LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM KIMIA PRODUK ALAM

IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER

DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

Disusun oleh:

Golongan IV Kelas B Kelompok A

1. Ziana Walidah 13/348742/FA/09660

2. Nida Al Husna 13/348838/FA/09661

3. Rusyda Dyah 13/348874/FA/09662

Dosen Jaga : Dr. rer.nat. Yosi Bayu Murti, M.Si., Apt

Asisten Jaga : Fairuz Sakina Mufida

Annisafia Rizky Damaskha

Dewi Rahmawati

Tanggal Praktikum : Selasa, 10 Maret 2015

LABORATORIUM KIMIA PRODUK ALAM

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS GADJAH MADA

YOGYAKARTA

2015

IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER

DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

I. Tujuan

1. Mahasiswa mampu memisahkan senyawa-senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak

tumbuhan yang akan dianalisis.

2. Mahasiswa mampu mengidentifikasi golongan senyawa metabolit sekunder yang ada

pada ekstrak tumbuhan dengan menggunakan KLT.

3. Mahasiswa mampu memahami prinsip pemisahan dan identifikasi golongan senyawa

metabolit sekunder dengan metode KLT.

II. Alat dan Bahan

A. Alat

1. Pipa Kapiler

2. Kertas saring

3. Penggaris

4. Lampu UV 254 dan 366

5. Kompor

6. Bejana KLT + tutup

7. Penyemprot

B. Bahan

1. Silika gel F254

2. Toluen:etil asetat (93:7)

3. Heksana:etiil asetat (4:1)

4. Minyak kayu putih

5. Oregano

6. Ekstrak mint

7. Pacing

8. Stigmasterol

9. Pembanding Thymol dan Menthol

10. Anisaldehid-asam sulfat

III. Cara Kerja

IV. Data dan Hasil Praktikum

A. MONOTERPEN

Keterangan:

P = Pembanding

S1 = Oregano

S2 = Daun Mint

S3 = Minyak kayu putih

Batas elusi ditandai 5 cm dari tempat penotolan dengan menggunakan

pensil secara perlahan

Larutan uji dan pembanding ditotolkan pada lempeng silika gel F 254

dengan diberi jarak pada masing-masing sampel

Lempeng dimasukkan dalam bejana KLT yang sudah dijenuhkan dengan

diberi fase gerak (toluen-etil asetat untuk tymol, menthol dan sineol,

heksana:etil asetat untuk steroid)

Senyawa dibiarkan terelusi hingga batas tanda

Diamati dan didokumentasikan pada kondisi sinar tampak, sinar UV 254

dan UV 366

Disemprot dengan menggunakan anisaldehid-asam sulfat, kemudian

dipanaskan

Diamati dan didokumentasikan pada kondisi sinar tampak, sinar UV 254

dan UV 366

- Dokumentasi

1. Sebelum disemprot

a. Tampak

b. UV 254

(tidak ada foto)

c. UV 366

(tidak ada foto)

2. Sesudah disemprot

a. Tampak

b. UV 366

- Data Rf

NO

SEBELUM DISEMPROT SESUDAH DISEMPROT

TAMPAK UV 254 UV 366 TAMPAK UV 366

P S1 S2 S3 P S1 S2 S3 P S1 S2 S3 P S1 S2 S3 P S1 S2 S3

1 - - - - - - - - - - - - 0,46 0,02 0,11 0,4 - 0,02 0,5 -

2 - - - - - - - - - - - - 0,63 0,11 0,27 0,54 - 0,54 -

3 - - - - - - - - - - - - 0,28 0,4 0,71 - - -

4 - - - - - - - - - - - - 0,54 0,5 - -

5 - - - - - - - - - - - - 0,65 0,61 - -

- Perhitungan Rf

Rf =

1. Tampak

a. Pembanding

P.1 Rf = = 0,46

P.2 Rf = = 0,63

b. Sampel 1 (Oregano)

S1.1 Rf = = 0,02

S1.2 Rf = = 0,11

S1.3 Rf = = 0,28

S1.4 Rf = = 0,54

S1.5 Rf = = 0,65

c. Sampel 2 (Mint)

S2.1 Rf = = 0,11

S2.2 Rf = = 0,27

S2.3 Rf = = 0,4

S2.4 Rf = = 0,5

S2.5 Rf = = 0,61

d. Sampel 4 (minyak kayu putih)

S3.1 Rf = = 0,4

S3.2 Rf = = 0,54

S3.3 Rf = = 0,71

2. UV 366

a. Sampel 1 (Oregano)

S1.1 Rf = = 0,02

S1.2 Rf = = 0,11

S2.1 Rf = = 0,28

B. STEROID

Keterangan :

P = Stigmasterol

S = Pacing

- Dokumentasi

1. Sebelum disemprot

a. Tampak

b. UV 254

c. UV 366

2. Sesudah disemprot

a. Tampak

b. UV 366

- Data Rf

NO

SEBELUM DISEMPROT SESUDAH DISEMPROT

TAMPAK UV 254 UV 366 TAMPAK UV 366

P S P S P S P S P S

1 - - - - - - 0,58 0,48 - -

2 - - - - - - 0,58 - -

3 - - - - - - 0,68 - -

4 - - - - - - 0,74 - -

5 - - - - - - 0,76 - -

- Perhitungan Rf

Rf =

Hanya terlihat pada sinar tampak

a. Pembanding

P.1 Rf = = 0,58

b. Sampel

S.1 Rf = = 0,48

S.2 Rf = = 0,58

S.3 Rf = = 0,68

S.4 Rf = = 0,74

S.5 Rf = = 0,76

V. Pembahasan

Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya senyawa terpenoid atau building block

isoprene dari jalur asetat-mevalonat dalam ekstrak tumbuhan yang dianalisis dan diidentifikasi

menggunakan teknik Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

Senyawa yang akan diuji adalah senyawa Thymol, Mentol, Sineol, dan Steroid. Dimana

bahan-bahan tersebut dianalisis dari beberapa tumbuhan yang telah diekstraksi yaitu: oregano

(Origanum vulgare L.) yang dianalisis kandungan Thymol, daun mint (Mentha piperita) yang

dianalisis kandungan Mentol, minyak kayu putih (Melaleuca leucadendron) yang dianalisis

kandungan sineol, dan Rhizoma pacing (Costus Specious) yang dianalisis kandungan

steroidnya.

Berikut ini adalah klasifikasi dari tumbuhan yang digunakan dalam percobaan ini :

1. Costus speciosus (Rhizoma pacing)

- Kingdom: Plantae

- Subkingdom : Tracheobionta

- Superdivisi : Spermatophyta

- Divisi: Magnoliophyta

- Kelas : Liliopsida

- Subkelas: Zingiberidae

- Orde: Zingiberales

- Famili: Costaceae

- Genus: Costus L.

- Spesies : Costus speciosus

2. Melaleuca leucadendron (Kayu putih)

- Kingdom: Plantae

- Subkingdom : Tracheobionta

- Superdivisi : Spermatophyta

- Divisi: Magnoliophyta

- Kelas : Magnoliopsida

- Subkelas: Rosidae

- Orde: Myrtales

- Famili: Myrtaceae

- Genus: Melaleuca L.

- Spesies : Melaleuca leucadendron

3. Origanum vulgare L. (Oregano)

- Kingdom: Plantae

- Subkingdom : Tracheobionta

- Superdivisi : Spermatophyta

- Divisi: Magnoliophyta

- Kelas : Magnoliopsida

- Subkelas: Asteridae

- Orde: Lamiales

- Famili: Lamiaceae Labiatae

- Genus: Origanum L.

- Spesies : Origanum vulgare L.

4. Mentha piperita (Daun mint)

- Kingdom: Plantae

- Subkingdom : Tracheobionta

- Superdivisi : Spermatophyta

- Divisi: Magnoliophyta

- Kelas : Magnoliopsida

- Subkelas: Asteridae

- Orde: Lamiales

- Famili: Lamiaceae Labiatae

- Genus: Mentha L.

- Spesies : Mentha piperita L. (Wijayakusuma, 1994)

Praktikum kali ini menggunakan teknik KLT, dimana metode ini digunakan untuk

memisahkan senyawa berdasarkan kepolarannya. semakin polar senyawa yang diidentifikasi,

maka akan semakin suka dengan fase diamnya (like dissolve like) dan tidak akan bergerak jauh.

Sedangkan untuk senyawa yang non polar akan lebih menyukai dengan fase geraknya yang

sama sama non polar sehingga akan memiliki jarak gerak yang lebih jauh dibandingkan dengan

senyawa yang polar.

Pada praktikum ini, fase diam yang digunakan bersifat polar (silika gel F254) dan fase

geraknya bersifat non polar. Senyawa yang dipisahkan adalah senyawa-senyawa yang terdapat

dalam ekstrak tumbuhan.

Pada teknik KLT terdapat beberapa hal yang harus diperhatikan. Diantanya adalah fase

gerak, fase diam dan senyawa pembanding.

Untuk senyawa thymol, mentol dan sineol fase gerak yang digunakan sama yaitu

toluene-etil asetat (93:7 v/v) sedangkan steroid, fase gerak yang digunakan adalah n-heksana-

etil asetat (4:1 v/v)

Pada praktikum ini. Tumbuhan yang disediakan sudah dalam keadaan ekstrak sehingga

tidak perlu lagi melakukan ekstraksi atau pembuatan larutan. Selain itu Plat KLT dan bejana

KLT pun sudah dijenuhikan dengan fase gerak. Langkah awal yang dilakukan adalah

menotolkan sampel pada plat KLT. Terdapat dua plat KLT, plat KLT pertama digunakan untuk

mengidentifikasi metabolit sekunder yang terkandung dalam rhizoma pacing dengan

pembanding stigmasterol, dan plat KLT kedua untuk mengidentifikasi adanya metabolit

sekunder yang terkandung pada minyak kayu putih, daun mint, oregano dengan pembanding

yaitu campuran menthol dan thymol. Tanda yang digunakan untuk penotolan adalah titik.

Dimana masing-masing titik pada plat ditotol dengan ukuran yang sesuai, tidak terlalu besar

ataupun keci. Totolan yang terlalu besar dapat mengakibatkan pelebaran hasil yang ditakutkan

dapat mengganggu senyawa lain, sedangkan totolan yang terlalu kecil dikhawatirkan tidak

terlihat ketika telah dilakukan KLT. Baik titik untuk pembanding maupun untuk sampel,

masing-masing penotolan harus menunggu sampai penotolan sebelumnya kering terlebih

dahulu agar totolan yang dihasilkan tidak melebar.

Lalu plat KLT yang telah ditotol dengan fase gerak tersebut dimasukkan kedalam bejana

yang telah dijenuhi oleh fase gerak. Plat KLT dimasukkan ke bejana dengan hati-hati agar fase

gerak tidak menyentuh totolan. Selain itu saat memasukkan plat KLT juga harus cepat agar

kejenuhan fase gerak dalam bejana tidak berubah. Penempatan palt ke dalam bejana pun harus

lurus, jangan sampai nantinya hasil yang didapat akan memperlihatkan fase gerak yang

bergerak tidak lurus. Hal tersebut akan mempersulit dalam penentuan batas elusi

danperhitungan Rf nantinya. Kemudian ditunggu hingga fase gerak mencapai batas elusi yaitu

5cm dari totolan. Setelah mencapai batas elusi, plat KLT diambil dan ditunggu hingga kering.

Selanjutnya hasil KLT yang didapatkan nantinya akan diuji dalam beberapa uji yang

harus dilakukan secara berurutan. Yaitu uji deteksi sinar tampak, UV 254, UV 366, deteksi UV

254 dan 366 setelah penyemprotan asam sulfat pekat dan pemanasan pada suhu 1100.

Senyawa pembanding yang digunakan adalah senyawa yang diperkirakan ada di dalam

ekstrak tumbuhan yang akan diidentifikasi. Sehingga nantinya apabila antara senyawa

pembanding dengan senyawa yang diidentifikasi memiliki nilai Rf yang sama, keduanya

merupakan suatu senyawa yang sama pula. Sebagai larutan penbanding. Untuk senyawa

Thymol, Mentol, Sineol menggunakan senyawa pembanding yang sama yaitu campuran

Thymol dan mentol, Untuk sineol bahan pembanding yang digunakan pun campuran dari

thymol dan menthol dengan pertimbangan, urutan RF dari ketiga senyawa tersebut dari nilai

yang terendah yaitu mentol, sineol, dan timol sehingga KLT dapat dilakukan kepada bahan-

bahan yang akan diperiksa secara bersama-sama. Sedangkan steroid menggunakan senyawa

pembanding yaitu stigmasterol.

Untuk uji senyawa thymol, bahan yang digunakan adalah oregano. Dimana oregano

diungkapkan oleh literature mengandung senyawa yang termasuk dalam phenol terpen

monohydric phenol, yaitu carvacrol (Kar, 2007) yang merupakan transformasi dari thymol

Berikut adalah struktur kimia dari thymol dan carvacrol yang terkandung dalam oregano:

(Kar, 2007)

Dari struktur diatas, dapat dilihat bahwa keduanya memiliki struktur pokok yang sama.

Sehingga dapat dikatakan bahwa oregano diduga mengandung thymol. Setelah dilakukan uji

KLT. Didapatkan hasil dimana RF untuk thymol adalah 0,63 sedangkan dari oregano terdapat

bercak dengan nilai RF sebesar 0,65. Hal ini memperkuat dugaan bahwa oregano mengandung

thymol. Dengan warna yang sama yaitu kuning kecoklatan. Hasil ini didapatkan pada sinar

tampak, setelah melakukan penyemprotan dengan H2SO4 dan pemanasan dengan suhu 1100C,

pemanasan harusnya menggunakan oven, sehingga suhu tetap terjaga dengan baik. Namun, pada

praktikum ini, pemanasan dilakukan dengan menggunakan kompor dan terdapat kesalahan dalam

pemanasan, dimana kemungkinan terjadi pemanasan yang melebihi dari suhu seharusnya

sehingga terdapat beberapa bagian kertas KLT yang terbakar dan tidak dapat diamati kembali

pada UV 366 setelah dilakukan penyemprotan.

Pada uji senyawa menthol, bahan yang digunakan adalah daun mint. Dimana daun mint

diungkapkan oleh literature mengandung menthol sebesar 50-60% (Kar, 2007)

Berikut adalah struktur kimia dari methol:

(Kar, 2007)

Setelah dilakukan uji KLT. Didapatkan hasil dimana RF untuk menthol adalah 0,46

sedangkan dari daun mint terdapat bercak dengan nilai RF sebesar 0,5. Nilai RF yang didapat

cukup dekat dan keduanya memiliki warna yang sama yaitu coklat kemerahan. Sehingga dapat

ditarik kesimpulan bahwa daun mint diduga mengandung menthol. Hasil ini didapatkan pada

sinar tampak, setelah melakukan penyemprotan dengan H2SO4 dan pemanasan dengan suhu

1100C, pemanasan harusnya menggunakan oven, sehingga suhu tetap terjaga dengan baik.

Namun, pada praktikum ini, pemanasan dilakukan dengan menggunakan kompor dan terdapat

kesalahan dalam pemanasan, dimana kemungkinan terjadi pemanasan yang melebihi dari suhu

seharusnya sehingga terdapat beberapa bagian kertas KLT yang terbakar dan tidak dapat diamati

kembali pada UV 366 setelah dilakukan penyemprotan.

Pada uji senyawa sineol, bahan yang digunakan adalah minyak kayu putih. Dimana

minyak kayu putih diungkapkan oleh literature mengandung sineol sebesar 50-60% (Tirtajaya,

et al. 2004)

Berikut adalah struktur kimia dari methol:

(Kar, 2007)

Setelah dilakukan uji KLT. Didapatkan hasil dimana RF untuk menthol adalah 0,46 dan

thymol adalah 0,63. Sedangkan minyak kayu putih terdapat bercak dengan nilai RF sebesar 0,58.

Nilai RF yang didapat berada diantara thymol dan methol. Hal ini, masuk sesuai dengan teori

dimana sineol memiliki RF diantara thymol dan menthol dengan penampakan warna yaitu ungu

muda. Sehingga dapat ditarik kesimpulan bahwa minyak kayu putih diduga mengandung sineol.

Hasil ini didapatkan pada sinar tampak, setelah melakukan penyemprotan dengan H2SO4 dan

pemanasan dengan suhu 1100C, pemanasan harusnya menggunakan oven, sehingga suhu tetap

terjaga dengan baik. Namun, pada praktikum ini, pemanasan dilakukan dengan menggunakan

kompor dan terdapat kesalahan dalam pemanasan, dimana kemungkinan terjadi pemanasan yang

melebihi dari suhu seharusnya sehingga terdapat beberapa bagian kertas KLT yang terbakar dan

tidak dapat diamati kembali pada UV 366 setelah dilakukan penyemprotan.

Pada uji senyawa steroid, bahan yang digunakan adalah rhizome pacing. Dimana pacing

diungkapkan oleh literature mengandung diosgenin yang merupakan steroid saponin (Singh dan

Thakur,1982). Pada KLT ini senyawa pembanding yang digunakan adalah stigmasterol

Berikut adalah struktur kimia dari stigmasterol:

(Kar, 2007)

Setelah dilakukan uji KLT. Didapatkan hasil dimana RF untuk stigmasteroid adalah 0,58,

sedangkan dari pacing terdapat bercak dengan nilai RF sebesar 0,58. Nilai RF yang didapat tepat

sama dan keduanya memiliki warna yang sama yaitu ungu. Sehingga dapat ditarik kesimpulan

bahwa pacing diduga mengandung steroid. Hasil ini didapatkan pada sinar tampak, setelah

melakukan penyemprotan dengan H2SO4 dan pemanasan dengan suhu 1100C, pemanasan

harusnya menggunakan oven, sehingga suhu tetap terjaga dengan baik. Namun, pada praktikum

ini, pemanasan dilakukan dengan menggunakan kompor dan terdapat kesalahan dalam

pemanasan, dimana kemungkinan terjadi pemanasan yang melebihi dari suhu seharusnya

sehingga terdapat beberapa bagian kertas KLT yang terbakar dan tidak dapat diamati kembali

pada UV 366 setelah dilakukan penyemprotan.

Semua bercak yang didapatkan pada percobaan kali ini terelusi dengan bagus (tidak ada

yang gagal) sehingga Rf yang dihasilkan cukup baik. Namun, terdapat beberapa titik yang kurang

jelas bahkan tidak tampak pada UV 366 setelah penyemprotan. Hal ini dikarenakan terlalu

panasnya perlakuan setelah penyemprotan.

VI. Kesimpulan

1. Oregano kemungkinan mengandung tymol karena Rf mendekati yaiu 065 dari

pembanding 0,63. Warna bercak yang dihasilkan adalah sama.

2. Mint kemungkinan mengandung mentol karena Rf mendekati yaitu 0,5 dari

pembanding 0,46. Warna bercak yang dihasilkan adalah sama.

3. Minyak Kayu Putih kemungkinan mengandung sineol karena Rf mendekati yaitu 0,54

dengan menggunakan pembanding Tymol dan Mentol.

4. Identifikasi senyawa kandungan ekstak tumbuhan dapat menggunakan metode KLT

menggunakan pembanding yang sama ataupun yang mewakili.

VII. Daftar Pustaka

Kar, Ashutosh, 2007, Pharmacognosy and Pharmacobiotechnology, Edisi 2, New Age

International (P) Limited Publishers, New Delhi

Singh, Sheo B., dan Thakur, Raghunath S., 1982, Saponins From the Seeds of Costus

, J. Nat. Prod 45 (6): 667671

Tirtajaya, Imelda., Djohan Sofia, Lidia Ratnawati, Hioe Fei Lien., Oktober 2004, Jurnal llmu

dan Teknologi Pangan, Vol. 2, No. 2:59-65

Wijayakusuma, H.M Hembing; Setiawan Dalimartha, dkk , 1994, Tanaman Berkhasiat Obat di

Indonesia, Pustaka Kartini, Jakarta