efek analgesik ekstrak etanol daun zaitun olea...
TRANSCRIPT
EFEK ANALGESIK EKSTRAK ETANOL DAUN ZAITUN
(Olea europaea L.) TERHADAP TIKUS SPRAGUE-DAWLEY
YANG DIINDUKSI NYERI DENGAN METODE TAIL
IMMERSION
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN
OLEH:
Taqiyya Maryam
NIM: 11141030000066
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN DAN PROFESI DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1439 H/2017 M
v
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum warahmatullahi wabarakatuh,
Puji dan syukur ke hadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat dan karunia-
Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Shalawat serta salam senantiasa
tercurah kepada Rasulullah SAW, yang telah menuntun umat manusia dari zaman
jahiliyyah ke zaman yang terang akan pengetahuan seperti sekarang ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik berkat
keterlibatan banyak pihak. Oleh karena itu penulis ingin menyampaikan penghargaan dan
ucapan terima kasih kepada:
1. Prof. Dr. H. Arif Sumantri, M.Kes selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan (FKIK) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. dr. Nouval Shahab, Sp.U, Ph.D, FICS, FACS selaku Ketua Program Studi
Kedokteran dan Pendidikan Dokter (PSKPD) FKIK UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta.
3. dr. Nurul Hiedayati, Ph.D. selaku dosen pembimbing I dan Ibu Nurlaely Mida R.,
S.Si, M.Biomed, DMS selaku dosen pembimbing II yang telah memberikan
inspirasi penelitian, arahan dan nasihat kepada penulis sehingga penulis
mendapatkan banyak ilmu baru terkait penelitian yang membantu penulis dalam
proses penulisan skripsi.
4. Bapak Chris Adhiyanto, M.Biomed, Ph.D selaku penanggung jawab riset PSKPD
angkatan 2014, yang telah mendukung dan memberikan solusi terkait masalah
riset.
5. Dosen PSKPD FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta yang telah memberikan
ilmu pengetahuan sebagai bekal bagi penulis agar menjadi dokter muslim yang
bermanfaat di masyarakat.
6. Laboran MPR, Biokimia dan MPH FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta yaitu
Mbak Ayi dan Pak Rahmadi yang telah membantu memfasilitasi akses
laboratorium sehingga penulis dapat menjalankan penelitian dengan baik.
vi
7. Kedua orang tua penulis, Moh. Dhandhang Purwadi (Ayah) dan Sylva Rijanti
(Ibu), yang mendukung penuh, memotivasi dan mendoakan penulis agar
penulisan skripsi ini dapat segera selesai dengan baik serta membawa manfaat.
8. Adik penulis, Aqila Hanifah, yang selalu ada untuk mendengarkan keluhan
penulis terkait penyusunan skripsi, serta menghibur, memberi saran, dan
memotivasi penulis di saat sulit dan sedih.
9. Teman-teman satu kelompok riset, Nadia Khairunnisa, Fitria Hafidzoh, Carin
Libel Octa Herina, dan Zakiyah Widiyanti yang telah memberikan banyak
bantuan dan dukungan. Terima kasih telah meluangkan waktu untuk
mengingatkan penulis agar terus semangat dalam menulis skripsi.
10. Sahabat penulis, Nurul Fathimah dan Neti Kurniawati, yang selalu ada untuk
berbagi banyak hal dengan penulis.
11. Sahabat SMA penulis, Putri Qurrotul Aini, teman konsultasi skripsi yang setia
membantu jika penulis mengalami kesulitan dalam penulisan skripsi.
12. Teman-teman satu angkatan PSKPD 2014, yang mendukung penulis selama
proses penulisan skripsi.
13. Semua pihak yang terlibat baik secara langsung maupun tidak langsung dalam
pengerjaan skripsi ini yang namanya tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Akhir kata, semoga skripsi ini dapat bermanfaat untuk perkembangan penelitian
selanjutnya.
Wassalamualaikum warahmatullahi wabarakatuh.
Ciputat, 2 November 2017
Taqiyya Maryam
vii
ABSTRAK
Taqiyya Maryam. Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter. UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta. Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Zaitun (Olea europaea
L.) terhadap Tikus Sprague-Dawley yang Diinduksi Nyeri dengan Metode Tail
Immersion. 2017.
Latar belakang: Daun zaitun mengandung oleuropein sebagai senyawa fenol utama
yang dapat menghambat kanal kalsium dan menimbulkan analgesia. Tujuan:
Mengetahui efek analgesik ekstrak etanol daun zaitun (OLE) pada tikus Sprague-Dawley
yang diinduksi nyeri dengan metode tail immersion. Metode: 25 ekor tikus Sprague-
Dawley dibagi menjadi 5 kelompok (n = 5): Kelompok kontrol negatif (phosphate
buffered saline (PBS) i.p.), kontrol positif (natrium diklofenak 10 mg/kg i.p.), dan 3
kelompok perlakuan (ekstrak etanol daun zaitun (OLE) 100 mg/kg, 300 mg/kg, dan 500
mg/kg i.p.). Metode tail immersion digunakan untuk menginduksi nyeri pada tikus. Data
berupa durasi waktu antara kontak dengan stimulus termal dan reaksi (periode latensi)
dicatat dalam satuan detik. Hasil: Pemberian OLE meningkatkan rata-rata periode latensi
secara signifikan pada menit ke-30 dan menit ke-60 setelah injeksi (p = 0,001 dan p =
0,045; secara berturut). Persentase analgesik tertinggi dicapai pada menit ke-30 oleh
kelompok yang diberi ekstrak etanol dosis 500 mg/kg (14,04%). Kesimpulan: Ekstrak
etanol daun zaitun memiliki efek analgesik pada tikus.
Kata Kunci: ekstrak etanol daun zaitun (Olea europaea L.), analgesik, tail immersion
ABSTRACT
Taqiyya Maryam. Medical Studies and Medical Education Program. UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta. Effect of Olive Leaf Ethanolic Extract in Pain-Induced
Sprague-Dawley Rats by Tail Immersion Test . 2017.
Background: Olive leaf has oleuropein as the main phenol which could inhibit calcium
channel and induce analgesia. Objective: The aim of this study is to know the analgesic
effect of olive leaf ethanolic extract (OLE) in pain-induced Sprague-Dawley rats by tail
immersion test. Method: 25 Sprague-Dawley rats was divided into 5 groups (n = 5):
Negative control group (phosphate buffered saline (PBS) i.p.), positive control group
(sodium diclofenac 10 mg/kg i.p.), and 3 variable groups (OLE 100 mg/kg, 300 mg/kg,
and 500 mg/kg i.p.). Tail immersion test was used to induce pain in rats. The data was
recorded as duration of thermal stimulus contact time and reaction time was defined
(latency period) in seconds. Result: Administration of OLE could increase the average
of latency period significantly in 30 minutes and 60 minutes after injection (p = 0,001
and p = 0,045, respectively). The highest percentage of analgesic was by administration
of 500 mg/kg i.p. OLE (14.04%) in 30 minutes after injection. Conclusion: Olive leaf
ethanolic extract has analgesic property in rats.
Keywords: olive leaf (Olea europaea L.) ethanolic extract, pain, analgesic, tail
immersion
viii
DAFTAR ISI
LEMBAR JUDUL ..........................................................................................................i
LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN .......................................................................ii
LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................................iii
LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI .............................................................................iv
KATA PENGANTAR ....................................................................................................v
ABSTRAK ......................................................................................................................vii
DAFTAR ISI ...................................................................................................................viii
DAFTAR TABEL ...........................................................................................................xi
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................................xii
DAFTAR GRAFIK .........................................................................................................xii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................................xiv
DAFTAR SINGKATAN ................................................................................................xv
BAB I
PENDAHULUAN .........................................................................................................1
1.1 Latar Belakang .........................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah .....................................................................................................2
1.3 Hipotesis ...................................................................................................................3
1.4 Tujuan Penelitian ......................................................................................................3
1.4.1 Tujuan Umum ................................................................................................3
1.4.2 Tujuan Khusus ...............................................................................................3
1.5 Manfaat penelitian ...................................................................................................3
1.5.1 Bagi Peneliti ..................................................................................................3
1.5.2 Bagi Pendidikan ............................................................................................3
1.5.3 Bagi Penyelenggaraan Pelayanan Kesehatan ................................................4
ix
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................................. 4
2.1 Daun Zaitun (Olea europaea L.) ............................................................................... 4
2.1.1 Karakteristik Umum Zaitun ........................................................................... 4
2.1.2 Kandungan dan Manfaat ................................................................................ 6
2.1.3 Ekstrak Daun Zaitun dan Efek Analgesik ...................................................... 8
2.2 Nyeri ........................................................................................................................10
2.3 Analgesik ................................................................................................................12
2.3.1 Natrium Diklofenak ......................................................................................13
2.4 Uji Nyeri Akut pada Hewan Coba ..........................................................................14
2.4.1 Metode Tail Immersion .................................................................................16
2.5 Kerangka Teori .......................................................................................................18
2.6 Kerangka Konsep ....................................................................................................19
2.7 Definisi Operasional ...............................................................................................20
BAB III
METODE PENELITIAN .............................................................................................22
3.1 Desain Penelitian ....................................................................................................22
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian .................................................................................22
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian ..............................................................................22
3.3.1 Populasi .........................................................................................................22
3.3.2 Sampel ...........................................................................................................22
3.3.3 Kriteria Inklusi ..............................................................................................23
3.3.4 Kriteria Eksklusi ............................................................................................23
3.4 Variabel Penelitian ..................................................................................................23
3.4.1 Variabel Bebas .............................................................................................23
3.4.2 Variabel Tergantung ....................................................................................23
3.5 Alat dan Bahan Penelitian .......................................................................................24
3.5.1 Alat ...............................................................................................................24
3.5.2 Bahan ............................................................................................................24
x
3.6 Cara Kerja Penelitian .............................................................................................24
3.6.1 Determinasi Daun Zaitun (Olea europaea L.) ............................................24
3.6.2 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Zaitun .....................................................24
3.6.3 Adaptasi Hewan Coba .................................................................................24
3.6.4 Pemberian Perlakuan pada Hewan Coba ....................................................25
3.6.5 Uji Efek Analgesik dengan Metode Tail Immersion ..................................25
3.7 Alur Penelitian .......................................................................................................27
3.8 Analisis Data Statistik ...........................................................................................28
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN .....................................................................................29
4.1 Uji Analgesik dengan Metode Tail Immersion ......................................................29
4.1.1 Rata-rata Periode Latensi ............................................................................29
4.1.2 Persentase Analgesik ...................................................................................34
4.2 Keterbatasan Penelitian .........................................................................................36
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN ...........................................................................................37
5.1 Kesimpulan ............................................................................................................37
5.2 Saran ......................................................................................................................37
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................................38
LAMPIRAN ...................................................................................................................41
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Kandungan Oleuropein Berdasarkan Bagian Zaitun .......................................... 8
Tabel 3.1 Kelompok Penelitian......................................................................................... 23
Tabel 4.1 Rata-rata dan Standar Deviasi Periode Latensi ................................................. 30
Tabel 4.2 Hasil Uji Kruskal-Wallis Rata-rata Periode Latensi berdasarkan Waktu ......... 31
Tabel 4.3 Persentase Analgesik berdasarkan Waktu ........................................................ 35
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Pohon Zaitun ................................................................................................ 5
Gambar 2.2 Daun Zaitun Tampak Depan dan Belakang ................................................... 6
Gambar 7.1 Daun Zaitun Kering ..................................................................................... 43
Gambar 7.2 Ekstrak Etanol Daun Zaitun ......................................................................... 43
Gambar 7.3 Injeksi Ekstrak Etanol Daun Zaitun ............................................................. 43
Gambar 7.4 Uji Tail Immersion ....................................................................................... 43
Gambar 7.5 Penghitungan dan Pencatatan Periode Latensi ........................................... 43
xiii
DAFTAR GRAFIK
Grafik 4.1 Hasil Uji Mann-Whitney Rata-rata Periode Latensi Menit ke-30 .................32
Grafik 4.2 Hasil Uji Mann-Whitney Rata-rata Periode Latensi Menit ke-60 .................33
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Surat Determinasi Ekstrak Daun Zaitun ......................................................41
Lampiran 2 Perhitungan Sampel .....................................................................................42
Lampiran 3 Dokumentasi Penelitian ...............................................................................43
Lampiran 4 Perhitungan Dosis........................................................................................44
Lampiran 5 Data Periode Latensi dan Rata-rata Periode Latensi ...................................45
Lampiran 6 Analisis Data Statistik Rata-rata Periode Latensi........................................47
Lampiran 7 Riwayat Penulis ...........................................................................................52
xv
DAFTAR SINGKATAN
cAMP : Cyclic adenosine monophosphate
COX : Cyclooxygenase
GDP : Guanosine diphosphate
GTP : Guanosine triphosphate
i.p. : Intraperitoneal
NSAID : Nonsteroid anti-inflammatory drugs
OLE : Olive leaf ethanol extract
PGE2 : Prostaglandin
PBS : Phosphate buffered saline
1
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Zaitun (Olea europaea L.) merupakan tumbuhan asal Mediterania yang
telah dibudidayakan manusia sejak lebih dari 7000 tahun yang lalu.1 Zaitun
bahkan telah disebutkan beberapa kali dalam Alquran, di antaranya pada surah Al
An’am ayat 99, At-Tin ayat 1-2, Abasa ayat 28, dan An-Nahl ayat 11.
Diriwayatkan dari Umar bin Khattab RA bahwa Nabi Muhammad SAW bersabda:
“Makan dan berminyaklah dengan zaitun karena ia berasal dari pohon yang
diberkati.” (HR. Tirmidzi).
Produk zaitun utama adalah minyak zaitun yang banyak digunakan sebagai
bahan campuran makanan, sehingga zaitun ditanam secara luas. Selain untuk
kepentingan komersial, berbagai bagian zaitun dikenal sebagai ramuan tradisional
untuk mengobati penyakit. Minyak zaitun dicampur dengan jus lemon untuk
mengobati batu empedu. Buah dan daun zaitun kering digunakan untuk
menyembuhkan diare, infeksi sistem respirasi, dan saluran kemih. Daunnya
dimakan sebagai terapi berbagai penyakit saluran pencernaan dan pembersih
mulut. Seduhan ekstrak daun zaitun segar dalam air panas diminum untuk
mengobati hipertensi dan menginduksi diuresis.2
Zaitun yang ditanam di Indonesia sulit menghasilkan buah karena proses
pembungaan dan pemecahan dormansi membutuhkan suhu rendah. Namun
daunnya dapat dihasilkan karena fase vegetatif zaitun tumbuh baik selama
memperoleh suhu hangat dan sinar matahari cukup.3
Oleuropein sebagai kandungan fenol utama berbagai bagian pohon zaitun
diyakini menimbulkan efek terapeutik. Oleuropein terdapat dalam berbagai bagian
pohon zaitun, tetapi kandungan tertinggi ada pada daun zaitun. Berdasarkan
laporan penelitian Esmaeili-Mahani (2010) ekstrak etanol daun zaitun dosis 50
mg/kg, 100 mg/kg, dan 200 mg/kg yang diinjeksikan secara intraperitoneal (i.p.)
memberikan efek analgesik (p < 0,05) pada tikus Wistar yang diinduksi nyeri
dengan metode tail flick serta kandungan oleuropein pada ekstrak tersebut dapat
2
menghambat kanal Ca2+
. Secara fisiologis ion kalsium berperan pada sensitivitas
terhadap nyeri, dan inhibisi terhadap kalsium menginduksi analgesia.4
Nyeri didefinisikan oleh The International Association for the Study of Pain
(IASP) sebagai pengalaman sensori dan emosional yang tidak menyenangkan
disebabkan oleh kerusakan jaringan. Nyeri merupakan manifestasi klinis yang
umum dari beragam penyakit dan berpotensi menurunkan kualitas hidup
penderitanya. Oleh sebab itu penelitian terkait tata laksana terhadap nyeri yang
tepat sangat dibutuhkan.
Metode uji nyeri idealnya dilakukan pada manusia, tetapi sulit terlaksana
akibat kendala etik. Uji nyeri pada hewan pun dianggap sangat perlu dilakukan
untuk pengembangan terapi analgesik yang lebih baik. Uji nyeri dengan hewan
coba berupa tikus dan mencit lebih banyak dilakukan dalam lima tahun terakhir.
Model uji nyeri yang sering digunakan adalah tail flick, yaitu dengan memberikan
stimulus berupa suhu panas pada bagian distal ekor tikus dan menghitung durasi
antara waktu kontak dengan stimulus dan gerak refleks tikus mengangkat ekornya
untuk menghindari stimulus dalam satuan detik (periode latensi). Metode yang
digunakan dalam penelitian ini adalah variasi dari tail flick yaitu tail immersion.
Stimulus nyeri diberikan melalui air yang dipanaskan dan dipertahankan pada
suhu konstan, kemudian ekor tikus dicelupkan ke dalamnya. Metode tail
immersion yang menguji nyeri akut ini sederhana, tidak merusak jaringan pada
lokasi pemberian stimulus, hasil dapat dikuantifikasi, serta tidak terpengaruh oleh
pemberian stimulus berulang.5
Adanya potensi efek analgesik daun zaitun, keterbatasan jumlah penelitian
terkait efek analgesik ekstrak daun zaitun, serta kemampuan tumbuh daun zaitun
yang mencukupi di Indonesia merupakan dasar ketertarikan penulis untuk meneliti
efek analgesik ekstrak etanol daun zaitun pada tikus Sprague-Dawley dengan
metode tail immersion.
1.2 Rumusan Masalah
Rumusan masalah pada penelitian ini adalah:
3
Apakah ekstrak etanol daun zaitun (Olea europea L.) memberikan efek analgesik
terhadap tikus Sprague-Dawley yang diinduksi nyeri dengan metode tail
immersion?
1.3 Hipotesis
Ekstrak etanol daun zaitun (Olea europaea L.) memberikan efek analgesik.
1.4 Tujuan Penelitian
1.4.1 Tujuan Umum
Mengetahui efek analgesik ekstrak etanol daun zaitun (Olea europaea L.)
terhadap tikus Sprague-Dawley yang diinduksi dengan metode tail immersion.
1.4.2 Tujuan Khusus
Mengetahui aktivitas analgesik ekstrak etanol daun zaitun dari perbandingan
rata-rata periode latensi dan persentase aktivitas analgesik.
1.5 Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan manfaat:
1.5.1 Bagi Peneliti
Sebagai pengalaman melakukan penelitian metode eksperimen dan
penerapan terhadap teori yang telah dipelajari selama pendidikan di Program
Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta.
1.5.2 Bagi Pendidikan
Penelitian ini diharapkan dapat menambah pengetahuan dan meningkatkan
pemahaman terkait efek ekstrak analgesik etanol daun zaitun pada tikus yang
diinduksi nyeri dengan metode tail immersion.
4
1.5.3 Bagi Penyelenggaraan Pelayanan Kesehatan
Penelitian ini dapat digunakan sebagai pertimbangan terapi analgesik
alternatif bahan alam pada pelayanan kesehatan, terutama pelayanan primer.
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Zaitun (Olea eropaea L.)
2.1.1 Karakteristik Umum Zaitun
Gambar 2.1 Pohon zaitun
Sumber: Dokumen pribadi
Zaitun merupakan tanaman asli daerah Mediterania. Budidaya zaitun juga
berkembang di luar daerah Mediterania, yakni di negara-negara beriklim subtropis
dan bersuhu hangat seperti Amerika Serikat, Australia, Cina dan Afrika Selatan.6
Agar tumbuh dengan baik, zaitun membutuhkan iklim yang kering dan hangat
serta banyak pancaran sinar matahari, namun suhu rendah seperti saat musim
dingin juga diperlukan untuk berbuah. Suhu optimum untuk berbuah dan
berbunga adalah 18-22°C. Suhu di atas 30°C dapat merusak bunga, tetapi pohon
zaitun umumnya dapat bertahan hidup pada suhu yang lebih tinggi. Pohon zaitun
6
dapat tumbuh dan produktif pada rentang kualitas tanah yang cukup luas, kecuali
pada tanah yang tergenang air, salinitas tinggi, atau terlalu basa (pH > 8,5).7
Di Indonesia zaitun dapat tumbuh dengan baik pada fase vegetatif sepanjang
mendapatkan suhu hangat dan sinar matahari yang cukup. Fase generatif sulit
tumbuh karena membutuhkan suhu rendah untuk pembungaan dan pemecahan
dormansi.3 Maka pohon zaitun di Indonesia cenderung menghasilkan daun dan
jarang menghasilkan buah.
Gambar 2.2 Daun zaitun tampak depan dan belakang
Sumber: Dokumen pribadi
Pohon zaitun adalah tumbuhan evergreen yang dapat hidup dalam jangka
waktu lama hingga mencapai ribuan tahun. Tinggi pohon zaitun dapat mencapai
4-8 meter. Batang mudanya berwarna hijau, dan berubah menjadi abu-abu ketika
tua. Daun zaitun berbentuk lanceolate, oblanceolate atau elips menyempit dengan
panjang berkisar 1,5 cm hingga 9 cm, serta lebar antara 0,5-2 cm. Daun zaitun
memiliki lapisan kitin pada permukaan bagian atas sehingga tampak berwarna
hijau mengkilap, sedangkan bagian bawah daun dilapisi peltat sehingga berwarna
hijau keabuan. Bunga zaitun berukuran kecil dengan diameter antara 4-6 mm,
berwarna putih kekuningan dan terdiri dari dua macam, yaitu bunga hermaprodit
7
(memiliki struktur reproduksi jantan dan betina) dan bunga jantan. Buah zaitun
mempunyai variasi bentuk mulai dari bulat, oval hingga sedikit memanjang
dengan ukuran 2-3 cm. Buah yang masih muda berwarna hijau, berubah menjadi
merah hingga ungu kehitaman ketika masak. 6,7
Taksonomi Olea europaea 2:
Kingdom : Plantae
Division : Angiosperms
Class : Eudicots
Order : Lamiales
Family : Oleaceae
Genus : Olea
Species : europaea
2.1.2 Kandungan dan Manfaat Terapeutik Zaitun
Pohon zaitun termasuk tumbuhan berbuah tertua yang dibudidayakan oleh
manusia. Bahkan zaitun tercantum pada beberapa ayat Alquran, salah satunya
dalam Surat Al-An’am ayat 99: “Dan Dialah yang menurunkan air dari langit,
lalu Kami tumbuhkan dengan air itu segala macam tumbuh-tumbuhan maka Kami
keluarkan dari tumbuh-tumbuhan itu tanaman yang menghijau; Kami keluarkan
dari tanaman yang menghijau itu butir yang banyak; dan dari mayang kurma,
mengurai tangkai-tangkai yang menjulai, dan kebun-kebun anggur, dan (Kami
keluarkan pula) zaitun dan delima yang serupa dan yang tidak serupa. Perhatikan
buahnya pada waktu berbuah dan menjadi masak. Sungguh, pada yang demikian
itu ada tanda-tanda (kekuasaan Allah) bagi orang-orang yang beriman.”. Dalil
tersebut menguatkan bahwa zaitun merupakan tumbuhan istimewa yang
bermanfaat.
Bagian yang paling sering dimanfaatkan sejak zaman dahulu adalah buah
dan daun zaitun. Buah zaitun diolah menjadi minyak zaitun, dan dimanfaatkan
untuk bahan campuran makanan, bahan bakar lampu, sabun, kosmetik dan obat.6
Sedangkan daun zaitun dikonsumsi sebagai teh serta ramuan tradisional untuk
8
mengobati penyakit dengan manifestasi klinis demam, salah satunya yakni
malaria, juga penyakit gastrointestinal.2
Minyak zaitun mengandung berbagai macam nutrisi, antara lain
triasilgliserol, asam lemak, senyawa aromatik, sterol, tokoferol, fenol, dan
sebagainya.8 Zaitun mengandung senyawa metabolit sekunder konsentrasi tinggi
yaitu senyawa fenolat yang bermanfaat bagi kesehatan tubuh. Diantara berbagai
senyawa fenolat, oleuropein dinilai sebagai senyawa utama yang menimbulkan
efek terapeutik.2 Oleuropein menyebabkan produk zaitun mentah mempunyai rasa
pahit, paling banyak ditemukan pada daun, biji, dan buah zaitun yang belum
matang.9
Tabel 2.1 Kandungan Oleuropein Berdasarkan Bagian Zaitun
Bagian Kandungan Oleuropein
Daun zaitun 2,1-134 mg/g (DW)
34,0-38,1 mg/g (FW)
Batang zaitun 11-18,9 mg/g (DW)
Akar zaitun 1,9-6,0 mg/g (DW)
Bunga zaitun 15,3-20.9 mg/g (FW)
Buah zaitun 0,4-21,7 mg/g (DW)
0,3-50,8 mg/g (FW)
Virgin olive oil 0,0-11,2 mg/g
FW: fresh weight; DW: dry weight
Sumber: Effects of Olive Oleuropein in Human Health. Barbaro, 20149
Menurut laporan beberapa penelitian, efek oleuropein terhadap kesehatan di
antaranya yakni antikanker, antimikroba, antivirus, hepatoprotektif,
neuroprotektif, antioksidan, antiaterogenik, antiinflamasi, dan analgesik.8,9
Di
antara manfaat tersebut, efek analgesik zaitun berpotensi untuk diteliti lebih lanjut
melihat masih minimnya jumlah studi terkait dan pentingnya pengembangan
9
tatalaksana terhadap nyeri sebagai manifestasi klinis dari berbagai penyakit yang
cukup sering ditemui.
Hasil penelitian Esmaeili-Mahani dkk. (2010) terhadap tikus Wistar
menunjukkan injeksi intraperitoneal ekstrak etanol daun zaitun dosis 50-200
mg/kg menimbulkan efek analgesik pada tes hot-plate dan tail-flick, serta
menurunkan respon nyeri secara signifikan pada fase pertama dan fase kedua tes
formalin untuk ekstrak etanol daun zaitun dosis 200 mg/kg i.p.4
Secara fisiologis, ion kalsium berperan dalam regulasi jaras nyeri dan
inhibisi kalsium berkontribusi menimbulkan sifat antinosisepsi. Di sisi lain,
diketahui oleuropein dapat bersifat sebagai calcium channel blocker. Namun,
menurut laporan penelitian Haloui (2011), diduga efek analgesik ekstrak daun
zaitun berhubungan dengan efek antiinflamasinya yang dapat menghambat
sintesis prostaglandin,4,10
Penelitian Khalatbary dkk. dan Impelizzeri dkk. membuktikan bahwa
oleuropein mengurangi ekspresi sitokin proinflamasi TNF-α dan IL-1β.10
Hal ini
secara tidak langsung menghambat enzim cyclooxygenase-2 (COX-2) yang
membantu mengubah asam arakidonat menjadi berbagai mediator inflamasi,
diantaranya prostaglandin (PGE2). Prostaglandin diketahui menyebabkan
sensitisasi pada reseptor nyeri terhadap sensasi mekanik dan kimiawi sehingga
menimbulkan keadaan hiperalgesia.11
2.1.3 Ekstrak Daun Zaitun dan Efek Analgesik
Budidaya pohon zaitun tidak hanya bertujuan memanfaatkan buahnya untuk
diolah menjadi minyak zaitun, namun daun zaitun juga telah lama dimanfaatkan
sebagai obat tradisional berbagai penyakit, diantaranya yakni penyakit dengan
manifestasi klinis berupa nyeri. Di Lebanon, daun zaitun digunakan untuk
menyembuhkan rematik dan neuralgia. Masyarakat Iran juga juga
menggunakannya untuk mengurangi nyeri otot dan nyeri sendi.8
Senyawa fenol merupakan kandungan utama yang bertanggungjawab atas
potensi efek farmakologis zaitun.8 Kandungan polifenol daun zaitun segar dapat
mencapai 10%.10
Lima kelompok senyawa fenol yang terdapat dalam daun zaitun
yaitu: oleuropeosides (oleuropein dan verbascoside), flavones (luteolin-7-
10
glucoside, apigenin-7-glucoside, diosmetin-7-glucoside, luteolin dan diosemetin),
flavonols (rutin), flavan-3-ols (catechin) dan substituted phenols (tyrosol,
hydroxytyrosol, vanilin, vanilic acid, dan caffeic acid). Namun senyawa fenol
yang terbanyak adalah oleuropein, diikuti hydroxytyrosol, luteolin-7-glucoside,
apigenin-7-glucoside, dan verbascoside.12
Kandungan oleuropein pada daun
zaitun lebih banyak dibanding produk zaitun lainnya.2 Rentang kadar oleuropein
pada minyak zaitun adalah 0,005%-0,12%, sedangkan pada daun zaitun mencapai
1%-14%.13
Laporan penelitian Haloui (2011) menyimpulkan bahwa oleuropein dan
hydroxytyrosol memiliki efek analgesik dan antiinflamasi. Uji analgesik ekstrak
oleuropein-rich dan hydroxytyrosol-rich dari daun zaitun dengan metode acetic
acid-induced writhing pada mencit menunjukkan adanya penurunan jumlah geliat
signifikan, hal ini berhubungan dengan pengeluaran substansi endogen, salah
satunya yakni prostaglandin. Oleh karena itu diduga oleuropein dan
hydroxytyrosol terlibat dalam inhibisi sintesis prostaglandin. Dengan demikian
terdapat hubungan antara efek analgesik perifer kedua senyawa tersebut dengan
efek antiinflamasinya.10
Selain itu uji analgesik dengan metode tail-flick dan hotplate yang
dilakukan oleh Esmaeili-Mahani dkk. (2010) menunjukkan bahwa injeksi ekstrak
etanol daun zaitun 200 mg/kg intraperitoneal pada tikus Wistar menimbulkan
aktifitas antinosisepsi dimulai sejak 15 menit pasca injeksi. Puncak kerja dicapai
30 menit pasca injeksi pada uji tail-flick dan 45 menit pasca injeksi untuk uji
hotplate, kemudian bertahan secara signifikan hingga 15 menit setelahnya pada
kedua uji. Diperkirakan bahwa kemampuan blokade kanal kalsium yang dimiliki
ekstrak daun zaitun berakibat pada penurunan Ca2+
intraneuron sehingga
menginduksi analgesia.4
Proses ekstraksi banyak digunakan dalam industri obat dan makanan untuk
memperoleh zat aktif tertentu yang bermanfaat bagi kesehatan. Proses ini
membutuhkan suatu solvent (pelarut) untuk melarutkan zat aktif tersebut. Menurut
hasil penelitian Lazos (2013), pelarut yang digunakan dalam pembuatan ekstrak
berpengaruh signifikan terhadap total kandungan fenol dalam ekstrak daun zaitun.
Adanya perbedaan polaritas pelarut berkontribusi terhadap solubilitas senyawa
11
fenol daun zaitun. Kandungan fenol paling tinggi terdapat pada ekstrak daun
zaitun dengan pelarut etanol. Ekstrak metanol daun zaitun juga menghasilkan total
fenol yang cukup tinggi, namun etanol lebih dipilih dan dianggap sebagai pelarut
yang paling sesuai untuk karena toksisitas metanol. Persentase senyawa fenol
pada ekstrak daun zaitun dengan pelarut etanol, metanol, n-propanol, serta
isopropanol dan etil asetat secara berturut-turut yakni 90,8%; 75,5%; 50,2%;
49,5%.14
Beberapa faktor lainnya di luar proses ekstraksi yang dapat berpengaruh
terhadap komposisi kandungan fenol daun zaitun antara lain adalah varian zaitun,
kondisi cuaca, keadaan tanah, waktu panen daun dan kondisi penyimpanan.13,15
2.2 Nyeri
Nyeri merupakan suatu persepsi yang mempunyai fungsi proteksi terhadap
kerusakan jaringan. Definisi nyeri menurut The International Association for the
Study of Pain (IASP) Sub-committee on Taxonomy (1986) ialah “an unpleasant
sensory and emotional experience associated with actual or potential tissue
damage or is described in terms of such damage”.16
Terdapat 2 tipe utama nyeri, yaitu nyeri nosiseptif/nociceptive pain dan
nyeri neuropatik/neuropathic pain. Nyeri nosiseptif muncul ketika jejas pada
jaringan mengaktivasi reseptor nyeri atau nosiseptor yang sensitif terhadap
stimulus yang berpotensi merusak jaringan (noxious). Stimuli yang merangsang
nosiseptor dapat berupa panas, dingin, getaran, regangan serta substansi kimiawi
yang dikeluarkan jaringan sebagai respon terhadap kekurangan oksigen,
kerusakan jaringan atau inflamasi seperti bradikinin, serotonin, histamin, ion
kalium, asam, asetilkolin dan enzim proteolitik. Di samping itu terdapat
prostaglandin dan substansi P yang secara tidak langsung merangsang nyeri
dengan meningkatkan sensitivitas ujung-ujung serat nyeri. Nyeri nosiseptif dibagi
menjadi dua, yaitu nyeri somatik dan viseral. Nyeri somatik dicetuskan oleh
nosiseptor pada permukaan jaringan superfisial (kulit, mukosa pada mulut,
hidung, genital) maupun jaringan profunda seperti tulang, kulit, sendi, otot, dan
jaringan ikat. Contoh nyeri somatik yaitu pada peristiwa trauma benda tajam pada
kulit, sprain, dan kram otot. Nyeri viseral ditimbulkan oleh stimulasi nosiseptor
pada organ internal. Misalnya pada infeksi, distensi akibat akumulasi cairan atau
12
gas, serta regangan dan kompresi akibat tumor. Nyeri neuropatik disebabkan oleh
adanya kerusakan struktur atau disfungsi sel saraf pada sistem saraf perifer atau
sistem saraf pusat. Berbagai proses metabolik, trauma, infeksi, iskemia,
imunologi, toksik maupun kompresi saraf secara mekanik dapat menimbulkan
nyeri neuropatik. Nyeri neuropatik bersifat perifer bila lesi atau penyakit terdapat
pada saraf perifer atau ganglion radiks dorsal, dan dapat juga bersifat sentral jika
lesi atau penyakit mengenai sistem saraf pusat. Nyeri nosiseptif dan neuropatik
yang terjadi bersamaan disebut nyeri campuran/mixed pain. Contohnya yaitu pada
luka bakar, dimana terjadi kerusakan jaringan dan sel saraf, juga pada kanker,
dimana proses infiltrasi menyebabkan kompresi dan kerusakan sel saraf.17
Berdasarkan waktu, nyeri diklasifikasikan menjadi nyeri akut dan nyeri
kronik. Nyeri akut berlangsung kurang dari 30 hari, sedangkan nyeri kronik
berlangsung lebih dari 3 bulan. Nyeri akut ditandai dengan onset segera setelah
jejas, intensitas berat, namun durasinya pendek. Sedangkan nyeri kronik memiliki
karakteristik kontinyu atau rekuren dan bertahan melebihi waktu normal
penyembuhan. Nyeri kronik dapat diawali oleh nyeri akut yang muncul dalam
waktu lama, terjadi rekuren akibat adanya stimulus noxious terus-menerus, atau
eksaserbasi jejas berulang. Bagaimanapun pembagian nyeri berdasarkan waktu ini
tidak berpengaruh terhadap manajemen nyeri.18
Mekanisme nyeri terdiri dari 4 proses, yaitu transduksi, transmisi, modulasi,
dan persepsi. Transduksi merupakan proses konversi stimulus noxious ke bentuk
yang dapat diakses oleh otak, dimulai dengan teraktivasinya nosiseptor.
Selanjutnya adalah transmisi, yaitu proses pengiriman impuls listrik dari sistem
saraf tepi ke sistem saraf pusat dan otonom. Transmisi impuls berlangsung
melalui serat saraf yang bersinaps di kornu dorsal medulla spinalis, kemudian
dihantarkan melalui traktus spinotalamikus ke nukleus ventral posterior lateral dan
ventromedial talamus. Proses transduksi dan transmisi disebut sebagai nosisepsi,
yakni penyampaian informasi adanya potensi kerusakan jaringan ke otak.
Sementara itu, proses modulasi diartikan sebagai kontrol sistem saraf terhadap
transmisi jalur penghantaran impuls yang dapat terjadi di bagian mana saja,
namun umumnya mengacu pada pengaturan di kornu dorsal medulla spinalis. Dari
kedua nukleus talamus, informasi nosiseptif dihantarkan ke berbagai bagian
13
kortikal dan subkortikal meliputi amigdala, hipotalamus, periaquaduktal grisea,
ganglia basal, dan regio-regio di korteks serebri. Bagian insula dan korteks
cingulata anterior diketahui secara konsisten teraktivasi ketika nosiseptor
terstimulasi oleh stimuli noxious dan berasosiasi dengan subjektivitas persepsi
nyeri.16,19
2.3 Analgesik
Analgesia merupakan keadaan dimana tidak ada rasa nyeri. Sedangkan
analgesik merujuk pada terapi digunakan untuk mengurangi hingga
menghilangkan rasa nyeri. Secara umum anlagesik dibagi menjadi dua, analgesik
golongan opioid dan nonopioid.
Analgesik opioid bersifat seperti opium yang berasal dari getah Papaver
somniferum. Opium mengandung sekitar 20 jenis alkaloid, di antaranya adalah
morfin, kodein, tebain, dan papaverin. Analgesik opioid bekerja pada reseptor
opioid yang berpasangan dengan protein G pada membran neuron, yaitu reseptor
mu, delta, dan kappa. Ketiga reseptor tersebut banyak ditemukan di SSP dan
medulla spinalis.11
Ikatan opioid agonis dengan reseptor opioid mengaktivasi
reseptor, menyebabkan subunit alfa protein G mengubah ikatan molekul
guanosine diphosphate (GDP) menjadi guanosine triphosphate (GTP). Kompleks
α-GTP kemudian terdisosiasi dari kompleks β-gama. Kedua kompleks tersebut
bebas berinteraksi dengan berbagai protein target sehingga menyebabkan
penurunan cyclic adenosine monophosphate (cAMP), inhibisi kanal kalsium yang
berperan terhadap influks ion Ca2+
serta aktivasi kanal kalium mengakibatkan
efluks ion K+. Hal ini menimbulkan efek hiperpolarisasi neuron dan terhambatnya
pengeluaran neurotransmitter.20
Analgesik nonopioid yang sering digunakan antara lain adalah nonsteroid
antiinflammation drugs (NSAID). Kerja NSAID yakni menghambat enzim
cyclooxygenase (COX) yang berperan dalam konversi asam arakidonat menjadi
berbagai mediator proinflamasi, salah satunya prostaglandin. Prostaglandin
meningkatkan kadar cAMP sehingga sensitisasi nosiseptor meningkat akibat
penurunan ambang kanal natrium via jalur protein kinase A. Maka inhibisi sintesis
prostaglandin berperan menginduksi analgesia.21
14
2.3.1 Natrium Diklofenak
Natrium diklofenak merupakan salah satu obat golongan NSAID yang
banyak diresepkan sebagai terapi untuk osteoarthritis, rheumatoid arthritis,
dismenorrhea dan penyakit lainnya, juga digunakan oleh masyarakat secara bebas
tanpa melalui resep untuk atasi berbagai keluhan nyeri ringan hingga sedang.22,23
Natrium diklofenak memiliki nama kimia 2-[(2,6- dichlorophenyl)amino]-
benzeneacetic acid dan termasuk kelompok preferential COX-2 inhibitor.23
Terhambatnya COX-2 berefek pada penurunan produksi prostaglandin, sehingga
melemahkan respon sistem saraf perifer dan sentral terhadap stimulus noxious,
juga mengurangi sensasi nyeri yang telah ada sebagai respon terhadap stimulus
tersebut. Oleh karenanya NSAID dianggap berpotensi sebagai terapi analgesik
preventif.24
Natrium diklofenak diabsorpsi secara cepat melalui saluran cerna. Absorpsi
mencapai 100% pasca administrasi per oral, tetapi hanya 60% yang mencapai
sirkulasi sistemik akibat first-pass metabolism. Makanan tidak secara signifikan
memperpanjang waktu absorpsi pada pemberian per oral. Lebih dari 99% natrium
diklofenak di sirkulasi berikatan dengan protein, utamanya albumin, namun secara
farmakokinetik dianggap tidak signifikan karena adanya proses asosiasi-disosiasi
yang cepat sehingga obat segera terdisosiasi dan melewati membran vaskular ke
jaringan.23
Natrium diklofenak dimetabolisme di hepar oleh CYP2C.11
Metabolit
dieksresikan 65% melalui urin dan 35% melalui empedu.23
Efek samping yang
ditimbulkan natrium diklofenak antara lain yakni mual, gastritis, eritema kulit, dan
peningkatan enzim transaminase reversible pada 15% pasien, maka penggunaan
obat ini pada pasien dengan ulkus peptikum harus berhati-hati. Dosis yang
dianjurkan untuk dewasa yakni 100-150 mg terbagi 2-3 dosis.11
Walaupun
demikian, natrium diklofenak memiliki indeks terapi yang cukup tinggi diantara
NSAID lainnya.23
2.4 Uji Nyeri Akut pada Hewan Coba
Uji nyeri menggunakan hewan coba telah dilakukan sejak akhir abad ke-19
dan dinilai krusial untuk memahami mekanisme nyeri. Sejak saat itu, berbagai
metode uji nyeri dengan hewan coba banyak dikembangkan.25
Hewan coba
15
menjadi pilihan agar prosedur penelitian yang bersifat invasif, manipulatif, dan
tidak boleh dilakukan pada manusia akibat kendala etik dapat dilaksanakan,
sehingga reliabilitas penelitian lebih baik.26
Hewan coba yang banyak digunakan
antara lain yakni tikus dan mencit.
Uji nyeri terhadap stimulus durasi pendek atau nyeri akut merupakan jenis
uji yang paling sering dilakukan. Uji ini dinilai cukup mendekati keadaan alamiah
dimana stimulus yang diberikan berupa suhu, mekanik, dan kimiawi.27
Stimulus
noxious diberikan dalam jangka waktu pendek dan dapat dihindari oleh hewan
coba, sehingga meminimalisasi kemungkinan pelanggaran etik. Prinsip umum uji
nyeri akut pada hewan coba yakni pemberian stimulus, dan kuantifikasi respon
behavioral berupa refleks menghindar maupun refleks rekuperatif.5
Berikut berbagai metode uji nyeri akut yang dikelompokkan berdasarkan
stimulus noxious yang diberikan:
(1) Stimulus Suhu
Tail-flick
Dilakukan fiksasi/restrain pada hewan coba dengan ekor terjulur
pada bidang datar. Setengah distal ekor diberi stimulus termal
berasal dari kumparan logam/coil yang dipanaskan dengan suhu
dijaga konstan. Normalnya hewan coba merespon dengan refleks
berupa gerakan hentakkan ekor. Durasi antara waktu kontak ekor
dengan stimulus dan waktu refleks menghindar dicatat sebagai
periode latensi. 5,25
Tail-immersion
Metode ini mirip dengan tail-flick, hanya saja stimulasi termal yang
diberikan pada 3-5 cm distal ekor berasal dari air panas (51°-
55°C).5,25
Hot-plate
Hewan coba ditempatkan di atas hot-plate atau permukaan panas
dengan suhu dijaga antara 50°-56°C, dibiarkan bebas tanpa fiksasi.
Tetapi area lokomosi dibatasi oleh dinding silinder Plexiglas. Target
stimulus termal yakni telapak kaki belakang hewan coba. Reaksi
16
terhadap nyeri dapat berupa gerakan menjilat telapak kaki, bergetar,
atau meloncat. Periode latensi dicatat sebagai data.5,25
Cold stimuli
Termasuk metode yang jarang digunakan dibandingkan dengan
metode uji nyeri stimulus termal. Pada uji ini, aseton diaplikasikan
pada telapak kaki hewan coba. Ketika kontak dengan kulit, aseton
akan terevaporasi dan menimbulkan sensasi dingin. Reaksi hewan
coba meliputi refleks menghindar, bergetar dan menjilat telapak
kaki.5
(2) Stimulus Mekanik
Tail-clip
Hewan coba difiksasi, dan bagian proksimal ekor dijepit erat
terhadap suatu objek. Periode latensi terhadap reaksi hewan coba
berupa menjilat, menggigit maupun berusaha meraih ekor dicatat.5
von Frey filament
Hewan coba diletakkan di dalam area berdinding Plexiglas, dengan
permukaan lantai berupa jaring-jaring kawat dan dibiarkan bebas
tanpa fiksasi. Kemudian serat nilon diselipkan melalui celah jaring-
jaring kawat dan ditempelkan pada plantar belakang hewan coba.
Respon yang muncul dapat berupa refleks menghindar dari serat
nilon dan menjilat plantar dihitung dan dicatat.5
(3) Stimulus Kimiawi
Formalin
Hewan coba diberi injeksi subkutan formalin 1-5% sebanyak 20-50
µl di bagian dorsal, atau di bagian plantar kaki belakang. Formalin
menyebabkan inflamasi, sehingga hewan coba bereaksi dengan
menjilat, menggigit ataupun mengangkat telapak kaki. Pengamatan
dilakukan hingga 40-90 menit pascainjeksi formalin. Pengamatan
terhadap reaksi dibagi menjadi fase awal/akut yang merupakan
respon dari injeksi formalin terhadap nosiseptor, dan fase
17
akhir/tonik, yakni respon terhadap sensitisasi sentral serta inflamasi
perifer.5
Abdominal constriction/writhing
Metode ini bertujuan menguji nyeri viseral. Hewan coba diberi
injeksi intraperitoneal asam asetat glacial 0,1-0,9% dengan dosis 10
ml/kg. Adanya reaksi berupa geliat/writhing (gerakan meregangkan
torso dengan punggung membentuk lekukan ke arah ventral)
dihitung. Pengamatan dilakukan hingga 30-40 menit pascainjeksi
asam asetat.5
2.3.1 Metode Tail Immersion
Metode tail immersion merupakan metode uji nyeri akut yang dinilai dari
periode latensi atau rentang antara waktu kontak dengan stimulus dan waktu
munculnya respon berupa refleks menghindar. Refleks ini merupakan refleks
spinal, namun prosesnya dimodulasi oleh batang otak.5 Selain itu, suatu observasi
menunjukkan bahwa morphine-like drugs memperpanjang periode latensi pada
tikus yang bagian distal ekornya dicelupkan pada air bersuhu 55°C.26
Dengan
demikian metode tail immersion dianggap mampu memprediksi efikasi opioid
dari suatu analgesik.27
Kelebihan metode tail immersion adalah, uji coba yang dilakukan berulang
tidak berpengaruh pada hasil akibat proses adaptasi.5 Namun kekurangannya yaitu
proses restrain untuk memfiksasi hewan coba pada metode ini secara signifikan
berpengaruh terhadap respon behavioral dan fisiologis terhadap nyeri dan
berpotensi mempengaruhi sensitivitas baseline pain hewan coba. Penelitian Mogil
et al. (2001) menunjukkan bahwa restrain menggunakan kain/handuk
menyebabkan sedikit stress-induced analgesia dibandingkan dengan imobilisasi
menggunakan silinder Plexiglas.27
18
2.5 Kerangka Teori
Stimulus termal
durasi pendek
Aktivasi nosiseptor
Transmisi impuls ke kornu
dorsal medulla spinalis
Talamus
Traktus
spinotalamikus
Regio kortikal,
subkortikal dan
batang otak
Jalur descendingRefleks
menghindarPersepsi nyeri
Kandungan
senyawa fenol
utama: oleuropein
& hydroxytyrosol
Periode latensi
Ekstrak etanol
daun zaitun
Inhibisi kanal
kalsium
Inhibisi
pengeluaran
neurotransmitter
19
2.6 Kerangka Konsep
Tikus
Sprague- Dawley
Diinjeksi ekstrak
etanol daun zaitun
Pengukuran
periode latensi
Refleks
menghindar
Diinduksi nyeri akut
dengan metode tail
immersion
Efek analgesik
opioid (sentral)
20
2.7 Definisi Operasional
Variabel Definisi Cara Pengukuran Alat Ukur Skala
Dosis
ekstrak
etanol
daun
zaitun
Jumlah dosis
ekstrak etanol
yang diberikan
pada tikus
melalui injeksi
intraperitoneal.
Berat badan tikus
ditimbang, kemudian
jumlah ekstrak
etanol diberikan
sesuai dosis yang
ditentukan, yaitu 100
mg/kg, 300 mg/kg
dan 500 mg/kg.
Neraca
analitik
Numerik
Periode
latensi
Durasi antara
waktu kontak
ekor tikus
dengan stimulus
termal dan
waktu saat tikus
menggerakkan
ekor menjauhi
stimulus (refleks
menghindar).
3 cm bagian distal
ekor tikus
dicelupkan ke dalam
air yang dipanaskan
pada suhu 55°C
dijaga konstan.
Dilakukan
penghitungan waktu
mulai dari waktu
ekor dicelupkan
hingga tampak ekor
bergerak
menghindari
stimulus. Waktu
diukur dalam satuan
detik.
Stopwatch Numerik
21
Variabel Definisi Cara Pengukuran Alat Ukur Skala
Persentase
analgesik
Aktivitas
analgesik setelah
pemberian
perlakuan
dibandingkan
dengan sebelum
pemberian
perlakuan.
Nilai periode latensi
setelah perlakuan
dikurangi dengan
periode latensi
sebelum perlakuan,
dibagi dengan durasi
waktu maksimal
pemberian induksi
nyeri (cutoff time)
yaitu 15 detik
dikurangi dengan
periode latensi
sebelum perlakuan,
kemudian dikalikan
dengan 100.
- Numerik
22
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Desain penelitian yang digunakan adalah eksperimental laboratorium, yakni
dengan menguji efek analgesik dari ekstrak etanol daun zaitun pada tikus galur
Sprague-Dawley menggunakan metode tail immersion.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada tanggal 29 Mei-10 Juni 2017. Pembuatan
ekstrak etanol daun zaitun (Olea europea L.) dilakukan di Balittro (Balai
Penelitian Tanaman Rempah dan Obat), Bogor, Jawa Barat. Pemeliharaan tikus
dilakukan di Animal House FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Perlakuan dan
pengamatan terhadap hewan coba dilakukan di Laboratorium Farmakologi FKIK
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian
3.3.1 Populasi
Populasi dalam penelitian ini adalah tikus galur Sprague-Dawley jantan
dengan berat 300 gram serta usia 18 bulan yang dibudidayakan dan telah
diverifikasi sebelumnya di Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.
Tikus Sprague-Dawley jantan dipilih karena berdasarkan penelitian Vierck (2008)
lebih sensitif terhadap stimulasi termal.
3.3.2 Sampel
Berdasarkan rumus Mead, jumlah sampel minimal penelitian adalah 3 ekor
per kelompok, sedangkan jumlah sampel maksimal yaitu 5 ekor. Oleh karena itu
jumlah total sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah 25 ekor tikus
jantan Sprague-Dawley yang dibagi dalam 5 kelompok perlakuan, sehingga
23
terdapat 5 ekor tikus dalam tiap kelompok. Cara menghitung sampel tercantum
dalam Lampiran 2.
Tabel 3.1 Kelompok Penelitian
No. Nama Kelompok Perlakuan
1 Kontrol negatif PBS (i.p.)
2 Kontrol positif PBS + natrium diklofenak 10 mg/kg
(i.p.)
3 OLE 100 PBS + ekstrak etanol daun zaitun
(OLE/olive leaf extract) 100 mg/kg
(i.p.)
4 OLE 300 PBS + OLE 300 mg/kg (i.p.)
5 OLE 500 PBS + OLE 500 mg/kg (i.p.)
3.3.3 Kriteria Inklusi
a. Tikus jantan galur Sprague-Dawley usia 18 bulan
b. Tidak ada kelainan anatomi sebelum perlakuan
c. Tidak tampak kusam, rambut rontok, atau botak sebelum perlakuan
3.3.4 Kriteria Eksklusi
a. Tikus sakit selama penelitian berlangsung
b. Tikus mati selama penelitian berlangsung
3.4 Variabel Penelitian
3.4.1 Variabel Bebas
Variabel bebas pada penelitian ini adalah pemberian dosis ekstrak etanol
daun zaitun yang diinjeksikan intraperitoneal.
24
3.4.2 Variabel Tergantung
Variabel tergantung pada penelitian ini adalah periode latensi atau durasi
waktu antara awal pencelupan ekor tikus pada air panas dan reaksi tikus
mengangkat ekor.
3.5 Alat dan Bahan Penelitian
3.5.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian antara lain yaitu kandang tikus,
tempat makan dan minum tikus, neraca analitik, tabung reaksi, spatula, vortex,
beaker glass (100 mL), hotplate, termometer raksa, restrainer tikus (modifikasi
dari botol air mineral plastik ukuran 600 mL), spuit 1 cc, sarung tangan, dan
stopwatch.
3.5.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian yakni tikus Sprague-Dawley jantan,
makanan dan minuman tikus, sekam (bedding), ekstrak etanol daun zaitun, PBS
10%, dan natrium diklofenak.
3.6 Cara Kerja Penelitian
3.6.1 Determinasi Daun Zaitun (Olea europaea L.)
Sebelum dibuat menjadi ekstrak, determinasi perlu dilakukan untuk
memastikan kebenaran identitas tanaman. Dalam penelitian ini daun zaitun yang
telah terkumpul dideterminasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI),
Bogor, Jawa Barat. Surat determinasi daun zaitun terlampir dalam Lampiran 1.
3.6.2 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Zaitun
Sampel berupa daun zaitun kering ditimbang terlebih dahulu, didapat hasil
penimbangannya yakni 196 gram. Daun zaitun direndam dengan alkohol 96%
sebanyak 2,5 liter selama semalam untuk satu kali rendaman, pada proses
pembuatan ekstrak ini dilakukan tiga kali rendaman. Setelah itu rendaman daun
zaitun ditampung menggunakan beaker glass, kemudian dimasukkan dalam labu
25
evaporator untuk dievaporasi dengan suhu 35°C dan putaran 90° selama 2 hari
hingga pekat.
3.6.3 Adaptasi Hewan Coba
Hewan coba berupa tikus Sprague-Dawley jantan dengan berat 300 gram
dan berusia 18 minggu menjalani proses adaptasi di Animal House FKIK UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta selama 14 hari. Semua tikus diperlakukan sama dari
segi pemberian makanan, minuman dan tempat tinggal. Pemeliharaan seperti
pembersihan kandang, penggantian bedding, serta pemberian makan dan minum
dilakukan setiap 1-3 hari sekali. Adaptasi bertujuan agar tikus tidak stres dan
mempengaruhi hasil penelitian.
3.6.4 Pemberian Perlakuan pada Hewan Coba
Tikus ditimbang terlebih dahulu, didapat rata-rata berat tikus Sprague-
Dawley yang digunakan dalam penelitian ini adalah 300 gram. Kemudian tikus
diberikan perlakuan secara i.p. menggunakan spuit 1 cc sesuai kelompok
berdasarkan dosis sebagaimana penjelasan berikut:
Kelompok kontrol negatif diberi larutan PBS 10% sebanyak 0,5 ml
Kelompok kontrol positif diberi natrium diklofenak 10 mg/kg + PBS 10%
sebanyak 0,1 ml
Kelompok OLE 100 diberi ekstrak etanol daun zaitun 100 mg/kg + PBS 10%
sebanyak 0,5 ml
Kelompok OLE 300 diberi ekstrak etanol daun zaitun 300 mg/kg + PBS 10%
sebanyak 0,5 ml
Kelompok OLE 500 diberi ekstrak etanol daun zaitun 500 mg/kg + PBS 10%
sebanyak 0,5 ml
3.6.5 Uji Efek Analgesik dengan Metode Tail Immersion
Tikus dimasukkan ke dalam restrainer yang terbuat dari modifikasi botol air
mineral ukuran 600 mL sehingga tikus terfiksasi dengan ekor menjuntai keluar.
Kemudian bagian ujung ekor tikus yang sudah ditandai sebelumnya, yakni 3 cm
dari distal ekor, dicelupkan ke dalam beaker glass berisi air yang dipanaskan
26
menggunakan hotplate hingga suhu 55°C dan dijaga konstan. Pengamatan
dilakukan terhadap reaksi refleks tikus mengangkat ekor akibat stimulus termal
pada saat sebelum diberi perlakuan, serta setelah diberi perlakuan, yakni pada
menit ke-30, menit ke-60, menit ke-90, menit ke-120, menit ke-150, dan menit ke-
180. Waktu pencelupan ekor tikus dalam air panas dibatasi maksimal 15 detik.
Data yang diambil berupa periode latensi atau waktu antara pencelupan ekor tikus
hingga muncul reaksi refleks mengangkat ekor. Periode latensi dihitung dalam
satuan detik dengan stopwatch.
27
3.7 Alur Penelitian
Tikus Sprague-
Dawley jantan
Aklimatisasi
selama 7 hari
Pengukuran periode
latensi awal
Setelah jeda ≥ 20 menit, tikus diberi perlakuan sesuai
kelompok (5 kelompok, n=5)
Kelompok
kontrol negatif
(PBS)
Kelompok
kontrol positif
(PBS + natrium
diklofenak)
Kelompok OLE
100
(PBS + OLE 100
mg/kg)
Kelompok OLE
300
(PBS + OLE 300
mg/kg )
Kelompok OLE
500
(PBS + OLE 500
mg/kg)
Injeksi PBS 0,5
ml i.p.
Injeksi PBS
0,1 ml + natrium
diklofenak 10
mg/kg i.p.
Injeksi PBS
0,5 ml + OLE
100 mg/kg i.p.
Injeksi PBS
0,5 ml + OLE
300 mg/kg i.p.
Injeksi PBS
0,5 ml + OLE
500 mg/kg i.p.
Pengukuran periode latensi tiap jeda 30 menit, mulai dari menit ke-30
pasca pemberian perlakuan hingga menit ke-180
Analisis data
penelitian
Kesimpulan
28
3.8 Analisis Data Statistik
Data periode latensi yang diperoleh dari penelitian dihitung rata-ratanya
sehingga diperoleh hasil rata-rata periode latensi. Dari nilai rata-rata dihitung
persentase analgesik menggunakan rumus berikut:4
Anal esik Latensi setelah di eri perlak an Latensi se el m di eri perlak an
(1 detik) Latensi se el m di eri perlak an
Setelah itu data diolah mengunakan International Business Machine
Statistical Package for Social Sciences (IBM SPSS) version 24. Dilakukan uji
Shapiro-Wilk untuk mengetahui distribusi data dan uji Levene untuk melihat
homogenitas data. Didapatkan hasil distribusi data pada penelitian ini tidak
normal, maka dilakukan uji Kruskal-Wallis, dan selanjutnya uji post-hoc Mann-
Whitney.28
29
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Uji Analgesik dengan Metode Tail Immersion
Dilakukan pengukuran periode latensi awal pada semua tikus dalam
kelompok penelitian dengan metode tail immersion, yakni mencelupkan bagian
distal ekor tikus ke dalam air panas suhu konstan 55°C. Setelah diberikan
perlakuan pada masing-masing kelompok secara i.p., dilakukan pengukuran
periode latensi setiap 30 menit hingga menit ke-180 setelah injeksi. Hasil
penelitian berupa data periode latensi diolah menjadi nilai rata-rata periode latensi
dan persentase analgesik.
4.1.1 Rata-rata Periode Latensi
Dalam penelitian ini dilakukan pengukuran periode latensi pada semua
sampel dalam satuan detik. Kemudian dihitung rata-ratanya berdasarkan
kelompok penelitian dan waktu pengamatan, yaitu pada menit ke-30, ke-60, ke-
90, ke-120, ke-150, dan ke-180. Hasilnya ditampilkan dalam tabel sebagai
berikut:
30
Tabel 4.1 Rata-rata dan Standar Deviasi Periode Latensi
Kelompok
Rata-rata ± standar deviasi periode latensi (detik)
Periode
latensi awal
Menit ke-
30
Menit ke-
60
Menit ke-
90
Menit ke-
120
Menit ke-
150
Menit ke-
180
Kontrol
negatif 2,13 ± 0,22 2,20 ± 0,24 2,20 ± 0,26 2,17 ± 0,24 2,15 ± 0,38 2,15 ± 0,38 2,16 ± 0,45
Kontrol
positif 2,19 ± 0,11 2,22 ± 0,28 2,24 ± 0,53 2,37 ± 0,38 2,38 ± 0,40 2,42 ± 0,34 2,46 ± 0,31
OLE 100
mg/kg 2,08 ± 0,15 3,21 ± 0,58 2,61 ± 0,26 2,47 ± 0,30 2,24 ± 0,25 2,17 ± 0,38 2,09 ± 0,29
OLE 300
mg/kg 2,09 ± 0,28 3,73 ± 0,41 2,87 ± 0,65 2,51 ± 0,34 2,28 ± 0,14 2,22 ± 0,45 2,11 ± 0,33
OLE 500
mg/kg 2,25 ± 0,25 4,04 ± 0,70 3,14 ± 0,50 2,91 ± 0,46 2,62 ± 0,42 2,41 ± 0,23 2,31 ± 0,34
Ket.: Kontrol negatif = PBS, Kontrol positif = Natrium diklofenak, OLE 100 mg/kg = Ekstrak
etanol daun zaitun dosis 100 mg/kg, OLE 300 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 300
mg/kg, OLE 500 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 500 mg/kg
Berdasarkan Tabel 4.1 di atas, diketahui bahwa periode latensi sebelum
adanya tindakan perlakuan (sebelum perlakuan) tidak berbeda antar kelompok (p
= 0,822). Periode latensi kelompok kontrol negatif yang diberi PBS cenderung
konstan. Sedangkan pada kelompok kontrol positif yang diberi natrium diklofenak
dosis 10 mg/kg terjadi peningkatan periode latensi dari menit ke-30 sampai menit
ke-180, walaupun nilai rata-ratanya di tiap waktu pengamatan jauh lebih rendah
bila dibandingkan dengan tiga kelompok yang diberi OLE.
Kelompok yang diberi OLE dosis 100 mg/kg, 300 mg/kg dan 500 mg/kg
menunjukkan rata-rata periode latensi tertinggi pada menit ke-30. Nilai rata-rata
periode latensi ketiga kelompok tersebut meningkat berdasarkan jumlah dosis,
semakin besar dosis OLE yang diberikan, maka semakin besar nilai rata-rata
periode latensinya. Namun pada menit ke-60 rata-rata periode latensi ketiga
kelompok tersebut menurun, dan terus menurun secara gradual hingga mencapai
nilai terendah pada menit ke-180.
Dalam penelitian ini dilakukan analisis statistik diawali dengan uji
normalitas untuk mengetahui distribusi data normal atau tidak. Hasilnya adalah
distribusi data tidak normal (p < 0,05). Oleh karena itu dilanjutkan uji Kruskal-
Wallis untuk mengetahui waktu pengamatan mana yang memiliki perbedaan yang
signifikan.
31
Tabel 4.2 Hasil Uji Kruskal-Wallis Rata-rata periode Latensi berdasarkan Waktu
Waktu P value
Sebelum perlakuan 0,822
Menit ke-30 0,001*
Menit ke-60 0,045*
Menit ke-90 0,127
Menit ke-120 0,398
Menit ke-150 0,588
Menit ke-180 0,401
Ket.: *p < 0,05
Berdasarkan Tabel 4.2 diketahui bahwa pada menit ke-30 dan menit ke-
60 nilai p < 0,05. Dengan demikian terdapat perbedaan rata-rata periode latensi
yang signifikan antar kelompok penelitian pada menit ke-30 dan menit ke-60.
Untuk mengetahui kelompok mana saja yang memiliki perbedaan rata-
rata periode latensi yang signifikan pada menit ke-30 dan menit ke-60, maka
dalam dilakukan uji Mann-Whitney. Hasil uji Mann-Whitney disajikan dalam
bentuk grafik berikut:
32
Grafik 4.1 Hasil uji Mann-Whitney Rata-rata Periode Latensi Menit ke-30 Ket: Kontrol negatif = PBS, Kontrol positif = Natrium diklofenak, OLE 100 mg/kg = Ekstrak
etanol daun zaitun dosis 100 mg/kg, OLE 300 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 300
mg/kg, OLE 500 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 500 mg/kg, (*) = p <0,05
Berdasarkan hasil uji Mann-Whitney pada menit ke-30 terdapat perbedaan
rata-rata periode latensi yang signifikan antara kelompok Kontrol negatif yang
diberi PBS dibandingkan dengan kelompok OLE 100 mg/kg (p = 0,009),
kelompok Kontrol negatif yang diberi PBS dibandingkan dengan kelompok OLE
300 mg/kg (p = 0,009), kelompok Kontrol negatif yang diberi PBS dengan
kelompok OLE 500 mg/kg (p = 0,009), kelompok Kontrol positif yang diberi
natrium diklofenak dengan kelompok OLE 100 mg/kg (p = 0,009), kelompok
Kontrol positif yang diberi natrium diklofenak dengan kelompok OLE 300 mg/kg
(p = 0,009), kelompok Kontrol positif yang diberi natrium diklofenak dengan
kelompok OLE 500 mg/kg (p = 0,009), serta kelompok OLE 100 mg/kg dengan
kelompok OLE 500 mg/kg (p = 0,047).
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
5
Kontrol negatif Kontrol positif OLE 100 mg/kg OLE 300 mg/kg OLE 500 mg/kg
Ra
ta-r
ata
pero
de l
ate
nsi
(d
eti
k)
Rata-rata periode latensi menit ke-30
*
*
*
*
*
*
*
33
Hal ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan rata-rata periode latensi
yang signifikan antara kelompok OLE 100 mg/kg, OLE 300 mg/kg, dan OLE 500
mg/kg dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif dan kontrol positif pada
menit ke-30.
Grafik 4.2 Hasil Uji Mann-Whitney Rata-rata Periode Latensi Menit ke-60 Ket: Kontrol negatif = PBS, Kontrol positif = Natrium diklofenak, OLE 100 mg/kg = Ekstrak
etanol daun zaitun dosis 100 mg/kg, OLE 300 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 300
mg/kg, OLE 500 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 500 mg/kg, (*) = p <0,05
Berdasarkan hasil uji Mann-Whitney pada menit ke-60 diketahui bahwa
terdapat perbedaan rata-rata periode latensi yang signifikan antara kelompok
kontrol negatif yang diberi PBS dibandingkan dengan kelompok OLE 300 mg/kg
(p = 0,47), serta kelompok kontrol negatif yang diberi PBS dibandingkan dengan
kelompok OLE 500 mg/kg (p = 0,16).
Hal ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan rata-rata periode latensi
yang signifikan antara kelompok kontrol negatif dibandingkan dengan kelompok
OLE 300 mg/kg dan OLE 500 mg/kg pada menit ke-60.
Peningkatan periode latensi pada kelompok perlakuan dibandingkan dengan
kelompok kontrol negatif menyatakan adanya aktivitas analgesik pada zat yang
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
Kontol negatif Kontrol positif OLE 100 mg/kg OLE 300 mg/kg OLE 500 mg/kg
Ra
ta-r
ata
perio
de
late
nsi
(d
eti
k)
Rata-rata periode latensi menit ke-60
*
*
34
diuji.29
Maka berdasarkan hasil penelitian dan analisis statistik ekstrak etanol daun
zaitun mempunyai efek analgesik.
Oleuropein dan hydroxytyrosol merupakan kandungan utama ekstrak etanol
daun zaitun yang diduga menimbulkan efek farmakologis. Menurut penelitian
Esmeili-Mahani (2012), oleuropein memiliki sifat sebagai calcium channel
blocker sehingga dapat menurunkan ion kalsium intraneuron. Keadaan ini
mencetus antinosisepsi.4 Selain itu Haloui (2011) menyatakan bahwa oleuropein
dan hydroxytyrosol memiliki efek antinosisepsi dengan mekanisme kerja
berhubungan dengan efek antiinflamasinya, yaitu melalui inhibisi sintesis
prostaglandin perifer dan sentral.10
Di sisi lain, hasil rata-rata periode latensi kelompok kontrol positif yang
diberi natrium diklofenak 10 mg/kg terus meningkat sejak menit ke-30 hingga
menit ke-180. Pola ini sesuai dengan penelitian Sankdia (2014) yang
menunjukkan injeksi natrium diklofenak dosis 10 mg/kg i.p. pada tikus Sprague-
Dawley menghasilkan rata-rata periode latensi yang semakin meningkat seiring
berjalannya waktu pengamatan. Nilai rata-rata periode latensi pada menit ke-15,
menit ke-30, menit ke-60 dan menit ke-120 secara berturut-turut yaitu 4,03; 4,6;
5,18; 5,65; dan 6,07 detik.30
Rata-rata periode latensi kelompok kontrol positif
pada penelitian ini lebih rendah bila dibandingkan dengan rata-rata periode latensi
penelitian sebelumnya. Selain itu, hasil analisis uji Mann-Whitney pada
pengamatan di menit ke-30 dan menit ke-60 menyatakan bahwa tidak terdapat
perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dan kelompok kontrol
positif. Hal ini diperkirakan karena sebagian besar natrium diklofenak tidak larut
dalam PBS dan terdapat partikel yang melekat pada dinding spuit maupun jarum
spuit, sehingga saat diinjeksikan pada tikus jumlah dosis yang masuk berkurang.
4.1.2 Persentase Analgesik
Pada penelitian ini dihitung persentase analgesik yang diperoleh dari nilai
rata-rata periode latensi yang dihitung menggunakan rumus. Maka hasilnya
disajikan sebagai berikut:
35
Tabel 4.3 Persentase Analgesik berdasarkan Waktu
Kelompok
% Analgesik
Menit ke-
30
Menit ke-
60
Menit ke-
90
Menit ke-
120
Menit ke-
150
Menit ke-
180
Kontrol
negatif 0,54 0,54 0,31 0,16 0,16 0,23
Kontrol
positif 0,23 0,39 1,41 1,48 1,8 2,11
OLE 100
mg/kg 8,75 4,10 3,02 1,24 0,7 0,08
OLE 300
mg/kg 12,70 6,04 3,25 1,47 1,01 0,15
OLE 500
mg/kg 14,04 6,98 5,18 2,90 1,25 0,47
Ket: Kontrol negatif = PBS, Kontrol positif = Natrium diklofenak, OLE 100 mg/kg = Ekstrak
etanol daun zaitun dosis 100 mg/kg, OLE 300 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 300
mg/kg, OLE 500 mg/kg = Ekstrak etanol daun zaitun dosis 500 mg/kg
Dari Tabel 4.3 di atas dapat dibuat grafik tren persentase analgesik terhadap
waktu. Masing-masing garis mewakili setiap kelompok penelitian.
Berdasarkan Tabel 4.3, persentase analgesik tertinggi dicapai pada menit
ke-30 oleh kelompok yang diberi OLE dosis 500 mg/kg yakni sebesar 14,04%,
kemudian diikuti oleh kelompok yang diberi OLE dosis 300 mg/kg (12,7%) dan
kelompok yang diberi OLE dosis 100 mg/kg (8,75%).
Hasil ini memiliki persamaan pola dengan hasil penelitian Esmaeili-
Mahani et al. (2010), yaitu pemberian OLE dosis 50 mg/kg, 100 mg/kg, dan 200
mg/kg i.p. pada tikus Wistar menunjukkan persentase analgesik lebih tinggi pada
menit ke-30 dibandingkan dengan persentase analgesik pada menit ke-60 dan
menit ke-120. Nilai persentase analgesik pada menit ke-30 meningkat bersamaan
dengan bertambahnya jumlah dosis yang diberikan.4
Persentase analgesik tertinggi yang dicapai pada menit ke-30 dapat
dipengaruhi oleh rute administrasi ekstrak etanol daun zaitun yakni injeksi
intraperitoneal. Laju absorpsi mempengaruhi efek kerja suatu substansi terhadap
waktu. Abdomen mempunyai permukaan yang luas dan banyak pembuluh darah
sehingga injeksi intraperitoneal memfasilitasi laju absorpsi cepat.
36
4.2 Keterbatasan Penelitian
Keterbatasan pada penelitian ini adalah:
1. Uji analgesik hanya menggunakan satu jenis metode yaitu tail immersion
yang terbatas untuk menguji nyeri akut.
2. Pelarut PBS yang digunakan tidak dapat melarutkan natrium diklofenak dan
ekstrak etanol daun zaitun secara sempurna.
37
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Ekstrak etanol daun zaitun memberikan efek analgesik pada tikus Sprague-
Dawley yang diinduksi nyeri dengan metode tail immersion. Rata-rata periode
latensi memiliki perbedaan signifikan pada menit ke-30 (p = 0,001) dan menit ke-
60 (p = 0,045). Persentase analgesik tertinggi dicapai oleh kelompok yang diberi
ekstrak etanol daun zaitun dosis 500 mg/kg i.p. pada menit ke-30 setelah injeksi,
yaitu sebesar 14,04%.
5.2 Saran
Bagi Penelitian
Diperlukan penelitian efek analgesik ekstrak etanol daun zaitun lebih lanjut
menggunakan metode uji nyeri kronik maupun uji nyeri dengan model penyakit
tertentu, serta menggunakan pelarut yang dapat melarutkan ekstrak etanol daun
zaitun lebih baik.
Bagi Pendidikan
Sebaiknya penelitian efek analgesik ekstrak etanol daun zaitun dilanjutkan
dan dikembangkan mengingat potensi manfaatnya dan keutamaan zaitun sebagai
tanaman yang disebutkan dalam Alquran.
Bagi Penyelenggaraan Pelayanan Kesehatan
Ekstrak etanol daun zaitun dapat dipertimbangkan sebagai pilihan terapi
analgesik dari bahan alam.
38
DAFTAR PUSTAKA
1. Hashmi MA, Khan A, Hanif M, Farooq U, Perveen S. Traditional Uses,
phytochemistry, and pharmacology of Olea europaea (Olive). Evid Based
Complement Alternat Med [Internet]. 2015 [dikutip 25 Oktober
2017];2015:1 29. Tersedia pada:
http://www.hindawi.com/journals/ecam/2015/541591/
2. Ben Salem M, Affes H, Ksouda K, Sahnoun Z, Zeghal KM, Hammami S.
Pharmacological activities of Olea europaea leaves. J Food Process Preserv
[Internet]. Desember 2015 [dikutip 25 Oktober 2017];39(6):3128 36.
Tersedia pada: http://doi.wiley.com/10.1111/jfpp.12341
3. Sari AP. Karakter vegetatif tanaman zaitun (Oleo Europaea L.) pada kondisi
tanam yang berbeda serta konsentrasi oleuropein dan asam askorbat pada
daunnya. Inst Pertan Bogor. Juli 2016;1 7.
4. Esmaeili-Mahani S, Rezaeezadeh-Roukerd M, Esmaeilpour K, Abbasnejad M,
Rasoulian B. Olive leaf extract elicits antinociceptive activity, potentiates
morphine analgesia and suppresses morphine hyperalgesia in rats. J
Ethnopharmacol [Internet]. Oktober 2010 [dikutip 25 Oktober
2017];132(1):200 5. Tersedia pada:
http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S037887411000560X
5. Fish R, Danneman PJ, Brown M, Karas A. Anesthesia and analgesia in
laboratory animals. 2 ed. Academic Press; 2011. 549-53.
6. Jain SM, Priyadarshan PM, editor. Breeding plantation tree crops: tropical
species. New York: Springer; 2009. 423-30.
7. Lim TK. Edible medicinal and non-medicinal plants [Internet]. Dordrecht:
Springer Netherlands; 2012 [dikutip 25 Oktober 2017]. 82-100. Tersedia
pada: http://link.springer.com/10.1007/978-94-007-4053-2
8. Omar SH. Oleuropein in olive and its pharmacological effects. Sci Pharm
[Internet]. 2010 [dikutip 25 Oktober 2017];78(2):133 54. Tersedia pada:
http://www.mdpi.com/2218-0532/78/2/133
9. Barbaro B, Toietta G, Maggio R, Arciello M, Tarocchi M, Galli A, et al.
Effects of the olive-derived polyphenol oleuropein on human health. Int J Mol
Sci [Internet]. 14 Oktober 2014 [dikutip 25 Oktober 2017];15(10):18508 24.
Tersedia pada: http://www.mdpi.com/1422-0067/15/10/18508/
10. Haloui E, Marzouk B, Marzouk Z, Bouraoui A, Fenina N. Hydroxytyrosol
and oleuropein from olive leaves: Potent anti-inflammatory and analgesic
activities. J Food Agric Environ. 2011;9(3 4):128 33.
11. Hilal-Dandan R, Brunton L. Goodman and Gilman manual of pharmacology
and therapeutics. McGraw Hill Professional; 2013. 920-21.
39
12. Özcan MM, Matthäus B. A review: benefit and bioactive properties of olive
(Olea europaea L.) leaves. Eur Food Res Technol [Internet]. Januari 2017
[dikutip 25 Oktober 2017];243(1):89 99. Tersedia pada:
http://link.springer.com/10.1007/s00217-016-2726-9
13. Vogel P, Kasper Machado I, Garavaglia J, Terezinha Zani V, de Souza D,
Morelo Dal Bosco S. Polyphenols benefits of olive leaf (Olea europaea L) to
human health. Nutr Hosp. 2015;31(3):1427 33.
14. Lafka T-I, Lazou A, Sinanoglou V, Lazos E. Phenolic extracts from wild olive
leaves and their potential as edible oils antioxidants. Foods [Internet]. 4
Januari 2013 [dikutip 25 Oktober 2017];2(1):18 31. Tersedia pada:
http://www.mdpi.com/2304-8158/2/1/18/
15. Abaza L, Taamalli A, Nsir H, Zarrouk M. Olive tree (Olea europaea L.)
leaves: importance and advances in the analysis of phenolic compounds.
Antioxidants [Internet]. 3 November 2015 [dikutip 25 Oktober
2017];4(4):682 98. Tersedia pada: http://www.mdpi.com/2076-3921/4/4/682/
16. Ardinata D. Multidimensional nyeri. J Keperawatan Rufaidah Sumat Utara.
November 2007;2:77 81.
17. World Health Organization. WHO guidelines on the pharmacological
treatment of persisting pain in children with medical illnesses. World Health
Organization; 2012. 19-20.
18. McMahon SB, editor. Wall and Melzack’s text ook of pain. 6th ed.
Philadelphia, PA: Elsevier/Saunders; 2013. 1153.
19. Garland EL. Pain processing in the human nervous system. Prim Care Clin
Off Pract [Internet]. September 2012 [dikutip 25 Oktober 2017];39(3):561
71. Tersedia pada:
http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0095454312000553
20. Pathan H, Williams J. Basic opioid pharmacology: an update. Br J Pain.
2012;6(1):11 6.
21. Ossipov MH, Lai J, King T, Vanderah TW, Malan TP, Hruby VJ, et al.
Antinociceptive and nociceptive actions of opioids. J Neurobiol [Internet].
Oktober 2004 [dikutip 25 Oktober 2017];61(1):126 48. Tersedia pada:
http://doi.wiley.com/10.1002/neu.20091
22. Ahmad M, Iqbal M, Akhtar N, Murtaza G, Madni MA, Rasool F. Comparison
of bioavailability and pharmacokinetics of diclofenac sodium and diclofenac
potassium in healthy and Escherichia coli induced febrile rabbits. Pak J Zool.
2010;42(4):395 400.
23. B.Chuasuwan, Binjesoh V, Polli JE, Zhang H, Amidon GL, Junginger HE, et
al. Biowaiver Monographs for Immediate Release Solid Oral Dosage Forms:
Diclofenac Sodium and Diclofenac Potassium. J Pharm Sci [Internet]. April
40
2009 [dikutip 25 Oktober 2017];98(4):1206 19. Tersedia pada:
http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0022354916329227
24. Cashman JN. The mechanisms of action of NSAIDs in analgesia. Drugs.
1996;52(5):13 23.
25. Mogil JS. Animal models of pain: progress and challenges. Nat Rev Neurosci
[Internet]. April 2009 [dikutip 25 Oktober 2017];10(4):283 94. Tersedia
pada: http://www.nature.com/doifinder/10.1038/nrn2606
26. Chipkin RE, Berger JG, Billard W, Chapman R, Florentin D, Sassi A, et al.
Inhibition of enkephalinase. Drug Discov Eval Pharmacol Assays.
2013;224:365.
27. Conn PM, editor. Sourcebook of models for biomedical research. Totowa,
N.J: Humana Press; 2008. 778.
28. Dahlan S. Statistik untuk kedokteran dan kesehatan: deskriptif, bivariat, dan
multivariat, dilengkapi aplikasi menggunakan SPSS. 6 ed. Jakarta:
Epidemiologi Indonesia; 2014. 11-4.
29. Zare L, Esmaeili-Mahani S, Abbasnejad M, Rasoulian B, Sheibani V, Sahraei
H, et al. Oleuropein, chief constituent of olive leaf extract, prevents the
development of morphine antinociceptive tolerance through Inhibition of
morphine-induced L-type calcium channel overexpression: oleuropein
prevents the development of morphine tolerance. Phytother Res [Internet].
November 2012 [dikutip 30 Oktober 2017];26(11):1731 7. Tersedia pada:
http://doi.wiley.com/10.1002/ptr.4634
30. Sankdia R, Kaore S. Antinociceptive activity of non-analgesic agents and
their interactions with tramadol and diclofenac in rats. Int J Pharma Bio Sci.
April 2014;5(2):79 90.
41
LAMPIRAN
Lampiran 1
Surat Determinasi Ekstrak Daun Zaitun
42
Lampiran 2
Perhitungan Sampel
Rumus Mead
=
Keterangan:
N = Total dari jumlah individu dalam penelitian (dikurangi 1)
B = Blocking component, mempresentasikan pengaruh limgkungan yang
diperbolehkan dalam suatu penelitian
T = Kelompok uji coba, termasuk kelompok kontrol (dikuragi 1)
E = Derajat kebebasan dari kelompok error, nilainya diantara 10-20
10 ≤ E ≤ 20
E = N B T E = N B T
≥ 10 (N 1) 0 (5 1) ≤ 20 (N 1) 0 (5 1)
≥ 10 N 1 4 ≤ 20 N 1 4
≥ 10 N 5 ≤ 20 N 5
N ≥ 1 N ≤ 2
Jadi jumlah sampel pada penelitian, yait : 1 ≤ N ≤ 2 , artinya minimal
jumlah sampel yang diperlukan pada penelitian ini yaitu 15 sampel, sedangkan
jumlah maksimal sampel yang dibolehkan pada penelitian ini yaitu 25 sampel.
Maka rentang jumlah sampel per kelompok berdasarkan rumus ini adalah 3-5.
43
Lampiran 3
Dokumentasi Penelitian
Gambar 7.3 Injeksi Ekstrak Etanol Daun
Zaitun
Gambar 7.4 Uji Tail Immersion
Gambar 7.5 Pencatatan Periode
Latensi
Gambar 7.1 Daun Zaitun kering Gambar 7.2 Ekstrak Etanol Daun Zaitun
44
Lampiran 4
Perhitungan Dosis
Berat badan tikus rata-rata = 300 g = 0,3 kg
1. Dosis Natrium Diklofenak
Dosis 10 mg/kgBB
= 10 mg x 0,3 kg
= 3 mg /tikus
2. Dosis Ekstrak Etanol Daun Zaitun
Dosis 100 mg/kgBB
= 100 mg x 0,3 kg
= 30 mg /tikus
Dosis 300 mg/kgBB
= 300 mg x 0,3 kg
= 90 mg /tikus
Dosis 500 mg/kgBB
= 500 mg x 0,3 mg
= 150 mg/tikus
45
Lampiran 5
Data Periode Latensi dan Rata-rata Periode Latensi
Kelompok
Periode
latensi awal
Menit ke-
30
Menit ke-
60
Menit ke-
90
Menit ke-
120
Menit ke-
150
Menit ke-
180
I II R I II R I II R I III R I II R I II R I II R
Kontrol
negatif
1,8 2,0 1,9 2,2 1,9 2,05 2,0 2,4 2,2 2,0 2,1 2,05 2,1 2,2 2,15 1,9 2,0 1,95 1,7 2,0 1,85
1,7 2,7 2,2 2,4 2,5 2,45 2,4 2,7 2,55 1,6 2,1 1,85 1,8 1,7 1,75 3,2 2,2 2,7 2,9 2,9 2,9
2,5 1,8 2,15 2,2 2,0 2,1 3,1 2,8 2,95 2,2 2,5 2,35 2,9 2,2 2,55 1,9 2,9 2,4 1,7 2,3 2,0
1,7 2,2 1,95 2,5 2,4 2,45 1,7 2,0 1,85 1,7 3,2 2,45 1,7 1,9 1,8 1,6 2,0 1,8 2,2 2,3 2,25
2,3 2,6 2,45 1,7 2,2 1,95 1,6 1,7 1,65 2,1 2,2 2,15 2,3 2,7 2,5 1,6 2,2 1,9 1,8 1,8 1,8
Rata-rata 2,130 2,200 2,200 2,170 2,150 2,150 2,160
SD 0,220 0,235 0,257 0,239 0,376 0,384 0,449
Kontrol
positif
2,4 2,0 2,2 1,8 2,0 1,9 2,0 2,4 2,2 2,0 2,6 2,3 2,7 3,0 2,85 1,9 2,2 2,05 2,8 2,3 2,55
2,6 2,1 2,35 2,8 1,9 2,35 2,4 2,7 2,55 2,9 2,4 2,65 2,0 1,9 1,95 2,3 3,5 2,9 3,0 2,6 2,8
2,2 1,9 2,05 1,3 3,7 2,5 3,1 2,8 2,95 2,7 3,0 2,85 2,5 2,9 2,7 2,0 2,9 2,45 3,0 2,3 2,65
1,8 2,5 2,15 1,8 2,1 1,95 1,7 2,0 1,85 1,9 2,3 2,1 2,3 2,5 2,4 2,1 3,0 2,55 2,4 2,1 2,25
2,1 2,3 2,2 2,1 2,7 2,4 1,6 1,7 1,65 1,7 2,2 1,95 1,7 2,3 2,0 1,9 2,4 2,15 2,4 1,7 2,05
Rata-rata 2,190 2,220 2,240 2,370 2,380 2,420 2,460
SD 0,108 0,275 0,525 0,375 0,404 0,338 0,305
OLE 100
mg/kg
2,1 2,4 2,25 2,7 3,6 3,15 2,9 2,2 2,55 2,5 3.0 2,05 2,2 1,9 2,05 2,4 2,4 2,4 1,8 2,4 2,1
2,6 1,8 2,2 4,0 4,2 4,2 3,2 2,6 2,9 1,8 2,7 2,25 2,1 2,0 2,05 1,9 2,7 2,3 2,0 2,3 2,15
1,8 2,0 1,9 3,7 2,5 3,1 2,7 2,7 2,7 3,3 2,4 2,85 2,7 2,6 2,65 2,2 2,5 2,35 1,8 1,6 1,7
2,3 1,9 2,1 2,7 3,0 2,85 2,0 2,4 2,2 2,5 2,0 2,25 2,1 2,3 2,2 1,4 1,6 1,5 2,5 2,5 2,5
2,0 1,9 1,95 2,6 2,9 2,75 2,5 2,9 2,7 2,4 2,1 2,25 1,8 2,7 2,25 2,1 2,5 2,3 1,8 2,2 2,0
Rata-rata 2,080 3,210 2,610 2,470 2,240 2,170 2,090
SD 0,152 0,578 0,261 0,303 0,246 0,377 0,288
46
(Lanjutan)
OLE 300
mg/kg
2,5 1,9 2,2 3,9 4,3 4,1 1,9 2,2 2,05 2,4 2,4 2,4 2,0 2,8 2,4 1,9 2,6 2,25 2,1 2,4 2,25
2,1 2,4 2,25 3,4 3,9 3,65 2,3 5,4 3,85 2,1 2,5 2,3 2,3 2,3 2,3 1,5 2,2 1,85 1,8 2,0 1,9
1,7 1,7 1,7 3,9 3,3 3,6 2,8 3,1 2,95 2,2 2,7 2,45 2,3 2,3 2,3 3,1 2,8 2,95 2,4 2,2 2,3
1,7 2,1 1,9 4,0 4,3 4,15 3,6 2,2 2,9 3,3 2,9 3,1 2,4 2,6 2,35 2,3 2,1 2,2 2,2 2,7 2,45
2,2 2,6 2,4 3,3 3,0 3,15 2,4 2,8 2,6 2,0 2,5 2,25 2,2 1,9 2,05 2,1 1,6 185 1,6 1,7 1,65
Rata-rata 2,090 3,730 2,870 2,510 2,280 2,220 2,110
SD 0,284 0,410 0,654 0,342 0,135 0,449 0,327
OLE 500
mg/kg
2,1 2,7 2,4 3,9 4,2 4,05 3,0 2,9 2,95 3,3 2,8 3,05 2,3 2,4 2,35 2,8 2,0 2,4 1,5 2,8 2,15
2,7 1,7 2,2 3,3 3,5 3,4 4,0 3,8 3,9 3,6 3,1 3,35 1,8 2,3 2,05 2,6 2,9 2,75 2,6 1,9 2,25
2,3 1,7 2,0 4,8 5,2 5,0 2,5 3,1 2,8 2,0 2,5 2,25 3,4 2,5 2,95 1,9 2,4 2,15 1,9 2,5 2,2
1,3 2,8 2,05 4,8 4,0 4,4 3,2 4,0 3,6 2,3 3,0 2,65 2,2 3,9 3,05 2,1 2,9 2,5 1,8 2,3 2,05
2,2 3,0 2,6 3,1 3,6 3,35 2,7 2,2 2,45 3,0 3,5 3,25 1,8 3,6 2,7 2,5 2,0 2,25 2,5 3,3 2,9
Rata-rata 2,250 4,040 3,140 2,910 2,620 2,410 2,310
SD 0,250 0,696 0,595 0,456 0,418 0,233 0,338
Ket: I = Pengukuran pertama, II = Pengukuran kedua, R = Rata-rata
47
Lampiran 6
Analisis Statistik Rata-rata Periode Latensi
1. Uji Normalitas
48
(Lanjutan)
2. Uji Kruskal-Wallis
Test Statisticsa,b
Latensi
Awal
Menit ke-
30
Menit ke-
60
Menit ke-
90
Menit ke-
120
Menit ke-
150
Menit ke-
180
Chi-Square 1,525 18,949 9,728 7,182 4,063 2,820 4,041
df 4 4 4 4 4 4 4
Asymp. Sig. ,822 ,001 ,045 ,127 ,398 ,588 ,401
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: Kelompok
3. Uji Mann-Whitney Menit ke-30
Kontrol negatif & Kontrol positif Kontrol negatif & OLE 100 mg/kg
Kontrol negatif & OLE 300 mg/kg Kontrol negatif & OLE 500 mg/kg
49
(Lanjutan)
Kontrol positif & OLE 100 mg/kg Kontrol positif & OLE 300 mg/kg
Kontrol positif & OLE 500 mg/kg OLE 100 mg/kg & OLE 300 mg/kg
OLE 100 mg/kg & OLE 500 mg/kg OLE 300 mg/kg & OLE 500 mg/kg
50
(Lanjutan)
4. Uji Mann-Whitney Menit ke-60
OLE 300 mg/kg & OLE 500 mg/kg
Kontrol negatif & Kontrol positif Kontrol negatif & OLE 100 mg/kg
Kontrol negatif & OLE 300 mg/kg Kontrol negatif & OLE 500 mg/kg
Kontrol positif & OLE 100 mg/kg Kontrol positif & OLE 300 mg/kg
51
(Lanjutan)
Kontrol positif & OLE 500 mg/kg OLE 100 mg/kg & OLE 300 mg/kg
OLE 100 mg/kg & OLE 500 mg/kg OLE 300 mg/kg & OLE 500 mg/kg
52
Lampiran 7
Riwayat Penulis
Identitas :
Nama : Taqiyya Maryam
Jenis Kelamin : Perempuan
Tempat, Tanggal Lahir : Sapporo, 6 Desember 1995
Agama : Islam
Alamat : Puri Serpong 2 Blok C1/4, Babakan, Setu,
Tangerang Selatan, Banten
E-mail : [email protected]
Riwayat Pendidikan :
1. 2002-2008 : SDN Puspiptek
2. 2008-2011 : SMPN 8 Tangerang Selatan
3. 2011-2014 : MAN Insan Cendekia Serpong
4. 2014-Sekarang : Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter
FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta