aquadest dengan konsentrasi 200 ppm, 400
25
ppm, 600 ppm, 800 ppm dan 1000 ppm. Sebanyak 2 mL hasil pengenceran
dimasukkan kedalam tabung reaksi tambahkan 3 mL larutan DPPH 40 ppm
homogenkan, kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37°C. Campuran
yang telah diinkubasi dimasukkan dalam kuvet sebanyak 3 ml dan diukur
absorbansinya menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang
maksimum DPPH yang diperoleh dengan blanko berupa larutan etanol 96% dan
larutan asam askorbat dengan perbandingan 3:2.
3.3.7.7. Pengukuran IC50 (Inhibition Concentration 50%)
Hasil aktivitas antioksidan ekstrak buah kiwi dibandingkan dengan
aktivitas antioksidan larutan baku pembanding vitamin C. IC50 dihitung dari kurva
regeresi liner antara % inhibisi serapan dengan berbagai konsentrasi ekstrak
larutan uji dengan rumus :
% 𝑝𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡 =A DPPH−𝐴 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
A DPPH𝑥 100%
26
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Determinasi Tanaman
Hasil determinasi yang dilakukan di Laboratorium Taksonomi
Tumbuhan, Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Padjadjaran, menunjukan bahwa tanaman yang digunakan pada
penelitian ini adalah benar buah kiwi (Actinidia deliciosa (A. Chev) C.F Liang &
A.R Ferguson). Hasil dapat dilihat pada Lampiran I.
4.2 Hasil Uji Kualitatif Vitamin C
Analisis kualitatif vitamin C menggunakan iodium karena iodium akan
mengoksidasi senyawa-senyawa yang mempunyai potensial reduksi yang lebih
kecil daripada iodium seperti vitamin C (Gandjar dan Rohman, 2012).
Hasil positif kandungan vitamin C adalah warna iodium menghilang dan
warna sampel memudar. Proses menghilangnya warna iodium terhadap vitamin C
standar dan sampel dapat dilihat pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1. Reaksi Vitamin C dengan Iodium (Gandjar dan Rohman, 2012)
27
Reaksi yang terjadi yaitu reaksi oksidasi dan reduksi. Vitamin C bersifat
reduktor dan dioksidasikan oleh iodium dalam suasana asam dan iodium
tereduksi menjadi ion iodida (Hall, 2014). Perbedaan volume iodium
menunjukkan perbedaan kadar vitamin C dalam sampel. Hasil uji kualitatif
vitamin C dapat dilihat pada Tabel 4.1.
Tabel 4.1. Hasil Uji Kualitatif Vitamin C dan Sampel
Sampel Volume
Sampel (mL)
Volume
Iodium (mL) Hasil
Vitamin C Standar 2 0,15 +
Infused Water Buah
Kiwi 2 0,1 +
4.3 Hasil Uji Kuantitatif Vitamin C
4.3.1. Panjang Gelombang Maksimum Vitamin C
Tahap penelitian diawali dengan memastikan panjang gelombang
maksimum vitamin C yang diukur dari 200-400 nm dan panjang gelombang
maksimum yang diperoleh adalah 264 nm dengan absorban 0,83 seperti pada
gambar 4.2.
Gambar 4.2. Panjang Gelombang Maksimum Vitamin C
28
Hasil yang didapat dari pengukuran panjang gelombang larutan baku
yang telah dibuat, menunjukkan bahwa baku yang digunakan mendekati hasil
yang spesifik, sesuai dengan literatur yaitu 265 nm (Wahyu, 2011).
4.3.2. Hasil Kurva Kalibrasi Vitamin C
Konsentrasi larutan sampel dapat ditentukan dengan menggunakan kurva
baku dengan cara mengukur absorban sampel kemudian dihitung dengan
menggunakan persamaan regresi linier.
Tabel 4.2. Hasil Pengukuran Absorban Larutan Baku Vitamin C pada
Panjang Gelombang Maksimum 264 nm
No. Konsentrasi
(ppm) Absorban
1 2,5 0,247
2 5 0,348
3 7,5 0,486
4 10 0,599
5 12,5 0,723
6 15 0,844
Gambar 4.3. Kurva Kalibrasi Vitamin C
29
Persamaan garis yang dihasilkan setelah dilakukan pengukuran Y =
0,0483x + 0,1189 dan koefisiensi korelasi (R2) yaitu 0,9991.
4.3.3. Hasil Pengukuran Absorban Sampel
Hasil pengukuran absorban sampel yang diukur pada panjang gelombang
maksimum vitamin C yaitu 264 nm dan diperoleh kadar vitamin C sampel dengan
memasukkan nilai absorban pada persamaan garis y = 0,0483x + 0,1189 dapat
dilihat pada tabel di bawah ini :
Tabel 4.3. Hasil Perhitungan Kadar Vitamin C pada Infused Water Buah
Kiwi Suhu 24-27 0C
Waktu
Pengam
bilan
Sampel
Replikasi Abs Kadar
(ppm)
Kadar
Rata-
Rata
(ppm)
Kadar
(mg/100g)
Kadar
Rata-Rata
(mg/100g)
0
I 0,303 38,12
37,84
19
19 II 0,301 37,70 19
II 0,301 37,70 19
2
I 0,426 63,58
64,13
32
32 II 0,429 64,20 32
III 0,431 64,62 32
4
I 0,519 82,84
82,91
41
41,3 II 0,519 82,84 41
III 0,520 83,04 42
6
I 0,605 100,64
100,64
50
50 II 0,605 100,64 50
III 0,605 100,64 50
12
I 0,708 121,97
122,24
61
61 II 0,710 122,38 61
III 0,710 122,38 61
24
I 0,657 111,41
111,13
56
56 II 0,655 110,99 56
III 0,655 110,99 56
30
Tabel 4.4. Hasil Perhitungan Kadar Vitamin C pada Infused Water Buah
Kiwi Suhu 2–5 °C
Waktu
Pengamb
ilan
Sampel
Replikasi Abs Kadar
(ppm)
Kadar
Rata-Rata
(ppm)
Kadar
(mg/100g)
Kadar
Rata-Rata
(mg/100g)
0
I 0,303 38,12
37,84
19
19 II 0,301 37,70 19
II 0,301 37,70 19
2
I 0,373 52,61
52,75
26
26 II 0,374 52,82 26
III 0,374 52,82 26
4
I 0,450 68,55
68,69
34
34 II 0,451 68,76 34
III 0,451 68,76 34
6
I 0,542 87,60
87,60
44
44 II 0,542 87,60 44
III 0,542 87,60 44
12
I 0,523 83,66
83,94
42
42 II 0,525 84,08 42
III 0,525 84,08 42
24
I 0,496 78,07
77,94
39
39 II 0,495 77,87 39
III 0,495 77,87 39
Penentuan kadar vitamin C pada infused water buah kiwi yang diukur
absorbannya dengan menggunakan spektrofotometri Uv-Vis, dimana infused
water disimpan pada suhu ruangan dan suhu dingin selama 24 jam. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa kadar vitamin C pada penyimpanan suhu ruangan
lebih tinggi dibandingkan dengan penyimpanan pada suhu dingin. Dimana kadar
terbesar pada suhu ruangan ditunjukkan pada jam ke 12 sebesar 61 mg, dan pada
suhu dingin kadar terbesar ditunjukkan pada jam ke 6 sebesar 44 mg. Jika
dibandingkan dengan hasil penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Manna
Wassalwa di dalam jurnal infused water kulit pisang menunjukkan hasil yang
sama dimana penyimpanan pada suhu tinggi (37 0C dengan waktu penyimpanan
31
120 menit) memperlihatkan kadar vitamin C tertinggi diantara perlakuan sampel
lainnya. Hasil tersebut berarti suhu dan waktu penyimpanan mempengaruhi proses
terlarutnya vitamin C yang terkandung didalam buah kiwi untuk larut ke dalam air
(Manna Wassalwa, 2016).
Pada suhu ruangan jam ke 24 terjadi penurunan kadar vitamin C sebesar
8,2%, hal ini disebabkan oleh suhu dan waktu penyimpanan lama dapat
mempercepat proses reaksi yang dapat menyebabkan kerusakan vitamin C (Mana
Wassalwa, 2016), dan sejalan pula dengan penelitian Rosida (tanpa tahun) bahwa
vitamin C mudah teroksidasi dengan oksigen dan proses oksidasi yang dipercepat
oleh suhu tinggi, namun kondisi panas dalam waktu relatif lama dapat merusak
struktur vitamin C. Pada suhu dingin terjadi penurunan kadar vitamin C pada jam
ke 12 sebesar 4,8%, hal ini sesuai dengan penelitian Safaryani dkk (2007) yang
menjelaskan bahwa stabilitas vitamin C biasanya meningkat dengan penurunan
suhu akan tetapi selama proses penyimpanan pada suhu rendah dapat
menyebabkan kerusakan jaringan oleh sebab jaringan tertutup oleh lapisan es.
USDA (2016) menerangkan bahwa dalam 100 g buah kiwi mengandung
vitamin C sebanyak 92,7 mg, maka hanya 65,8 % vitamin C yang diperoleh pada
infused water buah kiwi dengan suhu 24-27 0C dan 47,5 % pada suhu 2-5
0C.
32
4.4. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
4.4.1. Hasil Pemekatan
Dari hasil pemekatan 100 g buah kiwi yang direndam dalam 500 mL
aquadest didapatkan sebanyak 13,18 g ekstrak kental dan rendemen sebesar
13,18% yang diperoleh dengan menggunakan rumus :
Rendemen = Ekstrak yang diperoleh
Bobot awal x 100%
= 13,18 g
100 g x 100% = 13,18 %
Tabel 4.5. Hasil Rendemen Ekstrak
Fraksi
Berat
cawan
kosong
(g)
Berat cawan
kosong + Fraksi
kental (g)
Fraksi
kental (g) Rendemen
Air 35,67 48,85 13,18 13,18%
Gambar 4.4. Hasil Pemekatan
4.4.2. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Larutan DPPH dalam etanol yang berfungsi sebagai kontrol diukur
gelombang dan absorbansinya pada panjang gelombang 400-800 nm dengan
33
menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis. Didapat panjang gelombang DPPH
sebesar 516 nm dengan nilai absorbansi 0,79 untuk konsentrasi 40 ppm.
Gambar 4.5. Panjang Gelombang Maksimum DPPH
4.4.3. Hasil Pengukuran Absorbansi dan Persentase Penghambatan Vitamin
C terhadap Radikal DPPH
Larutan vitamin C yang dibuat dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8 dan 10 ppm
masing-masing diambil sebanyak 2 mL ditambah larutan DPPH sebanyak 3 mL
kemudian diukur dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis untuk
mendapatkan absorban. IC50 dihitung dari kurva regresi linier antar %
penghambat serapan dengan berbagai konsentrasi ekstrak larutan uji dengan
rumus :
% 𝑝𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡 =A DPPH − 𝐴 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
A DPPH𝑥 100%
34
Gambar 4.6. Larutan Vitamin C Pembanding + DPPH
Tabel 4.6. Hasil Pengukuran Absorban Vitamin C terhadap Radikal
DPPH
Konsentrasi
(ppm) Absorbansi
Kontrol Absorbansi
%
Penghambat
Persamaan
( y = bx + a
)
IC50
(ppm)
2
0,79
0,627 20,63
y = 4,671x
+ 13,39 7,8
4 0,512 35,19
6 0,454 42,53
8 0,414 47,59
10 0,307 61,14
Gambar 4.7. Kurva Baku Regresi Linier Kadar Vitamin C terhadap Radikal
DPPH
35
4.4.4. Hasil Pengukuran Absorbansi Persentase Penghambat Sampel
Sampel berupa filtrat infused water buah kiwi yang telah dipekatkan
diencerkan dengan konsentrasi 200, 400, 600, 800 dan 1000 ppm. Masing-masing
2 mL larutan sampel ditambah dengan 3 mL larutan DPPH 40 ppm yang
dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37 0C, kemudian diukur
dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
Tabel 4.7. Hasil Pengukuran Absorban Infused Water Buah Kiwi dengan
DPPH
Konsentra
si (ppm) Absorbansi
Kontrol Absorbansi
%
Penghambat
Persamaan (
y = bx + a )
IC50
(ppm)
200
0,79
0,408 48,35
y = 0,0282x
+ 43,869 217, 41
400 0,342 56,71
600 0,311 60,63
800 0,262 66,84
1000 0,225 71,52
Gambar 4.8. Kurva Regresi Linier Ekstrak Buah Kiwi terhadap
Radikal DPPH
4.4.5. Hasil Pengukuran IC50 (Inhibition Concentration 50%)
Dari gambar 4.6, didapat persamaan regresi linier y = 4,671x + 13,39
dengan R2 = 0,9705 sehingga diketahui IC50 = 7,8 ppm. Ini menunjukkan bahwa
36
untuk menangkap radikal DPPH sebesar 50% diperlukan konsntrasi vitamin C
sebesar 7,8 ppm. Dari gambar 4.7, didapat persamaan regresi linier y = 0,0282x +
43,869 dengan R2 = 0,9868 sehingga diketahui IC50 = 217,41 ppm. Ini
menunjukkan bahwa untuk menangkap radikal DPPH sebesar 50% diperlukan
konsentrasi esktrak sebesar 217,41 ppm. Maka dengan demikian ekstrak infused
water buah kiwi memiliki aktivitas antioksidan kategori sedang, sedangkan untuk
vitamin C memiliki aktivitas antioksidan kategori sangat kuat. Jun et al ( 2003)
dalam penelitiannya, menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan dinyatakan sangat
kuat apabila IC50 < 50 ppm, kuat (IC5050-100 ppm), sedang (IC50 101-250 ppm),
lemah (IC50 251-500 ppm) dan tidak aktif (IC50 > 500 ppm).
Tabel 4.8. Persamaan Garis Linier dan Nilai IC50 Sampel
Sampel Uji Regresi Linier R2
IC50
(ppm)
Vitamin C Y = 4,671x + 13,39 0,9705 7,8
Ekstrak Y = 0,0282x + 43,869 0,9868 217,41
37
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1. Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan ini, disimpulkan bahwa:
1. Kadar vitamin C pada penyimpanan suhu ruangan lebih tinggi dengan
kadar tertinggi ditunjukkan pada jam ke 12 yaitu sebesar 61 mg
dibandingkan dengan penyimpanan pada suhu dingin dengan kadar
tertinggi yang ditunjukkan pada jam ke 6 sebesar 44 mg.
2. Nilai IC50 hasil pemekatan infused water buah kiwi adalah 217,41 ppm
dan nilai IC50 untuk vitamin C adalah 7,8 ppm.
5.2. Saran
Perlu dilakukan penelitian terhadap infused water buah kiwi dengan
metode yang berbeda dan dengan menggunakan buah yang lain sebagai
perbandingan.
38
DAFTAR PUSTAKA
Aina, M., dan Suprayogi, D., 2011. Uji Kualitatif Vitamin C paga berbagai
Makanan dan Pengaruh Terhadap Pemanasan Volume 3 No 1. “online
–journal.Unja.ac.id., diakses pada 31 Juli 2017.
Amelia, P. 2011. Isolasi Elusidasi Struktur dan Uji Aktivitas Antioksidan
Senyawa dari Daun Garcinia benthami P. Universitas Indonesia. Jakarta.
Apriandi, A. 2011. Aktivitas Antioksidan dan Komponen Bioaktif Keong
Ipong-ipong (Fasciolaria salmo). Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.
Universitas Andalas. Padang.
Darmawan, A dan Artanti, N. 2009. Isolasi senyawa Aktif Antioksidan dari
Ekstrak Air Daun Benalu (Dendropothoe pentandra L. Mia.) yang
Tumbuh pada Cemara (Casuarina sp.). Lembaga Ilmu Pengetauan
Indonesia. Jakarta.
Evi Umayah, U., Moch Amrun, H. 2007. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Buah Naga (Hylocereus undatus (Haw.) Britt. & Rose). Jurnal Ilmu
Dasar, 8(1): 83-90.
Ferguson, A.R. (ed.). 1990. Kiwifruit: Science and Management. Wellington,
New Zealand: New Zealand Society for Horticultural Science, pp. 415-435.
Feri Sulianta. 2016. Keajaiban Air dan Buah Jadi Satu: Infused Water.
Penerbit Andi. Yogyakarta.
Gandjar, I.G., Rohman, A. 2013. Analisis Obat secara Spektrofotometri dan
Kromatografi. Yogyakarta. Pustaka Pelajar. Hal 473-484.
Gandjar, I.G., Rohman, A. 2012. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta. Pustaka
Pelajar. Hal 153-dan 463.
Hall, J. 2014. Experimental Chemistry. University of Massachuscett. USA. Hal
40.
Hernani dan Raharjo, M., 2005. Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Penebar
Swadaya, Jakarta. Hal 9-15
Hindah Muaris. 2014. Infused Water Tren gaya Hidup Minum Air Putih.
Penerbit PT GramediaPustaka Utama. Jakarta.
39
Jun, M.H.Y., J., Fong, X., Wan, C.S., Yang, C.T., Ho. 2003. Camparison of
Antioxidant Activities of Isoflavones Form Kudzu Root (Puerarua labata
O). Journal Food Science Institute of Technologist. 68: 2117-2122.
Karinda, M., Fatimawali, Gayatri C. 2013. Perbandingan Hasil Penetapan
Kadar Vitamin C Mangga Dodol dengan Menggunakan Metode
Spektrofotometri UV-Vis dan Iodometri. Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(1): 86-
89.
Manna Wassalwa, Agustus 2016, “Pengaruh waktu Infusa dan Suhu Air yang
Berbeda Terhadap Aktivitas Antioksidan dan Vitamin C pada Infused
water Kulit Pisang”. Volume 1, hal 107-118, http://PENGARUH SUHU
VIT C pada kulit pisang.pdf, Agustus 2016.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazil
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal of
Science Tchnology. Vol 262 Hal 211-219.
Murtie, A., & Yahya, M. 2014. Cara Asyik Minum Sehat Infused Water.
Penerbit Bhuana Ilmu Populer. Jakarta.
Rahayu, D. S., Kusrini., D., Fachriyah, E., 2010. Penentuan Aktivitas
Antioksidan dari ekstrak Etanol Daun Ketapang (Terminalia catappa
L.,) Dengan Metode DPPH (1,1-difenil-2-pilkrilhidrazil). Semarang.
Jurusan Kimia FMIPA Universitas Dipenogoro. Hal 4.
Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
Rosida, D.A.R.A. Tanpa Tahun. Penentuan Aktivitas Antioksidan dan Fenol
Total pada Ekstrak Kulit Buah Pisang (Musa Acuminata Colla).
Makalah Disajikan dalam Seminar Nasional Current Challenge in Drug Use
and Development Tantangan Terkini Perkembangan Obat dan Aplikasi
Klinis.
Safaryani, N., Sri H, Endah D.H. 2007. Pengaruh Suhu dan Lama
Penyimpanan terhadap Penurunan Kadar Vitamin C Brokoli (Brassica
oleracea L). Buletin Anatomi dan Fisiologi, XV(2): 39-45.
Sastrohamidjojo, Hardjono. 2005. Kimia Dasar. Yogyakarta: UGM PRESS.
Syahrizal, D. 2008. Pengaruh Proteksi Vitamin C terhadap Enzim
Transaminas dan Gambaran Hispatologis Hati Mencit yang Dipapar
Plumbum. Universitas Sumatera Utara. Medan.
Soraya, N. 2014. Infused Water: Minuman Alami Bervitamin & Super Sehat.
Jakarta: Penebar Swadya Grup.
40
Stone, E.R. 2014. Lose Weight with Infused Water: Easy Recipes for Optimum
Health: How to Boost Energy, Immunity, and Weight Loss with Infused
Water. Speedy Publishing LLC, (Online), (http://bit.ly/1Em7HT7.diakses 5
April 2017 09:45).
Sudarmaji, Slamet dkk. 2007. Prosedur Analisa Untuk Bahan Makanan dan
Pertanian (edisi keempat). Yogyakarta: Liberti.
Susanto, A., Rhona, D., Mardiyani, I. 2009. Vitamin C sebagai Antioksidan.
Surakarta. Universitas Sebelas Maret.
USDA. 2016. The USDA Food Search for Windows. Human Nutrition Research
Center of Agricultural and Service
Wahyu, 2011. Laporan Praktikum Biokimia Vitamin C, tersedia
http://wahyoe-analisiskimia.blogspot.com. 22 November 2012.
Wardani, L.A. 2012. Validasi Metode Analisis dan Penentuan Kadar Vitamin
C pada Minuman Buah Kemasan dengan Spektrofotometri UV-Visible.
Skripsi. Depok: Universitas Indonesia.
Wijanarko, Simon bambang. 2002. Analisa Hasil Pertanian. Malang: Universitas
Brawijaya.
Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Penerbit Kanisius.
Yogyakarta. Hal 77-81;267-273.
Zhang, yayung. 2013. Ascorbic Acid Plants Biosynthesis, Regulation and
Enchacemeny. Huangzhong Agriculture University. China.
41
LAMPIRAN I
Diagram Alur Penelitian
Infused
Water
Analisis Kadar
Vitamin C
Pencucian
Perajangan
Perendaman
Spektrofotometer UV-
Vis (Shimadzu
Corporation UV-1800)
Suhu
Dingin (S2)
Suhu
Ruangan (S1)
Filtrat di ambil masing-
masing pada 0, 2, 4, 6,
12, 24 jam
Uji Aktivitas
Antioksidan
Buah Kiwi
Pemekatan
Uji aktivitas antioksidan
dg DPPH
42
LAMPIRAN II
Hasil Determinasi Tanaman
43
LAMPIRAN III
Pemekatan Ekstrak
No. Gambar Keterangan
1.
Sampel berupa infused
water buah kiwi suhu
ruangan
2.
Sampel dibagi dalam
beberapa cawan penguap,
kemudian diuapkan di
atas water bath
3.
Diperoleh ekstrak kental
44
LAMPIRAN IV
Pembuatan Larutan Uji Aktivitas Antioksidan
No. Gambar Keterangan
1.
Larutan DPPH 40 ppm
2.
Larutan vitamin C
ditambah larutan DPPH
40 ppm sebagai
pembanding
3.
Ekstrak kental ditimbang,
lalu dibuat larutan untuk
mendapatkan beberapa
konsentrasi. Kemudian
ditambah larutan DPPH
40 ppm
45
LAMPIRAN V
Analisis Kualitatif Vitamin C
A. Hasil Uji Kualitatif Larutan Vitamin C + Pereaksi Iodin
B. Hasil Uji Kualitatif Sampel + Pereaksi Iodin
46
LAMPIRAN VI
Perhitungan Kadar Vitamin C
Persamaan garis : Y = 0,0483x + 0,1189
A. Perhitungan Kadar Vitamin Suhu Ruangan (24-27 0C)
1. Waktu ke-0
I. Absorban : 0,303
a. y = 0,0483x + 0,1189
0,303 = 0,0483x + 0,1189
x = 0,303−0,1189
0,0483 = 3,812
b. Konsentrasi vitamin C dalam sampel = Pengenceran x Konsentrasi
= 10 x 3,812
= 38,12 ppm
c. 500 𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿 x 38,12 ppm = 19,06 mg
II. Absorban : 0,301
a. y = 0,0483x + 0,1189
0,301 = 0,0483x + 0,1189
x = 0,301−0,1189
0,0483 = 3,770
b. Konsentrasi vitamin C dalam sampel = Pengenceran x Konsentrasi
= 10 x 3,770
= 37,70 ppm
c. 500 𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿 x 37,70 ppm = 18,85 mg
III. Absorban : 0,301
a. y = 0,0483x + 0,1189
0,301 = 0,0483x + 0,1189
x = 0,301−0,1189
0,0483 = 3,770
47
x = 0,301−0,1189
0,0483 = 3,770
b. Konsentrasi vitamin C dalam sampel = Pengenceran x Konsentrasi
= 10 x 3,770
= 37,70 ppm
c. 500 𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿 x 37,70 ppm = 18,85 mg
B. Perhitungan Kadar Vitamin C Suhu Dingin (2-5 0C)
1. Waktu ke-2
I. Absorban : 0,373
a. y = 0,0483x + 0,1189
0,373 = 0,0483x + 0,1189
x = 0,373 − 0,1189
0,0483 = 5,261
b. Konsentrasi vitamin C dalam sampel = Pengenceran x Konsentrasi
= 10 x 5,261
= 52,61 ppm
c. 500 𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿 x 52,61 ppm = 26,30 mg
II. Absorban : 0,374
a. y = 0,0483x + 0,1189
0,374= 0,0483x + 0,1189
x = 0,374 − 0,1189
0,0483 = 5,282
b. Konsentrasi vitamin C dalam sampel = Pengenceran x Konsentrasi
= 10 x 5,282
= 52,82 ppm
c. 500 𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿 x 52,82 ppm = 26,41 mg
48
III. Absorban : 0,374
a. y = 0,0483x + 0,1189
0,374 = 0,0483x + 0,1189
x = 0,374 − 0,1189
0,0483 = 5,282
b. Konsentrasi vitamin C dalam sampel = Pengenceran x Konsentrasi
= 10 x 5,282
= 52,82 ppm
c. 500 𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿 x 52,82 ppm = 26,41 mg
49
LAMPIRAN VII
Perhitungan IC50
A. IC50 Vitamin C
y = 4,671x + 13,39
IC5 = Inhibisi 50%
50 = 4,671x + 13,39
x = 50−13,39
4,671
x = 7,8 ppm
B. IC50 Ekstrak
y = 0,0282x + 43,869
IC50 = Inhibisi 50%
50 = 0,0282x + 43,869
x = 50−43,869
0,0282
x = 217,41ppm