Download - 09.55.06496 Marinda Eka Saputri
-
LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI DI M-BRIO FOOD LABORATORY BOGOR
oleh
Marinda Eka Saputri NIS 09.55.06496
KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri
Sekolah Menengah Kejuruan - SMAK Bogor 2013
-
LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI
DI M-BRIO FOOD LABORATORY BOGOR
Sebagai Syarat untuk Mengikuti Ujian Akhir Sekolah Menengah Kejuruan-SMAK Bogor Tahun Ajaran 2012/2013
oleh
Marinda Eka Saputri NIS 09.55.06496
KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA
Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri Sekolah Menengah Kejuruan - SMAK
Bogor 2013
-
LEMBAR PENGESAHAN DAN PERSETUJUAN
Disetujui dan disahkan oleh:
Disetujui oleh:
Intan Nurmala Dewi, STP Dra. Vera Marzuklina, M.Pd Manajer Mutu NIP. 19620212 198712 2 001 Pembimbing 1 , Pembimbing 2 ,
Disahkan oleh:
Dra.HadiatiAgustine NIP. 19570817 198103 2 002 Kepala Sekolah Menengah Kejuruan SMAK
Bogor
-
iii
DAFTAR ISI KATA PENGANTAR.i
DAFTAR ISI. .........................iii
DAFTAR TABEL........................... v
DAFTAR GAMBAR ......................... vi
DAFTAR LAMPIRAN .......................... vi
BAB I PENDAHULUAN. ............................. 1
A. Latar Belakang ............................................................................ 1
B. Tujuan Praktik Kerja Industri ....................................................... 2
C. Tujuan Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri ......................... 3
D. Sistematika Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri ................. 3
BAB II INSTITUSI PRAKERIN ........................... 4
A.Sejarah dan Perkembangan Perusahaan.. .......................... 4
B. Komitmen dan Misi Perusahaan.................................................. 5
C. Lokasi Perusahaan ..................................................................... 6
D. Struktur Organisasi M-BRIO Food Laboratory ............................. 7
E. Tugas dan Tanggung Jawab Organisasi ..................................... 8
BAB III TINJAUAN PUSTAKA ........................ 9
A. Jeli Agar ...................................................................................... 9
B. Mikrobiologi Pangan .................................................................. 11
C. Alat-alat yang digunakan saat Praktikum Mikrobiologi ............... 12
BABIVMETODEANALISIS...20
1. Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode TuangError! Bookmark not defined.
2. Uji Bakteri Coliform Metode Angka Paling Mungkin (APM)
Menggunakan Seri 3 Tabung ....... Error! Bookmark not defined. 3. Uji Bakteri Eschericcia coli Metode Angka Paling Mungkin (APM)
Menggunakan Seri 3 Tabung .................................................... 23
4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar ..................... 26
5. Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi ....................................... 27
6. Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang ............................. 32
7. Pewarnaan Gram menurut Preston dan Morrel ......................... 33
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN.. ......................... 34
-
iv
A. Hasil .......................................................................................... 34
B. Pembahasan ............................................................................. 34
1. Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode Tuang ........................... 34
2.Uji Bakteri Coliform...................................................................... 35
3.Uji Bakteri E.coli ......................................................................... 36
4.Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar ....................... 36
5.Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi.......................................... 37
6.Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang ................................ 38
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN............................... 39
A.Simpulan ...................................................................................... 39
B.Saran ........................................................................................... 39
DAFTAR PUSTAKA.. ............................ 40
-
v
DAFTAR TABEL Tabel 1. Tugas dan Tanggung Jawab PT. M-BRIO Food Laboratory ................. 8
Tabel 2. Hasil Reaksi IMViC dari E.coli .............................................................. 28
Tabel 3. Hasil Reaksi Biokimia dari Salmonella ................................................. 31
Tabel 4. Hasil Analisis Mikrobiologi Jeli Agar .................................................... 35
Tabel 5. Hasil Analisis ALT pada Jeli Agar ......................................................... 43
Tabel 6. Hasil Analisis Bakteri Coliform dan E. coli pada Jeli Agar..................... 44
Tabel 7. Hasil Analisis Bakteri Staphylococcus aureus pada Jeli Agar ............... 45
Tabel 8. Hasil Analisis Bakteri Salmonella pada Jeli Agar .................................. 46
Tabel 9. Hasil Analisis Kapang dan Khamir pada Jeli Agar ................................ 49
Tabel 10. Tabel APM Seri 3 Tabung .................................................................. 64
-
vi
DAFTAR GAMBAR Gambar 1.Autoklaf ............................................................................................... 6
Gambar 2. ose ................................................................................................... 13
Gambar 3. Cawan petri ...................................................................................... 13
Gambar 4. Tabung reaksi .................................................................................. 14
Gambar 5. Tabung durham ................................................................................ 14
Gambar 6. Pembakar spirtus ............................................................................. 15
Gambar 7. Inkubator .......................................................................................... 15
Gambar 8. Hot plate .......................................................................................... 15
Gambar 9. Colony counter ................................................................................. 16
Gambar 10. Mikroskop....................................................................................... 16
Gambar 11. Water bath ..................................................................................... 16
Gambar 12. Stomacher ...................................................................................... 17
Gambar 13. Laminar flow ................................................................................... 17
Gambar 14. Oven .............................................................................................. 18
Gambar 15. Mikropipet dan tip ........................................................................... 18
Gambar 16. Mesin Vortex .................................................................................. 18
Gambar 17. pH meter ........................................................................................ 19
Gambar 18. Hasil Pengamatan Uji Angka Lempeng total .................................. 43
Gambar 19. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Coliform dan E.coli .......................... 44
Gambar 20. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Staphylococcus aureus ................... 45
Gambar 21. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Tahap Enrichment, Kontrol
Negatif dan Kontrol Positif) ................................................................................ 46
Gambar 22. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi dari media TBB) . 47
Gambar 23. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi Salmonella dari
Media SCB) ....................................................................................................... 48
Gambar 24. Hasil Pengamatan Kapang dan Khamir .......................................... 49
-
iii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Gambar Hasil pengamatan Uji Angka Lempeng Total pada Media
PCA ................................................................................................................... 40
Lampiran 2. Gambar Hasil Pengamatan Bakteri Coliform dan E.coli pada Media
LSTB ................................................................................................................. 41
Lampiran 3. Gambar Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus pada Media BPA
.......................................................................................................................... 42
Lampiran 4. Gambar Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella .............................. 43
Lampiran 5. Gambar Hasil Pengamatan Kapang dan khamir Pada Media PDA . 47
Lampiran 6.Pembuatan Media dan Pereaksi ..................................................... 48
Lampiran 7. Tabel APM Seri 3 Tabung .............................................................. 64
-
vi
-
1
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Sejalan dengan meningkatnya pembangunan di sektor industri
maka tidak dapat dielakkan lagi sekolah-sekolah kejuruan, khususnya
Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor harus mampu menghadapi
tuntutan dan tantangan yang senantiasa muncul dalam kondisi seperti
sekarang ini. Mengingat tuntutan dan tantangan masyarakat industri di
tahun-tahun mendatang akan semakin meningkat dan bersifat padat
pengetahuan dan keterampilan, maka pengembangan pendidikan
menengah kejuruan khususnya rumpun kimia analisis harus difokuskan
kepada lulusan yang berkualitas. Berkaitan dengan itu, maka pola
pengembangan yang digunakan dalam pembinaan sistem pendidikan
menjadi sangat penting.
Seperti halnya sekolah menengah kejuruan lainnya, Sekolah
Menengah Kejuruan SMAK Bogor memepunyai visi,mengemban misi
dan memilki tujuan sebagai berikut.
1. Visi
Menjadi sekolah menengah analis kimia nasional bertaraf
internasional yang menghasilkan lulusan professional dan bermartabat.
2. Misi
a. Melakasanakan pendidikan kejuruan analisis kimia yang berkualitas
mampu memenuhi kebutuhan masyarakat dunia usaha dan dunia industri
baik tingkat nasional maupun internasional.
b. Meningkatkan kemitraan nasional dan membina kemitraan internasional.
c. Membina dan menyelenggarakan fungsi sosial dan kemasyarakatan.
-
2
3. Tujuan
Menyiapkan tamatan untuk menjadi tenaga kerja tingkat
menengah dalam bidang teknisi pengelola laboratorium, pengatur dan
pelaksana analis kimia, serta melanjutkan ke jenjang yang lebih tinggi.
Untuk mengatasi hal tersebut, perlu adakemitraan antara sekolah dengan
dunia industri, dimana dunia industri turut membantu kekurangan sekolah
melalu Praktik Kerja Industri.
B. Tujuan Praktik Kerja Industri
Dalam rangka melaksanakan program kurikulum Sekolah
Menengah Kejuruan SMAK Bogor tahun ajaran 2012/2013, pihak
sekolah mewajibkan siswa kelas 13 untuk melaksanakan Praktik Kerja
Industri pada semester VIII selama 12 minggu efektif (3 bulan) termasuk
pembuatan laporan dan pelaksanaan ujian, mulai tanggal 12 November
2012 sampai tanggal 01 Maret 2013. Tujuan dari Praktik Kerja Industri
adalah :
1. Meningkatkan kemampuan dan memantapkan keterampilan siswa
sebagai bekal kerja yang sesuai dengan program studi kimia analisis.
2. Menumbuhkembangkan dan memantapkan sikap professional siswa
dalam rangka memasuki lapangan kerja.
3. Meningkatkan wawasan siswa pada aspek-aspek yang potensial
dalam dunia kerja, antara lain : struktur organisasi, disiplin, lingkungan
dan sistem kerja.
4. Meningkatkan pengetahuan siswa dalam hal penggunaan instrument
kimia analisis yang lebih modern, dibandingkan dengan fasilitas yang
tersedia di sekolah.
5. Memperoleh masukan dan umpan balik guna memperbaiki dan
mengemban pendidikan di SMK-SMAK Bogor.
6. Memperkenalkan fungsi dan tugas seorang analis kimia (sebutan bagi
lulusan SMK-SMAK Bogor) kepada lembaga-lembaga penelitian dan
perusahaan industri di tempat pelaksanaan Prakerin (sebagai
konsumen tenaga analis kimia).
-
3
C. Tujuan Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri
Setiap siswa yang telah melaksanakan Praktik Kerja Industri wajib
membuat rangkuman hasil kegiatannya berupa sebuah laporan. Adapun
tujuan penulisan laporan yaitu :
1. Memantapkan siswa dalam pengembangan dan penerapan pelajaran dari
sekolah di institusi tempat prakerin.
2. Siswa mapu mencari alternatif lain dalam pemecahan masalah analisis
kimia, secara lebih rinci dan mendalam (seperti apa yang terungkap
dalam laporan prakerin yang dibuatnya).
3. Menambah koleksi pustaka di perpustakaan sekolah maupun di institusi
prakerin, sehingga dapat menambah pengetahuan, baik bagi dirinya
(penulis) maupun para pembaca.
4. Siswa dapat membuat laporan kerja dan mempertangggung
jawabkannya.
D. Sistematika Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri
Penulisan laporan terdiri dari beberapa bagian, yaitu :
1. Bagian pertama yang terdiri dari: halaman judul, lembar pengesahan,
kata pengantar, daftar isi, daftar tabel, dan daftar lampiran.
2. Bagian kedua yang terdiri dari:
a. Pendahuluan yang berisi uraian latar belakang dan tujuan prakerin,
tujuan penulisan laporan, dan sistematika laporan prakerin.
b. Institusi prakerin yang berisi sejarah dan perkembangan perusahaan,
komitmen dan misi perusahaan, lokasi perusahaan, struktur
organisasi, tugas dan tanggung jawab.
c. Kegiatan di laboratorium yang berisi deskripsi komoditi, metode
analisis (secara teoritis maupun praktik), cara kerja, serta sarana dan
peralatan yang digunakan.
d. Pembahasan yang berisi uraian tentang metode yang digunakan
dalam analisis, serta hasil analisis.
-
4
3. Bagian ketiga yang berisi simpulan dan saran, daftar pustaka dan
lampiran.
BAB II INSTITUSI PRAKERIN
A. Sejarah dan Perkembangan Perusahaan
M-BRIO Food Laboratory didirikan pada tanggal 15 Februari 1999
beredasarkan Akte Notaris No. tanggal 8 Januari 1999, dengan nama CV
Embrio Biotekindo dengan Akte Notaris No.14 PT. Embrio Biotekindo
memiliki lima divisi yaitu:
1. Divisi M-BRIO Food Laboratory, merupakan laboratorium yang
bergerak di bidang pangan (food safety).
2. Divisi M-BRIO HACCP Certification Body, yaitu layanan jasa sertifikasi
HACCP uuntuk sistem keamanan pangan (food safety).
3. Divisi M-BRIO Training, yang melayani pelatihan dibidang mutu dan
keamanan pangan berbasis kompetensi (CBT).
4. Divisi M-BRIO Research & Development (R & D), yang memberikan
pelayanan jasa penelitian dan pengembangan produk pangan untuk
produk-produk baru maupun modifikasi.
5. M-BRIO Press, yang menerbitkan buku-buku bermutu tentang pangan
dan industri pangan untuk kalangan awam dan akademik.
M-BRIO Food Laboratory merupakan salah satu divisi dari PT
Embrio Biotekindo yang bergerak dalam jasa analisis pengujian dalam
bidang kimia dan mikrobiologi khusus untuk produk pangan (food
specialist). Jasa pengujian yang ditawarkan oleh laboratorium M-BRIO
antara lain adalah : komposisi makanan, kualitas makanan, nutrition fact,
aktivitas enzim, kadaluarsa, sensori, logam berat, residu peptisida, uji
mikroba, dan Tempat Uji Kompetensi (TUK). Selain itu M-BRIO Food
Laboratory juga sebagai provider program uji profisiensi yang
diselenggarakan Komite Akreditasi Nasional (KAN).
-
5
M-BRIO Food Laboratory telah memperoleh akreditasi dari:
1. Komite Akreditasi Nasional (KAN) sebagai laboratorium penguji
tanggal 02 Juni 2000 dengan nomor akreditasi LP-067-IDN.
2. Komite Nasional Akreditasi Pranata Penelitian dan
Pengembangan (KNAPPP) sebagai laboratorium penelitian dan
pengembangan sejak tahun 2004, dengan nomor akreditasi PL-
005-INA.
3. LEMBAGA Sertifikasi Profesi Tenaga Laboratorium Penguji
Indonesia (LSPTELAPI) sejak tahun 2007, dengan nomor 2-
TELAPI IV/07/013 sebagai laboratorium tempat uji kompetensi
bagi personil laboratorium (TUK).
B. Komitmen dan Misi Perusahaan
M-BRIO Food Laboratory memiliki komitmen Akurat, Cepat dan
Bersahabat Demi Kepuasan Pelanggan serta mengemban misi sebagai
berikut :
1. Untuk memuaskan pelanggan M-BRIO Food Laboratory memberikan
pelayanan jasa pengujian dengan hasil akurat dan cepat.
2. Pengelolaan M-BRIO Food Laboratory mengacu pada ISO/IEC-
17025:2005 dan pedoman KNAPPP 02:2004 secara konsisten.
M-BRIO Food Laboratory didukung oleh personil yang memiliki
kualifikasi yang dapat dipertanggungjawabkan .
-
4
-
6
C. Lokasi Perusahaan
PT EMBRIO Biotekindo berada pada dua lokasi. Kantor pusat
terletak di jalan Pajajaran Indah V No. 1 C Baranangsiang, Bogor 16143.
Telepon (0251) 8332403, 8377973, yang meliputi divisi HACCP & ISO
Certification Body, M-BRIO Training Body dan M-BRIO Press. Sedangkan
divisi M-BRIO Food Laboratory dan M-BRIO Research and Development
(R&D) terletak di Jalan Villa Indah Pajajaran Blok B-17 Pulo Armin, Bogor
16143. Telepon/Faksimile (0251) 8346986/8325753.
-
7
D. Struktur Organisasi M-BRIO Food Laboratory
-
8
E. Tugas dan Tanggung Jawab Organisasi
No. Organisasi Penanggung Jawab Ruang Lingkup Pekerjaan 1. Manajemen Founder & Chairman a. Mengembangkan laboratorium
secara keseluruhan. b. Menandatangani dokumen-
dokumen yang mengikat perusahaan secara hukum dengan pihak lain.
2. Manajemen Direktur Administrasi Keuangan & Marketing
a. Mengelola keuangan dan pendanaan secara keseluruhan.
b. pengembangan sumber daya. c. Pemasaran jasa laboratorium.
3. Manajemen Kepala Divisi a. Bertanggungjawab dalam pengelolaan laboratorium secara keseluruhan.
b. Menandatangani dokumen-dokumen yang berkaitan dengan laboratorium.
4. Manajemen Manajer Keuangan & Marketing
a. Bertanggungjawab atas keuangan dan pemasaran jasa laboratorium.
5. Manajemen Asisten Manajer Keuangan & Marketing
a. Mengelola keuangan dan pemasaran jasa laboratorium.
6.
Manajemen Teknik
Manajer Teknik a. Memimpin kegiatan teknik di laboratorium
b. Bertanggungjawab atas proses pengujian dan mutu hasil pekerja teknik.
Supervisor Laboratorium
a. Bertanggungjawab terhadap operasional teknis laboratorium.
Analis Melaksanakan pekerjaan sesuai ruang lingkup laboratorium.
7. Manajemen Mutu
Manajer Mutu a. Bertanggungjawab dalam pelaksanaan implementasi dan dokumentasi sistem manajemen mutu laboratorium.
b. Bertanggungjawab atas administrasi laboratorium.
Supervisor jaminan mutu
a. Memantau pelaksanaan implementasi dan dokumentasi system manajemen mutu laboratorium
b. Mengelola administrasi dan pembelian barang/jasa
Staf Administrasi dan keuangan
a. Menerbitkan laporan hasil pengujian
b. Bertanggungjawab atas pengelolaan kegiatan manajemen sampel di laboratorium.
Tabel 1. Tugas dan Tanggung Jawab PT. M-BRIO Food Laboratory
-
9
BAB III TINJAUAN PUSTAKA
A. Jeli Agar
Menurut SNI 01-3552-1994, Jeli adalah makanan ringan berbentuk
gel, dapat dibuat dari pektin, agar, karagenan, gelatin, atau senyawa
hidrokoloid lainnya dengan penambahan gula, asam dan atau dengan bahan
tambahan makanan lain yang diizinkan. Jeli dibuat dengan mencampurkan
bubuk jeli, air, bahan pemanis, dan asam kemudian dimasak pada suhu 81-
85C selama 15-25 menit. Produk jeli merupakan olahan lanjut dari sari buah
jernih memiliki tekstur padat dan transparan (tembus pandang), dibuat
melalui proses pengentalan dan pencetakan. Bentuk, ukuran dan
warna produk jeli bervariasi disesuaikan dengan kesukaan anak-anak. Jeli
mengandung unsur gizi dan kalori. (Suprapti, 2004)
Minuman jeli adalah minuman yang terbuat dari jeli yang berbentuk
cair dan kenyal dan mengandung banyak serat. Untuk meningkatkan daya
tarik, minuman jeli ditambah dengan nata de coco, nata de soya atau
manisan buah dalam berbagai bentuk. Sifat dasar dari minuman ini adalah
rendah lemak dan tinggi serat, kandungan gizi minuman jeli tergantung dari
bahan pembuatnya. Bahan dasar dalam pembuatan jeli yang paling
bermanfaat adalah sari buah karena mengandung banyak serat dan nilai gizi.
Secara umum, minuman jeli mempunyai empat atau lima komponen utama
yaitu bahan pembentuk jel (hidrokoloid), air, pengasam (bisa berupa asam
sitrat atau sari buah), gula (pemanis), perasa (komponen flavor atau buah),
serta pewarna. Tekstur jel yang terbentuk sangat dipengaruhi oleh jenis
bahan pembentuk jel, gula, asam dan komponen lainnya. (Suprapti, 2004)
Mutu produk minuman jeli sangat di pengaruhi oleh beberapa hal,
antara lain bahan baku yang sesuai dengan ketentuan, proses produksi yang
benar, penggunaan bahan pengawet, pengemasan, penutupan kemasan,
penerapan sistem pengawetan, dan penyimpanan. Oleh karena itu, perlu
-
10
dilakukan uji cemaran mikroba pada jeli untuk mengetahui mutu jeli berdasarkan
ada atau tidaknya kontaminasi saat proses pembuatannya. Jika kontaminasi
terjadi, maka mikroba dapat tumbuh dan berkembang biak pada jeli tersebut
karena jeli mengandung gula dan pektin yang dapat mendukung pertumbuhan
mikroba.
Adapun bagan pembuatan jeli agar sebagai berikut :
-
11
B. Mikrobiologi Pangan
Mikrobiologi adalah suatu ilmu yang mempelajari makhluk hidup yang
sangat kecil yang hanya dapat dilihat dengan menggunakan lensa pembesar
atau mikroskop. Makhluk yang sangat kecil tersebut disebut mikroorganisme
atau mikroba, dan ilmu yang mempelajari tentang mikroba yang sering
ditemukan pada pangan disebut mikrobiologi pangan. Yang dimaksud
dengan pangan disini mencakup semua makanan, baik bahan baku pangan
maupun yang sudah diolah (produk jadi).
Makanan mengandung berbagai macam nutrisi seperti air, karbon,
nitrogen, mineral serta faktor lingkungan berupa kelembaban dan pH yang
dapat menunjang pertumbuhan mikroba. Pertumbuhan mikroba pada pangan
dapat menimbulkan berbagai perubahan, baik yang merugikan maupun yang
menguntungkan. Mikroba yang merugikan misalnya yang menyebabkan
kerusakan pangan seperti terjadinya pembusukan, perubahan warna, tekstur,
menimbulkan bau busuk, lendir, asam, pembentukan gas, dan perubahan-
perubahan lain yang tidak diinginkan.
Selain itu, beberapa bakteri dapat menyebabkan gejala sakit atau
keracunan disebut bakteri patogenik atau patogen. Gejala penyakit yang
disebabkan oleh patogen timbul karena bakteri tersebut masuk ke dalam
tubuh melalui produk pangan yang dimakan dan dapat berkembang biak di
dalam saluran pencernaan dan menimbulkan gejala sakit perut, diare,
muntah, mual, dan gejala lain. Beberapa bakteri yang tergolong ke dalam
bakteri patogen adalah Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, dan
Bacillus cereus yang memproduksi racun yang menyerang saluran
pencernaan dan disebut enterotoksin, dan Clostridium botulinum yang
memproduksi racun yang menyerang syaraf serta dapat menyebabkan
kelumpuhan saluran tenggorokan dan disebut neurotoksin atau racun
botulinum (Sudiarto,2010).
Beberapa bakteri penyebab penyakit seringkali terdapat dalam jumlah
kecil didalam makanan, oleh karena itu dalam isolasinya diperlukan beberapa
tahapan pengujian yaitu tahap pra-pengkayaan (pre-enrichment),
pengkayaan (enrichment), seleksi dan identifikasi.
-
12
Pada tahap pra-pengkayaan (pre-enrichment) dan pengkayaan
(enrichment) digunakan medium yang dapat merangsang pertumbuhan
bakteri target yang akan diuji, tetapi bakteri lainnya masih mungkin tumbuh.
Medium pengkaya (enrichment) bersifat lebih spesifik dibandingkan dengan
medium pra-pengkayaan. Pada tahap seleksi digunakan medium selektif
yang dapat merangsang pertumbuhan bakteri target dan menghambat
pertumbuhan bakteri non-target pada medium selektif ini ditandai dengan
terbentuknya koloni yang mempunyai ciri-ciri penampakan yang spesifik.
Tahap identifikasi bakteri pada umumnya memerlukan beberapa tahap yaitu :
1. Uji penduga
2. Uji penguat
3. Uji pelengkap (Fardiaz,1989)
C. Alat-alat yang digunakan saat Praktikum Mikrobiologi
1. Autoklaf
Autoklaf adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan
bahan yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas
bertekanan. Tekanan yang digunakan pada umumnya 15 psi atau sekitar 2
atm dan dengan suhu 121C (250F). Proses sterilisasi dilakukan pada suhu
121C selama 15 menit.
Gambar 1.Autoklaf
-
13
2. Jarum inokulum / ose
Jarum inokulum berfungsi untuk memindahkan biakan (bakteri dan
khamir) untuk ditanam/ditumbuhkan ke media baru. Jarum inokulum biasanya
terbuat dari kawat nichrome atau platinum sehingga dapat berpijar jika
terkena panas. Bentuk ujung jarum dapat berbentuk lingkaran (loop) dan
disebut ose atau inoculating loop / transfer loop, dan yang berbentuk lurus
disebut inoculating needle / transfer needle. Inoculating loop cocok untuk
melakukan streak di permukaan agar, sedangkan inoculating needle
digunakan untuk inokulasi secara tusukan pada agar tegak (stab inoculating).
3. Cawan petri
Cawan petri terbuat dari gelas dan berfungsi sebagai tempat
pembiakan mikroorganisme. Media pertumbuhan dapat dituang ke cawan
bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutup. Cawan petri tersedia
dalam berbagai macam ukuran yaitu berdiameter 5 cm, 8 cm, 9 cm atau 15
cm. Cawan berdiameter 15 cm dapat menampung media sebanyak 15-20 ml,
sedangkan cawan berdiameter 9 cm kira-kira cukup diisi media sebanyak 10
ml.
Gambar 2. ose
Gambar 3. Cawan petri
-
14
4. Tabung Reaksi
Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan sebagai tempat media
pertumbuhan atau penampungan cairan lainnya seperti pelarut dalam
pengenceran. Tabung reaksi dipilih karena bentuknya yang vertikal
(bandingkan dengan cawan petri) sehingga mempermudah penanganan dan
menghemat tempat penyimpanan. Tabung reaksi dapat diisi media padat
maupun cair. Media padat yang dimasukkan ke tabung reaksi dapat diatur
menjadi 2 bentuk menurut fungsinya, yaitu media agar tegak (deep tube
agar) dan agar miring (slants agar).
5. Tabung Durham
Tabung Durham berbentuk mirip dengan tabung reaksi namun
ukurannya lebih kecil dan tanpa tutup. Tabung Durham berfungsi untuk
menampung/menjebak gas yang terbentuk dari metabolisme pada bakteri
yang diujikan. Penempatannya terbalik dalam tabung reaksi dan harus
terendam sempurna dalam media (jangan sampai ada sisa udara) sebelum
diinokulasikan bakteri uji.
Gambar 4. Tabung reaksi
Gambar 5. Tabung durham
-
15
6. Pembakar Spirtus
Pembakar spirtus digunakan untuk sterilisasi alat inokulasi dengan
pembakaran seperti sterilisasi jarum inokulum atau spreader. Untuk
memastikan kesterilannya jarum inokulum dibakar sampai membara dan
spreader dapat dicelupkan alkohol lalu dibakar.
7. Inkubator
Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba
pada suhu terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu.
8. Hot plate
Merupakan alat yang digunakan untuk memanaskan suatu zat
dengan menggunakan listrik sebagai sumber energi yang kemudian diubah
menjadi energi panas. Proses pelarutan media akan lebih sempurna jika
dilakukan diatas hot plate, namun pada suhu pemanasan yang sesuai.
Gambar 6. Pembakar spirtus
Gambar 7. Inkubator
Gambar 8. Hot plate
-
16
9. Colony counter
Alat ini berguna untuk mempermudah perhitungan koloni yang
tumbuh setelah diinkubasi di dalam cawan karena adanya kaca pembesar.
Selain itu, alat tersebut dilengkapi dengan skala/kuadran yang sangat
berguna untuk pengamatan pertumbuhan koloni sangat banyak. Jumlah
koloni pada cawan petri dapat ditandai dan dihitung otomatis dapat di-reset.
10. Mikroskop
Mikroskop adalah alat yang dapat digunakan untuk melihat sel
mikroba yang sedemikian rupa kecil ukurannya melalui suatu sistem lensa
pembesar.
11. Water bath (Coliform Incubator)
Fungsi utama water bath adalah untuk menciptakan suhu yang
konstan dan digunakan untuk inkubasi pada analisa mikrobiologi. Pada water
bath suhu yang digunakan biasanya 44,50-45,50C untuk analisa konfirmasi
E.coli dengan ketelitian suhu 0,1C.
.
Gambar 9. Colony counter
Gambar 10. Mikroskop
Gambar 11. Water bath
-
17
12. Stomacher
Stomacher dapat berfungsi sebagai pengganti blender karena
memiliki fungsi sebagai alat untuk homogenisasi. Prinsip dari stomacher
adalah untuk melepaskan sel-sel bakteri atau mikroorganisme yang
terkandung dalam sampel. Komponen pada stomacher meliputi : kantong
plastik steril dan stomacher merupakan suatu alat berbentuk kotak yang pada
bagian dalam ada suatu pedal penumbuk.
13. Laminar Air Flow (LAF)
Semua prosedur mikrobiologi yang melibatkan patogen, pembuatan
media yang steril atau pemeriksaan bahan makanan dibutuhkan suasana
yang steril termasuk tempat juga harus steril, Untuk itu digunakan Laminar Air
Flow. Komponen LAF terdiri dari : exhaust filter, lampu neon biasa, lampu
UV.
Gambar 12. Stomacher
Gambar 13. Laminar flow
-
18
14. Oven
Sterilisasi dengan pemanasan kering untuk peralatan gelas yang
tahan terhadap pemanasan tinggi dilakukan dengan menggunakan oven.
15. Mikropipet dan tip
Mikropipet adalah alat untuk memindahkan cairan yang bervolume
cukup kecil. Beberapa ukuran volume mikropipet diantaranya 10-100 l, 20-
200 l, 100-1000 l dan 1-5 ml. Banyak pilihan kapasitas dari mikropipet,
misalnya mikropipet yang dapat diatur volume pengambilannya (adjustable
volume pipette) dan mikropipet yang tidak bias diatur volumenya. Tip
digunakan sesuai dengan volume mikropipet.
16. Vortex
Gambar 14. Oven
Gambar 15. Mikropipet dan tip
Gambar 16. Mesin Vortex
-
19
Vortex adalah alat yang memiliki suatu dudukan berengsel yang dapat
berputar cepat sehingga larutan dalam botol atau tabung yang diletakkan
(dengan ditekan) akan berputar dan teraduk. Umumnya digunakan untuk
menghomogenisasi larutan dalam botol atau tabung saja. Jika menggunakan
alat ini analis tidak perlu mengocok tabung menggunakan tangan dan cara ini
mampu meminimalisasi resiko tumpahan.
17. pH meter
pH meter merupakan alat yang digunakan untuk mengukur pH suatu
larutan. Pada laboratorium mikrobiologi biasa digunakan untuk mengukur pH
media sehingga mikroorganisme dapat tumbuh dengan baik pada media
biakan tersebut.
Gambar 17. pH meter
-
20
BAB IV METODE ANALISIS
1. Uji Angka Lempeng Total Metode Tuang
(Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)
Prinsip : Pada suhu pertumbuhan bakteri mesofil aerob setelah contoh
diinkubasikan dalam media yang cocok pada suhu 351C selama 24-48
jam.
Peralatan :
a. Tabung reaksi
b. Rak tabung
c. Gelas ukur 100 ml
d. Mikropipet
e. Cawan petri
f. Vortex mixer
g. Inkubator suhu 361C
h. Penangas air
i. Pengaduk
j. Colony Counter
k. Neraca analitik
l. Stomacher
m. Laminar flow
n. Erlenmeyer
Pereaksi :
a. Buffered Peptone Water (BPW)
b. Plate Count Agar (PCA)
c. Alkohol 70%
Cara kerja :
1. Ditimbang sebanyak 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung
plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hingga diperoleh pengenceran
1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan
pengenceran yang diperlukan.
-
21
2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan
Petri steril, dibuat duplo.
3. Ke dalam setiap cawan Petri dituangkan sebanyak 15 ml Media PCA
yang telah didinginkan hingga suhu 45 C.
4. Lakukan putaran pada cawan petri hingga membentuk angka delapan
supaya contoh tercampur rata dengan media.
5. Dikerjakan blanko dengan mencampurkan larutan pengencer dengan
media.
6. Dikerjakan kontrol positif dengan mencampurkan suspensi bakteri
dengan media.
7. Diamkan campuran dalam cawan petri hingga padat.
8. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 351C selama
24-48 jam.
9. Dicatat pertumbuhan koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan
alat Colony counter.
Perhitungan : Faktor pengenceran = 1/pengenceran Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran
2. Uji Bakteri Coliform Metode Angka Paling Mungkin (APM)
Menggunakan Seri 3 Tabung
(Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)
Prinsip : Pertumbuhan bakteri Coliform yang ditandai dengan
terbentuknya gas dalam tabung Durham, setelah contoh diinkubasi pada
media yang cocok pada suhu 361C selama 24-48 jam dan jumlah
bakteri Coliform dapat diketahui berdasarkan tabel APM.
Peralatan :
a. Tabung reaksi
b. Rak tabung
c. Tabung Durham
d. Mikropipet
e. Cawan petri
-
22
f. Inkubator suhu 361C
g. Sengkelit(ose)
h. Neraca analitik
i. Stomacher
j. Laminar flow
k. Pembakat spirtus
l. Erlenmeyer
Pereaksi :
a. Buffered Peptone Water (BPW)
b. Lauryl Sulphate Tryptone Broth (LSTB)
c. Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)
d. Alkohol 70%
Cara kerja :
1. Ditimbang sebanyak 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung
plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hingga diperoleh pengenceran
1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan sampai
dengan pengenceran 1:1000.
2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke dalam 3
media tabung yang berisi Lauryl Sulphate Tryptone Broth yang
didalamnya terdapat tabung durham terbalik.
3. Diinkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam.
4. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas.
Uji Penegasan : a. Diambil satu ose dari tabung yang terbentuk gas.
b. Dimasukkan ke dalam tabung ulir yang berisi durham dengan media
BGLBB
c. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 24-48 jam.
d. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas.
e. Dihitung jumlah bakteri berdasarkan tabel APM seri 3 tabung.
Perhitungan :
Jumlah Bakteri = dihitung berdasarkan tabel APM seri 3 Tabung
-
23
3. Uji Bakteri Eschericcia coli Metode Angka Paling Mungkin (APM)
Menggunakan Seri 3 Tabung
(Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)
Prinsip : Pertumbuhan bakteri E.coli yang ditandai dengan terbentuknya
gas dalam tabung Durham, setelah contoh diinkubasi pada media yang
cocok pada suhu 44,5-45,5C selama 24-48 jam yang diikui uji biokimia
dan jumlah bakteri E.coli dapat diketahui berdasarkan tabel APM.
Peralatan :
a. Tabung reaksi
b. Rak tabung
c. Tabung Durham
d. Gelas ukur 100 ml
e. Mikropipet
f. Cawan Petri
g. Inkubator suhu 361C
h. Penangas air 44,5-45,5C
i. Pengaduk
j. Sengkelit (ose)
k. Neraca analitik
l. Stomacher
m. Laminar flow
n. Pembakar spirtus
o. Erlenmeyer
Pereaksi :
a. E.coli Broth (ECB)
b. Lauryl Sulfate Tryptose Broth (LSTB)
c. Eosin Methylene Blue (EMB) Agar
d. Nutrient Agar (NA)
e. Tryptone Broth
f. Methylene Red Voges Proskauer Broth (MRVP).
-
26
g. Koser Citrate Broth (KS)
h. Indikator Merah Metil
i. Larutan -naftol 5%
j. Larutan KOH 40%
k. Alkohol 70%
Cara kerja :
1. Diambil satu ose dari tabung durham yang terbentuk gas dari media
LSTB.
2. Dimasukkan ke dalam tabung ulir yang berisi durham terbalik dengan
media ECB.
3. Diinkubasi pada suhu 44,5-45,5C selama 24-48 jam dalam penangas
air.
4. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas.
5. Dihitung jumlah bakteri berdasarkan table APM seri 3 tabung.
6. Bila terbentuk gas, suspensi tersebut digoreskan pada media EMB
Agar.
7. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam.
8. Jika terbentuk koloni warna kilap logam maka hasil positif, sedangkan
jika tidak terbentuk koloni warna kilap logam maka hasil negatif
(dibandingkan terhadap kontrol positif E.coli ATCC 25922)
9. Koloni digoreskan pada media NA miring.
10. Lalu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam.
11. Dilanjutkan dengan pewarnaan gram,dan dilakukan uji Indol Reagent
Merah Voges Proskauer Koser Citrate (IMViC).
Pengujian IMViC :
a. Uji Indol :
1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam
Tryptone broth.
2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 18-24 jam.
3) Ditambahkan 0,2-0,3 pereaksi Indole (Kovacs)
4) Dikocok selama 10 menit, warna merah tua pada permukaan
menunjukkan hasil indol positif, warna jingga menunjukkan reaksi
Indol negatif.
-
26
b. Uji Merah Methyl
1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam
MRVP Broth.
2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 24-48 jam.
3) Dipipet 5 ml biakan ke dalam tabung steril.
4) Ditambahkan 5 tetes larutan MM dan kocok, warna kuning
menunjukkan hasil negatif, dan warna merah menunjukkan hsil
positif.
c. Uji Voges Proskauer
1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam
MRVP Broth.
2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 24-48 jam.
3) Dipipet 1 ml biakan ke tabung steril
4) Ditambahkan 0,6 -naftol 5% dan 0,2 ml KOH 40% dan kocok.
Warna merah muda hingga merah tua menunjukkan reaksi positif,
dan warna tidak berubah menunjukkan reaksi negatif.
d. Uji Citrate
1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam
Koser Citrate.
2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 48-96 jam.
Adanya kekeruhan pada media Koser Citrate menunjukkan reaksi
positif.
Bakteri Indol Methyl Red Voges Proskauer
Citrate
E..coli + + - - Tabel 2. Hasil Reaksi IMViC dari E.coli
Perhitungan :
Jumlah Bakteri = dihitung berdasarkan tabel APM seri 3 Tabung
-
26
4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)
Prinsip : Pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada perbenihan
khusus setelah inkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam dan
dilanjutkan dengan uji koagulase.
Peralatan :
a. Tabung reaksi
b. Rak tabung
c. Holkey stick
d. Gelas ukur 100 ml
e. Mikropipet
f. Cawan petri
g. Inkubator suhu 361C
h. Colony counter
i. Pengaduk
j. Sengkelit(ose)
k. Neraca analitik
l. Stomacher
m. Laminar flow
n. Pembakat spirtus
o. Erlenmeyer
Pereaksi :
a. Buffered Peptone Water (BPW)
b. Larutan Fisiologis 0,85%
c. Baird Parker Agar (BPA)
d. Brain Heart Infusion Broth (BHIB)
e. Plasma darah kelinci
f. Alkohol 70%
-
27
Cara kerja :
1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung
plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hinnga diperoleh pengenceran
1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan
pengenceran yang diperlukan.
2. Dipipet 0,1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan
petri yang berisi media BPA lau disebarkan dengan menggunakan
holkey stick, dikerjakan secara duplo dan dilakukan blanko.
3. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 361C selama
18-24 jam.
4. Dihitung jumlah koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan alat
Colony counter. Cirinya koloni berwarna hitam dikelilingi areal bening,
lalu dilanjutkan dengan uji koagulase (dibandingkan dengan control
positif S.aureus ATCC 25923).
Uji Koagulase :
a. Diambil satu koloni yang dicurigai.
b. Dimasukkan ke dalam tabung yang berisi media BHI.
c. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam.
d. Diambil 0,1 ml biakan ke dalam tabung yang berisi plasma darah
kelinci sebanyak 0,3 ml.
e. Dihitung jumlah Staphylococcus aureus yang memberikan reaksi
koagulase positif.
Perhitungan :
Faktor pengenceran = 1/pengenceran
Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran
5. Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)
Prinsip : Pertumbuhan Salmonella pada perbenihan selektif yang
dilanjutkan dengan uji biokimia dan uji serologi.
-
28
Peralatan :
a. Tabung reaksi
b. Rak tabung
c. Gelas ukur 100 ml
d. Mikropipet
e. Cawan petri
f. Inkubator suhu 37C dan 42-43C
g. Penangas air
h. Pengaduk
i. Sengkelit(ose)
j. Neraca analitik
k. Stomacher
l. Laminar flow
m. Pembakat spirtus
n. Erlenmeyer
Pereaksi :
a. Buffered Peptone Water (BPW)
b. Selenite Cystine Broth (SCB)
c. Tetrathionate Brilliant Green Broth (TBB)
d. Salmonella Shingella Agar (SSA)
e. Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD)
f. Nutrient Agar (NA)
g. Triple Sugar Iron Agar (TSIA)
h. Urea broth
i. Lysine Iron Agar (LIA)
j. S.I.M Medium
k. Beta-Galactosidase reagent
l. Toulena
m. V.P. Medium
n. Creatine
o. Alpha- Naftol
p. KOH 40%
-
29
q. Indole medium
r. Pereaksi Indole
s. Antisera O dan H
t. Alkohol 70%
Cara kerja :
Pra-pengkayaan (pra-enrichment)
1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung
plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW.
2. Dihomogenkan dengan stomacher, lalu dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer steril secara aseptik.
3. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 16-20 jam.
Pengkayaan (enrichment)
1. Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media
Selenite Cystine Broth (SCB), lalu diinkubasi di dalam inkubator pada
suhu 35-37C selama 24 jam.
2. Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media
Tetrathionate Brilliant Green Broth (TBB), lalu diinkubasi di dalam
inkubator pada suhu 43C selama 24 jam.
Penanaman pada media selektif
1. Diambil satu ose dari masing-masing media pengkayaan yang telah
diinkubasikan.
2. Diinokulasikan ke dalam media Salmonella Shingella Agar (SSA) dan
Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD).
3. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 361C selama 24 jam.
4. Diamati,pada media SSA terbentuk koloni tidak berwarna sampai
merah muda,bening sampai buram dan pada media XLD terbentuk
koloni merah muda, bintik hitam ditengah/koloni bening bintik hitam
latar belakang merah, (dibandingkan dengan control positif S. tiphy
ATCC 14028).
5. Uji Penegasan (Biokimia)
a. Pilih 2-5 koloni tersangka dan goreskan pada media agar miring
Nutrient Agar, diinkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam.
b. Pindahkan isolat dari media Nutrient Agar ke dalam media
sebagai berikut:
-
30
1) TSIA
a) Tersangka koloni Salmonella ditusuk ke media dasar agar
dan digores pada agar miringnya.
b) Inkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam.
c) Amati terjadinya perubahan-perubahan sebagai berikut :
Bagian tegak : warna kuning dengan atau tanpa warna
hitam (H2S).
Bagian miring : warna merah atau tidak berubah.
2) Urea Agar
a) Goreskan koloni tersangka Salmonella, pada permukaan
Urea Agar miring.
b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 24 jam, jika media
berwarna merah maka menunjukkan reaksi positif, jika
tidak terjadi perubahan warna, maka reaksi negatif.
3) Lysine Decaboxylation Medium
a) Inokulasikan tersangka koloni Salmonella pada perbenihan
cair (Lysine Decaboxylation Medium)
b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 48 jam.timbulnya
warna ungu menunjukakan reaksi positif.
4) Beta-Galactosidase reagent
a) Suspensikan tersangka koloni Salmonella dalam 0,25 ml
larutan saline pada tabung reaksi.
b) Ditambahkan satu tetes toulena.
c) Masukan dalam penangas air pada suhu 37C selama
beberapa menit.
d) Ditambahkan 0,25 ml pereaksi Beta-Galactosidase dan
dikocok.
e) Disimpan kembali dalam penangas air pada suhu 37C
selama 24 jam. Terbentuknya warna kuning menunjukkan
reaksi positif. Jika warna tidak berubah maka reaksi
negatif.
-
31
5) V.P. Medium
a) Dimasukkan masing-masing satu ose tersangka koloni
Salmonella ke dalam 2 tabung reaksi yang masing-masing
terdiri dari 0,2 ml media V.P.
b) Inkubasikan tabung I pada suhu kamar dan tabung II pada
suhu 37C selama 48 jam.
c) Pada tiap tabung ditambahkan 2 tetes larutan Creatine, 3
tetes larutan alpha-naftol, dan 2 tetes larutan KOH
40%(lakukan pengocokan setiap penambahan pereaksi).
d) Amati dalam waktu 15 menit. Terbentuknya warna merah
jambu sampai merah tua menunjukkan reaksi positif dan
bila tidak berubah reaksi negatif.
6) Indole Medium
a) Ambil satu ose koloni tersangka Salmonella, dimasukkan
kedalam media Indole dalam tabung reaksi.
b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 24 jam.
Ditambahkan 1 ml pereaksi Indole. Terbentuknya warna
gelang merah menunjukkan reaksi positif dan bila tidak
berubah atau warna kuning kecoklatan, maka reaksi
negatif.
No. Media Reaksi Biokimia 1. TSIA Bagian tegak : warna kuning dengan atau
tanpa warna hitam (H2S). Bagian miring : warna merah atau tidak berubah
2. Urea Agar Warna tidak berubah ( reaksi negatif )
3. Lysine Decaboxylation
Medium
Warna ungu ( reaksi positif )
4. Beta-Galactosidase reagent
Warna tidak berubah ( reaksi negatif )
5. V.P. Medium
Warna tidak berubah ( reaksi negatif )
6. Indole Medium Warna kuning kecoklatan ( reaksi positif ). Tabel 3. Hasil Reaksi Biokimia dari Salmonella
6. Jika reaksi biokimia menunjukkan ada Salmonella, ambil satu ose
biakan dari TSIA dan dioleskan pada gelas sediaan. Diteteskan
sedikit antisera O dan H disamping biakan. Dengan menggunakan
-
32
ose campur tetesan antisera dengan kultur hingga homogen.
Penggumpalan yang terjadi menunjukkan reaksi positif Salmonella.
Perhitungan :
Hasil = (Positif/Negatif) gram/ mL sampel
6. Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang
(Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)
Prinsip : Pertumbuhan Kapang dan Khamir dalam media yang cocok
setelah diinkubasi pada suhu 25C selama 5 hari.
Peralatan :
a. Tabung reaksi
b. Rak tabung
c. Gelas ukur 100 ml
d. Mikropipet
e. Cawan petri
f. Inkubator suhu 25C
g. Pengaduk
h. Neraca analitik
i. Stomacher
j. Laminar flow
k. Pembakat spirtus
l. Erlenmeyer
Pereaksi :
a. Buffered Peptone Water (BPW )
b. Larutan Fisiologis 0,85%
c. Potato Dextrose Agar (PDA)
d. Alkohol 70%
e. Asam Tartarat 10%
-
33
Cara kerja :
1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung
plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hinnga diperoleh pengenceran
1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan
pengenceran yang diperlukan.
2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan
petri steril secara duplo dan dilakukan blanko.
3. Ke dalam setiap cawan petri dituangkan sebanyak 15 ml Media PDA
yang telah ditambahkan Asam Tartarat 10% (1,6 ml dalam 100 ml)
yang sudah disterilisasi.
4. Lakukan putaran pada cawan petri hingga membentuk angka delapan
supaya contoh tercampur rata dengan media.
5. Dikerjakan blanko dengan mencampurkan larutan pengencer dengan
media.
6. Diamkan campuran dalam cawan petri hingga padat.
7. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 25C selama 5 hari.
8. Dicatat pertumbuhan koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan
alat Colony counter.
Perhitungan :
Faktor pengenceran = 1/pengenceran
Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran
7. Pewarnaan Gram menurut Preston dan Morrel
Prinsip : Pewarnaan gram ini digunakan untuk menentukan jenis bakteri
gram positif dan bakteri gram negatif. Yang termasuk bakteri gram positif
adalah segolongan bakteri yang menahan persenyawaan yang disebut
Iodinedye Complex yang terbentuk dari KI dan I2 dengan zat warna Kristal
Violet sewaktu dicuci. Sedangkan yang termasuk bakteri gram negatif
adalah segolongan bakteri yang melepaskan persenyawaan dan zat
warna tadi, tetapi mengikat zat warna berikutnya yaitu Safranin.
-
34
Peralatan :
a. Kaca obyektif.
b. Ose.
c. Pembakar spirtus.
d. Mikroskop.
Bahan:
a. Alkohol 96%.
b. Suspensi bakteri.
c. Zat warna Kristal Violet
d. Lugol.
e. Zat warna Safranin.
f. Kertas serap.
g. Air suling.
Cara Kerja:
1. Disiapkan kaca obyek, lalu dibersihkan dengan menggunakan kapas
yang telah dibasahi dengan alkohol sampai terbebas dari kotoran dan
lemak, setelah itu difiksasi di atas api.
2. Diambil 1-2 ose penuh suspensi bakteri pada kaca obyek, lalu
sebarkan hingga rata seluas area yang disediakan.
3. Difiksasi 3 kali di atas api.
4. Diletakkan kaca obyektif tersebut di atas bak pewarna, lalu diwarnai
dengan zat warna Kristal Violet selama 60 detik.
5. Dipegang kaca obyektif dengan pinset atau penjepit lain dan
miringkan untuk membuang kelebihan zat warna, lalu bilas dengan air
suling sampai tidak ada lagi zat warna yang mengalir dari kaca obyek.
6. Ditetesi kaca obyek tersebut dengan larutan lugol selama 30 detik.
7. Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkan kaca obyek
untuk membuang kelebihan larutan lugol, lalu bilas dengan air suling.
-
35
8. Kemudian dicuci dengan alkohol 95% tetes demi tetes selama 30
detik atau sampai zat warna Kristal Violet tidak terlihat lagi mengalir
dari kaca obyek, lalu dicuci dengan air suling.
9. Diwarnai kembali kaca obyek tersebut dengan menggunakan zat
warna Safranin selama 60 detik.
10. Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkan kaca obyek
untuk membuang kelebihan zat warna Safranin, lalu dibilas dengan air
suling.
11. Kaca obyek dikeringkan dengan menggunakan kertas serap.Diamati
dibawah mikroskop dengan menggunakan lensa obyektif 100 x
dengan meneteskan minyak.
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Hasil Analisis Mikrobiologi sampel jeli agar dibandingkan dengan SNI
01-3552-1994 Jeli Agaradalah sebagai berikut :
No. Krietria Uji Metode Satuan Hasil Batas Maksimum 1. Angka Lempeng Total Tuang Koloni/g
-
36
seperti saat pemilihan bahan baku, pengolahan bahan baku, proses
pengemasan, penyimpanan serta proses distribusi yang tidak baik.
Angka lempeng total merupakan salah satu cara untuk menghitung
cemaran mikroba, dimana cara ini merupakan bagian dari metode hitungan
cawan. Prinsip pada metode hitungan cawan adalah jika sel jasad renik yang
masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel jasad renik tersebut
akan berkembang biak membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan
dapat dihitung dengan menggunakan mata tanpa mikroskop.
2. Uji Bakteri Coliform
Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil
Bakteri Coliform < 3 koloni/g. Hasil Coliform sesuai dengan persyaratan SNI
01-3552-1994 (Jeli Agar).
Coliform merupakan suatu kelompok bakteri yang digunakan sebagai
indikator adanya polusi kotoran dan kondisi sanitasi yang tidak baik terhadap
air, makanan, susu dan produk-produk susu. Adanya bakteri Coliform di
dalam makanan menunjukkan kemungkinan adanya mikroorganisme yang
bersifat enteropatogenik yang berbahaya bagi kesehatan.
Bakteri Coliform terdiri dari Coliform fecal dan Coliform non-fecal.
Coliform fecal biasa ditemukan pada kotoran hewan dan manusia seperti
Eschericia coli sedangkan Coliform non-fecal yang bisa ditemukan pada
jasad hewan atau tumbuhan yang telah mati seperti Enterobacter aerogenes.
Metode yang digunakan dalam menghitung jumlah Coliform yaitu
metode Angka Paling Mungkin (APM). Metode ini lebih baik dibanding
dengan metode hitungan cawan karena lebih sensitif dan dapat mendeteksi
Coliform dalam jumlah yang sedikit. Pengujian Coliform terdiri dari uji
penduga, dan uji penegasan. Pada uji penduga digunakan media Lauryl
Sulfate Trptose Broth, sedangkan untuk sampel yang mengandung bakteri
asam laktat yang tinggi digunakan media Brilliant Green Lactose Bile Broth
(BGLBB).
-
37
Perhitungan bakteri Coliform dilakukan berdasarkan jumlah tabung
yang positif, yaitu yang ditumbuhi oleh mikroba stelah diinkubasi pada suhu
dan waktu tertentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat dari timbulnya
kekeruhan atau terbentuknya gas pada tabung durham.
3. Uji Bakteri E.coli
Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil
Bakteri E. coli < 3 koloni/g. Hasil E. coli sesuai dengan persyaratan SNI 01-
3552-1994 (Jeli Agar).
E.coli merupakan salah satu golongan bakteri Coliform fecal sehingga
dalam pengujian awal digunakan media LSTB. Terbentuknya gas pada media
LSTB tidak pasti menunjukkan bahwa bakteri yang menghasilkan gas
tersebut adalah E.coli sehingga tabung Durham yang terbentuk gas diisolasi
ke media E.coli Broth (ECB) dan diinokulasikan ke media Eosin Methylene
Blue (EMB) tiap masing-masing pengenceran yang menunjukkan adanya
pertumbuhan Coliform baik fecal maupun non-fecal. Coliform fecal dapat
diketahui dengan mengamati penampakan koloni gelap, dengan sinar hijau
metalik (keemasan). Sedangkan Coliform non-fecal berwarna merah muda
dengan bagian tengah gelap.
Dari pertumbuhan koloni pada media EMB dipilih satu koloni yang
berwarna gelap dengan sinar hijau metalik yang diduga E.coli lalu diisolasi
ke media NA dan dilakukan pewarnaan Gram. Reaksi pewarnaan gram
menunjukkan bakteri gram negatif dan berbentuk batang, sedangkan pada
pengujian IMViC (Indole, Methyl Red, Voges Proskauer, dan Citrate)
menunjukan reaksi positif pada uji Indole dan uji Methyl Red serta reaksi
negatif pada uji Voges Proskauer dan uji Citrate.
-
38
4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar
Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil
Bakteri Staphylococcus aureus
-
39
Media yang digunakan pada pengujian S.aureus adalah media Baird
Parker Agar (BPA) yang mengandung Egg Yolk Tellurite (1 ml larutan glysin
20%, 1 ml larutan Kalium tellurit 1%, 5 ml Na-piruvat 20 %, 5 ml Emulsi Egg
Yolk). Egg Yolk Tellurite Enrichment ditambahkan pada media Baird Parker
Agar setelah proses sterilisasi. Fungsi penambahan Lithium dan Kalium
tellurit pada media adalah untuk menghambat pertumbuhan mikroba lainnya.
Sedangkan Na-piruvat dan Glysin untuk merangsang pertumbuhan
Staphylococcus aureus.
Selain S.aureus, mikroba yang dapat tumbuh pada media BPA yaitu
Staphylococcus epidermidis. Kedua koloni ini dapat dibedakan dengan
melakukan uji koagulase. S.aureus mampu mengkoagulasi plasma kelinci
dari media Brain Heart Infusion Broth (BHIB), sedangkan Staphylococcus
epidermidis tidak mampu mengkoagulasi plasma kelinci tersebut.
5.Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi
Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil
Bakteri Salmonella negatif/25g. Hasil Salmonella sesuai dengan persyaratan
SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar). Salmonella adalah bakteri berbentuk batang,
pada pengecatan gram berwarna merah muda (gram negatif) dan termasuk
bakteri patogen yang dapat menimbulkan penyakit demam tifus dan
gastroenteritis pada manusia. Oleh sebab itu bakteri Salmonella tidak boleh
ada dalam bahan pangan. Keberadaannya dalam jumlah yang sedikit sudah
dapat menimbulkan gejala penyakit. Seperti diantaranya Salmonella typhii
yang merupakan penyebab typhus dan Salmonella paratiphus penyebab
penyakit Paratiphus. Karena pada suatu bahan makanan jumlahnya sedikit,
hal ini memungkinkan analisis dilakukan secara kualitatif. Pengujian secara
kualitatif dilakukan melalui tahap pra-pengkayaan, pengkayaan, seleksi,
isolasi, identifikasi primer, dan identifikasi lengkap. Jika tahapan pra-
pengkayaan, pengkayaan, seleksi dan isolasi telah dilakukan, dan bahan
makanan dicurigai mengandung bakteri Salmonella, maka dilakukan tahapan
berikutnya yaitu identifikasi primer (uji biokimia).
-
40
6.Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang
Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil
Bakteri Kapang dan khamir
-
38
-
41
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
Berdasarkan hasil analisis mikrobiologi yang dilakukan pada sampel jeli
agar dapat disimpulkan bahwa sampel jeli agar memenuhi persyaratan yang
ditetapkan dan sesuai dengan Standar Nasional Indonesia 01-3552-1994 (jeli
Agar).
B. Saran
1. Penggunaan APD lebih ditingkatkan untuk mencegah kecelakaan dan
kontaminasi saat analisis.
2. Perlu ditambahnya alat yang baru untuk meningkatkan kinerja analisis.
3. Kerjasama antara PT. M-BRIO Food Laboratory dan Sekolah Menengah
Analis Kimia Bogor lebih ditingkatkan.
-
42
DAFTAR PUSTAKA
Anonimus. 1994. Standar Nasional Indonesia Jeli Agar. Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Fardiaz, Srikandi. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Raja Grafindo Persada.
Fardiaz, Srikandi. 1989. Penuntun Praktek Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Institut Pertanian Bogor.
Hadioetomo, Ratna Siri.1985. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek.Jakarta : PT. Gramedia. Suprapti M. Lies.2004.Jelly Jambu Mete. Yogyakarta: Kanisius.
Sudiarto, Fadil.2010.Mikrobiologi Pangan.Yogyakarta:Diva Press Yogyakarta.
Anonimus.2013.Pengumpulan dan Pengolahan Data. Tersedia di URL : http://www.library.upnvj.ac.id/pdf/4s1teknikindustri/207415011/BAB%20IV.pdfDiakses pada tanggal 23 Februari 2013 Pukul : 19.25. Anonimus.2013.Analisis Pengemasan. Tersedia di URL: http://blog.ub.ac.id/midori/2012/03/20/analisis-pengemasan-5/ . Diakses pada tanggal 24 Februari 2013. Pukul :19.05. Anonimus.2013.Alat-alat dalam Praktikum Mikrobiologi. Tersedia di URL : http://praktikmikrobiologi.blogspot.com/2011/07/bab-1-alat-alat-dalam-laboratorium_23.html . Diakses pada tanggal 24 Februari 2013. Pukul:20.30. Anonimus.2013.Jeli.Tersedia di URL: http://unlimited4sedoyo.wordpress.com/2011/02/21/jelly/*. Diakses pada tanggal.24 Februari 2013. Pukul: 17.15. Anonimus.2013.Staphylococcus aureus. Tersedia di URL: http://pustaka.unpad.ac.id/wpcontent/uploads/2011/09/pustaka_unpad_staphylococcus.pdf . Diakses pada tanggal 25 Februari 2013. Pukul : 20.38.
-
43
Lampiran 1. Gambar dan Data Hasil pengamatan Uji Angka Lempeng Total pada Media PCA
Pengenceran 10-1 10-2
Simplo 0 0
Duplo 0 0
Kontrol media 0
Tabel 5. Hasil Analisis ALT pada Jeli Agar
Jumlah total bakteri = 1,0 x 101 koloni/gram
Kontrol Negatif Pengenceran 10-2 Pengenceran 10-1
Gambar 18. Hasil Pengamatan Uji Angka Lempeng total
-
44
Lampiran 2. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Bakteri Coliform dan E.coli pada
Media LSTB
Pengenceran 10-1 10-2 10-3 Kontrol (+) Kontrol (-)
Tabung 1 0 0 0 (+) (-)
Tabung 2 0 0 0
Tabung 3 0 0 0
Tabel 6. Hasil Analisis Bakteri Coliform dan E. coli pada Jeli Agar
Keterangan kontrol (+): E.coli ATCC 25922 Jumlah Bakteri menurut tabel APM seri 3 tabung = < 3 APM/gram.
Kontrol Negatif Kontrol Positif
Pengenceran 10-1 Pengenceran 10-2 Pengenceran 10-3
Gambar 19. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Coliform dan E.coli
-
45
Lampiran 3. Gambar Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus pada Media BPA
Pengenceran 10-2 Kontrol (+) Kontrol (-)
Simplo 0 (+) (-)
Duplo 0
Tabel 7. Hasil Analisis Bakteri Staphylococcus aureus pada Jeli Agar
Keterangan kontrol (+): S.aureus ATCC 25923 Jumlah total bakteri =
-
46
Lampiran 4. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella
Media Hasil Kontrol (+) Kontrol (-)
Salmonella Shigella Agar (SSA) (-) (+) (-)
Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLDA) (-)
Tabel 8. Hasil Analisis Bakteri Salmonella pada Jeli Agar
Keterangan kontrol (+): S.tiphy ATCC 14028 a.Tahap Enrichment
b.Kontrol Positif dan Negatif
Media TBB .Media SCB
Kontrol Negatif pada Media XLD Kontrol Positif pada Media XLD
Kontrol Negatif pada Media SSA Kontrol Positif pada Media SSA Gambar 21. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Tahap Enrichment,
Kontrol Negatif dan Kontrol Positif)
-
47
c.Inokulasi dari media TBB
Inokulasi Sampel Simplo pada Media XLD
Inokulasi Sampel Duplo pada Media XLD
Inokulasi pada Sampel Simplo pada Media SSA
Inokulasi Sampel Duplo pada Media SSA
Gambar 22. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi dari media TBB)
-
48
d.Inokulasi dari media SCB
I Sampel Simplo pada Media SSA Inokulasi Sampel Duplo pada Media SSA
Inokulasi Sampel Simplo pada Media XLD
Inokulasi Sampel Duplo pada Media XLD
Gambar 23. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi Salmonella dari Media SCB)
-
49
Lampiran 5. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Kapang dan khamir Pada Media PDA
Pengenceran 10-1 10-2
Simplo 0 0
Duplo 0 0
Kontrol media 0
Tabel 9. Hasil Analisis Kapang dan Khamir pada Jeli Agar
Jumlah total bakteri =
-
50
Lampiran 6.Pembuatan Media dan Pereaksi
1. Buffered Peptone Water (BPW)
Komposisi:
Peptone 10,0 gram
Sodium chloride 5,0 gram
Phospate Buffer 10,5 gram
Air Suling 1 Liter
Pembuatan:
Ditimbang 2,55 gram BPW dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,
setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian disterilkan dalam autoklaf pada
suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit, BPW digunakan sebagai larutan
pengencer.
2. Plate Count Agar (PCA)
Komposisi:
Tryptone 5,0 gram
Yeast extract 2,5 gram
Glucose 1,0 gram
Agar 15,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 2,25 gram PCA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah
larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu
121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. PCA digunakan sebagai media pada
perhitungan Angka Lempeng Total yang dituangkan ke dalam cawan petri steril
15 ml.
-
51
3. Baird Parker Agar (BPA)
Komposisi:
Peptone from casein 10,0 gram
Meat extract 5,0 gram
Yeast extract 1,0 gram
Sodium piruvat 10,5 gram
Glysin 12,5 gram
Lithium chloride 5,0 gram
Agar 15,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Bahan-bahan dicampurkan dan dipanaskan hingga larut sempurna (pH
6,8 0,2), kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi
selama 15 menit, didinginkan sampai suhu 45-50oC, kemudian ditambahkan Egg
yolk emulsion dan 10 ml Tellurit 1%. BPA digunakan sebagai media selektif untuk
uji Staphylococcus aureus.
4. Selenite Cystine Broth (SCB)
Komposisi:
Pepton from casein 5.0 gram
L (-) cystine 0,01 gram
Lactose 4,0 gram
Phospate buffer 10,0 gram
Sodium hydrogen selenite 4,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 2,3 gram SCB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak
hingga larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di masukkan ke dalam
autoklaf. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan. Media ini
digunakan sebagai media pengkaya pada tahapan homogenasi contoh makanan
untuk uji Salmonella.
-
52
5. Lauryl Sulphate Broth
Komposisi:
Tryptone,tryptose atau trypticase 20 gram
Lactose 5 gram
K2HPO4 2,75 gram
KH2PO4 2,75 gram
NaCl 5 gram
Sodium Lauryl Sulphate 0,2 gram
Air Suling 1 liter
Pembuatan:
Larutkan bahan-bahan dalam air suling. Atur pH 6,8. Masukkan 10 ml ke
dalam tabung kimia yang berisi tabung durham terbalik, kemudian disterilkan
dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.
6. Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)
Komposisi:
Peptone from meat 10,0 gram
Lactose 10,0 gram
Oxgall bile 20,0 gram
Brilliant green 0,0133 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 4 gram BGLBB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah
larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi
yang berisis tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan
untuk uji Coliform dengan metoda APM pada tahapan penegasan media
memberikan hasil positif apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada
tabung durham.
-
53
7. E. coli Broth (ECB)
Komposisi:
Tryptone 20,0 gram
Lactose 5,0 gram
Bile salt no 3 1,5 gram
Dipotassium phosphate 4,0 gram
Monopotassium phosphate 1,5 gram
Sodium chloride 5,0 gram
Air suling 1 gram
Pembuatan:
Ditimbang 3,7 gram ECB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,9
0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan
ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu
disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.
Media ini digunakan sebagai media selektif untuk uji E.coli dengan metode APM
pada tahapan penegasan media memberikan hasil positif apabila terbentuk gas
atau gelembung udara pada tabung durham.
8. Salmonella Shigella Agar (SSA)
Komposisi:
Lab. Lemco powder 5,0 gram
Lactose 10,0 gram
Bile salt 8,5 gram
Sodium citrate 10,0 gram
Sodium thiosulphate 8,5 gram
Ferric citrate 1,0 gram
Brilliant green 0,00033 gram
Neutral red 0,025 gram
Agar 15,0 gram
Pembuatan:
Ditimbang 6,3 gram SSA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak
hingga mendidih dan larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di
masukkan ke dalam autoklaf. Didinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke
dalam cawan petri. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan.
-
54
9. Eosine Methylene Blue (EMB) Agar
Komposisi:
Peptone 10,0 gram
Di-kalium hydrogen phosphate 2,0 gram
Lactose 5,0 gram
Sacharose 5,0 gram
Eosin yeblich 0,4 gram
Methylen blue 0.07 gram
Agar 13,5 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 3,6 gram EMB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,
panaskan hingga mendidih dan setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) disterilkan
dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini
digunakan sebagai media selektif pada pengujian bakteri E.coli yang akan
menunjukkan hasil positif apabila terbentuk koloni berwarna kilap logam.
Pembuatan:
10. Salmonella Shigella Agar (SSA)
Komposisi:
Lab. Lemco powder 5,0 gram
Lactose 10,0 gram
Bile salt 8,5 gram
Sodium citrate 10,0 gram
Sodium thiosulphate 8,5 gram
Ferric citrate 1,0 gram
Brilliant green 0,00033 gram
Neutral red 0,025 gram
Agar 15,0 gram
Pembuatan:
Ditimbang 6,3 gram SSA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak
hingga mendidih dan larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di
masukkan ke dalam autoklaf. Didinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke
dalam cawan petri. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan.
-
55
-
49
-
55
11. Potato Dextrose Agar (PDA)
Komposisi:
Potato infusion 4,0 gram
Infusion from 200 gram potato
D (+) glucose 20,0 gram
Agar 15,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 3,9 gram PDA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,
panaskan hingga mendidih dan setelah larut sempurna (pH 5,2 0,2) disterilkan
dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Pada saat akan
digunakan, media ditambahkan 1,6 ml asam tartarat 10% untuk 100 ml media.
Media ini digunakan pada pengujian Kapang dan Khamir yang dituang sebanyak
15 ml pada cawan steril.
12. Lactose Broth (LB)
Komposisi:
Lab. Lemco powder 3,0 gram
Peptone 5,0 gram
Lactose 5,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 1,3 gram LB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,9
0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan
ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu
disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.
Media ini digunakan sebagai media selektif untuk perhitungan bakteri Coliform
dengan metode APM pada tahapan sangkaan. Media memberikan hasil positif
apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada tabung durham.
-
56
13. Nutrient Agar (NA)
Komposisi:
Bacto beef extract 3,0 gram
Bacto peptone 5,0 gram
Bacto agar 15,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Bahan-bahan dilarutkan (pH 6,8-7,0), kemudian disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.
14. Brain Heart Infusion (BHI)
Komposisi:
Calf brain infusion solids 12,5 gram
Beef heart infusion 5,0 gram
Proteose paptone 10,0 gram
Glucose 2,0 gram
Sodium chloride 5,0 gram
di-sodium phosphate 2,5 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 3,7 gram BHI dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 7,3
0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan
ke dalam tabung reaksi 7 ml, kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu
121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan sebagai media
pertumbuhan bakteri S.aureus.
15. Triple Sugar Iron (TSIA)
Komposisi:
Lab. Lemco powder 3,0 gram
Yeast extract 3,0 gram
Peptone 20,0 gram
Sodium chloride 5,0 gram
-
57
Lactose 10,0 gram
Sucrose 10,0 gram
Glucose 1,0 gram
Ferric citrate 0,3 gram
Sodium thiosulphate 0,3 gram
Phenol red 5,0 gram
Agar 12 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 6,5 gram TSIA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 7,4
0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian
dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, kemudian disterilkan dalam autoklaf
pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Lalu dimiringkan, media ini
digunakan sebagai media penegasan uji bakteri Salmonella.
16. Lysine Decarboxylase Broth
Komposisi:
L-lysine 5,0 gram
Yeast extract 3,0 gram
Glucose 1,0 gram
Bromoceresol purple 0,015 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Masukkan bahan-bahan dalam air suling,panaskan perlahan sambil
diaduk,masukkan 5 ml ke dalam tabung. kemudian disterilkan dalam autoklaf
pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. pH akhir 6,5.
-
57
-
58
17. Urea Broth
Komposisi:
Peptone 1,0 gram
Glucose 1,0 gram
Sodium chloride 5,0 gram
Di-sodium phosphate 1,2 gram
Potassium dihydrogen phosphate 0,8 gram
Phenol red 0,012 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 2,4 gram Urea Broth dan dilarutkan dalam 100 ml air suling
(pH 6,8 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian
disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit,
didinginkan sampai suhu 50oC. Lalu dimiringkan, media ini digunakan sebagai
media penegasan uji bakteri Salmonella.
18. Xylose Lysine Desoxycholate Agar(XLD)
Komposisi:
Yeast extract 3,0 gram
L(-) Lysine HCl 5,0 gram
Xylose 3,75 gram
Lactose 7,5 gram
Sucrose 7,5 gram
Sodium desoxycholate 1,0 gram
Sodium chloride 0,8 gram
Ferric ammonium citrate 0,8 gram
Phenol red 0,008 gram
Agar 12,5 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 5,3 gram XLD dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,
panaskan sampai mendidih agar larut semua (pH 7,4 0,2) jangan dimasukkan
ke dalam autoklaf. Dinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke dalam cawan
-
59
petri. Buatlah media ini dalam keadaan fresh (siap pakai) dan tidak untuk
disimpan. Media ini digunakan sebagai uji bakteri Salmonella yang menunjukan
hasil positif apabila terbentuk koloni tak berwarna sampai merah muda atau
bening.
19. Methyl Red Voges Proskauer Broth (MRVP)
Komposisi:
Peptone 5,0 gram
Glucose 5,0 gram
Sodium chloride 30 gram
K2HPO4 5,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 1,5 gram MRVP dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,
dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke
dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan
15 psi selama 15 menit, media ini digunakan sebagai media penegasan uji
bakteri Salmonella dan E.coli.
20. Koser Citrate Broth
Komposisi:
Sodium ammonium hydrogen phosphate 1,4 gram
K2HPO4 1,0 gram
MgSO4 0,2 gram
Sodium citrate 3,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Ditimbang 5,7 gram Koser Citrate Broth dan dilarutkan dalam 1000 ml
air suling, dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna.
Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.
-
60
21. Indole Medium
Komposisi:
Tryptone 10,0 gram
NaCl 5,0 gram
DL-tryptophane 1,0 gram
Air suling 1 liter
Pembuatan:
Bahan-bahan dilarutkan dengan air suling (pH 7,0). Kemudian
dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu
121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.
22. Tetrathinonate Broth Base (TBB)
Komposisi:
Lab lemco powder 0,9 gram
Peptone 4,5 gram
Yeast extract 1,8 gram
Sodium chloride 4,5 gram
Calcium carbonat 25,0 gram
Sodium thiosulfat 40,7 gram
Pembuatan:
Dilarutkan 7,7 gram TBB dalam 10 ml air suling. Dipanaskan sampai
mendidih agar larut sempurna. Media ini jangan di autoklaf. Pada saat akan
digunakan, tambahkan 2 ml larutan iodine untuk 100 ml media. Jangan disimpan
terlalu lama setelah media ditambahkan larutan iodine. Media ini digunakan
sebagai media pengkaya pada homogenasi contoh makanan untuk uji
Salmonella setelah ditambahkan larutan iodine dan 1 ml Brillian Green 0,1 %
untuk 10 ml.
-
58
-
61
23. Kovacs reagent
Komposisi:
p-dimethylaminobenzaldehyde 5,0 gram
n-amylalkohol 75 gram
HCl pekat 25 mL
Pembuatan:
Larutkan p-dimethylaminobenzaldehyde dalam Amylalkohol. Dengan
perlahan-perlahan tambahkan HCl, simpan pada 4oC.
24. Merah metil (MM)
Komposisi:
Methyl Red 0,10 gram
Etil alkohol 300 mL
Pembuatan:
Larutkan Methyl Red dalam alkohol, lalu encerkan dengan air suling
sampai menjadi 500 ml.
25. Alpha-naftol 5%
Pembuatan:
Larutkan 5 gram alfa-naftol dalam 100 ml alkohol mutlak.
26. Rabbit Plasma
Pembuatan:
Gunakan bacto-coagulase plasma (EDTA No. kode 0803) dehidrat.
Larutkan 1 amful (100 mg) dalam 3 ml air suling. Larutkan plasma yang tidak
terpakai dapat disimpan dalam lemari pendingin (0-5oC) selama beberapa hari.
27. Voges Proskauer
a. Larutan alfa-naftol 5%
Pembuatan:
Larutkan 5 gram alfa-naftol dalam 100 mL air suling.
-
62
b. Larutan KOH 40%
Pembuatan:
Larutkan 40 gram Kalium Hidroksida dalam 100 ml air suling. Larutkan
alfa-naftol harus segar disiapkan setiap hari (setiap akan dipakai).
28. Kalium Tellurit Trihidrat 1 %
Pembuatan:
Larutkan 1 gram Kalium tellurit trihidrat dalam 100 ml air suling,
kemudian disterilkan pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit atau
dengan penyaringan. Larutan ini digunakan sebagai indikator pada pengujian S.
aueus yang ditambahkan 2 ml pada 100 ml media Baird Parker Agar (BPA).
29. Asam Tartarat 10 %
Pembuatan:
Larutkan 10 gram asam tartarat dalam 100 ml air suling,
kemudian disterilkan pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Larutan
ini digunakan sebagai penurun pH menjadi pH 3,5 pada pengujian Kapang dan
Khamir yang ditambahkan 1,6 ml pada 100 ml media Potato Dextrose Agar
(PDA).
30. -Galaktosidase
Komposisi:
a. Natrium dihidrogen fosfat 6,9 gram
b. Larutan NaOH 0,1 N 3,0 gram
c. Air suling 65 ml
d. Pyranoside 80 mg
Pembuatan:
a. Natrium dihidrogen fosfat
Larutkan Natrium dihidrogen fosfat dalam 45 ml air. Atur pH
7,00,1. Ditambahkan air hingga mencapai 50 ml. Disimpan dalam lemari
pendingin.
-
63
b. Orto-nitrophenyl Beta-D-glacto-Pyranoside
Larutkan Pyranoside dengan air suling pada 50oC, didinginkan lalu
ditambahkan 5 ml larutan Natrium dihidrogen fosfat yang telah dibuat.
Disimpan pada suhu 4oC (penyimpanan tidak melebihi 1 bulan).
31. Larutan Kristal Violet
Komposisi:
Kristal violet (85-90% kadar zat warna) 2 gram
Etil alkohol (95%) 20 mL
Ammonium oksalat 0,8 gram
Air suling 80 ml
Pembuatan:
Larutkan Kristal Violet dalam alkohol dan Ammonium Oksalat dalam air
suling sebanyak 80 ml. Campurkan kedua larutan tersebut dan simpan
campuran selama 24 jam sebelum digunakan.
32. Larutan Lugol
Komposisi:
Iodine 1,0 gram
Kalium Iodida 2,0 gram
Air suling 300 ml
Pembuatan:
Masukan bahan-bahan tersebut ke dalam air suling sebanyak 300 ml,
campurkan dan biarkan 24 jam sehingga Yod melarut sempurna.
-
64
Lampiran 7. Tabel APM Seri 3 Tabung
Jumlah Tabung
Positif APM/g
10-1 10=2 10-3
0 0 0 3 0 0 1 3 0 0 2 6 0 0 3 9 0 1 0 3 0 1 1 6 0 1 2 9 0 1 3 12 0 2 0 6 0 2 1 9 0 2 2 12 0 2 3 16 1 3 0 9 1 3 1 13 1 3 2 16 1 3 3 19 1 0 0 4 1 0 1 7 1 0 2 11 1 0 3 15 1 1 0 7 1 1 1 11 1 1 2 15 1 1 3 19 1 2 0 11 1 2 1 15 1 2 2 20 1 2 3 24 2 3 0 16 2 3 1 20 2 3 2 24 2 3 3 29 2 0 0 9 2 0 1 14 2 0 2 20 2 0 3 26
Tabel 10. Tabel APM Seri 3 Tabung
Jumlah Tabung Positif
APM/g
10=1 10-2 10-3
2 1 0 15 2 1 1 20 2 1 2 27 2 1 3 34 2 2 0 21 2 2 1 28 2 2 2 35 2 2 3 42 2 3 0 29 2 3 1 36 2 3 2 44 2 3 3 53 3 0 0 23 3 0 1 39 3 0 2 64 3 0 3 95 3 1 0 45 3 1 1 75 3 1 2 120 3 1 3 160 3 2 0 93 3 2 1 150 3 2 2 210 3 2 3 290 3 3 0 240 3 3 1 460 3 3 2 1100 3 3 3 1400