i
PENGARUH PEMBERIAN INFUSA DAUN SIRSAK (Annona muricata L.)
SECARA SUBKRONIS TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH TIKUS
JANTAN DAN BETINA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu SyaratMemperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Veronika Dita Ayuningtyas
NIM : 098114090
FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA2013
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
kemarin, aku BERMIMPI
hari ini, ku LAKUKAN mimpi itu
TUHANLAH GEMBALAKU,TAK KAN KEKURANGAN AKU
(Mazmur 23:1)
Karya ini kupersembahan untuk :
Yesus Kristus sumber kekuatan dan pengharapanku
Papa yang ada di surga yang telah mendidikku
Mama, abangku Wahyu, adikku Shela serta keluarga besarku
atas doa dan dukungan yang memotivasiku
Sahabat-sahabatku yang telah berbagi suka dan duka
selama perkuliahan
Serta Almamterku tercinta
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas
berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang
berjudul Pengaruh Pemberian Infusa Daun Sirsak (Annona Muricata L.)
Secara Subkronis Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Jantan dan Betina
dengan baik. Penyususnan skripsi ini sebagai salah satu syarat memperoleh gelar
Sarjana Farmasi (S. Farm) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta.
Penulis menyadari bahwa penyelesaian skripsi ini, tentunya tidak terlepas
dari bantuan dan campur tangan berbagai pihak, baik secara langsung maupun
tidak langsung. Oleh karena itu, penulis hendak mengucapkan terimakasih
kepada:
1. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen
Penguji pada skripsi ini atas segala kesabaran, pengarahan, bimbingan, saran,
bantuan, serta motivasi dan masukan kepada penulis dalam pengerjaaan
skripsi ini.
2. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah
banyak memberi masukan dan saran kepada penulis.
3. Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah
banyak memberi masukan dan saran kepada penulis.
4. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt selaku Kepala Penanggungjawab
Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam
penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi
ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
5. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam
determinasi tanaman sirsak (Annona muricata L.).
6. Dokter Ari, Bapak Ratijo, Bapak Heru, Bapak Parjiman, Bapak Kayat, Bapak
Wagiran, Mas Andri selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah
banyak memberikan bantuan selama proses pelaksanaan penelitian.
7. Rekan-rekan dan sahabatku tim sirsak (Annona muricata L.), Christiana
Lambang Kristanti, Galuh Ajeng, Meita Eryanti, Niken Ambar Sayekti, Raras
Pramudita, Suster Imelda atas segala kerjasama, bantuan dan dukungan dalam
pengerjaan skripsi.
8. Sahabat-sahabatku Luluk Rahendra Martha, Novia Sarwoning Tyas, Theresia
Garri Windrawati, Nanda Chris Nurcahyanti atas motivasi, doa, kebersamaan
dan persahabatannya.
9. Seluruh dosen dan teman-teman FSM B 09, FKK B 09 serta seluruh angkatan
2009 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
10. Semua pihak yang penulis tidak dapat menyebutkan satu-persatu yang telah
ikut membantu selama penyusunan skripsi ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh
karena itu, penulis menerima kritik dan saran yang dapat membangun demi
kemajuan dimasa mendatang. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang farmasi,
serta semua pihak, baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun masyarakat.
Yogyakarta, 4 Februari 2013
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .......................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................. iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ...................................................... v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH ........................................................................................................ vi
PRAKATA................................................................................................... vii
DAFTAR ISI................................................................................................ x
DAFTAR TABEL........................................................................................ xiv
DAFTAR GAMBAR ................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN................................................................................ xvii
INTISARI .................................................................................................... xviii
ABSTRACT................................................................................................... xix
BAB I. PENGANTAR................................................................................. 1
A. Latar Belakang...................................................................................... 1
1. Perumusan masalah .......................................................................... 3
2. Keaslian penelitian ........................................................................... 4
3. Manfaat penelitian............................................................................ 5
B. Tujuan Penelitian .................................................................................. 5
1. Tujuan umum ................................................................................... 5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
2. Tujuan khusus .................................................................................. 5
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ......................................................... 6
A. Tanaman Sirsak (Annona muricata L.)................................................. 6
1. Sinonim ............................................................................................ 6
2. Taksonomi........................................................................................ 6
3. Habitat dan penyebaran ................................................................... 6
4. Morfologi ................................................................................. 7
5. Kandungan kimia ............................................................................. 8
6. Khasiat dan kegunaan ...................................................................... 10
7. Nama daerah..................................................................................... 10
B. Infusa .................................................................................................... 11
C. Toksisitas .............................................................................................. 11
1. Definisi toksikologi .......................................................................... 12
2. Asas toksikologi ............................................................................... 12
a. Kondisi pemberian dan makhluk hidup ...................................... 12
b. Mekanisme aksi toksik................................................................ 13
c. Wujud dan sifat efek toksik ........................................................ 13
3. Jenis uji toksikologi.......................................................................... 14
D. Toksisitas Subkronis. ............................................................................ 14
E. Glukosa Darah ..................................................................................... 18
F. Keterangan Empiris .............................................................................. 28
BAB III. METODE PENELITIAN ............................................................. 29
A. Jenis dan Rancangan Penelitian............................................................ 29
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional....................................... 29
1. Variabel penelitian ........................................................................... 29
a. Variabel bebas............................................................................. 29
b.Variabel tergantung...................................................................... 29
c. Variabel pengacau terkendali...................................................... 29
d. Variabel pengacau tidak terkendali............................................. 30
2. Definisi operasional ......................................................................... 30
a. Infusa daun sirsak ..................................................................... 30
b. Pengaruh pemberian infusa daun sirsak.................................... 30
C. Alat dan Bahan Penelitian..................................................................... 30
1. Alat penelitian .................................................................................. 30
2. Bahan penelitian............................................................................... 31
D. Tata Cara Penelitian.............................................................................. 32
1. Determinasi daun sirsak .................................................................. 32
2. Pengumpulan bahan uji .................................................................... 32
3. Pembuatan serbuk kering daun sirsak .............................................. 32
4. Penetapan kadar air serbuk kering daun sirsak ................................ 33
5. Penetapan dosis infusa daun sirsak .................................................. 33
6. Pembuatan infusa daun sirsak .......................................................... 34
7. Penyiapan hewan uji ........................................................................ 35
8. Pengelompokan hewan uji ............................................................... 35
9. Prosedur pelaksanaan toksisitas subkronis....................................... 35
10. Pengamatan ..................................................................................... 36
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
a. Pengamatan berat badan hewan uji ............................................. 36
b. Pengukuran asupan pakan hewan uji .......................................... 36
c. Pengukuran asupan minum hewan uji......................................... 36
E. Tata Cara Analisis Hasil ....................................................................... 37
1. Pemeriksaan kadar glukosa darah................................................... 37
2. Pengamatan berat badan hewan uji................................................. 37
3. Pengukuran asupan pakan hewan uji .............................................. 38
4. Pengukuran asupan minum hewan uji ............................................ 38
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 39
A. Determinasi Tanaman Sirsak ............................................................... 39
B. Pembuatan Serbuk dan Penetapan Kadar Air Tanaman Sirsak ............ 39
C. Hasil Uji Kadar Glukosa Darah Tikus Jantan Akibat Pemberian
Infusa Daun Sirsak................................................................................ 41
D. Hasil Uji Kadar Glukosa Darah Tikus Betina Akibat Pemberian
Infusa Daun Sirsak................................................................................ 47
E. Perubahan Berat Badan Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian
Infusa Daun Sirsak................................................................................ 51
F. Asupan Pakan Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian
Infusa Daun Sirsak................................................................................ 56
G. Asupan Minum Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian
Infusa Daun Sirsak................................................................................ 58
H. Rangkuman Pembahasan ...................................................................... 59
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 61
A. Kesimpulan ........................................................................................... 61
B. Saran ..................................................................................................... 61
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 62
LAMPIRAN................................................................................................. 65
BIOGRAFI PENULIS ................................................................................. 97
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p
kadar glukosa darah tikus jantan tiap kelompok......................... 42
Tabel II. Hasil uji Scheffe kadar glukosa darah tikus jantan setelah
pemberian infusa daun sirsak ...................................................... 43
Tabel III. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p
kadar glukosa darah tikus betina tiap kelompok......................... 48
Tabel IV. Hasil uji Scheffe kadar glukosa darah tikus betina setelah
pemberian infusa daun sirsak ...................................................... 49
Tabel V. Purata berat badan SEM tikus jantan akibat pemberian
infusa daun sirsak........................................................................ 52
Tabel VI. Purata berat badan SEM tikus betina akibat pemberian
infusa daun sirsak........................................................................ 53
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Acetogenins terisolasi dari buah Annona muricata L. ................ 9
Gambar 2. Struktur senyawa Annona ........................................................... 9
Gambar 3. Skema langkah-langkah dalam glukoneogenesis........................ 22
Gambar 4. Siklus Cori................................................................................... 23
Gambar 5. Sintesis dan degradasi glikogen .................................................. 24
Gambar 6. Diagram batang rata-rata pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar glukosa darah tikus jantan antar
kelompok perlakuan ..................................................................... 43
Gambar 7. Diagram batang rata-rata pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar glukosa darah tikus betina antar
kelompok perlakuan ..................................................................... 48
Gambar 8. Grafik perubahan berat badan tikus jantan selama
pemberian infusa daun sirsak menurut kelompok dosis pada
hari ke 0 sampai hari ke 28 ......................................................... 54
Gambar 9. Grafik perubahan berat badan tikus jantan selama
pemberian infusa daun sirsak menurut kelompok dosis pada
hari ke 0 sampai hari ke 28 ......................................................... 55
Gambar 10.Grafik asupan pakan tikus jantan akibat pemberian infusa
daun sirsak pada hari ke 1 sampai hari ke 28.............................. 56
Gambar 11.Grafik asupan pakan tikus betina akibat pemberian infusa
daun sirsak pada hari ke 1 sampai hari ke 28.............................. 57
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Foto daun sirsak......................................................................... . 66
Lampiran 2. Foto infusa daun sirsak.............................................................. . 66
Lampiran 3. Foto serbuk daun sirsak ............................................................. 66
Lampiran 4.Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa daun
sirsak pada kelompok perlakuan. ................................................ . 67
Lampiran 5. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ............................... . 68
Lampiran 6. Perhitungan rendemen serbuk daun sirsak ................................ 69
Lampiran 7. Penetapan kadar air serbuk daun sirsak..................................... . 69
Lampiran 8. Surat pengesahan determinasi tanaman sirsak. ......................... . 71
Lampiran 9. Surat ethics committee approval. .............................................. . 72
Lampiran 10. Analisis Statistik Kadar Glukosa Darah Pre dan Post
pada Tikus Jantan melalui uji Paired T-Test............................... . 73
Lampiran 11. Analisis Statistik Kadar Glukosa Darah Pre dan Post
pada Tikus Betina melalui uji Paired T-Test. ............................. . 74
Lampiran 12. Analisis Statistik Kadar Glukosa Darah Post pada
Tikus Jantan. ............................................................................... . 75
Lampiran 13. Analisis Statistik Kadar Glukosa Darah Post pada
Tikus Betina. ............................................................................... . 79
Lampiran 14. Analisis Statistik Berat Badan Tikus Jantan............................ . 84
Lampiran 15. Analisis Statistik Berat Badan Tikus Betina ........................... . 93
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xviii
INTISARI
Penelitian tentang pengaruh pemberian infusa daun sirsak (Annonamuricata L.) secara subkronis terhadap kadar glukosa darah tikus jantan danbetina bertujuan mengungkapkan spektrum efek toksik infusa daun sirsakterhadap metabolisme karbohidrat yang dilihat berdasarkan kadar glukosa darahdan mengungkapkan kekerabatan antara dosis infusa daun sirsak dengan spektrumefek toksik.
Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan penelitianacak lengkap pola searah. Metode yang dilakukan adalah pengukuran kadarglukosa darah tikus jantan dan betina secara subkronis dengan pemberian infusadaun sirsak selama 30 hari, kekerapan pemberian satu kali sehari. Sebanyak 50tikus galur Sprague-Dawley (25 jantan dan 25 betina) berumur 2-3 bulan dibagisecara acak dalam 5 kelompok yaitu kelompok kontrol aquadest 8333 mg/kgBB,kelompok perlakuan yang diberi infusa daun sirsak dengan dosis berturut-turutyaitu 108; 180; 301; 503 mg/kgBB. Pada hari ke-1 sebelum pemberian infusadaun sirsak, glukosa darah diukur. Pada hari ke-31 setelah pemberian infusa daunsirsak, darah seluruh tikus diambil pada bagian sinus orbitalis untuk dilakukanpengukuran kadar glukosa darah.
Hasil penelitian tidak ditemukan spektrum efek toksik infusa daun sirsakterhadap kadar glukosa darah dan tidak ada kekerabatan antara dosis infusa daunsirsak dengan spektrum efek toksik.
Kata kunci : Annona muricata L., infusa, toksisitas, subkronis, glukosa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xix
ABSTRACT
The research of the influence of aqueous extract from soursop leaves(Annona muricata L.) in subchronic of blood glucose levels of male and femalerats aimed revealed the spectrum of toxic effects soursop leaf aqueous extract onthe metabolism of carbohydrates seen by blood glucose levels and expressedrelationship between doses soursop leaf aqueous extract with the spectrum oftoxic effects.
This research is included to experimental study with one way-complete-random. The method used is the measurement of blood glucose levels in male andfemale rat by administering soursop leaf aqueous extract for 30 days withfrequently once a day. This research using 50 Sprague-Dawley strain rats (25males and 25 females) aged 2 till 3 months. The rats were randomly divided into 5groups: control group 8333 mg/kg BW of distilled water, the treatment group wasgiven a dose of soursop leaf aqueous extract is 108; 180; 301; 503 mgkg BW. Onday 1 before administration aqueous extract from soursop leaves, blood glucosewas measured. On day 31 after administration aqueous extract from soursopleaves, whole rat blood was taken at the orbital sinus for measurement of bloodglucose levels.
The results are there were no toxic effects spectrum aqueous extract fromsoursop leaves on blood glucose levels and there is no kinship between dosesaqueous extract from soursop leaves with a spectrum of toxic effects.
Key words : Annona muricata L., aqueous extract, toxicity, subchronic,glucose
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Kekayaan alam di Indonesia terdiri atas 30.000 jenis tanaman dari total
40.000 jenis tanaman di dunia, dimana 9.600 jenis diantaranya merupakan
tanaman berkhasiat obat (Kusuma and Zaky, 2005). Saat ini beragam produk
berbahan dasar tanaman obat (herbal) terus bermunculan. Penggunaan tanaman
obat tidak hanya sebatas tren, tetapi telah menjadi gaya hidup. Hal ini sejalan
dengan kecenderungan masyarakat dunia untuk kembali ke alam (back to nature),
tak terkecuali masyarakat Indonesia. Penggunaan tanaman obat oleh masyarakat
dikarenakan komponen bioaktif dari tanaman obat dapat dimanfaatkan secara
langsung untuk menjaga kesehatan atau menyembuhkan penyakit. Salah satu
penggunaan tanaman obat yang dikenal dimasyarakat adalah obat tradisional.
Obat tradisional berasal dari bahan alam yang jenis dan sifat kandungannya sangat
beragam sehingga untuk menjamin mutu obat tradisional penanganan serta
pengembangan obat tradisional harus dapat memberikan dasar-dasar yang kuat
sehingga penggunaannya dapat dipertanggungjawabkan (Direktorat Obat Asli
Indonesia, 2005). Ada beberapa alasan mengapa penggunaan tanaman obat harus
dipelajari yaitu terdapat kemungkinan tanaman obat memiliki efek terapetik dan
memiliki efek samping yang tidak diinginkan.
Salah satu tanaman berkhasiat obat di Indonesia adalah sirsak (Annona
muricata L.). Daun sirsak mengandung senyawa kimia seperti saponin, flavonoid,
tanin, alkaloid (Mangan, 2009). Daun sirsak telah lama dikenal akan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
kemampuannya untuk mengobati berbagai macam penyakit seperti demam, luka,
penyakit kulit, antiparasit, astringen, sedatif, dan bahkan sekarang daun sirsak
semakin dikenal kemampuannya dalam mengobati penyakit kanker. Menurut
penelitian daun sirsak mengandung senyawa aktif Annonaceous acetogenin yang
dapat membunuh sel kanker dan telah terbukti resisten terhadap agen antikanker
(Taylor, 2002).
Pada saat ini konsumsi daun sirsak oleh masyarakat sebagai tanaman
obat semakin banyak, pengonsumsiannya dengan membuat air rebusan daun
sirsak (Zuhud, 2011). Pengonsumsian oleh masyarakat hanya berdasarkan dasar-
dasar empiris tanpa tahu dosis dan jangka waktu pengonsumsian yang benar.
Sebagian besar masyarakat mengonsumsi daun sirsak sebagai tanaman obat dalam
jangka waktu panjang. Namun, penelitian mengenai penggunaan daun sirsak pada
jangka panjang masih sedikit dilakukan.
Pengaruh ketoksikan dilihat dari perubahan kadar glukosa darah yang
merupakan sumber energi utama bagi tubuh. Glukosa merupakan karbohidrat
terpenting, glukosa menjadi jalur umum akhir untuk mentranspor hampir semua
karbohidrat ke sel jaringan, dan merupakan bahan bakar utama (otak) atau bahan
bakar satu-satunya (eritrosit). Selain itu, apabila glukosa tidak berada dalam
kadar yang normal maka dapat terjadi penurunan kadar glukosa darah
(hipoglikemia), ini berdampak buruk karena dapat menyebabkan disfungsi otak
dan kematian. Apabila terjadi peningkatan glukosa darah (hiperglikemia) dalam
jangka waktu panjang, ini bersifat mematikan bagi manusia. Arthur, Woode,
Terlabi, and Larbie (2011) telah melaporkan penelitian mengenai toksisitas akut
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
dan subkronis ekstrak air Annona muricata pada hewan uji mencit albino selama
14 hari. Hasil menunjukkan bahwa terjadi penurunan kadar glukosa darah dengan
pemberian ekstrak air Annona muricata.
Berdasarkan pemikiran-pemikiran tersebut, perlu dilakukan penelitian
mengenai pengaruh pemberian infusa daun sirsak secara subkronis terhadap tikus
jantan dan betina selama tiga puluh hari. Penelitian ini diharapkan dapat
memberikan informasi kepada masyarakat tentang potensi ketoksikan akibat
penggunaan berulang infusa daun sirsak dengan melihat perubahan pada kadar
glukosa darah. Penelitian ini merupakan salah satu bagian dari serangkaian uji
toksisitas subkronis infusa daun sirsak pada tikus jantan dan betina.
Daun sirsak diolah menjadi sediaan infusa didasarkan pada acuan sediaan
herbal Direktorat Obat Asli Indonesia (2010). Oleh karena itu, diharapkan dengan
menggunakan infusa daun sirsak dapat dilihat spektrum efek toksik terhadap
kadar glukosa darah. Selain itu, infusa merupakan salah satu bentuk sediaan
herbal dengan proses pembuatan yang paling sederhana untuk membuat sediaan
herbal dari bahan lunak seperti daun.
1. Perumusan masalah
a. Seberapa besar spektrum efek toksik (perubahan biokimia) infusa daun sirsak
terhadap kadar glukosa darah yang dinilai dari perubahan kadar glukosa darah?
b. Apakah terdapat hubungan kekerabatan antara dosis infusa daun sirsak dengan
spektrum efek toksik pada kadar glukosa darah?
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
2. Keaslian penelitian
Sepengetahuan penulis penelitian terhadap daun sirsak yang pernah
dilakukan adalah sebagai berikut :
a. Evaluasi Toksisitas Akut dan Subkronis Ekstrak Air Annona muricata (Linn.)
pada Hewan. Pada penelitian ini, hasil yang diperoleh terhadap pengukuran
kadar glukosa darah adalah terdapat pengaruh ekstrak air Annona muricata
yang menyebabkan penurunan luar biasa dalam kadar glukosa darah terutama
pada dosis 1000 mg pada tikus jantan dan betina dengan pembandingan
terhadap kelompok kontrol. Hal ini menunjukkan adanya komponen
hipoglikemik dalam ekstrak dan dapat memberikan kepercayaan pada
penggunaan Annona muricata sebagai agen hipoglikemia. Namun, dalam
penelitian ini tidak dilakukan uji keterbalikan dari ekstrak air Annona muricata
(Arthur, et al., 2011).
b. Aktivitas Anti Hiperglikemia pada Annona Muricata (Linn.). Pada penelitian
ini hasil yang didapat bahwa Annona Muricata (Linn.) memiliki sifat aktivitas
anti-hiperglikemia berdasarkan perbedaan yang signifikan antara kelompok
hiperglikemia yang di beri obat dan yang tidak diberi obat pada tikus yang
diinduksi dengan streptozotocin (Adeyemi, Komolafe, Adewole, Obuotor and
Adenowo, 2008).
c. Perubahan Morfologi dan Efek Hipoglikemia dari Ekstrak Daun Annona
muricata L. (Annonaceae) di Sel- Pankreas pada Tikus Diabetes dengan
Penginduksi Streptozotocin. Penelitian ini menunjukkan bahwa A. muricata
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
memiliki efek yang menguntungkan pada jaringan pankreas yang diinduksi
streptozotocin. A. muricata menunjukkan aktivitas antioksidan dan mampu
mengurangi dan atau mencegah, kerusakan pankreas yang dihasilkan oleh
Streptozotocin. (Adewole and Martin, 2006).
Sejauh pengetahuan penulis, penelitian tentang toksisitas subkronis
infusa daun sirsak (Annona muricata L.) terhadap kadar glukosa darah tikus jantan
dan betina selama 30 hari belum pernah dilakukan.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis. Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi
pengembangan ilmu kefarmasian, ilmu kedokteran, dan pengetahuan tentang obat-
obat tradisional khususnya tanaman sirsak.
b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan bahan informasi
tentang spektrum toksisitas subkronis infusa daun sirsak terhadap kadar glukosa
darah, hubungan efek dan dosis.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan ada tidaknya potensi efek
toksik dari infusa daun sirsak.
2. Tujuan khusus
a. Mengungkapkan spektrum efek toksik (perubahan biokimia) infusa daun sirsak
terhadap kadar glukosa darah yang dinilai dari perubahan kadar glukosa darah.
b. Mengungkapkan kekerabatan antara dosis infusa daun sirsak dengan spektrum
efek toksik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Tanaman Sirsak (Annona muricata L.)
1. Sinonim
Annona bondplaniana Kunth, Anona cearaensis Barb. Rodr., Annona
macrocarpa Werckle, Annona muricata var.borinquensis Morales, dan
Guanabanus muricata (L.) Gomez.
(Pinto et al., 2005)
2. Taksonomi
Kingdom : Plantae (tanaman)
Subkingdom : Tracheobionta (tanaman berpembuluh)
Super Divisi : Spermatophyta (menghasilkan biji)
Divisi : Magnoliophyta (tanaman berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)
Sub Kelas : Magnoliidae
Ordo : Magnoliales
Famili : Annonaceae
Genus : Annona
Spesies : Annona muricata L.
(Plantamor, 2008)
3. Habitat dan penyebaran
Sirsak tumbuh di dataran rendah tropis dan subtropis lembab. Tanaman
sirsak umumnya ditemukan di pantai dan lereng. Sirsak dapat tumbuh liar atau
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
tumbuh di semak, padang rumput dan sepanjang jalan. Tanaman ini umumnya
dibudidayakan di pekarangan dan ditemukan di daerah pedesaan, serta di taman
vulkanik (AgroForestryTree, 2012).
Tanaman sirsak berasal dari Amerika tropis, yakni sekitar Peru, Meksiko,
dan Argentina, kemudian menyebar ke Filipina dan Indonesia. Di Indonesia,
sirsak memiliki beberapa nama daerah seperti nangka belanda, nangka seberang,
atau buah nona. Sesuai dengan namanya, buah sirsak berlapis seperti kantong
(zak) dan masam (zur) (Sunarjono, 2006).
4. Morfologi
Sirsak merupakan tanaman menyerupai semak dan perdu dengan tinggi
pohon sekitar 5 - 10 meter. Batang sirsak coklat berkayu, bulat, dan bercabang.
Mempunyai daun berbentuk telur atau lanset, ujung runcing, tepi rata, pangkal
meruncing, pertulangan menyirip, panjang tangkai 5 mm, berwarna hijau
kekuningan. Daun sirsak berseling dengan panjang 7,6 - 15,2 cm, lebar 2,5 - 7,6
cm, permukaan daun kasar, mengkilap di atas, gundul di bagian bawah, sederhana,
stipula tidak ada. Daun berwarna hijau di bagian atas, pucat dan kusam di bagian
bawah. Bau daun sirsak menyengat kuat, petioles pendek dengan ukuran 3 - 10
mm (AgroForestryTree, 2012).
Bunga terminal atau lateral, berukuran besar, batang kekar, berwarna hijau,
berukuran 1,3 -1,9 cm. Terdiri dari tiga sepal berwarna hijau, berbentuk segitiga,
berukuran 3 mm. Kelopak berwarna hijau kekuningan berukuran 4 5 cm x 3
4,3 cm, tebal dan berdaging dengan tekstur yang kasar. Buah sirsak berukuran 14
40 cm x 10 18 cm, berat buah sirsak bisa mencapai 7 kilogram. Buah sirsak
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
berbentuk bulat telur atau hati. Daging buah berwarna putih, berserat, dan berair.
Biji sirsak mengkilap, berwarna coklat gelap atau hitam, berbentuk lonjong,
berukuran 2 x 0,7 cm. Tanaman sirsak berakar tunggang dan akar samping kuat
serta agak dalam. Nama genus Annona berasal dari bahasa Latin anon yang berarti
produksi tahunan, mengacu pada saat produksi dari berbagai spesies dalam genus
ini (AgroForestryTree, 2012).
5. Kandungan kimia
Berdasarkan literatur dan hasil penelitian, diketahui bahwa zat aktif yang
terkandung di dalam daun sirsak adalah alkaloid, saponin, flavonoid (Mangan,
2009). Jumlah total alkaloid 0,65 g/kg pada daun, 19,7 g/kg pada kulit akar, 2,5
g/kg pada kulit batang. Daun sirsak mengandung fitosterol, Ca-oksalat dan
alkohol murisine (Permadi, 2008). Pada bagian daun, biji dan kulit mengandung
benzyltetrahydroisoquinolines misalnya retikulin. Tanaman sirsak mengandung
alkaloid isoquinoline: annonaine (EFSA, 2009).
Pathak, Saraswathy, Vora, dan Savai (2010) melaporkan bahwa daun
sirsak mengandung metabolit sekunder seperti tanin, steroid, dan glikosida. Daun
sirsak mengandung Annonaceous acetogenins. Selain itu, terdapat senyawa tak
jenuh mono-epoxy C-35 dan C-37, epomuricenins A dan B (8+9), epomusenins A
dan B (10+11), epomurinins A dan B (12+13) juga terisolasi (Gambar 1.)
(Dembitsky et al., 2011).
Acetogenines yang ditemukan dalam Annona muricata L. meliputi :
annocatalin, annohexocin, annomonicin, annomontacin, annomuricatin,
annomuricin, annonacin, coronin, corossolin, corossolone, gigantetrocin,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
gigantetronenin, montanancin, muracin, muricatalicin, muricin, robustosin,
solamin, squamocin, uvariamicin (Castillo-Snchez, Jimnez-Osornio, and
Delgado-Herrera, 2010).
Gambar 1. Acetogenins terisolasi dari tanaman Annona muricata L.(Dembitsky et al., 2011)
Komponen utama dari minyak daun Annona muricata adalah -kariofilen
(Dembitsky et al., 2011).
Gambar 2. Struktur senyawa Annona (Bicas et al., 2011)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
6. Khasiat dan kegunaan
Seluruh bagian dari pohon sirsak dapat digunakan sebagai obat alami
termasuk kulit pohon, daun, akar, buah, dan biji buah. Teh daun sirsak
merupakan salah satu cara mengonsumsi daun sirsak untuk mengobati berbagai
gangguan penyakit. Kulit pohon, daun, dan akar dianggap sebagai obat penenang,
antispasmodik, hipotensi. Umumnya, buah dan jus buah dimanfaatkan untuk
mengobati cacing dan parasit, mengobati demam, meningkatkan ASI setelah
melahirkan, dan sebagai obat diare dan disentri (Taylor, 2002).
Khasiat daun sirsak bagi orang sehat berguna untuk menambah
kekebalan tubuh dan mencegah asam urat. Bagi pria, daun sirsak menambah
jumlah dan memperkuat sperma. Daun sirsak diresepkan oleh para herbalis, salah
satunya untuk mengatasi beragam penyakit kanker (Zuhud, 2011). Daun sirsak
mempunyai daya sebagai antibakteri (Pathak et. al., 2010) dan mempunyai
aktivitas anti hiperglikemia (Adeyemi, et al., 2008).
7. Nama daerah
Jawa : nangka sabrang
Sunda : nangka walanda
Madura : nangka buris
Bali : srikaya jawa
Aceh : deureuyan belanda
Nias : durio ulondro
Minangkabau : durian batawi
Lampung : jambu landa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
Gorontalo : langelo walanda
(Redaksi Agromedia, 2008).
B. Infusa
1. Definisi
Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi
simplisia nabati dengan air pada suhu 900C selama 15 menit. Infus merupakan
cara yang paling sederhana untuk membuat sediaan herbal dari bahan lunak
seperti daun dan bunga. Infusa dapat diminum panas atau dingin (Direktorat Obat
Asli Indonesia, 2010).
2. Pembuatan
Proses pembuatan sediaan infusa yaitu dengan mencampur simplisia
dengan derajat halus yang sesuai dalam panci dengan air secukupnya, kemudian
dilakukan pemanasan di atas tangas air selama 15 menit terhitung mulai suhu
mencapai 900C sambil sekali-sekali diaduk-aduk. Serkai selagi panas melalui kain
flanel, lalu menambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh
volume infus yang dikehendaki (Direktorat Obat Asli Indonesia, 2010).
C. Toksisitas
Dasar dari proses keracunan suatu senyawa adalah terjadinya pemejanan
senyawa ke dalam tubuh, lalu terdistribusi dan sampai ke sel sasaran dan terjadi
antaraksi antara senyawa tersebut dengan sel sasaran. Nasib racun di dalam tubuh
menggambarkan proses perjalanan racun meliputi absorpsi, distribusi,
metabolisme, dan eliminasi. Keparahan pengaruh toksik suatu senyawa dapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
diketahui dengan menggunakan suatu tolok ukur yaitu tolok ukur kualitatif dan
tolok ukur kuantitatif.
1. Definisi toksikologi
Karakteristik toksik adalah menghasilkan efek kesehatan yang tidak
diinginkan atau merugikan. Toksisitas merupakan efek toksik (samping) dari
bahan kimia atau fisika terhadap organisme makhluk hidup. Toksikologi adalah
ilmu yang mempelajari tentang efek samping (toksisitas) bahan kimia atau fisika
yang dapat dihasilkan di dalam organisme makhluk hidup dalam kondisi tertentu
dari suatu pemberian zat beracun. Toksikologi merupakan suatu ilmu untuk
mengidentifikasi secara kualitatif dan kuantitatif semua bahaya atau toksisitas
yang berhubungan dengan pemberian suatu zat beracun. Toksikologi adalah ilmu
eksperimental yang menyelidiki proses, sifat, pengaruh, mekanisme, dan faktor
risiko untuk efek buruk dari zat beracun (Williams, James, and Roberts, 2000).
2. Asas toksikologi
a. Kondisi pemberian dan makhluk hidup
Kondisi pemberian ialah semua faktor yang menentukan
keberadaan racun di tempat aksinya. Jalur pemberian seperti intravena,
inhalasi, intraperitonial, subkutan, intramuskular, dermal, dan oral akan
menentukan ketersediaan senyawa induk atau metabolit di tempat aksi. Saat
pemberian, serta besarnya takaran racun akan mempengaruhi besarnya
ketersediaan zat racun di tempat aksi tertentu dan kerentanan makhluk hidup
terhadap racun. Kondisi makhluk hidup adalah keadaan fisiologi (berat
badan, umur, jenis kelamin, dan kehamilan) serta patologi (penyakit)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
makhluk hidup dapat mempengaruhi ketersediaan racun di sel sasaran dan
keefektifan antaraksi antara kedua ubahan ini (Donatus, 2001).
b. Mekanisme aksi toksik
Mekanisme aksi toksik racun digolongkan menjadi tiga, yakni
mekanisme berdasarkan sifat dan tempat kejadian, berdasarkan sifat
antaraksi antara racun dan tempat aksinya, dan berdasarkan risiko
penumpukan racun dalam gudang penyimpanan tubuh. Berdasarkan sifat
dan tempat kejadian mekanisme aksi toksik digolongkan menjadi dua yaitu
mekanisme luka intrasel dan mekanisme luka ekstrasel. Mekanisme luka
intrasel diawali oleh racun pada tempat aksinya di dalam sel sasaran. Racun
akan berinteraksi dengan sasaran molekuler yang khas atau tak khas,
melalui mekanisme reaksi kimia. Tubuh akan memberi respon berupa
perbaikan atau adaptasi sebelum terjadi efek yang tidak diinginkan, tetapi
apabila mekanisme pertahanan tubuh tidak lagi mampu memperbaiki akan
timbul respon toksik berupa perubahan biokimia, fungsional, atau struktural.
Mekanisme luka ekstrasel terjadi secara tidak langsung karena racun
bereaksi diluar sel sasaran (Donatus, 2001).
c. Wujud dan sifat efek toksik
Wujud efek toksik sesuatu racun dapat berupa perubahan biokimia,
fungsional, dan struktural. Berbagai perubahan ini memiliki ciri yang khas,
yakni terbalikkan atau tak terbalikkan. Jenis wujud perubahan biokimia
tidak menunjukkan bukti secara langsung terhadap patologi organ, apabila
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
mekanisme homeostatis normal makhluk hidup masih dapat bekerja maka
perubahan biokimia bersifat timbal balik (Donatus, 2001).
3. Jenis uji toksikologi
Uji toksikologi dibedakan menjadi dua golongan :
a. Uji ketoksikan tak khas, dirancang untuk mengevaluasi keseluruhan atau
spektrum efek toksik suatu senyawa pada berbagai jenis hewan uji. Pada uji
ketoksikan tak khas dikenal uji ketoksikan akut, subkronis, dan kronis.
b. Uji ketoksikan khas, dirancang untuk mengevaluasi secara rinci efek khas
suatu senyawa pada berbagai jenis hewan uji. Pada uji ketoksikan khas
terdapat beberapa uji yaitu uji potensiasi, kekarsinogenikan, kemutagenikan,
keteratogenikan, reproduksi, kulit dan mata, dan perilaku
(Donatus, 2001).
D. Toksisitas Subkronis
Toksisitas subkronis merupakan salah satu jenis uji toksikologi. Uji
ketoksikan subkronis adalah uji ketoksikan sesuatu senyawa yang diberikan
dengan dosis berulang pada hewan uji tertentu, selama kurang dari tiga bulan. Uji
ini ditujukan untuk mengungkapkan spektrum efek toksik senyawa uji, serta untuk
memperlihatkan apakah spektrum efek toksik tersebut berkaitan dengan takaran
dosis (Donatus, 2001). Uji toksisitas subkronis tidak difokuskan pada titik akhir
tertentu, melainkan untuk mengeksplorasi secara luas keseluruhan efek biologis
yang ditimbulkan pada tempat aksi yang diberikan pada rentang dosis tertentu. Uji
toksisitas subkronis dapat menentukan toksisitas secara kualitatif (organ target
dan efek yang ditimbulkan) dan kuantitatif (pengaruh atau efek yang ditimbulkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
terhadap jaringan dan plasma darah) dari pemberian dosis berulang pada hewan
uji (Gad, 2002).
Hewan uji yang disarankan paling tidak satu jenis hewan dewasa sehat,
baik jantan maupun betina. Hewan uji dipilih yang peka dan memiliki pola
metabolisme terhadap senyawa uji yang semirip mungkin dengan manusia
(Donatus, 2001). Spesies hewan dapat digunakan rodent dan non-rodent. Spesies
hewan rodent menggunakan tikus. Hewan dimasukkan dalam dua kategori
kelompok yaitu kelompok kontrol dan perlakuan yang dilakukan secara acak
(Gad, 2002). Jumlah kelompok hewan uji paling tidak sebanyak empat kelompok
yaitu satu kelompok kontrol dan tiga kelompok peringkat dosis. Jumlah hewan uji
untuk jangka waktu penelitian selama empat minggu, paling tidak terdapat lima
jantan dan lima betina dalam satu kelompok (Derelanko and Mannfred, 2002).
Jalur pemberian sesuai dengan jalur yang digunakan manusia dan peringkat dosis.
Pengamatan dan pemeriksaan yang dilakukan dalam uji ketoksikan subkronis,
meliputi:
(1) Perubahan berat badan yang diperiksa paling tidak 7 hari sekali,
(2) asupan makanan untuk masing-masing hewan atau kelompok hewan, diukur
paling tidak 7 hari sekali,
(3) gejala-gejala klinis umum yang diamati setiap hari,
(4) pemeriksaan terhadap hematologi, paling tidak diperiksa dua kali, pada awal
akhir uji coba,
(5) pemeriksaaan kimia darah, paling tidak diperiksa dua kali, pada awal akhir uji
coba,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
(6) analisis urin, paling tidak sekali,
(7) pemeriksaan histopatologi organ pada akhir uji coba
( Donatus, 2001)
Keterbalikan toksisitas terjadi apabila efek buruk atau efek yang tidak
diinginkan yang dapat dikembalikan apabila pemaparan dihentikan. Keterbalikan
toksisitas tergantung pada sejumlah faktor, termasuk tingkat pemaparan (waktu
dan jumlah racun) dan kemampuan jaringan yang terkena untuk memperbaiki atau
meregenerasi (Williams et. al., 2000).
Ada banyak cara organisme dapat menanggapi senyawa beracun, jenis
respon tergantung pada banyak faktor. Meskipun banyak efek toksik dari senyawa
asing memiliki dasar biokimia, ekspresi efeknya mungkin berbeda. Oleh karena
itu jenis respon beracun dibedakan menjadi :
(1) Tindakan beracun secara langsung,
(2) farmakologi, fisiologi, efek biokimia,
(3) teratogenesis,
(4) imuno toksisitas,
(5) karsinogenesis (Timbrell, 2008).
Sarana utama dalam mendeteksi respon beracun apabila tidak terdapat
kematian seperti organisme atau jaringan adalah :
1. Perubahan biokimia, melibatkan efek pada enzim seperti inhibitor atau
perubahan jalur metabolik tertentu. Munculnya enzim atau substansi lain dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
cairan tubuh dapat menunjukkan kebocoran dari jaringan karena merusak dan
merupakan indikasi perubahan patologis.
2. Perubahan status normal, terdapat sejumlah penanda toksisitas. Dengan
demikian, perubahan berat badan, asupan makanan dan minum, luaran urin,
dan berat organ merupakan indikator yang umum dan spesifik untuk toksisitas.
Oleh karena itu, hewan yang mengonsumsi lebih sedikit makanan dan
kehilangan bobot setelah terpapar senyawa beracun atau peningkatan berat
organ karena terpapar senyawa beracun, perubahan ini dikonfirmasi dengan
pengukuran kimia, biokimia, dan histopatologi
(Timbrell, 2008).
Ada dua basis yang berbeda untuk jenis farmakologi, fisiologi, dan efek
biokimiawi, basis ini dibedakan menjadi farmakokinetika dan farmakodinamika.
Farmakokinetika berbasis pada efek toksik yang disebabkan oleh meningkatnya
konsentrasi senyawa atau metabolik aktif di sisi target. Hal ini dikarenakan,
peningkatan dosis, perubahan metabolisme, atau kejenuhan proses eliminasi.
Basis efek toksik farmakodinamika terdapat respon yang berubah pada sisi target,
kemungkinan karena adanya variasi reseptor (Timbrell, 2008).
Salah satu parameter biokimia yang dapat diukur adalah glukosa darah.
Perubahan konsentrasi glukosa darah dapat disebabkan oleh senyawa asing dan
kemungkinan melibatkan berbagai mekanisme. Obat-obatan seperti tolbutamide,
sulfonilurea, digunakan terapi untuk menurunkan kadar glukosa darah.
Streptozotocin, yang merusak pankreas -sel, yang menghasilkan insullin,
menyebabkan hiperglikemia tidak langsung dengan mengurangi tingkat insulin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Hidrazin bahan kimia industri menyebabkan hiperglikemia, sebagai akibat dari
mobilisasi glikogen karena efek hati dan hipoglikemia sebagai penghasil
glikogen habis, dan glukoneogenesis dihambat (Timbrell, 2008).
E. Glukosa Darah
Jenis- jenis zat yang diangkut oleh darah, berperan dalam darah serta
mencerminkan proses-proses metabolik tidak terhingga banyaknya, tetapi relatif
sedikit diantaranya yang dikur pada pemeriksaan rutin. Ada yang ditetapkan guna
mendapatkan informasi mengenai organ atau proses tertentu dan ada juga yang
menggambarkan akibat menyeluruh dari banyak peristiwa metabolik (Widmann,
1983).
Glukosa adalah karbohidrat terpenting. Kebanyakan karbohidrat dalam
makanan diserap ke dalam aliran darah sebagai glukosa dan gula lain diubah
menjadi glukosa di hati. Produk akhir pencernaan karbohidrat dalam saluran
pencernaan sebagian besar dalam bentuk glukosa. Oleh karena itu, glukosa
menjadi jalur umum akhir untuk mentranspor hampir semua karbohidrat ke sel
jaringan. Glukosa adalah bahan bakar metabolik utama pada mamalia dan bahan
bakar universal bagi janin serta merupakan bahan bakar utama bagi kebanyakan
jaringan (Murray, Granner, and Rodwell, 2006). Oleh karena itu, proses
menyediakan glukosa menjadi prioritas utama dari homeostatis. Banyak sel dapat
memperoleh sebagian kecil kebutuhan energi oleh pembakaran asam lemak, tetapi
jalur energi itu kurang efisien dibandingkan dengan pembakaran glukosa, lagi
pula proses menyusun asam-asam lemak dapat merugikan tubuh bila sampai
terjadi penimbunan. Banyak macam hormon ikut serta dalam regulasi kadar
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
glukosa dalam darah, baik pada keadaan normal, maupun sebagai respon terhadap
rangsangan. Dengan mengukur kadar glukosa dalam darah dapat diketahui apakah
regulasi berhasil atau tidak. Jika kadar itu jelas menyimpang dari nilai normal,
umpamanya terlalu tinggi atau terlalu rendah itu menandakan bahwa homeostatis
terganggu dan hasil pengukuran glukosa darah seharusnya menjadi dorongan
untuk melacak etiologi penyimpangan itu (Widmann, 1983).
Glukosa yang berasal dari pencernaan karbohidrat diserap melalui vena
porta hati. Hati berperan mengatur konsentrasi berbagai metabolit larut air dalam
darah. Pada glukosa hal ini dicapai dengan menyerap glukosa yang melebihi
kebutuhan saat ini dan mengubahnya menjadi glikogen (glikogenesis) atau asam
lemak (lipogenesis). Diantara waktu makan, hati berperan mempertahankan
glukosa darah dari glikogen (glikogenolisis), dan bersama dengan ginjal, dengan
mengubah metabolit nonkarbohidrat, seperti laktat, gliserol, dan asam amino
menjadi glukosa (glukoneogenesis) (Murray et al., 2006). Metabolisme
karbohidrat, antara lain sebagai berikut:
1. Glikolisis
Glukosa dimetabolisme menjadi piruvat melalui jalur glikolisis. Jaringan
aerob memetabolisme piruvat menjadi asetil-KoA yang dapat memasuki siklus
asam sitrat untuk dioksidasi sempurna menjadi CO2 dan H2O, yang berkaitan
dengan pembentukan ATP dalam proses fosforilasi oksidatif. Glikolisis juga dapat
berlangsung secara anaerob (tanpa oksigen), dengan produk akhir berupa laktat
(Murray et al., 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
Langkah-langkah dalam glikolisis, antara lain :
a. Fosforilasi -D-glukosa dikatalisis oleh enzim heksokine menjadi -
D-glukosa 6-fosfat dengan bantuan ATP dan Mg2+. Reaksi ini bersifat
irreversibel.
b. Isomerisasi -D-glukosa 6-fosfat oleh glukosa 6-fosfat isomerase
menjadi -D-fruktosa 6-fosfat
c. Fosforilasi -D-fruktosa 6-fosfat dikatalisis oleh enzim
fosfofruktokinase menjadi -D-fruktosa 1,6-bifosfat dengan bantuan
ATP dan Mg2+. Reaksi ini bersifat irreversibel.
d. Pemotongan -D-fruktosa 1,6-bifosfat dikatalis oleh aldolase menjadi
D-Gliseraldehid 3-fosfat dan dihidroksiaseton fosfat, melibatkan
reaksi kondensasi retro-aldol.
e. D-Gliseraldehid 3-fosfat dan dihidroksiaseton fosfat
diinterkonversikan oleh enzim triosefosfat isomerase.
f. Oksidasi D-Gliseraldehid 3-fosfat, diiringi dengan fosforilasi
intermediet asam karboksilat untuk menghasilkan D-1,3-
bisfosfogliserat diperantarai oleh enzim gliseraldehid-3-fosfat
dehidrogenase.
g. Konversi D-1,3-bisfosfogliserat menjadi D-3-fosfogliserat
menghasilkan energi dan produksi ATP, diperantarai enzim
fosfoglieserat kinase.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
h. Isomerisasi antara D-3-fosfogliserat menjadi D-2-fosfogliserat,
dikatalis oleh enzim fosfogliseromutase.
i. Dehidrasi D-2-fosfogliserat oleh enolase untuk menghasilkan
fosfoenolpiruvat dengan bantuan Mg2+
j. Konversi irreversibel fosfoenolpiruvat menjadi piruvat, dikatalisis
oleh piruvat kinase dengan bantuan Mg2+ dan juga menghasilkan ATP.
Reaksi ini bersifat irreversibel.
(Ngili, 2009).
2. Glukoneogenesis
Glukoneogenesis merupakan proses sintesis glukosa dari prekursor
nonkarbohidrat (Gambar 3). Rangka karbon yang digunakan untuk sintesis
glukosa berasal dari asam-asam amino tertentu dengan pengecualian laktat karena
bisa dimasukkan ke dalam molekul glukosa baru (Ngili, 2009). Hati dan ginjal
adalah jaringan glukoneogenik utama. Glukoneogenesis memenuhi kebutuhan
glukosa tubuh jika karbohidrat dari makanan atau cadangan glikogen kurang
memadai (Murray et al., 2006). Glukogenesis memungkinkan reaksi irreversibel
dalam glikolisis dapat dibalikkan (Ngili, 2009). Hal ini penting karena pasokan
glukosa merupakan hal yang essensial terutama bagi sistem saraf dan eritrosit
(Murray et al., 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Gambar 3. Skema langkah-langkah dalam glukoneogenesis (Ngili, 2009)
3. Siklus Cori
Lokalisasi enzim-enzim tertentu hanya dalam sel-sel tertentu sehingga
beberapa organ tergantung pada yang lain untuk melengkapi metabolisme substrat
tertentu. Selama karbohidrat diperhitungkan, hati dan otot rangka menjalankan
suatu kerjasama metabolisme tertentu (Gambar 4). Otot rangka memperoleh ATP
selama berlatih, hampir semua berasal dari glikolisis, sehingga produk akhir laktat
akan memasuki darah. Laktat akan dihilangkan dari darah oleh hati yaitu melalui
enzim isozim M4 laktat dehidrogenase yang mengkatalisis konversi laktat menjadi
piruvat. Bila hati dalam keadaan berenergi tinggi, piruvat akan diubah menjadi
glukosa 6-fosfat melalui jalur glukoneogenesis. Senyawa glukosa 6-fosfat akan
dihidrolisis menjadi glukosa dengan enzim glukosa-6-fosfatase lalu memasuki
darah dan glukosa ditranspor menuju otot rangka. Dalam otot rangka, glukosa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
diubah menjadi glukosa 6-fosfat dengan enzim heksokinase lalu memasuki
glikolisis. Keseluruhan proses ini disebut siklus Cori (Ngili, 2009).
Gambar 4. Siklus Cori (Ngili, 2009)
4. Metabolisme glikogen
Glikogen adalah karbohidrat simpanan utama pada hewan. Zat ini
terutama ditemukan di hati dan otot. Glikogen otot merupakan sumber glukosa
yang dapat cepat digunakan untuk glikolisis di dalam otot itu sendiri. Glikogen
hati berfungsi untuk menyimpan dan mengirim glukosa untuk mempertahankan
kadar glukosa darah diantara waktu makan (Murray, et al., 2006).
Glikogen disintesis dari glukosa 6-fosfat di dalam hati dan otot, lalu
disimpan dalam hati dan otot sebagai butiran halus glikogen (Gambar 5).
Glikogen yang merupakan polimer glukosa, adalah simpanan energi yang dapat
diuraikan dengan cepat dan menjadi glukosa 6-fosfat lalu memasuki jalur
glikolisis (Ngili, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Gambar 5. Sintesis dan degradasi glikogen (Ngili, 2009)
Pemeliharaan kadar glukosa darah yang sangat memadai penting bagi
jaringan yang memakai glukosa sebagai bahan bakar utama (otak) atau bahan
bakar satu-satunya (eritrosit). Pemeliharaan kadar glukosa darah yang stabil
merupakan salah satu mekanisme homeostatik yang diatur paling ketat yang
melibatkan hati, jaringan ekstrahepatik, dan beberapa hormon. Hormon yang
berperan dalam mengatur glukosa darah, antara lain :
1. Insulin berperan sentral dalam mengatur glukosa darah, berefek langsung
terhadap hiperglikemia dalam meningkatkan penyerapan glukosa ke dalam
hati.
2. Glukagon, sekresinya dirangsang oleh hipoglikemia. Kerja glukagon
bertentangan dengan kerja insulin.
3. Kelenjar hipofisis anterior menyekresikan hormon-hormon yang cenderung
meningkatkan kadar glukosa darah sehingga melawan kerja insulin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
4. Epinefrin disekresikan oleh medula adrenal akibat rangsangan yang
menimbulkan stres (rasa takut, kegembiraan, pendarahan, hipoksia,
hipoglikemia, dsb) dan menyebabkan glikogenolisis di hati dan otot karena
stimulasi fosforilase
(Murray et al., 2006).
Mekanisme pengaturan kadar glukosa darah :
1. Hati berfungsi sebagai suatu sistem penyangga glukosa darah yang sangat
penting. Artinya saat glukosa darah meningkat hingga konsentrasi yang tinggi,
yaitu sesudah makan, dan kecepatan eksresi insulin juga meningkat, sebanyak
dua pertiga dari seluruh glukosa yang diabsorbsi dari usus dalam waktu singkat
akan disimpan di hati dalam bentuk glikogen. Lalu, selama beberapa jam
berikutnya, bila konsentrasi glukosa darah dan kecepatan insulin berkurang hati
akan melepaskan glukosa kembali ke dalam darah. Dengan cara ini, hati
mengurangi fluktuasi konsentrasi glukosa darah sampai kira-kira sepertiga dari
fluktuasi yang dapat terjadi. Pada pasien penyakit hati yang parah, hampir tidak
mungkin mempertahankan konsentrasi glukosa darah dalam batas yang sempit
ini.
2. Fungsi insulin dan glukagon sama pentingnya dengan sistem pengatur umpan
balik untuk mempertahankan konsentrasi glukosa darah normal. Bila
konsentrasi glukosa darah meningkat sangat tinggi, sekresi insulin akan terjadi;
insulin selanjutnya akan mengurangi konsentrasi glukosa darah kembali ke
nilai normalnya. Sebaliknya, penurunan kadar glukosa darah akan merangsang
sekresi glukagon; selanjutnya glukagon ini akan berfungsi secara berlawanan,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
yakni meningkatkan kadar glukosa darah kembali ke nilai normalnya. Pada
sebagian besar kondisi yang normal, mekanisme umpan balik insulin ini jauh
lebih penting daripada mekanisme glukagon, namun pada keadaan kelaparan
atau pemakaian glukosa yang berlebihan selama aktivitas fisik dan keadaan
stres yang lain, mekanisme glukagon ini menjadi bernilai.
3. Selain itu, pada keadaan hipoglikemia berat, timbul suatu efek samping akibat
kadar glukosa darah yang rendah terhadap hipotalamus, yang akan merangsang
sistem saraf simpatis. Selanjutnya hormon epinefrin yang disekresikan oleh
kelenjar adrenal menyebabkan pelepasan glukosa lebih lanjut dari hati. Jadi,
epinefrin juga membantu melindungi agar tidak timbul hipoglikemia berat.
4. Dan akhirnya, sesudah beberapa jam dan beberapa hari, sebagai respon
terhadap keadaan hipoglikemia yang lama, akan timbul sekresi hormon
pertumbuhan dan kortisol, dan kedua hormon ini mengurangi kecepatan
pemakaian glukosa oleh sebagian besar sel tubuh, dan sebaliknya akan
menambah jumlah pemakaian lemak. Hal ini juga akan mengembalikan kadar
glukosa darah menjadi normal
(Guyton and Hall, 2006).
Kadar glukosa darah penting untuk dipertahankan karena normal glukosa
merupakan satu-satunya bahan makanan yang dapat digunakan oleh otak, retina,
epitel germinal gonad dalam jumlah yang cukup untuk menyuplai jaringan
tersebut secara optimal sesuai dengan energi yang dibutuhkannya. Oleh karena
itu, konsentrasi glukosa darah harus dipertahankan pada kadar yang cukup tinggi
untuk menyediakan nutrisi yang penting ini (Guyton and Hall, 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Sebagian besar glukosa yang terbentuk melalui proses glukoneogenesis
selama proses pencernaan digunakan untuk metabolisme di otak. Pankreas
memang tidak seharusnya menyekresi insulin selama waktu ini; kalau tidak,
persediaan glukosa yang tidak cukup ini, akan diangkut ke otot dan jaringan
perifer yang lain, sehingga otak tidak mempunyai sumber makanan lagi (Guyton
and Hall, 2006).
Konsentrasi glukosa darah juga perlu dijaga agar tidak meningkat terlalu
tinggi karena empat alasan berikut :
1. Glukosa dapat menimbulkan sejumlah besar tekanan osmotik dalam cairan
ekstrasel, dan bila konsentrasi glukosa meningkat secara berlebihan, akan
dapat mengakibatkan timbulnya dehidrasi sel.
2. Tingginya konsentrasi glukosa dalam darah menyebabkan keluarnya
glukosa dalam air seni.
3. Hilangnya glukosa melalui urin juga menimbulkan diuresis osmotik oleh
ginjal, yang dapat mengurangi jumlah cairan tubuh dan elektrolit.
4. Peningkatan jangka panjang glukosa darah dapat menyebabkan kerusakan
pada banyak jaringan, terutama pembuluh darah. Kerusakan vaskular,
akibat diabetes melitus yang tidak terkontrol, akan berakibat pada
peningkatan risiko terkena serangan jantung, stroke, penyakit ginjal
stadium akhir, dan kebutaan
(Guyton and Hall, 2006).
Kadar glukosa darah sering dipergunakan sebagai parameter keberhasilan
metabolisme di dalam tubuh, dimana akibat kondisi tertentu sehubungan dengan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
konsentrasi glukosa di darah dapat mengalami keadaan yang disebut hipoglikemia
yaitu penurunan kadar glukosa darah (Sari, 2007). Hipoglikemia dapat memburuk
dan menyebabkan kebingungan, kecanggungan atau pingsan (NIDDK, 2008). Hal
ini karena pasokan otak terganggu atau kurang karena sel otak sumber energinya
berasal dari glukosa sehingga pada suatu saat dapat menyebabkan koma dan
kematian (Sari, 2007). Hal ini adalah salah satu kegagalan glukoneogenesis
bersifat fatal (Murray, et al., 2006).
Kadar glukosa darah yang meningkat diluar rentang glukosa darah yang
normal (hiperglikemia) disebabkan oleh masalah mekanis pada pankreas yang
gagal memproduksi insulin sehingga menyebabkan glukosa darah terlalu banyak
disimpan di hati (Vaxa, 2012).
F. Keterangan Empiris
Penelitian ini merupakan penelitian eksploratif untuk mendapatkan bukti
adanya efek toksisitas subkronis dari infusa daun sirsak (Annona muricata L.)
terhadap kadar glukosa darah tikus jantan dan betina.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian pengaruh pemberian infusa daun sirsak (Annona muricata L.)
secara subkronis terhadap kadar glukosa darah tikus jantan dan betina termasuk
penelitian eksperimental murni dengan menggunakan rancangan penelitian acak
lengkap pola searah.
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional
1. Variabel penelitian
Varibel-variabel yang terdapat dalam penelitian ini adalah :
a. Variabel bebas :
Peringkat dosis infusa daun sirsak. Dosis infusa daun sirsak adalah
volume tertentu (ml) infusa daun sirsak tiap satuan kilogram berat badan subjek
uji yang bersangkutan.
b. Variabel tergantung
Kadar glukosa darah tikus jantan dan betina ditandai dengan tolok ukur
kuantitatif berupa efek yang ditimbulkan setelah pemberian infusa daun sirsak.
c. Variabel pengacau terkendali
1) Subjek uji berupa tikus :
a) Galur Sprague Dawley.
b) Jantan dan betina.
c) Umur 2 3 bulan.
d) Berat badan 170 280 g.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
e) Keadaan fisik berstatus sehat.
2) Bahan uji berupa daun sirsak
a) Daun sirsak diambil dari bagian tengah antara pucuk dan pangkal daun,
berwarna hijau, utuh, dan segar.
b) Diperoleh dari wilayah Jetis, Ngaglik, Sleman, Yogyakarta pada bulan
Mei sampai Juni 2012.
d. Variabel pengacau tak terkendali
Keadaan patologi tikus jantan dan betina galur Sprague Dawley yang
digunakan; meskipun keadaan fisik sehat, belum menjamin bahwa kadar glukosa
darah tikus normal.
2. Definisi Operasional
a. Infusa daun sirsak
Infusa serbuk kering daun sirsak dibuat dengan cara menginfundasi
sejumlah 6,0 g serbuk kering daun sirsak dalam air 100,0 ml pada suhu 90oC
selama 15 menit.
b. Pengaruh pemberian infusa daun sirsak
Didefinisikan sebagai efek yang ditimbulkan oleh infusa daun sirsak
terhadap kadar glukosa dalam darah tikus jantan dan betina.
C. Alat dan Bahan Penelitian
1. Alat penelitian
a. Alat-alat pembuatan serbuk kering daun sirsak antara lain : mesin
penyerbuk (blender), timbangan, oven.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
b. Alat-alat penetapan kadar air serbuk daun sirsak antara lain : labu beralas
bulat 500 ml, pendingin air balik, alat penampung, tabung penerima 5 ml,
pemanas, tabung penyambung.
c. Alat-alat pembuatan infusa daun sirsak antara lain : Bekker glass,
timbangan, batang pengaduk, gelas ukur, panci infusa, heater, Stopwatch,
kain flanel.
d. Alat-alat uji toksisitas antara lain : kandang tikus (metabolic cage),
timbangan, Bekker glass, jarum suntik per oral, spuit injeksi, Eppendorf,
pipa kapiler (haematokrit).
2. Bahan penelitian
Bahan uji yang digunakan dalam peneletian ini sebagai berikut :
a. Hewan uji yang digunakan yaitu tikus jantan dan betina galur Sprague
Dawley berumur 2 3 bulan dengan berat badan 170 280 g yang diperoleh
dari Laboratorium Hayati Imono, Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma, Yogyakarta.
b. Daun sirsak yang digunakan diambil pada bagian tengah antara pucuk dan
pangkal daun dalam kondisi segar berwarna hijau dan utuh. Daun diperoleh
dari wilayah Jetis, Ngaglik, Sleman, Provinsi Daerah Istimewa Yogyakarta
pada bulan Mei sampai Juni 2012.
c. Pelarut untuk pembuatan sediaan uji yaitu aquadest yang diperoleh dari
Laboratorium Farmakologi-Toksikologi, Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma, Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
d. Asupan pakan hewan uji yaitu pelet AD-2 yang diperoleh dari Laboratorium
Hayati Imono, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
e. Asupan minum hewan uji berupa air reverse-osmosis yang diperoleh dari
Laboratorium Hayati Imono, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma,
Yogyakarta.
f. Pereaksi toluen P diperoleh dari Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
D. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi daun sirsak
Determinasi daun sirsak telah dilakukan dengan cara mencocokkan ciri-
ciri yang dipunyai daun sirsak dengan buku acuan (Steenis, 1975) hingga
ketingkat spesies. Determinasi disahkan oleh Bapak Yohanes Dwiatmaka, Dosen
Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
2. Pengumpulan bahan uji
Bahan uji yang digunakan adalah daun sirsak. Daun yang dipilih adalah
daun dalam kondisi segar dan berwarna hijau pada bagian tengah antara pucuk
dan pangkal daun. Daun yang diperoleh hanya berasal dari wilayah Jetis, Ngaglik,
Sleman, Provinsi Daerah Istimewa Yogyakarta pada bulan Mei sampai Juni 2012.
3. Pembuatan serbuk kering daun sirsak
Daun sirsak yang telah dipetik, dicuci, dikeringkan, kemudian
dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 50oC selama 72 jam. Daun yang telah
kering kemudian diserbuk dan diayak dengan menggunakan ayakan no. 40, dan
dilakukan perhitungan rendemen serbuk daun sirsak.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Rendemen serbuk daun sirsak dihitung dengan menggunakan rumus :
x 100 %
(Widyastuti and Istini, 2000).
4. Penetapan kadar air serbuk kering daun sirsak
Sebanyak 50 g daun sirsak dimasukkan kedalam 200 ml toluen ke dalam
labu beralas bulat. Toleun dituang ke dalam tabung penerima melalui alat
pendingin. Labu beralas bulat dipanaskan selama 15 menit. Setelah toluen
mendidih, disuling dengan kecepatan 2 tetes tiap detik hingga sebagian air
tersuling, kecepatan penyulingan dinaikan hingga 4 tetes per detik. Setelah semua
air tersuling, bagian dalam pendingin dicuci dengan toluen. Penyulingan
dilanjutkan selama 5 menit. Tabung penerima pendingin dibiarkan hingga suhu
kamar. Setelah air dan toluen terpisah sempurna dilakukan pembacaan volume air.
Kadar air dihitung dalam %.
5. Penetapan dosis infusa daun sirsak
Peringkat dosis yang digunakan berdasarkan pengobatan pada
masyarakat sehari-hari, dosis pada perlakuan ini adalah 2 g/ 70 kgBB manusia.
Konversi manusia (70 kg ke tikus 200 g) = 0,018 (Laurence and
Bacharach, 1964).
Dosis untuk 200 g tikus = 0,018 x 2 g
= 0,036 g/ 200gBB tikus
Dosis untuk 1 kg tikus =
x 0,036
= 0,180 g/ kgBB tikus
= 180 mg/kgBB tikus
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
Peringkat dosis tertinggi infusa daun sirsak, dihitung dengan
menggunakan konsentrasi 6 g/ 100 ml
D x BB = C x V
D x 300 g = 6 g/100 ml x 2,5 ml
D = 0,0005 g/gBB
D = 500 mg/kgBB
Dari kedua dosis tersebut kemudian ditentukan faktor pengali untuk
peringkat dosis :
Faktor pengali =
= /
/
= 1,67
Peringkat dosis yang diperoleh berdasarkan faktor pengali :
Dosis I = 108 mg/kgBB tikus
Dosis II = 180 mg/kgBB tikus
Dosis III = 301 mg/kgBB tikus
Dosis IV = 503 mg/kgBB tikus
6. Pembuatan infusa daun sirsak
Infusa daun sirsak dibuat dengan menimbang sejumlah 6,0 g serbuk
kering daun sirsak dengan menambahkan 100,0 ml aquadest. Campuran ini
dipanaskan selama 15 menit dengan suhu 900C pada heater. Waktu 15 menit
dihitung ketika suhu campuran telah mencapai 90oC. Air yang diperoleh
kemudian disaring menggunakan kain flanel dan apabila belum mencapai volume
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
100 ml maka dapat ditambahkan air panas melalui ampas rebusan hingga volume
yang diinginkan tercapai.
7. Penyiapan hewan uji
Hewan uji yang digunakan terdiri dari tikus jantan dan betina, galur
Sprague-Dawley, umur 2- 3 bulan, berat badan 170-280 g, berjumlah 50 ekor (25
jantan dan 25 betina) disiapkan dan ditempatkan dalam metabolic cage. Pada
setiap metabolic cage berisi satu tikus. Tiga hari sebelum dilakukan perlakuan
hewan uji diadaptasikan pada metabolic cage.
8. Pengelompokan hewan uji
Pada penelitian ini digunakan lima puluh ekor tikus, dibagi menjadi lima
kelompok secara acak, yaitu satu kelompok kontrol dan empat kelompok
perlakuan, masing-masing kelompok uji terdiri dari sepuluh ekor tikus (lima
jantan dan lima betina). Kelompok I sampai IV diberi perlakuan infusa daun
sirsak dengan peringkat dosis berturut-turut, yaitu 108; 180; 301; 503 mg/kgBB
tikus. Kelompok V, yaitu kelompok kontrol negatif diberi aquadest sebanyak
8333 mg/kgBB tikus.
9. Prosedur pelaksanaan toksisitas subkronis
Sediaan uji berupa infusa daun sirsak diberikan pada hewan uji sesuai
dosis pemberian dengan kekerapan pemberian satu kali sehari selama 30 hari pada
tikus jantan dan betina dengan tetap diberi makan dan minum. Pada awal masa uji
yaitu pada hari I, darah semua tikus diambil melalui sinus orbital mata, ditampung
pada Eppendorf berisi heparin untuk diambil serum darah kemudian dilakukan
pengukuran kadar glukosa darah tikus. Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
di Parahita Medical Lab. Pemberian infusa daun sirsak dilakukan selama 30 hari
pada setiap kelompok perlakuan sesuai dengan peringkat dosis. Pada hari ke 31,
darah semua tikus diambil melalui vena orbital mata, ditampung pada Eppendorf
berisi heparin untuk diambil serum darah kemudian dilakukan pengukuran kadar
glukosa darah tikus.
10. Pengamatan
a. Pengamatan berat badan hewan uji
Pengamatan berat badan terhadap hewan uji dilakukan dengan cara
menimbang hewan uji dengan timbangan. Penimbangan berat badan hewan uji
dilakukan setiap hari. Perhitungan purata berat badan tikus dilakukan dengan cara
menambahkan berat badan tikus kemudian dibagi dengan jumlah tikus ditiap
kelompok dilakukan pada hari 0, 7, 14, 21, 28.
b. Pengukuran asupan pakan hewan uji
Hewan uji diberikan asupan pakan setiap hari sebanyak 20 g dan
dilakukan penggantian pakan setiap harinya. Cara mengukur besarnya asupan
pakan tikus yaitu dengan menimbang pakan yang diberikan pada hari pertama,
kemudian pada hari kedua pakan yang masih tertinggal pada wadah ditimbang.
Selisih penimbangan antara berat pakan hari kedua dengan berat badan hari
pertama, dihitung sebagai asupan makanan yang dihabiskan pada hari pertama.
c. Pengukuran asupan minun hewan uji
Hewan uji diberikan minum berupa air reverse-osmosis sebanyak 150 ml.
Minuman diberikan dalam wadah botol kaca yang diberi pipa seperti tabung
reaksi yang diberi lubang pada ujungnya. Pengukuran asupan minum hewan uji
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
dilakukan dengan cara memasukkan 150 ml air pada wadah dihari pertama,
kemudian pada hari kedua jumlah sisa air yang masih terdapat dalam botol
dihitung. Air minum yang dihabiskan tikus pada hari pertama dihitung dengan
cara mengurangkan jumlah air minum yang diberikan pada hari pertama dengan
jumlah air minum sisa pada hari kedua.
E. Analisis dan Evaluasi Hasil
1. Pemeriksaan kadar glukosa darah
Data kadar glukosa darah dianalisis dengan uji Kolmogorov Smirnov
untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Apabila distribusi data normal maka
analisis dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf
kepercayaan 95% , kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk mengetahui
perbedaan masing-masing kelompok. Apabila hasil analisis dengan uji
Kolmogorov Smirnov data menunjukkan distribusi yang tidak normal maka
analisis dilanjutkan dengan analisis non parametrik, yaitu Kruskal Walis untuk
mlihat perbedaan kadar glukosa darah antar kelompok, dilanjutkan dengan uji
Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan uji tiap kelompok.
Untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan bermakna sebelum dan
sesudah perlakuan dilakukan uji paired-T test untuk tiap kelompok.
2. Pengamatan berat badan hewan uji
Data perubahan berat badan merupakan data pendukung dengan dihitung
purata kenaikan berat badan pada hari ke 0, 7, 14, 21, dan pada hari ke 28. Data
perubahan berat dilakukan dianalisis dengan menggunakan General Linier Model
(dengan metode multivariate).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
3. Pengukuran asupan pakan hewan uji
Data pengukuran asupan pakan hewan uji dilakukan dengan menghitung
purata harian asupan pakan hewan uji. Setelah 28 hari, profil pola makan dibuat
dengan menggunakan grafik.
4. Pengukuran asupan minum hewan uji
Data pengukuran asupan minum hewan uji dilakukan dengan menghitung
purata harian asupan minum hewan. Setelah 28 hari, profil pola minum dibuat
dengan menggunakan grafik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan ada tidaknya potensi efek
toksik dari infusa daun sirsak. Penelitian ini secara khusus bertujuan untuk
mengungkapkan spektrum efek toksik (perubahan biokimia) infusa daun sirsak
terhadap kadar glukosa darah yang dinilai dari perubahan kadar glukosa darah dan
mengungkapkan kekerabatan antara dosis dengan spektrum efek toksik.
A. Determinasi Tanaman Sirsak
Determinasi tanaman bertujuan untuk menentukan nama atau jenis
tanaman dengan spesifik dan tepat karena tumbuhan memiliki berbagai jenis
varietas. Hal ini berguna dalam pemanfaatan tanaman tersebut sehingga tidak
menimbulkan masalah. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan tanaman
dengan kunci determinasi berdasarkan buku acuan. Hasil determinasi tanaman
sirsak dilakukan sampai ketingkat spesies.
Setelah determinasi dilakukan, dapat disimpulkan bahwa tanaman sirsak
yang digunakan dalam penelitian ini adalah benar tanaman sirsak dengan nama
ilmiah Annona muricata L.
B. Pembuatan Serbuk dan Penetapan Kadar Air Tanaman Sirsak
Pembuatan serbuk daun sirsak dengan cara mengolah sejumlah 184,0 g
daun sirsak basah lalu diproses dengan cara dipetik, dicuci, dan dikeringkan.
Proses pengeringan daun sirsak basah dengan menggunakan oven, suhu yang
dipakai 50oC selama 72 jam. Daun sirsak kering kemudian dibuat serbuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
menggunakan mesin penyerbuk (blender). Serbuk kering daun sirsak diayak
menggunakan ayakan nomor 40. Tujuan pengayakan ini adalah untuk
menyeragamkan ukuran serbuk daun sirsak. Ayakan nomor 40 diklasifikasikan
sebagai serbuk setengah kasar (Direktorat Jendral Pangawasan Obat dan
Makanan, 1994). Daun sirsak basah sejumlah 184,00 g yang telah diproses
tersebut, didapatkan serbuk kering daun sirsak sejumlah 41,40 g, lalu dilakukan
perhitungan rendemen. Perhitungan rendemen serbuk daun sirsak bertujuan
mengetahui persen jumlah serbuk kering daun sirsak yang diperoleh dari daun
sirsak basah yang telah diproses. Rendemen serbuk daun sirsak yang diperoleh
dari daun sirsak basah adalah sebesar 22,50 %.
Penetapan kadar air dilakukan dengan tujuan untuk memenuhi
persyaratan serbuk yang baik, yaitu tidak lebih dari 10% (Menteri Kesehatan RI,
1994). Penetapan kadar air serbuk daun sirsak dilakukan dengan metode destilasi
toluen. Prinsip dari metode ini adalah menguapkan air dengan pembawa cairan
kimia yang mempunyai titik didih lebih tinggi daripada air dan tidak dapat
bercampur dengan air serta memiliki berat jenis lebih rendah daripada air. Air
dikumpulkan dalam tabung penerima dan volume air yang terkumpul dapat
diketahui (Hariyanti, 2003). Hasil pengujian kadar air serbuk daun sirsak setelah
dilakukan replikasi sebanyak tiga kali menunjukkan bahwa serbuk daun sirsak
memiliki kadar air sebesar 9,7%. Hasil menunjukkan bahwa serbuk daun sirsak
telah memenuhi persyaratan serbuk yang baik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
C. Hasil Uji Kadar Glukosa Darah Tikus Jantan Akibat Pemberian InfusaDaun Sirsak
Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan spektrum efek toksik
infusa daun sirsak terhadap kadar glukosa darah, maka dilakukan pemeriksaan
terhadap kadar glukosa darah untuk mengungkapkan spektrum efek toksik
tersebut. Pemeriksaan kadar glukosa darah dilakukan pre (sebelum) pemberian
infusa daun sirsak dan post (setelah) pemberian daun sirsak selama 30 hari. Hal
ini ditujukan untuk melihat kebermaknaan perbedaan kadar glukosa darah
diantara keduanya. Pengukuran dilakukan terhadap glukosa darah sewaktu.
Glukosa darah sewaktu adalah pemeriksaan kadar glukosa darah sesaat tanpa
puasa dan tanpa pertimbangan waktu setelah makan (Sutedjo, 2006).
Pengukuran kadar glukosa darah menggunakan ARCHITECT ci 8200
dengan metode heksokinase/G-6-PDH. Prinsip metode heksokinase/G-6-PD yaitu
glukosa terfosforilasi oleh heksokinase dengan bantuan ATP dan ion Mg2+ untuk
menghasilkan glukosa-6-fosfat (G-6-P) dan adenosin difosfat (ADP). Glukosa-6-
fosfat dehidrogenase akan mengoksidasi G-6-P menjadi 6-fosfoglukonat dengan
bersamaan terjadi reduksi nikotinamid adenin dinukleotida (NAD) menjadi
nikotinamid adenin dinukleotida tereduksi (NADH). Satu ml NADH diproduksi
untuk setiap mol konsumsi glukosa. NADH yang dihasilkan akan menyerap
cahaya pada panjang gelombang 340 nm dan dideteksi secara spektrofotometri.
Pada penelitian ini terdapat lima kelompok perlakuan, yaitu kelompok
perlakuan infusa daun sirsak dosis 108; 180; 301; 503 mg/kgBB dan kelompok
kontrol aquadest 8333 mg/kgBB. Pelarut yang digunakan pada infusa daun sirsak
adalah aquadest dan dijadikan sebagai kelompok kontrol. Kelompok kontrol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
aqudest bertujuan untuk melihat apakah penggunaan aquadest sebagai pelarut
infusa daun sirsak dapat memberikan pengaruh terhadap kadar glukosa darah.
Dosis aquadest yang digunakan sebesar 8333 mg/kgBB dikarenakan konsentrasi
aquadest yang digunakan adalah 1 g/ml.
Kadar glukosa darah pada tiap kelompok diukur pada saat pre (sebelum)
dan post (setelah) pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari, lalu dianalisis
menggunakan uji Paired T-test, uji ini dilakukan karena subjek uji yang
digunakan sama namun memiliki perlakuan yang berbeda dan melihat apakah
terdapat pengaruh pemberian infusa daun sirsak yang bermakna pada pre dan post
perlakuan ditiap kelompok perlakuan.
Tabel I. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadarglukosa darah tikus jantan tiap kelompok
Kelompok Perlakuan
Kadar Glukosa Darah (mg/dl)
Nilai pPre
(RerataSEM)
Post
(RerataSEM)
IInfusa DaunSirsak 108mg/kgBB
75,6 5,0 70,6 4,2 0,510TB
IIInfusa DaunSirsak 180mg/kgBB
68,6 5,6 46,6 6,6 0,039B
IIIInfusa DaunSirsak 301mg/kgBB
70,4 4,0 51,2 5,7 0,098TB
IVInfusa DaunSirsak 503mg/kgBB
72,0 3,9 75,0 3,0 0,413TB
VKontrol
Aquadest 8333mg/kgBB tikus
77,8 3,2 67,0 5,9 0,247TB
Ket. : TB = berbeda tidak bermakna (p>0.05) B = berbeda bermakna (p
43
Gambar 6. Diagram batang rata-rata pengaruh pemberian infusa daun sirsakterhadap kadar glukosa darah tikus jantan antar kelompok perlakuan
Tabel II. Hasil uji Scheffe kadar glukosa darah tikus jantan setelah (post)pemberian infusa daun sirsak
Kelompok
KontrolAquadest
8333mg/kgBBtikus
InfusaDaunSirsak108
mg/kgBB
InfusaDaunSirsak180
mg/kgBB
InfusaDaunSirsak301
mg/kgBB
InfusaDaunSirsak503
mg/kgBBKontrol
Aquadest8333mg/kgBB
tikus
- TB TB TB TB
Infusa DaunSirsak 108mg/kgBB
TB - TB TB TB
Infusa DaunSirsak 180mg/kgBB
TB TB - TB B
Infusa DaunSirsak 301mg/kgBB
TB TB TB - TB
Infusa DaunSirsak 503mg/kgBB
TB TB B TB -
Ket. : TB = berbeda tidak bermakna (p>0.05) B = berbeda bermakna (p>0.05)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Hasil analisis data dari tabel I menunjukkan bahwa kadar glukosa darah
kelompok kontrol aquadest pada awal dan akhir masa uji menunjukkan perbedaan
yang tidak bermakna. Artinya, pemberian aquadest tidak memberikan pengaruh
terhadap kadar glukosa darah sehingga bila terjadi pengaruh terhadap kadar
glukosa darah tikus tidak disebabkan penggunaan aquadest sebagai pelarut infusa
daun sirsak.
Pada tabel I diperoleh hasil bahwa pada kelompok perlakuan infusa daun
sirsak 180 mg/kgBB, kadar glukosa darah pre dan post pemberian infusa daun
sirsak menunjukkan hasil berbeda bermakna (p>0,05). Kebermaknaan perbedaan
kelompok perlakuan infusa daun sirsak 180 mg/kgBB disebabkan terjadinya
penurunan kadar glukosa darah, dilihat dari nilai rerata SEM yaitu data pre-
perlakuan sebesar 68,6 5,6 mg/dl dan data post-perlakuan sebesar 46,6 6,6
mg/dl. Namun, apabila dilihat dari data post pemberian infusa daun sirsak, kadar
glukosa darah pada dosis tersebut yang dibandingkan dengan kadar glukosa darah
kelompok kontrol aquadest menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna (tabel II).
Hal ini berarti penurunan kadar glukosa darah akibat pemberian infusa daun sirsak
masih dalam batas normal.
Pada kelompok perlakuan infusa daun sirsak dosis 108 mg/kgBB, 301
mg/kgBB, dan 503 mg/kgBB menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna
terhadap kadar glukosa darah tikus jantan pada pre dan post pemberian infusa
daun sirsak. Hal ini menunjukkan pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari
tidak mengakibatkan perubahan kadar glukosa darah yang bermakna. Hal ini
dapat dikarenakan adanya proses pemeliharaan kadar glukosa darah yang stabil
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
merupakan salah satu mekanisme homeostatik yang diatur paling ketat yang
melibatkan hati, jaringan ekstrahepatik, dan beberapa hormon seperti insulin,
glukagon, kelenjar hipofisis dan epinefrin.
Setelah dilakukan analisis terhadap kadar glukosa darah pre dan post
pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari. Kadar glukosa darah post pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari dianalisis menggunakan One Way Anova,
bertujuan untuk melihat pengaruh pemberian infusa daun sirsak pada kelompok
perlakuan infusa daun sirsak yang dibandingkan terhadap kontrol aquadest.
Hasil analisis varian satu arah (One Way Anova) terhadap kadar glukosa
darah post pemberian infusa daun sirsak diperoleh nilai probabilitas sebesar 0,003
(p
46
Hasil menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna antara glukosa darah
tikus kelompok kontrol aquadest dengan semua kelompok perlakuan infusa daun
sirsak seperti terlihat pada tabel II. Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian
infusa daun sirsak tidak menimbulkan pengaruh yang bermakna terhadap kadar
glukosa darah tikus jantan. Hal tersebut dapat disebabkan oleh adanya mekanisme
untuk memelihara kadar glukosa darah untuk tetap dalam kondisi normal yang
merupakan salah satu mekanisme homeostatik yang diatur paling ketat dengan
melibatkan hati, jaringan ekstrahepatik, dan beberapa hormon (Murray, et al.,
2006).
Berdasarkan tabel II jika dilakukan pembandingan terhadap antar dosis
kelompok perlakuan, terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok
perlakuan infusa daun sirsak dosis 180 mg/kgBB dengan dosis 503 mg/kgBB.
Sedangkan, untuk antar dosis lainnya menunjukkan perbedaan yang tidak
bermakna.