buletin 2

EditorialAssalamu'alaikum.

Bulen edisi 2 tahun 2014 ini dibuka dengan informasi

tentang virus ebola dan bahayanya terhadap manusia.

Sementara itu, tahukah pembaca sekalian bahwa

penggunaan hewan percobaan untuk penelian diperlukan

pengetahuan yang cukup mengenai berbagai aspek tentang

sarana biologis dalam hal penggunaan hewan percobaan

laboratorium.Peneli yang akan memanfaatkan hewan

percobaan pada penelian harus mengkaji kelayakan dan

alasan pemanfaatan hewan dengan mempermbangkan

penderitaan yang akan dialami oleh hewan percobaan dan

manfaat yang akan diperoleh untuk manusia. Bahasan

menarik ini akan dikupas dalam Peran (Instuonal Animal

Care and Use Commiee)IACUC dalam Penggunaan Hewan

Laboratorium guna Penelian dan Pengembangan

Diagnosk.

Dilanjutkandenganlangkah-langkah teknis Tahapan

Idenkasi Molekuler Bakteri atau Fungi berdasarkan

Sequencing16S rRNAatau daerah ITS rDNA, yang pas akan

memperkaya khasanah pengetahuan para pembaca.

Topik selanjutnya masih membahas tentang bakteri dan

jamur, yaitu mengenai Pemeliharaan jangka panjang

mikroorganisme (bakteri dan jamur) dengan metodeLiquid

Drying.Liquid Drying adalah awalnya metode yang

dikembangkan oleh Instute for Fermentaon Osaka (IFO).

Yaitu metode pengeringan suspensi sel tanpa pembekuan,

untuk menghindari kerusakan yang diakibatkan dari

pembekuan tersebut.

Sedangkan info tentang West Nile Virus menjadi penutup

bulen kita kali ini. Berisi wawasan lengkap mengenai

penyebaran dan gejala klinisnya. Sehingga kita mampu

mewaspadai dan bisa melakukan ndakan prevenf

terhadap penularan dan penyebarannya.

Selamat menikma suguhan bulen edisi ini.

Wassalam.(a)

Jl. Pemuda No. 29A

Ebola adalah virus Ebolavirus (EBOV), genus

virus dan penyakit demam hemorrhagic Ebola

(EHF), virus demam hemorrhagic (VHF).

Terdapat empat spesies yang diakui dalam

genus ebolavirus genus, yang memiliki nomor

strain tertentu. '' Zaire virus'' adalah salah

satunya spesies tipenya, yang juga yang

pertama ditemukan dan paling mematikan.

Micrographs elektron menunjukkan

panjang filamen, karakteristik keluarga

virus Filoviridae. Virus mengganggu pada

sel-sel endotel pada lapisan permukaan

interior pembuluh darah dan kaskade.

Akibatnya dinding pembuluh darah menjadi

rusak dan platelet darah mengental, dan

pasien mengalami hypovolemic shock.

Ebola ditularkan melalui cairan-cairan

tubuh. Eksposur kulit dan conjunctiva juga

dapat menyebabkan transmisi, penyakit

tetapi untuk tingkat yang lebih rendah.

Ebola pertama muncul pada tahun 1976 di

Zaire. .Masa inkubasinya dari 2 sampai 21

hari, umumnya antara 5 sampai 10 hari.

Saat ini telah dikembangkan vaksin untuk

Ebola yang 90% efektif dalam monyet,

namun vaksin untuk manusia belum

ditemukan.

EbolaOleh: Elis Damayanti, A.Ma.

Virus Ebola dilihat menggunakn mikroskop elektron

Balai Pengujian Mutu dan Sertifikasi Produk Hewan

Sejauh ini, Ebola adalah penyakit yang paling

mematikan diseluruh dunia. Kesempatan

untuk hidup jika terinfeksi penyakit ini masih

0% alias tidak mungkin, dan sampai sekarang

masih dicari vaksinnya. Penderita biasanya

bisa langsung meninggal dalam siklus 6 hari

sampai 20 hari, dengan sangat cepat.

Sekarang bisa dikatakan bahwa Ebola adalah

penyakit yang paling dihindari untuk terjangkit

diseluruh dunia.

DAFTAR PUSTAKA

Database entry on genus Ebolavirus

- ICTVdB

Ebola Virus Haemorrhagic Fever

- Proceedings of an International

Colloquium on Ebola Virus Infection

and Other Haemorrhagic Fevers held in

Antwerp, Belgium, 6-8 December, 1977

Questions and Answers about Ebola

Hemorrhagic Fever

- Center for Disease Control (CDC),

retrieved 10 July 2006


Penelitian adalah kegiatan yang dilakukan

berdasarkan kaidah dan metode ilmiah secara

sistematis untuk memperoleh informasi, data, dan

keterangan dar i sub jek terka i t , dengan

pemahaman teori dan pembuktian asumsi

dan/atau hipotesis. Hasil yang diperoleh

merupakan simpulan yang dapat diaplikasikan

atau menjadi tambahan pengetahuan bagi

kemajuan ilmu pengetahuan. Walaupun demikian,

kegiatan penelitian harus tetap menghormati hak

dan martabat subjek penelitian.Penelitian meliputi

penelitian biomedik, epidemiologi, sosial, serta

perilaku. Sebagian penelitian dapat dilakukan

secara invitro, memakai model matematik, atau

simulasi komputer. Jika hasil penelitian akan

dimanfaatkan untuk manusia, diperlukan

penelitian lanjutan dengan menggunakan bahan

hidup (invivo) seperti galur sel dan biakan jaringan.

Walaupun demik ian , un tuk mengamat i ,

mempelajari, dan menyimpulkan seluruh kejadian

pada mahluk hidup secara utuh diperlukan hewan

percobaan karena hewan percobaan mempunyai

nilai pada setiap bagian tubuh dan terdapat

interaksi antara bagian tubuh tersebut. Sampai

saat ini beberapa peneliti masih melakukan

penel i t ian dengan memanfaatkan hewan

percobaan, namun masih ada kekurangan dalam

penanganan dan perawatan hewan percobaan

tersebut sebagaimana layaknya diatur dalam etika

pemanfaatan hewan percobaan atau yang disebut

dengan IACUC.

Inst i tut ional Animal Care and Use

Committee (IACUC) atau dalam bahasa Indonesia

KPKPHP (Komisi Pengawasan Kesejahteraan

dan Penggunaan Hewan Penelitian) merupakan

suatu komite independen yang bertugas

mengawasi protokol, program, fasilitas dan

kegiatan penel i t ian d i inst i tus i - inst i tus i .

Kesejahteraan hewan dan etik penelitian hewan di

laboratorium mempunyai 3 prinsip yaitu replace,

reduce dan refine. Prinsip percobaan bisa dimulai

dengan hal yang tidak memakai hewan sama

sekali yaitu melalui simulasi komputer, setelah itu

kultur jaringan dan yang terakhir dilakukan

menggunakan hewan percobaan. Jika akan

di lakukan pi l ihan terakhir ini diharapkan

menggunakan hewan percobaan dari ordo yang

paling rendah merasakan sakit.Peneliti harus

membuat dan menyesuaikan protokol dengan

standar yang berlaku secara ilmiah.

Etik penelitian secara umum tercantum

Peran IACUC dalam Penggunaan Hewan Laboratorium

guna Penelitian dan Pengembangan Diagnostikoleh : Dr. drh. Rismayani Saridewi


dalam World Medical Association (WMA 2008),

yaitu: a) respect (menghormati hak dan martabat

makhluk hidup, kebebasan memil ih dan

berkeinginan, serta bertanggung jawab terhadap

dirinya, termasuk di dalamnya hewan coba); b)

beneficiary (bermanfaat bagi manusia dan

makhluk lain, manfaat yang didapatkan harus lebih

besar d ibandingkan dengan r is iko yang

diter ima);c) just ice (bersikap adi l dalam

memanfaatkan hewan percobaan). Contoh sikap

tidak adil, antara lain: hewan disuntik/dibedah

berulang untuk menghemat jumlah hewan,

memakai obat euthanasia yang menimbulkan rasa

nyeri karena harga yang lebih murah.

Hewan percobaan yang digunakan pada

penelitian akan mengalami penderitaan yaitu:

ketidaknyamanan, ketidaksenangan, kesusahan,

rasa nyeri, dan terkadang berakhir dengan

kematian. Berdasarkan hal tersebut, hewan yang

dikobankan dalam penelitian yang hasilnya dapat

dimanfaatkan oleh manusia patut dihormati,

mendapat perlakuan yang manusiawi, dipelihara

dengan baik, dan diusahakan agar dapat

disesuaikan pola kehidupannya seperti di alam.

Peneliti yang akan memanfaatkan hewan

percobaan pada penelitian harus mengkaji

kelayakan dan alasan pemanfaatan hewan

dengan mempertimbangkan penderitaan yang

akan dialami oleh hewan percobaan dan manfaat

yang akan diperoleh untuk manusia. Penggunaan

hewan percobaan untuk penelitian diperlukan

pengetahuan yang cukup mengenai berbagai

aspek tentang sarana biologis dalam hal

penggunaan hewan percobaan laboratorium.

Pengelolaan hewan percobaan diawali dengan

pengadaan hewan, meliputi pemilihan dan seleksi

jenis hewan yang cocok terhadap materi

penelitian. Pengelolaan dilanjutkan dengan

perawatan dan pemeliharaan hewan selama

penelitian berlangsung, pengumpulan data,

sampai akhirnya dilakukan terminasi hewan

percobaan dalam penel i t ian (Smith dan

Mangkoewidjojo 1988; CIOMS 1985).

Hewan kecil memiliki berbagai karakteristik

tertentu yang relatif serupa dengan manusia,

sementara hewan lainnya mempunyai kesamaan

dengan aspek fisiologis metabolis manusia. Saat

ini, beberapa strain tikus digunakan dalam

penelitian di laboratorium hewan coba di

Indonesia, antara la in : Wistar (asalnya

dikembangkan di Institut Wistar), yang turunannya

dapat diperoleh di Pusat Teknologi Dasar

Kesehatan dan Pusat Teknologi Terapan

Kesehatan dan Epidemiologi Klinik Badan

Litbangkes dan Sprague-Dawley (tikus albino

yang dihasilkan di tanah pertanian Sprague-

Dawley), yang dapat diperoleh di laboratorium

Badan Pengawasan Obat dan Makanan dan Pusat

Teknologi Dasar Kesehatan Badan Litbangkes

(Marice dan Raflizar 2010). Tikus putih juga sering

digunakan dalam menilai mutu protein, toksisitas,

karsinogenik, dan kandungan pestisida dari suatu

produk bahan pangan hasil pertanian (Herlinda

1986).

Ilmuwan penelitian kesehatan yang

menggunakan model hewan menyepakati bahwa

hewan coba yang menderita dan mati untuk

k e p e n t i n g a n m a n u s i a p e r l u d i j a m i n

kesejahteraannya dan diperlakukan secara

manusiawi (KNEPK 2006). Dalam penelitian

kesehatan yang memanfaatkan hewan coba, juga

harus diterapkan prinsip 3 R dalam protokol

penelitian, yaitu: replacement, reduction, dan

refinement (Ball et al. 1995; Russell dan Burch

1959) . Rep lacemen t ada lah keper luan

memanfaatkan hewan percobaan sudah

diperhitungkan secara seksama, baik dari

pengalaman terdahulu maupun literatur untuk

menjawab pertanyaan penelitian dan tidak dapat

digantikan oleh mahluk hidup lain seperti sel atau

biakan jaringan. Replacement terbagi menjadi dua

bagian, yaitu: relatif (mengganti hewan percobaan

dengan memakai organ/jaringan hewan dari

rumah potong, hewan dari ordo lebih rendah) dan

absolut (mengganti hewan percobaan dengan


kultur sel, jaringan, atau program komputer).

Reduction diartikan sebagai pemanfaatan hewan

dalam penelitian seminimal mungkin, tetapi tetap

mendapatkan hasil yang optimal. Jumlah minimal

biasa dihitung menggunakan rumus Frederer yaitu

(n-1) (t-1) >15, dengan n adalah jumlah hewan

yang diperlukan dan t adalah jumlah kelompok

perlakuan. Kelemahan dari rumus ini adalah

semakin sedikit kelompok penelitian, semakin

banyak jumlah hewan yang diperlukan, serta

sebaliknya. Untuk mengatasinya, diperlukan

penggunaan desain statistik yang tepat agar

didapatkan hasil penelitian yang sahih (Shaw et al.

2002). Refinement adalah memperlakukan hewan

percobaan secara manusiawi (humane) ,

memelihara hewan dengan baik, tidak menyakiti

hewan, serta meminimalisasi perlakuan yang

menyakitkan sehingga menjamin kesejahteraan

hewan coba sampai akhir penelitian.

Pada dasarnya prinsip refinement berarti

membebaskan hewan coba dari beberapa kondisi

(Bousfield dan Brown 2010). Yang pertama adalah

bebas dari rasa lapar dan haus, dengan

memberikan akses makanan dan air minum yang

sesuai dengan jumlah yang memadai baik jumlah

dan komposisi nutrisi untuk kesehatannya.

Makanan dan air minum memadai dari kualitas,

dibuktikan melalui analisa proximate makanan,

analisis mutu air minum, dan uji kontaminasi

secara berkala. Analisis pakan hewan untuk

mendapatkan komposisi pakan, menggunakan

metode standar (Horwitz 2000). Kedua, hewan

percobaan bebas dari ketidaknyamanan,

disediakan lingkunganbersih dan paling sesuai

dengan biologi hewan percobaan yang dipilih,

dengan perhatian terhadap siklus cahaya, suhu,

kelembaban lingkungan, dan fasilitas fisik seperti

ukuran kandang untuk kebebasan bergerak,

kebiasaan hewan untuk mengelompok atau

menyendiri. Berikutnya, hewan coba harus bebas

dari nyeri dan penyakit dengan menjalankan

p rog ram keseha tan , pencegahan , dan

pemantauan, serta pengobatan tehadap hewan

percobaan jika diperlukan. Penyakit dapat diobati

dengan catatan tidak mengganggu penelitian yang

sedang dijalankan. Bebas dari nyeri diusahakan

dengan memilih prosedur yang meminimalisasi

nyeri saat melakukan tindakan invasif, yaitu

d e n g a n m e n g g u n a k a n a n a l g e s i k d a n

anesthesiketika diperlukan. Euthanasi dilakukan

dengan metode yang manusiawi oleh orang yang

terlatih untuk meminimalisasi atau bahkan

meniadakan penderitaan hewan coba (Fitzpatrick

2003). Hewan juga harus bebas dari ketakutan

dan stress jangka panjang, dengan menciptakan

lingkungan yang dapat mencegah stress, misalnya

memberikan masa adaptasi/aklimatisasi dan

memberikan latihan prosedur penelitian untuk

hewan.

Semua prosedur dilakukan oleh tenaga

yang kompeten, terlatih, dan berpengalaman

da lam merawat /memper lakukan hewan

percobaan untuk meminimalisasi stres. Hewan

diperbolehkan mengekspresikan tingkah laku

alami dengan memberikan ruang dan fasilitas

yang sesuai dengan kehidupan biologi dan tingkah

laku spesies hewan percobaan (ILARCLS 2010).

Hal tersebut dilakukan dengan memberikan

sarana untuk kontak sosial (bagi spesies yang

bersifat sosial), termasuk kontak sosial dengan

peneliti; menempatkan hewan dalam kandang

secara individual, berpasangan atau berkelompok;


memberikan kesempatan dan kbebasan untuk

berlari dan bermain.

Referensi

Ball M, Goldberg AM, Fentem JH, Broadhead CL,

Burch RL, Festing MF. 1995. The three rs: the way

forward, the report and recommendation of

ECVAM (The European Center for the Validation of

Alternative Methods). Altern Lab Anim. 23(6):836-

66.

Bousfield B, Brown R. 2010. Animal Welfare.

Veterinary Bulletin, Agriculture, Fisheries

and Conservation Department Newsletter.

1(4):1-12.

[CIOMS] Council for International Organization of

Medical Sciences.1985. International

guiding principles for biomedical research

involving animals council for international

organization of medical sciences.

Fitzpatrick A. 2003. Ethics and animal research. J

Lab Clin Med.41:89-90.

Herlinda Y. 1986. Hewan percobaan tikus albino

stra in wistar d i uni t penel i t ian giz i

Diponegoro. Majalah Kedokteran Indonesia.

36(11):491-495.

Horwitz W. 2000. Official Methods of Analysis

AOAC International. 17th edition. Maryland:

Association of Official Analytical Chemists.

[ ILARCLS] Insitute of Laboratory Animal

Resources Commission on Life Sciences.

2010. Guide for the care and use of

laboratory animals.National academy of

science USA, National Research Council.

[KNEPK] Komisi Nasional Etik Penelit ian

Kesehatan. 2006.Pedoman Nasional Etik

Penelitian Kesehatan Suplemen II. Jakarta

(ID): Depkes Pr.

Marice S, Raflizar. 2010. Status gizi dan fungsi hati

mencit galur CBS (swiss) dan tikus putih

galur wistar di laborator ium hewan

percobaan puslitbang biomedis dan farmasi.

Media Litbang Kesehatan. 20(1): 33-40.

Russell WMS, Burch RL. 1959. The Principles of

Humane Experimental Technique. London

(UK): Methuen Pr.

Shaw R, Festing MFW, Peers I, Furlong L. 2002.

The use of factorial designs to optimize

animal experiments and reduce animal use.

ILAR J. 43:223-32.

Smith JB, Mangkoewidjojo S. 1988. Pemeliharaan,

Pembiakan, dan Penggunaan Hewan

Percobaan di Daerah Tropis. Jakarta (ID): UI

Pr.

[WMA] World Medical Association. 2008.

Declaration of helsinki: recommendation

guiding physicians in biomedical research

involving human subject; 1964 Jun; Helsinki,

Finland. Amended by 59th WMA, General

Assembly, Seoul.


1. Isolasi DNA

Dapat menggunakan metode ekstraksi phenol-chloroform ( kelemahan : tahapan lebih panjang, lebih

lama, toxic) atau menggunakan berbagai kit komersial yang tersedia(Misalnya: QiaAmp DNA Mini Kit

(50)(Qiagen, Cat#51304).

2. Amplifikasi PCR gen 16S rRNA (16S rDNA) atau daerah ITS rDNA

Dapat menggunakan berbagai jenis thermostable DNA polymerase yang tersedia. (Seperti : Hotstar Taq

Plus Master Mix Kit (250) Catalog No. 203643)

3. Purifikasi hasil amplifikasi 16S rDNA atau daerah ITS rDNA bertujuan untuk menghilangkan sisa-sisa

primer dan nukleotida bebas (free nucleotides)

Dapat menggunakan berbagai kit komersial yang tersedia (Misalnya : Qiaquick PCR Purification Kit (50)

(Qiagen, Cat#28104)

4. Reaksi Cycle sequencing

Dapat menggunakan berbagai kit komersial yang tersedia akan tetapi harus diseleksi tergantung tipe

sequencer yang digunakan (Misalnya : BigDye Terminator v3.1 Cycle SequencingKit (Applied Biosystems))

5. Purifikasi produk reaksi cycle sequencing bertujuan untuk menghilangkan sisa-sisa fluorescent dye-

terminators

Dapat menggunakan metode Ethanol Precipitation atau menggunakan berbagai Kit komersial yang tersedia.

6. Sequencing menggunakan automated DNA sequencer

Menggunakan ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Amersham Biosciences)

7. Analisis Sequence 16S rDNA atau daerah ITS rDNA yang diperoleh

Mencari homologi menggunakan program BLAST.

Disarikan dari :

Wellyzar Sjamsuridzal, Workshop on Molecular identification of Microorganisms, CoE IBR-GS FMIPA UI, Depok,

15-16 April 2014

TAHAPAN IDENTIFIKASI MOLEKULER BAKTERI ATAU FUNGI

BERDASARKAN SEQUENCING 16S rDNA ATAU DAERAH ITS rDNA

Oleh : drh.Kanti Puji Rahayu


Liquid Drying adalah awalnya metode yang

dikembangkan oleh Institute for Fermentation Osaka

(IFO). Suspensi sel yang dikeringkan tanpa

pembekuan, hal ini untuk menghindari kerusakan yang

diakibatkan dari pembekuan tersebut. Berlaku secara

luas, terutama berlaku untuk beberapa bakteri Gram-

negatif dan ragi yang sensitif untuk freeze-drying.

Media khusus telah dikembangkan untuk masing-

masing membran-yang rusak dan organisme DNA-

yang terluka.

Kelebihan metode ini antara lain :

Peralatan yang dibutuhkan sederhana, tanpa

freezer.Antara lain: mesin konstriksi ampul

(Gambar 1), freeze- dryer (Gambar 2), kumparan

Tesla (Gambar 3).

Lebih sedikit stres/tekanan pada sel karena tidak

terjadi pembekuan.

Dapat digunakan untuk organisme yang lebih

sensitif, misalnya bakteri laut

Pemeliharaanjangka panjangmikroorganisme

(bakteri dan jamur)

Dengan metode Liquid Drying


Oleh : drh.Oli Susanti

Prinsip kerja :

1. Pre-culturing, kultur berusia akhir lockfase

dimanamikroorganisme sudah tahan kondisi

ekstrim.

2. Pembuatan suspensisel di dalam medium

protektif

3. Penuangan suspensi sel ke dalam tabung

ampul

4. Konstriksi tabung ampul

5. Pengeringan diterapkan selama 2 jam,

6. Penyegelan ampul,

7. Estimasi kelangsungan hidup dengan uji

penyimpanan yang dipercepat, accelerated

storage test

8. Penyimpanan

9. Penghidupan kembali (reviving)

Media.

Protokol untuk mempersiapkan tabung ampul L-

Drying :

1. Persiapan tabung ampul

- Tabung ampul diberi sumbat kapas,

o

kemudian disterilkan pada 150 C selama

3 jam.

2. Persiapan suspensi spora

- Tuangkan 5 ml medium protektif (SM1

untuk bakteri, SM12 untuk fungi) ke

dalam tabung agar miring

Media ProtektifSM1 untuk bakteriSM12

untuk fungiSodium L(+)-glutamate

Monohydrate3 grSodium L(+)-g lutamate

monohydrate 3 grRibitol1,5 gr0,1 M potassium

phosphate buffer (pH 7,0) 100 mlL-cystein

h y d r o c l o r i d e M o n o h y d r a t e 0 , 0 5 g r

0,1 M potassium phosphate

buffer (pH 7,0)100 ml

- Kerik koloni menggunakan jarum ose

steril sehingga terbentuk suspensi

spora/sel.

- Pindahkan suspensi/sel ke dalam tabung

2,5 ml ( atau tabung sentrifus 15 ml)

3. Pengisian tabung ampul

- Setiap tabung ampul diisi dengan 0,2 ml

suspensi spora/sel.

4. Pemotongan sumbat kapas

- Sumbat kapas dipotong dan didorong ke

bagian bawah tabung ampul.

5. Konstriksi tabung ampul

-Tabung ampu l d i kon t r i k s i un tuk

membentuk bagian kapi ler pendek

(berdiameter 4 mm) di bagian tengah

dengan mesin kontriksi gelas ampul (Iwata

glass, Osaka, japan)

6. Pengeringan (Drying)

-Tabung ampul yang telah dikontriksi

dimasukkan kedalam manifold alat

vaccum freeze dryer. Suspensi spora/sel

akan langsung dikeringkan dari fase cair.

Pengeringan akan selesai dalam waktu

sekitar 2 jam. Vakum di dalam tabung

ampul yang telah kering harus lebih

rendah dari 0,1 Torr (tekanan udara=760


Torr= 760 mm Hg)

7. Penyegelan tabung ampul (sealing)

- Tabung ampul disegel dalam kondisi

v a k u m d i b a g i a n t a b u n g y a n g

dikonstriksi dengan burner.

8. Uji kevakuman (test for vaccum)

- Kevakuman di dalam gelas ampul

diperiksa dengan alat Tesla coil (Tozai

Tsusho, Tokyo, Japan). Kevakuman

yang memuaskan dikonfirmasi dengan

kemunculan pendar cahaya berwarna

biru pucat hingga violet di dalam tabung

ampul.

9. Penghidupan kembali (reviving)

- Potongtabung ampul di bagian tengah

yang terdapat sumbat kapas dengan

menggunakan alat pemotong ampul.

Tambahkan larutan re-hidrasi (0,2 ml)

dengan pipet pasteur steril, lalu dipipet

dengan baik setelah beberapa menit

didiamkan. Transfer suspensi spora ke

dalam medium pertumbuhan (cair, agar

miring, dan/atau cawan petri berisi agar).

Uji Penyimpanan yang dipercepat (Accelerated

storage test)

Viabilitas setelah preservasi jangka

o

panjang (selama 20 tahun pada 5 C) dapat

diprediksi dengan melakukan uji penyimpanan

o

yang dipercepat : 4 minggu pada 37 C untuk

o

kapang dan khamir, 2 minggu pada 37 C untuk

bak te r i . Tabung ampu l L -d r y i ng , yang

3

m e n g a n d u n g 1 0 C F U / a m p u l p a d a u j i

penyimpanan yang dipercepat, dapat dipreservasi

hingga 20 tahun.

Cara membuka ampul dan menghidupkan kembali

spesimen L-Dried

1. Siapkan larutan rehidrasi dan medium

pertumbuhan yang direkomendasikan

2. Gores ampul pada bagian tengah sumbat

kapas dengan ampul cutter

3. Disinfeksi ampul dengan kassa/tissu

tebal yang dibasahi alkohol

4. Bungkus ampul dengan kain kassa/tissu

tebal dan pecahkan dengan hati-hati

(jangan gunakan kain yang dibasahi

alkohol)

5. Segera tambahkan 0,2 ml larutan

rehidrasi ke dalam sel-sel L-dried dengan

transfer pipet steril

6. Campur dengan baik dan transfer

s u s p e n s i s e l k e d a l a m m e d i u m

pertumbuhan (cair, agar pada tabung

miring, agar pada cawan petri)

7. Inkubasi pada kondisi spesifik untuk sel-

sel tersebut. Beberapa sel membutuhkan

waktu periode yang lebih lama sebelum

tumbuh . Pada kond is i demik ian ,

perpanjang inkubasi sampai 2 minggu

pada suhu yang sesuai

8. Seluruh sisa yang terdapat di dalam

ampul segera diautoklaf sebelum dibuang

9. Jika spesimen dalam ampul tidak ingin

segera dibuka setelah diterima, ampul

dapat disimpan di refrigerator.

Pustaka :

Akira Yokota dan Wellyzar Sjamsuridzal,

Workshop on Preservation of Microorganisms

(L-Drying), CoE IBR-GS FMIPA UI, Kampus UI

Depok, 17 April 2014


West nile merupakan salah satu penyakit yang

diakibatkan oleh virus serta pertama kali

ditemukan pada manusia di daerah West Nile,

Uganda. Penyakit ini kemudian secara cepat

menyebar ke negara-negara Eropa, Amerika

dan Asia. Pada pertengahan tahun 1990an,

penyakit ini hanya terjadi secara sporadic dan

masih menimbulkan resiko yang kecil pada

manusia, sampai terjadinya wabah di Aljazair

pada tahun 1994 dengan penyakit west nile

yang menyebabkan encephalitis. Sedangkan

wabah besar yang terjadi di Rumania pada

tahun 1996, sebagian besar dalam bentuk

neuroinvasif. Virus ini pertama kali diisolasi

pada saat terjadi wabah encephalitis pada

manusia, kuda, burung liar dan burung

peliharaan di kota New York, Amerika Serikat

(Senne et al. 2000). Penyakit ini juga telah

dilaporkan telah membunuh 286 orang di

Amerika Serikat pada tahun 2012.

WEST NILE VIRUSdrh. Eko Susanto, MSi

Gambar 1 West Nile virus yang dilihat dengan

mikroskop electron

West nile disebabkan oleh virus west

nile yang termasuk keluarga Flaviridae dan

genus Flavivirus. Virus ini merupakan virus

RNA single stranded dengan ukuran 40-60

nm, beramplop dan mempunyai simetri

iksohedral (Petersen dan Martin 2002).

Burung liar dan burung yang dipelihara sangat


rentan jika dibandingkan dengan unggas

lainnya seperti ayam, kalkun dan itik. Ayam

buras, yang dipelihara secara ekstensif,

berpeluang terinfeksi virus West Nile.

Gambar 2 Siklus hidup Virus West Nile (CDC

2005)

Pada kuda, infeksi West Nile dapat

menimbulkan gejala klinis berupa gangguan

syaraf (Abutarbush et al. 2004). Manusia,

kuda dan mamalia lainnya merupakan induk

semang akhir (dead-end). Virus ini dapat

menyerang burung/unggas, anjing, kucing,

kuda, dan mamalia lain seperti kelelawar,

kelinci, Lamma, bajing, skunks, chipmunks.

Penemuan Turell et al. (2000) menduga

bahwa pada ayam, saat terjadi puncak

viremia, dapat menginfeksi nyamuk tersebut

dan bertindak sebagai amplifier bagi West

Nile.

Virus West Nile pada manusia akan

menyebar ke kelenjar getah bening dan ke

peredaran darah. Penetrasi virus ke dalam

sistem saraf pusat mengikuti stimulasi

reseptor toll-like dan peningkatan kadar tumor

necrosis factor-, yang meningkatkan

permeabilitas blood-brain barrier. Virus West

Nile langsung menginfeksi neuron, terutama di

bagian inti dan materi abu-abu otak, batang

otak, dan sumsum tu lang belakang.

Kerusakan sel saraf dapat menyebabkan

kelumpuhan. Kerusakan jaringan sistem imun

juga dapat menyebabkan perubahan

patologis dalam beberapa kasus.

Penularan langsung dari manusia ke

manusia disebabkan oleh akibat kontak

dengan darah yang terinfeksi, melalui

t ransfusi darah, organ transplantasi ,

intrauterin, dan akibat menyusui. Sejak tahun

2003, bank darah di Amerika Serikat secara

rutin menguji virus West Nile terhadap para

pendonor. Penularan vertikal pada nyamuk

terjadi dari betina ke anaknya (Montgomery et

al. 2005). Burung yang terinfeksi berinteraksi

d e n g a n v e k t o r n y a m u k a g a r d a p a t

menularkan ke hewan lain dan manusia.

Kontak langsung antara unggas yang diinfeksi

virus West Nile tidak terjadi. Hal ini terlihat dari

tidak ditemukannya antibodi dan virus pada

tubuh ayam tersebut (Senne et al. 2000).

Di Indonesia, baik kasus klinis maupun

data serologis tentang infeksi West Nile belum

pernah diteliti dan dilaporkan. Meskipun kasus

encephalitis dan meningitis pada manusia

telah banyak ditemukan di rumah sakit-rumah

sakit di Indonesia (Gautama 2005). Begitu

gencarnya pemberitaan kasus West Nile pada

manusia di negara lain, dan frekuensi

perpindahan hewan dan manusia dari satu

negara ke negara lain sangat tinggi, sehingga

tidak menutup kemungkinan masuknya

penyakit-penyakit eksotik dan zoonosis ke

Indonesia.

a. Gejala Klinis pada Hewan

Virus West Nile telah dilaporkan

menyerang lebih dari 150 spesies burung di

Amerika Utara (CDC 2011). Burung biasanya

tidak menunjukkan tanda-tanda infeksi

sampai tahap terakhir penyakit yaitu

ensefalitis (radang otak) dan miokarditis. Virus

West Nile pada kuda sangat berbahaya jika

virus menginfeksi otak.

b. Gejala Klinis pada Manusia

Penyakit West Nile ini biasanya terjadi

pada musim hangat saat nyamuk aktif di


l ingkungan. Infeksi di manusia jarang

menunjukkan tanda klinis, hanya sekitar 20%

menunjukkan gejala demam West Nile dan 1%

neuroinvasif , dimana neuroinvasif ini

kemungkinan lebih sering terjadi pada

penderita lanjut usia diatas 50 tahun dan

penderita imunocompresi. Case Fatality Rate

(CFR) yang dilaporkan selama wabah di

Amerika Serikat bervariasi antara 4% - 15%

(CFSPH 2009). Tiga sindrom yang sering

terlihat yaitu ensefalitis, meningitis, dan acute

flaccid paralysis. Meningitis ditandai dengan

demam, sakit kepala atau leher, kaku dan

fotofobia. Sedangkan pasien dengan West

Nile ensefalitis memiliki perubahan dalam

kesadaran, disorientasi maupun ataksia,

inkoordinasi, tremor dan tanda-tanda yang

menyerupai penyakit Parkinson. Pasien

penderita tidak mentransmisikan penularan ke

orang lain melalui kontak, namun West Nile

virus dapat ditransmisikan melalui transfusi

darah dan transplantasi organ dari orang yang

tidak menunjukkan tanda klinis (CFSPH

2009).

Pencegahan infeksi ini dengan cara

mengurang kontak dengan nyamuk yang

terinfeksi, dan melakukan vaksinasi. Karena

penyakit West Nile berbahaya bagi manusia,

maka vaksinasi pada hewan terutama pada

kuda dapat dilakukan. Pembasmian sarang

nyamuk di rumah dengan menjaga kebersihan

l i n g k u n g a n i k u t b e r p e r a n d a l a m

mengeliminasi media perkembangbiakan

nyamuk. Selain pemberian abate sebagai

la rvas ida pada a i r yang te rgenang,

penggunaan larvasida biologis dapat

digunakan seperti Bacillus thuringiensis var.

israelensis dan Bacillus sphaericus (Petersen

and Martin 2002).

DAFTAR PUSTAKA

[CDC] Centers for Disease Control and

Prevention. 2011. West Nile Infection

[internet]. [diunduh 2013 Oktober 3].

T e r s e d i a d a r i :

http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/west

nile/qa/symptoms.htm.

[CFSPH] The Center For Food Security and

Public Health, 2009. West Nile Virus

Infection [internet]. [diunduh 2013

Oktober 3]. Tersedia dari: Iowa State

U n i v e r s i t y .

http://www.cfsph.iastate.edu/Factshee

ts/pdfs/west_nile_fever.pdf.

Montgomery SP, Chow CC, Smith SW, Marfin

AA, O'Leary DR, Campbell GL 2005.

Rhabdomyolysis in patients with West

Nile encephalitis and meningitis. Vector

Borne Zoonotic Dis. 5 (3): 252257.

Petersen LR and Martin AA. 2002. West Nile

virus: A primer for the clinician. Annual

of Internal Medicine 137 (3): 173-179.

Senne DA, Pedersen JC, Hutto DL, Taylor WD,

Schmitt BJ, Panigrahy B. 2000.

Pathogenicity of West Nile virus in

Chickens. Avian Diseases. 44: 642-

649.

Turell MJ, Sardelis MR, Dohm DJ, O'Guinn,

ML. 2000. Potential for North American

Mosquitoes to transmit West Nile Virus.

Am J of Tropical Medicine and Hygiene.

62: 413-414.


buletin 2

Documents