bab 5

5/20/2018 bab 5

1/15

PERCOBAAN V

UJI KANDUNGAN KIMIA EKSTRAK

1.

Tujuan percobaan

Setelah mengikuti percobaan ini diharapkan mahasiswa dapat :- Mengetahui prinsip dasar uji kandungan kimia ekstrak

- Melakukan identifikasi kandungan kimia dalam suatu ekstrak bahan alam

2.

Teori singkat

Uji pendahuluan terhadap komponen kimia bahan alam bertujuan untuk

mempermudah dalam pengerjaan isolasi. Uji pendahuluan dilakukan terhadap bahan

alam yang baru diambil dari alam dengan menggunakan pereaksi kimia yang sesuai.

Senyawa kimia yang berkhasiat sebagai obat yang terdapat dalam bahan alam.

3.

Prosedur kerja

3.1

pemeriksaan kandungan kimia alkaloid1. pemeriksaan kandungan kimia alkaloid menurut CULVONER dan

FITZEGERALDO

kurang lebih 2-4 gram bagian tanaman segar dipotong-potong kecil, kemudian

digerus bersama pasir putih, lalu di tambahkan 5 ml campuran NH4OH dan CHCl3,

dikocok selama 15 menit, lalu disaring kedalam tabung reaksi 10ml. tambahkan

10 tetes H2SO4 2 N, kemudian dikocok, lapisan air dan lapisan kloroform

dipisahkan. Lapisan air di uji dengan pereaksi meyer, bila terbentuk endapan

berarti positif adanya alkaloid dalam simplisia.

2.

Cara lain pemeriksaan kandungan kimia alkaloidPembuatan larutan percobaan :

Ekstrak yang setara dengan 20 gram bahan, panaskan diatas penangas air sampai

sekental sirup, dinginkan, tambah 10 ml HCl 2 N dan panaskan lagi selama 2-3

menit. Setelah dingin tambahkan 0,5 gram NaCl untuk mengendapkan protein-

proteinnya, saring kemudian filtrate ditambahkan HCl 2 N sampai 10 ml. bagi

menjadi 4 bagian dan masukkan ke dalam tabung reaksi.

a.

Reaksi pengendapan

Tabung reaksi yang berisi larutan percobaan diatas ditambahkan pereaksi

meyer, apabila terjadi kekeruhan atau pengendapan berarti positif terdapatalkaloid.

Selanjutnya tabung yang lain ditambah NH4OH 28% sampai alkalis lalu

ekstraksi dengan 10 ml kloroform. Fase kloroform ditambah NA2SO4

eksikatus kemudian saring. Filtrate diuapkan sampai kering untuk percobaan.

b.

Kromatografi Lapis Tipis

5/20/2018 bab 5

2/15

Ekstrak kloroform yang telah diperoleh, dilakukan kromatografi lapis tipis

dengan eluen etil asetat : metanol : air (1000 : 65 : 135). Penampak noda

digunakan pereaksi dragendorf. Apabila terbentuk noda orange, berarti

positif adanya alkaloid.

c.

Menentukan adanya alkaloid (kwartener, amino oksida)Fase air ditambah HCl 2 N sampai netral, kemudian berturut-turut ditambah

pereaksi mayer dan pereaksi wagne, bila terjadi kekeruhan atau endapan

maka positif adanya alkaloid.

3.2

Pemeriksaan kandungan kimia triterpen/steroid dan saponin

Uji ini dilakukan dengan menggunakan metode SIMES, dkk yaitu kira-kira 2-4 gram

daun dipotong-potong kecil dan digerus bersama etanol, campuran tersebut

dididihkan (dipanaskan) selama 15 menit. Lalu disaring panas, filtrate diuapkan

sampai kering. Ekstrak kering ditambahkan eter, setelah terlebih dahulu

disuspensikan dengan sedikit air, bagian yang dalam eter dipisahkan sedangkanabgian yang sudah larut ditambahkan lagi sedikit air, perhatikan terjadinya busa

yang stabil selama 30 menit, ditambahkan reagen Libermann-Bouchardad, bila

timbul warna merah atau merah jambu menunjukkan adanya triterpen atau steroid.

3.3

Pemeriksaan kandungan kimia glikosida saponin

1.

Percobaan pendahuluan

a. Tes buih

- Ekstrak X setara dengan 2 gram bahan di tambah 10 ml aquades, kocok

kuat-kuat.

- Perlakuan kontrol, 1 gram senegae Radix ditambah 10 ml aquadest,

kocok kuat-kuat.

- Untuk blanko, 10 ml aquades ditambah sedikit alcohol 80%, kocok reaksi

positif bila terjadi buih 3 cm diatas permukaan cairan, bedakan

perlakuan kontrol dan perlakuan blanko.

b.

Tes hemolisis darah

Ekstrak X setara dengan 2 gram bahan ditambah 10 ml aquadest dalam

tabung reaksi, tambahkan beberapa tetes darah yang telah difebrinasikan,

demikian pula pada kontrol dan blanko seperti pada A, amati secara visual

dan mikroskopik.

2. Reaksi Warna

a. pembuatan larutan percobaan

Ekstrak X setara dengan 10 gram bahan diuapkan diatas penangas

air sampai kering. Setelah dingin kocok dengan 10 ml Heksana/Petrolium eter,

decanter filtrat dibuang. Ulangi sampai heksana/petroleum eter tidak

berwarna lagi. Residu ditambah 10 mlkloroform, kocok selama 5 menit.

5/20/2018 bab 5

3/15

Decanter tabung reaksi yang berisi 100 ml NA2SO4 anhidrat selanjutnya

disaring. Filtrat dibagi 4 bagian (A,B,C).

b. Tes Libermann-Buchard (Untuk steroida tak jenuh dan triterpen)

- Filtrat A sebagai blanko

- Filtrat B ditambahkan 3 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes H2SO4pekat,kocok pelan-pelan lalu amati terjadinya perubahan warna, bedakan dengan

blanko.

- Perubahan Warna:

Hijau/Biru untuk saponin steroida

Mearh/violet untuk saponin jenuh

c.Tes Filtrat Salkowski (untuk steroida tak jenuh)


- Filtrat B ditambahkan 1-2 ml asam sulfat pekat melalui dinding-dinding

tabung reaksi. Reaksi positif apabila terbentuk warna merah pada faseasam (air).

3. Kromatografi Lapis Tipis (untuk saponin)

Ekstrak X setara dengan 10 gram bahan, tambah 2 ml HCl 1 N refluks diatas

penangas air selama 2-6 jam untuk menghidrolisa saponin, setelah dingin

dinetralkan denagn ammonia, uapkan diatas penangas air sampai kental dan

tambahkan 3 ml heksan dan kocok. Decanter ekstraksi dengan heksan 2 kali.

Kumpul heksan dan uapkan, residu ditambahkan 5 tetes kloroform. Totolkan

pada TLC dengan fase gerak heksan : aseton (4:1) dengan penampak noda

Antimon (III) Chlorida dalam asam asetat.

Adanya saponin dapat ditunjukkan denag warna noda merah muda sampai

violet.

Fase gerak yang lain yang dapat digunakan antara lain :

- Kloroform : karbon tetraklorida : asam asetat (2:2:1)

- Kloroform : aseton (4:1)

- Kloroform : etil asetat (1:1)

3.4

Pemeriksaan kandungan kimia glikosida jantung

1.

Reaksi warna

a.

Tes keller keliani

Ekstrak X setara dengan 10 gram bahan diuapkan diatas penangas air sampai

kering, ekstraksi berulang-ulang sampai heksan tidak berwarna. Residu

diuapkan untuk menghilangkan heksannya, tamabh 3 ml FeCl3aduk dan

masukkan dalam tabung reaksi tambah HCl pekat melalui dinding tabung

reaksi, amati perubahan warna. Warna coklat kemerahan perlahan berubah

menjadi violet atau biru, menunjukkan adanya gula 2-deoksi

5/20/2018 bab 5

4/15

b.

Tes libermann-Buchard

Cara pengerjaannya sama dengan cara 2.b pada uji glikosida saponin.

2. kromatografi Lapis Tipis

Sebanyak 0,1-0,2 ml ekstrak X ditotolkan pada lempeng TLC dengan fase gerak

Kloroform : metanol (4:1) dengan menggunakan penampang noda pereaksikedde.

Positif bila terdapat noda violet pada lempeng TLC.

3.5

Pemeriksaan kandungan kimia Flavonoid (Benzopiron, Flavon, Isoflavon, Flavonol,

Anthocyanin, Leucoanthocyanin, Cathecin, halcon)

1.

Pembuatan larutan percobaan

Ekstrak X setara dengan 10 gram bahan, panaskan pada penangas air sehingga

kering. Ekstraksi berulang-ulang dengan petroleum eter/heksan sampai cairan

tidak berwarna. Residu ditambahkan 20 ml metanol 80%, saring. Filtrat dibagi 4

(A,B,C,D)2.

Reaksi warna (Leucoanthocyanin)

a. Tes base smith dan Metcalf


- Filtrat B ditambah 0,5 ml HCl pekat, amati perubahan warna dan

panaskan diatas penangas air selama 15 menit dan amati perubahan

warnanya. Positif bila terjadi perubahan warna merah terang atau

violet.

b.

Tes wilstatter (untuk flavonoid)


- Filtrat C ditambah 0,5 ml HCl pekat, tambahkan 3-4 potong magnesium.

Amati perubahan warna yang terjadi selama 10 menit. Encerkan dengan

aquadest dengan volume yang sama kemudian tambah 1 ml astil

alcolhol, amati perubahan warna yang terjadi pada tiap lapisan.

Perubahan warna :

Orange merah untuk flavon

Merah sampai merah pucat (creamson) sampai merah tua (magenta)

untuk flavon.

c.


0,1-0,2 ml ekstrak X atau filtrat D ditotolkan pada lempeng TLC dengan fase

gerak butanol : asam asetat : aquadest (4:1:5) atau asam asetat 5%. Setelah

dielusi, lempeng dikeringkan. Sebagai penampak noda dipakai sinar

ultraviolet dan pereaksi amoniak yang dibandingkan dengan warna noda dari

rutin.

Flavonoid memberi warna :

5/20/2018 bab 5

5/15

- Biru agak hijau

- Merah asmpai orange

- Kuning jelascoklat lemah sampai hijau kuning

3.6

Pemeriksaan kandungan kimia tannin dan senyawa polifenol

1.

Pembuatan larutan percobaanEkstrak X setara dengan 10 gram bahan, diuapkan diatas penangas air sampai

kering. Setelah dingin tambahkan 20 ml aquadest panas, kocok sampai homogen

lalu tambah 5 tetes NACl 10% untuk mengendapkan zat-zat lain (kotoran).

Saring, filtrat dibagi menjadi 3 bagian (A,B,C).

2.

Reaksi warna

a.

Tes gelatin

Filtrat A sebagai blanko

Filtart B ditambah larutan gelatin 1% dan NaCl 10%, amati terjadinya

endapan.b.

Tes ferri chlorida

Filtrat C ditambahkan 3 tetes larutan FeCl3, amati warna yang terbentuk.

TABEL REAKSI WARNA UNTUK TANIN & SENYAWA POLY-FENOL

No. Reaksi Pengamatan keterangan

1 FeCl3 - Tanin (-)

2 FeCl3 Hijau biru

Hijau-hitam

Tanin type catechol

3 FeCl3 Biru-hitam Tanin type pyrogallol

4 Gelati NaCl Tak terjadi pengendapan

Tapi terjadi warna hijau-biruhitam setelahFeCl3

Tanin (-)

Polyfenol (+)

3.7

Pemeriksaan kandungan kimia anthrakinon

1.

Reaksi warna

a.

Tes borntrager

Ekstrak X setara dengan 1 gram bahan diuapkan sampai kering, setelah

dingin ditambahkan 10 ml aquadest, saring, filtrate diekstraksi dengan

benzene dalam corong pisah 2 kali masing-masing 5 ml. fase benzen diambil

kemudian dibagi 2 (A,B).A sebagai blanko

B ditambahkan 5 ml ammonia kemudian kocok

Amati perubahan warna pada lapisan alkalis, positif apabila terjadi warna

merah (senyawa Anthrakinon).

b. Modifikasi borntrager test

5/20/2018 bab 5

6/15

Ekstrak X setara dengan 1 gram bahan, uapkan diatas penangas air sampai

kering. Setelah dingin ditambahkan 10 ml KOH 5 N dan 1 ml H 2SO4 encer,

panaskan diatas penangas air selama 10 menit, kemudian saring.

Filtrat ditambahkan asam asetat glasial sampai reaksi asam. Ekstraksi dengan

benzen 2 kali masing-masing 5 ml. fase benzen dikumpulkan dan dibagi 2(A,B)

- Ekstrak A sebagai blanko

- Ekstrak B ditambahkan 2-5 ml larutan ammonia, amati lapisan alkalis

(air). Positif bila terjadi warna merah (senyawa anthrakinon)

2.


0,1-0,2 ml ekstrak X ditotolkan pada lempeng TLC dengan fase gerak benzen :

Etil asetat : asam asetat (75:24:1). Penampak noda digunakan 10% KOH Metanol

positif terdapat senyawa anthrakinon, apabila ditemukan barwarna :

-

Kuning-coklat kuning- Merah

- Violet

- Hijau-violet

3.8

Pemeriksaan kandungan kimia glikosida Cyanhydrin

1.

Reaksi warna

a. Tes gurignard

2-5 gram bahan yang sudah dipotong-potong, tambahkan aquadest

secukupnya dan beberapa tes kloroform serta 1 ml dari 10% larutan emulsi

dimasukkan dalam tabung reaksi yang ditutup gabus dengan diselipi kertas

pikrat. Kertas tidak boleh menyentuh cairan. Panaskan 34-35C atau diamkan

selama 3 jam. Apabila terjadi bayang merah, maka terdapat glikosida

cyanhidrin.

3.9

Pemeriksaan kandungan kimia minyak atsiri

Kromatografi lapis tipis, 2 gram bahan diekstraksi dengan mikrodestilasi uap air.

Ekstrak yang diperoleh ditotolkan pada lempeng TLC menggunakan fase gerak

kloroform : benzen (1:1) dan penampak noda pereaksi asam phospomolybdat

kemudian dipanaskan 1050-1100C selama 5-10 menit.

Adanya minyak atsiri ditandai dengan munculnya noda biru. Fase gerak lain yang

dapat digunakan adalah benzen dan penampak noda yang lain adalah pereaksi

vanilin, asam sulfat, pereaksi anisaldehida.

5/20/2018 bab 5

7/15

4.

Hasil Pengamatan

4.1

SAMPEL KELOMPOK

LABORATORIUM FITOKIMIA

JURUSAN FARMASI

UNIVERSITAS HALUOLEO


JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :


5/20/2018 bab 5

8/15


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :


NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :



JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

5/20/2018 bab 5

9/15


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :


NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :



JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

5/20/2018 bab 5

10/15


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :


NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :



JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

5/20/2018 bab 5

11/15

4.2

SAMPEL PRIBADI


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

5/20/2018 bab 5

12/15


JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :


NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :



JURUSAN FARMASI



JURUSAN FARMASI


(6,5 X 6,5) (6,5 X 6,5)

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

NAMA EKSTRAK :

IDENTIFIKASI :

PEREAKSI :

KETERANGAN :

5/20/2018 bab 5

13/15

HASIL PENGAMATAN

SAMPEL KELOMPOK

PENGUJIAN ALKALOIDSTEROID/

TRITERPENOIDSAPONIN GLIKOSIDA SAPONIN

METODA

/PEREAKSI

CULVONER/

FITZEGERALDOMEYER WAGNER

LIBERMANN

BOUCHARDTES BUIH TES BUIH

HEMOLISIS

DARAH

REAKSI

WARNA(LIBERMAN

N b)

SAMPEL 1SAMPEL 2

SAMPEL 3

SAMPEL 4

PENGUJIANGLIKOSIDA

JANTUNGFLAVONOID POLIFENOL ANTRAKINON

GLIKOSIDA

CYANHIDRINMINYAK

ATSIRIMETODA

/PEREAKSI

REAKSI

WARNA(LIBERMANN b)

BASE

SMITHWILSTATTER TES GELATIN FeCl3 BORNTRAGER GURIGNARD

SAMPEL 1

SAMPEL 2

SAMPEL 3

SAMPEL 4

5/20/2018 bab 5

14/15

HASIL PENGAMATAN

SAMPEL PRIBADI

PENGUJIAN ALKALOIDSTEROID/

TRITERPENOIDSAPONIN GLIKOSIDA SAPONIN

METODA

/PEREAKSI

CULVONER/

FITZEGERALDOMEYER WAGNER

LIBERMANN

BOUCHARDTES BUIH TES BUIH

HEMOLISIS

DARAH

REAKSI

WARNA(LIBERMAN

N b)

SAMPEL 1

SAMPEL 2

SAMPEL 3

SAMPEL 4

PENGUJIANGLIKOSIDA

JANTUNGFLAVONOID POLIFENOL ANTRAKINON

GLIKOSIDA

CYANHIDRINMINYAK

ATSIRIMETODA

/PEREAKSI

REAKSI

WARNA(LIBERMANN b)

BASE

SMITHWILSTATTER TES GELATIN FeCl3 BORNTRAGER GURIGNARD

SAMPEL 1

SAMPEL 2

SAMPEL 3

SAMPEL 4

5/20/2018 bab 5

15/15

PEMBAHASAN

PARAF ASISTEN

MASUK 1 MASUK 2 MASUK 3 MASUK 4

Assisten 1 Assisten 2

( ) ( )

bab 5

Documents