Bidang Unggulan : Unggulan Perguruan Tinggi

Kode/Nama Rumpun Ilmu: 251/Kedokteran hewan

LAPORAN AKHIR

PENELITIAN UNGGULAN PERGURUAN TINGGI

DETEKSI ANTIBODI DAN KARAKTERISTIK GENETIK

TOXOPLASMA GONDII PADA ITIK DI BALI

Tim Peneliti

Drh. I Made Dwinata Mkes (NIDN:0006066216)

Prof. Dr. drh. I Made Damriyasa, MS (NIDN:0031126263)

Drh. Ida Bagus Made Oka, M.Kes (NIDN:0031126069)

Drh. Kadek Karang Agustina, MP (NIDN:0004088401)

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS UDAYANA

2013

HALAMAN PENGESAHAN

PENELITIAN UNGGULAN PERGURUAN TINGGI

Judul Penelitian : Deteksi Antibodi dan Karakteristik Genetik

Toxoplasma gondii pada Itik di Bali Kode/Nama Rumpun Ilmu : 151 / Kedokteran Hewan

Bidang Unggulan PT : Unggulan Perguruan Tinggi

Topik Unggulan : Kesehatan dan Obat-obatan

Ketua Peneliti:

a. Nama Lengkap : Drh. I Made Dwinata, M.Kes

b. NIDN : 0006066216

c. Jabatan Fungsional : Lektor Kepala

d. Program Studi : Fakultas Kedokteran Hewan

e. Nomor HP : 08123611353

f. Alamat surel (e-mail) : dwinatadwi@yahoo.com

Anggota Peneliti (1) a. Nama Lengkap : Prof.Dr.drh. I Made Damriyasa, MS

b. NIDN : 0031126263

c. Perguruan Tinggi : Universitas Udayana

Anggota Peneliti (2) a. Nama Lengkap : Drh. Ida Bagus Made Oka, M.Kes

b. NIDN : 0031126069

c. Perguruan Tinggi : Universitas Udayana

Lama Penelitian Keseluruhan: 2 tahun

Penelitian Tahun ke : 1

Biaya Penelitian Keseluruhan : Rp. 111.176.000

Biaya Tahun Berjalan : - diusulkan ke DIKTI Rp. 58.388.000

- dana internal PT Rp. -

- dana institusi lain Rp. -

- inkind sebutkan -

Denpasar, 14 Maret 2013

Mengetahui,

Dekan FKH Unud Ketua Peneliti,

Prof.Dr.Drh. I Made Damriyasa, MS Drh. I Made Dwinata, M.Kes

NIP. 196212311988031017 NIP. 196206061989031003

Menyetujui,

Ketua Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat

Universitas Udayana

Prof. Dr. Ir. I Ketut Satriawan MT

NIP: 19640717 198903 1 001

DAFTAR ISI

Halaman Pengesahan ............................................................................................. i

Daftar isi ............................................................................................................... ii

Abstrak .................................................................................................................... iii

BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................. 1

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................... 3

BAB III. METODE PENELITIAN ....................................................................... 6

BAB IV. PEMBIAYAAN DAN JADWAL PENELITIAN ................................... 9

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 10

LAMPIRAN ........................................................................................................... 11

ii

ABSTRAK RENCANA PENELITIAN

Di Indonesia penyakit toxoplasmosis merupakan masalah yang cukup serius karena

masih ditemukannya pada manusia maupun pada hewan. Di Bali perlu data aktual prevalensi

terhadap T. gondii pada ternak-ternak yang sangat berbahaya jika terjadi infeksi primer

T.gondii pada saat hamil, penularan terhadap janin menyebabkan keguguran atau cacat pada

bayi yang lahir. Manusia dapat terinfeksi akibat memakan daging yang mengandung kista T.

gondii.

Tujuan penelitian ini adalah mengetahui tingkat kontaminasi T. gondii pada itik,

sehingga dapat diketahui apakah itik juga potensial sebagai sumber penularan toxoplasmosis

pada manusia. Selain itu itik yang biasanya mencari makanan di tanah dapat sebagai indikator

tingkat kontaminasi lingkungan terhadap ookista T.gondii. Ternak itik yang diketahui positif

secara serologi akan dilakukan Isolasi dan identifikasi dengan metode digesti.. Pada

penelitian ini akan dilakukan screening prevalensi antibodi spesifik terhadap Toxoplasma

gondii pada itik yang dipelihara di Bali. Antibodi (IgG) spesifik tehadap Toxoplasma gondii

pada ternak tersebut akan dilacak dengan metode IHA dan isolasi parasit dengan metoda

biassay pada kucing dan.mencit dengan tujuan untuk mengetahui patogenitas T. gondii pada

itik, kemudian dilakukan genotyping untuk menentukan strain DNA dari Toxoplasma gondii

isolat lokal. Temuan ini sangat bermanfaat dalam strategi pencegahan infeksi penyakit

tersebut pada manusia dan Isolat lokal yang didapat akan sangat bermanfaat untuk

dikembangkan secara ilmiah untuk penelitian diagnostik dan sebagai kandidat vaksin untuk

toxoplasmosis.

iii

BAB I . PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang Penelitian

Infeksi Toxoplasma gondii merupakan penyakit zoonosis yang telah tersebar

diseluruh dunia. Kucing peliharaan dan golongan felidae lainnya merupakan satu-satunya

hospes definitif yang merupakan sumber penularan terpenting dari parasit ini. kucing

merupakan satu-satunya hewan yang secara langsung dapat menyebarkan ookiste yang

mencemari lingkungan dan potensial menulari manusia maupun hewan lain sebagai induk

semang antara. Manusia dapat terinfeksi apabila memakan daging mentah atau kurang masak

dari hewan terinfeksi dan mengkonsumsi makanan atau minuman yang terkontaminasi

ookiste yang dikeluarkan melalui feses kucing ( Dubey, 2012) Kucing terinfeksi akibat

makan daging hospes perantara yang mengandung kista T. gondii.( Kravetz et al., 2002)

Akibat yang ditimbulkan parasit ini pada manusia cukup fatal apabila terjadi infeksi

primer pada wanita hamil yang dapat mengakibatkan abortus, kematian neonatal atau

abnormalitas pada fetus (Tenter et. al, 2000). Selain itu pada orang-orang yang mengalami

imunosupresi, seperti pengidap AIDS dapat mengakibatkan kerusakan sel inang dan

terjadinya ensefalitis diperkirakan berkaitan dengan infeksi T. gondii (Dubey, 1998;

Carruthers, 2002).

Toxoplasmosis dilaporkan menyerang hampir semua ternak termasuk unggas, isolasi

dan karakterisasi Toxoplasma pada mamalia telah banyak dilakukan. Beberapa penelitian

terhadap toxoplasmosis pada itik telah dilaporkan Dubey, et al., (2003) di Mesir (15,7 %)

Yan, et al., (2009) di China selatan (11,4%) dan Yang et al., (2012) di China Utara sebesar

7,8 %. Mereka tertarik melakukan penelitian ini karena itik yang mempunyai kebiasaan

mencari makan di tanah dan itik terinfeksi akibat lingkungan yang terkontaminasi ookista

T.gondii. Prevalensi pada itik sangat cocok dipakai sebagai indikator dari kontaminasi

toxoplasmosis pada lingkungan atau tanah. Belakangan ini telah diisolasi T.gondii pada

unggas, antara lain di Mesir telah diisolasi Toxoplasma gondii pada ayam dan itik (Dubey et

al., 2003),

Keberadaan parasit T. gondii pada beberapa hospes intermidier di Bali telah

dilaporkan yaitu pada ayam kampung (Dwinata, dkk; 2012), pada kambing (Dwinata, dkk.,

2011) dan pada babi seroprevalensinya sebesar 32 % (Damriyasa, dkk., 2001). Penelitian

seroprevalensi T.gondii pada wanita hamil di Bali ditemukan sebesar 10,9% dan salah satu

faktor risiko yang telah teridentifikasi pada penelitian ini adalah seringnya mengkonsumsi

daging yang belum dimasak dengan sempurna ( Dwinata, dkk., 2009). Daging unggas

termasuk itik merupakan sumber terpenting infeksi toxoplasmosis pada manusia.

Infeksi T. gondii pada inang, baik inang akhir maupun inang antara ditentukan oleh

tingkat patogenitas dari parasit yang menginfeksi. Makin tinggi tingkat patogenisitasnya

maka akibat yang ditimbulkan pada inang akan lebih parah (Dubey, 1998). Tingkat

patogenisitas T. gondii sangat ditentukan oleh tipe genetik dari parasit tersebut dan

berdasarkan restriction fragment length polymorphism (RFLP) dinyatakan ada tiga tipe

yaitu tipe I, tipe II dan tipe III (Howe et.al., 1997). Pada itik telah dapat diisolasi T. gondii di

Mesir yang termasuk tipe III ( Dubey, et al., 2003).

Penelitian ini merupakan pendekatan penelaahan agen penyakit T. gondii pada itik

sebagai salah satu inang antara. Penelitian ini penting dilakukan di Bali karena masyarakat

masih mempunyai kebiasaan mengkonsumsi makanan yang mengandung daging mentah

yang disajikan pada masakan khas Bali (Lawar) . Sampai saat ini belum ada laporan hasil

penelitian tentang keberadaan toxoplasmosis pada itik yang umum dikonsumsi masyarakat di

Bali. Dengan kondisi Bali yang memelihara ternak dalam satu pekarangan serta banyaknya

populasi kucing yang berkeliaran, sehingga perlu dilakukan penelitian pada ternak itik yang

dapat sebagai faktor risiko toxoplasmosis pada manusia. Data ini sangat diperlukan dalam

strategi menekan penularan toxoplasmosis pada manusia.

1.2 Tujuan Penelitian

a. Mengetahui infeksi latent Toxoplasma gondii pada itik yang dikonsumsi sebagai

sumber penularan yang potensial ke manusia.

b. Mengisolasi dan identifikasi kista Toxoplasma gondii pada itik yang dipelihara di

Bali.

c. Menentukan patogenitas isolat Toxoplasma gondii asal itik di Bali terhadap mencit

(virulensi terhadap mencit)

d. Menentukan Karakteristik genetik Toxoplasma gondii isolat lokal pada itik di Bali.

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

Toxoplasmosis merupakan penyakit zoonosis yang disebabkan oleh infeksi Toxoplasma

gondii, penyakit ini dapat ditularkan dari hewan ke manusia melalui stadium infekstif yang

terkandung pada hewan. Hewan piaraan kucing merupakan satu-satunya sumber penularan

terpenting dari Toxoplasma gondii, karena kucing merupakan satu-satunya hewan yang

secara langsung dapat menyebarkan ookiste yang mencemari lingkungan dan potensial

menulari manusia maupun hewan lain sebagai induk semang antara .

Pada manusia Toxoplasmosis berakibat fatal, apabila terjadi infeksi primer pada trimester

pertama kehamilan dapat mengakibatkan abortus, kematian neonatal atau abnormalitas pada

fetus (Tenter dkk., 2000). Selain itu infeksi T. gondii diperkirakan dapat mengakibatkan

kerusakan sel inang dan ensefalitis pada orang-orang yang mengalami imunosupresi seperti

pengidap AIDS (Dubey, 1998a; Carruthers, 2002) dan dinyatakan juga infeksi parasit ini

ada hubungannya dengan schizophrenia (Torrey dkk., 2003).

Penularan Toxoplasmosis dapat dibagai menjadi tiga cara yaitu :

a). Kongenital, inkesi ini terjadi selama janin masih dalam kandungan. Hal ini terjadi apabila

selama kehamilan terjadi infeksi Toxoplasma gondii dan infeksi tersebut dapat ditularkan

kepada janin. Infeksi yang terjadi selama kehamilan dapat menimbulakan keguguran,

kematian bayi pada waktu lahir atau abnormalitas foetus (Remington et al. 1990; Remington

et al. 1995; Chatterton et al. 1992; Hayde et al. 2000). Toxoplasmosis kongenital ini dapat

menyebabkan menurunya kwalitas hidup anak penderita. Kelainan kelainan yang sering

nampak pada toxoplasmosis kongenital adalah gangguan penglihatan dan encephalitis yang

fatal (Dubey dan Beatie, 1988; Koskiniemi et al, 1989; Roberts et al, 1994).

b). Penularan melalui makanan atau air yang tercemar oleh ookista T. gondii, ookista

Toxoplasma gondii berasal dari tinja kucing yang merupakan satu satunya hospes definitif

dari parasit tersebut. Okista yang keluar bersama tinja kucing pada lingkungan akan

mengalami sporulasi yang merupakan phase infektif. Pada lingkungan ookista yang sudah

bersporulasi tahan terhadap kondisi lingkungan sehingga masih tetap infektif selama berbulan

bulan. Kucing penderita toxoplasmosis tidak menunjukkan tanda tanda klinis serta penularan

melalui plasenta sangat jarang (Dubey and Beatie, 1988; Dubey, 1986). Infeksi laten

Toxoplasmosis pada kucing di beberapa negara dilaporkan antara 6% sampai 52% (Tenter et

al. 1999).

Kucing merupakan satu satunya hewan piaraan yang merupakan hospes definitif

Toxoplasma gondii sehingga kucing memegang peran penting dalam epidemiologi penyakit

ini. Setelah terjadi infeksi primer pada kucing maka akan mengeluarkan ookista dalam

jumlah yang sangat banyak, ookista tersebut akan mencemari lingkungan sekitar. Infeksi

primer yang terjadi pada kucing liar ookista akan mencemari lingkungan dan lahan pertanian.

Tercemarnya lingkunngan oleh ookista yang telah bersporulasi merupakan sumber infeksi

yang potensial terhadap manusia atau induk semang antara lainnya seperti ternak., yang

nantinya merupakan sumber infeksi terhadap manusia.

c). Penularan melalui konsumsi daging yang mengandung kista T. gondii,

Daging yang mengandung kista Toxoplasma gondii juga merupakan sumber infeksi yang

potensial terhadap manusia. Pada daging babi, domba dan kambing paling sering ditemukan

kista parasit tersebut dibandingkan dengan daging daging ternak lainnya. Dari hasil beberapa

penelitian di Eropa daging babi merupakan sumber penularan toxoplasmosis pada manusia

(Janitske, 1999; Bundesgesundheitsamt, 1993).

Hasil-hasil penelitian terhadap seroprevalensi toxoplasmosis pada manusia di

berbagai daerah di Indonesia telah dilaporkan, yaitu berkisar antara 3,1 % - 64 % (Chomel

dkk., 1993; Matsuo, 1995; Uga dkk., 1996; Fan, 2002). Dari hasil penelitian epidemiologi

tersebut beberapa peneliti berpendapat, bahwa kebiasaan makan sangat menentukan

terjadinya infeksi parasit tersebut, misalnya kebiasaan makan sate yang belum masak dengan

sempurna (Gandahusada, 1991), kebiasaan makan lawar di Bali (Chomel dkk., 1993).

Diagnosis adanya infeksi T. gondii pada manusia dan hewan pada prinsipnya sama, yang

pada dasarnya diagnosis infeksi dibedakan menjadi dua, yaitu deteksi adanya parasit secara

tidak langsung dan secara langsung. Deteksi secara tidak langsung umumnya dilakukan

berdasarkan uji-uji imunologi, salah satu uji yang dinyatakan mempunyai tingkat sensitivitas

yang tinggi adalah uji ELISA. Sedangkan deteksi langsung umumnya berdasarkan

ditemukan adanya parasit atau materi genetik parasit .(Montoya dan Liesenfeld, 2004). Ada

beberapa metode yang dapat diterapkan, diantaranya metode digesti jaringan, dengan pepsin

atau trypsin, untuk melihat adanya kista yang mengandung bradizoit pada jaringan tersebut,

atau metode bioassay dengan menyuntikkan hasil digesti ke hewan coba dan melakukan

pengamatan pada hewan coba tersebut. (Dubey, 1998b; Dubey, 1998c). Sampai saat ini di

kawasan Asia tenggara belum ada penelitian yang melaporkan keberadaan Toxoplasma

gondii pada kambing serta patogenitasnya.

Uji diagnostik yang ideal diharapkan memenuhi beberapa kreteria antara lain:

memeliki akurasi atau validitas dan presisi yang tinggi, prosedur kerja yang mudah dan biaya

pemeriksaan tidak terlalu mahal. Setiap metode yang akan diterapkan di suatu laboratorium

baik kepentingan diagnostik maupun penelitian sebaiknya dilakukan optimalisasi metode

tersebut.

Infeksi T. gondii pada inang, baik inang akhir maupun inang antara ditentukan oleh

tingkat patogenisitas dari parasit yang menginfeksi. Makin tinggi tingkat patogenisitasnya

maka akibat yang ditimbulkan pada inang akan lebih parah (Dubey, 1998a). Tingkat

patogenisitas T. gondii sangat ditentukan oleh tipe genetik dari parasit tersebut dan

berdasarkan restriction fragment length polymorphism (RFLP) dinyatakan ada tiga tipe

yaitu tipe I, tipe II dan tipe III (Howe dkk, 1997). Diantara tiga tipe T. gondii tersebut

dinyatakan tipe I mempunyai tingkat patogenisitas paling tinggi, hal ini dibuktikan dengan

teramati LD 100 pada mencit adalah dibawah 10 takisoit, sedangkan tipe II dan tipe III

disebut dengan tipe intermediet dan avirulent. ( Howe dkk, 1997). Dubey et al., (2008) yang

menyatakan bahwa isolat T. gondii yang diisolasi dari Ghana, Indonesia, Italia, Polandia, dan

Vietnam bersifat avirulent terhadap mencit.

Infeksi T. gondii akan menimbulkan reaksi pada inangnya, yaitu berupa pembentukan

zat kebal atau antibodi, yang ditunjukkan dengan pembentukan beberapa kelas antibodi

spesifik dalam plasma (Frenkel, 1990; Denker dan Gazzienelli, 1998) dan intensitas

terbentuknya antibodi ditunjukkan dengan tingkatan titer antibodi. Omata dkk, (1994) pada

penelitiannya mengungkapkan bahwa titer antibodi terhadap T. gondii pada babi dipengaruhi

oleh patogenitas dari strain T. gondii yang menginfeksi. Sedangkan Dubey dkk (1995)

mengasumsikan bahwa makin tinggi titer antibodi terhadap T. gondii pada babi maka makin

tinggi pula kemungkinan intensitas parasit pada jaringan. Namun pada penelitian tersebut

tidak diungkapkan bagaimana hubungan antara titer antibodi dengan intensitas T. gondii pada

pada jaringan yang terinfeksi.

Penelitian tentang toxoplasmosis pada berbagai hospes intermidier di Bali telah

dilakukan pada wanita hamil (Dwinata, dkk., 2009) dan dapat diidentifikasi kebiasaan makan

daging dan keberadaan kucing sebagai faktor risiko terhadap toxoplasmosis. Penelitian pada

hewan yang merupakan sumber penularan pada toxoplasmosis ke manusia telah diteliti

seperti T. gondii pada kambing dengan seroprevalensi 15,9% (Dwinata, dkk., 2011) namun

keberadaan kista parasit tidak dapat diisolasi. Pada ayam kampung (Dwinata, dkk., 2012)

seroprevalensinya sebesar 24,8 %.

BAB III. METODE PENELITIAN

Penelitian Tahun I

3.1. Pengambilan sampel

Itik yang dipakai sampel penelitian adalah itik yang berumur diatas 6 bulan yang

dipelihara secara ekstensif. Sampel berasal dari 8 kabupaten di Bali masing masing:

kabupaten Badung, Gianyar, Tabanan, Bangli, Karangasem, Kelungkung, Negara dan

Buleleng. Dari masing masing kabupaten diambil sekitar 20-40 ekor itik yang berasal dari

peternak yang berbeda. jumlah sampel itik yang digunakan pada penelitian ini keseluruhan

adalah 200 ekor. Pengambilan sampel dan pemotongan pada masing masing kabupaten

dilakukan secara bertahap. Setiap kali pemotongan hanya sebanyak 10 ekor itik. Selama

pemotongan dilakukan pengambilan darah, otak dan jantung.

3.2. Pemeriksaan Serologis untuk Menentukan Seroprevalensi T. gondii pada Itik

Darah yang diperoleh dilakukan pemisahan serum. Setelah serum didapat, kemudian

serum disimpan pada freezer dengan suhu -20 C̊ sebelum dilakukan uji serologis.

Pemeriksaan serologis untuk menentukan adanya antibodi terhadap Toxoplasma gondiii

menggunakan metoda IHA.

Sebelum dilakukan uji serologis serum yang disimpan pada suhu - 20 C̊ kemudian didiamkan

terlebih dahulu pada suhu kamar sampai serum yang beku tersebut mencair. Uji serologis

yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan antibody terhadap Toxoplasma gondii

menggunakan Uji IHA (Indirect Haemaglutination Test) dengan menggunakan Cellognost*-

Toxoplasmosis H (SIEMENS).

Prosedur kerja dari uji IHA (Indirect Haemaglutination Test) adalah sebagai berikut:

Masukkan 50 µl serum buffer kedalam sumuran mikrotitration plate, kemudian tambahkan 2

µl Toxoplasma Control Serum, Positive (IgG) ke dalam sumuran mikrotitration plate yang

sudah terisi serum buffer dengan baik. Pada sumuran A1 kemudian tambahkan 2 µl

Toxoplasma Control Serum Negative ke dalam sumuran A2 (sumuran A1 dan A2 digunakan

sebagai control). Tambahkan 2 µl serum itik yang akan di uji. Tambahkan 50 µl Cellognost*

Toxoplasmosis H (Toxoplasmosis IHA Reagent) kedalam sumur mikrotitration plate (kocok

reagent sebelum digunakan) Kocok mikrotitration plate dengan menggunakan mikrotitration

plate shaker ( Pengocok) Selama 15-20 detik dengan kecepatan 900 s/d 1100 rpm Tutup

Mikrotitration plate dengan menggunakan plastik Polystyrine, dan Inkubasikan pada suhu

ruangan (+ 15-25 ºC) Reaksi dapat terbaca setelah 3-24 jam.

Setelah diperoleh hasil dari uji serologis, sampel yang menunjukkan hasil positif akan

dilanjutkan dengan uji Titer Antibodi. Prosedur kerja Uji Titer Antibodi adalah sebagai

berikut: pada sumuran A1-H1 masukkan 175 µl serum buffer, sedangkan pada sumuran

sisanya masukkna 50 µl serum buffer. Kemudian pada sumuran A1 masukkan 25 µl serum

kontrol positif dan pada sumuran B1 masukkan 25 µl serum kontrol negatif, sedangkan pada

sumuran C1-H1 masukan 25 µl (1:8) serum yang akan diuji Titernya. Kemudian lakukan

pengenceran dengan cara pindahkan 50 µl dari sumuran 1 hingga ke sumuran 12, lalu pada

sumuran terakhir, dibuang 50 µl. Kemudian tambahkan 50 µl Cellognost* Toxoplasmosis H

(Toxoplasmosis IHA Reagent) kedalam sumuran ke 3 sampai sumuran ke 12, lalu Kocok

mikrotitration plate dengan menggunakan mikrotitration plate shaker ( Pengocok) Selama

15-20 detik dengan kecepatan 900 s/d 1100 rpm Tutup Mikrotitration plate dengan

menggunakan plastik Polystyrine, dan Inkubasikan pada suhu ruangan (+ 15-25 ºC) Reaksi

dapat terbaca setelah 3-24 jam.

3.3 Uji Bioassay

Identifikasi stadium parasit dilakukan dengan uji bioassay dari organ hewan yang positif

secara serologis terinfeksi Toxoplasma gondii pada mencit dan kucing.

Bioassay dibagi menjadi beberapa tahapan, antara lain:

a. Metoda Digesti Pepsin-HCl (Dubey 1998).

Pertama-tama organ otak dan jantung dari itik yang positif secara serologis dipotong kecil (1-

2 cm), kemudian dengan menggunakan blender hancurkan 50 g daging yang ditambahkan

125 ml saline pada kecepatan tinggi selama 30 detik. Setelah itu bilas emulsi daging tersebut

dengan 125 ml saline kemudian tuangkan pada wadah 1000 ml dan letakkan pada temperatur

kamar selama 1 – 3 jam. Langkah berikutnya adalah Tambahkan 250 ml emulsi daging

dengan larutan asam pepsin (pepsin 2,6 g, NaCl 5,0 g, HCl 7,0 dan tambahkan aqudes sampai

500 ml, ph 1,10 – 1,20) dalam keadaan hangat (37o

C), kemudian inkubasikan pada

temperatur 37o

C selama 60 menit. Selanjutnya emulsi daging tersebut disaring sebanyak 250

ml dan disentrifus pada kecepatan 1200 rpm selama 10 menit. Supernatan dituang, kemudian

sedimen ditambahkan 20 ml phospat buffer saline (PBS, pH 7,2) dan letakkan pada tabung

50 ml.serta ditambahkan 12 – 18 ml 1,20 % sodium bicarbonat (pH 8,3), kemudian

disentrifuse pada kecepatan 1200 rpm selama 10 menit. Langkah teraknir adalah supernatan

dibuang, kemudian sedimen ditambahkan 1000 unit penicillin dan 100 µg streptomycin per

ml. dan inokulat siap untuk diperiksa atau diinokulasikan.

b. Bioassay pada Mencit dan kucing

Inokulum asal otot, otak dan jantung itik diinokulasikan masing-masing pada 3 ekor

mencit sebanyak 0,2 ml secara peritonial, masing-masing mencit dengan perlakuan yang

berbeda diberi tanda yang berbeda (diwarnai) dan diletakkan dalam satu kandang. Kandang

mencit diberi penanda tanggal penyuntikan dan nomor inokulum dan pengamatan pada

mencit dilakukan sampai hari ke 28 setelah inokulasi.

c. Bioassay pada kucingI

Jantung, otot dan otak daging itik yang positif antibodi T. gondii di pool kemudian

diberikan makan pada 3 ekor anak kucing. setelah hari ketiga sampai hari ke-14 mulai

dilakukan pemeriksaan feses kucing untuk menemukan adanya ookista T. gondii . ookista

yang ditemukan kemudian disimpan pada di frezer pada suhu minus 20 C

d. Nekropsi Mencit dan Pengamatan Kista

Mencit yang mati selama pengamatan dilakukan nekropsi,kemudian dibuatkan

preparat ulas organ otak, jantung, paru dan hati. Mencit yang bertahan hidup sampai hari ke

28 terlebih dahulu dianastesi dengan menggunakan ether, lalu dinekropsi dan dibuat preparat

ulas organ otak, jantung, paru dan hati. Preparat ulas difiksasi dengan menggunakan

methanol dan diwarnai dengan giemsa 20 %. Selanjutnya dilakukan pengamatan dibawah

mikroskop dengan pembesaran 1000 X untuk melihat adanya kista T. gondii.

Penelitian Tahun II

Genotyping

Ookista Toxoplasma gondii pada kucing atau Kista otak pada mencit yang positif

Toxoplasma gondii diisolasi dengan percoll gradient sentrufugasi. Extraksi DNA

menggunakan QIAamp DNA minikit (Qiagen). Penentuan type strain dari Toxoplasma

gondii menggunakan tiga single nucleotide polymorphism (SNPs) dengan PCR-restriction

fragment lenght polymorphism RFLP (SAG2, SAG1 dan GRA7).

Ekstraksi DNA

Tahapan isolasi DNA T. gondii Mengacu pada prosedur suplaiyer (Qiagen, 2007).

Sebanyak 180-220 mg sampel feses dimasukkan kedalam tabung mikrosentrifuge 2 ml dan

letakkan pada kotak yang berisi es. Tambahkan 1,4 ml buffer ASL pada masing masing

tabung yang berisi sampel, divortex selama 1 menit atau hingga sampel homogen. Masukkan

tabung kedalam waterbath dengan suhu 960C selama 5 menit. Vortex selama 15 detik lalu

sentrifuge dengan kecepatan maksimum selama 1 menit hingga terbentuk endapan didasar

tabung. Ambil 1,2 ml supernatan dan lmasukkan kedalam tabung mikrosentrifuge 2 ml yang

baru, endapannya dibuang. Tambahkan 1 tablet InhibitEX pada masing masing tabung,

langsung divortex hingga seluruh tablet tersuspensi dalam larutan sampel. Inkubasikan

suspensi pada suhu kamar selama 1 menit supaya partikel inhibitor teradsorbsi pada matriks

InhibitEX. Centrifuge sampel pada kecepatan maksimum hingga terbentuk endapan (ikatan

inhibitor dan matriks InhibitEX). Ambil seluruh supernatan lalu masukkan ke dalam tabung

mikrosentrifuge 1,5 ml baru, endapannya dibuang. Centrifuge sampel pada kecepatan

maksimum selama 3 menit. Ambil lalu masukkan 200 µl supernatan pada tabung

mikrosentrifuge 1,5 ml baru lalu tambahkan 15µ proteinase K dan 200 µl buffer AL

kemudian divortex selama 15 detik. Inkubasikan pada suhu 70oC selama 10 menit.

Tambahkan 200 µl etanol 96-100% sebagai lisator dan vortex hingga tercampur. Ambil

cairan yang telah lisis dengan hati-hati agar tidak terbentuk gelembung udara dan cairan tidak

tertempel didinding tabung, lalu masukkan kedalam QiAmp spin column yang diletakkan

pada tabung mikrosentrifuge 2 ml. Tutup tabung QiAmp spin column lalu centrifuge pada

kecepatan penuh selama 1 menit, filtratnya dibuang dan ambil QiAmp spin column untuk

diletakkan pada tabung mikrocentrifuge yang baru. Tambahkan 500 µl buffer AW1 kedalam

QiAmp spin column lalu centrifuge pada kecepatan maksimum selama 1 menit, buang

filtratnya dan letakkan QiAmp spin column pada tabung mikrocentrifuge 2 ml yang baru dan

tambahkan 500 µl buffer AW2, centrifuge pada kecepatan maksimum selama 3 menit. Buang

filtratnya dan ulangi centrifuge pada kecepatan maksimum selama 1 menit. Ambil QiAmp

spin column dan masukkan kedalam tabung mikrocentrifuge 1,5 ml yg baru. Tambahkan

dengan meletakkan 50 µl buffer AE pada membran QiAmp spin column, inkubasi selama 1

menit pada temperatur kamar. Centrifuge selama 1 menit pada kecepatan maksimum. DNA

tertampung bersama filtrat pada tabung mikrocentrifuge 1,5 ml.

Proses PCR

Reaksi PCR dilakukan pada total volume 25 µl yang mengandung 2 µl DNA template,

5 µl PCR buffer, 1,5 µl MgCl2, 0,2 µl dNTPs, 0,1 µl Taq polymerase, 1 µl F Primer, 1 µl R

Primer dan 14,2 µl dH2O. Proses PCR mengacu pada metode yang diterapkan oleh (Daniel

et.al 1997 dan Lehman et. al 2000) yaitu menggunakan metode nested PCR dengan

menggunakan dua pasangan primers.

Sampel dianalisis pada lokus SAG2, amplifikasi pertama dilakukan reaksi sebanyak

40 siklus dengan menggunakan primers SAG2.F4 (5’GCTACCTCGAACAGGAACAC3’)

dan SAG2.R4 (5’GCATCAACAGTCTTCGTTGC3’). Amplifikasi dilakukan pada mesin

Thermalcycler Model TC25/H dengan kondisi predenaturasi pada suhu 94oC selama 5 menit,

diikuti 40 siklus dengan kondisi reaksi sebagai berikut: denaturasi pada suhu 94oC selama 30

detik, annealing pada suhu 65oC selama 30 detik dan polimerisasi pada suhu 72

oC selama 45

detik. Pada bagian akhir ditambahkan dengan polimerasi pada suhu 72oC selama 10 menit.

Amplifikasi kedua dilakukan menggunakan produk PCR pada reaksi yang pertama

sebanyak 2 µl setelah dilarutkan pada dH2O dengan perbandingan 1/10. Primers yang

digunakan adalah sebagai berikut SAG2.F (5’GAAATGTTTCAGGTTGCTGC3’) dan

SAG2.R2 (5’GCAAGAGCGAACTTGAACAC3’) kondisi reaksi yaitu predenaturasi pada

suhu 94oC selama 5 menit, diikuti 40 siklus dengan kondisi reaksi sebagai berikut: denaturasi

pada suhu 94oC selama 30 detik, annealing pada suhu 65

oC selama 30 detik dan polimerisasi

pada suhu 72oC selama 45 detik. Pada bagian akhir ditambahkan dengan polimerasi pada

suhu 72oC selama 10 menit.

Elektroforesis

Setelah reaksi PCR selesai dilanjutkan pada tahapan elektroforesis. Langkah kerjanya

sebagai berikut; Siapkan agarose 1,5% (75 mg + 50 ml TAE buffer) yang ditambahkan

sebanyak 2µl DNA Stainer. Masing-masing produk PCR diambil 5 µl dan dicampur dengan

2 µl loading dye. Kolom pertama diisikan DNA Ladder berukuran 100 bp. Elektroforesis

dilakukan pada tegangan 90 volt selama 35 menit. Visualisasi band yang muncul dilakukan

dengan UV transilluminator, kemudian difoto menggunakan kamera digital yang dilengkapi

dengan UV filter.

Purifikasi DNA

Sampel yang menunjukkan adanya band pada gel elektroforesis selanjutnya

dimurnikan menggunakan DNA Purification Kit produksi Invitrogen. Gel yang terdapat band

dipotong menggunakan pisau scalpel steril tepat pada bandnya. Masukkan potongan gel

kedalam tabung spin khusus yang tersedia dalam kit lalu tambahkan binding buffer kira-kira

empat kali volume sampel, centrifuge pada kecepatan 10.000 rpm selama 1 menit. Buang

cairannya dan ambil spin tube, tambahkan 650 µl washing buffer lalu centrifuge pada

kecepatan 10.000 rpm selama 1 menit. Buang cairannya dan ulangi centrifuge pada kecepatan

maksimum selama 2-3 menit. Ambil spin tube dan masukkan kedalam tube baru lalu

tambahkan 30 µl elution buffer dan inkubasikan pada suhu ruang selama 1 menit. Centrifuge

pada kecepatan maksimum selama 2 menit, cairan tersebut mengandung produk DNA yang

siap untuk diproses selanjutnya.

Sequencing DNA dan Analisis Hasil

DNA hasil purifikasi dikirim ke Laboratorium Eijkman untuk dilakukan analisa

sequencing. Hasil sequencing yang didapatkan kemudian dianalisa dan dibaningkan dengan

Gene Bank untuk menentukan spesies Entamoeba.

BAB IV. PEMBIAYAAN DAN JADWAL PENELITIAN

4.1 Anggaran Biaya

JENIS PENGELUARAN

BIAYA YANG DIUSULKAN

(RP)

JUMLAH

Th. 2013 Th. 2014

UPAH DAN GAJI 12.288.000 12.288.000 24.576.000

BAHAN HABIS PAKAI 35.850.000 33.000.000 68.850.000

PERJALANAN 7.000.000 - 7.000.000

PENGELUARAN LAINNYA 3.250.000 7.500.000 10.750.000

JUMLAH 58.388.000 52.788.000 111.176.000

4.2 JADWAL PENELITIAN

JADWAL PELAKSANAAN PENELITIAN

No Kegiatan

Bulan ke

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Tahun 2013

1 Persiapan

2 Pengambilan sampel dan uji serologis

3 Uji biasaay pada mencit dan kucing

4 Analisis data dan publikasi

DAFTAR PUSTAKA

Carney WP; Cross JH; Joseph SW, Van Peenen PF, Rusell D; Salianti Saroso J (1978):

Serological study of amoebiasis and toxoplasmosis in the Malili area, South Sulawesi,

Indonesia. Sutheast Asian J Trop Med Public Health 4: 471-479

Chatterton J.M.W. (1992): Pregnancy. In: Ho-Yen DO, Joss AWL, editors. Human

toxoplasmosis. Oxford: Oxford University Press. 144-183

Chomel BB; Karsten R; Adam C; Lambilotte C; Theis J; Goldsmith R; Koss J; Chioino C;

Widjana DP; Sutisna P (1993): Serosurvey of some major zoonotic infections in

children and teenagers in Bali, Indonesia.Sutheast Asian J Trop Med Public Health

24: 321-326

Cross JH; Van Peenen PF; Hsu NH; Koeshardjono C; Simanjuntak GM; Amdani SK. (1976):

Toxoplasma gondii haemaglutinating antibody titers in Indonesian goats. Trop Geogr

Med 28: 355-358

Damriyasa, IM., C. Bauer, K. Noeckler, A.M. Tenter and H. Zahner (2000) Survey on

zoonotic parasite infections in pigs in southern Bali, Indonesia Proc. 19. Kongr.

DTSCH. Ges. Parasitol., Stuttgart

Damriyasa, IM., Suratma, N.A., Dwinata, I.M., Tenter, A.M., Nöckler, K. and C. Bauer

(2001b): Faecal and serological survey on Endoparasite infections of sows in Bali,

Indonesia. Proc. 18. Int. Conf. Wrld. Adv. Vet. Parasitol., Stressa-Italy. Abstr. Nr.

E35p

Daniel, KH., S. Honore, F. Derouin and LD. Sibley. 1997. Determination of Genotypes of

Toxoplasma gondii Strains Isolated from Patients with Toxoplasmosis. J. of Clinical

Microbiology. Vol. 36, No.6. P:1411-1414

Desmonts G; Daffos F; Forestier F; Capella-Pavlovsky M; Thulliez P; Chartier M. (1985):

Prenatal Diagnosis of congenital toxoplasmosis. Lancet 8620: 500-504.

Dubey JP. (1980): Mouse pathogenecity of Toxoplasma gondii isolated from goat. Am. J. of

Vet Sci. 24: 139-146

Dubey JP and Beattie CP. (1988). Toxoplasmosis of animals and man. Boca Raton, FL: CRC

Press.

Dubey JP, Beattie CP. 1988. Toxoplasmosis of animals and man. Boca Raton, FL: CRC

Press.

Dubey JP. 1998. Refinement of pepsin digestion method for isolation of Toxoplasma gondii

from infected tissue. Veterinary Parasitology 74, 75-77

Dubey, JP, Graham DH, Dahl E, Hilali M, El-Ghaysh A, Sreekumar C, Kwok OCH, Shen

SK, Lehman T. 2003a. Isolation and molecular characterization of Toxoplasma gondii

from Chickens and ducks from Egypt. Vet. Parasitol. 114, 89-95.

Dubey JP, Lam Thi Thu Huong, Lowson BWL, Subekti DT, Tassi P, Cabaj W, Sundar N,

Velmurugan GV, Kwok OCH, Su C. 2008. Seroprevalence and isolation of

Toxoplasma gondii from free-range chicken in Ghana, Indonesia, Italy, Poland and

Vietnam. J. Parasitol. 94. Pp 68-71

Dubey JP. (1996): Strategies to to reduce transmission of Toxoplasma gondii to animals and

humans. Vet Parasitol. 64: 65-70

Dwinata, IM. Sutarga IM: Damriyasa, IM. 2009. Potensi Kucing sebagai Faktor Risiko

terhadap Toxoplasmosis pada Wanita Hamil di Bali. Laporan Hibah penelitian

Strategis Nasional. Universitas Udayana.

Dwinata, IM; Sukada, IM; Oka, IBM. 2011. Isolasi dan seroprevalensi Toxoplasma gondii

pada kambing di Bali. Laporan Penelitian Fundamental. DIKTI.

Dwinata, IM; Adi Suratma,N; Oka,IBM; Damriyasa, IM. 2012. Seroprevalensi dan isolasi

Toxoplasma gondii pada Ayam Kampung di Bali. Jurnal Veteriner. Fakultas

Kedokteran Hewan Indonesia. Vol.13 N0.4 Desember 2012.

Gandahusada S and Endardjo S (1980) Toxoplasma antibodies in Obano, Irian Jaya,

Indonesia. Sutheast Asian J Trop Med Public Health. 11: 276-279

Hayde M. and Pollack A.(2000): A clinical picture: neonatal signs and symptoms. In:

Ambroise Thomas P; Petersen E editors. Congenital Toxoplasmosis: scientific

background, clinical management and control. Paris: Springer Verlag France. 153-164

Lehmann T., CR. Blackston, SF. Parmley, JS. Remington and JP. Dubey. 2000. Strain

Typing of Toxoplasma gondii: Comparison of Antigenic-coding and Housekeeping

Genes. J. Parasitol, 86(5), P 960-971.

Yan, C; Yue, CL.; Yuan, ZG.; He,Y.; Yin, CC.; Lin, RQ.; Dubey,JP.; Zhu,XQ. 2009.

Toxopalsmosis gondii Infection in Domestic ducks, Free-range and cage chikens in

Southern China. Veterianry Parasitology 165. 337-340.

Yang, N; Ming-Yang, M; Hong-Kui, L; Miao, L.; Jian-Bin, H. 2012. Seroprevalence of

Toxoplasma gondii Infection in Slaughtetred Chickens, Ducks, and Geese in

Shenyang, Northeastern China. Parasites and Vector, 5.237.

Koskiniemi M; Lappalainen M; Hedman K. (1989): Toxoplasmosis needs evaluation: an

overview and proposals. Am J Dis Child: 143: 724-728

Matsuo K and Husin D. (1996): A survey of Toxoplasma gondii antibodies in goats and

cattle in Lampung province, Indonesia. Sutheast Asian J Trop Med Public Health 27:

554-555

Pinckney RD; Lindsay DS; Blagburn BL; Boosinger RB; McLaughin SA; Dubey JP. (1994):

Evaluation of the safety and efficacy of vaccination of nursing pigs with living

tachyzoites of two strains of Toxoplasma gondii. J. Parasitol. 80: 438-448

Tenter AM, Heckeroth AR, Weiss LM . 2000. Toxoplasma gondii: From animal to human.

Inter. J.for Parasitol., 30: 1217-5

Uga S; Ono K; Kataoka N; Hasan H. (1996): Seroepidemiologi of five major zoonotikc

parasite infections in inhabitants of Sidoarjo, East Java, Indonesia. Sutheast Asian J

Trop Med Public Health 27: 556-561

LAMPIRAN 1.

REKAPITULASI ANGGARAN

Pada Tahun I.

1. Honor dan Upah

N

o

Tim

Peneliti

Orang Ming

gu /

Bulan

Bulan

Kerja

Jam /

Ming

gu

Tarip/

Jam

Total (Rupiah)

1 Ketua 1 4 8 8 18000 4.608.000

2 Anggota 2 4 8 8 15000 7.680.000

Subtotal 12.288,000

Terbilang: Dua belas juta dua delapan puluh delapan ribu rupiah

2. Pengadaan Bahan habis pakai

No Nama Bahan Volume Satuan Biaya satuan Total biaya (Rp)

1 Kit IHA 4 set 4.000.000 16.000.000

2 Pemeriksaan digesti 1 paket 4.000.000 4.000.000

3 Pembelian itik 200 ekor 50.000 10.000.000

4 Pembelian kucing 3 ekor 100.000 300.000

5 Tip dan pipet 1 paket 1.000.000 1.000.000

6 pembelian mencit 1 paket 1.350.000 1.350.000

7 pemeliharaan mencit 1 paket 1.000.000 1.000.000

8 pembelian objek glas 10 boks 60.000 600.000

9 pembelian cover glas 10 boks 60.000 600.000

10 Bahan lainnya 1 paket 1.000.000 1.000.000

Subtotal 35.850.000

Terbilang: Tiga puluh lima juta delapan ratus lima puluh ribu rupiah

3. Perjalanan

Uraian kegiatan Volume Biaya satuan Biaya satuan

1. Denpasar-Buleleng

2. Denpasar –kelungkung

3. Denpasar-Gianyar

4. Denpasar-Tabanan

5. Denpasar-karangasem

6. Denpasar-Bangli

7. Denpasar-Jembrana

2

2

2

2

2

2

2

500.000

500.000

500.000

500.000

500.000

500.000

500.000

1000.000,-

1000.000,-

1000.000,-

1000.000,-

1000.000,-

1000.000,-

1000.000,-

Sub total 7.000.000,-

Terbilang : Tujuh juta rupiah

4. Pengeluaran lainnya

N

o

Uraian Kegiatan Volu

me

Biaya

satuan

Total biaya

1 Rapat persiapan 1 Paket 500.000 500,000

2 Administrasi 1 Paket 1.000000 1,000,000

3 Analisis data 1 Paket 500.000 500,000

4 Seminar dan

pelaporan

1 Paket 1.250.000 1,250,000

Sub total 3.250,000

Terbilang: Tiga juta dua ratus lima puluh ribu rupiah

Total pengeluaran 1+2+3 Rp. 58.388.000,-

Terbilang: Lima puluh delapan juta tiga ratus delapan puluh delapan

ribu rupiah

Pada Tahun II

1. Honor dan Upah

No Tim Peneliti Orang Minggu /

Bulan

Bulan

Kerja

Jam /

Minggu

Tarip/

Jam Total (Rupiah)

1 a. Ketua 1 4 8 8 18.000 4.608.000

2 b. Anggota 2 4 8 8 15.000 7.680000

Subtotal 12.288.000

Terbilang : Dua belas juta dua ratus delapan puluh delapan ribu rupiah

2. Bahan habis pakai untuk genotyping

No Uraian kegiatan Volume Biaya

satuan

Total biaya

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

DNA Extraction KIT

Primers

Reagen PCR

Pipett tips

Agarose

Buffer TAE

Loading dye

DNA Ladder

PCR Tubes

Nuclease free water

Powder free gloves

Edithium bromide

Parafilm paper

DNA Purification Kit

Sequencing DNA

3 box

3 pasang

150 reaksi

10 box

1 box

1 L

1 ml

1 ml

1 box

500 ml

5 box

1 ml

1 rol

1 box

25

3.680.000

600.000

50.000

250.000

1.800.000

800.000

1.013.000

3.300.000

2.800.00

2.600.000

150.000

900.000

500.000

4.300.000

300.000

11.040.000

1.800.000

7.500.000

2.500.000

1.800.000

800.000

1.013.000

3.300.000

2.800.000

2.600.000

750.000

900.000

500.000

4.300.000

7.500.000

49.103,000

3. Pengeluaran lainnya

No Uraian Kegiatan Volume Biaya

satuan

Total biaya

2 Rapat persiapan 1 Paket 500000 500,000

3 Sewa alat 1 Paket 1500000 1,500,000

4 Administrasi 1 Paket 500000 500,000

5 Analisis data 1 Paket 500000 500,000

6 Seminar dan pelaporan 1 Paket 4,500000 4,500,000

Sub total 7.500,000

Terbilang: Tujuh juta lima ratus ribu rupiah

Total : 1 +2 +3 = Rp. 52.788.000,-

(Lima puluh dua juta rupiah tujuh ratus delapan puluh delapan ribu rupiah

Lampiran 2

Organisasi Tim Peneliti

No Nama dan gelar Bidang Keahlian Pembagian Tugas

1

2.

3.

4.

Drh. I Made Dwinata,

M.kes

Prof.Dr.Drh. I Made

Damriyasa, M.kes

Drh. I B Made Oka Mkes

Drh. Kadek Karang

Agustina,MP

Parasitologi

Parasitologi

Parsitologi

Molekuler Parasitologi

Semua tim peneliti

ikut didalam

pengambilan sampel

kelapangan dan ikut

didalam pemeriksaan

laboratorium.

Lampiran 3

Dukungan Sarana dan Prasarana Penelitian.

Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana telah merintis kerjasama sejak tahun

2000 dengan Institute for Parasitologi Justus Liebig University Giessen Jerman yang

terwujud dalam bentuk Laboratorium Bersama yaitu Center for Study on Animal

Diseases (CSAD) yang pembangunan dan perlatannya dibantu dari Institute for

Parasitologi Justus Liebig University Giessen Jerman . Dari kerjasama tersebut telah

banyak hasil-hasil penelitian yang dipublikasikan pada seminar-seminar baik tingkat

nasional maupun internasional, serta beberapa telah dipublikasikan pada journal

internasional. Disamping itu adanya laboratorium Parasitology di fakultas Kedokteran

Hewan Universitas Udayana telah dilengkapi dengan serana dan prasarana untuk

pelaksanaan penelitian ini.

Laboratorium Biomedik merupakan laboratorium molekuler yang dimiliki oleh FKH

Unud, disana merupakan pusat penelitian dibidang molekuler, yang menyediakan

beberapa mesin PCR serta perlengkapan penunjang lainnya.

LAMPIRAN 4.

BIOGRAFI

1. KETUA PENELITI

Nama Lengkap : Drh. I Made Dwinata Mkes

Tempat/Tanggal Lahir : Tabanan, 6 Juni 1962

Jenis Kelamin : Pria

Bidang Keahlian : Parasitologi

Kantor/Unit Kerja

NIP

Pangkat/Gol/Jabatan

:

:

:

FKH UNUD

196206061989031003

Pembina TK I/IVb/Lektor Kepala

Alamat Kantor : FKH-Unud Denpasar Bali

Telepon : 0361 223791

Alamat Rumah

Email

:

:

Jl. Tukad Pakerisan G. XIIB/4 DPS

dwinatadwi@yahoo.com

Pendidikan (S1 ke atas)

No.

Perguruan Tinggi

Kota & Negara

Tahun lulus

Bidang Studi

1 Universitas Airlangga Surabaya, Indonesia 1981-1987 Kedokteran

Hewan (S1)

2 Universitas Airlangga Surabaya, Indonesia 1993-1996 Ilmu Kesehatan

Masyarakat (S2)

PENGALAMAN RISET

No. Judul Riset

Tahun

1. Prevalensi cacing nematoda pada ayam buras yang dipasarkan di Kotif 1988

Denpasar

2. Hubungan antara jumlah cacing Haemonchus dengan hitung jenis lekosit

pada Kambing

1989

3. Penggunaan getah pepaya sebagai obat cacing pada babi 1991

4. Survey cacing pada itik di Bali 1992

5. Prevalensi cacing Ascaris suum pada babi di Bali 1994

6. Efek Ivermectin terhadap embryonisasi Telur Ascaris suum 1998

7

8.

9.

10.

11.

12

13.

14.

15.

16.

Penggunaan minyak oles bokasi pada anjing penderita scabies

Prevalensi infeksi Cacing nematoda pada Rusa yang ditangkarkan di Bali

Isolasi Toxoplasma gondii Asal Babi di Bali

Identitifikasi Cacing Trematoda usus pada Itik Bali Post Mortem

Hubungan Titer Antibodi Terhadap Toxoplasma dengan Intensitas Parasit

Pada Jaringan

Isolasi dan Uji Patogenitas Toxoplasma gondii pada Ayam kampung di

Bali

Evaluasi Metode Elisa Melalui Pemeriksaan Meat Juice Untuk Melacak

Adanya Infeksi Toxoplasma Gondii Pada Babi

Potensi Kucing sebagai Faktor Risiko terhadap Toxoplasmosis pada

wanita Hamil di Bali (Hibah Strategis Nasional, P2M Dikti

Prevalensi Infeksi Strongyloides ransomi pada anak babi diare di Bali.

Penentuan Kontaminasi Toxoplasma gondii pada daging kambing melalui

deteksi antibodi dan Genotyping (Hibah Fundamental, P2M DIKTI)

2001

2004

2005

2006

2007

2008

2008

2009

2009

2011

PUBLIKASI

1.

2.

Arjana AAG dan Dwinata IM 2000. Uji in vitro Praziquantel terhadap daya tetas

Telur Cacing Fasciola Gigantika. Buletin Sains Veteriner. Vol. XVI

Damriyasa, IM., Suratma, N.A., Dwinata, I.M., Tenter, A.M., Nöckler, K. and C.

Bauer (2000): Faecal survey on Endoparasite infections in Breeding sows in two

districts of Bali, Indonesia. Proc. 19. Kongr. DTSCH. Ges. Parasitol.,Stuttgart

3. Damriyasa, IM., Suratma, N.A., Dwinata, I.M., Tenter, A.M., Nöckler, K. and C.

Bauer (2001): Faecal and serological survey on Endoparasite infections of sows in

Bali, Indonesia. Proc. 18. Int. Conf. Wrld. Adv. Vet. Parasitol., Stressa-Italy. Abstr.

Nr. E35p

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

Damriyasa, IM., Suratma, N.A., Dwinata, IM., Apsari IAP., Schares G., Noeckler

K., Schein E. and Baur C. (2000).Parasite infections in semi-domesticated dogs in

Bali, Indonesia.Proc. 18. Int. Conf. Wrld. Adv. Vet. Parasitol., Stressa-Italy. Abstr.

Nr. E35p

Dwinata, 2006. Cacing Nematoda Pada Rusa yang Ditangkarkan di Bali. Jurnal

Veteriner.

Yudistira D.G, I.M. Dwinata, IM Damriyasa, N.S Dharmawan, 2006. Survey on

Helminth infections of Elephants in Elephant Safari Park Bali. Proc.2nd

. Asean

Congres Of Tropical Medicine and Parasitology, Bandung May 21-23 2006. P.26

Dwinata, I M. 2007. Proc. Seminar Nasional Sosialisasi dan Komunikasi Hasil

Hasil Penelitian Pada Hewan Kesayangan. Denpasar, 10 Desember 2007.

Dwinata, IM.2007. Identitifikasi Cacing Trematoda usus pada Itik Bali Post

Mortem. Proc. Simposium Nasional Parasitologi dan Penyakit Tropis. Denpasar,

25-26 Agustus 2007. Denpasar.

Dwinata, IM. 2009. Isolation Toxoplasma gondii in Village Chicken in Bali

Proc. In The Internasional Conference on ” Biotechnology for a Sustainable

Future” . Bali, Indonesia, Udayana University, 15-16 September 2009.

Oka, IBM, I M Dwinata . 2011. Strongyloidosis Pada Anak Babi Pra-Sapih.

Buletin Veteriner Udayana, Vol.3 No.2.

Dwinata, IM, IBM Oka, N. Adi Suratma , IM Damriyasa. 2012. Seoprevalensi

dan Isolasi Toxoplasma gondii pada Ayam Kampung di Bali. Jurnal Veteriner.

Fakultas Kedokteran Hewan Indonesia. Vol.13 N0.4 Desember 2012.

Denpasar, 12 Desember 2013

Drh. I Made Dwinata MKes

NIP. 19620606 198903 1 003

2. Anggota Peneliti

Anggota 1

I. IDENTITAS DIRI

1.1 Nama Lengkap (dengan gelar) Prof. Dr. Drh, I Made Damriyasa MS. L/P

1.2 Jabatan Fungsional Guru Besar

1.3 NIP/NIK/No. identitas lainnya 19621231 198803 1017

1.4 Tempat dan Tanggal Lahir Karangasem, 31 Desember 1962

1.5 Alamat Rumah Jl. Tukad Badung XXIV No 11 Denpasar

1.6 Nomor Telepon/Faks -

1.7 Nomor HP 0817340627

1.8 Alamat Kantor Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana,

Jl. PB. Sudirman Denpasar, Bali.

1.9 Nomor Telepon/Faks 0361 223791

1.10 Alamat e-mail madedamriyasa@yahoo.com

1.11 Lulusan yg telah dihasilkan S-1= 65 orang ; S-2= - orang; S-3=

3 orang

1.12 Mata Kuliah yg diampu

1. Parasitologi (S1)

2. Patologi Klinik Veteriner (S1)

3. Imunologi Parasit (S2)

4. Ekologi Parasit (S2)

5. Epidemiologi (S2)

6. Parasitologi lanjutan (S3)

7. Biokimia Patogen (S3)

II. RIWAYAT PENDIDIKAN

2.1. Program: S1 S2 S3

2.2. Nama PT Universitas

Airlangga

Surabaya

Universitas Airlangga

Surabaya

Justus Liebig

University Giessen

Germany

2.3. Bidang Ilmu Kedokteran Hewan Kedokteran Dasar Parasitologi

2.4. Tahun Masuk 1981 1990 1996

2.5. Tahun Lulus 1987 1993 2001

2.6. Judul Skripsi/

Tesis/Disertasi

Hubungan antara umur

kebuntingan dengan

gambaran eritrosit sapi

Frisian Holstein

Pengaruh penam-

bahan niasin pada

pakan terhadap

pertumbuhan ayam

broiler

Querschnittsstudie zu

Parasitosen bei

Zuchtsauen in

suedhessischen

Betrieben

2.7. Nama Pembim-

bing/ Promotor

Dr. drh. D. N. K. Laba

Mahaputra MSc

Prof. Dr. Purnomo Prof. Dr. Horz Zahner

III. PENGALAMAN PENELITIAN (bukan skripsi, tesis, maupun disertasi)

Urutkan judul penelitian yang pernah dilakukan(sebagai ketua) selama 5 tahun terakhir dimulai

dari penelitian yang paling diunggulkan menurut Saudara sampai penelitian yang tidak

diunggulkan.

No Tahun Judul Penelitian Penyandang

Dana

Jumlah

1 2008-

2010

Kajian epidemiologi neosporosis pada

sapi bali

Hibah

Kompetensi

300.000.000

2 2010 Epidemiology, diagnosis, and reducing

prevalence of zoonotic parasites in West

Papua

ACIAR 150.000.000

3 2005 Seroprevalensi Neospora caninum pada

red fox di Jerman

JLU Giessen,

Jerman

*-

5 2006 Infeksi buatan cacing pita Taenia

saginata pada sapi bali

University of

Asahikawa

Jepang

75.000.000

6 2007 The anthelmintic activity of papaya fruit

and betel nuts on gastrointestinal

nematodes in pig

ACIAR 80.000.000

7 2005 Seroprevalensi Trichinella pada red fox di

Jerman

JLU Giessen,

Jerman

50.000.000

8 2006 Seroprevalece of Toxoplasma and

Trichinella in Jayawijaya Papua Indonesia

ACIAR 75.000.000

9 2009 Seroprevalensi dan identifikasi molekuler CSAD 75.000.000

Toxoplasma gondii pada kambing

10 2005 Survey on endoparasite infections of pigs

in Wamena Papua

ACIAR 65.000.000

Keterangan:

*- : Pekerjaan dilakukan di Justus Liebig University Giessen, Jerman

CSAD (Center for Studies on Animal Diseases): Laboratorium kerjasama antara FKH

Universitas Udayana dengan Institute of Parasitology JLU Giessen, Jerman;

penggalian dananya diprakarsai oleh Prof. Dr. Christian Bauer (Visiting Professor di

FKH Unud).

IV. PENGALAMAN PENGABDIAN KEPADA MASYARAKAT

Urutkan judul pengabdian kepada masyarakat yang pernah dilakukan(sebagai ketua) selama 5

tahun terakhir dimulai dari yang paling diunggulkan menurut Saudara sampai pengabdian

kepada masyarakat yang tidak diunggulkan.

No Tahun Judul Kegiatan Pendanaan

Sumber Jumlah

1 2006 Pemanfaatan limbah biji pepaya sebagai

obat cacing pada peternakan ayam

petelur di desa Penebel Tabanan

DIKTI,

Penerapan

IPTEKS

5.000.000

2 2005 Strategi pemberantasan penyakit

parasiter dalam meningkatkan produksi

pada peternakan babi rakyat di desa

Sibetan Karangasem

DIPA Unud 4.000.000

3 2004 Peningkatan produktifitas ternak babi

melalui pemberantasan penyakit

parasiter di desa Bungaya Karangasem

DIPA Unud 4.000.000

4 2005 Strategi pemberantasan penyakit

cacingan pada anjing lokal di obyek

wisata Sanur dalam upaya pencegahan

penularannya yang bersifat zoonosis

DIPA Unud 4.000.000

5 2005 Pelayanan Kesehatan Ternak sapi di Bukit FKH Unud 5.000.000

Jimbaran Badung

6 2005 Peningkatan produktivitas ternak babi

dengan menekan kematian pra sapih di

desa Bebandem, Karangasem

DIPA Unud 4.000.000

V. PENGALAMAN PENULISAN ARTIKEL ILMIAH DALAM JURNAL (tidak termasuk makalah

seminar/proceedings, artikel di surat kabar)

Urutkan judul artikel ilmiah yang pernah diterbitkan selama 5 tahun terakhir dimulai dari artikel

yang paling diunggulkan menurut Saudara sampai penelitian yang tidak diunggulkan.

No. Tahun Judul Artikel Ilmiah Volume/

Nomor Nama Jurnal

1 2010 Seroprevalence of antibodies to

Neospora caninum in Bos Javanicus

(Bali cattle) from Indonesia*.

42:

95-98

Tropical Animal

Health Production

2 2007 Improving the efficiency of the

sweetpotato-pig production in

Jayawijaya Regency of Papua

Province: reducing parasite infection

in pigs.

23 (2):

5-9

Commonwealth

Veterinary Association

Journal

3 2009 Experimental Infection of Taenia

saginata eggs in Bali Cattle:

Distribution and Density of Cysticercus

bovis.

10 (4):

178-183

Jurnal Veteriner

4 2006 Small strongyle infection:

Consequences of larvacidal treatment

of horses with fenbendazole and

moxodectin.

139;

115-131

Veterinary

Parasitology,

5 2006 Prevalence and age-depending

occurrence of gastrointestinal

protozoa infections in suckling piglets.

119;

287-290.

Berl. Munch.

Tieraerztl.

Wochenschr.

6 2005 Seroprevalence of Toxoplasma gondii

in sows in Muensterland, Germany.

112;

201-240

Dtsch. Tieraerztl.

Wschr.

7 2004 Cross-sectional study in pig breeding

farm in Hesse, Germany: prevalence

126; Veterinary

of antibodies to Toxoplasma gondii,

Sarcocystis spp. and Neospora

caninum in sows and analyses of risk

factors.

271-286 Parasitology

8 2004 Prevalence, risk factors and economic

importance of infestations with

Sarcoptes scabiei and Haematopinus

suis in sows of pig breeding farms in

Hesse, Germany.

18;

361-367

Medical and

Veterinary

Entomology

9 2008 Molecular genotyping of Anisakis

Dujardin, 1845 (Nematoda:

Ascaridoidea: Anisakidae) larvae from

fish of Balinese and Javanese waters,

Indonesia.

45, 1:

3-12,

Helminthologia

10 2009 Serosurvey for infections with

Leptospira serovars in pigs from Bali,

Indonesia.

116,

389-391

Deutsche Tierärztliche

Wochenschrift

11 2006 Peningkatan produktivitas ternak babi

dengan menekan kematian prasapih

di desa Bebandem Karangasem.

5 (1).

48-49.

Udayana Mengabdi

*) Publikasi luaran dari hibah kompetensi 2008-2010

VI. PENGALAMAN PENULISAN BUKU

Urutkan judul buku yang pernah diterbitkan selama 5 tahun terakhir dimulai dari buku yang

paling diunggulkan menurut Saudara sampai buku yang tidak diunggulkan.

No. Tahun Judul Buku Jumlah

Halaman

Penerbit

1. 2002 Querschnittsstudie zu Parasitosen bei

Zuchtsauen in südhessischen

Betrieben. ISBN 3-935713-15-0

178 Fachverlag Koehler,

Giessen

2. 2008 Neosporosis pada sapi. ISBN 978-602-

8409-00-1

110 Pelawa Sari Denpasar.

VII. PENGALAMAN MERUMUSKAN KEBIJAKAN PUBLIK/REKAYASA SOSIAL LAINNYA

Urutkan judul rumusan kebijakan/rekayasa sosial lainnya yang pernah dbuat/ditemukan

selama 5 tahun terakhir.

No. Tahun Judul/Tema/Jenis Rekayasa Sosial Lainnya

yang Telah Diterapkan

Tempat

Penerapan

Respons

Masyarakat

1. 2009 Rancangan Peraturan Daerah Tentang

Rabies di Bali

Pemerintah

Provinsi Bali

Positif

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak-sesuaian

dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya.

Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam

pengajuan hibah Penelitian Kompetensi.

Denpasar, 12 Desember 2013

(Prof. Dr. Drh. I Made Damriyasa MS)

Anggota 2:

1. Nama Lengkap : Drh. Ida Bagus Made Oka Mkes

2. Tempat/Tanggal Lahir : Karangasem, 1960

3. Jenis Kelamin : Laki

4. Fakultas : Kedokteran Hewan

5. Pangkat/Golongan/NIP : Penata /IIIc/19601231 1989031014

6. Bidang Keahlian : Parasitologi

Tahun perolehan gelar akademik terakhir : 1996

7. Kedudukan dalam Tim : Anggota

8. Alamat Kantor : Kampus Bukit Jimbaran Bali

Telepon : 0361 701808

Fax. : 0361 701808

Alamat Rumah : Jalan Tegal Buah XIIB/4

Denpasar

PENGALAMAN PENELITIAN No.

JUDUL RISET Tahun

1. Prevalensi cacing nematoda pada ayam buras yang dipasarkan di Kotif

Denpasar

1988

2. Penggunaan getah pepaya sebagai obat cacing pada babi 1991

3. Survey cacing pada itik di Bali 1992

4. Prevalensi cacing Ascaris suum pada babi di Bali 1994

5. Efek Ivermectin terhadap embryonisasi Telur Ascaris suum 1998

7

8.

9

10.

11

Prevalensi infeksi Cacing nematoda pada Rusa yang ditangkarkan di Bali

Isolasi Toxoplasma gondii Asal Babi di Bali

Identitifikasi Cacing Trematoda usus pada Itik Bali Post Mortem

Isolasi dan Uji Patogenitas Toxoplasma gondii pada Ayam kampung di

Bali

Prevalensi Infeksi Strongyloides ransomi pada anak babi diare di Bali.

2004

2005

2006

2008

2009

Denpasar, 12 Desember 2013

Drh. I B Made Oka Mkes

NIP. 196012311989031014

Anggota 3:

A. Identitas Diri

1. Nama Lengkap (dengan gelar)

Drh. Kadek Karang Agustina,

MP L

2. Jabatan Fungsional Asisten ahli

3. Jabatan Struktural -

4. NIP/NIK/No.Identitas lainnya 198408042008121001

5. NIDN 0004088401

6. Tempat dan Tanggal Lahir Karangasem, 4 Agustus 1984

7. Alamat Rumah Br.Merta sari, Penatih Dangin Puri

8. Nomor Telepon/Faks /HP 081353306020

9. Alamat Kantor Kampus FKH-Jl PB Sudirman

10. Nomor Telepon/Faks 0361 223791

11. Alamat e-mail karang_dvm@yahoo.co.id

12. Lulusan yang telah dihasilkan S-1= 4 orang;

13. Mata Kuliah yg diampu 1. Kesmavet I dan II

2. Ilmu penyakit Zoonosis

3. Epidemiologi Veteriner

4. Dasar Komunikasi Veteriner

5. Etika Veteriner

B. Riwayat Pendidikan

Program S-1 S-2 S-3

Nama Perguruan Tinggi Univ. Udayana Univ. Udayana

Bidang Ilmu FKH Bioteknologi

Tahun Masuk 2002 2007

Tahun Lulus 2008 2010

Judul Skripsi/Thesis/Disertasi Identifikasi cacing

tipe strongyl pada

babi di Bali

Pemanfaatan lendir

kerang abalone

sebagai alternatif

obat luka bakar

Nama Pembimbing/Promotor Prof. Dr.drh. I

Made Damriyasa,

MS dan drh. I Made

Dwinata, M.Kes

Prof. Dr. I Made

Dira Suantara, MS

dan Prof. Dr.drh. Ni

Ketut Suwiti,

M.Kes

C. Pengalaman Penelitian dalam 5 Tahun Terakhir

(Bukan Skripsi, Tesis, maupun Disertasi)

No. Tahun Judul Penelitian Pendanaan

Sumber *) Jml (Juta Rp.)

1. 2011 Penerapan Kombinasi Metode

Pembelajaran Diskusi Kelompok dan

Student Centered Learning untuk

Meningkatkan Kompetensi Mahasiswa

Hibah PHKI Rp. 25.000.000;

2. 2012 Prevalensi Toxocara vitulorum Pada

Induk dan Anak Sapi Bali di Wilayah

Bali Timur

DIPA - Dosen

Muda

Rp. 7.500.000

3 2013 Kandungan Antioksidan, Gizi dan

Kualitas Telur Asin Dengan Media

Kulit Buah Manggis (Gracinia

Mangostana L)

DIPA - Dosen

Muda

Rp. 7.500.000;

D. Pengalaman Pengabdian kepada Masyarakat dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Pengabdian Kepada

Masyarakat

Pendanaan

Sumber *) Jml (Juta

Rp.)

1. 2010 Pelayanan kesehatan dan pemberian vaksin SE

pada ternak sapi di Desa Bona Kecamatan

Blahbatuh Gianyar

DIPA Unud 4.000.000

2. 2011 Sosialisasi penyakit rabies di Desa Buana Giri

Kecamatan Bebandem Karangasem

DIPA Unud 4.000.000

3. 2011 Pemberian vaksin SE dan pelayanan kesehatan

ternak sapi di Desa Keramas Kecamatan

Blahbatuh Gianyar

DIPA Unud 4.000.000

4. 2012 Sosialisasi penyakit Cacing Pita (Taenia

solium) yang menyerang manusia dan babi di

Desa Tianyar Barat, Karangasem

DIPA Unud 4.000.000

5 2013 Pelatihan dan sosialisasi penerapan animal

welfare dalam proses pemotongan hewan

(sapi) kepada para teknisi di rumah

pemotongan hewan Kabupaten Karangasem

PNBP Unud 4.000.000

E. Pengalaman Penulisan Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 Tahun Terakhir

No. Judul Artikel Ilmiah Volume/Nomor Nama Jurnal

1. Sosialisasi Penyakit Rabies pada Siswa SLTA

di Desa Bebandem Karangasem.

10 (2)/2013 Jurnal Udayana

Mengabdi

2. Prevalensi Toxocara vitulorum pada Induk dan

Anak Sapi Bali di Wilayah Bali Timur

5(1) 2013 Buletin Veteriner

3. Kualitas Susu Kambing Peranakan Etawah

Post-Thawing Ditinjau Dari Waktu Reduktase

dan Angka Katalase

2 (2)/ 2013 Indonesia Medicus

Veterinus

4. Sosialisasi penyakit cacing pita daging babi dan

beberasan pada masyarakat di Desa binaan

Unud, Desa Tianyar Barat, Karangasem

12 (1)/ 2013 Jurnal Udayana

Mengabdi

5. Identifikasi dan prevalensi cacing tipe strongyl

pada babi di Bali

5 (2) / 2013 Buletin Veteriner

F. Pengalaman Penyampaian Makalah Secara Oral pada Pertemuan/ Seminar

Ilmiah dalam 5 Tahun Terakhir

No. Nama Pertemuan ilmiah/ Seminar Judul Artikel Ilmiah Waktu dan

Tempat

1. Prosiding. Seminar Nasional Sapi Bali Studi Biologi

Perkembangan Metacestoda

Taenia saginata Pada Sapi

Bali

Denpasar -

2012

2. International Workshop of Improvement

and Sustainability of Sweetpotato - Pig

Production Systems To Support

Livelihoods in Highland Papua and West

Papua, Indonesia

Parasitiasis on Pig, Dog and

Human in Papua, Indonesia

Makassar -

2012

3. Proc. International Seminar on Timor

Leste’s Quarantine Regulations. August

26th

, 2010.

List of Animal Diseases and

Animal Diseases Requiring

Quarantine Provisions in

Timor Leste.

Timor Leste

– 2010

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak-sesuaian

dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya.

Denpasar, 12 Desember 2013

Drh. Kadek Karang Agustina, MP

NIP. 198408042008121001

KEMENTERIAN PENDIDIKAN NASIONAL

U N I V E R S I T A S U D A Y A N A

Kampus Bukit Jimbaran , Bali Telp.(0361) 701954; 701907; Fax. (0361) 701907

SURAT PERNYATAAN KETUA PENELITI

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Drh. I Made Dwinata, M.Kes

NIDN : 0006066216

Pangkat / Golongan : Pembina TK I /IVb

Jabatan Fungsional : Lektor Kepala

Dengan ini menyatakan bahwa proposal penelitian saya dengan judul:

Deteksi Antibodi dan Karakteristik genetik Toxoplasma gondii pada Itik Di Bali

yang diusulkan dalam skema Hibah Unggulan Perguruan Tinggi untuk tahun anggaran 2013

bersifat original dan belum pernah dibiayai oleh lembaga / sumber dana lain.

Bilamana di kemudian hari ditemukan ketidaksesuaian dengan pernyataan ini, maka saya

bersedia dituntut dan diproses sesuai dengan ketentuan yang berlaku dan mengembalikan

seluruh biaya penelitian yang sudah diterima ke kas negara.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan sesungguhnya dan dengan sebenar-benarnya.

Denpasar, 12 Desember 2013

Mengetahui, Yang menyatakan,

Ketua Lembaga Penelitian Unud

Prof. Dr. Ir. I Ketut Satriawan MT Drh. I Made Dwinata, M.Kes

NIP: 19640717 198903 1 001 NIP. 196206061989031003