09.55.06496 marinda eka saputri

LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI DI M-BRIO FOOD LABORATORY BOGOR

oleh

Marinda Eka Saputri NIS 09.55.06496

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri

Sekolah Menengah Kejuruan - SMAK Bogor 2013

LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI

DI M-BRIO FOOD LABORATORY BOGOR

Sebagai Syarat untuk Mengikuti Ujian Akhir Sekolah Menengah Kejuruan-SMAK Bogor Tahun Ajaran 2012/2013

oleh

Marinda Eka Saputri NIS 09.55.06496

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri Sekolah Menengah Kejuruan - SMAK

Bogor 2013

LEMBAR PENGESAHAN DAN PERSETUJUAN

Disetujui dan disahkan oleh:

Disetujui oleh:

Intan Nurmala Dewi, STP Dra. Vera Marzuklina, M.Pd Manajer Mutu NIP. 19620212 198712 2 001 Pembimbing 1 , Pembimbing 2 ,

Disahkan oleh:

Dra.HadiatiAgustine NIP. 19570817 198103 2 002 Kepala Sekolah Menengah Kejuruan SMAK

Bogor

iii

DAFTAR ISI KATA PENGANTAR.i

DAFTAR ISI. .........................iii

DAFTAR TABEL........................... v

DAFTAR GAMBAR ......................... vi

DAFTAR LAMPIRAN .......................... vi

BAB I PENDAHULUAN. ............................. 1

A. Latar Belakang ............................................................................ 1

B. Tujuan Praktik Kerja Industri ....................................................... 2

C. Tujuan Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri ......................... 3

D. Sistematika Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri ................. 3

BAB II INSTITUSI PRAKERIN ........................... 4

A.Sejarah dan Perkembangan Perusahaan.. .......................... 4

B. Komitmen dan Misi Perusahaan.................................................. 5

C. Lokasi Perusahaan ..................................................................... 6

D. Struktur Organisasi M-BRIO Food Laboratory ............................. 7

E. Tugas dan Tanggung Jawab Organisasi ..................................... 8

BAB III TINJAUAN PUSTAKA ........................ 9

A. Jeli Agar ...................................................................................... 9

B. Mikrobiologi Pangan .................................................................. 11

C. Alat-alat yang digunakan saat Praktikum Mikrobiologi ............... 12

BABIVMETODEANALISIS...20

1. Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode TuangError! Bookmark not defined.

2. Uji Bakteri Coliform Metode Angka Paling Mungkin (APM)

Menggunakan Seri 3 Tabung ....... Error! Bookmark not defined. 3. Uji Bakteri Eschericcia coli Metode Angka Paling Mungkin (APM)

Menggunakan Seri 3 Tabung .................................................... 23

4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar ..................... 26

5. Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi ....................................... 27

6. Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang ............................. 32

7. Pewarnaan Gram menurut Preston dan Morrel ......................... 33

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN.. ......................... 34

iv

A. Hasil .......................................................................................... 34

B. Pembahasan ............................................................................. 34

1. Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode Tuang ........................... 34

2.Uji Bakteri Coliform...................................................................... 35

3.Uji Bakteri E.coli ......................................................................... 36

4.Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar ....................... 36

5.Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi.......................................... 37

6.Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang ................................ 38

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN............................... 39

A.Simpulan ...................................................................................... 39

B.Saran ........................................................................................... 39

DAFTAR PUSTAKA.. ............................ 40

v

DAFTAR TABEL Tabel 1. Tugas dan Tanggung Jawab PT. M-BRIO Food Laboratory ................. 8

Tabel 2. Hasil Reaksi IMViC dari E.coli .............................................................. 28

Tabel 3. Hasil Reaksi Biokimia dari Salmonella ................................................. 31

Tabel 4. Hasil Analisis Mikrobiologi Jeli Agar .................................................... 35

Tabel 5. Hasil Analisis ALT pada Jeli Agar ......................................................... 43

Tabel 6. Hasil Analisis Bakteri Coliform dan E. coli pada Jeli Agar..................... 44

Tabel 7. Hasil Analisis Bakteri Staphylococcus aureus pada Jeli Agar ............... 45

Tabel 8. Hasil Analisis Bakteri Salmonella pada Jeli Agar .................................. 46

Tabel 9. Hasil Analisis Kapang dan Khamir pada Jeli Agar ................................ 49

Tabel 10. Tabel APM Seri 3 Tabung .................................................................. 64

vi

DAFTAR GAMBAR Gambar 1.Autoklaf ............................................................................................... 6

Gambar 2. ose ................................................................................................... 13

Gambar 3. Cawan petri ...................................................................................... 13

Gambar 4. Tabung reaksi .................................................................................. 14

Gambar 5. Tabung durham ................................................................................ 14

Gambar 6. Pembakar spirtus ............................................................................. 15

Gambar 7. Inkubator .......................................................................................... 15

Gambar 8. Hot plate .......................................................................................... 15

Gambar 9. Colony counter ................................................................................. 16

Gambar 10. Mikroskop....................................................................................... 16

Gambar 11. Water bath ..................................................................................... 16

Gambar 12. Stomacher ...................................................................................... 17

Gambar 13. Laminar flow ................................................................................... 17

Gambar 14. Oven .............................................................................................. 18

Gambar 15. Mikropipet dan tip ........................................................................... 18

Gambar 16. Mesin Vortex .................................................................................. 18

Gambar 17. pH meter ........................................................................................ 19

Gambar 18. Hasil Pengamatan Uji Angka Lempeng total .................................. 43

Gambar 19. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Coliform dan E.coli .......................... 44

Gambar 20. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Staphylococcus aureus ................... 45

Gambar 21. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Tahap Enrichment, Kontrol

Negatif dan Kontrol Positif) ................................................................................ 46

Gambar 22. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi dari media TBB) . 47

Gambar 23. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi Salmonella dari

Media SCB) ....................................................................................................... 48

Gambar 24. Hasil Pengamatan Kapang dan Khamir .......................................... 49

iii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Gambar Hasil pengamatan Uji Angka Lempeng Total pada Media

PCA ................................................................................................................... 40

Lampiran 2. Gambar Hasil Pengamatan Bakteri Coliform dan E.coli pada Media

LSTB ................................................................................................................. 41

Lampiran 3. Gambar Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus pada Media BPA

.......................................................................................................................... 42

Lampiran 4. Gambar Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella .............................. 43

Lampiran 5. Gambar Hasil Pengamatan Kapang dan khamir Pada Media PDA . 47

Lampiran 6.Pembuatan Media dan Pereaksi ..................................................... 48

Lampiran 7. Tabel APM Seri 3 Tabung .............................................................. 64

1

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Sejalan dengan meningkatnya pembangunan di sektor industri

maka tidak dapat dielakkan lagi sekolah-sekolah kejuruan, khususnya

Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor harus mampu menghadapi

tuntutan dan tantangan yang senantiasa muncul dalam kondisi seperti

sekarang ini. Mengingat tuntutan dan tantangan masyarakat industri di

tahun-tahun mendatang akan semakin meningkat dan bersifat padat

pengetahuan dan keterampilan, maka pengembangan pendidikan

menengah kejuruan khususnya rumpun kimia analisis harus difokuskan

kepada lulusan yang berkualitas. Berkaitan dengan itu, maka pola

pengembangan yang digunakan dalam pembinaan sistem pendidikan

menjadi sangat penting.

Seperti halnya sekolah menengah kejuruan lainnya, Sekolah

Menengah Kejuruan SMAK Bogor memepunyai visi,mengemban misi

dan memilki tujuan sebagai berikut.

1. Visi

Menjadi sekolah menengah analis kimia nasional bertaraf

internasional yang menghasilkan lulusan professional dan bermartabat.

2. Misi

a. Melakasanakan pendidikan kejuruan analisis kimia yang berkualitas

mampu memenuhi kebutuhan masyarakat dunia usaha dan dunia industri

baik tingkat nasional maupun internasional.

b. Meningkatkan kemitraan nasional dan membina kemitraan internasional.

c. Membina dan menyelenggarakan fungsi sosial dan kemasyarakatan.

2

3. Tujuan

Menyiapkan tamatan untuk menjadi tenaga kerja tingkat

menengah dalam bidang teknisi pengelola laboratorium, pengatur dan

pelaksana analis kimia, serta melanjutkan ke jenjang yang lebih tinggi.

Untuk mengatasi hal tersebut, perlu adakemitraan antara sekolah dengan

dunia industri, dimana dunia industri turut membantu kekurangan sekolah

melalu Praktik Kerja Industri.

B. Tujuan Praktik Kerja Industri

Dalam rangka melaksanakan program kurikulum Sekolah

Menengah Kejuruan SMAK Bogor tahun ajaran 2012/2013, pihak

sekolah mewajibkan siswa kelas 13 untuk melaksanakan Praktik Kerja

Industri pada semester VIII selama 12 minggu efektif (3 bulan) termasuk

pembuatan laporan dan pelaksanaan ujian, mulai tanggal 12 November

2012 sampai tanggal 01 Maret 2013. Tujuan dari Praktik Kerja Industri

adalah :

1. Meningkatkan kemampuan dan memantapkan keterampilan siswa

sebagai bekal kerja yang sesuai dengan program studi kimia analisis.

2. Menumbuhkembangkan dan memantapkan sikap professional siswa

dalam rangka memasuki lapangan kerja.

3. Meningkatkan wawasan siswa pada aspek-aspek yang potensial

dalam dunia kerja, antara lain : struktur organisasi, disiplin, lingkungan

dan sistem kerja.

4. Meningkatkan pengetahuan siswa dalam hal penggunaan instrument

kimia analisis yang lebih modern, dibandingkan dengan fasilitas yang

tersedia di sekolah.

5. Memperoleh masukan dan umpan balik guna memperbaiki dan

mengemban pendidikan di SMK-SMAK Bogor.

6. Memperkenalkan fungsi dan tugas seorang analis kimia (sebutan bagi

lulusan SMK-SMAK Bogor) kepada lembaga-lembaga penelitian dan

perusahaan industri di tempat pelaksanaan Prakerin (sebagai

konsumen tenaga analis kimia).

3

C. Tujuan Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri

Setiap siswa yang telah melaksanakan Praktik Kerja Industri wajib

membuat rangkuman hasil kegiatannya berupa sebuah laporan. Adapun

tujuan penulisan laporan yaitu :

1. Memantapkan siswa dalam pengembangan dan penerapan pelajaran dari

sekolah di institusi tempat prakerin.

2. Siswa mapu mencari alternatif lain dalam pemecahan masalah analisis

kimia, secara lebih rinci dan mendalam (seperti apa yang terungkap

dalam laporan prakerin yang dibuatnya).

3. Menambah koleksi pustaka di perpustakaan sekolah maupun di institusi

prakerin, sehingga dapat menambah pengetahuan, baik bagi dirinya

(penulis) maupun para pembaca.

4. Siswa dapat membuat laporan kerja dan mempertangggung

jawabkannya.

D. Sistematika Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri

Penulisan laporan terdiri dari beberapa bagian, yaitu :

1. Bagian pertama yang terdiri dari: halaman judul, lembar pengesahan,

kata pengantar, daftar isi, daftar tabel, dan daftar lampiran.

2. Bagian kedua yang terdiri dari:

a. Pendahuluan yang berisi uraian latar belakang dan tujuan prakerin,

tujuan penulisan laporan, dan sistematika laporan prakerin.

b. Institusi prakerin yang berisi sejarah dan perkembangan perusahaan,

komitmen dan misi perusahaan, lokasi perusahaan, struktur

organisasi, tugas dan tanggung jawab.

c. Kegiatan di laboratorium yang berisi deskripsi komoditi, metode

analisis (secara teoritis maupun praktik), cara kerja, serta sarana dan

peralatan yang digunakan.

d. Pembahasan yang berisi uraian tentang metode yang digunakan

dalam analisis, serta hasil analisis.

4

3. Bagian ketiga yang berisi simpulan dan saran, daftar pustaka dan

lampiran.

BAB II INSTITUSI PRAKERIN

A. Sejarah dan Perkembangan Perusahaan

M-BRIO Food Laboratory didirikan pada tanggal 15 Februari 1999

beredasarkan Akte Notaris No. tanggal 8 Januari 1999, dengan nama CV

Embrio Biotekindo dengan Akte Notaris No.14 PT. Embrio Biotekindo

memiliki lima divisi yaitu:

1. Divisi M-BRIO Food Laboratory, merupakan laboratorium yang

bergerak di bidang pangan (food safety).

2. Divisi M-BRIO HACCP Certification Body, yaitu layanan jasa sertifikasi

HACCP uuntuk sistem keamanan pangan (food safety).

3. Divisi M-BRIO Training, yang melayani pelatihan dibidang mutu dan

keamanan pangan berbasis kompetensi (CBT).

4. Divisi M-BRIO Research & Development (R & D), yang memberikan

pelayanan jasa penelitian dan pengembangan produk pangan untuk

produk-produk baru maupun modifikasi.

5. M-BRIO Press, yang menerbitkan buku-buku bermutu tentang pangan

dan industri pangan untuk kalangan awam dan akademik.

M-BRIO Food Laboratory merupakan salah satu divisi dari PT

Embrio Biotekindo yang bergerak dalam jasa analisis pengujian dalam

bidang kimia dan mikrobiologi khusus untuk produk pangan (food

specialist). Jasa pengujian yang ditawarkan oleh laboratorium M-BRIO

antara lain adalah : komposisi makanan, kualitas makanan, nutrition fact,

aktivitas enzim, kadaluarsa, sensori, logam berat, residu peptisida, uji

mikroba, dan Tempat Uji Kompetensi (TUK). Selain itu M-BRIO Food

Laboratory juga sebagai provider program uji profisiensi yang

diselenggarakan Komite Akreditasi Nasional (KAN).

5

M-BRIO Food Laboratory telah memperoleh akreditasi dari:

1. Komite Akreditasi Nasional (KAN) sebagai laboratorium penguji

tanggal 02 Juni 2000 dengan nomor akreditasi LP-067-IDN.

2. Komite Nasional Akreditasi Pranata Penelitian dan

Pengembangan (KNAPPP) sebagai laboratorium penelitian dan

pengembangan sejak tahun 2004, dengan nomor akreditasi PL-

005-INA.

3. LEMBAGA Sertifikasi Profesi Tenaga Laboratorium Penguji

Indonesia (LSPTELAPI) sejak tahun 2007, dengan nomor 2-

TELAPI IV/07/013 sebagai laboratorium tempat uji kompetensi

bagi personil laboratorium (TUK).

B. Komitmen dan Misi Perusahaan

M-BRIO Food Laboratory memiliki komitmen Akurat, Cepat dan

Bersahabat Demi Kepuasan Pelanggan serta mengemban misi sebagai

berikut :

1. Untuk memuaskan pelanggan M-BRIO Food Laboratory memberikan

pelayanan jasa pengujian dengan hasil akurat dan cepat.

2. Pengelolaan M-BRIO Food Laboratory mengacu pada ISO/IEC-

17025:2005 dan pedoman KNAPPP 02:2004 secara konsisten.

M-BRIO Food Laboratory didukung oleh personil yang memiliki

kualifikasi yang dapat dipertanggungjawabkan .

6

C. Lokasi Perusahaan

PT EMBRIO Biotekindo berada pada dua lokasi. Kantor pusat

terletak di jalan Pajajaran Indah V No. 1 C Baranangsiang, Bogor 16143.

Telepon (0251) 8332403, 8377973, yang meliputi divisi HACCP & ISO

Certification Body, M-BRIO Training Body dan M-BRIO Press. Sedangkan

divisi M-BRIO Food Laboratory dan M-BRIO Research and Development

(R&D) terletak di Jalan Villa Indah Pajajaran Blok B-17 Pulo Armin, Bogor

16143. Telepon/Faksimile (0251) 8346986/8325753.

7

D. Struktur Organisasi M-BRIO Food Laboratory

8

E. Tugas dan Tanggung Jawab Organisasi

No. Organisasi Penanggung Jawab Ruang Lingkup Pekerjaan 1. Manajemen Founder & Chairman a. Mengembangkan laboratorium

secara keseluruhan. b. Menandatangani dokumen-

dokumen yang mengikat perusahaan secara hukum dengan pihak lain.

2. Manajemen Direktur Administrasi Keuangan & Marketing

a. Mengelola keuangan dan pendanaan secara keseluruhan.

b. pengembangan sumber daya. c. Pemasaran jasa laboratorium.

3. Manajemen Kepala Divisi a. Bertanggungjawab dalam pengelolaan laboratorium secara keseluruhan.

b. Menandatangani dokumen-dokumen yang berkaitan dengan laboratorium.

4. Manajemen Manajer Keuangan & Marketing

a. Bertanggungjawab atas keuangan dan pemasaran jasa laboratorium.

5. Manajemen Asisten Manajer Keuangan & Marketing

a. Mengelola keuangan dan pemasaran jasa laboratorium.

6.

Manajemen Teknik

Manajer Teknik a. Memimpin kegiatan teknik di laboratorium

b. Bertanggungjawab atas proses pengujian dan mutu hasil pekerja teknik.

Supervisor Laboratorium

a. Bertanggungjawab terhadap operasional teknis laboratorium.

Analis Melaksanakan pekerjaan sesuai ruang lingkup laboratorium.

7. Manajemen Mutu

Manajer Mutu a. Bertanggungjawab dalam pelaksanaan implementasi dan dokumentasi sistem manajemen mutu laboratorium.

b. Bertanggungjawab atas administrasi laboratorium.

Supervisor jaminan mutu

a. Memantau pelaksanaan implementasi dan dokumentasi system manajemen mutu laboratorium

b. Mengelola administrasi dan pembelian barang/jasa

Staf Administrasi dan keuangan

a. Menerbitkan laporan hasil pengujian

b. Bertanggungjawab atas pengelolaan kegiatan manajemen sampel di laboratorium.

Tabel 1. Tugas dan Tanggung Jawab PT. M-BRIO Food Laboratory

9

BAB III TINJAUAN PUSTAKA

A. Jeli Agar

Menurut SNI 01-3552-1994, Jeli adalah makanan ringan berbentuk

gel, dapat dibuat dari pektin, agar, karagenan, gelatin, atau senyawa

hidrokoloid lainnya dengan penambahan gula, asam dan atau dengan bahan

tambahan makanan lain yang diizinkan. Jeli dibuat dengan mencampurkan

bubuk jeli, air, bahan pemanis, dan asam kemudian dimasak pada suhu 81-

85C selama 15-25 menit. Produk jeli merupakan olahan lanjut dari sari buah

jernih memiliki tekstur padat dan transparan (tembus pandang), dibuat

melalui proses pengentalan dan pencetakan. Bentuk, ukuran dan

warna produk jeli bervariasi disesuaikan dengan kesukaan anak-anak. Jeli

mengandung unsur gizi dan kalori. (Suprapti, 2004)

Minuman jeli adalah minuman yang terbuat dari jeli yang berbentuk

cair dan kenyal dan mengandung banyak serat. Untuk meningkatkan daya

tarik, minuman jeli ditambah dengan nata de coco, nata de soya atau

manisan buah dalam berbagai bentuk. Sifat dasar dari minuman ini adalah

rendah lemak dan tinggi serat, kandungan gizi minuman jeli tergantung dari

bahan pembuatnya. Bahan dasar dalam pembuatan jeli yang paling

bermanfaat adalah sari buah karena mengandung banyak serat dan nilai gizi.

Secara umum, minuman jeli mempunyai empat atau lima komponen utama

yaitu bahan pembentuk jel (hidrokoloid), air, pengasam (bisa berupa asam

sitrat atau sari buah), gula (pemanis), perasa (komponen flavor atau buah),

serta pewarna. Tekstur jel yang terbentuk sangat dipengaruhi oleh jenis

bahan pembentuk jel, gula, asam dan komponen lainnya. (Suprapti, 2004)

Mutu produk minuman jeli sangat di pengaruhi oleh beberapa hal,

antara lain bahan baku yang sesuai dengan ketentuan, proses produksi yang

benar, penggunaan bahan pengawet, pengemasan, penutupan kemasan,

penerapan sistem pengawetan, dan penyimpanan. Oleh karena itu, perlu

10

dilakukan uji cemaran mikroba pada jeli untuk mengetahui mutu jeli berdasarkan

ada atau tidaknya kontaminasi saat proses pembuatannya. Jika kontaminasi

terjadi, maka mikroba dapat tumbuh dan berkembang biak pada jeli tersebut

karena jeli mengandung gula dan pektin yang dapat mendukung pertumbuhan

mikroba.

Adapun bagan pembuatan jeli agar sebagai berikut :

11

B. Mikrobiologi Pangan

Mikrobiologi adalah suatu ilmu yang mempelajari makhluk hidup yang

sangat kecil yang hanya dapat dilihat dengan menggunakan lensa pembesar

atau mikroskop. Makhluk yang sangat kecil tersebut disebut mikroorganisme

atau mikroba, dan ilmu yang mempelajari tentang mikroba yang sering

ditemukan pada pangan disebut mikrobiologi pangan. Yang dimaksud

dengan pangan disini mencakup semua makanan, baik bahan baku pangan

maupun yang sudah diolah (produk jadi).

Makanan mengandung berbagai macam nutrisi seperti air, karbon,

nitrogen, mineral serta faktor lingkungan berupa kelembaban dan pH yang

dapat menunjang pertumbuhan mikroba. Pertumbuhan mikroba pada pangan

dapat menimbulkan berbagai perubahan, baik yang merugikan maupun yang

menguntungkan. Mikroba yang merugikan misalnya yang menyebabkan

kerusakan pangan seperti terjadinya pembusukan, perubahan warna, tekstur,

menimbulkan bau busuk, lendir, asam, pembentukan gas, dan perubahan-

perubahan lain yang tidak diinginkan.

Selain itu, beberapa bakteri dapat menyebabkan gejala sakit atau

keracunan disebut bakteri patogenik atau patogen. Gejala penyakit yang

disebabkan oleh patogen timbul karena bakteri tersebut masuk ke dalam

tubuh melalui produk pangan yang dimakan dan dapat berkembang biak di

dalam saluran pencernaan dan menimbulkan gejala sakit perut, diare,

muntah, mual, dan gejala lain. Beberapa bakteri yang tergolong ke dalam

bakteri patogen adalah Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, dan

Bacillus cereus yang memproduksi racun yang menyerang saluran

pencernaan dan disebut enterotoksin, dan Clostridium botulinum yang

memproduksi racun yang menyerang syaraf serta dapat menyebabkan

kelumpuhan saluran tenggorokan dan disebut neurotoksin atau racun

botulinum (Sudiarto,2010).

Beberapa bakteri penyebab penyakit seringkali terdapat dalam jumlah

kecil didalam makanan, oleh karena itu dalam isolasinya diperlukan beberapa

tahapan pengujian yaitu tahap pra-pengkayaan (pre-enrichment),

pengkayaan (enrichment), seleksi dan identifikasi.

12

Pada tahap pra-pengkayaan (pre-enrichment) dan pengkayaan

(enrichment) digunakan medium yang dapat merangsang pertumbuhan

bakteri target yang akan diuji, tetapi bakteri lainnya masih mungkin tumbuh.

Medium pengkaya (enrichment) bersifat lebih spesifik dibandingkan dengan

medium pra-pengkayaan. Pada tahap seleksi digunakan medium selektif

yang dapat merangsang pertumbuhan bakteri target dan menghambat

pertumbuhan bakteri non-target pada medium selektif ini ditandai dengan

terbentuknya koloni yang mempunyai ciri-ciri penampakan yang spesifik.

Tahap identifikasi bakteri pada umumnya memerlukan beberapa tahap yaitu :

1. Uji penduga

2. Uji penguat

3. Uji pelengkap (Fardiaz,1989)

C. Alat-alat yang digunakan saat Praktikum Mikrobiologi

1. Autoklaf

Autoklaf adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan

bahan yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas

bertekanan. Tekanan yang digunakan pada umumnya 15 psi atau sekitar 2

atm dan dengan suhu 121C (250F). Proses sterilisasi dilakukan pada suhu

121C selama 15 menit.

Gambar 1.Autoklaf

13

2. Jarum inokulum / ose

Jarum inokulum berfungsi untuk memindahkan biakan (bakteri dan

khamir) untuk ditanam/ditumbuhkan ke media baru. Jarum inokulum biasanya

terbuat dari kawat nichrome atau platinum sehingga dapat berpijar jika

terkena panas. Bentuk ujung jarum dapat berbentuk lingkaran (loop) dan

disebut ose atau inoculating loop / transfer loop, dan yang berbentuk lurus

disebut inoculating needle / transfer needle. Inoculating loop cocok untuk

melakukan streak di permukaan agar, sedangkan inoculating needle

digunakan untuk inokulasi secara tusukan pada agar tegak (stab inoculating).

3. Cawan petri

Cawan petri terbuat dari gelas dan berfungsi sebagai tempat

pembiakan mikroorganisme. Media pertumbuhan dapat dituang ke cawan

bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutup. Cawan petri tersedia

dalam berbagai macam ukuran yaitu berdiameter 5 cm, 8 cm, 9 cm atau 15

cm. Cawan berdiameter 15 cm dapat menampung media sebanyak 15-20 ml,

sedangkan cawan berdiameter 9 cm kira-kira cukup diisi media sebanyak 10

ml.

Gambar 2. ose

Gambar 3. Cawan petri

14

4. Tabung Reaksi

Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan sebagai tempat media

pertumbuhan atau penampungan cairan lainnya seperti pelarut dalam

pengenceran. Tabung reaksi dipilih karena bentuknya yang vertikal

(bandingkan dengan cawan petri) sehingga mempermudah penanganan dan

menghemat tempat penyimpanan. Tabung reaksi dapat diisi media padat

maupun cair. Media padat yang dimasukkan ke tabung reaksi dapat diatur

menjadi 2 bentuk menurut fungsinya, yaitu media agar tegak (deep tube

agar) dan agar miring (slants agar).

5. Tabung Durham

Tabung Durham berbentuk mirip dengan tabung reaksi namun

ukurannya lebih kecil dan tanpa tutup. Tabung Durham berfungsi untuk

menampung/menjebak gas yang terbentuk dari metabolisme pada bakteri

yang diujikan. Penempatannya terbalik dalam tabung reaksi dan harus

terendam sempurna dalam media (jangan sampai ada sisa udara) sebelum

diinokulasikan bakteri uji.

Gambar 4. Tabung reaksi

Gambar 5. Tabung durham

15

6. Pembakar Spirtus

Pembakar spirtus digunakan untuk sterilisasi alat inokulasi dengan

pembakaran seperti sterilisasi jarum inokulum atau spreader. Untuk

memastikan kesterilannya jarum inokulum dibakar sampai membara dan

spreader dapat dicelupkan alkohol lalu dibakar.

7. Inkubator

Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba

pada suhu terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu.

8. Hot plate

Merupakan alat yang digunakan untuk memanaskan suatu zat

dengan menggunakan listrik sebagai sumber energi yang kemudian diubah

menjadi energi panas. Proses pelarutan media akan lebih sempurna jika

dilakukan diatas hot plate, namun pada suhu pemanasan yang sesuai.

Gambar 6. Pembakar spirtus

Gambar 7. Inkubator

Gambar 8. Hot plate

16

9. Colony counter

Alat ini berguna untuk mempermudah perhitungan koloni yang

tumbuh setelah diinkubasi di dalam cawan karena adanya kaca pembesar.

Selain itu, alat tersebut dilengkapi dengan skala/kuadran yang sangat

berguna untuk pengamatan pertumbuhan koloni sangat banyak. Jumlah

koloni pada cawan petri dapat ditandai dan dihitung otomatis dapat di-reset.

10. Mikroskop

Mikroskop adalah alat yang dapat digunakan untuk melihat sel

mikroba yang sedemikian rupa kecil ukurannya melalui suatu sistem lensa

pembesar.

11. Water bath (Coliform Incubator)

Fungsi utama water bath adalah untuk menciptakan suhu yang

konstan dan digunakan untuk inkubasi pada analisa mikrobiologi. Pada water

bath suhu yang digunakan biasanya 44,50-45,50C untuk analisa konfirmasi

E.coli dengan ketelitian suhu 0,1C.

.

Gambar 9. Colony counter

Gambar 10. Mikroskop

Gambar 11. Water bath

17

12. Stomacher

Stomacher dapat berfungsi sebagai pengganti blender karena

memiliki fungsi sebagai alat untuk homogenisasi. Prinsip dari stomacher

adalah untuk melepaskan sel-sel bakteri atau mikroorganisme yang

terkandung dalam sampel. Komponen pada stomacher meliputi : kantong

plastik steril dan stomacher merupakan suatu alat berbentuk kotak yang pada

bagian dalam ada suatu pedal penumbuk.

13. Laminar Air Flow (LAF)

Semua prosedur mikrobiologi yang melibatkan patogen, pembuatan

media yang steril atau pemeriksaan bahan makanan dibutuhkan suasana

yang steril termasuk tempat juga harus steril, Untuk itu digunakan Laminar Air

Flow. Komponen LAF terdiri dari : exhaust filter, lampu neon biasa, lampu

UV.

Gambar 12. Stomacher

Gambar 13. Laminar flow

18

14. Oven

Sterilisasi dengan pemanasan kering untuk peralatan gelas yang

tahan terhadap pemanasan tinggi dilakukan dengan menggunakan oven.

15. Mikropipet dan tip

Mikropipet adalah alat untuk memindahkan cairan yang bervolume

cukup kecil. Beberapa ukuran volume mikropipet diantaranya 10-100 l, 20-

200 l, 100-1000 l dan 1-5 ml. Banyak pilihan kapasitas dari mikropipet,

misalnya mikropipet yang dapat diatur volume pengambilannya (adjustable

volume pipette) dan mikropipet yang tidak bias diatur volumenya. Tip

digunakan sesuai dengan volume mikropipet.

16. Vortex

Gambar 14. Oven

Gambar 15. Mikropipet dan tip

Gambar 16. Mesin Vortex

19

Vortex adalah alat yang memiliki suatu dudukan berengsel yang dapat

berputar cepat sehingga larutan dalam botol atau tabung yang diletakkan

(dengan ditekan) akan berputar dan teraduk. Umumnya digunakan untuk

menghomogenisasi larutan dalam botol atau tabung saja. Jika menggunakan

alat ini analis tidak perlu mengocok tabung menggunakan tangan dan cara ini

mampu meminimalisasi resiko tumpahan.

17. pH meter

pH meter merupakan alat yang digunakan untuk mengukur pH suatu

larutan. Pada laboratorium mikrobiologi biasa digunakan untuk mengukur pH

media sehingga mikroorganisme dapat tumbuh dengan baik pada media

biakan tersebut.

Gambar 17. pH meter

20

BAB IV METODE ANALISIS

1. Uji Angka Lempeng Total Metode Tuang

(Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)

Prinsip : Pada suhu pertumbuhan bakteri mesofil aerob setelah contoh

diinkubasikan dalam media yang cocok pada suhu 351C selama 24-48

jam.

Peralatan :

a. Tabung reaksi

b. Rak tabung

c. Gelas ukur 100 ml

d. Mikropipet

e. Cawan petri

f. Vortex mixer

g. Inkubator suhu 361C

h. Penangas air

i. Pengaduk

j. Colony Counter

k. Neraca analitik

l. Stomacher

m. Laminar flow

n. Erlenmeyer

Pereaksi :

a. Buffered Peptone Water (BPW)

b. Plate Count Agar (PCA)

c. Alkohol 70%

Cara kerja :

1. Ditimbang sebanyak 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung

plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hingga diperoleh pengenceran

1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan

pengenceran yang diperlukan.

21

2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan

Petri steril, dibuat duplo.

3. Ke dalam setiap cawan Petri dituangkan sebanyak 15 ml Media PCA

yang telah didinginkan hingga suhu 45 C.

4. Lakukan putaran pada cawan petri hingga membentuk angka delapan

supaya contoh tercampur rata dengan media.

5. Dikerjakan blanko dengan mencampurkan larutan pengencer dengan

media.

6. Dikerjakan kontrol positif dengan mencampurkan suspensi bakteri

dengan media.

7. Diamkan campuran dalam cawan petri hingga padat.

8. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 351C selama

24-48 jam.

9. Dicatat pertumbuhan koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan

alat Colony counter.

Perhitungan : Faktor pengenceran = 1/pengenceran Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran

2. Uji Bakteri Coliform Metode Angka Paling Mungkin (APM)

Menggunakan Seri 3 Tabung


Prinsip : Pertumbuhan bakteri Coliform yang ditandai dengan

terbentuknya gas dalam tabung Durham, setelah contoh diinkubasi pada

media yang cocok pada suhu 361C selama 24-48 jam dan jumlah

bakteri Coliform dapat diketahui berdasarkan tabel APM.

Peralatan :

a. Tabung reaksi

b. Rak tabung

c. Tabung Durham

d. Mikropipet

e. Cawan petri

22

f. Inkubator suhu 361C

g. Sengkelit(ose)

h. Neraca analitik

i. Stomacher

j. Laminar flow

k. Pembakat spirtus

l. Erlenmeyer

Pereaksi :


b. Lauryl Sulphate Tryptone Broth (LSTB)

c. Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)

d. Alkohol 70%

Cara kerja :

1. Ditimbang sebanyak 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung

plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hingga diperoleh pengenceran

1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan sampai

dengan pengenceran 1:1000.

2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke dalam 3

media tabung yang berisi Lauryl Sulphate Tryptone Broth yang

didalamnya terdapat tabung durham terbalik.

3. Diinkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam.

4. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas.

Uji Penegasan : a. Diambil satu ose dari tabung yang terbentuk gas.

b. Dimasukkan ke dalam tabung ulir yang berisi durham dengan media

BGLBB

c. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 24-48 jam.

d. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas.

e. Dihitung jumlah bakteri berdasarkan tabel APM seri 3 tabung.

Perhitungan :

Jumlah Bakteri = dihitung berdasarkan tabel APM seri 3 Tabung

23

3. Uji Bakteri Eschericcia coli Metode Angka Paling Mungkin (APM)

Menggunakan Seri 3 Tabung


Prinsip : Pertumbuhan bakteri E.coli yang ditandai dengan terbentuknya

gas dalam tabung Durham, setelah contoh diinkubasi pada media yang

cocok pada suhu 44,5-45,5C selama 24-48 jam yang diikui uji biokimia

dan jumlah bakteri E.coli dapat diketahui berdasarkan tabel APM.

Peralatan :

a. Tabung reaksi

b. Rak tabung

c. Tabung Durham

d. Gelas ukur 100 ml

e. Mikropipet

f. Cawan Petri


h. Penangas air 44,5-45,5C

i. Pengaduk

j. Sengkelit (ose)

k. Neraca analitik

l. Stomacher

m. Laminar flow

n. Pembakar spirtus

o. Erlenmeyer

Pereaksi :

a. E.coli Broth (ECB)

b. Lauryl Sulfate Tryptose Broth (LSTB)

c. Eosin Methylene Blue (EMB) Agar

d. Nutrient Agar (NA)

e. Tryptone Broth

f. Methylene Red Voges Proskauer Broth (MRVP).

26

g. Koser Citrate Broth (KS)

h. Indikator Merah Metil

i. Larutan -naftol 5%

j. Larutan KOH 40%

k. Alkohol 70%

Cara kerja :

1. Diambil satu ose dari tabung durham yang terbentuk gas dari media

LSTB.

2. Dimasukkan ke dalam tabung ulir yang berisi durham terbalik dengan

media ECB.

3. Diinkubasi pada suhu 44,5-45,5C selama 24-48 jam dalam penangas

air.

4. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas.

5. Dihitung jumlah bakteri berdasarkan table APM seri 3 tabung.

6. Bila terbentuk gas, suspensi tersebut digoreskan pada media EMB

Agar.

7. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam.

8. Jika terbentuk koloni warna kilap logam maka hasil positif, sedangkan

jika tidak terbentuk koloni warna kilap logam maka hasil negatif

(dibandingkan terhadap kontrol positif E.coli ATCC 25922)

9. Koloni digoreskan pada media NA miring.

10. Lalu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam.

11. Dilanjutkan dengan pewarnaan gram,dan dilakukan uji Indol Reagent

Merah Voges Proskauer Koser Citrate (IMViC).

Pengujian IMViC :

a. Uji Indol :

1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam

Tryptone broth.

2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 18-24 jam.

3) Ditambahkan 0,2-0,3 pereaksi Indole (Kovacs)

4) Dikocok selama 10 menit, warna merah tua pada permukaan

menunjukkan hasil indol positif, warna jingga menunjukkan reaksi

Indol negatif.

26

b. Uji Merah Methyl


MRVP Broth.


3) Dipipet 5 ml biakan ke dalam tabung steril.

4) Ditambahkan 5 tetes larutan MM dan kocok, warna kuning

menunjukkan hasil negatif, dan warna merah menunjukkan hsil

positif.

c. Uji Voges Proskauer


MRVP Broth.


3) Dipipet 1 ml biakan ke tabung steril

4) Ditambahkan 0,6 -naftol 5% dan 0,2 ml KOH 40% dan kocok.

Warna merah muda hingga merah tua menunjukkan reaksi positif,

dan warna tidak berubah menunjukkan reaksi negatif.

d. Uji Citrate


Koser Citrate.


Adanya kekeruhan pada media Koser Citrate menunjukkan reaksi

positif.

Bakteri Indol Methyl Red Voges Proskauer

Citrate

E..coli + + - - Tabel 2. Hasil Reaksi IMViC dari E.coli

Perhitungan :

Jumlah Bakteri = dihitung berdasarkan tabel APM seri 3 Tabung

26

4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)

Prinsip : Pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada perbenihan

khusus setelah inkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam dan

dilanjutkan dengan uji koagulase.

Peralatan :

a. Tabung reaksi

b. Rak tabung

c. Holkey stick

d. Gelas ukur 100 ml

e. Mikropipet

f. Cawan petri


h. Colony counter

i. Pengaduk

j. Sengkelit(ose)

k. Neraca analitik

l. Stomacher

m. Laminar flow

n. Pembakat spirtus

o. Erlenmeyer

Pereaksi :


b. Larutan Fisiologis 0,85%

c. Baird Parker Agar (BPA)

d. Brain Heart Infusion Broth (BHIB)

e. Plasma darah kelinci

f. Alkohol 70%

27

Cara kerja :

1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung

plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hinnga diperoleh pengenceran



2. Dipipet 0,1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan

petri yang berisi media BPA lau disebarkan dengan menggunakan

holkey stick, dikerjakan secara duplo dan dilakukan blanko.

3. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 361C selama

18-24 jam.

4. Dihitung jumlah koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan alat

Colony counter. Cirinya koloni berwarna hitam dikelilingi areal bening,

lalu dilanjutkan dengan uji koagulase (dibandingkan dengan control

positif S.aureus ATCC 25923).

Uji Koagulase :

a. Diambil satu koloni yang dicurigai.

b. Dimasukkan ke dalam tabung yang berisi media BHI.

c. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam.

d. Diambil 0,1 ml biakan ke dalam tabung yang berisi plasma darah

kelinci sebanyak 0,3 ml.

e. Dihitung jumlah Staphylococcus aureus yang memberikan reaksi

koagulase positif.

Perhitungan :

Faktor pengenceran = 1/pengenceran

Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran

5. Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)

Prinsip : Pertumbuhan Salmonella pada perbenihan selektif yang

dilanjutkan dengan uji biokimia dan uji serologi.

28

Peralatan :

a. Tabung reaksi

b. Rak tabung


d. Mikropipet

e. Cawan petri

f. Inkubator suhu 37C dan 42-43C

g. Penangas air

h. Pengaduk

i. Sengkelit(ose)

j. Neraca analitik

k. Stomacher

l. Laminar flow

m. Pembakat spirtus

n. Erlenmeyer

Pereaksi :


b. Selenite Cystine Broth (SCB)

c. Tetrathionate Brilliant Green Broth (TBB)

d. Salmonella Shingella Agar (SSA)

e. Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD)

f. Nutrient Agar (NA)

g. Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

h. Urea broth

i. Lysine Iron Agar (LIA)

j. S.I.M Medium

k. Beta-Galactosidase reagent

l. Toulena

m. V.P. Medium

n. Creatine

o. Alpha- Naftol

p. KOH 40%

29

q. Indole medium

r. Pereaksi Indole

s. Antisera O dan H

t. Alkohol 70%

Cara kerja :

Pra-pengkayaan (pra-enrichment)


plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW.

2. Dihomogenkan dengan stomacher, lalu dimasukkan ke dalam

Erlenmeyer steril secara aseptik.

3. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 16-20 jam.

Pengkayaan (enrichment)

1. Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media

Selenite Cystine Broth (SCB), lalu diinkubasi di dalam inkubator pada

suhu 35-37C selama 24 jam.

2. Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media

Tetrathionate Brilliant Green Broth (TBB), lalu diinkubasi di dalam

inkubator pada suhu 43C selama 24 jam.

Penanaman pada media selektif

1. Diambil satu ose dari masing-masing media pengkayaan yang telah

diinkubasikan.

2. Diinokulasikan ke dalam media Salmonella Shingella Agar (SSA) dan

Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD).

3. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 361C selama 24 jam.

4. Diamati,pada media SSA terbentuk koloni tidak berwarna sampai

merah muda,bening sampai buram dan pada media XLD terbentuk

koloni merah muda, bintik hitam ditengah/koloni bening bintik hitam

latar belakang merah, (dibandingkan dengan control positif S. tiphy

ATCC 14028).

5. Uji Penegasan (Biokimia)

a. Pilih 2-5 koloni tersangka dan goreskan pada media agar miring

Nutrient Agar, diinkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam.

b. Pindahkan isolat dari media Nutrient Agar ke dalam media

sebagai berikut:

30

1) TSIA

a) Tersangka koloni Salmonella ditusuk ke media dasar agar

dan digores pada agar miringnya.

b) Inkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam.

c) Amati terjadinya perubahan-perubahan sebagai berikut :

Bagian tegak : warna kuning dengan atau tanpa warna

hitam (H2S).

Bagian miring : warna merah atau tidak berubah.

2) Urea Agar

a) Goreskan koloni tersangka Salmonella, pada permukaan

Urea Agar miring.

b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 24 jam, jika media

berwarna merah maka menunjukkan reaksi positif, jika

tidak terjadi perubahan warna, maka reaksi negatif.

3) Lysine Decaboxylation Medium

a) Inokulasikan tersangka koloni Salmonella pada perbenihan

cair (Lysine Decaboxylation Medium)

b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 48 jam.timbulnya

warna ungu menunjukakan reaksi positif.

4) Beta-Galactosidase reagent

a) Suspensikan tersangka koloni Salmonella dalam 0,25 ml

larutan saline pada tabung reaksi.

b) Ditambahkan satu tetes toulena.

c) Masukan dalam penangas air pada suhu 37C selama

beberapa menit.

d) Ditambahkan 0,25 ml pereaksi Beta-Galactosidase dan

dikocok.

e) Disimpan kembali dalam penangas air pada suhu 37C

selama 24 jam. Terbentuknya warna kuning menunjukkan

reaksi positif. Jika warna tidak berubah maka reaksi

negatif.

31

5) V.P. Medium

a) Dimasukkan masing-masing satu ose tersangka koloni

Salmonella ke dalam 2 tabung reaksi yang masing-masing

terdiri dari 0,2 ml media V.P.

b) Inkubasikan tabung I pada suhu kamar dan tabung II pada

suhu 37C selama 48 jam.

c) Pada tiap tabung ditambahkan 2 tetes larutan Creatine, 3

tetes larutan alpha-naftol, dan 2 tetes larutan KOH

40%(lakukan pengocokan setiap penambahan pereaksi).

d) Amati dalam waktu 15 menit. Terbentuknya warna merah

jambu sampai merah tua menunjukkan reaksi positif dan

bila tidak berubah reaksi negatif.

6) Indole Medium

a) Ambil satu ose koloni tersangka Salmonella, dimasukkan

kedalam media Indole dalam tabung reaksi.

b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 24 jam.

Ditambahkan 1 ml pereaksi Indole. Terbentuknya warna

gelang merah menunjukkan reaksi positif dan bila tidak

berubah atau warna kuning kecoklatan, maka reaksi

negatif.

No. Media Reaksi Biokimia 1. TSIA Bagian tegak : warna kuning dengan atau

tanpa warna hitam (H2S). Bagian miring : warna merah atau tidak berubah

2. Urea Agar Warna tidak berubah ( reaksi negatif )

3. Lysine Decaboxylation

Medium

Warna ungu ( reaksi positif )

4. Beta-Galactosidase reagent

Warna tidak berubah ( reaksi negatif )

5. V.P. Medium

Warna tidak berubah ( reaksi negatif )

6. Indole Medium Warna kuning kecoklatan ( reaksi positif ). Tabel 3. Hasil Reaksi Biokimia dari Salmonella

6. Jika reaksi biokimia menunjukkan ada Salmonella, ambil satu ose

biakan dari TSIA dan dioleskan pada gelas sediaan. Diteteskan

sedikit antisera O dan H disamping biakan. Dengan menggunakan

32

ose campur tetesan antisera dengan kultur hingga homogen.

Penggumpalan yang terjadi menunjukkan reaksi positif Salmonella.

Perhitungan :

Hasil = (Positif/Negatif) gram/ mL sampel

6. Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang


Prinsip : Pertumbuhan Kapang dan Khamir dalam media yang cocok

setelah diinkubasi pada suhu 25C selama 5 hari.

Peralatan :

a. Tabung reaksi

b. Rak tabung


d. Mikropipet

e. Cawan petri

f. Inkubator suhu 25C

g. Pengaduk

h. Neraca analitik

i. Stomacher

j. Laminar flow

k. Pembakat spirtus

l. Erlenmeyer

Pereaksi :

a. Buffered Peptone Water (BPW )

b. Larutan Fisiologis 0,85%

c. Potato Dextrose Agar (PDA)

d. Alkohol 70%

e. Asam Tartarat 10%

33

Cara kerja :


plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hinnga diperoleh pengenceran



2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan

petri steril secara duplo dan dilakukan blanko.

3. Ke dalam setiap cawan petri dituangkan sebanyak 15 ml Media PDA

yang telah ditambahkan Asam Tartarat 10% (1,6 ml dalam 100 ml)

yang sudah disterilisasi.

4. Lakukan putaran pada cawan petri hingga membentuk angka delapan

supaya contoh tercampur rata dengan media.

5. Dikerjakan blanko dengan mencampurkan larutan pengencer dengan

media.

6. Diamkan campuran dalam cawan petri hingga padat.

7. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 25C selama 5 hari.

8. Dicatat pertumbuhan koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan

alat Colony counter.

Perhitungan :

Faktor pengenceran = 1/pengenceran

Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran

7. Pewarnaan Gram menurut Preston dan Morrel

Prinsip : Pewarnaan gram ini digunakan untuk menentukan jenis bakteri

gram positif dan bakteri gram negatif. Yang termasuk bakteri gram positif

adalah segolongan bakteri yang menahan persenyawaan yang disebut

Iodinedye Complex yang terbentuk dari KI dan I2 dengan zat warna Kristal

Violet sewaktu dicuci. Sedangkan yang termasuk bakteri gram negatif

adalah segolongan bakteri yang melepaskan persenyawaan dan zat

warna tadi, tetapi mengikat zat warna berikutnya yaitu Safranin.

34

Peralatan :

a. Kaca obyektif.

b. Ose.

c. Pembakar spirtus.

d. Mikroskop.

Bahan:

a. Alkohol 96%.

b. Suspensi bakteri.

c. Zat warna Kristal Violet

d. Lugol.

e. Zat warna Safranin.

f. Kertas serap.

g. Air suling.

Cara Kerja:

1. Disiapkan kaca obyek, lalu dibersihkan dengan menggunakan kapas

yang telah dibasahi dengan alkohol sampai terbebas dari kotoran dan

lemak, setelah itu difiksasi di atas api.

2. Diambil 1-2 ose penuh suspensi bakteri pada kaca obyek, lalu

sebarkan hingga rata seluas area yang disediakan.

3. Difiksasi 3 kali di atas api.

4. Diletakkan kaca obyektif tersebut di atas bak pewarna, lalu diwarnai

dengan zat warna Kristal Violet selama 60 detik.

5. Dipegang kaca obyektif dengan pinset atau penjepit lain dan

miringkan untuk membuang kelebihan zat warna, lalu bilas dengan air

suling sampai tidak ada lagi zat warna yang mengalir dari kaca obyek.

6. Ditetesi kaca obyek tersebut dengan larutan lugol selama 30 detik.

7. Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkan kaca obyek

untuk membuang kelebihan larutan lugol, lalu bilas dengan air suling.

35

8. Kemudian dicuci dengan alkohol 95% tetes demi tetes selama 30

detik atau sampai zat warna Kristal Violet tidak terlihat lagi mengalir

dari kaca obyek, lalu dicuci dengan air suling.

9. Diwarnai kembali kaca obyek tersebut dengan menggunakan zat

warna Safranin selama 60 detik.

10. Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkan kaca obyek

untuk membuang kelebihan zat warna Safranin, lalu dibilas dengan air

suling.

11. Kaca obyek dikeringkan dengan menggunakan kertas serap.Diamati

dibawah mikroskop dengan menggunakan lensa obyektif 100 x

dengan meneteskan minyak.

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

Hasil Analisis Mikrobiologi sampel jeli agar dibandingkan dengan SNI

01-3552-1994 Jeli Agaradalah sebagai berikut :

No. Krietria Uji Metode Satuan Hasil Batas Maksimum 1. Angka Lempeng Total Tuang Koloni/g

36

seperti saat pemilihan bahan baku, pengolahan bahan baku, proses

pengemasan, penyimpanan serta proses distribusi yang tidak baik.

Angka lempeng total merupakan salah satu cara untuk menghitung

cemaran mikroba, dimana cara ini merupakan bagian dari metode hitungan

cawan. Prinsip pada metode hitungan cawan adalah jika sel jasad renik yang

masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel jasad renik tersebut

akan berkembang biak membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan

dapat dihitung dengan menggunakan mata tanpa mikroskop.

2. Uji Bakteri Coliform

Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil

Bakteri Coliform < 3 koloni/g. Hasil Coliform sesuai dengan persyaratan SNI

01-3552-1994 (Jeli Agar).

Coliform merupakan suatu kelompok bakteri yang digunakan sebagai

indikator adanya polusi kotoran dan kondisi sanitasi yang tidak baik terhadap

air, makanan, susu dan produk-produk susu. Adanya bakteri Coliform di

dalam makanan menunjukkan kemungkinan adanya mikroorganisme yang

bersifat enteropatogenik yang berbahaya bagi kesehatan.

Bakteri Coliform terdiri dari Coliform fecal dan Coliform non-fecal.

Coliform fecal biasa ditemukan pada kotoran hewan dan manusia seperti

Eschericia coli sedangkan Coliform non-fecal yang bisa ditemukan pada

jasad hewan atau tumbuhan yang telah mati seperti Enterobacter aerogenes.

Metode yang digunakan dalam menghitung jumlah Coliform yaitu

metode Angka Paling Mungkin (APM). Metode ini lebih baik dibanding

dengan metode hitungan cawan karena lebih sensitif dan dapat mendeteksi

Coliform dalam jumlah yang sedikit. Pengujian Coliform terdiri dari uji

penduga, dan uji penegasan. Pada uji penduga digunakan media Lauryl

Sulfate Trptose Broth, sedangkan untuk sampel yang mengandung bakteri

asam laktat yang tinggi digunakan media Brilliant Green Lactose Bile Broth

(BGLBB).

37

Perhitungan bakteri Coliform dilakukan berdasarkan jumlah tabung

yang positif, yaitu yang ditumbuhi oleh mikroba stelah diinkubasi pada suhu

dan waktu tertentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat dari timbulnya

kekeruhan atau terbentuknya gas pada tabung durham.

3. Uji Bakteri E.coli


Bakteri E. coli < 3 koloni/g. Hasil E. coli sesuai dengan persyaratan SNI 01-

3552-1994 (Jeli Agar).

E.coli merupakan salah satu golongan bakteri Coliform fecal sehingga

dalam pengujian awal digunakan media LSTB. Terbentuknya gas pada media

LSTB tidak pasti menunjukkan bahwa bakteri yang menghasilkan gas

tersebut adalah E.coli sehingga tabung Durham yang terbentuk gas diisolasi

ke media E.coli Broth (ECB) dan diinokulasikan ke media Eosin Methylene

Blue (EMB) tiap masing-masing pengenceran yang menunjukkan adanya

pertumbuhan Coliform baik fecal maupun non-fecal. Coliform fecal dapat

diketahui dengan mengamati penampakan koloni gelap, dengan sinar hijau

metalik (keemasan). Sedangkan Coliform non-fecal berwarna merah muda

dengan bagian tengah gelap.

Dari pertumbuhan koloni pada media EMB dipilih satu koloni yang

berwarna gelap dengan sinar hijau metalik yang diduga E.coli lalu diisolasi

ke media NA dan dilakukan pewarnaan Gram. Reaksi pewarnaan gram

menunjukkan bakteri gram negatif dan berbentuk batang, sedangkan pada

pengujian IMViC (Indole, Methyl Red, Voges Proskauer, dan Citrate)

menunjukan reaksi positif pada uji Indole dan uji Methyl Red serta reaksi

negatif pada uji Voges Proskauer dan uji Citrate.

38

4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar


Bakteri Staphylococcus aureus

39

Media yang digunakan pada pengujian S.aureus adalah media Baird

Parker Agar (BPA) yang mengandung Egg Yolk Tellurite (1 ml larutan glysin

20%, 1 ml larutan Kalium tellurit 1%, 5 ml Na-piruvat 20 %, 5 ml Emulsi Egg

Yolk). Egg Yolk Tellurite Enrichment ditambahkan pada media Baird Parker

Agar setelah proses sterilisasi. Fungsi penambahan Lithium dan Kalium

tellurit pada media adalah untuk menghambat pertumbuhan mikroba lainnya.

Sedangkan Na-piruvat dan Glysin untuk merangsang pertumbuhan

Staphylococcus aureus.

Selain S.aureus, mikroba yang dapat tumbuh pada media BPA yaitu

Staphylococcus epidermidis. Kedua koloni ini dapat dibedakan dengan

melakukan uji koagulase. S.aureus mampu mengkoagulasi plasma kelinci

dari media Brain Heart Infusion Broth (BHIB), sedangkan Staphylococcus

epidermidis tidak mampu mengkoagulasi plasma kelinci tersebut.

5.Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi


Bakteri Salmonella negatif/25g. Hasil Salmonella sesuai dengan persyaratan

SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar). Salmonella adalah bakteri berbentuk batang,

pada pengecatan gram berwarna merah muda (gram negatif) dan termasuk

bakteri patogen yang dapat menimbulkan penyakit demam tifus dan

gastroenteritis pada manusia. Oleh sebab itu bakteri Salmonella tidak boleh

ada dalam bahan pangan. Keberadaannya dalam jumlah yang sedikit sudah

dapat menimbulkan gejala penyakit. Seperti diantaranya Salmonella typhii

yang merupakan penyebab typhus dan Salmonella paratiphus penyebab

penyakit Paratiphus. Karena pada suatu bahan makanan jumlahnya sedikit,

hal ini memungkinkan analisis dilakukan secara kualitatif. Pengujian secara

kualitatif dilakukan melalui tahap pra-pengkayaan, pengkayaan, seleksi,

isolasi, identifikasi primer, dan identifikasi lengkap. Jika tahapan pra-

pengkayaan, pengkayaan, seleksi dan isolasi telah dilakukan, dan bahan

makanan dicurigai mengandung bakteri Salmonella, maka dilakukan tahapan

berikutnya yaitu identifikasi primer (uji biokimia).

40

6.Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang


Bakteri Kapang dan khamir

41

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan

Berdasarkan hasil analisis mikrobiologi yang dilakukan pada sampel jeli

agar dapat disimpulkan bahwa sampel jeli agar memenuhi persyaratan yang

ditetapkan dan sesuai dengan Standar Nasional Indonesia 01-3552-1994 (jeli

Agar).

B. Saran

1. Penggunaan APD lebih ditingkatkan untuk mencegah kecelakaan dan

kontaminasi saat analisis.

2. Perlu ditambahnya alat yang baru untuk meningkatkan kinerja analisis.

3. Kerjasama antara PT. M-BRIO Food Laboratory dan Sekolah Menengah

Analis Kimia Bogor lebih ditingkatkan.

42

DAFTAR PUSTAKA

Anonimus. 1994. Standar Nasional Indonesia Jeli Agar. Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.

Fardiaz, Srikandi. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Raja Grafindo Persada.

Fardiaz, Srikandi. 1989. Penuntun Praktek Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Institut Pertanian Bogor.

Hadioetomo, Ratna Siri.1985. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek.Jakarta : PT. Gramedia. Suprapti M. Lies.2004.Jelly Jambu Mete. Yogyakarta: Kanisius.

Sudiarto, Fadil.2010.Mikrobiologi Pangan.Yogyakarta:Diva Press Yogyakarta.

Anonimus.2013.Pengumpulan dan Pengolahan Data. Tersedia di URL : http://www.library.upnvj.ac.id/pdf/4s1teknikindustri/207415011/BAB%20IV.pdfDiakses pada tanggal 23 Februari 2013 Pukul : 19.25. Anonimus.2013.Analisis Pengemasan. Tersedia di URL: http://blog.ub.ac.id/midori/2012/03/20/analisis-pengemasan-5/ . Diakses pada tanggal 24 Februari 2013. Pukul :19.05. Anonimus.2013.Alat-alat dalam Praktikum Mikrobiologi. Tersedia di URL : http://praktikmikrobiologi.blogspot.com/2011/07/bab-1-alat-alat-dalam-laboratorium_23.html . Diakses pada tanggal 24 Februari 2013. Pukul:20.30. Anonimus.2013.Jeli.Tersedia di URL: http://unlimited4sedoyo.wordpress.com/2011/02/21/jelly/*. Diakses pada tanggal.24 Februari 2013. Pukul: 17.15. Anonimus.2013.Staphylococcus aureus. Tersedia di URL: http://pustaka.unpad.ac.id/wpcontent/uploads/2011/09/pustaka_unpad_staphylococcus.pdf . Diakses pada tanggal 25 Februari 2013. Pukul : 20.38.

43

Lampiran 1. Gambar dan Data Hasil pengamatan Uji Angka Lempeng Total pada Media PCA

Pengenceran 10-1 10-2

Simplo 0 0

Duplo 0 0

Kontrol media 0

Tabel 5. Hasil Analisis ALT pada Jeli Agar

Jumlah total bakteri = 1,0 x 101 koloni/gram

Kontrol Negatif Pengenceran 10-2 Pengenceran 10-1

Gambar 18. Hasil Pengamatan Uji Angka Lempeng total

44

Lampiran 2. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Bakteri Coliform dan E.coli pada

Media LSTB

Pengenceran 10-1 10-2 10-3 Kontrol (+) Kontrol (-)

Tabung 1 0 0 0 (+) (-)

Tabung 2 0 0 0

Tabung 3 0 0 0

Tabel 6. Hasil Analisis Bakteri Coliform dan E. coli pada Jeli Agar

Keterangan kontrol (+): E.coli ATCC 25922 Jumlah Bakteri menurut tabel APM seri 3 tabung = < 3 APM/gram.

Kontrol Negatif Kontrol Positif

Pengenceran 10-1 Pengenceran 10-2 Pengenceran 10-3

Gambar 19. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Coliform dan E.coli

45

Lampiran 3. Gambar Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus pada Media BPA

Pengenceran 10-2 Kontrol (+) Kontrol (-)

Simplo 0 (+) (-)

Duplo 0

Tabel 7. Hasil Analisis Bakteri Staphylococcus aureus pada Jeli Agar

Keterangan kontrol (+): S.aureus ATCC 25923 Jumlah total bakteri =

46

Lampiran 4. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella

Media Hasil Kontrol (+) Kontrol (-)

Salmonella Shigella Agar (SSA) (-) (+) (-)

Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLDA) (-)

Tabel 8. Hasil Analisis Bakteri Salmonella pada Jeli Agar

Keterangan kontrol (+): S.tiphy ATCC 14028 a.Tahap Enrichment

b.Kontrol Positif dan Negatif

Media TBB .Media SCB

Kontrol Negatif pada Media XLD Kontrol Positif pada Media XLD

Kontrol Negatif pada Media SSA Kontrol Positif pada Media SSA Gambar 21. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Tahap Enrichment,

Kontrol Negatif dan Kontrol Positif)

47

c.Inokulasi dari media TBB

Inokulasi Sampel Simplo pada Media XLD

Inokulasi Sampel Duplo pada Media XLD

Inokulasi pada Sampel Simplo pada Media SSA

Inokulasi Sampel Duplo pada Media SSA

Gambar 22. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi dari media TBB)

48

d.Inokulasi dari media SCB

I Sampel Simplo pada Media SSA Inokulasi Sampel Duplo pada Media SSA

Inokulasi Sampel Simplo pada Media XLD

Inokulasi Sampel Duplo pada Media XLD

Gambar 23. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi Salmonella dari Media SCB)

49

Lampiran 5. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Kapang dan khamir Pada Media PDA

Pengenceran 10-1 10-2

Simplo 0 0

Duplo 0 0

Kontrol media 0

Tabel 9. Hasil Analisis Kapang dan Khamir pada Jeli Agar

Jumlah total bakteri =

50

Lampiran 6.Pembuatan Media dan Pereaksi

1. Buffered Peptone Water (BPW)

Komposisi:

Peptone 10,0 gram

Sodium chloride 5,0 gram

Phospate Buffer 10,5 gram

Air Suling 1 Liter

Pembuatan:

Ditimbang 2,55 gram BPW dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,

setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian disterilkan dalam autoklaf pada

suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit, BPW digunakan sebagai larutan

pengencer.

2. Plate Count Agar (PCA)

Komposisi:

Tryptone 5,0 gram

Yeast extract 2,5 gram

Glucose 1,0 gram

Agar 15,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 2,25 gram PCA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah

larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu

121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. PCA digunakan sebagai media pada

perhitungan Angka Lempeng Total yang dituangkan ke dalam cawan petri steril

15 ml.

51

3. Baird Parker Agar (BPA)

Komposisi:

Peptone from casein 10,0 gram

Meat extract 5,0 gram


Sodium piruvat 10,5 gram

Glysin 12,5 gram

Lithium chloride 5,0 gram

Agar 15,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Bahan-bahan dicampurkan dan dipanaskan hingga larut sempurna (pH

6,8 0,2), kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi

selama 15 menit, didinginkan sampai suhu 45-50oC, kemudian ditambahkan Egg

yolk emulsion dan 10 ml Tellurit 1%. BPA digunakan sebagai media selektif untuk

uji Staphylococcus aureus.

4. Selenite Cystine Broth (SCB)

Komposisi:

Pepton from casein 5.0 gram

L (-) cystine 0,01 gram

Lactose 4,0 gram

Phospate buffer 10,0 gram

Sodium hydrogen selenite 4,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 2,3 gram SCB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak

hingga larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di masukkan ke dalam

autoklaf. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan. Media ini

digunakan sebagai media pengkaya pada tahapan homogenasi contoh makanan

untuk uji Salmonella.

52

5. Lauryl Sulphate Broth

Komposisi:

Tryptone,tryptose atau trypticase 20 gram

Lactose 5 gram

K2HPO4 2,75 gram

KH2PO4 2,75 gram

NaCl 5 gram

Sodium Lauryl Sulphate 0,2 gram

Air Suling 1 liter

Pembuatan:

Larutkan bahan-bahan dalam air suling. Atur pH 6,8. Masukkan 10 ml ke

dalam tabung kimia yang berisi tabung durham terbalik, kemudian disterilkan

dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

6. Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)

Komposisi:

Peptone from meat 10,0 gram

Lactose 10,0 gram

Oxgall bile 20,0 gram

Brilliant green 0,0133 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 4 gram BGLBB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah

larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi

yang berisis tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan

untuk uji Coliform dengan metoda APM pada tahapan penegasan media

memberikan hasil positif apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada

tabung durham.

53

7. E. coli Broth (ECB)

Komposisi:

Tryptone 20,0 gram

Lactose 5,0 gram

Bile salt no 3 1,5 gram

Dipotassium phosphate 4,0 gram

Monopotassium phosphate 1,5 gram


Air suling 1 gram

Pembuatan:

Ditimbang 3,7 gram ECB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,9

0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan

ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu

disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

Media ini digunakan sebagai media selektif untuk uji E.coli dengan metode APM

pada tahapan penegasan media memberikan hasil positif apabila terbentuk gas

atau gelembung udara pada tabung durham.

8. Salmonella Shigella Agar (SSA)

Komposisi:

Lab. Lemco powder 5,0 gram

Lactose 10,0 gram

Bile salt 8,5 gram

Sodium citrate 10,0 gram

Sodium thiosulphate 8,5 gram

Ferric citrate 1,0 gram


Neutral red 0,025 gram

Agar 15,0 gram

Pembuatan:

Ditimbang 6,3 gram SSA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak

hingga mendidih dan larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di

masukkan ke dalam autoklaf. Didinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke

dalam cawan petri. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan.

54

9. Eosine Methylene Blue (EMB) Agar

Komposisi:

Peptone 10,0 gram

Di-kalium hydrogen phosphate 2,0 gram

Lactose 5,0 gram

Sacharose 5,0 gram

Eosin yeblich 0,4 gram

Methylen blue 0.07 gram

Agar 13,5 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 3,6 gram EMB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,

panaskan hingga mendidih dan setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) disterilkan

dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini

digunakan sebagai media selektif pada pengujian bakteri E.coli yang akan

menunjukkan hasil positif apabila terbentuk koloni berwarna kilap logam.

Pembuatan:

10. Salmonella Shigella Agar (SSA)

Komposisi:


Lactose 10,0 gram

Bile salt 8,5 gram





Neutral red 0,025 gram

Agar 15,0 gram

Pembuatan:

Ditimbang 6,3 gram SSA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak

hingga mendidih dan larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di

masukkan ke dalam autoklaf. Didinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke

dalam cawan petri. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan.

55

11. Potato Dextrose Agar (PDA)

Komposisi:

Potato infusion 4,0 gram

Infusion from 200 gram potato

D (+) glucose 20,0 gram

Agar 15,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 3,9 gram PDA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,

panaskan hingga mendidih dan setelah larut sempurna (pH 5,2 0,2) disterilkan

dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Pada saat akan

digunakan, media ditambahkan 1,6 ml asam tartarat 10% untuk 100 ml media.

Media ini digunakan pada pengujian Kapang dan Khamir yang dituang sebanyak

15 ml pada cawan steril.

12. Lactose Broth (LB)

Komposisi:


Peptone 5,0 gram

Lactose 5,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 1,3 gram LB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,9


ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu

disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

Media ini digunakan sebagai media selektif untuk perhitungan bakteri Coliform

dengan metode APM pada tahapan sangkaan. Media memberikan hasil positif

apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada tabung durham.

56

13. Nutrient Agar (NA)

Komposisi:

Bacto beef extract 3,0 gram

Bacto peptone 5,0 gram

Bacto agar 15,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Bahan-bahan dilarutkan (pH 6,8-7,0), kemudian disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

14. Brain Heart Infusion (BHI)

Komposisi:

Calf brain infusion solids 12,5 gram

Beef heart infusion 5,0 gram

Proteose paptone 10,0 gram

Glucose 2,0 gram


di-sodium phosphate 2,5 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 3,7 gram BHI dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 7,3


ke dalam tabung reaksi 7 ml, kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu

121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan sebagai media

pertumbuhan bakteri S.aureus.

15. Triple Sugar Iron (TSIA)

Komposisi:



Peptone 20,0 gram


57

Lactose 10,0 gram

Sucrose 10,0 gram

Glucose 1,0 gram



Phenol red 5,0 gram

Agar 12 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 6,5 gram TSIA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 7,4

0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian

dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, kemudian disterilkan dalam autoklaf

pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Lalu dimiringkan, media ini

digunakan sebagai media penegasan uji bakteri Salmonella.

16. Lysine Decarboxylase Broth

Komposisi:

L-lysine 5,0 gram


Glucose 1,0 gram

Bromoceresol purple 0,015 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Masukkan bahan-bahan dalam air suling,panaskan perlahan sambil

diaduk,masukkan 5 ml ke dalam tabung. kemudian disterilkan dalam autoklaf

pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. pH akhir 6,5.

58

17. Urea Broth

Komposisi:

Peptone 1,0 gram

Glucose 1,0 gram


Di-sodium phosphate 1,2 gram

Potassium dihydrogen phosphate 0,8 gram

Phenol red 0,012 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 2,4 gram Urea Broth dan dilarutkan dalam 100 ml air suling

(pH 6,8 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian

disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit,

didinginkan sampai suhu 50oC. Lalu dimiringkan, media ini digunakan sebagai

media penegasan uji bakteri Salmonella.

18. Xylose Lysine Desoxycholate Agar(XLD)

Komposisi:


L(-) Lysine HCl 5,0 gram

Xylose 3,75 gram

Lactose 7,5 gram

Sucrose 7,5 gram

Sodium desoxycholate 1,0 gram


Ferric ammonium citrate 0,8 gram

Phenol red 0,008 gram

Agar 12,5 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 5,3 gram XLD dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,

panaskan sampai mendidih agar larut semua (pH 7,4 0,2) jangan dimasukkan

ke dalam autoklaf. Dinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke dalam cawan

59

petri. Buatlah media ini dalam keadaan fresh (siap pakai) dan tidak untuk

disimpan. Media ini digunakan sebagai uji bakteri Salmonella yang menunjukan

hasil positif apabila terbentuk koloni tak berwarna sampai merah muda atau

bening.

19. Methyl Red Voges Proskauer Broth (MRVP)

Komposisi:

Peptone 5,0 gram

Glucose 5,0 gram

Sodium chloride 30 gram

K2HPO4 5,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 1,5 gram MRVP dan dilarutkan dalam 100 ml air suling,

dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke

dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan

15 psi selama 15 menit, media ini digunakan sebagai media penegasan uji

bakteri Salmonella dan E.coli.

20. Koser Citrate Broth

Komposisi:

Sodium ammonium hydrogen phosphate 1,4 gram

K2HPO4 1,0 gram

MgSO4 0,2 gram


Air suling 1 liter

Pembuatan:

Ditimbang 5,7 gram Koser Citrate Broth dan dilarutkan dalam 1000 ml

air suling, dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna.

Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

60

21. Indole Medium

Komposisi:

Tryptone 10,0 gram

NaCl 5,0 gram

DL-tryptophane 1,0 gram

Air suling 1 liter

Pembuatan:

Bahan-bahan dilarutkan dengan air suling (pH 7,0). Kemudian

dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu

121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

22. Tetrathinonate Broth Base (TBB)

Komposisi:

Lab lemco powder 0,9 gram

Peptone 4,5 gram



Calcium carbonat 25,0 gram

Sodium thiosulfat 40,7 gram

Pembuatan:

Dilarutkan 7,7 gram TBB dalam 10 ml air suling. Dipanaskan sampai

mendidih agar larut sempurna. Media ini jangan di autoklaf. Pada saat akan

digunakan, tambahkan 2 ml larutan iodine untuk 100 ml media. Jangan disimpan

terlalu lama setelah media ditambahkan larutan iodine. Media ini digunakan

sebagai media pengkaya pada homogenasi contoh makanan untuk uji

Salmonella setelah ditambahkan larutan iodine dan 1 ml Brillian Green 0,1 %

untuk 10 ml.

61

23. Kovacs reagent

Komposisi:

p-dimethylaminobenzaldehyde 5,0 gram

n-amylalkohol 75 gram

HCl pekat 25 mL

Pembuatan:

Larutkan p-dimethylaminobenzaldehyde dalam Amylalkohol. Dengan

perlahan-perlahan tambahkan HCl, simpan pada 4oC.

24. Merah metil (MM)

Komposisi:

Methyl Red 0,10 gram

Etil alkohol 300 mL

Pembuatan:

Larutkan Methyl Red dalam alkohol, lalu encerkan dengan air suling

sampai menjadi 500 ml.

25. Alpha-naftol 5%

Pembuatan:

Larutkan 5 gram alfa-naftol dalam 100 ml alkohol mutlak.

26. Rabbit Plasma

Pembuatan:

Gunakan bacto-coagulase plasma (EDTA No. kode 0803) dehidrat.

Larutkan 1 amful (100 mg) dalam 3 ml air suling. Larutkan plasma yang tidak

terpakai dapat disimpan dalam lemari pendingin (0-5oC) selama beberapa hari.

27. Voges Proskauer

a. Larutan alfa-naftol 5%

Pembuatan:

Larutkan 5 gram alfa-naftol dalam 100 mL air suling.

62

b. Larutan KOH 40%

Pembuatan:

Larutkan 40 gram Kalium Hidroksida dalam 100 ml air suling. Larutkan

alfa-naftol harus segar disiapkan setiap hari (setiap akan dipakai).

28. Kalium Tellurit Trihidrat 1 %

Pembuatan:

Larutkan 1 gram Kalium tellurit trihidrat dalam 100 ml air suling,

kemudian disterilkan pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit atau

dengan penyaringan. Larutan ini digunakan sebagai indikator pada pengujian S.

aueus yang ditambahkan 2 ml pada 100 ml media Baird Parker Agar (BPA).

29. Asam Tartarat 10 %

Pembuatan:

Larutkan 10 gram asam tartarat dalam 100 ml air suling,

kemudian disterilkan pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Larutan

ini digunakan sebagai penurun pH menjadi pH 3,5 pada pengujian Kapang dan

Khamir yang ditambahkan 1,6 ml pada 100 ml media Potato Dextrose Agar

(PDA).

30. -Galaktosidase

Komposisi:

a. Natrium dihidrogen fosfat 6,9 gram

b. Larutan NaOH 0,1 N 3,0 gram

c. Air suling 65 ml

d. Pyranoside 80 mg

Pembuatan:

a. Natrium dihidrogen fosfat

Larutkan Natrium dihidrogen fosfat dalam 45 ml air. Atur pH

7,00,1. Ditambahkan air hingga mencapai 50 ml. Disimpan dalam lemari

pendingin.

63

b. Orto-nitrophenyl Beta-D-glacto-Pyranoside

Larutkan Pyranoside dengan air suling pada 50oC, didinginkan lalu

ditambahkan 5 ml larutan Natrium dihidrogen fosfat yang telah dibuat.

Disimpan pada suhu 4oC (penyimpanan tidak melebihi 1 bulan).

31. Larutan Kristal Violet

Komposisi:

Kristal violet (85-90% kadar zat warna) 2 gram

Etil alkohol (95%) 20 mL

Ammonium oksalat 0,8 gram

Air suling 80 ml

Pembuatan:

Larutkan Kristal Violet dalam alkohol dan Ammonium Oksalat dalam air

suling sebanyak 80 ml. Campurkan kedua larutan tersebut dan simpan

campuran selama 24 jam sebelum digunakan.

32. Larutan Lugol

Komposisi:

Iodine 1,0 gram

Kalium Iodida 2,0 gram

Air suling 300 ml

Pembuatan:

Masukan bahan-bahan tersebut ke dalam air suling sebanyak 300 ml,

campurkan dan biarkan 24 jam sehingga Yod melarut sempurna.

64

Lampiran 7. Tabel APM Seri 3 Tabung

Jumlah Tabung

Positif APM/g

10-1 10=2 10-3

0 0 0 3 0 0 1 3 0 0 2 6 0 0 3 9 0 1 0 3 0 1 1 6 0 1 2 9 0 1 3 12 0 2 0 6 0 2 1 9 0 2 2 12 0 2 3 16 1 3 0 9 1 3 1 13 1 3 2 16 1 3 3 19 1 0 0 4 1 0 1 7 1 0 2 11 1 0 3 15 1 1 0 7 1 1 1 11 1 1 2 15 1 1 3 19 1 2 0 11 1 2 1 15 1 2 2 20 1 2 3 24 2 3 0 16 2 3 1 20 2 3 2 24 2 3 3 29 2 0 0 9 2 0 1 14 2 0 2 20 2 0 3 26

Tabel 10. Tabel APM Seri 3 Tabung

Jumlah Tabung Positif

APM/g

10=1 10-2 10-3

2 1 0 15 2 1 1 20 2 1 2 27 2 1 3 34 2 2 0 21 2 2 1 28 2 2 2 35 2 2 3 42 2 3 0 29 2 3 1 36 2 3 2 44 2 3 3 53 3 0 0 23 3 0 1 39 3 0 2 64 3 0 3 95 3 1 0 45 3 1 1 75 3 1 2 120 3 1 3 160 3 2 0 93 3 2 1 150 3 2 2 210 3 2 3 290 3 3 0 240 3 3 1 460 3 3 2 1100 3 3 3 1400

09.55.06496 marinda eka saputri

Documents