modul 2 - turbidimetri dan counting chamber - novita

8/18/2019 Modul 2 - Turbidimetri Dan Counting Chamber - Novita

1/12

Laboratorium Mikrobiologi

Teknik

1

Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi Teknik

LAPORAN RESMI

PENENTUAN JUMLAH SEL MIKROORGANISME

I. Tujuan

I.1 Metode Spektrofotoetr!

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mempelajari cara menghitung jumlah

sel mikroorganisme dengan metode spektrofotometri.

II." Metode Counting Chamber


sel mikroorganisme dengan metode counting chamber .

II. #ata Pen$aatan

II.1 Metode Spektrofotoetr!

Ta%e& II. 1 Hasil Pengamatan Metode Spektrofotometri

'aktor Pen$en(eran )T O#

1:1 25.2 .5!!

1:2 "#.$% .&2!

1:" %#.$& .11"

1:$ %!.& .12

1:1# $#.5% .#&

II." Metode Counting Chamber

Massa ragi ' 1 gram

Ta%e& II." Hasil Pengamatan pada Pengenceran 1. kali

(umlah sel ragi rata)rata ' 2%*&

RunKotak Tota&

Ju&a*

Se&+ Kotak

A , - # E

1 1 % $ $ % " $

2 $ ! 1& $ ! "% !+"

& ! ! 11 1 ! "$ !+#

(,M-H 2%


2/12


Teknik

2


' ! sel*kotak

(umlah sel ragi ' ! / 01*25 sel*mm2

' 225 sel*mm2

(umlah sel ragi ' 225 sel*mm2 / 01*+1mm3 sel*mm&

' 2.25 sel*mm&

(umlah sel ragi pada pengenceran 1./ ' 2.25 sel*mm& / 01 mm&*+1 ml

' 2.25. sel*ml sampel

' 2 juta sel*ml sampel

Ta%e& II. Hasil Pengamatan pada Pengenceran 1. kali

(umlah sel ragi rata)rata ' 22+#*&

' %+5&& sel*kotak

(umlah sel ragi ' %+5&& / 01*25 sel*mm2

' 1$$+&25 sel*mm2

(umlah sel ragi ' 1$$+&25 sel*mm2 / 01*+1mm3 sel*mm&

' 1$$&+25 sel*mm&

(umlah sel ragi pada pengenceran 1./ '1.$$&+25 sel*mm&

/ 01 mm&

*+1

ml

' 1.$$&.25 sel*ml sampel

' 2 juta sel*ml sampel

Ta%e& II./ Hasil Pengamatan pada Pengenceran 1.. kali

RunKotak Tota&

Ju&a*

Se&+ Kotak

A , - # E

1 5 # 12 % ! &! %+$

2 & 5 1& # 11 &$ %+#

& 5 " 15 5 % %+2

(,M-H 22.#


3/12


Teknik

3


(umlah sel ragi rata)rata ' 1+"*&

' +"% sel*kotak

(umlah sel ragi ' ."% / 01*25 sel*mm2

' 11+%5 sel*mm2

(umlah sel ragi ' 11+%5 sel*mm2 / 01*+1mm3 sel*mm&

' 11%+5 sel*mm&

(umlah sel ragi pada pengenceran 1../ ' 11%+5 sel*mm& / 01 mm&*+1

ml

' 11%.5 sel*ml sampel

' 1 ribu sel*ml sampel

III. Pe%a*a0an

III.1 Metode Spektrofotoetr!


sel mikroorganisme dengan metode spektrofotometri. Spektrofotometri

merupakan analisa kuantitatif berdasarkan absorbsi suatu 4at terhadap panjang

gelombang elektromagnetik tertentu+ dalam hal ini gelombang cahaa. Suspensi

dari suatu sel akan terlihat keruh+ karena sel akan menebarkan cahaa ang

mele6ati suspense. Semakin banak sel+ semakin banak cahaa ang disebarkan+

sehingga suspensi terlihat semakin keruh. 7ekeruhan sel akan sebanding dengan

jumlah sel ang ada di suatu suspense. Sehingga perlu dipahami bah6a absorbsi

ang terjadi pada sel bukan karena adana absorbsi pada panjang gelombang

tertentu+ tetapi penebaran cahaa pada panjang gelombang tertentu. Pengukuran

RunKotak Tota&

Ju&a*

Se&+ Kotak

A , - # E

1 1 1 2 +"

2 1 1 1 & +#

& 1 1 2 +"

(,M-H 1+"


4/12


Teknik

4


kekeruhan sel disajikan dalam satuan Optical Density 089 pada panjang

gelombang ang spesifik.

0Madigan+ 212+ hal 1&1

0Tortora+ 21+ hal 1%!

Pertama)tama spektrofotometer dinalakan lalu ditunggu sekitar 15 menit

agar alat ang digunakan mencapai kesetimbangan termal sehingga lebih optimal

ketika digunakan. 7emudian dilakukan pengenceran terhadap bakteri Escherichia

coli. Pengenceran berfungsi untuk mengurangi konsentrasi suspensi. 9engan

konsentrasi bakteri ang kecil+ bakteri akan tersebar merata di seluruh larutan dan

kemungkinan membentuk gumpalan. Pengenceran ang digunakan adalah

pengenceran berantai+ sehingga akan menghemat larutan dan bahan.

-angkah pertama ang dilakukan dalam pengenceran adalah meniapkan 5tabung reaksi dan memberi label 1:1+ 1:2+ 1:"+ 1:$+ dan 1:1#. utrient ;roth

dimasukkan ke dalam tabung 0kecuali tabung 1:1 masing)masing sebanak " ml.

9itambahkan nutrient broth supaa mikroorganisme ang digunakan+ aitu

Escherecia coli tidak mati.

Nutrient Broth Agar 0; merupakan media ang berasal dari ekstrak

daging. Media ; terdiri dari 2 jenis+ aitu cair 0 Nutrient Broth atau padat

dengan penambahan agar 0 Nutrient Agar . ; cocok digunakan untuk kultur

bakteri karena kandunganna kaa protein ang sangat dibutuhkan bakteri dalam

pertumbuhanna.

7omposisi Nutrient Agar adalah sebagai berikut:

Peptone 5. g

;eef e/tract &. g

gar 15. g

9istilled 6ater 1+. ml

7omposisi Nutrient Broth adalah sebagai berikut:

Peptone 5. g

;eef e/tract &. g

Ga%ar III.1 Metode spektrofotometri untuk menghitung jumlah sel


5/12


Teknik

5


9istilled 6ater 1+. ml

0Prescott+ 22+ hal. ""#

;akteri ang digunakan adalah Escherichia coli dengan taksonomi sebagai

berikut:

9omain : ;acteria

nterobacteriales

nterobacteriaceae

=enus : Escherichia

Spesies : E. coli

?iri)ciri dari Eschericia coli adalah berbentuk batang 0basil dan berukuran

panjang sekitar & @m. Merupakan bakteri gram negatif dan tidak menghasilkan

spora. Eschericia coli merupakan bakteri ang dapat menguntungkan maupun

merugikan. Eschericia coli membantu dalam proses pembusukan makanan di

dalam usus besar. amun di sisi lain dapat menebabkan berbagai macam

penakit pada manusia+ seperti diare+ infeksi saluran kemih+ sepsis+ dan

meningitis.

0-eboffe+ 211+ hal. 1""

-arutan suspesi Escherichia coli kemudian diambil " ml dan dimasukkan ke

tabung 1:1. -arutan suspesi Escherichia coli kemudian diambil " ml lagi dan

dimasukkan ke tabung 1:2. 9ari tabung 1:2 diambil " ml dimasukkan ke tabung

1:". 9ari tabung 1:" diambil " ml dimasukkan ke tabung 1:$. 9ari tabung 1:$

diambil " ml dimasukkan ke tabung 1:1#. 7etika pengenceran+ suspensi bakteri

diaduk dengan memutar)mutar tabung reaksi dengan telapak tangan. Tujuanna

agar larutan menjadi homogen sehingga tidak ada bakteri ang terkonsentrasi

pada satu titik. Pengadukan tidak boleh dilakukan dengan mengocok tabung

reaksi karena dapat menebabkan sel)selna mati dan terjadi penumpukan sel.


6/12


Teknik

6


0;enson+ 2&+ !%

Panjang gelombang pada spektrofotometer diatur menjadi #$# nm+ lalu

dimasukkan kuAet ang berisi media Nutrient Broth sebagai blanko. Sel bakteri

menebarkan cahaa dengan baik pada panjang gelombang #$# nm+ ketika

ditumbuhkan di media standar. Setelah itu spektrofotometer dikalibrasi sehingga

menunjukkan dan 1 BT

Suspensi bakteri pada tabung 1:1 dimasukkan ke dalam kuAet hingga C

Aolume kuAet. 7uAet tidak boleh diisi penuh untuk menghindari larutan tumpah di

dalam ruang pengukuran. 7uAet berisi blanko kemudian dikeluarkan dan diganti

dengan kuAet berisi suspensi bakteri ang akan diukur. Spektrofotometer akan

menunjukkan angka absorbansi dan transmitansi. Tunggu beberapa saat agar

spektrofotometer menunjukkan angka ang stabil lalu dicatat hasilna.

Pengukuran pada suatu satu Aariabel lebih baik diulang sebnaak & kali kemudian

dirata)rata hasilna untuk mendapatkan hasil ang lebih akurat. Prosedur ang

sama dilakukan untuk Aariable lainna+ aitu 1:2+ 1:"+ 1:$+ dan 1:1#. Pada setiap

pergantian Aariabel pengenceran+ juga dilakukan standarisasi dengan larutan

blanko.

1:1 1:2 1:4 1:8 1:160

0.2

0.4

0.6

0.8

9iagram


7/12


Teknik


III." Metode Counting Chamber


sel mikroorganisme dengan metode counting chamber . Metode termasuk metode

langsung karena menghitung jumlah sel pada sebagian kecil sampel kemudian

dihitung rata)rata jumlah sel per ml. Metode ini mempunai keuntungan karena

hana membutuhkan 6aktu ang singkat+ mudah+ dan tidak memerlukan biaa

mahal. amun apabila tidak diberi pe6arnaan khusus+ sel hidup atau sel ang

mati tidak dapat dibedakan sehingga mengurangi tingkat kepercaaan

perhitungan.

Pertama)tama 1 gram fermipan 0Saccharomyces cerevisiae dilarutkan dengan

aEuadest 1 ml lalu diencerkan secara berantai. -arutan fermipan kemudian

diambil 1 ml dan diencerkan dengan aEuadest hingga 1 ml dan dimasukkan ke

tabung . 9ari tabung diambil 1 ml dan dimasukkan ke tabung ; lalu

diencerkan dengan aEuadest hingga 1 ml. 9ari tabung ; diambil 1 ml dandimasukkan ke tabung ? lalu diencerkan dengan aEuadest hingga 1 ml. 9ari

tabung ? diambil 1 ml dan dimasukkan ke tabung 9 lalu diencerkan dengan

aEuadest hingga 1 ml. 9ari tabung 9 diambil 1 ml dan dimasukkan ke tabung

;>lalu diencerkan dengan aEuadest hingga 1 ml. 9ari tabung > diambil 1 ml dan

dimasukkan ke tabung < lalu diencerkan dengan aEuadest hingga 1 ml. 7etika

pengenceran+ suspensi fermipan diaduk dengan memutar)mutar tabung reaksi

dengan telapak tangan. Tujuanna agar larutan menjadi homogen sehingga tidak

ada yeast ang terkonsentrasi pada satu titik. Pengadukan tidak boleh dilakukan

dengan mengocok tabung reaksi karena dapat menebabkan sel)selna mati dan

terjadi penumpukan sel. Pengenceran sendiri bertujuan agar bakteri ang akan

diamati tidak berkoloni+ sehingga mempermudah pengamatan.

Hemasitometer dan deck glass ang akan digunakan dibersihkan terlebih

dahulu menggunakan alkohol. Hal ini bertujuan untuk membunuh segala

mikroorganisme ang ada pada hemasitometer maupun deck glass. lkohol

Ga%ar III. =rafik


8/12


Teknik

8


efektif untuk membunuh bakteri dan jamur+ tetapi tidak dengan endospore dan

Airus ang tidak mempunai envelope. Mekanisme alkohol digunakan sebagai

desinfektan karena alkohol menebabkan denaturasi protein+ dapat merusak membran dan melarutkan lemak+ termasuk komponen lemak penusun lapisan

pelindung pada Airus. lkohol cukup baik dalam membunuh mikroorganisme dan

mudah menguap serta tidak meninggalkan residu. Selanjutna menghitung

banakna sel secara langsung.

0Tortora+ 21+ hal. 1!%

Mikroskop berasal dari bahasa Funani ang terdiri dari micos ang artina

kecil dan scopein ang artina melihat. Mikroskop merupakan alat bantu angdapat ditemukan hampir diseluruh laboratorium untuk dapat mengamati

organisme berukuran kecil 0mikroskopis. 9ua karakteristik kunci dari mikroskop

adalah magnification+ atau kemampuan untuk memperbesar objek+ dan resolving

power + atau kemampuan untuk menampilkan detail objek. da beberapa jenis

mikroskop+ aitu mikroskop konAensional+ mikroskop cahaa 0compound light

microscope+ dan mikroskop elektron. Mikroskop konAensional adalah mikroskop

ang menggunakan cahaa matahari ang dipantulkan melalui cermin sebagai

sumber cahaa. Mikroskop cahaa 0compound light microscope adalah

mikroskop ang hampir mirip dengan mikroskop konAensional+ tetapi sumber

cahaa berasal dari lampu elektrik pada mikroskop. Mikroskop elektron adalah

mikroskop ang mengunakan elektron sebagai sumber cahaa. Mikroskop

elektron dibagi menjadi 2+ aitu ransmission Electron !icroscope 0T>M dan

Scanning Electron !icroscope 0S>M.

0?o6an+ 21#+ hal 5)51

Pada percobaan ini+ mikroskop ang digunakan adalah mikroskop cahaa

0"ompound #ight !icroscope dengan perbesaran lensa obektif "/ dan lensa

okuler 1/+ sehingga perbesaran totalna "/. Perbesaran total didapatkan

dengan mengalikan perbesaran pada lensa okuler dengan perbesaran pada lensa

obektif.

0?o6an+ 21#+ hal "$

Hemasitometer dapat dikatakan sebagai kaca obek ang dibuat secara

khusus sehingga terdapat jarak antara hemasitometer dengan deck glass ang


9/12

! "

#

$

%


Teknik

&


dikenal dengan kedalaman. Pada permukaan hemasitometer terdapat suatu grid

dengan luasan tertentu ang digunakan untuk menghitung sel.

0-eboffe+ 211+ hal. 21!

Pengamatan pada setiap sampel Aariabel diulang sebanak tiga kali+

kemudian dirata)rata hasilna. Hal ini untuk menghindari kesalahan

perhitungan. 9ari percobaan diperoleh data jumlah sel per kotak. 9ari data

tersebut+ dapat dihitung jumlah sel per ml dengan cara :

(umlah sel* mm& ' jumlah sel rata G rata per kotak

0luas per kotak / tebal

(umlah sel * ml ' jumlah sel * mm& / 1 0mm&*ml

0Tortora+ 21+ hal 1%$

Setelah dilakukan perhitungan+ hemasitometer dan deck glass dibersihkan

kembali dengan alkohol untuk membunuh bakteri ang tersisa. Prosedur ang

sama dilakukan untuk larutan di tabung > 0pengenceran 1. kali dan larutan

di tabung < 0pengenceran 1.. kali. Pengamatan untuk metode ini hana

pada pengenceran 1. kali+ 1. kali+ dan 1.. kali. Hal ini

dilakukan karena metode counting chamber ini memiliki kekurangan aitu:

1. Sel mati tidak bisa dibedakan dengan sel hidup+

Ga%ar III. Hemasitometer

Ga%ar III.2 uang Hitung pada Hemasitometer


10/12


Teknik

10


2. Sel kecil sukar terlihat pada mikroskop+ sehingga hal ini mengakibatkan sel

tersebut terle6atkan atau tidak terhitung+

&. Tingkat ketelitian kurang+". 9ibutuhkan mikroskop dengan kontras tinggi ketika tidak digunakan

pe6arnaan terhadap bakteri

5. Metode ini tidak cocok untuk suspensi sel dengan kepekatan atau kekentalan

rendah+

#. Sel ang bersifat motile harus dibuat tidak bergerak sebelum dihitung+

%. 9ebu pada lensa mikroskop sering terhitung sebagai sel mikroorganisme.

0Madigan+ 212+ hal. 12!

9ari data hasil pengamatan dan perhitungan+ dapat dibuat grafik ang

menatakan hubungan antara pengenceran dan jumlah sel sebagai berikut :

0 500000 1000000

0

5

10

15

20

25

'()* + , 0) - 21.85

R + 0.&&

=rafik Hubungan (umlah Sel dengan Pengenceran

Pengenceran 0kali

(umlah sel * ml sampel 0/15

;erdasarkan grafik ang telah dibuat+ diketahui bah6a harga gradienna

negatif. Hal ini menunjukkan bah6a pengenceran berbanding terbalik dengan

nilai jumlah sel. 9engan kata lain+ semakin besar pengenceran+ maka semakin

sedikit jumlah sel ragi*ml dalam sampel ang diamati+ begitu pula sebalikna. Hal

Ga%ar III.2 =rafik Hubungan (umlah sel dengan Pengenceran


11/12


Teknik

11


ini juga sesuai pada literatur+ aitu ketika konsentrasi bakteri dalam suatu sampel

menurun+ maka jumlah sel mikroorganisme juga semakin menurun.

0Tortora+ 21+ 1%%

Ja3a%an Pertan4aan

1. Apa *u%un$an antara O# den$an ju&a* 0e& pada culture 0audara5

Optical Density akan berbanding terbalik dengan jumlah sel. Semakin banak

jumlah sel+ maka akan semakin banak pula cahaa ang disebarkan oleh

bakteri sehingga nilai transmitanna akan kecil. Hal itu menebabkan nilai

Optical Density menjadi lebih kecil. ;egitu pula sebalikna.

". Apaka* d!per&ukan untuk e%uat 0uatu *u%un$an antara per*!tun$an

0e& antara etode 1 6d!&ut!on7 den$an etode " 6tur%!d!etr!7 5

Perlu. Hal ini dikarenakan agar data ang diperoleh dari turbidimetri dapat

dinatakan sebagai konsentrasi mikroorganisme+ maka diperlukan suatu

kurAa standar ang menatakan korelasi antara kekeruhan biakan dengan

jumlah mikroorganisme per Aolume biakan. amun+ pada praktikum kali ini

tidak bisa dilakukan+ karena mikroorganisme ang digunakan pada kedua

metode berbeda.

I8. Ke0!pu&an

I8.1 Metode Tur%!d!etr!

;erdasarkan hasil percobaan dengan metode spektrofotometri dapat

disimpulkan bah6a nilai Optical Density berbanding terbalik dengan faktor

pengenceran+ akan tetapi berbanding lurus dengan jumlah sel dalam sampel.

I8." Metode Counting Chamber ;erdasarkan hasil percobaan dengan metode counting chamber dapat

disimpulkan bah6a jumlah sel pada pengenceran 1./ adalah 2.25.

sel*ml sampel+ pada pengenceran 1./ adalah 1.$$&.25 sel*ml sampel+ dan

pada pengenceran 1../ adalah 11%.5 sel*ml sampel.

#aftar Pu0taka


12/12


Teknik

12


;enson. 21. !icrobiological Applications #aboratory !anual $th Edition. The

Mc=ra6 Hill

?o6an+ Marjorie 7ell+ et al. 21#. !icrobiology %undamentals A "linical

Approach Second Edition. e6 Fork: Mc=ra6 Hill

-eboffe+ Michael (.+ Pierce+ ;urton >. 211. A &hotographic Atlas for the

Bicrobiology #aboratory 'th Edition. ,S: Morton Publishing ?ompan

Madigan+ Michael T. et al. 212. Brock Biology of !icroorganisms ()th Edition.

San

modul 2 - turbidimetri dan counting chamber - novita

Documents