LAMPIRAN

63

Lampiran 1. Pembuatan Media Pertumbuhan

a. Media f/2-Si Guillard

Untuk membuat larutan f/2-Si Guillard, sebelumnya terlebih dahulu disiapkan

larutan stok dengan komposisi seperti dalam Tabel 2. Untuk pembuatan 1 L

media f/2-Si Guillard, masukkan 950 mL air laut steril ke dalam labu

Erlenmeyer 1000 mL, lalu tambahkan 1 mL larutan stok NaNO3, 1 mL larutan

stok Na2HPO4.7H2O, 0,5 mL vitamin, dan 1 mL trace element. Campuran

larutan diaduk, kemudian tambahkan air laut steril hingga volume larutan total

menjadi 1000 mL.

Tabel 2. Komposisi larutan stok media f/2-Si

Komposisi Larutan Stok

Na2SiO3.9H20 3 g /100 mL

NaNO3 7,5 g/100 mL

NaH2PO4.7H2O 0,5 g/100 mL

Vitamin* 100 mL

Trace element** 100 mL

64

Keterangan

*) Pembuatan Vitamin

Untuk membuat 100 mL larutan vitamin, masing-masing larutan stok dari

biotin dan sianokobalamin sebanyak 0,1 mL ditambahkan pada labu

erlenmeyer yang berisi 60 mL akuades. Kemudian 20 mg thiamin-HCl

ditambahkan, diaduk hingga seluruh thiamin larut, setelah itu ditambahkan

akuades hingga volumenya mencapai 100 mL.

Tabel 3. Komposisi larutan stok untuk vitamin

Komposisi vitamin Larutan Stok

Biotin (vit H) 0,1 g/100 mL

Cyanokobalamin (B12) 0,1 g/100 mL

**) Pembuatan Trace Element

Untuk pembuatan 100 mL unsur kelumit, sebanyak 60 mL akuades dalam labu

ukur ditambahkan Na2EDTA sebanyak 0,315 g, dan FeCl3.6H2O sebanyak

0,436 g. Setelah padatan larut ditambahkan larutan stok MnCl2.4H2O,

CuSO4.5H2O, ZnSO4.7H2O, CoCl2.6H2O, NaMoO4.2H2O masing-masing

sebanyak 0,1 mL, selanjutnya ditambahkan akuades hingga volum totalnya

menjadi 100 mL.

65

Tabel 4. Komposisi trace element

Komposisi Larutan Stok

Na2-EDTA -

FeCl3.6H2O -

MnCl2.4H2O 18 g/ 100 mL

CuSO4.5H2O 0,98 g/100 mL

ZnSO4.7H2O 2,2 g/100 mL

CoCl2.6H2O 0,1 g/100 mL

NaMoO4.2H20 0,63 g/100 mL

b. Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)

Sebanyak 2 g NA di masukkan dalam Labu Erlenmeyer 250 mL,

dilarutkan dalam akuades hingga volume 100 mL. Larutan media NA

kemudian disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121 0C selama

15 menit. Dalam keadaan hangat (50-60 0C), tuangkan sekitar 20 mL

media steril tersebut dalam cawan petri steril lalu biarkan dingin dan

memadat. Media NA siap digunakan untuk peremajaan bakteri dengan

menggunakan metode penggoresan menggunakan jarum ose.

66

Lampiran 2. Pembuatan Pereaksi Visualisasi Uji KLT

a. Pereaksi Ninhidrin

Sebanyak 0.3 g ninhidrin dilarutkan dalam 100 mL n-butanol dan ditambahkan 3

mL asam asetat glasial.

b. Pereaksi Serium Sulfat

Larutan terdiri dari serium (IV) sulfat 10% dan asam sulfat 15% dalam pelarut

akuades. Setelah disemprotkan dengan pereaksi, plat dipanaskan pada suhu 120o C

selama beberapa menit sampai bercak tampak jelas.

c. Pereaksi Dragendorff

Komposisi pereaksi dragendorff terdiri dari larutan a (1,7 gram bismut (III) nitrat

dan 20 gram asam tartarat dilarutkan dalam 80 ml akuades) dan larutan b (16

gram KI dilarukan dalam 40 ml akuades). Larutan a dicampur dengan larutan b

(1:1) sebagai larutan stok. Larutan a dan b stabil untuk beberapa bulan jika

disimpan dalam lemari pendingin.

Larutan untuk visualisasi KLT : 10 gram asam tartarat dilarutkan dalam 50 ml

akuades kemudian ditambah dengan 10 ml larutan stok.

67

Lampiran 3. Spektrum NMR

a. Spektrum 1H NMR F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat)

68

b. Spektrum 1H NMR Asam Cis-eikos-9-enoat Prediksi ChemBio DrawUltra 11.0

69

c. Spektrum 13C NMR F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat)

70

d. Spektrum 13C NMR Asam Cis-eikos-9-enoat Prediksi ChemBio DrawUltra 11.0

71

e. Spektrum 1H-1H COSY F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat)

1H-1H COSYH3C OH

O1

2

3

4

5910

811

712

613

20

19

18

17

IIIIII

72

f. Spektrum HMBC F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat)

HMBCH3C OH

O1

2

3

4

5910

811

712

613

20

19

18

17

IIIIII

73

g. Konstanta Kopling Pada Ikatan Rangkap F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat)

74

h. Perbandingan 1H NMR Asam Cis-eikos-9-enoat (C20H38O2) dan Asam

Linoleat (C18H34O2)

75

Lampiran 4. Perbandingan Spektrum FTIR Asam Linoleat dan Asam Cis-eikos-9-enoat

Keterangan

Lampiran 5. Diagram Alir Prosedur Penelitian

Biomassa Oscillatoria sp.

- diekstraksi dengan DCM- MeOH (1-1)- dipartisi dengan air- dipekatkan

Fase air Fase organik

- diuji bioaktivitas terhadap E. coli resisten

- dipekatkan

Ekstrak pekat

Ekstrak bioaktif

- difraksinasi menggunakan MPLC- tiap fraski diuji bioaktivitasnya terhadap E. coli resisten

Fraksi bioaktif

- dilakukan pemurnian lebih lanjut menggunakankromatografi kolom dan rekristalisasi

Senyawa target

- Dikarakterisasi menggunakan spektroskopiFTIR, 1H NMR, 13C NMR, dan 2D NMR

Sruktur senyawa