ekstraksi dan uji aktivitas enzim lipase
DESCRIPTION
EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE. EKSTRAKSI ENZIM LIPASE. Lipase (triacyl glycerol acylhydrolase, EC. 3.1.1.3) enzim yang menghidrolisis triasilgliserol menjadi asam lemak bebas dan gliserol dan mempunyai aktivitas maksimum pada daerah interface minyak dan air - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE
EKSTRAKSI ENZIM LIPASELipase (triacyl glycerol acylhydrolase, EC.
3.1.1.3) enzim yang menghidrolisis triasilgliserol menjadi asam lemak bebas dan gliserol dan mempunyai aktivitas maksimum pada daerah interface minyak dan air
Produk hasil hidrolisis yang lain adalah monogliserida dan digliserida.
Penggunaan enzim lipase antara lain pankreas, susu, tanaman yang menghasilkan trigliserida (seperti kacang, kedelai), kapang dan bakteri.
Reaksi Trigliserida
Faktor hidrolisis lipaseSuhupHKonsentrasi substratKonsentrasi Enzim
Satuan Aktivitas EnzimSatuan unit ( U ) yang didfinisikan sebagai
jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per menit pada kondisi tertentu. Satuan 1 Unit Enzim (UE) : mol per menit
Sistem SI; dengan satuan KATAL yang didefinisikan sebagai : jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per detik ( 1 KAT = 60 x 106 Unit) atau 1 Unit = 16.67 nanokatal . Sistem ini belum banyak diterima secara luas
Tujuan PraktikumMempraktikkan cara menguji
aktivitas lipase dari kacang tanah dan dedak padi
Menghitung aktivitas enzim
Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Dedak Padi
Bahan◦dedak padi◦susu sapi segar ◦dietil eter ◦buffer phospat pH 7.5◦NaOH 0.1 N◦indikator PP◦alkohol
Alatcorong pipet volume 10 mlkertas saring bola hisapmagnetik stirer gelas ukur 50 mlsentrifuse gelas bekermortar buretWater bath pengadukerlenmeyer 100 ml pipet tetesneraca analitik
Dedak padi sebanyak 10 gram
ditambah 50 ml dietileter, aduk-aduk dan gojog untuk melarutkan lemak.
Saring dengan kertas saring, filtratnya berisi lemak dan turunannya yang larut dalam dietil eter.
Ampas yang diperoleh ditambah dengan 40 ml 50 mM bufer phosphat pH 7 atau 40 ml 10 mM Tris HCL Bufer pH 7,5
Campuran tersebut dimagnetik stirer selama 30 menit.
Selanjutnya saring dengan kain saring dua lapis.
Filtratnya disentrifugasi, supernatan merupakan ekstrak enzim kasar yang terlarut dalam buffer.
Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Kacang Tanah
Bahan:susu sapi segarkacang tanahalkoholbuffer phospat pH 6.5Indikator NaOH 0,1 NIndikator pp
Hancurkan 5 gram kacang tanah Tambahkan 50 ml 0,1 N NaCl atau 0,1 M buffer phospat
pH 6,5 biarkan 30 menit pada suhu kamar. Saring dengan kertas saring kasar. Filtrat yang
diperoleh merupakan ekstrak enzim lipase kasar. Substrat (susu sapi segar) dipanaskan suhu 80oC
selama 10 menit. Sebanyak 8 ml substrat (susu sapi pasteurisasi)
dimasukkan dalam labu Erlenmeyer 100 ml dan seimbangkan suhunya dalam penangas air 370C.
Tambahkan 2 ml ekstrak enzim lipase kasar. Inkubasikan selama 10 menit, 370C. Setelah
inkubasi tambahkan 40 ml alkohol. Sebagai blanko adalah susu sebanyak 8 ml
ditambah 2 ml larutan pengekstrak enzim (Larutan NaCl atau Buffer phosphat) dan 40 ml alkohol tanpa dilakukan inkubasi.
Tambahkan 5 tetes indikator pp pada msing-masing sampel dan blanko, kemudian titrasi dengan 0,1 N NaOH sehingga berubah menjadi mencapai warna PINK .
Aktivitas enzim dinyatakan dalam mol / menit ml enzim atau Unit/ml
Aktivitas lipase = ( ts- tb ) NaOH x M NaOH x1000 Volume enzim x menitSatuan aktivitas lipase = μmol/ ml enz mnt
Dengan : ts = titrasi sample tb = titrasi blanko waktu inkubasi = 10 menit M NaOH = Molaritas NaOH 1000 berasal dari konversi mmol = 1000
μmol
% kemurnian = 100% x aktivitas spesifik sampel enzim
aktivitas spesifik enzim murni