EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE

EKSTRAKSI ENZIM LIPASE

Lipase (triacyl glycerol acylhydrolase, EC. 3.1.1.3) enzim yang menghidrolisis triasilgliserol menjadi asam lemak bebas dan gliserol dan mempunyai aktivitas maksimum pada daerah interface minyak dan air

Produk hasil hidrolisis yang lain adalah monogliserida dan digliserida.

Penggunaan enzim lipase antara lain pankreas, susu, tanaman yang menghasilkan trigliserida (seperti kacang, kedelai), kapang dan bakteri.

Reaksi Trigliserida

Faktor hidrolisis lipaseSuhupHKonsentrasi substratKonsentrasi Enzim

Satuan Aktivitas EnzimSatuan unit ( U ) yang didfinisikan

sebagai jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per menit pada kondisi tertentu. Satuan 1 Unit Enzim (UE) : mol per menit

Sistem SI; dengan satuan KATAL yang didefinisikan sebagai : jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per detik ( 1 KAT = 60 x 106 Unit) atau 1 Unit = 16.67 nanokatal . Sistem ini belum banyak diterima secara luas

Tujuan PraktikumMempraktikkan cara menguji

aktivitas lipase dari kacang tanah dan dedak padi

Menghitung aktivitas enzim

Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Dedak Padi

Bahan◦dedak padi◦susu sapi segar ◦dietil eter ◦buffer phospat pH 7.5◦NaOH 0.1 N◦indikator PP

◦alkohol

Alat

corong pipet volume 10 ml

kertas saring bola hisapmagnetik stirer gelas ukur

50 mlsentrifuse gelas bekermortar buretWater bath pengadukerlenmeyer 100 ml pipet tetesneraca analitik

Dedak padi sebanyak 10 gram

ditambah 50 ml dietileter, aduk-aduk dan gojog untuk melarutkan lemak.

Saring dengan kertas saring, filtratnya berisi lemak dan turunannya yang larut dalam dietil eter.

Ampas yang diperoleh ditambah dengan 40 ml 50 mM bufer phosphat pH 7 atau 40 ml 10 mM Tris HCL Bufer pH 7,5

Campuran tersebut dimagnetik stirer selama 30 menit.

Selanjutnya saring dengan kain saring dua lapis.

Filtratnya disentrifugasi, supernatan merupakan ekstrak enzim kasar yang terlarut dalam buffer.

Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Kacang Tanah

Bahan:susu sapi segarkacang tanahalkoholbuffer phospat pH 6.5Indikator NaOH 0,1 NIndikator pp

Hancurkan 5 gram kacang tanah Tambahkan 50 ml 0,1 N NaCl atau 0,1 M buffer phospat

pH 6,5 biarkan 30 menit pada suhu kamar. Saring dengan kertas saring kasar. Filtrat yang

diperoleh merupakan ekstrak enzim lipase kasar. Substrat (susu sapi segar) dipanaskan suhu 80oC

selama 10 menit. Sebanyak 8 ml substrat (susu sapi pasteurisasi)

dimasukkan dalam labu Erlenmeyer 100 ml dan seimbangkan suhunya dalam penangas air 370C.

Tambahkan 2 ml ekstrak enzim lipase kasar. Inkubasikan selama 10 menit, 370C. Setelah

inkubasi tambahkan 40 ml alkohol. Sebagai blanko adalah susu sebanyak 8 ml

ditambah 2 ml larutan pengekstrak enzim (Larutan NaCl atau Buffer phosphat) dan 40 ml alkohol tanpa dilakukan inkubasi.

Tambahkan 5 tetes indikator pp pada msing-masing sampel dan blanko, kemudian titrasi dengan 0,1 N NaOH sehingga berubah menjadi mencapai warna PINK .

Aktivitas enzim dinyatakan dalam mol / menit ml enzim atau Unit/ml

Aktivitas lipase = ( ts- tb ) NaOH x M NaOH x1000 Volume enzim x menitSatuan aktivitas lipase = μmol/ ml enz mnt

Dengan : ts = titrasi sample tb = titrasi blanko waktu inkubasi = 10 menit M NaOH = Molaritas NaOH 1000 berasal dari konversi mmol =

1000 μmol

% kemurnian = 100% x aktivitas spesifik sampel enzim

aktivitas spesifik enzim murni