LAPORAN RESMIPRAKTIKUM KIMIA PRODUK ALAM

IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDERJALUR SIKIMAT DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

Disusun oleh:Golongan IV Kelas B Kelompok A1. Ziana Walidah13/348742/FA/096601. Nida Al Husna13/348838/FA/096611. Rusyda Dyah13/348874/FA/09662

Dosen Jaga : Dr. rer.nat. Yosi Bayu Murti, M.Si., AptAsisten Jaga : Fairuz Sakina Mufida Annisafia Rizky Damaskha Dewi RahmawatiTanggal Praktikum: Rabu, 22 April 2015

LABORATORIUM KIMIA PRODUK ALAMFAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS GADJAH MADAYOGYAKARTA2015IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDERDENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

I. Tujuan1. Mahasiswa mampu memisahkan senyawa-senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak tumbuhan yang akan dianalisis.2. Mahasiswa mampu mengidentifikasi golongan senyawa metabolit sekunder yang ada pada ekstrak tumbuhan dengan menggunakan KLT.3. Mahasiswa mampu memahami prinsip pemisahan dan identifikasi golongan senyawa metabolit sekunder dengan metode KLT.

II. Alat dan BahanA. Alat1. Pipa Kapiler2. Kertas saring3. Penggaris4. Lampu UV 254 dan 3665. Bejana KLT + tutup6. Penyemprot7. Kompor

B. Bahan1. Silika gel F2542. KLT Toyo no 513. Etil asetat : toluen (7:93)4. Eter : toluen : asam asetat 10% (55:45:0,8)5. Klroform : Metanol (98:2)6. Asam asetat 30%7. Ekstrak cinnamomum cortex8. Ekstrak mengkudu9. Ekstrak temulawak10. Ekstrak ketela pohon11. Larutan pembanding sinamaldehid 0,1%; 12. Vanilin-asam sulfat13. Larutan pembanding Kumarin 0,1%14. KOH15. Larutan pembanding Kurkumin 1%16. Pembanding rutin17. Pembanding kuersetin

III. Cara KerjaDiamati dan didokumentasikan pada kondisi sinar tampak, sinar UV 254 dan UV 366

IV. Data dan Hasil Praktikum A. Ekstrak cinnamomum cortex Dokumentasi Sebelum disemprot1. Tampak 1. UV 254

1. UV 366

Sesudah disemprot1. Tampak

1. UV 254

1. UV 366

Data dan perhitungan RfSebelum disemprotSetelah disemprot

TAMPAKUV 254UV 366TAMPAKUV 254UV 366

PSPSPSPSPSPS

1--3,50,4-2,5-3,20,70,7-3,2

2---0,7----1,52--

3---3,2----22,5--

4--------3,53,2--

Rf =

Sebelum disemprot1. Tampaka. Pembanding -b. Sampel-2. UV 254a. Pembanding Rf = = 0,67b. Sampel Rf = = 0,07Rf = = 0,13Rf = = 0,623. UV 366a. Pembanding -b. Sampel Rf = = 0,48Setelah disemprot1. Tampaka. Pembanding -b. SampelRf = = 0,622. UV 254a. Pembanding Rf = = 0,13Rf = = 0,29Rf = = 0,38Rf = = 0,67b. Sampel Rf = = 0,13Rf = = 0,38Rf = = 0,48Rf = = 0,623. UV 366a. Pembanding -b. Sampel Rf = = 0,62

B. Ekstrak mengkudu Dokumentasi Sebelum disemprota. Tampak

b. UV 254

c. UV 366

Sesudah disemprota. Tampak

b. UV 254

c. UV 366

Data dan perhitungan RfSebelum disemprotSetelah disemprot

UV 254UV 366TAMPAK

PSPSPS

13,81,522-0,6

2-4,3-2,5-1

3---4,5-1,5

4---5,2--

Rf =

Sebelum disemprot1. UV 254a. Pembanding Rf = = 0,69b. Sampel Rf = = 0,27Rf = = 0,782. UV 366a. Pembanding Rf = = 0,36b. Sampel Rf = = 0,36Rf = = 0,45Rf = = 0,82Rf = = 0,94Setelah disemprot1. Tampaka. Pembanding -b. SampelRf = = 0,11Rf = = 0,18Rf = = 0,27

C. Ekstrak temulawak Dokumentasia. Tampak b. UV 254

c. UV 366

Data dan perhitungan RfTAMPAKUV 254UV 366

PSPSPS

12,31,32,31,31,30,5

22,62,5-2,52,41,3

3-4,3-4-1,8

4-4,9-4,3-2,5

5---4,7-4,3

6-----4,9

Rf = 1. Tampaka. Pembanding Rf = = 0,46Rf = = 0,52b. SampelRf = = 0,36Rf = = 0,5Rf = = 0,86Rf = = 0,982. UV 254a. Pembanding Rf = = 0,46b. Sampel Rf = = 0,26Rf = = 0,5Rf = = 0,8Rf = = 0,86Rf = = 0,943. UV 366a. Pembanding Rf = = 0,26Rf = = 0,48b. SampelRf = = 0,1Rf = = 0,26Rf = = 0,36Rf = = 0,5Rf = = 0,86Rf = = 0,98

D. Ekstrak ketela pohon Dokumentasi Sebelum disemprota. Tampak b. UV 254

c. UV 366

Sesudah disemprota. Tampak

b. UV 366

Data dan perhitungan RfSebelum disemprotSetelah disemprot

TAMPAKUV 254UV 366TAMPAKUV 366

KSRKSRKSRKSRKSR

1-------2,45,75-6-0,53-

2-------5,75-------

3---------------

4---------------

Keterangan :K = pembanding kuersetinS = sampelR -= Pembanding rutinRf =

Sebelum disemprot1. Tampaka. Pembanding Kuersetin-b. Sampel-c. Pembanding Rutin-3. UV 254a. Pembanding Kuersetin-b. Sampel -

c. Pembanding Rutin-3. UV 366a. Pembanding Kuersetin-b. Sampel Rf = = 0,3Rf = = 0,71c. Pembanding RutinRf = = 0,71

Setelah disemprot1. Tampaka. Pembanding Kuersetin-b. SampelRf = = 0,78c. Pembanding Rutin-2. UV 366a. Pembanding KuersetinRf = = 0,06b. Sampel Rf = = 0,375c. Pembanding Rutin-

V. PEMBAHASANPraktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya senyawa fenilpropanoid atau dengan kombinasi poliketida atau building block dari jalur fenilpropan atau jalur kombinasi fenilpropan dengan asetat-malonat dalam ekstrak tumbuhan yang dianalisis dan diidentifikasi menggunakan teknik Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Senyawa yang akan diuji adalah senyawa Sinamaldehid, Kumarin, Kurkuminoid, Rutin serta Kuersetin. Bahan-bahan tersebut dianalisis dari beberapa tumbuhan yang telah diekstraksi yaitu: kayu manis (Cinnamomum cortex) yang dianalisis kandungan Sinamaldehid, mengkudu yang dianalisis kandungan Kumarin, temulawak (Curcuma xanthorriza) yang dianalisis kandungan kurkuminoid, dan ketela pohon yang dianalisis kandungan rutin dan kersetinnya.Berikut ini adalah klasifikasi dari tumbuhan yang digunakan dalam percobaan ini :1. Cinnamomum cortex (Cinnamomum verum) Kingdom: Plantae Subkingdom : Tracheobionta Superdivisi : Spermatophyta Divisi: Magnoliophyta Kelas : Liliopsida Subkelas: Zingiberidae Orde: Zingiberales Famili: Costaceae Genus: Costus L. Spesies : Costus speciosus1. Mengkudu (Morinda citrifolia L.)1. Kingdom: Plantae1. Divisi : Spermatophyta1. Sub divisi : Angiospermae1. Kelas : Dicotyledone1. Anak kelas : Sympatalae1. Bangsa: Rubiales1. Suku : Rubiaceae1. Marga / genus : Morinda1. Jenis / spesies :Morinda citrifoliaL.1. Temulawak (Curcuma xanthorizza)1. Ketela pohon (Wijayakusuma, 1994)Praktikum kali ini menggunakan teknik KLT, dimana metode ini digunakan untuk memisahkan senyawa berdasarkan kepolarannya. Semakin polar senyawa yang diidentifikasi, maka akan semakin suka dengan fase diamnya (like dissolve like) dan tidak akan bergerak jauh. Sedangkan untuk senyawa yang non polar akan lebih menyukai dengan fase geraknya yang sama sama non polar sehingga akan memiliki jarak gerak yang lebih jauh dibandingkan dengan senyawa yang polar. Pada praktikum ini, fase diam yang digunakan bersifat polar (silika gel F254) dan fase geraknya bersifat non polar.Senyawa yang dipisahkan adalah senyawa-senyawa yang terdapat dalam ekstrak tumbuhan. Pada teknik KLT terdapat beberapa hal yang harus diperhatikan.Diantanya adalah fase gerak, fase diam dan senyawa pembanding. Masing-masing senyawa mempunyai komposisi fase gerak yang berbeda, disesuaikan dengan sifat kepolaran senyawa yang akan dianalisis. Tumbuhan yang disediakan sudah dalam keadaan ekstrak sehingga tidak perlu lagi melakukan ekstraksi atau pembuatan larutan. Selain itu bejana KLT pun sudah dijenuhkan dengan fase gerak. Langkah awal yang dilakukan adalah menotolkan sampel pada plat KLT. Terdapat dua plat KLT, plat KLT pertama, plat silika, digunakan untuk mengidentifikasi metabolit sekunder yang terkandung dalam kayu masin, mengkudu dan temulawak, dan plat KLT kedua, kertas toyo, untuk mengidentifikasi adanya metabolit sekunder yang terkandung pada ketela pohon. Tanda yang digunakan untuk penotolan adalah titik. Dimana masing-masing titik pada plat ditotol dengan ukuran yang sesuai, tidak terlalu besar ataupun kecil. Totolan yang terlalu besar dapat mengakibatkan pelebaran hasil yang ditakutkan dapat mengganggu senyawa lain, sedangkan totolan yang terlalu kecil dikhawatirkan tidak terlihat ketika telah dilakukan elusi. Baik titik untuk pembanding maupun untuk sampel, masing-masing penotolan harus menunggu sampai penotolan sebelumnya kering terlebih dahulu agar totolan yang dihasilkan tidak melebar.Lalu plat KLT yang telah ditotol dengan fase gerak tersebut dimasukkan kedalam bejana yang telah dijenuhi oleh fase gerak. Plat KLT dimasukkan ke bejana dengan hati-hati agar fase gerak tidak menyentuh totolan (dikhawatirkan senyawa larut dalam fase gerak). Selain itu saat memasukkan plat KLT juga harus cepat agar kejenuhan fase gerak dalam bejana tidak berubah. Penempatan palt ke dalam bejana pun harus lurus, jangan sampai nantinya hasil yang didapat akan memperlihatkan fase gerak yang bergerak tidak lurus. Hal tersebut akan mempersulit dalam penentuan batas elusi dan perhitungan Rf nantinya. Kemudian ditunggu hingga fase gerak mencapai batas elusi yaitu 5cm dari totolan untuk plat kayu manis, mengkudu dan temulawak, sedangkan batas elusi untuk ketela pohoon mencapai 8 cm. Setelah mencapai batas elusi, plat KLT diambil dan ditunggu hingga kering. Untuk pengeringan elusi ketela pohon menggunakan hair dryer agar benar-benar kering. Selanjutnya hasil KLT yang didapatkan nantinya akan diuji dalam beberapa uji yang harus dilakukan secara berurutan. Yaitu uji deteksi sinar tampak, UV 254, UV 366, deteksi UV 254 dan 366 setelah penyemprotan untuk visualisasi, kecuali temulawak. Untuk mengetahui keberadaan senyawa yang dianalisis, senyawa pembanding menjadi penting. Senyawa pembanding yang digunakan adalah senyawa yang diperkirakan ada di dalam ekstrak tumbuhan yang akan diidentifikasi. Sehingga nantinya apabila antara senyawa pembanding dengan senyawa yang diidentifikasi memiliki nilai Rf yang sama, keduanya merupakan suatu senyawa yang sama pula. Analisis senyawa fenilpropanoid dibagi menjadi 2, yaitu senyawa sinamaldehid dan kumarin. Fenilpropanoid merupakan derivat enyawa fenol dar asam aamino fenlalanin dan tirosin yang dibentuk melalui jalur biosintesis sikimat. (Kar, 2007) Senyawa sinamaldehid yang dianalisis berada pada tanaman kayu mans (Cinnamomum cortex), sedangkan senyawa kumarin berada pada tanaman mengkudu. Untuk uji senyawa sinamaldehid, bahan yang digunakan adalah kayu manis (Cinnamomum cortex), dimana kayu manis mengandung senyawa yang termasuk dalam fenilpropan, yaitu sinamaldehid, safrol, sineol dan eugenol. (Kar, 2007) Berikut adalah struktur kimia dari sinamaldehid yang terkandung dalam kayu manis:(Kar, 2007)Setelah dilakukan elusi dengan fase gerak toluen-etil asetat (93-7), didapatkan hasil Rf untuk pembanding sinamaldehid adalah 0,67 sedangkan dari kayu manis terdapat bercak dengan nilai Rf sebesar 0,62. Hal ini memperkuat dugaan bahwa kayu manis mengandung sinamaldehid, terlebih warna kedua bercak yang sama yaitu kecoklatan. Hasil ini didapatkan pada sinar UV 254 nm, sebelum mendapatkan perlakuan visualisasi. (Anonim, 2008)Berdasarkan gambar, Rf pebanding sinamaldehid berkisar diantara 0,65 dan kemungkinan dugaan kayu manis mengandung sinamaldehid benar. Untuk lebih memperjelas hasilnya, dilakukan visualisasi berupa penyemprotan dengan vanilin-asam sulfat dan pemanasan dengan suhu 1100C. Pemanasan harusnya menggunakan oven, sehingga suhu tetap terjaga dengan baik. Namun, pada praktikum ini, pemanasan dilakukan dengan menggunakan kompor dan terdapat kesalahan dalam pemanasan, dimana kemungkinan terjadi pemanasan yang melebihi dari suhu seharusnya sehingga terdapat beberapa bagian kertas KLT. yang terbakar dan tidak dapat diamati kembali pada UV 366 setelah dilakukan penyemprotan. Penyemprotan dilakukan agar bercak dapat terlihat dengan bantuan energi sinar UV. Hasil penyemprotan dan pemanasan menunjukkan bahwa bercak yang terlihat ada UV 254 sebelum penyemprotan masih sama dengan Rf yang sama. Namun, ada UV 366 dan sinar tampak, hanya bercak sampel dengan Rf 0,62 saja yang terlihat. Hal inii dikarenakan kerusakan struktur pada saat penyemprotan dan pemanasan. Pada uji senyawa kumarin, bahan yang digunakan adalah mengkudu, dimana mengkudu mengandung skopoletin, (Kar, 2007) Berikut adalah struktur kimia dari kumarin: (Kar, 2007)Setelah dilakukan elusi dengan fase gerak eter-toluen-asam asetat 10% (55;45;0.8) didapatkan hasil Rf untuk pembanding kumarin adalah 0,36 sedangkan dari ekstrak mengkudu terdapat bercak dengan nilai Rf sebesar 0,36 dilihat pada UV 366 nm sebelum visualisasi. Nilai Rf yang sama memberikan dugaan yang kuat bahwa mengkudu mengandung kumarin. Untuk memperjelas dan membuktikan lebih lanjut dugaan yang ada, dilakukan visualisasi dengan penyemprotan KOH metanolik. Hasil yang didapatkan pada setelah visuaisasi menggunakan sinar UV 366 nm menunjukkan bahwa nilai Rf pembanding dan sampel sama, yaitu 0,33. Dibandingkan dengan gambar, Rf pembanding berkisar diantara 0,4 dan masih bisa dikatakan bahwa mengkudu mengandung senyawa kumarin (skopoletin). (Anonim, 2008)Pada uji kurkuminoid, bahan yang akan diuji kandungan kurkuminoid adalah Curcuma xanthorrizha Roxb., dimana rimpang temulawak ini mengandung kurkuminoid tidak kurang dari 4,0% dihitung sebagai kurkumin (Anonim, 2008)Temulawak memiliki permukaan luar berkerut, warna coklat kekuningan hingga coklat; memiliki garis tengah hingga 6cm, tebal 2-5 mm, memiliki korteks yang sempit, berkas patahan berdebu, warna kuning jingga hingga coklat jingga terang, berbau khas, rasa tajam dan agak pahit (Anonim, 2008)Pada temulawak, kurkuminoid yang dimiliki merupakan senyawa xantorizol yang memiliki gugus yang merupakan ciri kurkuminoid. yaitu:

Uji KLT yang dilakukan dengan memberikan totolan pada silica gel F 254 yang merupakan lempeng fase diam dengan senyawa sampel yaitu ekstrak kental temulawak, dengan senyawa pembanding yaitu kurkumin. Fase gerak yang digunakan adalah kloroform : methanol (98:2 v/v). dilihat dari struktur kimia xantrorizol dan kurkumin, keduanya bersifat nonpolar, sehingga akan lebih terbawa dengan fase gerak.

Setelah diuji menggunakan sinar tampak, UV 254 dan UV 366. Terdapat hasil dimana pada sinar tampak Nampak bercak berwarna abu-abu pada titik 0,49 sedangkan pada senyawa temulawak terdapat bercak pada Rf 0,5. Titik yang sama pun Nampak dibawah sinar UV 254 dan UV 366 dengan warna kuning tua. Berdasarkan teori dalam buku Farmakope Herbal Indonesia, akan terdapat bercak yang sama pada Rf sebesar 0,5

(Anonim, 2008)

sehingga dapat diperkirakan bahwa temulawak memiliki senyawa kurkuminoid dalam ekstraknya.Pada uji flavonoid, bahan yang akan diuji adalah daun ketela pohon, yang merupakan anggota family Euphorbiaceae dengan nama spesies yaitu Manihot utilissima Pohl. (Wijayakusuma, 1994). Salah satu golongan flavonoid yang adalah kuersetin dan retin yang diduga terdapat juga dalam daun ketela pohon.

Struktur Rutin

Struktur kuersetinUji KLT yang dilakukan pada senyawa ini menggunakan kertas toyo no 51, dimana kertas toyo terbuat dari selulosa yang bersifat nonpolar, sehingga KLT yang dilakukan merupakan KLT terbalik. Dimana fase diam bersifat lebih nonpolar dibanding dengan fase gerak. Fase gerak yang digunakan adalah asam asetat 30%. Setelah fase gerak telah jenuh dalam bejana KLT dilakukan penotolan pada kertas toyo yang berukuran panjang 8 cm, kertas ditotol pada 3 ttik, dimana sebelah kiri merupakan kuersetin, tengah berupa sampel, dan bagian kanan adalah rutin. Sampel diletakkan ditengah agar dapat dengan mudah melihat bercak Rf antara dua pembanding yang ada. Pembanding yang diberika dua dengan tanpa dicampur, karena kedua pembanding memiliki Rf dan sifat kepolaran yang berbeda. Ditakukan apabila dicampur, nantinya keduanya tidak dapat terdeteksi.Pengamatan hasil KLT dilakukan dua kali, yaitu sebelum penyemprotan dan setelah penyemprotan. Sebelumnya perlakuan KLT terjadi cukup lama Karena fase KLT yang digunakan tebalik, setelah dilakukan KLT. Pengamatan sinar tampak dan UV 254 tidak memberikan hasil apapun, sedangkan pada isnar UVterdapat bercak pada sampel dengan nilai Rf sebesar 0,3 dan 0,71. Pada pembanding kuersetin tidak terlihat apa-apa. Dan pada rutin terapat Rf sebesar 0,71. Diduga sementara daun ketela pohon mengandung rutin karena memiliki bercak Rf yang sama dengan warna yang sama yaitu gelap keabu-abuan.Setelah itu dilakukan penyemprotan dengan sitroborat dan dilakukan pengamatan kembali. Pada sinar tampak, bercak tidak terlihat sama sekali pada kedua pembanding. Sedangkan pada sampel uji terdapat Rf senilai 0,78. Kemudian dilakukan pengamatan pada UV 254 dan tidak terlihat apapun pada bercak, sedangkan pada UV 366 terdapat bercak pada pembanding kuersetin dengan nilai Rf sebesar 0,06, senyawa uji memiliki bercak yang panjang mulai dari 0 mm hingga 6 cm dengan nilai Rf : 0,375 sedangkan rutin tidak terlihat bercak sama sekali. Tidak nampaknya bercak ataupun hasil yang kurang bagus dapat terjadi karena beberapa kemungkinan, salah satunya adalah terlalu polarnya fase gerak yang digunakan, Karena pada KLT ini digunakan sistem terbalik, bisa jadi kemungkinan rutin ynag merupakan bersifat terlalu polar dibanding dengan fase gerak yang dugunakan sehingga terlewat dalam mengikuti fase gerak. Dugaan sementara pada uji daun ketela pohon ini, setelah dilakukan penyemprotan dapat diduga bahwa ekstrak mengandung senyawa flavonoid yaitu kuersetin karena terdapat lintas becak totolan yang sama.Semua bercak yang didapatkan pada percobaan kali ini terelusi dengan bagus (tidak ada yang gagal) sehingga Rf yang dihasilkan cukup baik. Namun, terdapat beberapa titik yang kurang jelas bahkan tidak tampak pada UV 366 setelah penyemprotan. Hal ini dikarenaka terlalu panasnya perlakuan setelah penyemprotan.

VI. KESIMPULAN1. Sampel Cinnamomum cortex diduga mengandung sinamaldehid berdasarkan kedekatan Rf Cinnamomum dengan pembanding dan persamaan warna1. Sampel mengkudu diduga mengandung kumarin berdasarkan kesamaan nilai Rf yang didapat1. Diperkirakan bahwa temulawak memiliki senyawa kurkuminoid dalam ekstraknya baik berdasarkan nilai Rf dengan pembanding maupun teori1. Diduga daun ketela pohon mengandung rutin karena memiliki bercak Rf yang sama dengan warna yang sama yaitu gelap keabu-abuan. Pada uji daun ketela pohon ini, setelah dilakukan penyemprotan dapat diduga bahwa ekstrak mengandung senyawa flavonoid yaitu kuersetin karena terdapat lintas becak totolan yang sama.

VII. DAFTAR PUSTAKAAnonim, 2008, Farmakope Herbal Indonesia, Edisi I, DepKes RI, Jakarta Dewick, Paul M., 2002, Medicinal Natural Product A Biosynthettic Approach, Edisi 2, John Wiley & Son Ltd, InggrisKar, Ashutosh, 2007, Pharmacognosy and Pharmacobiotechnology, Edisi 2, New Age International (P) Limited Publishers, New DelhiWijayakusuma, H.M Hembing; Setiawan Dalimartha, dkk , 1994, Tanaman BerkhasiatObat di Indonesia, Pustaka Kartini, Jakarta