DASAR-DASAR PEMERIKSAAN MIKROBIOLOGI

METODE IDENTIFIKASI DAN DIAGNOSIS MIKROBIOLOGI

PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS :• Pemeriksaan Lab.dilakukan u/ menget.penye-

bab penyakit, menilai perkembangan penyakit stlh pengobatan,atau u/meyakinkan kebenaran penyebab penyakit yg diduga berdasarkan gejala klinisnya yg khas.

• Untuk mengetahui penyebab penyakit infeksi, dilakukan penanaman (kultur).

• Hasil pemeriksaan kultur akan digunakan sbg pedoman dalam pengobatan,perawatan, dan tindakan lain pd penderita.

• Krn pemeriksaan Lab. Penting, maka pengambilan dan penanganan specimen harus benar.

Pemeriksaan Lab dpt dilakukan berbagai cara sbb :

PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS :• Bbrp jenis penyakit dpt didiagnosa ckp dgn

menemukan bibit penyakit pd specimen segar, misalnya : penyakit yg disebabkan o/ Protozoa ,cacing dan jamur.

• Sementara penyakit yg disebabkan o/ bakteri, umumnya tdk ckp hanya dgn pem.mikroskopis ,krn morphologi bakteri tdk memiliki ciri khas u/ membedakan antar bakteri.

Bahan dan Alat yg dibutuhkan u/ pemeriksaan MIKROSKOPIS :• Specimen, koloni bakteri, suspensi bakteri.• Larutan Garam Fisiologi steril• Objeck Glass dan Deck Glass• Mikroskop • Minyak imersi• Xylol• Zat Warna/cat pewarnaan• Botol semprot aquades• Lampu spiritus• Ose/jarum ent• Pinset anatomi• Bak Pengecatan• Tissu, kapas putih dan Centrifuge.

Pemeriksaan Jenis Bakteri :

• Pemeriksaan jenis bakteri disini,hanya mengamati secara mikroskopis dgn menggnkn mikroskop.

• Untuk pengamatan yg lbh baik,mk hrs dilkkan pengecatan/pewarnaan pd bakteri.

• Pemeriksaan mikroskopis hanya akan menget. Morphologi,sifat pewarnaan dan gerak bakteri

• Sebelum pengecatan dan pengamatan bakteri maka harus membuat sediaan lbh dulu.

CARA MEMBUAT SEDIAAN :• Ambil objeck glass,bersihkan dgn tisu kering.• Bila menggunakan spesimen yg purulen, atau

koloni bakteri , maka harus ditambah garam fisiologi steril, bila spesimen cair (suspensi) bakteri, tidak butuh garam fisiologi, dan bila specimen cair (urin), centrifuge,endapan yang diambil.

• Letakkan objeck glass diatas meja porselen, ambil specimen seujung ose,bila perlu tambah garam fisiologi 1 ose, ratakan diatas kaca objek setipis mungkin.

* Keringkan diudara(angin-anginkan).* Lakukan Fiksasi ,lalukan diatas api 3kali.

• Fungsi fiksasi adalah : merekatkan specimen pd objek glass dan membunuh kuman.

• Fiksasi ada juga dgn cara merendam dalam methanol.

• Sediaan siap untuk diwarnai/ di Cat.

Macam-macam pewarnaan bakteri :

• Pewarnaan negatip : u/melihat simpai/kapsul bakteri dan u/ melihat bakteri bentuk spiral.

• Pewarnaan Tunggal: menggnkn 1 mcm zat warna.(methylen blue ).

• Pewarnaan Ganda/majemuk : * Pewarnaan Gram * Pewarnaan Tahan Asam atau BTA.

• Pewarnaan Khusus : * Pewarnaan Gray : u/ melihat Flagel * Pewarnaan Klein : u/ melihat endospora.

* Pewarnaan Neisser :u/ mlihat bakteri diphteri* Pewarnaan Castaneda : u/ Rickettsia.• Pewarnaan Giemsa : U/ melihat parasit, dan

sel darah.Cara Pewarnaan Gram :Siapkan sediaan yg sdh difiksasi, Gram Colour (A,

B,C,& D ), 3 Zat warna & 1 Decolorisasi.• Sediaan yg telah difiksasi diletakkan diatas bak

pewarnaan.• Ambil Gram A (Gentian Violet),tetes kan diatas

sediaan, hingga tergenang,biarkan 2 menit.

* Cuci dgn air mengalir tiriskan. * Teteskan Gram B ( Lugol ) biarkan 30 detik • Cuci dgn air mengalir, tiriskan.• Bubuhkan Gram C (Alkohol Aceton 5% )/Deco

lorisasi, sampai warna hitam tengguli luntur.• Cuci dgn air mengalir dan tiriskan.• Bubuhkan Gram D (Safranain/Fuchsin),biarkan

selama 1 menit.• Cuci dgn air mengalir,tiriskan,keringkan dan

siap diamati dibawah mikroskop dgn lensa objektip 100X,ditambah setetes imersi Oil.

* Gram Positip akan tmpk bakteri bwarna Ungu.* Gram Negatip tampak bakteri bwarna Merah

*Cara Pewarnaan Tahan Asam : *Pewarnaan Tahan Asam dikenal dgn BTA = Basil Tahan

Asam./Zeihl Neelson Colour.( 2 zat warna dan 1 Decolorisasi ).

* Sediaan yg sdh difiksasi diletakkan diatas bak pewarnaan.

* Teteskan Zn 1 (Carbol Fuchsin) diatas sediaan hingga tergenang,panaskan diatas nyala api

sampai menguap tidak mendidih selama 5 menit.* Cuci dgn air mengalir dan tiriskan.• Teteskan Zn 2 (Alkohol Asam 3 %), sampai

warna merah hilang.(Decolorisasi).• Cuci dgn air mengalir, tiriskan.• Bubuhkan Zn 3(Methylen Blue/Malachyt

Green) ,biarkan 1 menit.• Cuci dgn air mengalir, tiriskan dan keringkan.• Siap diamati dibwh mikroskop dgn perbesaran

lensa objektip 100 X, tambah imersi oil.

* Bacil Tahan Asam Positip bila ditemukan bakte

ri bentuk bacil berwarna Merah.• Dalam pemeriksaan mikroskopis, tdk

dilakukan identifikasi, sehingga tdk akan diket. Bakteri apa, tetapi akan dilaporkan morphologi bakteri yg dpt diamati dibawah mikroskop, misalnya :

• Ditemukan bakteri bentuk Coccus dgn formasi dua-dua bersifat Gram negatip intracelluler jumlah banyak/ LPB, dan jml lekosit banyak /LPB.

Pemeriksaan Kultur, Biokimia dan Tes Sensitivity thd Antibiotik :• Lanjut… ke Kultur resistensi/Sensitivity tes !!!!

• Pengambilan darah: sebelum minum antibiotik sama saat demam

Urin: saat demam,3 jam sebelum BAKsebelum minum antibiotik 48-72jam stlh minum antibiotikUrin pagi setelah bangun tidurPengambilan seputum: pagi dan sewaktuPengambilan fese : setiap saat pada stadium dini, sebelum minum

anti biotik

• Pengambilan darah untuk bayi: mata kaki, pelipis atau leher

• Sputum kehijauan: haemophiluss• Sputum kuning keemasan• Sputum putih:• Sputum abu-abu:• Sputum mukopurulen kental kuningan : infeksi

dini pneumonia lobar

• Sputum kuning atau kehijauan dengan bau tak sedap in feksi pseudomonas

• Hijau pseudomonas, kuning staphylococus aureus