isolasi, enumerasi dan purifikasi revisi

7/25/2019 Isolasi, Enumerasi Dan Purifikasi Revisi

1/59

By:

Manzil Wahyu Khoironi 13030204006

ADP Inas R 13030204070

Mirrah Kurnia Lestari 13030204071

Emilia Elis Hartanti 13030204072

Indrie Dwi Andarwati 13030204073

Fikky Dian Roqobih 13030204075


2/59

ISOLASI DAN ENUMERASI


3/59

a. Latar belakang

Populasi mikrobia di alam sekitar sangat besar dan sangat komplek. Beratus-

beratus jenis mikrobia hidup di lingkungan sekitar. Mikrobia dapat hidup di luar

dan di dalam tubuh makhluk hidup. Kehadiran mikoba tersebut dapatmemberikan keuntungan maupun kerugian bagi makhluk hidup khususnya

manusia. Mikrobia diluar tubuh manusia dapat masuk ke dalam tubuh melalui

berbagai cara, salah satunya melalui makanan yang dikonsumsi. Mikrobia ini akan

mendiami saluran pencenaan dan dapat mengakibatkan berbagai masalah

kesehatan.


4/59

Beratus-beratus spesies berbagai mikrobia biasanya menghuni bermacam-macam

bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan dan kulit. Sebagai contoh,

sekali bersin dapat menyebarkan beribu-ribu mikroorganisme (Plezar, 1986).

untuk dapat membedakan mikrobia berdasarkan karakteristik optik, karakteristik

permukaan, pigmentasi, ukuran, bentuk, elevasi dan bentuk tepian serta jumlah

mikrobia yang terdapat dalam sampel saus. Maka di lakukanlah penelitian isolasi

dan enumerasi terhadap sampel saus.


5/59

RUMUS N M S L H

Bagaimana prosedur isolasi mikroorganisme dari lingkungan?

Bagaimana karakteristik morfologi koloni mikroorganisme?

Bagaimana menentukan jumlah mikroorganisme dalam suatu

sampel?

TUJU N

Mengetahui prosedur isolasi mikroorganisme dari lingkungan.

Mengetahui karakteristik morfologi koloni mikroorganisme.

Melatih mahasiswa untuk menentukan jumlah mikroorganisme

dalam suatu sampel.


6/59

MANFAAT

Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi kami secara teoritis maupun

secara praktis. Secara teoritis, manfaat pelaksanaan praktikum isolasi dan

enumerasi ini adalah untuk menambah wawasan tentang karakterisktik

morfologi berbagai koloni mikroorganisme dan cara menentukan jumlah

mikroorganisme dalam suatu sampel. Selain itu penelitian ini juga diharapkan

dapat memberi informasi kepada masyarakat tentang mikrobia yang terdapat

pada sampel saus, agar masyarakat dapat lebih berhati-hati dalam memilih

bahan makanan yang akan dikonsumsi.


7/59

Teknik penanaman (inokulasi) merupakan suatu pekerjaan

memindahkan bakteri dari medium lama ke medium yang baru dengan

tingkat ketelitian yang sangat tinggi, dengan demikian akan diperoleh biakan

mikroorganisme yang dapat digunakan untuk pembelajaran mikrobiologi.

Identifikasi biakan mikroorganisme sering kali memerlukan penanam biakan

segar tanpa terjadi pencemaran.pemindahan mikroorganisme ini ilakukan

dengan teknik aseptik untuk mempertahankan kemurnian

biakan selama peminahan berulang kali. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan

dalam biakan cair atau padat,(Lay:1988)


8/59

Enumerasi adalah teknik perhitungan jumlah mikroba dalam suatu media

tanpa mengidentifikasikan jenis mikroba (bakteri, jamur, yeast), yang

bertujuan untuk menentukan jumlah sel dari suatu kultur bakteri secara

kuantitatif (Rosalia, 2010).


9/59

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada hari Kamis, 12 Maret 2015 pukul 13.00 sampai

selesai.Bertempat di Laboratorium Mikrobiologi C8 Universitas Negeri Surabaya.

Bahan dan Alat Penelitian

Alat- alat yang digunakan adalah tabung reaksi, rak tabung reaksi,suntikan, cawanpetri bersi ,tissue,bunsen. Sedangkan bahan yang digunakan adalah media tauge

agar,sampel saus.


10/59

Metode

Penanaman sampel mikroorganisme dari sampel uji

Mengambil 1 mL sampel saus dan memasukkan kedalam tabung reaksi yang berisi 9 mL akuades

steril,kemudian di vortex (diberi label suspense 10-1)langkah ini dilakukan secara aseptis.. Mengambil 1 mL pada suspense 10-1dimasukkan kedalam tabung reaksi berisi 9 mL akuades steril

kemudian di vortex (diberi label suspense 10-2)langkah ini dilakukan secara aseptis

Mengulangi langkah di atas hingga 5 kali dengan label 10-310-410-510-610-1langkah ini dilakukan

secara aseptis.

Memanaskan media tauge agar,saat suhu mencapai 450C,media di masukkan kedalam cawan petri

steril dan kemudian memasukkan suspensi 10-6dalam cawan petri 1, dan memasukkan suspensi 10-7pada cawan petri dua. Menghomogenuskan cawan petri.

Membiarkan media hingga memadat,setelah memadat media di bungkus kertas dan di masukkan

dalm inkubasi dengan suhu 28-300C selama 24 jam.

Enumerasi jumlah mikroorganisme yang terdapat pada suatu sampel

Mengambil cawan petri dari inkubasi Menghitung jumlah koloni pada tiap cawan petri

Menuliskan jumlah koloni dalam laporan sementara.


11/59


12/59


13/59


14/59


15/59


16/59


17/59


18/59


19/59


20/59

Proses isolasi ini digunakan untuk mempelajari identifikasi mikrobia, uji

morfologi, fisiologi, dan serologi. Sedangkan pengujian sifat-sifat tersebut di alamterbuka sangat mustahil untuk dilakukan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah

memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran

bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya

dalam media padat, sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada

tempatnya (Pelczar, 1986).

Prinsip kerja isolasi bakteri cukup sederhana yakni dengan menginokulasikan

sejumlah kecil bakteri pada suatu medium tertentu yang dapat menyusung

kehidupan bakteria. Sejumlah kecil bakteri ini didapat dari bermacam-macam

tempat tergantung dari tujuan inokulasi. Dalam kajian mikrobiologi yang

berhubungan dengan sumber bakteri adalah mikrobia tanah, air, makanan dan

udara (Talaro, 1999).


21/59

Pada praktikum isolasi dan enumerasi ini menggunakan sampel saus. Isolasi

bakteri pada sampel saus digunakan untuk mengetahui jenis bakteri apa saja

yang ada didalam saus yang kami uji. Sampel saus diambil sebanyak 1 ml dankemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml akuades steril.

Suspensi yang didapatkan merupakan pengenceran 10-1. Kemudian ambil

suspensi pengenceran 10-1 dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi 9 ml

akuades steril. Suspensi tersebut merupakan pengenceran 10-2

dan demikianseterusnya hingga mendapatkan suspensi pengenceran 10-7. Suspensi dengan

pengenceran 10-6dan 10-7yang kemudian ditanam pada media agar padat di

cawan petri steril secara terpisah dengan menggunakan metode duplo. Setelah

dilakukan penanaman sampel bakteri pada media agar yang ada di cawan petrikemudian di inkubasi pada suhu antara 28-38o Cselama 24 jam.


22/59

Pada saat dikeluarkan dari incubator, koloni bakteri sudah mulai terlihat. Koloni bakteri

yang didapatkan kemudian dikarakterisasi dan dihitung. Pada hasil karakterisasi

didapatkan hasil bahwa pada suspensi 10-6 dan 10-7 pada 4 cawan ditemukan 10 jenis

koloni bakteri dengan karakteristik optik yang berbeda-beda Setelah dilakukan

karakterisasi lalu proses selanjutnya adalah enumerasi.

Enumerasi dapat dilakukan dengan berbagai cara, untuk kali ini kami melakukan

enumerasi dengan cara hitungan cawan. Cara ini dilakukan dengan pengenceran sampel

yang berisi mikroorganisme hingga konsentrasi tertentu, kemudian diambil volume

tertentu dari setiap seri pengenceran tertentu, dalam praktikum kami yang digunakan

adalah sampel pengenceran 10-6dan 10-7untuk ditanam pada media pertumbuhan yang

telah dibuat sebelumnya. Setelah diinkubasi, jumlah koloni yang tumbuh pada cawan

petri tersebut diamati, kemudian dilakukan perhitungan dengan menggunakan koloni

counter. Syarat statistik yang harus dipenuhi ketika melakukan penghitungan haruslah

cawan yang mengandung 30 sampai 300 koloni.


23/59

Jumlah mikroorganisme dalam setiap cawan bervariasi, hal ini dipengaruhi

komposisi bahan dan faktor lingkungan. Pada sampel uji saus pertama setelah

melakukan standart plate count menghasilkan


24/59

Dari hasil enumerasi dengan menggunakan standart plate count maka yang paling

tinggi pada sampel uji saus yang keempat, dan yang terendah pada sampel uji saus

pertama.Dalam SPC menurut aturan-aturan antara lain untuk memilih cawan petri pada

masing-masing pengenceran yang menunjukkan pertumbuhan koloni antara 30-

300 koloni. Standart maksimum saus yang digunakan adalah untuk jenis mikroba

ALT (30OC , 72 jam) 1x106koloni / mL , APM koliform 10/mL, Bacillus cereus

1x103koloni / mL dan kapang ,


25/59

Kesimpulan

Prosedur dalam melakukan isolasi adalah mencairkan sampel hingga 7 kali

pengenceran,menyiapkan media tauge agar,memasukkan sampel dan dihomogenasikan

kemudian di diamkan hingga memadat lalu meletakkan dalam inkubasi

Bakteri yang di temukan dalam percobaan kali ini memiliki ciri jika dilihat dari

karektiristik optiknya ada yang translucent,opaque dan transparan, ciri permukaan

semuanya halus dan mengkilap, ciri pigmentasi ada yang memiliki pigmen (putih ),ada

yang tidak memiliki pigmen,ukuran diameternya antara 0,1 hingga 0,3 cm,bentuknya ada

yang spindle,circular dan irregular,ciri elevasi ada yang flat,pulvinate,dan convex

sedangkan bentuk tepiannya ada yang entire dan undulate.


26/59

PURIFIK SI


27/59

1 Latar belakang

Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimana

memperoleh suatu biakan yang murni, tetapi juga bagaimana memelihara serta

mencegah pencemarannya. Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobanya

berasal dari pembelahan satu sel tunggal (Pelczer, 1986).

Pemurnian merupakan suatu pekerjaan memindahkan bakteri dari

medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang

sangat tinggi. Dengan demikian, akan diperoleh biakan mikroorganisme yang

dapat digunakan untuk pembelajaran mikrobiologi. Pada praktikum ini akan

dilakukan teknik pemurnian biakan mikroorganisme pada medium steril

untuk mempelajari mikrobiologi dengan satu kultur murni saja.


28/59

Identifikasi biakan mikroorganisme sering kali memerlukan pemindahan

ke biakan segar tanpa terjadi pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini

dilakukan dengan teknik aseptik untuk mempertahankan kemurnian biakan

selama pemindahan berulang kali. Selain itu untuk menghindari adanya

kontaminasi, yaitu masuknya mikroorganisme yang tidak diinginkan (Budiarti,

2009).

Pemurnian merupakan tahapan penting untuk mempelajarimikroorganisme di laboratorium. Mikroorganisme yang ada di alam pada

umumnya adalah sangat beragam, banyak, dan tidak terpisah-pisah sesuai

dengan jenisnya, namun pada hakikatnya mikroorganisme di alam terdiri dari

campuran mikroorganisme yang membentuk koloni tertentu. Begitu punhalnya dengan perkembangan mikroorganisme yang ditumbuhkan dalam

suatu media di laboratorium yang diperoleh dari suatu sampel.

Mikroorganisme yang tumbuh juga sangat beragam terdiri dari berbagai


29/59

Mikroorganisme yang tumbuh juga sangat beragam, terdiri dari berbagai

koloni yang bervariasi. Namun, di dalam laboratorium mikroorganisme ini

dapat dikelompokkan dalam koloni sesuai dengan jenisnya. Pengelompokan

ini dapat dilakukan dengan cara pemurnian mikroorganisme, sehingga dapat

diidentifikasi jenisnya, dipelajari morfologi, serta sifat dan kemampuan

biokimiawinya.

Dalam teknik pemurnian ini, tidak hanya diperlukan bagaimana untuk

memperoleh biakan murni, namun juga bagaimana memelihara sertamencegah pencemaran dari luar atau kontaminasi yang diakibatkan oleh

mikroorganisme jenis lain. Karena jika sudah terkontaminasi dari mikroba

jenis lain, maka hasil pemurnian tidak lagi dapat disebut sebagai biakan

murni.


30/59

Uraian di ataslah yang melatar-belakangi praktikan melaksanakan

praktikum mengenai teknik pemurnian mikroorganisme. Tujuannya adalah

untuk mendapatkan biakan murni dari koloni bakteri yang telah berhasil

diisolasi dari sampel.

2 Rumusan Masalah

Bagaimanakah prosedur pemurnian mikroorganisme dari lingkungan?

3 Tujuan

Mengetahui prosedur pemurnian mikroorganisme dari lingkungan.

4 Manfaat

Dapat melakukan pemurnian mikroorganisme dengan prosedur yang tepat.


31/59

WAKTU DAN TEMPAT PENELITIAN

Praktikum dilaksanakan pada hari Kamis, 19 Maret 2015 pukul 13.00 sampaiselesai di Laboratorium Mikrobiologi gedung C9, Jurusan Biologi Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Surabaya.

BAHAN DAN ALAT PENELITIAN

Alat : Pembakar spiritus, tabung reaksi, rak tabung reaksi, jarum

inokulasi/ose, lemari pendingin, spray atau wadah alkohol, tissue, kertas label,

incubator, korek api, laminar air flow.

Bahan : Media taoge agar yang berisikan bakteri hasil pengenceran (dalam

cawan petri), media taoge agar baru (dalam cawan petri), media agar miring

(dalam tabung reaksi)

Metode


32/59

Metode

Hal pertama yang harus dilakukan adalah menandai koloni pada cawan

petri yang akan dimurnikan. Koloni-koloni ini didapatkan pada media taoge

agar dalam cawan petri hasil pengenceran. Selanjutnya, UV alat-alat yang akan

digunakan seperti alkohol yang ada dibotol sprey, jarum inokulasi atau ose,

kertas label, cawan petri, tissue, bunsen, tissue serta media taoge agar berisi

biakan bakteri hasil pengenceran dan cawan petri media taoge agar baru.

Secara aseptis, ambil koloni yang ada di cawan petri dengan menggunakanjarum ose kemudian goreskan dengan metode cawan gores secara kuadran

pada media cawan petri baru. Goreskan pada kuadran 1 secara aseptis,

kemudian celupkan jarum inakulasi atau ose ke alkohol lalu bakar lagi sampai

membara dan goreskan ke kuadran 2. Secara berturut-turut lakukan hal yangsama sampai ke kuadran 4.


33/59

Koloni hasil isolasi pada media cawan petri baru ini selanjutnya dibungkus

dengan plastik wrap dan kertas dan diinkubasi (dengan posisi cawan Petri

terbalik) selama 24 jam pada suhu 28-300C. Goreskan pada kuadran 1 secara

aseptis, kemudian celupkan jarum inakulasi atau ose ke alkohol lalu bakar lagi

sampai membara dan goreskan ke kuadran 2. Secara berturut-turut lakukan

hal yang sama sampai ke kuadran 4. Koloni hasil isolasi pada media cawan

petri baru ini selanjutnya dibungkus dengan plastik wrap kemudian dibungkusdengan kertas dan diinkubasi (dengan posisi cawan Petri terbalik) selama 24

jam pada suhu 28-300C.

Praktikan mengamati hasil dari teknik kuadran tersebut dan

menentukan ada atau tidaknya satu koloni yang terpisah atau koloni tunggalyang biasanya berada pada kuadran keempat.


34/59

Setelah didapatkan biakan murni, ambil koloni tersebut kemudian tanam pada

media agar yang baru di tabung reaksi (media agar miring) dan tentunya

lakukan secara aseptis dan sebelum penanaman di media miring, UV alat-alat

seperti saat penanaman di cawan petri di kuadran.

Bahan berupa biakan murni dalam cawan petri baru kemudian diambil

secara aseptis menggunakan jarum inokulasi/ose dan digoreskan ke media agar

miring secara streak. Biakan murni dalam media agar miring pada tabung

reaksi ini selanjutnya diinkubasi pada suhu 28-300C selama 24-48 jam dan

kemudian diamati koloni yang tumbuh apabila koloni yang tumbuh sudah

murni, biakan murni dalam tabung reaksi tersebut kemudian disimpan dalam

lemari pendingin dan jika koloni yang tumbuh belum murni, praktikan harusmengulangi praktikum kuadran dan praktikum penanaman bakteri pada

media agar miring.


35/59

Kuadran Pemurnian Catatan

Gambar 4.1. Bakteri isolasi Gambar 4.2

Pemurnian koloni

bakteri

Kuadran : Koloni tunggal yang

digunakan untuk

pemurnian

Purification : Koloni tunggal

Hasil koloni ini dari

pengenceran10-7

Hasil pemurnian olehManzil Wahyu K

(130204006)


36/59


Gambar 4.2. Bakteri isolasiGambar 4.2Pemurnian koloni

bakteri

Kuadran :

Koloni tunggal yangdigunakan untuk

pemurnian

Purification :

Koloni tunggalHasil koloni ini dari

pengenceran10-7

Hasil pemurnian oleh

ADP Inas R (1330204070)


37/59


Gambar 4.3. Bakteri isolasi

Gambar 4.3

Pemurnian koloni

bakteri

Kuadran :

Koloni tunggal yang

digunakan untuk

pemurnian

Purification :

Koloni tunggal


pengenceran10-7


Mirrah kurnia L

(1330204071)


38/59


Gambar 4.4. Bakteri isolasi

Gambar 4.4

Pemurnian koloni

bakteri

Kuadran :

Koloni tunggal yang

digunakan untuk

pemurnian

Purification :

Koloni tunggal


pengenceran10-7


Emilia Elis H

(1330204072)


39/59



Pemurnian koloni

bakteri

Kuadran :

Koloni tunggal yang

digunakan untuk

pemurnian

Purification :

Koloni tunggal


pengenceran10-7


Indrie Dwi A

(1330204073)


40/59



Pemurnian koloni

bakteri

Kuadran :

Koloni tunggal yang

digunakan untuk

pemurnian

Purification :

Koloni tunggal


pengenceran10-7


Fikky Dian R

(1330204075)


41/59

Hasil pemurnian oleh Manzil Wahyu

Pada dasarnya teknik streak cawan dan streak di tabung agar menggunakan

cara yang sama, dengan melakukan steak bakteri di media agar. Sementara

streak tabung agar bertujuan untuk penyimpanan. Teknik yang digunakan

dalam piring melesat adalah dengan "membagi" cawan Petri menjadi 4

kuadran. Langkah pertama adalah dengan menyetreak bakteri dari media

terisolasi dalam kuadran 1 dalam lingkup lainnya dalam cawan Petri.

Kemudian beruntun lagi dari kuadran 1 ke kuadran 2 sampai pada kuadran

ke-4. Tapi setiap kali kita ingin berpindah streak kuadran kita harus

memanaskan loop kawat dan mendinginkannya. Karakter morfologi antara

bakteri pada cawan Petri dan di agar miring yang adalah sama.


42/59

Tingkat keberhasilan yang rendah dalam penyimpanan di tabung agar

dapat disebabkan oleh lingkaran kawat yang terlalu panas saat mengambil

bakteri dan ketika menyetreak di lereng agar. Kesulitan dalam membuka

cawan Petri dimana tutup masih harus memiliki celah sebagai penghalang

yang akan dibuka oleh salah satu tidak dimiliki dalam culture cawan Petri.

Loop kawat yang harus diletakkan dekat api setelah dipanaskan, kurang dingin

karena pada saat kesulitan membuka cawan Petri, jarum dipanaskan lagi dan

ketika cawan petri yang sudah dibuka loop kawat tidak cukup dingin.

Sehingga ketika bakteri ditanamkan di tabung agar miring, streak tidak

terbentuk dengan baik.


43/59

Penggunaan teknik aseptik standar membantu untuk meminimalkankontaminasi oleh mikroorganisme yang hadir di udara selain bakteri dalam

sampel uji. Inokulasi dan streak harus dilakukan dekat dengan api Bunsen dan

diselesaikan dengan cepat untuk memastikan bahwa cawan Petri terbuka

untuk waktu yang sesingkat mungkin. Teknik-teknik aseptik standar seperti

dengan membersihkan meja kerja dengan menggunakan alkohol dan juga

disemprotkan di tangan. Panaskan loop kawat sampai panas merah dan

kemudian mendinginkannya dekat Bunsen.


44/59

Hasil pemurnian dengan ADP Inas R.

Dalam pemurnian teknik streak cawan dan streak di tabung agar

menggunakan cara yang sama, dengan melakukan steak bakteri di media agar.

Namun keduanya memiliki tujuan yang berbeda, streak tabung agar bertujuan

untuk penyimpanan dan streak cawan digunakan untuk menyebarkan bakteri

pada permukaan media tumbuh sehingga koloni bakteri individu dapat

diisolasi (Port, 2010). Teknik yang digunakan dalam penyetrekan cawan

adalah penyetrekan 4 kuadran. Hasil dari penyetreakan ini nantinya akan

digunakan untuk penyetrekan tabung agar. Penyetrekan tabung agar ini yang

dinamakan pemurnan.


45/59

Dalam melaksanakan streak agar miring tangan dan meja kerja yang kita

gunakan dalam kegiatan ini haruslah steril. Selain penyemprotan alkohol,

teknik aseptik lainnya terbakar ose jarum yang akan kita gunakan di atas apiharuslah membara, tujuannya yang sama yaitu untuk jarum ose steril dari

mikroba bakteri lain yang kita akan murnikan.

Hasil dari Karakterisasi bakteri dalam tabung reaksi miring dari pengenceran

10-7

adalah termasuk jenis bakteri aerobik. Karena dalam cawan tersebutterlihat gelembung udara dan memiliki permkaan berlendir di bagian cawan

petri, bentuk koloni bakteri tidak begitu terlihat kemungkinan dikarenakan

langakh asepis yang kurang, penyetrekan yang kurang rapi, pemanasan jarum

ose yang berlebihan, media agar yang di gunakan tidak segarr, dan jenisbakteri yang memang tidak memerlihatkan bentuk streak pada cawan agar


46/59

Hasil pemurnian oleh emilia elis.

Langkah pemurnian kultur murni adalah sebagai berikut, koloni dengan

karakter morfologi tertentu (koloni tunggal) dapat dipisahkan satu sama

lain dengan mengambil dengan jarum ose. Kemudian melesat pada media

nutrien agar untuk pemurnian lain. Mengambil jarum ose dapat

memisahkan koloni tunggal untuk dari yang lain. Ambil koloni dengan

karakteristik morfologi tertentu dengan cara mengambil jarum ose danmeletakkannya pada satu titik di media pada cawan petri. Jarum ose yang

digunakan untuk memindahkan harus disterilkan dengan pemanasan di

atas lampu bunsen untuk bebas dari mikroorganisme (steril).


47/59

Media yang akan didinginkan dalam permukaan luar miring untuk

mendapatkan lebih besar. Sehingga koloni yang dikembangkan. Tujuan utama

adalah untuk mengurangi atau mengurangi tingkat metabolisme sekecil

mungkin dengan tetap menjaga kelangsungan hidup (energi kehidupan),

karakteristik genetik tetap stabil dan tidak berubah dan mempertahankan

budaya mungkin, sehingga biaya gambar (recovery) dan kehidupan (survival)

yang tinggi dengan perubahan karakteristik minimum. Bagaimana hampir

sama dengan budaya penyulingan, yaitu dengan mengambil koloni bakteri

beberapa menggunakan jarum ose dan kemudian meletakkannya di media

yang telah disediakan dalam tabung reaksi. Mulut Sterilisasi dilakukan dengan

melewati tabung mulut tabung pada nyala Bunsen. Hal ini dilakukan sebelumdan sesudah inokulasi. Kemudian lakukan inkubasi ke dalam inkubator dan

mengamati bentuk koloni yang tumbuh. Inkubasi dilakukan untuk

memberikan suasana yang memungkinkan (optimal) untuk pertumbuhan dan

untuk membentuk koloni.


48/59

Hasil pemurnian mikroba hasil praktis yang diperoleh murni, yangdiperoleh dengan warna dalam cawan petri dengan tembus keseluruhan,

sehingga dapat disimpulkan bahwa mikroba yang sama diperoleh koloni

murni.


49/59

Hasil pemurnian oleh Mirrah Kurnia.

Dengan melakukan langkah-langkah setiap pemurnian, itu diperoleh murni

koloni bakteri yang sama dengan koloni bakteri dalam cawan petri(kuadran). Karakter morfologi antara bakteri pada cawan Petri dan koloni

murni sama.

Koloni bakteri pada cawan petri dengan menggunakan metode kuadran

membentuk koloni tunggal dalam kuadran 4.Budidaya koloni bakteri pada

cawan petri dengan menggunakan metode kuadran harus dilakukan untuk

membentuk koloni bakteri tunggal. Peneliti melakukan teknik aseptik

dalam metode pemurnian dan kuadran untuk mengurangi kontaminasi atau

digarap koloni bakteri. Setelah melepas koloni bakteri tunggal dengan

menggunakan jarum ose.


50/59

Penyimpanan yang koloni bakteri tunggal di miring Media kaldu agar dan ditempatkan

zig-zag. Tutup mulut tabung reaksi dengan kapas untuk mengurangi kontaminasi

mikroorganisme lainnya. Setelah itu Inkubasi untuk memberikan kondisi yang optimal

untuk pertumbuhan bakteri. Inkubasi dilakukan pada suhu 300C selama waktu inkubasi

24 jam. Setelah terbentuk koloni murni di lereng agar itu harus penyimpanan dalam

lemari es untuk mengurangi tingkat pertumbuhan bacteri dan membentuk zig-zag.

Dalam penelitian ini, peneliti harus mengulangi proses budidaya koloni bakteri dengan

menggunakan metode kuadran karena hasilnya tidak optimal. Hal ini dapatmenyebabkan bakteri mati dalam suhu panas dan tidak melekat pada jarum ose dan

dapat tumbuh di media agar. Tapi setelah mengulangi percobaan dengan benar,

penelitian dapat dilakukan pemurnian dan memperoleh koloni murni.


51/59

Hasil pemurnian oleh Indrie Dwi A.

Pemurnian bakteri yang telah dilakukan memiliki hasil, dimulai dengan

pembiakan bakteri dalam cawan petri dibuat dengan teknik kuadran. Cawanpetri ditandai dengan spidol sebagai tanda kuadran 1,2,3, atau 4. Masuknya

bakteri ke dalam cawan petri disertai dengan teknik beruntun membuat

gerakan zig-zag bila disentuh jarum ose dengan media tumbuh. Teknik ini

sehingga bakteri dapat tumbuh membentuk koloni tunggal bakteri danmengisi permukaan medium. Selain mendapatkan koloni tunggal bakteri juga

dilakukan pengenceran mulai 10-1 sampai 10-7.


52/59

Hasil pengembangbiakan bakteri seperti pada gambar 4.9., Yang bakteri

yang tumbuh ada beberapa jenis, ada yang sudah membentuk koloni tunggal,

tapi masih ada juga yang tidak membentuk koloni tunggal. Oleh karena itu,

untuk meniru jenis bakteri yang harus kita lakukan pemurnian yang pertama.

Kita harus memilih satu koloni bakteri dalam cawan petri untuk dibesarkan

dan melihat apa kuadran. Dalam penelitian ini mengambil bakteri dari cawan

petri dari pengenceran 10-6 dan di kuadran keempat.Setelah proses pemurnian koloni bakteri di tabung reaksi yang berisi

media kaldu agar, dibentuk koloni tunggal bakteri yang sama seperti pada

gambar 4.10. Namun pertumbuhan bakteri dalam tidak terbentuk beruntun

zig-zag karena ketika bakteri masuk ke dalam media untuk miring jarum osemasih dalam kondisi panas, sehingga bakteri mati. tetapi juga mungkin karena

kuadran di inkubator terlalu lama sehingga tidak segera dipindahkan ke

kulkas.


53/59

Hal ini mengakibatkan bakteri yang tumbuh terlalu banyak sehingga bakteri

tidak dapat membentuk koloni. Kulkas berfungsi sebagai penghalang untuk

thermofilik pertumbuhan bakteri. Oleh karena itu untuk menumbuhkan satujenis bakteri yang kita harus melakukan pemurnian pertama. Pertama-tama

kita harus memilih satu koloni bakteri dalam cawan petri untuk dibesarkan

dan dilihat pada kuadran keberapa. Dalam prakteknya kali ini saya mengambil

cawan petri dengan bakteri dari pengenceran 10-7

dan di kuadran keempat.Dalam percobaan ini harus menggunakan teknik aseptik dengan

menyemprotkan alkohol di tangan dan meja kerja yang kita gunakan dalam

kegiatan ini haruslah steril. Hal ini dimaksudkan agar kemungkinan

kontaminasi dapat diminimalisi.


54/59

Hasil pemurnian oleh Fikky Dian R

Pada dasarnya pembentukan koloni beruntun tunggal atau streak plate, itu

merupakan langkah pertama untuk memurnikan bakteri. Langkah pertamaadalah memilih bakteri yang akan digunakan untuk streak plate (isolasi dari

cawan peemurnian 10-7, kemudian melakukan streak plate pada metode

kuadran dalam cawan petri yang sudah berisi media agar terlihat koloni

tunggal akan muncul dalam kuadran 4, melakukan Metode kuadran agar adaharapan untuk munculnya bakteri koloni tunggal pada kuadran ke-4. Mulai

beruntun di kuadran pertama ke dua ke tiga dan yang terakhir ke 4. Setelah

menyetreak beruntun di cawan dengan metode kuadran, dan kemudian

disimpan dalam inkubator, tunggu selama 24 jam, dan akan terlihat kolonitunggal. Ketika muncul koloni tunggal, koloni tersebut siap untuk dimurnikan

dan malakukan kultur murni bakteri.


55/59

Tangan dan meja kerja yang kita gunakan dalam kegiatan ini haruslahsteril. Hal ini dimaksudkan agar kemungkinan kontaminasi dapat

diminimalisir. Selain penyemprotan alkohol, teknik aseptik lainnya terbakar

ose jarum yang akan kita gunakan di atas api, tujuan yang sama yaitu untuk

jarum ose steril dari mikroba bakteri lain yang kita akan memurnikan. Pada

saat penanaman media pertumbuhan bakteri, jarum ose yang telah diantisipasi

hanya memanas dingin tapi posisinya tidak bisa jauh dari api. Hal ini

bertujuan agar bakteri tidak akan mati dimurnikan oleh panas dengan jarum

ose.


56/59

Simpulan

Berdasarkan praktikum yang telah dilaksanakan dapat disimpulkan bahwa

prosedur pemurnian bakteri adalah sebagai berikut:

Tandai koloni bakteri yang akan dimurnikan.

Secara aseptis, koloni diambil dengan menggunakan jarum ose dan digoreskan

dengan metode cawan gores secara kuadran pada media cawan petri baru.

Media yang didapat kemudian diinkubasi pada suhu 28-30oC selama 24 jam

dengan posisi cawan terbalik.

Hasil media yang telah diinkubasi diamati dan ditentukan apakah terdapatkoloni yang terpisah atau biakan murni dan biasanya terletak pada kuadran 4.


57/59

Koloni diambil dan ditanam pada media agar yang baru pada tabung reaksi

(media agar miring).

Biakan diinkubasi pada suhu 28-30oC selama 48 jam kemudian koloni yang

tumbuh diamati.

Apabila koloni yang telah tumbuh sudah murni, simpan di dalam lemari

pendingin.


58/59


59/59

isolasi, enumerasi dan purifikasi revisi

Documents