laporan sterilisasi.docx
TRANSCRIPT
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Mikrobiologi adalah sebagai ilmu yang mempelajari tentang
organisme mikroskopis. Mikrobiologi berasal dari bahasa Yunani, mikros
= kecil, bios = hidup dan logos = ilmu. Ilmuwan menyimpulkan bahwa
mikroorganisme sudah dikenal lebih kurang 4 juta tahun yang lalu dari
senyawa organik kompleks yang terdapat di laut, atau mungkin dari
gumpalan awan yang sangat besar yang mengelilingi bumi. Sebagai
makhluk hidup pertama di bumi, mikroorganisme diduga merupakan
nenek moyang dari semua makhluk hidup. Antony van Leeuwenhoek
(1632–1723) sebenarnya bukan peneliti atau ilmuwan yang profesional.
Profesi sebenarnya adalah sebegai wine terster di kota Delf, Belanda. Ia
biasa menggunakan kaca pembesar untuk mengamati serat-serat pada
kain. Sebenarnya ia bukan 3 orang pertama dalam penggunaan
mikroskop, tetapi rasa ingin tahunya yang besar terhadap alam semesta
menjadikannya salah seorang penemu mikrobiologi.
Dan di jaman modern ini kita sudah memiliki alat-alat canggih
yang lebih spesifik daripada jaman dahulu. Dari tahun pertama di
temukan hewan kecil hanya mengetahui satu jenis saja. Tetapi lama
kelamaan dari tahun ketahun perkembangan illmu tentang mikrobiologio
semakin banyak. Banyak di temukan berbagai jenis, spora, dll. Di
temukan banyak macam jenis itu pula pasti banyak juga peralatan yang
khusus untuk penelitian tersebut. Banyak berbagai macam penelitian.
Sterilisasi adalah proses pemusnahan mikroorganisme fisika. Panas
mempunyai peranan penting. Energi membinasakan mikroorganisme
Radiasi panas menginaktifkan protein enzym dari mikroorganisme.
1
B. Tujuan
Tujuan Sterilisasi adalah agar mahasiswa mampu mengenal dan
mengetahui mikroorganisme, kerja alat-alat sterilisasi dan mampu
menguasai teknik kerja aseptis. Sterilisasi berguna untuk mengetahui
bahawa alat-alat yang di pakai perlu disterilisasi agar tetap sterill dan
terjaga dari mikroorganisme.
2
II. MATERI DAN METODE
A. Materi
1. Alat
Cawan petri
Pipet ukur
Tabung reaksi
Drugalsky
Jarum ose
Rak tabung reaksi
Pembakar Bunsen
Plastik wrapper
Filler
Sprayer
Korek api
2. Bahan
Alcohol 70%
Media agar tanpa mikroba
Media agar dengan mikroba
Akuades
3
B. Metode
1. Pipeting
4
Sterilkan meja kerja dan tangan dengan sprayer yang berisi
alcohol 70%
Nyalakan pembakar spirtus dengan korek api agar menciptakan
suasana steril
Lepaskan bungkus pipet ukur secara perlahan pasang filler pada
ujungnya dengan tangan kanan, usahakan ujung pipet harus
dekat dengan api agar tetap sterill
Tangan kiri mengambil tabung reaksi yang berisi mikrooba, buka
tutup dengan kelingking tangan kanan
Ambil larutan yang berisi mikrooba dengan pipet ukur
sebanyak 1 ml
Masukan ke tabung reaksi yang berisi akuades sebanyak 9
ml
Tutup tabung reaksi dengan kapas.
2. Plating
5
Sterilkan meja kerja dan tangan dengan sprayer yang berisi alcohol
70%
Nyalakan pembakar spirtus dengan korek api agar menciptakan
suasana steril
Lepaskan bungkus pipet ukur secara perlahan pasang filler pada
ujungnya dengan tangan kanan, usahakan ujung pipet harus dekat
dengan api agar tetap sterill
Tangan kiri mengambil tabung reaksi yang berisi mikrooba, buka
tutup dengan kelingking tangan kanan
Ambil mikrooba dengan pipet ukur sebanyak 0,1 ml
Taruh ke cawan petri ratakan dengan drugal sky
Tutup cawan dengan perekat wrepping
3. Transfer biakan
6
Sterilkan meja kerja dan tangan dengan sprayer yang berisi alcohol
70%
Nyalakan pembakar spirtus dengan korek api agar menciptakan
suasana steril
Lepaskan bungkus pipet ukur secara perlahan pasang filler pada
ujungnya dengan tangan kanan, usahakan ujung pipet harus dekat
dengan api agar tetap sterill
Tangan kiri mengambil tabung reaksi yang berisi mikrooba, buka
tutup dengan kelingking tangan kanan
Letakan mikroba ke dalam tabung reaksi dengan media agar yang
miring, dengan cara streaking. Bisa juga dengan streaking ke media
agar dalam cawan petri yang datar
Tutup kembali tabung reaksi atau cawan petri, kemudian tutup rapat
dengan cara wrapping.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Pengertian Sterilisasi
Sterilisasi didefinisikan sebagai proses pembebasan suatu benda dari
semua mikroorganisme hidup. Sterilisasi merupakan suatu proses yang
efektif membunuh atau menghilangkan agen menular (seperti jamur ,
bakteri , virus , bentuk spora) dari permukaan , peralatan , makanan atau
obat-obatan , dan media untuk kultur biakan.
Sedangkan aseptis atau asepsis adalah pekerjaan teknik, seperti
penggunaan sarung tangan , filter udara, sinar ultraviolet untuk mencapai
lingkungan kerja yang bebas mikroba. Sterilisasi alat bahan dan kerja
aseptis sangat mempengaruhi dalam berlangsungnya proses kerja dalam
percobaan mikrobiologi.
2. Pembagian Sterilisasi
Sterilisasi dibagi menjadi tiga cara, yaitu secara fisik, mekanis dan
kimiawi.
a. Fisik
1. Sinar matahari
Sterilisasi menggunakan sinar matahari sering
dilakukan di negara-negara dengan iklim tropis. Prses
sterilisasi dengan sinar matahari dapat berlangsung karena
adanya paduan antara sinar ultraviolet dan panas yang
terkansungg dalam sinar matahari. Namun metode ini tingkat
efektivitas dalam membunuh mikroba sangat kecil, karena
sinar matahari tidak sporisidal maka kurang mensterilkan.
2. Panas
Pemanasan merupakan metode yang umum digunakan
untuk sterilisasi. Panas bertindak dengan efek oksidatif serta
denaturasi dan koagulasi protein. Faktor yang mempengaruhi
sterilisasi dengan panas adalah :
Suhu dan waktu : suhu dan waktu yang berbanding
terbalik . Ketika suhu rendah maka waktu sterilisasi
7
yang diperlukan tinggi, namun jika suhu tinggi waktu
yang diperlukan rendah begitu pula sebaliknya.
Sifat panas : panas lembab lebih efektif daripada panas
kering hal ini dapat dikaitkan dengan prinsip kerja
oven dan autklaf, yang tingkat sterilisasinya lebih
tinggi autoklaf dengan prinsip panas lembab / uap air
bertekanan.
Jumlah mikroorganisme : semakin banyak jumlah
mikroorganisme, tinggi suhu dan durasi waktu
sterilisasi makin tinggi.
Sifat mikroorganisme : tergantung pada spesies dan
strain mikroorganisme , kepekaan terhadap panas dapat
bervariasi. Contohnya spora yang sangat tahan
terhadap panas.
Keberadaan bahan organik : Bahan organik yang
terkandung dalam bahan yang akan disterilkan seperti
protein , gula , minyak dan lemak dapat meningkatkan
waktu sterilisasi.
Prinsip kerja sterilisasi panas yaitu :
a. Panas kering
Panas merah : sterilisasi dengan panas merah yaitu
dengan cara membakar media yang akan disterilkan
dengan pembakar spirtus sampai muncul bara merah.
Biasanya alat yang disterilkan dengan cara ini adalah alat
yang tahan api seperti jarum ose dan pisau bedah.
Flaming : metode flaming dilakukan dengan melewatkan
media yang akan disterilkan diatas api. Alat yang
disterilkan dengan metode ini biasanya alat yang terbuat
dari bahan glass seperti drugalsky.
Insinerasi : metode ini digunakan untuk membakar habis
bahan yang mengandung mikroba dalam alat incinerator.
8
Oven : metode sterilisasi dengan oven yaitu dengan
memasukan alat dan bahan kedalam alat oven. Berikut
keuntungan dan kekurangan menggunakan oven.
*Keuntungan : Ini merupakan metode yang efektif
sterilisasi dengan panas yang stabil. Alat dan bahan tetap
kering setelah sterilisasi . Ini adalah satu-satunya metode
untuk sterilisasi minyak dan bubuk.
*Kekurangan :
-Kapas dan kertas mungkin akan sedikit hangus .
-Kaca pintu oven bisa menjadi berasap karena lamanya
proses sterilisasi.
-Membutuhkan waktu lebih lama dibandingkan dengan
autoclave.
-Karena udara adalah konduktor panas yang buruk , udara
panas memiliki penetrasi yang buruk
Sinar inframerah : sinar inframerah membawa sterilisasi
dengan generasi panas. Bahan yang akan disterilkan
ditempatkan dalam ban berjalan yang bergerak dan
melewati sebuah terowongan yang dipanaskan oleh
radiator inframerah untuk suhu 180oC. Alat atau bahan
yang disterilkan dipanaskan selama 7,5 menit. Media
disterilkan termasuk instrumen logam dan gelas . Hal ini
membutuhkan peralatan khusus , maka tidak berlaku di
laboratorium diagnostik . Efisiensi dapat diperiksa
menggunakan Browne tube No.4 (spot biru ).
b. Panas lembab
Pada suhu di bawah 100oC
Pasteurisasi : Proses ini awalnya digunakan oleh
Louis Pasteur . Saat ini prosedur ini digunakan
dalam industri makanan dan susu . Ada dua metode
pasteurisasi , metode pemegang ( dipanaskan pada
63oC selama 30 menit ) dan metode flash
( dipanaskan pada 72oC selama 15 detik ) diikuti
oleh pendinginan cepat ke 13oC . Metode
9
pasteurisasi lainnya termasuk Suhu Ultra -High
( UHT ) , 140oC selama 15 detik dan 149oC
selama 0,5 detik . Metode ini cocok untuk
menghancurkan sebagian besar susu ditanggung
patogen seperti Salmonella , Mycobacteria ,
Streptococcus , Staphylococcus dan Brucella ,
namun Coxiella dapat bertahan hidup pasteurisasi .
Khasiat diuji dengan uji fosfatase dan uji biru
metilen .
Vaksin Mandi : Bakteri mencemari dalam
persiapan vaksin dapat dinonaktifkan dengan
pemanasan dalam bak air pada suhu 60oC selama
satu jam . Hanya bakteri vegetatif tewas dan spora
bertahan hidup .
Serum Mandi : Bakteri mencemari dalam
persiapan serum dapat dinonaktifkan dengan
pemanasan dalam bak air di 56oC selama satu jam
pada beberapa hari berturut-turut . Protein dalam
serum akan mengental pada suhu yang lebih
tinggi . Hanya bakteri vegetatif tewas dan spora
bertahan hidup .
Inspissation : Ini adalah teknik untuk memperkuat
serta di desinfektan telur dan serum berisi media .
Medium yang mengandung serum atau telur
ditempatkan di lereng sebuah inspissator dan
dipanaskan pada 80 - 85oC selama 30 menit pada
tiga hari berturut-turut . Pada hari pertama , bakteri
vegetatif akan mati dan mereka spora yang
berkecambah dengan hari berikutnya kemudian
dibunuh keesokan harinya . Proses ini tergantung
pada perkecambahan spora di antara inspissation .
Jika spora gagal berkecambah maka teknik ini tidak
dapat dianggap sterilisasi .
10
Pada suhu 100oC
Merebus : Air mendidih ( 100oC ) membunuh
bakteri yang paling vegetatif dan virus segera.
Racun bakteri tertentu seperti stafilokokus
enterotoksin juga tahan panas . Beberapa spora
bakteri tahan sampai mendidih dan bertahan , maka
ini bukan pengganti untuk sterilisasi . Kegiatan
pembunuhan dapat ditingkatkan dengan
penambahan 2 % natrium bikarbonat . Ketika
sterilitas mutlak tidak diperlukan , artikel logam
tertentu dan glasswares dapat didesinfeksi dengan
menempatkan mereka dalam air mendidih selama
10-20 menit . Tutup boiler tidak boleh dibuka
selama periode tersebut .
Uap pada 100oC : Alih-alih menjaga artikel dalam
air mendidih , mereka mengalami steam gratis di
100oC . Secara tradisional Arnold dan kapal uap
Koch digunakan . Autoclave ( dengan keran debit
terbuka ) juga dapat melayani tujuan yang sama .
Sebuah kapal adalah kabinet logam dengan nampan
berlubang untuk memegang artikel dan tutup
berbentuk kerucut . Bagian bawah kapal diisi
dengan air dan dipanaskan . Uap yang dihasilkan
mensterilkan artikel bila terkena untuk jangka
waktu 90 menit . Media seperti TCBS , DCA dan
kaldu selenite telah disterilkan dengan dikukus .
Gula dan gelatin dalam medium mungkin akan
terurai pada autoklaf , maka mereka terkena
mengepul gratis selama 20 menit selama tiga hari
berturut-turut . Proses ini dikenal sebagai
tyndallisation ( setelah John Tyndall ) atau
sterilisasi pecahan atau sterilisasi berselang.
Bakteri vegetatif tewas dalam pemaparan pertama
dan spora yang berkecambah hari berikutnya tewas
11
dalam hari-hari berikutnya . Keberhasilan proses
tergantung pada perkecambahan spora .
Pada suhu diatas 100oC
Sterilisasi dapat dicapai secara efektif pada suhu di atas
100oC menggunakan autoclave . Air mendidih pada 100oC
pada tekanan atmosfer , tetapi jika tekanan dinaikkan ,
suhu di mana air mendidih juga meningkat . Dalam
autoclave air direbus dalam ruang tertutup . Sebagai
tekanan naik , titik didih air juga meningkatkan . Pada
tekanan dari £ 15 dalam autoclave , suhu dikatakan 121oC.
Paparan artikel suhu ini selama 15 menit mensterilkan
mereka . Untuk menghancurkan agen infeksi yang terkait
dengan ensefalopati spongiform ( prion ) , suhu yang lebih
tinggi atau waktu yang lebih lama digunakan , 135oC atau
121oC selama setidaknya satu jam dianjurkan .
Keuntungan dari steam yaitu memiliki kekuatan lebih
penetratif daripada udara kering, membasahi spora
( kelembaban sangat penting untuk koagulasi protein ) ,
kondensasi uap pada rilis permukaan dingin panas laten ,
kondensasi uap menarik di steam segar .
3. Radiasi
Dua jenis radiasi yang digunakan yaitu ionisasi dan
non ionisasi. Sinar Non - ionisasi adalah sinar energi rendah
dengan kekuatan penetrasi miskin sementara sinar ionisasi
adalah sinar berenergi tinggi dengan daya penetrasi yang baik.
Sinar non ionisasi
Sinar panjang gelombang lebih panjang dari cahaya tampak
adalah non - pengion. Mikrobisidal panjang gelombang sinar
UV terletak pada kisaran 200-280 nm, dengan 260 nm yang
paling efektif. Sinar UV yang dihasilkan menggunakan lampu
uap merkuri bertekanan tinggi. Hal ini pada panjang
gelombang ini bahwa penyerapan oleh mikroorganisme berada
pada maksimum , yang menghasilkan efek kuman. Sinar UV
menginduksi pembentukan dimer timin - timin , yang pada
12
akhirnya menghambat replikasi DNA. UV mudah
menginduksi mutasi pada sel-sel di iradiasi dengan dosis yang
tidak mematikan . Mikroorganisme seperti bakteri , virus ,
jamur dan lain-lain yang terkena radiasi UV yang efektif
menjadi tidak aktif dalam hitungan detik. Karena sinar UV
tidak membunuh spora , mereka dianggap digunakan sebagai
disinfeksi permukaan . Sinar UV yang digunakan untuk
mendisinfeksi bangsal rumah sakit , teater operasi ,
laboratorium virus , koridor , dll Kekurangan menggunakan
sinar uv termasuk daya penetrasi yang rendah , kehidupan
terbatas bola uv , beberapa bakteri memiliki enzim perbaikan
DNA yang dapat mengatasi kerusakan yang disebabkan oleh
sinar uv , bahan organik dan debu mencegah jangkauannya ,
sinar yang berbahaya bagi kulit dan mata . Ini tidak menembus
kaca, kertas atau plastik .
Sinar ionisasi
Sinar pengion terdiri dari dua jenis , partikulat dan sinar
elektromagnetik . Partikullat. Elektron balok partikel di alam
sementara sinar gamma elektromagnetik di alam. Elektron
berkecepatan tinggi yang dihasilkan oleh akselerator linear
dari katoda yang dipanaskan. Berkas elektron yang digunakan
untuk mensterilkan artikel seperti jarum suntik , sarung tangan
, paket ganti , makanan dan obat-obatan .Sterilisasi ini
dilakukan dalam beberapa detik. Tidak seperti sinar
elektromagnetik , instrumen dapat dimatikan . Kerugian
meliputi kekuatan penetratif miskin dan kebutuhan peralatan
yang canggih. Sinar elektromagnetik seperti sinar gamma
berasal dari disintegrasi nuklir isotop radioaktif tertentu
( Co:60 , Cs:137 ). Mereka memiliki lebih banyak kekuatan
penetratif dari berkas elektron , tetapi membutuhkan waktu
yang lebih lama dari paparan . Ini radiasi energi tinggi
merusak asam nukleat dari mikroorganisme. Sebuah dosis 2,5
megarads membunuh semua bakteri , jamur , virus dan spora .
Hal ini digunakan secara komersial untuk mensterilkan piring
13
petri sekali pakai , jarum suntik plastik , antibiotik , vitamin ,
hormon , glasswares dan kain . Kerugian meliputi; seperti
berkas elektron , mereka tidak dapat dimatikan , glasswares
cenderung menjadi kecoklatan , hilangnya kekuatan tarik
kain . Gamma iradiasi merusak rasa makanan tertentu .
Bacillus pumilus E601 digunakan untuk mengevaluasi proses
sterilisasi .
b. Kimia
Bahan kimia juga digunakan untuk sterilisasi . Meskipun
pemanasan menyediakan
cara yang paling dapat diandalkan untuk membersihkan benda-benda
dari semua agen menular , tidak selalu tepat , karena akan merusak
bahan peka panas seperti bahan biologi , serat optik , elektronik , dan
banyak plastik. Beberaa bahan kimia yang dapat digunakan untuk
sterilisasi adalah sebagai berikut.
Etilen oksida ( EO atau ETO ) gas umumnya digunakan untuk
mensterilkan benda sensitif terhadap suhu lebih dari 60 ° C
seperti plastik , optik dan listrik . Etilen oksida pengobatan
umumnya dilakukan antara 30 ° C dan 60 ° C dengan
kelembaban relatif di atas 30 % dan konsentrasi gas antara 200
dan 800 mg / L untuk setidaknya tiga jam .
Ozon digunakan dalam pengaturan industri untuk
mensterilkan air dan udara , serta disinfektan untuk permukaan
. Ini memiliki manfaat yang mampu mengoksidasi bahan
organik yang paling . Di sisi lain , itu adalah gas beracun dan
tidak stabil yang harus diproduksi di tempat , sehingga tidak
praktis untuk digunakan di banyak rangkaian .
Pemutih klorin cair sterilisasi agen lain diterima . Rumah
Tangga pemutih terdiri dari 5,25 % sodium hipoklorit . Hal ini
biasanya diencerkan menjadi 1/10 segera sebelum digunakan ,
namun untuk membunuh Mycobacterium tuberculosis itu
harus diencerkan hanya 1/ 5, dan 1/2.5 ( 1 bagian pemutih dan
air 1,5 bagian ) untuk menonaktifkan prion . Faktor
14
pengenceran harus memperhitungkan volume limbah cair
apapun yang sedang digunakan untuk mensterilkan .
Glutaraldehid dan formaldehid solusi ( juga digunakan sebagai
fiksatif ) diterima agen cair sterilisasi , asalkan waktu
perendaman yang cukup lama . Untuk membunuh semua spora
dalam cairan bening bisa memakan waktu hingga 12 jam
dengan glutaraldehid dan bahkan lebih lama dengan
formaldehida . Kehadiran partikel padat dapat memperpanjang
periode yang diperlukan atau membuat pengobatan tidak
efektif .
Hidrogen peroksida adalah bahan kimia sterilisasi lain . Hal ini
relatif tidak beracun bila diencerkan dengan konsentrasi
rendah , seperti 3 % solusi ritel akrab meskipun hidrogen
peroksida adalah oksidator berbahaya pada konsentrasi tinggi (
> 10 % b / b ) . Hidrogen peroksida adalah oksidan yang kuat
dan sifat-sifat oksidasi memungkinkan untuk menghancurkan
berbagai patogen dan digunakan untuk mensterilkan artikel
sensitif panas atau suhu seperti endoskopi kaku .
c. Mekanis
Sterilisasi secara mekanis adalah sterilisasi menggunakan suatu
saringan. Filtrasi tidak membunuh mikroba , melainkan memisahkan
mikroba dari bahan. Membran filter dengan ukuran pori antara 0,2-
0,45 m biasanya digunakan untuk menghilangkan partikel dari solusi
yang tidak dapat diautoklaf . Hal ini digunakan untuk menghilangkan
mikroba dari cairan labil panas seperti serum , solusi antibiotik ,
larutan gula , larutan urea. Berbagai aplikasi filtrasi termasuk
menghilangkan bakteri dari bahan-bahan dari media kultur ,
mempersiapkan suspensi virus dan fag bebas dari bakteri , mengukur
ukuran virus , memisahkan racun dari budaya filtrat , menghitung
bakteri , mengklarifikasi cairan dan memurnikan cairan hidatidosa.
Filtrasi dibantu dengan menggunakan tekanan positif atau negatif
dengan menggunakan pompa vakum . Filter yang lebih tua yang
terbuat dari gerabah atau asbes disebut filter mendalam. Macam filter
yaitu :
15
Filter gerabah (filter ini terbuat dari tanah diatom atau porselen
. Mereka biasanya dipanggang dalam bentuk lilin),
Asbes filter (filter ini terbuat dari jenis chrysotile asbes , kimia
terdiri dari magnesium silikat, ditekan untuk membentuk disc ,
yang akan digunakan hanya sekali, disc ini diselenggarakan
dalam logam mount , yang disterilkan dengan autoklaf),
Sinter filter glass (terbuat dari kaca ditumbuk halus yang
menyatu cukup untuk membuat partikel kecil menempel satu
sama lain, biasanya tersedia dalam bentuk disk menyatu ke
dalam corong kaca) ,
Membran filter (filter ini terbuat dari berbagai bahan polimer
seperti selulosa nitrat , selulosa diasetat , polikarbonat dan
polyester).
3. Prinsip Kerja dan Spesifikasi Alat
a. Autoklaf
1. Prinsip kerja
Autoklafmemiliki prinsip kerja uap air bertekanan.
Uap air berasal dari akuades yang berada di bawah
keranjang besi mendidih sehingga memiliki tekanan
yang mampu membunuh mikroba yang ada pada alat
bahan yang akan digunakan dalam percobaan.
Cara kerja menggunakan autoklaf adalah sebagai
berikut.
Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu
banyaknya air dalam autoklaf. Jika air kurang
dari batas yang ditentukan, maka dapat
ditambah air sampai batas tersebut. Gunakan
air hasil destilasi, untuk menghindari
terbentuknya kerak dan karat.
Masukkan peralatan dan bahan. Jika
mensterilisasi botol beretutup ulir, maka tutup
harus dikendorkan
16
Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan
baut pengaman agar tidak ada uap yang
keluar dari bibir autoklaf. Klep pengaman
jangan dikencangkan terlebih dahulu.
. Nyalakan autoklaf, diatur timer dengan
waktu minimal 15 menit pada suhu 121oC.
Tunggu samapai air mendidih sehingga
uapnya memenuhi kompartemen autoklaf dan
terdesak keluar dari klep pengaman.
Kemudian klep pengaman ditutup
(dikencangkan) dan tunggu sampai selesai.
Penghitungan waktu 15’ dimulai sejak
tekanan mencapai 2 atm.
Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka
tunggu tekanan dalam kompartemen turun
hingga sama dengan tekanan udara di
lingkungan (jarum pada preisure gauge
menunjuk ke angka nol). Kemudian klep-klep
pengaman dibuka dan keluarkan isi autoklaf
dengan hati-hati.
2. Spesifikasi :
i. Keuntungan
Membunuh mikroba hingga tingkat spora
Proses dilampaui dengan waktu yang
singkat
Dapat mensterilkan alat dan bahan
Menampung muatan banyak
ii. Kerugian
Menghasilkan efek kondensasi dari uap
air
Dapat menurunkan pH bahan hingga 0,5
b. Oven
17
1. Prinsip kerja
Oven memiliki prinsip kerja panas kering. Biasanya digunakan
untuk mensterilkan alat yang terbuat dari kaca yang sebelumnya
telah dibungkus kertas putih. Langkah penggunaan oven adalah
sebagai berikut.
i. Pintu oven dibuka, alat yang ingin dikeringkan
dimasukkan kedalam oven dan pintu ditutup kembali.
Setelah itu, tombol POWER ditekan, kipas dinyalakan dan
kecepatan kipas juga diatur.
ii. Kemudian set suhu dengan menekan tombol SET. Layar
SV akan menunjukkan suhu yang diinginkan.
iii. Tunggu hingga layar PV menunjukkan suhu yang hampir
sama dengan layar SV.
iv. Lalu oven dimatikan dengan menekan tombol POWER.
v. Alat dikeluarkan dari dalam oven.
2. Spesifikasi
i. Keuntungan
Mensterilkan alat dan bahan dengan suhu yang
konstan yaitu 160-180oC
Tanpa efek kondensasi karena tanpa uap air
ii. Kerugian
Tidak membunuh mikroba hingga tingkat spora.
c. Milipore
1. Prinsip kerja
Prinsip kerja milipore adalah dengan filtrasi menggunakan filter
atau membrane penyaring. Yaitu 0,22 mikron untuk bakteri dan
0,45 mikron untuk yeast. Membrane ini digunakan sekali pakai.
2. Spesifikasi
i. Keuntungan
Tidak menghasilkan efek kondensasi
Digunakan untuk sterilisasi bahan yang tidak tahan
panas seperti enzim atau vitamin
ii. Kerugian
18
Tidak bisa digunakan untuk sterilisasi alat
Tidak bisa menyaring virus
d. Arnold Steam Strerilizer
1. Prinsip kerja
Prinsip kerja dari Arnold steam sterilizer adalah uap air panas.
Alat ini sering disebut secara sederhana dandang.
2. Spesifikasi
i. Keuntungan
Dapat mensterilkan bahan
ii. Kerugian
Memerlukan waktu yang lama dalam proses
sterilisasi yaitu 3x24 jam, 24 jam pertama untuk
membunuh spora, kedua bakteri vegetative dan
terakhir membunuh spora dan bakteri vegetative.
Tidak bisa atau dianjurkan tidak digunakan untuk
mensterilkan alat.
e. Biological Safety Cabinet
1. Prinsip kerja
Prinsip kerja dari Biological Safety Cabinet / BSC adalah dengan
sinar ultra violet dan pola aliran udara horizontal atau vertical.
Alat ini digunakan untuk menciptakan lingkungan kerja yang
aseptis. Langkah penggunaan BSC adalah sebagai berikut.
i. Hidupkan lampu UV selama 2 jam, selanjutnya matikan
segera sebelum mulai bekerja
ii. Pastikan kaca penutup terkunci dan pada posisi terendah
iii. Nyalakan lampu neon dan blower
iv. Biarkan selama 5 menit
v. Cuci tangan dan lengan dengan sabun gemisidal / alkohol 70
%
vi. Usap permukaan interior BSC dengan alcohol 70 % atau
desinfektan yang cocok dan biarkan menguap
vii. Masukkan alat dan bahan yang akan dikerjakan, jangan
terlalu penuh (overload) karena memperbesar resiko
kontaminan
19
viii. Atur alat dan bahan yang telah dimasukan ke BSC
sedemikian rupa sehingga efektif dalam bekerja dan tercipta
areal yang benar-benar steril
ix. Jangan menggunakan pembakar Bunsen dengan bahan bakar
alkohol tapi gunakan yang berbahan bakar gas.
x. Kerja secara aseptis dan jangan sampai pola aliran udara
terganggu oleh aktivitas kerja
xi. Setelah selesai bekerja, biarkan 2-3 menit supaya kontaminan
tidak keluar dari BSC
xii. Usap permukaan interior BSC dengan alkohol 70 % dan
biarkan menguap lalu tangan dibasuh dengan desinfektan
xiii. Matikan lampu neon dan blower
2. Spesifikasi
iii. Keuntungan
Tingkat sterilnya sangat tinggi
iv. Kerugian
Jika laboran tidak hati-hati maka kulit akan terkena radiasi
sinar UV yang berbahaya
4. Cara kerja
a. Pipeting
Sterilkan meja kerja, tangan dan alat-alatnnya dengan spray
yang berisi alcohol 70%. Nyalakan pembakar spirtus agar
menciptakan suasana sterill. Lepaskan bungkus pipet yang telah
disterilisasikan. Usahakan dalam setiap melakukan percobaan, tangan
kiri yang bergerak bebas sedangkan tangan kanan pada posisi yang
stabil. Usahakan daerah ujung pipet berdekatan dengan api. Hal ini
bertujuan agar tercipta suasana yang tetap aseptis dan selama
praktikum berlangsung usahakan seminimal mungkin berbicara
karena udara pernafasan juga dapat mengontaminasi media. Buka
tutup tabung dengan jari kelingking tangan kanan. Ambil cairan di
pipet tabung dengan menekan S sebanyak 1 ml, keluarkan cairan di
tabung reaksi yang berisi akuades dengan menekan E. Tutup kembali
tabung. Letakkan di tabung rak. Bila ingin dengan cara miring
20
letakkan di rak tabung miring. Selama proses ini harus tetap dekat
dengan api.
b. Plating
Sterilkan meja kerja tangan dan alat-alatnnya dengan spray
yang berisi alcohol 70%. Nyalakan pembakar spirtus agar
menciptakan suasana sterill. Lepaskan bungkus pipet yang telah
disterilisasikan. Usahakan daerah ujung pipet berdekatan dengan api.
Buka tutup tabung dengan jari kelingking tangan kanan. Ambil cairan
di pipet tabung dengan menekan S sebanyak 0,1 ml, taruh cairan
kecawan petri dengan menekan E. Ratakan media yang telah diberi
larutan dengan drugal sky. Tutup cawan dengan perekat wrapping.
Selama proses ini harus tetap dekat dengan api agar tidak
terkontaminasi mikroba di udara.
c. Transfer biakan
Sterilkan meja kerja tangan dan alat-alatnya dengan spray
yang berisi alcohol 70%. Nyalakan pembakar spirtus agar
menciptakan suasana sterill. Ambil tabung reaksi yang berisi biakan
mikroba dalam media dengan jarum ose. Letakan mikroba ke dalam
tabung reaksi atau cawan dengan media agar yang miring, dengan
cara streaking. Tutup kembali tabung reaksi atau cawan petri,
kemudian tutup rapat dengan cara wrapping.
IV. KESIMPULAN DAN SARAN
1. Kesimpulan
21
Sterilisasi pada dasarnya kegiatan membebaskan suatu benda dari
segala bentuk kehidupan. Sterilisasi dapat dilakukan dengan metode fisis,
mekanis atau kimia. Kondisi yang steril sangat diperlukan kapanpun kita
melakukan uji atau percobaan dalam laboratorium. Karena kontaminasi
mikroba tidak dikehendaki yang terdapat dalam percobaan dapat
mempengaruhi hasil percobaan yang dilakukan.
2. Saran
Dalam melakukan kegiatan uji atau percobaan di dalam laboratorium
usahakan meminimalisir kontaminasi mikroba pada alat-alat yang akan
dan sedang kita gunakan dalam percobaan. Cara kerja yang aseptis akan
sangat membantu dalam mengurangi tingkat kontaminasi mikroba.
V. DAFTAR REFERENSI
22
Sterilization and Disinfection Journal of Sidhar Rao PN Assistant Professor
Departement of Microbiology JJMMC, Davangere www.microrao.com
http://www.freewebs.com/mikrodas/PETUNJUK%20PRAKTIKUM.pdf
http://mikrobiologi.edublogs.org/files/2009/03/01-sejarah-dan-ruang-
lingkup.pdf
http://file.upi.edu/Direktori/FPMIPA/JUR._PEND._BIOLOGI/
196805091994031-KUSNADI/
BUKU_COMMON_TEXT_MIKROBIOLOGI,_Kusnadi,dkk/
BAB__I_PENDAHULUAN.pdf
23