USULAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

JUDUL PROGRAM:

UJI EFEKTIVITAS PEMBERIAN KOMBINASI OBAT ATORVASTATIN DAN

EKSTRAK SAMBILOTO (ANDROGRAPHIS PANICULATA NEES) TERHADAP

PENURUNAN KADAR MALONALDEHIT (MDA) YANG DIBANDINGKAN

DENGAN PEMBERIAN TUNGGALNYA SEBAGAI TERAPI DISLIPIDEMIA

UNTUK MENCEGAH ARTEROSKLEROSIS

BIDANG KEGIATAN:

PKM PENELITIAN

Diusulkan oleh:

Ketua : Anak Agung Istri Sinta Indrani (1108505037) (Angkatan 2011)

Anggota 1 : Ni Nyoman Putri Paramita Sari (1108505011) (Angkatan 2011)

UNIVERSITAS UDAYANA

DENPASAR

2014

RINGKASAN

Dislipidemia merupakan suatu kelainan metabolisme lipid yang ditandai dengan

meningkatnya kadar kolestrol total, Low Density Lipoprotein (LDL) di dalam darah dan

tingginya kadar trigliserida yang disertai dengan penurunan kadar High Density Liporotein

(HDL). Pada kondisi dislipidemia, tingginya kadar LDL yang beredar diidentifikasi sebagai

faktor risiko potensial untuk terjadinya stress oksidatif yang memicu meningkatnya peroksidasi

lipid pada membran lipid, hemoglobin dan sel darah merah. Peroksidasi lipid menghasilkan

berbagai produk akhir yang bersifat radikal dan juga merusak makromolekul lain disekitarnya.

Salah satu produknya adalah Malonaldehit (MDA). MDA juga diketahui bersifat sitotoksik dan

kemostatik di dalam tubuh serta berkontribusi pada kekakuan jaringan arteri pada kasus

penyakit jantung koroner seperti aterosklerosis. Sehingga salah satu cara terapi yang efektif

untuk terapi dislipidemia serta terapi preventif terjadinya aterosklerosis adalah menurunkan

kadar LDL yang menjadi faktor resiko stress oksidatif atau mengurangi lipid peroksidasi untuk

menurunkan kadar MDA bebas dalam tubuh. Kombinasi penggunaan obat golongan statin

dengan herba sambiloto (Andrographis paniculata Nees) bertujuan untuk mebandingkan

aktivitas kombinasi obat sintetik dan herba sambiloto dalam terapi dislipidemia untuk

mencegah resiko timbulnya arterosklerosis melalui pengukuran penurunan kadar MDA di

dalam serum darah yang diujkan secara invivo dengan pemberian tunggal obat antorvastatin

dan ekstak sambiloto pada tikus yang diinduksi dislipidemia. Herbal sambiloto dipilih karena

aktivitasnya yang kuat sebagai antioksidan yang mendukung aktivitas fakmakologisnya yang

lain sebagai anti-aterosklerosis sehingga diharapkan mampu memberikan potensi kombinasi

yang efektif dalam penyembuhan dislipidemia dan mencegah aterosklerosis. Kandungan

Andrografolidnya memiliki aktivitas farmakologis sebagai antioksidan yang berpotesi dalam

menurunkan lipid peroksidasi dan meningkatkan enzim yang bekerja sebagai antioksidan pada

hati serta antioksidan lainnya dalam tubuh seperti glutathione peroxidase, glutathione

reductase, katalase, superoxide dismutase (SOD) dan glutathione S transferase. Obat sintetik

yang digunakan pada kombinasi terapi ini adalah golongan statin yang merupakan lini pertama

pengobatan dislipidemia. Penggunaan atorvastatin dapat memberikan aksi kuat dalam

menurunkan kadar LDL yang menjadi faktor resiko timbulnya peroksidasi lipid. Penelitian

dilakukan pada tikus putih (Rattus norvegicus, L.) jantan galur wistar yang berumur 4 minggu

dengan berat badan berkisar 150-200 gram yang dibagi menjadi lima kelompok besar dan

diberikan pakan kaya lemak untuk menginduksi terjadinya dyslipidemia (kecuali pada

kelompok normal). Kelompok perlakuan terdiri dari 3 kelompok besar dengan perlakuan

pemberian kombinasi atorvastatin dan ekstrak sambiloto, pemberian tunggal atorvastatin, dan

pemberian tunggal ekstrak sambiloto. Luaran yang diharapkan adalah kelompok perlakuan

(tikus yang diberikan kombinasi ekstrak sambiloto dan atrovastatin dengan pemberian tunggal

ekstrak sambiloto atau atrovastatin) mengalami penurunan kadar MDA secara signifikan jika

dibandingkan dengan kontrol negatifnya yang mengalami dislipidemia dan memberikan kadar

MDA yang lebih kecil bila dibandingkan dengan kadar MDA pada pemberian tunggalnya,

maka kombinasi obat atrovastatin dan ekstrak sambiloto diduga efektif sebagai obat terapi

dislipidemia dan mampu mencegah arterosklerosis melalui mekanismenya mengurangi kadar

LDL dan sebagai antioksidan dengan menurunkan kadar MDA secara signifikan dibandingkan

dengan kontrol negatif ataupun pemberian tunggalnya.

Kata kunci: Dislipidemia, MDA, atorvastatin, ekstrak sambiloto, androgafolid, antioksidan.

1

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Dislipidemia merupakan suatu kelainan metabolisme lipid yang ditandai dengan

meningkatnya kadar kolestrol total, Low Density Lipoprotein (LDL) di dalam darah dan

tingginya kadar trigliserida yang disertai dengan penurunan kadar High Density Liporotein

(HDL) (Musunuru, 2010). WHO memperkirakan dari setengah lebih kasus penyakit jantung

iskemik yang terjadi di dunia berkaitan dengan kondisi dislipidemia, dimana angka

kematiannya telah mencapai lebih dari empat juta tiap tahunnya (Sigh, et.al., 2011).

Terapi dislipidemia yang sering digunakan sebagai terapi lini pertama adalah golongan

statin. Golongan statin yang dikelompokkan ke dalam aksi kuat menurunkan LDL yaitu

atorvastatin (Oxford dan King, 2002). Pada kondisi dislipidemia, tingginya kadar LDL yang

beredar diidentifikasi sebagai faktor risiko potensial untuk terjadinya stress oksidatif yang

memicu meningkatnya peroksidasi lipid pada membran lipid, hemoglobin dan sel darah merah

(Tewari, et. al., 2010). Peroksidasi lipid menghasilkan berbagai produk akhir yang bersifat

radikal dan juga merusak makromolekul lain disekitarnya. Salah satunya adalah dicarbonyls

(MDA dan glyoxal) (Evans dan Cooke, 2006). Konsentrasi MDA dalam material biologi telah

digunakan sebagai indikator kerusakan oksidatif pada lemak tak jenuh dan sebagai indikator

keberadaan radikal bebas (Endang, 2005). MDA juga telah diketahui bersifat sitotoksik dan

kemostatik di dalam tubuh serta berkontribusi pada kekakuan jaringan arteri pada kasus

penyakit jantung koroner seperti aterosklerosis (Duner, 2009). Sehingga salah satu cara terapi

yang efektif untuk terapi dislipidemia serta terapi preventif terjadinya aterosklerosis adalah

menurunkan kadar LDL yang menjadi faktor resiko stress oksidatif atau mengurangi lipid

peroksidasi untuk menurunkan kadar MDA bebas dalam tubuh.

Salah satu bahan alam yang telah teruji baik secara in vitro maupun in vivo dan memiliki

aktivitas dapat menurunkan kadar MDA adalah herba sambiloto (Andrographis paniculata

Nees). Herba sambiloto memiliki kandungan Andrografolid yang memiliki aktivitas

farmakologis sebagai antioksidan yang berpotesi dalam menurunkan lipid peroksidasi dan

meningkatkan enzim yang bekerja sebagai antioksidan pada hati serta antioksidan lainnya

dalam tubuh. Aktivitas farmakologis herba sambiloto sebagai antioksidan juga berkontribusi

pada aktivitasnya yang lain sebagai anti-aterosklerosis (Chao dan Lin, 2010).

Berdasarkan uraian tersebut, dilakukan penelitian terhadap kombinasi penggunaan obat

golongan statin dengan kombinasi herba sambiloto (Andrographis paniculata Nees) yang

bertujuan untuk mebandingkan aktivitas kombinasi obat sintetik dan herba sambiloto dalam

2

terapi dislipidemia untuk mencegah resiko timbulnya arterosklerosis melalui pengukuran

penurunan kadar MDA di dalam serum darah yang diujkan secara invivo dengan pemberian

tunggal obat antorvastatin dan ekstak sambiloto pada tikus yang diinduksi dislipidemia.

1.2. Rumusan Masalah

Apakah pemberian kombinasi obat atorvastatin (golongan statin) dengan ekstrak sambiloto

(Andrographis paniculata Nees) memberikan perbedaan hasil pengukuran kadar MDA pada

tikus yang diinduksi dislipidemia dibandingkan dengan pemberian tunggalnya?

1.3. Tujuan Khusus

Tujuan khusus dari penelitian ini adalah untuk menguji perbedaan dari aktivitas kombinasi

obat sintetik atorvastatin (golongan statin) dan herba sambiloto dalam terapi dislipidemia untuk

mencegah resiko timbulnya arterosklerosis dibandingkan dengan pemberian tunggal obat

atorvastatin dan ekstrak sambiloto pada tikus.

1.4. Urgensi Penelitian

Urgensi dari penelitian ini yang bisa disampaikan adalah kondisi dislipidemia mampu

meningkatkan resiko timbulnya arterosklerosis melalui peroksidasi lipid yang menghasilkan

radikal bebas. Untuk itu, diperlukan terapi yang efektif dengan mengkombinasikan obat yang

digunakan. Herbal sambiloto dipilih karena aktivitasnya yang kuat sebagai antioksidan yang

mendukung aktivitas fakmakologisnya yang lain sebagai anti-aterosklerosis sehingga

diharapkan mampu memberikan potensi kombinasi yang efektif dalam penyembuhan

dislipidemia dan mencegah aterosklerosis.

1.5. Luaran yang Diharapkan

Luaran yang diharapkan dari penelitian ini adalah artikel ilmiah yang menunjukkan

hasil uji aktivitas yang efektif pada pemberian obat atorvastatin (golongan statin) dan herba

sambiloto dalam terapi dislipidemia untuk mencegah resiko timbulnya arterosklerosis

dibandingkan dengan pemberian tunggal obat atorvastatin dan ekstrak sambiloto.

1.6. Manfaat Penelitian

Dari hasil penelitian akan diperoleh informasi mengenai efektivitas pemilihan terapi

dislipidemia untuk mencegah resiko timbulnya arterosklerosis dengan kombinasi antara obat

sintetik dan bahan herbal sebagai alternatif untuk mengoptimalkan terapi penyebuhan

dislipidemia.

3

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Taksonomi Tanaman Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees

Secara taksonomi, sambiloto dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

Subkingdom : Trakeobionta, tanaman berpembuluh

Superdivisi : Spermatopita, tanaman berbiji

Divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledoneae

Subkelas : Gamopetalae

Ordo : Personales

Famili : Acanthaceae

Subfamili : Acanthoidae

Genus : Andrographis

Spesies : Andrographis paniculata Nees

(Sivananthan and Elamaran, 2013)

2.1.1. Kandungan Kimia

Komponen bioaktif utama dari tanaman obat Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees

adalah Andrografolid. Komponen ini dapat ditemukan di semua bagian tanaman, terutama pada

bagian daun. Di dalam daun, kadar senyawa andrografolid sebesar 2,5-4,8% dari berat

keringnya (Prapanza dan Marito, 2003).

2.1.1. Aktivitas Farmakologi Herba Sambiloto

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, andrografolid memiliki beberapa aktivitas

farmakologi seperti antidiabetes, antiaterosklerosis, antidislipidemia, antiinflamasi, Anti

kanker dan Antioksidan (Chao dan Lin, 2010).

Dosis andrografolid yang digunakan untuk manusia dengan berat badan 50 kg setelah

dikonversikan adalah kurang lebih 40 mg/hari (Visen et al., 1993; Puri et al., 1993, Paget &

Barnes, 1964).

2.2. Antioksidan

Antioksidan dapat didefinisikan sebagai suatu zat yang dapat menghambat atau

memperlambat proses oksidasi. Oksidasi adalah jenis reaksi kimia yang melibatkan pengikatan

oksigen pelepasan hidrogen atau pelepasan elektron. Proses oksidasi adalah peristiwa alami

yang terjadi di alam dan dapat terjadi dimana-mana, tak terkecuali di dalam tubuh kita

(Halliwell dan Gutteridge, 2007).

4

Aktivitas Antioksidan sambiloto dapat menurunkan kadar MDA dengan mekanisme

menurunkan pembentukan MDA melalui peroksidasi lipid adalah herba sambiloto

(Andrographis paniculata Nees). Herba sambiloto memiliki kandungan Andrografolid yang

memiliki aktivitas farmakologis sebagai antioksidan yang berpotesi dalam menurunkan lipid

peroksidasi dan meningkatkan enzim yang bekerja sebagai antioksidan pada hati serta

antioksidan lainnya dalam tubuh seperti glutathione peroxidase, glutathione reductase, katalase,

superoxide dismutase (SOD) dan glutathione S transferase. Aktivitas antioksidan dari

A.paniculata berkontribusi untuk menghambat terjadinya inflamasi, atherosclerosis, dan

diabetes (Chao dan Lin, 2010).

2.3. Obat Golongan Statin

Terapi dislipidemia merupakan terapi individualistis dan berdasarkan dari kadar lipid. Lini

pertama terapi adalah golongan statin dan sebagai preventif sekunder tanpa melihat kadar TG

dan HDL-C. Dosis sedang statin (untuk memperoleh reduksi LDL-C sebesar 25% atau lebih)

digunakan untuk inisasi terapi. Penghambat HMG-KoA reduktase (golongan statin) bekerja

dengan cara menghambat secara kompetitif enzim HMG-KoA reduktase. Obat ini dapat

menyebabkan terjadinya penurunan simpanan kolesterol intrasel. Obat ini juga menghambat

sintesis VLDL di hati sehingga produksi kolesterol LDL menurun dan meningkatkan jumlah

reseptor LDL, contoh obat ini yaitu fluvastatin, lovastatin, pravastatin, simvastatin, dan

atorvastatin (Murray et al. 2003). Golongan statin yang dikelompokkan ke dalam aksi kuat

menurunkan LDL yaitu atorvastatin (Oxford dan King, 2002)

Gambar 1. Klasifikasi lipid Serum dan Dosis Terapi Statin

2.4. Dislipidemia

Dislipidemia adalah suatu keadaan yang meliputi kenaikan kadar kolesterol total, LDL,

trigliserida, dan atau penurunan kadar HDL. Pada tikus kadar normal kolesterol total tikus

5

adalah 10 54 mg/dL (Kusumawati, 2004). Kadar normal LDL tikus adalah 17 22 mg/dL

dan kadar normal HDL tikus adalah 77 84 mg/dL (Wahyuni, unpublished data). Tikus

dikatakan dislipidemia bila terjadi kenaikan berat badan > 20% atau kadar kolesterol total

serum > 200 mg/dL (Hardini et al., 2007).

2.5. Malondialdehyde (MDA) sebagai Indikator Peroksidasi Lipid

Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki sebuah elektron yang tidak

berpasangan di orbit luarnya (Hendromatono 2000; Suryohudoyo, 200). Radikal ini akan

merebut elektron dari molekul lain yang ada disekitarnya untuk menstabilkan diri, sehingga

spesies kimia ini sering dihubungkan dengan terjadinya kerusakan sel, kerusakan jaringan, dan

proses penuaan (Halliwell and Gutteridge, 1999).

Peroksidasi lipid menghasilkan berbagai produk akhir yang bersifat radikal dan juga

merusak makromolekul lain disekitarnya. Produk tersebut antara lain lipid hidroperoksida, 4-

hydroxy-2-alkenal (4-hydroxy-noneal/HNE, acrolein dan crotonaldehyde) dan dicarbonyls

(MDA dan glyoxal) (Evans dan Cooke, 2006). Umumnya produk peroksidasi lipid ini diukur

melalui kadar MDA dan etana (Winarsi, 2007).

Malondialdehyde (MDA) merupakan produk hasil peroksidasi lipid dalam tubuh dan

terdapat dalam bentuk bebas atau terkompleks dengan jaringan di dalam tubuh. Reaksi ionisasi

senyawa-senyawa radikal bebas juga dapat membentuk MDA dan MDA juga merupakan

produk samping biosintesis prostaglandin. Senyawa senyawa aldehida dan keton seperti

hidroksialkenal dan tentunya MDA terbentuk dari bereaksinya molekul lemak dengan asam

lemak tak jenuh yang karbon metilennya telah teroksidasi, selanjutnya senyawa senyawa ini

telah diketahui bersifat toksik terhadap sel. Konsentrasi MDA dalam material biologi telah

digunakan secara luas sebagai indikator dan kerusakan oksidatif pada lemak tak jenuh sekaligus

merupakan indikator keberadaan radikal bebas. Rantai asam lemak tak jenuh jamak pada

lapisan fosfolipid membran diserang oleh radikal hidroksil menyebabkan terjadinya peroksidasi

lipid (Endang, 2005).

Pengukuran kinetika peroksidasi lipid secara in vitro dapat dilakukan dengan mengukur

berapa banyak oksigen yang dibutuhkan. Ada beberapa metodeyang dapat digunakan, salah

satunya TBA (Thiobarbituric acid) reactivity test yang dapat dilakukan baik secara in

vivo maupun in vitro. Tes ini didasarkan padareaksi kondensasi antara satu molekul MDA

dengan dua molekul TBA padakondisi asam. Hasilnya adalah pigmen berwarna merah yang

dapat diukur padapanjang gelombang 532 nm. Jumlah MDA yang terdeteksi menggambarkan

banyaknya peroksidasi lipid yang terjadi (Josephy, 1997).

6

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1.Rancangan Penelitian

Penelitian ini adalah eksperimental murni yang dilakukan melalui beberapa tahapan,

diantaranya :

1. Ekstraksi serbuk simplisia herba sambiloto dengan pelarut etanol 96%

2. Purifikasi ekstrak kasar dengan menggunakan pelarut n-hexan, etil asetat dan air panas

hingga diperoleh ekstrak terpurifikasi

3. Induksi diet kaya lemak

4. Uji kadar MDA dalam serum dengan metode TBA

Data yang diperoleh berupa kadar MDA dalam serum. Sebelum penelitian akan dilakukan

evaluasi kelayakan etik (ethical clearance) di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas

Udayana.

3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian

Determinasi jenis tanaman dilakukan dibagian Biologi Farmasi Fakultas Farmasi

Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Laboratorium Farmakognosi dan Fitofarmasi Jurusan

Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana untuk proses ekstraksi hingga purifikasi ekstrak

andrografolid dari herba sambiloto. Analisis dan Farmasi Forensik Jurusan Farmasi FMIPA

Univerisitas Udayana, pemeliharaan hewan uji dan pengukuran kadar MDA dilakukan pada

Laboratorium Hewan Uji Jurusan Farmasi FMIPA Universitas. Penelitian ini dilakukan selama

5 bulan.

3.3. Subjek Penelitian

Subjek pada penelitian ini yaitu hewan tikus putih (Rattus norvegicus, L.) jantan galur

wistar yang berumur 4 minggu dengan berat badan berkisar 150-200 gram yang diadaptasi

selama 1 minggu dan diberikan pakan standard dan air mineral.

3.4. Alat dan Bahan Penilitian

3.4.1. Alat Penelitian

Alat yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat alat maserasi, neraca

analitik (AND), vial (15 mL dan 150 mL), Erlenmeyer (50 mL dan 1 L) merk Pyrex, gelas

beaker (100 mL dan 500 mL) merk Pyrex, vacum rotary evaporator 1 L merk Eyela, penangas

air, mortir, stamper, gelas ukur (50 mL dan 100 mL) merk Pyrex, labu ukur (10 mL dan 1L)

merk Pyrex, pipet ukur, pipet tetes, pipet kapiler, pipet mikro, toples kaca, aluminium foil, ball

filler, vortex (IKA), corong gelas, corong pisah 250 mL merk Pyrex, kertas saring, kain kasa,

batang pengaduk, pinset, sudip, oven, sonde, spuite, tabung reaksi, tabung sentrifuge,

7

sentrifugator, cawan porselen, kandang tikus serta tempat minum tikus, Spektrofotometer

(Vitalab Micro).

3.4.2. Bahan Penelitian

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain serbuk kering herba

sambiloto yang diperoleh dari Kulonprogo, Yogyakarta, etanol 96%, Aquadest, n-Hexan, Etil

asetat, Kloroform pro analisis, Metanol pro analisis, Pakan Pellet BR-1, Atorvastatin, Vitamin

E, Telur bebek, Lemak Babi, Air mineral, CMC Na, reagen TBA.

3.5. Prosedur Penelitian

3.5.1. Ekstraksi

Sebanyak 2 kg serbuk kering Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees dimaserasi

dengan 10L etanol 96% selama 2 hari. Kemudian disaring dan ampasnya diremaserasi dua kali

dengan 5L etanol 96% selama 1 hari. Maserat dijadikan satu dan diuapkan hingga diperoleh

ekstrak kental. Ekstrak kental dicuci dengan n-heksan (1:20), dengan etil asetat (1:1) da terakhir

dengan air panas hingga warna air menjadi bening. Ektrak diuapkan hingga kental kemudian

ditambahkan sedikit etanol 96% sehingga diperoleh ekstrak terpurifikasi.

3.5.2. Aklimatisasi Hewan Uji

Tiga puluh enam (30) ekor tikus berat badan 150-200 gram diletakkan pada kondisi

lingkungan standard (suhu 251oC, kelembaban 555% dan fase terang gelap = 12:12 jam).

Tiap kandang berisi 6 ekor tikus dan diberi akses bebas untuk air minum dan pakan. Luaran

yang diharapkan adalah hewan uji tidak mengalami stres (dipantau dari tingkah laku dan nafsu

makan). Selain itu juga tikus dilatih untuk pakan kaya lemak dalam rentang dua bulan. Semakin

sedikit waktu yang dibutuhkan, semakin baik pembentukan kolesterol dan peroksidasi lipid

sehingga dapat digunakan untuk tahap selanjutnya merupakan indikator keberhasilan dari tahap

ini.

3.5.3. Pemberian Perlakuan pada Tikus untuk Tahap Pengujian

Tikus dibagi menjadi 5 kelompok, 6 ekor mencit disetiap kelompoknya dan diberikan

perlakuan sebagai berikut : kelompok 1 (kontrol normal) diberikan pakan standard BR-1 dan

aquadest, klompok II (kontrol negatif) diberikan pakan kaya lemak dan CMC Na 1%; kelompok

III diberikan pakan kaya lemak dan ekstrak andrografolid dengan dosis 4,5 mg/tikus/hari;

kelompok IV diberikan kombinasi ekstrak sambiloto dan atrovastatin perbandingan (1:1)

dengan dosis 4,5 mg/tikus/hari; kelompok V diberikan pakan kaya lemak dan atrovastatin

dengan dosis 4,5 mg/tikus/hari.

Kelompok III sampai kelompok V diberikan perlakuan selama 1 minggu secara per oral

dan setelah 1 minggu diinduksi pakan kaya lemak dengan campuran pakan meliputi kuning

telur 80%, sukrosa 65%, lemak hewan 5 % dan dilakukan pengambilan sampel darah dan diukur

8

kadar pemeriksaan profil lipid dan kadar MDA. Setelah diinduksi pakan kaya lemak, luaran

yang diharapkan adalah kelompok perlakuan (tikus yang diberikan kombinasi ekstrak

sambiloto dan atrovastatin dengan pemberian tunggal ekstrak sambiloto atau atrovastatin)

mengalami penurunan kadar MDA secara signifikan jika dibandingkan dengan kontrol

negatifnya yang mengalami dislipidemia dan memberikan kadar MDA yang lebih kecil bila

dibandingkan dengan kadar MDA pada pemberian tunggalnya, maka kombinasi obat

atrovastatin dan ekstrak sambiloto diduga efektif sebagai obat terapi dislipidemia dan mampu

mencegah arterosklerosis melalui mekanismenya mengurangi kadar LDL dan sebagai

antioksidan dengan menurunkan kadar MDA secara signifikan dibandingkan dengan kontrol

negatif ataupun pemberian tunggalnya. Hal tersebut merupakan indikator keberasilan penelitian

ini.

3.5.4. Penetapan Kadar MDA dalam Serum Dengan Metode TBA

Dibuat 5 larutan seri dari larutan MDA standar dan diukur absorbansinya pada panjang

gelombang 532 nm. Serum yang diperoleh ditambahkan reagen TBA kemudian dipanaskan di

waterbath pada suhu 95 C selama 1 jam. Larutan selanjutnya disentrifugasi pada kecepatan

7000 rpm selama 10 menit dan diambil bagian supernatan. Absorbansi sampel diukur pada

panjang gelombang 532 nm.

3.6. Larutan dan Indikator Capaian

Tabel 1. Luaran dan Indikator Capaian

Tahapan Luaran Indikator Capaian

Pembuatan Larutan Uji

- Ekstraksi

Ekstrak etanol kering herba sambiloto

Diperoleh ekstrak etanol kering

herba sambiloto

Persiapan Hewan Uji Hewan uji beradaptasi dengan lingkungan Tercipta kondisi hewan coba

beradaptasi dengan lingkungan

Induksi Pakan Kaya Lemak Hewan uji yang dislipidemia Kenaikan berat badan, kadar TG,

TC, dan LDL melebihi batas

normal

Uji Efektivitas Kombinasi dan

Pemberian Tunggal pada Hewan

Uji

Penurunan kadar MDA Diharapkan memberikan

penurunan kadar MDA

3.7.Teknik Pengumpulan Data dan Analisis Data

Pada uji aktivitas antioksidan, data berupa absorbansi. Kadar MDA dihitung dengan

persamaan regresi linier yang diperoleh dari kurva kalibrasi.

Data yang diperoleh dinyatakan dengan rerataSD (Standar Deviasi). Data tersebut

kemudian dianalisis secara statistik dengan uji Kolmogorov-Smirnov untuk melihat distribusi

data dan data Levene test untuk melihat kehomogenan data. Jika distribusi data normal dan

9

homogen, maka analisis dilanjutkan dengan analisis pola searah (ANOVA-one way) taraf

kepercayaan 95% dan uji LSD untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Data

dikatakan berbeda bermakna apabila p0,05.

3.8. Cara Penafsiran dan Penyimpulan Hasil Penelitian

Indikator keberhasilan dari penelitian ini adalah jika hasil analisis statistik uji LSD dari

kadar MDA hewan uji pada kelompok perlakuan IV (Tikus yang diberi kombinasi ekstrak

sambiloto dengan atrovastatin) berbeda bermakna (P0,05 maka

kombinasi atorvastatin dan ekstrak sambiloto dinyatakan tidak memiliki perbedaan dengan

pemberian tunggalnya untuk menurunkan kadar MDA.

Kontrol

Normal

Dibagi menjadi 5 kelompok

Kontrol

Negatif

Perlakuan I

Perlakuan II

Perlakuan III

Diberi makanan tinggi lemak dan kolesterol

Uji Kadar serum profil lipid dan MDA

Tidak diberi

perlakuan

Ekstrak

andrografolid

4,5 mg/hari +

CMC Na 1%

Diberi

CMC Na 1%

kombinasi

atorvastatin

+ekstrak

sambiloto

(1:1) 4,5 mg/hari

Atrovastatin

4,5 mg/hari + CMC Na 1%

Hari ke-0

Hari

ke-61

Hari ke-90

Diberi pakan

standar

Analsiis data secara statistik

30 ekor tikus putih jantan galur Wistar, BB 150-200 g, umur 4 minggu telah diadaptasi selama 1 minggu

10

DAFTAR PUSTAKA

Evans, M.D. dan Cooke, M.S. 2006. Lipid- and Protein-Mediated Oxidative Damage to DNA.

In: Singh, K.S., editor. Oxidative Stress, Disease and Cancer. Singapura: Mainland Press.

p. 201-220.

Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas: Potensi dan Aplikasinya dalam

Kesehatan. Yogyakarta: Kanisius. p. 49-60.

Wahyuni, S. Unpublished. Asupan Minyak Ikan Lemuru (Sardinella Longiceps Fish Oil)

Sebagai Antiinflamasi Melalui Penurunan TNF-, IL-6, dan Anti Dislipidemia Melalui

Peningkatan HDL dan Penurunan LDL Pada Tikus Wistar Jantan.

Hardini, D., Yuwanta, T., Supadmo, dan Zuprizal. 2007. Pengaruh Telur Beromega-3 dan 6

Hasil Olahan terhadap Profil Lipid Darah Tikus Rattus norvegicus L. Normal dan

Hiperkolesterolemia. Media Peternakan. 30(1): 26-34.

Halliwell, B., Gutteridge, J.M.C. 2007. Free Radicals in Biology and Medicine. Fourth edition.

New York. Oxford University Press.

Hendromartono S. Peran Radikal Bebas terhadap Komplikasi Vaskuler. Majalah Penyakit

Dalam Udayana 2000;1:89-92

Suryohudoyo P. Oksidan, Antioksidan dan Radikal bebas. Dalam: Ilmu Kedokteran Molekuler.

Kapita Selekta. Jakarta: Sagung Seto. 2000.h. 31-46.

Murray RK et al. 2003. Biokimia Harper. Andi Hartono, penerjemah. Jakarta: Penerbit Buku

Kedokteran EGC.

Sivananthan, M and M. Elamaran. 2013. Medicinal and pharmacological properties of

Andrographis paniculata. International Journal of Biomolecules and Biomedicine (IJBB).

Vol. 3(2),1-12

Song, Y., S.P.Liu, Z. Jin, J. Qin dan Z. Jiang. 2013. Qualitative and Quantitative Analysis of

Andrographis paniculata by Rapid Resolution Liquid Chromatography/Time-of-Flight

Mass Spectrometry. Molecules, Vol.18. ISSN 1420-3049

Oxford, A.W., F.D. King. 2002. Progress in Medical Chemistry. Amsterdam : Elsevier Science.

P.1-5

Chao, Wen-Wan and BI-Fong Lin. 2010. Isolation and identification of bioactive compounds

in Andrographis paniculata. http://www.cmjournal.org/content/5/1.17. Page:7-15.