metode parafin mikroteknik

7/21/2019 metode parafin mikroteknik

http://slidepdf.com/reader/full/metode-parafin-mikroteknik 1/8

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Mikroteknik secara umum didefinisikan sebagai ilmu yang mempelajari metode

pembuatan preparat mikroskopis, baik preparat hewan maupun tumbuhan, menganalisis

preparat mikroskopis dan melakukan mikrometri, serta membahas manfaat preparat bagi

perkembangan keilmuan dan dukungan terhadap kehidupan manusia. Sedangkan mikroteknik

tumbuhan merupakan teknik dalam pembuatan preparat mikroskopis tumbuhan. Beberapa

metode yang dikenal dalam pembuatan preparat tumbuhan, yaitu metode parafin, metode

squash, metode asetolisis, metode maserasi dan metode whole mount(Maximilian, !""#.

$ubuh hewan secara morfologi terdiri atas unit sel, dan masing%masing sel dengan

mengadakan kesatuan dengan adanya substansi antar sel. &i dalam tubuh hewan sel%sel ini

terdapat dalam kelompok yang secara struktural dan fungsional berbeda dengan kelompok sel

yang lain. 'elompok%kelompok sel%sel tersebut dikenal dengan jaringan (Sumardi, !!#.

aringan dalam bahasa )erancis adalah *tissue* yang pertama kali digunakan oleh

Bichat seorang ahli anatomi dan fisiologi dari )erancis yang terkesan oleh ragam anyaman

yang dijumpainya sewaktu mendeteksi tubuh. +bserasi mikroskop pada jaringan yang

berbeda memastikan bahwa satuan terkecil dari jaringan dibentuk oleh sel, sel inilah

merupakan struktur terkecil yang membentuk tubuh manusia, hewan dan tumbuhan (-ianury,

!!!#.

Metode paraffin memiliki langkah%langkah penting dalam metode ini antara lain

fiksasi, pencucian, dehidrasi, penjernihan, embedding, penyayatan ( section#, penempelan,

pewarnaan, danpenutupan(&asumiati !!#. -arutan fiksasi yang digunakan untuk proses

fiksasi adalah larutan Bouine. -arutan fiksasi ini merupakan larutan yang mampu bereaksi

dan menandai suatu sel dengan spesimen diiris setipis mungkin. /al ini sangat mendukung

laju fiksasi dalam sel(&asumiati !!#.

1.2. Rumusan masalah

". Bagaimanakah penggunaan metode parafin dalam pembuatan preparat0

. Bagaimanakah penggunaan mikrotom dalam membuat irisan preparat0

BAB II

PEMBAHASAN



2.1 Metode Para!n

2.1.1 Pengert!an em"edd!ng

1mbedding merupakan proses pelilinan suatu organ dengan menggunakan kotak

kertas yang dilapisi dengan gliserin. )roses ini memudahkan dalam membuat irisan yang

sangat tipis dengan menggunakan mikrotom. Beberapa keuntungan menggunakan kotak

kertas. &alam embedding yaitu bisa membuat arah sayatan dan menandai suatu jaringan.

aringan atau sampel akan ditanam di ketas kotak, dengan terlebih dahulu parafin membeku

pada bagian dasar dalam kotak dan setelah penempelan jaringan dilanjutkan dengan

penutupan dengan parafin sampai membeku. )roses penyayatan (sectioning# diawali dengan

pengirisan blok parafin dengan scalpel, sehingga permukaan blok parafin yang akan diiris

dengan mikrotom berbentuk trapesium. -etak mata pisau pada mikrotom menentukan hasil

yang diperoleh. /asil sayatan diambil dengan menggunakan kuas secara hati%hati. )ita hasil

sayatan ditempel pada kaca objek dengan menggunakan meyer albumin. 'aca obyek tersebut

diletakkan di atas meja penangas ( haeting plate#. Meyer albumin memiliki kandungan putih

telur dan gliserin dan merupakan pelakat alami yang sangat baik#. Sedang proses pewarnaan

dilakukan setelah preparat dideparafinasi dengan merendam preparat pada xylol. Salah satu

pewarna metode parafin pada jaringan hewan adalah hematoxylin dan 1osin. 2at warna

hematoxilin ini bersifat mewarnai inti sedang eosin mewarnai

sitoplasmanya(3risworo&!!!#.

3lat dan Bahan yang digunakan dalam 1mbedding antara lain 4

3lat Bahan

'otak kayu )arafin

'ertas manila5kalender 6liserin

)inset

arum

7awan petri

)rosedur 1mbeding

Mempersiapkan kotak kertas sebagai tempat pengeblokan dengan bantuan kotak kayu.

Menuangkan parafin yang sudah dicairkan ke dalam kotak kertas yang telah diberi tanda

panah terlebih dahulu untuk membedakan antara arah pemotongannya (posterior5anterior,

membujur5melintang#.



Menuangkan setengah parafin ke dalam kotak kertas terlebih dahulu dan tunggu sebentar

hingga parafin sedikit membeku agar mudah menempatkan objek.

Meletakkan objek di permukaan parafin yang telah dituang ke dalam kotak kertas.

Mengatur letak objek dengan pipet atau jarum.

Menuang sisa parafin hingga penuh. 8sahakan dalam menuang parafin tidak ada gelembung.

Mendinginkan blok parafin.

2.1.2 Pengert!an M!krotom

)ujawati (!! 4 9:# menyatakan bahwa mikrotom merupakan instrument ilmiah yang

memotong iris optis suatu untuk memeriksa mikroskopis. 3lat untuk membuat bagian yang

sangat tipis untuk pemeriksaan mikroskopis. 3lat mekanis yang digunakan untuk memotong

specimen biologi menjadi bagian tipis trasparan untuk pemeriksaan mikrokopis. Mikrotom

menggunakan baja, kaca atau berlian pisau tergantung pada spesimen yang sedang diiris dan

ketebalan yang diinginkan dari bagian yang dipotong.

Mikrotom merupakan perangkat penting dalam persiapan mikroskop, memungkinkan

untuk persiapan sampel untuk pengamatan di bawah cahaya yang ditransmisikan atau radiasi

elektron. Mikrotom menggunakan pisau baja atau kaca tergantung pada spesimen yang diiris

dan ketebalan yang diinginkan dari bagian yang dipotong. )isau baja digunakan untuk

mempersiapkan bagian dari jaringan hewan atau tanaman untuk histologi mikroskop cahaya.

)isau kaca digunakan untuk mengiris bagian untuk mikroskop cahaya dan untuk mengiris

bagian sangat tipis untuk mikroskopi elektron. $ingkat industri berlian pisau yang digunakan

untuk mengiris bahan%bahan keras seperti tulang, gigi dan materi tanaman untuk kedua

mikroskop cahaya dan mikroskop elektron. 6em kualitas berlian pisau yang digunakan untuk

mengiris bagian tipis untuk mikroskopi electron. Microtomy adalah metode untuk persiapan

bagian tipis untuk bahan seperti tulang, mineral dan gigi, dan alternatif untuk electropolishing

dan penggilingan ion. Bagian mikrotom dapat dibuat cukup tipis untuk bagian rambut

manusia di lebarnya, dengan ketebalan bagian antara !,!: dan "!! mikron.

6ambar " 4 M;krotom



Secara umum, suatu mikrotom memilki bagian%bagian terpenting sebagai berikut4 a#

Skala pengatur ketebalan sayatan biasanya terdapat di bagian kanan atas badan mikrotom,

skala ini dapat digeser ke kiri dan ke kanan sesuai dengan ketebalan sayatan yang diinginkan.

b# )isau mikrotom, merupakan komponen yang bisa menentukan kualitas sayatan. c#

)egangan blok jaringan, merupakan komponen yang menghubungkan mikrotom dengan blok

jaringan yang hendak disayat. d# )engatur jarak berfungsi untuk mengatur blok jaringan

dengan mata pisau.

Beberapa penggunaan mikrotom4

8ntuk mikroskop cahaya, material pertama%tama difiksasi dan dibekukan atau dibenamkan ke

dalam parafin. Bagian%bagian setebal < = ! mm biasanya diiris dengan pisau baja.

8ntuk mikroskop elektron, fiksasi diikuti dengan pembenaman dalam resin seperti 3raldine,

bagian%bagian diiris dengan pisau gelas atau pisau intan ultramikrotom setebal = "!! nm.

enis = jenis mikrotom

Secara garis besar mikrotom dibagi menjadi dua golongan4

a# Mikrotom Schant> , yaitu mikrotom dimana pada saat menyayat, blok jaringan yang

hendak disayat tetap diam di tempatnya sementara pisau melewati blok parafin tersebut.

Mikrotom ini tidak dapat menghasilkan pita sayatan, tetapi sayatan yang dihasilkan selalu

terpisah satu sama lain.

b# Mikrotom Spencer adalah mikrotom dimana pada saat menyayat dapat menghasilkan pita

sayatan yang panjang sehingga sangat cocok untuk pembuatan preperat sayatan serial.

3. )engirisan dengan Mikrotom

3lat 4

". Mikrotom (pisau mikrotom, tempat pegangan blok, mikrometer pengatur tebal

tipisnya irisan dalam mikron, roda penggerak blok naik turun sambil berjalan maju

untuk dapat diiris#

. 'uas

http://id.wikipedia.org/wiki/Parafin


http://id.wikipedia.org/wiki/Intan






<. )isau

Bahan 4

". Blok parafin

)rosedur Menggunakan Mikrotom 4

Mengatur posisi objek dengan tepat di mikrotom lalu kunci dan putar hingga objek terpotong.

Menahan hasill potongan yang berbentuk pita panjang dengan menggunakan kuas.

Mengambil potongan objek dengan mengirisnya menggunakan pisau.

Meletakkan potongan pada kaca benda yang telah diberi label.

6ambar 4 /asil )engirisan mengunakan Mikrotom

&alam penempelan irisan dibutuhkan bahan perekat agar irisan tatap menempel pada

kaca benda untuk melalui tahapan berikutnya. Bahan perekat yang sering digunakan adalah

perekat /aupt(/aupt 3dhesie# dan perekat Mayer(Mayer 3dhesie#.

B. )erekat /aupt

7ara pembuatan perekat /aupt dengan melarutkan " g gelatin dalam "!! ml aquades

dan dipanaskan hingga suhu <! derajat celcius sambil diaduk. ika telah larut

ditambahkan g kristal phenol dan ":ml gliserin kemudian disaring ketika masih

panas.

)rosedur penggunaanya seperti berikut 4

Semirkan perekat /aupt diatas kaca benda

Meneteskan sedikit formalin <? diatas perekat



Meletakan irisan diatas formalin

Memanaskan lampu spirtus agar irisan menempel pada kaca benda sisa perekat dan

formalin diisap dengan kertas perekat

'emudian mengeringkan dlam oen kering bersuhu @: erajat celcius

7. )erekat Mayer

8mumnya penggunakan perekat ini dilakukan terhadap jaringan hewan. 7ara

membuatnya dengan mencampurkan :! ml putih telur(albumin# yang masih segar

dengan :! ml gliserin dan "g natrium salisilat. 'emudian disaring dan dibiarkan

beberapa jam sampai beberapa hari.

)rosedur penggunaanya sebagai berikut4

Semirkan perekat Mayer pada kaca benda kemudian keringkan

Meneteskan akuades diatas perekat

Meletakan irisan diatas akuades tersebut

Memanaskan diatas lampu spirtus agar menempel rata pada kaca benda sisa kauades

diisap dengan kertas isap

'eringkan



BAB III

PENU#UP

<." 'esimpulan

". Metode paraffin memiliki langkah%langkah penting dalam metode ini antara lain fiksasi,

pencucian, dehidrasi, penjernihan, embedding, penyayatan ( section#, penempelan,

pewarnaan, dan penutupan.

. )engirisan mengunakan pisau mikrotom dapat dilakukan setelah blok atau embedding

dingin. Mengatur posisi objek dengan tepat di mikrotom lalu kunci dan putar hingga

objek terpotong. Menahan hasill potongan yang berbentuk pita panjang dengan

menggunakan kuas. Mengambil potongan objek dengan mengirisnya menggunakan

pisau. Meletakkan potongan pada kaca benda yang telah diberi label. &alam penempelan

potongan mikrotom ke kaca benda dapat mengunakan perekat /oupt yang dapatdigunakan pada irisan jaringan hewan dan tumbuhan dan )erekat Mayer yang biasa

digunakan pada irisan jaringan hewan.



&aftar Aujukan

3bdul, 3ryati ). !!:. Bahan ajar biologi umum. gorontalo 4 86

3nonimus. !"!. Mikrotom.(online#. htttp.55 tekniklaboratorium.web.id5 diakses selasa C

3gustusi !":. ".!:. wib

&asumiati. !!. Diktat Kuliah Mikroteknik . akarta 4 8; Syarif /idayatullah )ress.

udani, $iti. !!<. Dasar-Dasar Mikrotehnik . Malang4 8M.

'aunang, $. !!D. Hand out teknik laboratorium. Surabaya 4 8;M3

)ujawati, 1.&. !!. Petunjuk praktikum mikroteknik tumbuhan. -ampung mangkurat 4

8niersitas -ambung

$ean, ohn. !!D. Teknik laboratorium, M;)3. Bandung 4 ;$B

Eijosoemarto, '. !!@. Teknik laboratorium. Surakarta 4 ;S$1)

metode parafin mikroteknik

Documents