karakterisasi dan uji aktivitas antibakteri dari...
TRANSCRIPT
KARAKTERISASI DAN UJI AKTIVITAS
ANTIBAKTERI DARI FUNGI ENDOFIT DAUN
TANAMAN MAJA (Crescentia cujete L.) TERHADAP
BAKTERI Escherichia coli
DEDDY SETYAWAN
2443013260
PROGRAM STUDI S1
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA SURABAYA
2019
KARAKTERISASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
DARI FUNGI ENDOFIT DAUN TANAMAN MAJA
(Crescentia cujete L.) TERHADAP BAKTERI Escherichia coli
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi sebagian persyaratan
Memperoleh gelar Sarjana Farmasi Program Studi Strata 1
di Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya
OLEH:
DEDDY SETYAWAN
2443013260
Telah disetujui pada tanggal 23 Mei 2019 dan dinyatakan LULUS
Pembimbing,
Lisa Soegianto, S.Si., M.Sc., Apt.
NIK. 241.07.0609
Mengetahui,
Ketua Penguji
(Dr. Lanny Hartanti, S.Si., M.Si)
NIK. 241.00.0437
LEMBAR PERSETUJUAN
PUBLIKASI KARYA ILMIAH
Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi/karya
ilmiah saya, dengan judul : Karakterisasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri
Dari Fungi Endofit Daun Tanaman Maja (Crescentia Cujete L.)
Terhadap Bakteri Escherichia coli untuk dipublikasikan atau ditampilkan
di internet atau media lain yaitu Digital Library Perpustakaan Unika Widya
Mandala Surabaya untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan
Undang-Undang Hak Cipta.
Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya buat
dengan sebenarnya.
Surabaya, 23 Mei 2019
Deddy Setyawan
2443013260
LEMBAR PERNYATAAN KARYA ILMIAH NON PLAGIAT
Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil tugas akhir ini adalah
benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri.
Apabila di kemudian hari diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil
plagiarisme, maka saya bersedia menerima sangsi berupa pembatalan
kelulusan dan atau pencabutan gelar yang saya peroleh.
Surabaya, 23 Mei 2019
Deddy Setyawan
2443013260
i
ABSTRAK
KARAKTERISASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI
FUNGI ENDOFIT DAUN TANAMAN MAJA (Crescentia cujete L.)
TERHADAP BAKTERI Escherichia coli
DEDDY SETYAWAN
2443013260
Escherichia coli merupakan flora normal tubuh manusia tetapi dapat
menyebabkan penyakit serta bersifat Patogen. Patogenitas bakteri dapat
dihambat dengan senyawa antimikroba. Salah satu cara untuk mendapatkan
senyawa antimikroba adalah melalui fungi endofit. Tujuan dari penelitian
ini adalah untuk mengisolasi, menguji aktivitas antibakteri dan
mengkarakterisasi fungi endofit yang diperoleh dari daun tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) yang berpotensi sebagai antibakteri. Permukaan daun
tanaman Maja disterilisasi dengan cara direndam dalam alkohol 70%
selama 2 menit, natrium hipoklorit 5,3% selama 5 menit, alkohol 70%
selama 1 menit, dibilas menggunakan akuades steril dan dikeringkan
menggunakan tisu steril. Daun Maja yang telah disterilisasi ditanam pada
media Malt Extract Agar (MEA). Diperoleh 7 fungi endofit yang diisolasi
dari daun tanaman Maja. Ketujuh isolat fungi endofit tersebut diuji aktivitas
antibakterinya terhadap bakteri Escherichia coli dengan metode inokulasi
langsung menggunakan media Plate Count Agar. Hasil uji terhadap ketujuh
fungi endofit tersebut tidak menunjukkan adanya aktivitas antibakteri
terhadap Eschericia coli kemudian dilakukan pengamatan makroskopis,
mikroskopis serta uji biokimia. Fungi dengan kode EM 1, EM 2, EM 3, EM
6 dan EM 7 diduga kelas Deuteromycetes. EM 4 diduga kelas
Mastigomycetes dan EM 5 diduga kelas Zygomycetes.
Kata kunci : fungi endofit, antibakteri, Crescentia cujete L., Escherichia
coli
ii
ABSTRACT
CHARACTERIZATION AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY
ASSAY OF ENDOPHYTIC FUNGI FROM MAJA
(Crescentia cujete L.) LEAVES AGAINST Escherichia coli BACTERIA
DEDDY SETYAWAN
2443013260
Escherichia coli is the normal flora of the human body but can cause
disease and is pathogenic. The pathogenicity of bacteria can be inhibited by
antimicrobial compounds. One way to obtain antimicrobial compounds is
through endophytic fungi. The aim of this study was to isolate, test the
antibacterial activity and characterize endophytic fungi obtained from the
leaves of the Maja plant (Crescentia cujete L.) which has the potential as an
antibacterial. The surface of the leaves of the Maja plant was sterilized by
soaking in 70% alcohol for 2 minutes, 5.3% sodium hypochlorite for 5
minutes, 70% alcohol for 1 minute, rinsing with sterile distilled water and
dried using sterile tissue. Sterilized Maja leaves were planted in the Malt
Extract Agar (MEA). 7 endophytic fungi were isolated from the leaves of
the Maja plant. The seven endophytic fungi isolates were tested for their
antibacterial activity against the bacterium Escherichia coli using the
inoculation method directly using Plate Count Agar. The test results on the
seven endophytic fungi did not show any antibacterial activity against
Escherichia coli, then macroscopic, microscopic and biochemical tests were
carried out. Fungi with the EM 1, EM 2, EM 3, EM 6 and EM 7 codes are
thought to be the Deuteromycetes class. EM 4 is thought to be the
Mastigomycetes class and EM 5 is thought to be the Zygomycetes class.
Keywords : endophytic fungi, antibacterial, Crescentia cujete L.,
Escherichia coli
iii
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang senantiasa menyertai,
melindungi dan membimbing dalam segala usaha yang telah dilakukan
sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Skripsi yang berjudul
“Karakterisasi dan Uji Aktivitas Antibakteri dari Fungi Endofit Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) Terhadap Bakteri Escherichia
coli” ini disusun dan diajukan untuk memenuhi persyaratan guna
memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Katolik
Widya Mandala Surabaya.
Terselesaikannya skripsi tidak terlepas dari dukungan, bantuan dan
bimbingan baik secara langsung dan tidak langsung dari berbagai pihak.
Dalam kesempatan ini dengan segala ketulusan dan kerendahan hati,
disampaikan ucapan terima kasih kepada :
1. Kedua orang tua saya Bapak Darmono, Ibu Sumarti, dan kakak saya
Nofi Andika serta keluarga besar saya atas doa, dukungan,
kepercayaan, dukungan moril dan materiil yang selalu diberikan
untuk keberhasilan saya.
2. Lisa Soegianto, S.Si., M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing yang
telah memberikan masukkan, bimbingan, arahan, waktu dan tenaga
dalam menyelesaikan permasalahan selama proses pengerjaan
naskah skripsi, sehingga skripsi ini dapat diselesaikan.
3. Dr. Lanny Hartanti, S.Si., M.Si selaku ketua penguji. Terima kasih
atas nasehat dan saran yang membuat naskah skripsi ini menjadi
semakin lebih baik sehingga penelitian ini dapat berjalan lancar.
4. Silvia Sutandhio, dr., M.Ked.Klin., Sp.MK selaku dosen penguji 2.
Terima kasih atas nasehat dan saran untuk perbaikan usulan skripsi
sehingga penelitian ini dapat berjalan lancar.
iv
5. Sumi Wijaya S. Si., Ph.D., Apt. selaku penasihat akademik yang
telah memberikan waktu, tenaga dan bantuan serta jalan keluar
terhadap segala macam persoalan yang saya hadapi selama proses
perkuliahan.
6. Drs. Kuncoro Foe, Ph.D., G.Dip.Sc., Apt., selaku Rektor Universitas
Katolik Widya Mandala Surabaya. Terima kasih atas sarana
prasarana yang telah diberikan untuk menempuh pendidikan di
Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.
7. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala
Surabaya, Sumi Wijaya S. Si., Ph.D., Apt. yang telah memberikan
kesempatan untuk menulis skripsi ini.
8. Kepala program studi S1 Fakultas Farmasi Universitas Katolik
Widya Mandala Surabaya, Dr. Lanny Hartanti, S.Si., M.Si. yang
telah memberikan kesempatan untuk menulis skripsi ini.
9. Para dosen dan seluruh staff Fakultas Farmasi Universitas Katolik
Widya Mandala Surabaya yang telah memberikan pengajaran dan
ilmu yang berharga yang membantu dalam penelitian.
10. Pak Antok selaku Laboran Laboratorium Mikrobiologi Farmasi yang
telah banyak membantu selama pengerjaan skripsi ini sehingga dapat
terselesaikan dengan baik.
11. Pak Ary selaku Laboran Laboratorium Botani Farmasi yang telah
membantu dalam menyelesaikan pengamatan mikroskopis selama
proses pengerjan skripsi.
12. Suwandi Wonowijaya dan Billy Surya Saputra sebagai teman
seperjuangan yang selalu memberikan dukungan, bantuan, waktu
dan tenaga dalam penelitian ini.
13. Riris Ratihari, Evita Yuniarti, dan Hamalatul Qur’ani atas bantuan
peminjaman alat-alat selama proses dalam pengerjaan skripsi.
v
14. Teman-teman seperjuangan mikro Fransisca Risza Regar, Sevy
Sanjaya, Embun Larasati, Wian May, Vanny Verawati, Clara Rosa
Melinda, Birgitta Servia, Devi Julianita, Andini Ragil, dan Ainur
Rochma atas dukungan dan bantuannya dalam menyelesaikan
penelitian ini.
15. Dimas Aditya Suhendar, Ryo Lamro, Alde Baran, dan Hadianto Nur
Satya, yang selalu membantu, mendukung dan selalu memberikan
hiburan sehingga peneliti bersemangat dalam menyelesaikan
penelitian ini.
16. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu yang
telah memberikan bantuan dan dukungan selama proses penyusunan
naskah skripsi ini baik secara langsung maupun tidak langsung.
Mengingat bahwa skripsi ini merupakan pengalaman belajar dalam
merencanakan, melaksanakan, dan menyusun suatu karya ilmiah dengan
keterbatasan pengalaman, pengetahuan maupun pustaka yang ditinjau, maka
penulis menyadari kekurangan dalam penulisan naskah skripsi ini masih
jauh dari kata sempurna, maka penulis mengharapkan kritik dan saran untuk
perbaikan skripsi ini dan semoga penelitian ini dapat memberikan manfaat
bagi masyarakat sehingga dapat dikembangkan menjadi lebih baik lagi.
Surabaya, 23 Mei 2019
Penulis
vi
DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK................................................................................................... ..i
ABSTRACT ............................................................................................... …ii
KATA PENGANTAR .............................................................................. ...iii
DAFTAR ISI ............................................................................................ ...vi
DAFTAR TABEL .................................................................................... ...ix
DAFTAR GAMBAR ................................................................................ ....x
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ ..xii
BAB I PENDAHULUAN ......................................................................... …1
1.1 Latar Belakang ......................................................................... …1
1.2. Rumusan Masalah .................................................................... …4
1.3. Tujuan Penelitian ..................................................................... …4
1.4. Hipotesis Penelitian ................................................................. …5
1.5 Manfaat Penelitian ................................................................... …5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. …6
2.1 Tinjauan tentang Mikroba Endofit ........................................... …6
2.1.1 Kapang Endofit ............................................................. …7
2.2 Tinjauan tentang Isolasi Mikroba Endofit ............................... …8
2.3 Tinjauan tentang Tanaman Maja ............................................. …9
2.3.1 Klasifikasi Tanaman Maja ............................................ ..10
2.3.2 Pohon Tanaman Maja ................................................... ..10
2.4 Tinjauan tentang Senyawa Antibakteri .................................... ..11
2.5 Tinjauan tentang Uji Aktivitas Antibakteri .............................. ..13
2.5.1 Metode Dilusi ............................................................... ..13
2.5.2 Metode Difusi ............................................................... ..13
vii
Halaman
2.6 Tinjauan tentang Escherichia coli ........................................... ..14
2.6.1 Klasifikasi Escherichia coli .......................................... ..14
2.6.2 Karakteristik Escherichia coli ...................................... ..14
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ................................................. ..16
3.1 Jenis Penelitian ........................................................................ ..16
3.2 Bahan dan Alat Penelitian ........................................................ ..16
3.2.1 Bahan Penelitian ........................................................... ..16
3.2.2 Alat Penelitian .............................................................. ..17
3.3 Metode Penelitian .................................................................... ..17
3.4 Variabel Penelitian ................................................................... ..18
3.4.1 Tahap Isolasi ................................................................. ..18
3.4.2 Tahap Pengujian Aktivitas Antibakteri......................... ..19
3.5 Tahapan Penelitian ................................................................... ..19
3.5.1 Pengambilan Sampel Daun Tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) ................................................... ..19
3.5.2 Determinasi, Pengamatan Mikroskopis dan
Makroskopis Daun Tanaman Maja (Crescentia
cujete L.) ....................................................................... ..19
3.5.3 Isolasi Fungi Endofit dari Daun Tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) ................................................... ..20
3.5.4 Pemurnian Kultur Fungi Endofit dari Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) .......................... ..20
3.5.5 Penyiapan Bakteri Uji ................................................... ..21
3.5.6 Pengujian Aktivitas Antibakteri Fungi Endofit
terhadap Escherichia coli ............................................. ..21
3.5.7 Karakterisasi Fungi Endofit .......................................... ..21
3.6 Hasil Pengamatan .................................................................... ..23
3.7 Skema Kerja............................................................................. ..24
viii
Halaman
3.7.1 Sterilisasi Daun Tanaman Maja (Crescentia
cujete L.) ....................................................................... ..25
3.7.2 Pengujian Aktivitas Antibakteri ................................... ..26
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .......................... ..27
4.1 Hasil Penelitian ........................................................................ ..27
4.1.1 Hasil Determinasi Daun Tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) ................................................... ..27
4.1.2 Hasil Makroskopis dan Mikroskopis Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) .......................... ..27
4.1.3 Hasil Isolasi Fungi Endofit dari Daun Tanaman
Maja (Crescentia cujete L.) .......................................... ..29
4.1.4 Hasil Pemurnian Fungi Endofit dari Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) .......................... ..30
4.1.5 Hasil Persiapan Bakteri Uji .......................................... ..32
4.1.6 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Daun Tanaman
Maja (Crescentia cujete L.) .......................................... ..33
4.1.7 Hasil Karakterisasi Fungi Endofit ................................ ..34
4.2 Pembahasan ............................................................................. ..39
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ......................................................... ..45
5.1 Kesimpulan .............................................................................. ..45
5.2 Saran ........................................................................................ ..45
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... ..46
LAMPIRAN ............................................................................................ ..52
ix
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil Pengamatan makroskopis Daun Tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) .................................................................... ..28
4.2 Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis
Escherichia coli ATCC 8739 ........................................................ ..32
4.3 Hasil pengukuran uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri
Escherichia coli ATCC 8739 ......................................................... ..34
4.4 Hasil pengamatan makroskopis fungi endofit dari Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) ........................................... ..34
4.5 Hasil pengamatan mikroskopis fungi endofit Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) dengan perbesaran
10x40 ............................................................................................. ..35
4.6 Hasil pengamatan uji biokimia fungi endofit dari Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) ........................................... ..39
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Pohon Maja.................................................................................... ..10
2.2 Escherichia coli ............................................................................. ..14
3.1 Skema kerja penelitian .................................................................. ..24
3.2 Skema sterilisasi dan inokulasi daun tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) .................................................................... ..25
3.3 Skema Uji aktivitas antibakteri ...................................................... ..26
4.1 Pengamatan Daun Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) ............. ..27
4.2 Daun Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) dari 3 pohon
yang berbeda.................................................................................. ..28
4.3 Berkas pembuluh penampang melintang tulang daun pada
Daun Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) pada
perbesaran 42,3 x 10 dengan media fluorogusin HCl. ................... ..28
4.4 Stomata tipe Anomositik penampang membujur Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) dengan perbesaran
42,3 x 40 ........................................................................................ ..29
4.5 Kristal Ca-Oksalat bentuk prisma penampang membujur
permukaan atas Daun Tanaman Maja (Crescentia cujete
L.) pada media campuran kloralhidrat dan flourogusin HCl
dengan perbesaran 42,3 x 40. ........................................................ ..29
4.6 Posisi penanaman Daun Tanaman Maja (Crescentia cujete
L.) pada media Malt Extract Agar ................................................. ..30
4.7 Pengamatan pertumbuhan fungi endofit dari Daun
Tanaman Maja (Crescentia cujete L.) setelah inkubasi pada
suhu ruang selama 7 hari pada media Malt Extract Agar .............. ..30
4.8 Kultur fungi endofit murni dari daun tanaman Maja
(Crescentia cujete L.) pada usia 7 hari pada media
Sabouraud Dextrose Agar. ............................................................ ..31
4.9 Pengamatan makroskopis Eschericia coli ATCC 8739
pada media Mueller Hinton Agar dan Pengecatan Gram
xi
Halaman
bakteri Eschericia coli ATCC 8739 pada perbesaran
10x100 ........................................................................................... ..32
4.10 Hasil pengamatan uji aktivitas antibakteri fungi endofit
dari daun tanaman Maja (Crescentia cujete L.) terhadap
bakteri Eschericia coli ATCC 8739 setelah inkubasi pada
suhu ruang 24 jam pada media Plate Count Agar. ........................ ..33
4.11 Hasil uji hidrolisa amilum pada media Starch Agar ...................... ..37
4.12 Hasil uji hidrolisa kasein pada media Skim Milk Agar .................. ..37
4.13 Hasil uji hidrolisa lemak pada media Neutral Red Agar ............... ..38
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
A. Surat Determinasi Daun Tanaman Maja (Crescentia cujete
L.) .................................................................................................. ..52
B. Sertifikat Analisis Escherichia coli ............................................... ..53
C. Kontrol Sterilisasi Permukaan Daun Tanaman Maja .................... ..55