makalah imunopresipitasi

7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi

http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 1/11

DAFTAR ISI

DAFTAR ISI ..........................................................................................................1

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................2

BAB I PENDAHUL UAN

1.1. Latar Belakang .........................................................................................3

1.2. Rumuan Maala! ..................................................................................."

1.3. Tu#uan $an Man%aat ................................................................................"

BAB II TIN&AUAN PUSTA'A

2.1 Imun(k)m)a ......................................................................................................*

2.2 Imun(+re)+)ta) ..............................................................................................*

BAB III PEMBAHASAN

3.1 Met($e Imun(+re)+)ta) ..........................................................................,

3.2 Tekn)k - Tekn)k Immu+re)+)tat)(n .......................................................,

BAB I/ PENUTUP

".1 'e)m+ulan ..............................................................................................10

".2 Saran .........................................................................................................10

DAFTAR PUSTA'A ..........................................................................................11

1



DAFTAR GAMBAR

Gamar 2 Langka! 'r(mat)n Imun(+re)+)ta................................................

Gamaar 2 U#) menggunakan Lael +r(te)n .....................................................

2



BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tren modern dalam pengembangan teknologi biokimia berdasarkan protein-

protein dan ligan-protein interaksi mengharuskan memperbarui dan memperluas

terus-menerus serangkaian metode analisis dan model biokimia karakteristik

mengikat spesifik makromolekul. Hal ini memungkinkan untuk memperdalam

pengetahuan tentang sifat kimia proses bioteknologi dan untuk mengungkapkan

pola yang konsisten baru praktis penting pada tingkat molekuler. Pendekatan ini

efektif, khususnya, dalam mengembangkan tes imunokimia untuk diagnosa medis.

Imunokimia adalah suatu kajian imunologi yang berfokus pada level kimia

atau biokimia. Imunokimia juga menerangkan seara rini molekul - molekul dan

reaksi ! reaksi yang terlibat dalam sistem kekebalan yang berkembang pesat

dengan adanya teknik laboratorium.

"alah satu metode imunokimia, yaitu imunopresipitasi. Immunopreipitasi

adalah teknik yang popular digunakan di berbagai bidang ilmiah yang

menggunakan spesifisitas antibodi untuk mengisolasi protein. Prosedur

immunopresipitasi adalah dengan menghilangkan peptide dan protein larut dari

larutan. "edangkan protein yang bereaksi seara spesifik dengan antibody dapat

dianalisis. #ntuk aplikasi dari immunopresipitasi ini, terbagi kembali beberapa

teknik $ %-&iosienes, 2'12 (.

Teknik imunopresipitasi merupakan salah satu ara yang banyak dipakai untuk

mengukur kadar antigen atau antibodi. Proses ini dapat digunakan untuk

mengisolasi dan berkonsentrasi protein tertentu dari sampel yang mengandung

ribuan protein yang berbeda. Immunopresipitasi membutuhkan keterikatan antara

antibodi yang digabungkan ke substrat padat di beberapa titik dalam prosedur $

)ora, 2''* (.

)ari permasalahan diatas, maka dari itu kami menulis makalah tentang

immunopresipitasi ini untuk untuk mengetahui salah satu aplikasi yang digunakan

dalam teknik ini. Hal ini bertujuan untuk mengetahui teknik yang lebih baik dan

lebih ook dalam penggunaannya.

+



1.2 Rumuan Maala!

1( pa yang dimaksud dengan imunokimia

2( pa yang dimaksud dengan imunopresipitasi

+( pa saja teknik-teknik dari imunopresipitasi

( &agaimana aplikasi dari imunopresipitasi

1.3 Tu#uan $an Man%aat

1( /engetahui pengertian dari imunokimia.

2( /emahami teknik ! teknik dari imunopresipitasi.

+( /engetahui salah satu aplikasi dari imunopresipitasi.



BAB II

TIN&AUAN PUSTA'A

2.1 Imun(k)m)a

Imunokimia adalah suatu kajian imunologi yang berfokus pada level kimia atau

biokimia. Imunokimia juga menerangkan seara rini molekul ! molekul dan


dengan adanya teknik laboratorium. Imunokimia berfungsi menerangkan reaksi

kimia masuknya benda asing, ontoh le0at penernaan urin dan lain ! lain.

&eberapa ontoh peran dari aplikasi imunokimia, yaitu $ )ora, 2''* (.

1. /engenali antibodi adalah imunoglobulin suatu glikoprotein dan gen

adalah ) suatu polinukleotida.

2. /engenali interaksi antigen-antibodi merupakan interaksi kimia0i yang

dapat dianalogikan dengan interaksi en3im dengan substratnya. "pesifitas

kerja antibodi mirip dengan en3im..

+. /enemukan fakta bah0a golongan darah &4 merupakan glikoprotein

sehingga pemberian transfusi darah yang tidak sesuai akan menimbulkan

hemolisi dan koagulasi.

2.2 Immun(+re)+)ta)

Immunopreipitation adalah teknik yang popular digunakan di berbagai

bidang ilmiah yang menggunakan spesifisitas antibodi untuk mengisolasi protein.

Prosedur immunopresipitasi adalah dengan menghilangkan peptide dan protein

larut dari larutan. "edangkan protein yang bereaksi seara spesifik dengan

antibodi dapat dianalisis. Immunopresipitasi merupakan teknik pengendapan dari

larutan antigen protein yang diggunakan sebagai antibodi yang seara khusus

mengikat protein tertentu. Proses ini dapat digunakan untuk mengisolasi dan berkonsentrasi dengan protein tertentu dari sampel yang mengandung ribuan

protein yang berbeda. Immunopresipitasi mengharuskan antibodi dapat

digabungkan ke substrat padat di beberapa titik dalam prosedur $ %-&iosienes,

2'12 (.

5



BAB III

PEMBAHASAN

3.1 Met($e Immun(+re)+)ta)

Terdapat dua metode utama yang biasanya digunakan pada imunopresipitasi

yaitu diret dan indiret. Pada metode Indiret, ntibodi yang spesifik untuk

protein tertentu $atau kelompok protein( bergerak pada substrat padat-fase seperti

mirobeads superparamagneti atauagarosa mikroskopis $non-magnetik(. "ubstrat

dengan antibodi terikat kemudian ditambahkan ke ampuran protein, dan protein

yang ditargetkan oleh antibodi ditangkap ke substrat melalui antibodi,dengan kata

lain, terjadilah immunopreipitasi. "edangkan pada metode diret, ntibodi yang

spesifik untuk protein tertentu, atau sekelompok protein, ditambahkan langsung

ke ampuran protein. ntibodi belum melekat pada dukungan fase padat belum.

ntibodi bebas untuk mengapung di sekitar ampuran protein dan mengikat target

mereka. )engan berjalannya 0aktu, substrat dilapisi protein 6 % ditambahkan ke

ampuran antibodi dan protein. Pada titik ini, antibodi, yang sekarang terikat

dengan target mereka, akan menempel pada materi $ )ora, 2''* (.

3.2 Tekn)k - tekn)k Immun(+re)+)ta)

"eperti yang dijelaskan diatas, imunopresipitasi merupakan salah satu bagian

dari teknik imunokimia. Imunopresipitasi menggunakan teknik pengendapan dari

larutan antigen protein yang diggunakan sebagai antibodi yang seara khusus

mengikat protein tertentu sehingga dapat diisolasi. dapan beberapa jenis dari

imunopresipitasi, yaitu

1. Immun(+re)+)tat)(n +r(te)n )n$)4)$u 5IP6

/eliputi penggunaan antibodi yang spesifik untuk protein yang dikenal

untuk mengisolasi protein tertentu dari larutan yang mengandung banyak

protein yang berbeda. 7arutan ini akan sering berada dalam bentuk lisat

minyak dari jaringan tanaman atau he0an. 8enis sampel lainnya bisa

menjadi airan tubuh atau sampel lainnya asal biologis $ 9osenberg, 2'': (.

2. Pr(te)n )mmun(+re)+)tat)(n k(m+lek 57(8IP6

Immunopresipitasi kompleks protein utuh yaitu antigen bersama dengan

protein atau ligan yang terikat untuk itu dikenal sebagai o-

immunopreipitation $;o-IP(. ;o-IP bekerja dengan memilih antibodi

:



yang menargetkan protein yang dikenal agar diyakini sebagai bagian dari

kompleks yang lebih besar dari protein. )engan menargetkan bagian yang

dikenal dengan antibodi hal itu mungkin menjadi menarik untuk seluruh

larutan dari kompleks protein dan dengan demikian mengidentifikasi

bagian yang tidak diketahui dari kompleks. Teknik ini berfungsi ketika

protein yang terlibat mengikat kompleks untuk saling erat, sehingga

memungkinkan untuk menarik beberapa bagian dari larutan kompleks

dengan menempel ke salah satu bagian dari antibodi. <onsep menarik dari

larutan kompleks protein kadang-kadang disebut sebagai =pull-do0n=. ;o-

IP adalah teknik yang kuat yang digunakan seara teratur oleh ahli biologi

molekuler untuk menganalisis interaksi protein-protein $ 9osenberg,

2'': (.

3. 'r(mat)n )mmun(+re)+)tat)(n 57HIP6

<romatin immunopreipitation

$;HIP( adalah metode yang

digunakan untuk menentukan lokasi

binding site ) pada genom untuk

protein tertentu yang menarik. Teknik

ini memberikan gambaran dari

interaksi protein-) yang terjadi di

dalam inti sel hidup atau jaringan.

"ifat in vivo dari metode ini berbeda

dengan pendekatan lain seara

tradisional. >ondasi prinsip pengujian

ini adalah ikatan protein )

$termasuk faktor transkripsi danhiston( dalam sel hidup dapat menjadi

hubungan silang dengan ) dimana mengikat. )engan menggunakan

antibodi yang spesifik untuk protein ) yang diduga mengikat,

imunipresipitasi kompleks protein-) dapat dilihat terjadi lisis seluler.

Ikatan silang sering dilakukan dengan menerapkan formaldehid ke sel

$atau jaringan(, meskipun kadang-kadang menguntungkan untuk

menggunakan ikatan silang dan konsisten seperti )T&P. Pada titik ini

immunopresipitasi dilakukan dengan menghasilkan pemurnian kompleks

*



protein-). <ompleks protein-) dimurnikan kemudian dipanaskan

untuk membalikkan formaldehida silang protein dan ) kompleks,

sehingga ) yang akan dipisahkan dari protein dan untuk identifikasi

serta kuantitas framen ) sapat dilanjutkan dengan P;9 $ 9osenberg,

2'': (.

". RNA Imun(+re)+)tat)(n 5 RIP6

Prinsip kerja 9 Imupresipitasi mirip dengan kromatin

immunopreipitation $;HIP(, hanya saja bukan menargetkan ikatan

protein ) tetapi protein yang mengikat target 9

immunopreipitation 9. 9IP juga merupakan metode yang in vivo

dalam sel-sel hidup yang segaris. )an imunopresipitasi yang dilakukan

dengan antibodi yang menargetkan protein yang menarik. )enganmengisolasi protein, 9 juga akan terisolasi karena terikat dengan

protein. <ompleks 9-protein murni dapat dipisahkan dengan

melakukan ekstraksi 9 dan identitas 9 dapat ditentukan oleh

) se?uening atau 9T-P;9. &eberapa varian dari 9IP, seperti P9-

;7IP termasuk langkah ikatan silang, yang selanjutnya membutuhkan

kondisi lisis $<eene et al , 2'': (.

*. Lael) Pr(te)n

@

%ambar 27angkah <romatin Imunopresipitasi

%ambar 1. Tahapan <romatin Imunopresipitasi



"alah satu hambatan teknis utama dengan imunopresipitasi adalah

kesulitan besar dalam menghasilkan antibodi yang seara khusus

menargetkan protein yang

dikenal tunggal. <euntungan

teknik ini adalah label yang

sama dapat digunakan pada

banyak protein yang berbeda

dan digunakan antibodi yang

sama setiap kali. <euntungan

lain dengan menggunakan

protein lebel yaitu bah0a

teknik ini telah menjadi

terbiasa untuk semua jenis

imunopresipitasi termasuk semua jenis IP yang dijelaskan di atas. ;ontoh

lebel yang digunakan adalah %reen >luoresent Protein $%>P( tag,

%lutathione-"-transferase $%"T( tag dan tag >7%-tag $ 9osenberg, 2'':

(.

,. S)tem Immun(+re)+)tat)(n Lu)%erae 5 LIP 6

"istem immunopreipitation luiferase merupakan teknik yang

sangat kuantitatif dan tinggi dalam mendeteksi antibodi. Teknik ini

merupakan teknik baru yang biasanya digunakan untuk perbandingan

dalam identifikasi virus dalam uji sensitifitas dan spesifisitas dengan uji

lain $;ohen et al , 2'1 (.

A

%amabar 2#ji menggunakan 7abel protein



BAB III

PENUTUP

3.1 'ESIMPULAN

Imunokimia adalah suatu kajian imunologi yang berfokus pada level kimia

atau biokimia. Imunokimia juga menerangkan seara rini molekul - molekul dan


dengan adanya teknik laboratorium. "alah satu metode imunokimia, yaitu

imunopresipitasi. Immunopresipitasi merupakan teknik pengendapan dari larutan

antigen protein yang diggunakan sebagai antibodi yang seara khusus mengikat

protein tertentu. Proses ini dapat digunakan untuk mengisolasi dan berkonsentrasi

dengan protein tertentu dari sampel yang mengandung ribuan protein yang

berbeda. Immunopresipitasi mengharuskan antibodi dapat digabungkan ke

substrat padat di beberapa titik dalam prosedur. /etode imunopresipitasi ada 2,

yaitu langsung dan tidak langsung. "edangkan teknik-teknik imunopresipitasi

terbagi atas Immunopreipitation protein individu, Protein immunopreipitation

kompleks, <romatin Immunopreipitasi, 9 Imunopresipitation, dan "istem

Immunopreipitation 7uiferase.

".2 Saran

dapun saran yang dapat kami sampaikan, semoga makalah ini bisa

menjadi referensi untuk mengetahui apasaja teknik dan metode dalam

imunopresipitasi dari subteknik imunokimia.

1'



DAFTAR PUSTA'A

&onifaino, 8. "., )ellBngelia, C. ;. and "pringer, T. . 2''1.

Immunopreipitation. ;urrent Protools in /oleular &iology. 1'.1:.1!

1'.1:.2A.

;ohen, 8effrey I., /ir . li., hmad &ayat., "haron P. "teinberg., Hosun Park.,

nne . %ershon., Peter ). &urbelo. 2'1. )etetion of ntibodies to

Dariella-Eoster Dirus in 9eipients of the Dariella Daine by #sing a

7uiferase Immunopreipitation "ystem ssay. #". ;linial and Daine

Immunology p. 12@@!12A1.

;ristea I/, Filliams 9, ;hait &T, 9out /P. 2''5. >luoresent proteins as

proteomi probes. Molecular & Cellular Proteomics " $12( 1A++!1.

)ora, %etra. 2''*. Respon Imun Ayam Single Comb Brown Leghorn Terhada oi

!erpes"irus #!$%. &ogor. Institut Pertanian &ogor.

%-&iosienes. 2'12. Immunoprecipitation Techniue. %eno Tehnology, In.

$#"(.

<eene 8), <omisaro0 8/, >riedersdorf /&. 2'':. 9IP-;hip the isolation and

identifiation of m9s, miro9s and protein omponents of

ribonuleoprotein ompleGes from ell eGtrats. 'at Protoc 1 $1( +'2!*.

9osenberg, Ian $2''5(. Protein analysis and puri(ication) benchtop techniues.

"pringer. p. 52'. I"& A*@-'-@1*:-+'-A.

11

http://en.wikipedia.org/wiki/Current_Protocols

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/eutils/elink.fcgi?dbfrom=pubmed&tool=sumsearch.org/cite&retmode=ref&cmd=prlinks&id=17406249




http://books.google.com/?id=gi-UgCF8G6EC&pg=PA43&dq=preclear+irrelevant+antibody+isbn#v=onepage&q&f=false



http://en.wikipedia.org/wiki/International_Standard_Book_Number


http://en.wikipedia.org/wiki/Special:BookSources/978-0-8176-4340-9






http://en.wikipedia.org/wiki/Special:BookSources/978-0-8176-4340-9

http://en.wikipedia.org/wiki/Current_Protocols

makalah imunopresipitasi

Documents