Nefropati diabetik merupakan komplikasi utama dari diabetes dan

penyebab utama penyakit ginjal stadium akhir di AS Pigment

epitel yang diturunkan faktor (PEDF) adalah angiogenik ampuh

inhibitor yang telah dipelajari secara ekstensif dalam diabetes

retinopati. Baru-baru ini, kami melaporkan bahwa PEDF dinyatakan di

tingkat tinggi di ginjal normal dan bahwa tingkat PEDF yang

menurun pada ginjal streptozotocin (STZ) -diinduksi diabetes

tikus. Dalam penelitian ini, kami disuntikkan tikus STZ-diabetes

dengan adenovirus mengekspresikan PEDF (Ad-PEDF) untuk mengevaluasi

efeknya pada diabetes. Hasil menunjukkan bahwa peningkatan

ekspresi PEDF di ginjal dalam menanggapi Ad-PEDF

pengiriman secara signifikan berkurang mikroalbuminuria pada awal

tahap diabetes. Administrasi Ad-PEDF ditemukan

mencegah berlebih dari dua faktor fibrogenic utama,

mengubah factor pertumbuhan? (TGF -?) 1 dan jaringan ikat

faktor pertumbuhan (CTGF), dan secara signifikan mengurangi

produksi matriks ekstraselular (ECM) protein dalam

ginjal diabetes. Selain itu, PEDF diregulasi metalloproteinase-

2 ekspresi dalam ginjal diabetes, yang bertanggung jawab

untuk degradasi ECM. Dalam mesangial manusia berbudaya

sel, PEDF signifikan menghambat overekspresi

TGF-? 1 dan fibronektin yang disebabkan oleh angiotensin II. PEDF

juga memblokir produksi fibronektin yang disebabkan oleh TGF-? 1

melalui penghambatan aktivasi Smad3. Temuan ini

menunjukkan bahwa fungsi PEDF sebagai endogen anti-TGF-?

dan faktor antifibrogenic di ginjal. Sebuah terapi

potensi PEDF di nefropati diabetik didukung oleh

downregulation di diabetes; pencegahannya dari berlebih yang

dari TGF- ?, CTGF, dan protein ECM di diabetes

ginjal; dan perbaikan yang proteinuria pada tikus diabetes

Berikut injeksi Ad-PEDF. Diabetes 55: 1678-1685 2006

Salah satu komplikasi utama dari diabetes adalah diabetes

nefropati, yang terjadi pada 30-40% dari

pasien dengan diabetes tipe 1 dan 10-20% dari

pasien dengan diabetes tipe 2 (1). Di AS,

nefropati diabetik menyumbang 30-40% dari semua stadium akhir

kasus penyakit ginjal (2), atau? 28.000 kasus baru setiap tahun

(2,3). Meskipun kemajuan yang cukup besar dalam optimalisasi

glikemik dan kontrol tekanan darah, kejadian

nefropati diabetik dan stadium akhir penyakit ginjal selanjutnya

terus naik (3). Dengan demikian, pencarian terus

untuk lebih memahami patogenesis

nefropati diabetik dan untuk terapi baru.

Meskipun mekanisme yang tidak sepenuhnya dipahami,

matriks ekstraselular mesangial (ECM) akumulasi dan

fibrosis ginjal akibat telah diakui sebagai bermain

peran utama dalam gagal ginjal progresif dalam nefropati diabetik

(4,5). Beberapa faktor pertumbuhan, seperti mengubah

factor pertumbuhan? (TGF -?) 1, jaringan ikat

faktor pertumbuhan (CTGF), dan pertumbuhan endotel vaskular

faktor, diyakini terlibat dalam patogenesis

(5,6). Pada pasien diabetes dan model hewan, mRNA dan

tingkat protein dari TGF-? 1 ditemukan untuk menjadi semakin

meningkat pada glomeruli, bersama dengan peningkatan produksi

proteoglikan dan komponen matriks lainnya, di

kontras ke tingkat negatif atau hampir tidak terdeteksi dari TGF-? 1

di glomeruli ginjal dari normal (7). Blokade dari

berlebih dari TGF-? 1 telah terbukti untuk mencegah

perubahan patologis di nefropati diabetik, seperti

penebalan membran glomerulus basement dan

Ekspansi matriks mesangial (8 -10). Insufisiensi ginjal

bisa dicegah oleh anti-TGF-? 1 antibodi dalam

model tikus diabetes tipe 2 (10).

Pigmen epithelial- berasal faktor (PEDF) adalah glikoprotein

milik superfamili dari serin proteinase

inhibitor, pertama kali diidentifikasi di berbudaya pigmen retina epitel

sel (11,12). Telah ditemukan untuk menjadi endogen

inhibitor angiogenik (13). Penurunan kadar PEDF memiliki

dikaitkan dengan retinopati diabetik (14,15). Kami

Studi terbaru menunjukkan bahwa PEDF juga menyatakan pada tinggi

tingkat di ginjal tikus normal, dan tingkat PEDF ginjal

menurun di streptozotocin (STZ) -diinduksi tikus diabetes

Model (16). Hiperglikemia bertanggung jawab untuk penurunan

dari PEDF pada ginjal diabetes (16). Selain itu, PEDF

mencegah berlebih dari TGF-? 1 dan fibronektin

diinduksi oleh glukosa yang tinggi-menengah di mesangial manusia berbudaya

sel (HMCS) (16). Temuan ini mengungkapkan

Dari 1Departments Kedokteran Endokrinologi dan Biologi Sel Universitas

Oklahoma Health Sciences Pusat, Oklahoma City, Oklahoma; itu

2Department of Ophthalmology, Dean A. McGee Eye Institute, University of

Oklahoma Health Sciences Pusat, Oklahoma City, Oklahoma; dan 3Department

Kedokteran Nefrologi, University of Oklahoma Health Sciences

Center, Oklahoma City, Oklahoma.

Alamat korespondensi dan cetak ulang permintaan untuk Jian-xing Ma, MD, PhD, 941

Stanton L. Muda Blvd., BSEB 328B, Oklahoma City, OK 73104. E-mail:

jian-xing-ma@ouhsc.edu.

Diterima untuk publikasi 4 November 2005 dan diterima di revisi bentuk 13

Maret 2006.

Ad-GFP, adenovirus mengekspresikan protein fluorescent hijau; Ad-PEDF, adenovirus

mengekspresikan pigmen epithelium- faktor yang berasal; CTGF, ikat

Faktor pertumbuhan jaringan; ECM, matriks ekstraselular; ELISA, enzyme-linked immunosorbent

uji; GFP, green fluorescent protein; HMC, sel mesangial manusia;

MMP-2, matriks metaloproteinase-2; PEDF, pigmen faktor epithelium- berasal;

STZ, streptozotocin; TGF- ?, mengubah factor pertumbuhan ?; UEA, urin

ekskresi albumin.

J.J.W. dan S.X.Z. kontribusi sama untuk penelitian ini.

DOI: 10,2337 / db05-1448

© 2006 oleh American Diabetes Association.

Biaya penerbitan artikel ini yang dibiayai sebagian oleh pembayaran halaman

biaya. Artikel ini karena itu harus dengan ini ditandai "iklan" sesuai

dengan 18 U.S.C. Bagian 1734 semata-mata untuk menunjukkan fakta ini

nefropati, yang terjadi pada 30-40% dari

pasien dengan diabetes tipe 1 dan 10-20% dari

pasien dengan diabetes tipe 2 (1). Di AS,

nefropati diabetik menyumbang 30-40% dari semua stadium akhir

kasus penyakit ginjal (2), atau? 28.000 kasus baru setiap tahun

(2,3). Meskipun kemajuan yang cukup besar dalam optimalisasi

glikemik dan kontrol tekanan darah, kejadian

nefropati diabetik dan stadium akhir penyakit ginjal selanjutnya

terus naik (3). Dengan demikian, pencarian terus

untuk lebih memahami patogenesis

nefropati diabetik dan untuk terapi baru.

Meskipun mekanisme yang tidak sepenuhnya dipahami,

matriks ekstraselular mesangial (ECM) akumulasi dan

fibrosis ginjal akibat telah diakui sebagai bermain

peran utama dalam gagal ginjal progresif dalam nefropati diabetik

(4,5). Beberapa faktor pertumbuhan, seperti mengubah

factor pertumbuhan? (TGF -?) 1, jaringan ikat

faktor pertumbuhan (CTGF), dan pertumbuhan endotel vaskular

faktor, diyakini terlibat dalam patogenesis

(5,6). Pada pasien diabetes dan model hewan, mRNA dan

tingkat protein dari TGF-? 1 ditemukan untuk menjadi semakin

meningkat pada glomeruli, bersama dengan peningkatan produksi

proteoglikan dan komponen matriks lainnya, di

kontras ke tingkat negatif atau hampir tidak terdeteksi dari TGF-? 1

di glomeruli ginjal dari normal (7). Blokade dari

berlebih dari TGF-? 1 telah terbukti untuk mencegah

perubahan patologis di nefropati diabetik, seperti

penebalan membran glomerulus basement dan

Ekspansi matriks mesangial (8 -10). Insufisiensi ginjal

bisa dicegah oleh anti-TGF-? 1 antibodi dalam

model tikus diabetes tipe 2 (10).

Pigmen epithelial- berasal faktor (PEDF) adalah glikoprotein

milik superfamili dari serin proteinase

inhibitor, pertama kali diidentifikasi di berbudaya pigmen retina epitel

sel (11,12). Telah ditemukan untuk menjadi endogen

inhibitor angiogenik (13). Penurunan kadar PEDF memiliki

dikaitkan dengan retinopati diabetik (14,15). Kami

Studi terbaru menunjukkan bahwa PEDF juga menyatakan pada tinggi

tingkat di ginjal tikus normal, dan tingkat PEDF ginjal

menurun di streptozotocin (STZ) -diinduksi tikus diabetes

Model (16). Hiperglikemia bertanggung jawab untuk penurunan

dari PEDF pada ginjal diabetes (16). Selain itu, PEDF

mencegah berlebih dari TGF-? 1 dan fibronektin

diinduksi oleh glukosa yang tinggi-menengah di mesangial manusia berbudaya

sel (HMCS) Temuan ini mengungkapkan implikasi dari penurunan PEDF di nefropati diabetik.

Namun, efek perlindungan dari PEDF di diabetes

ginjal dan mekanisme kerjanya belum ditunjukkan.

Dalam penelitian ini, kami meneliti efek PEDF

disampaikan oleh vektor adenovirus dalam model tikus

Diabetes STZ-diinduksi. Hasil menunjukkan bahwa

Pengobatan PEDF signifikan diperbaiki mikroalbuminuria,

menurunkan regulasi ekspresi faktor fibrogenic

TGF-? 1 dan CTGF, dan, selanjutnya, mengurangi mesangial

produksi protein matriks dalam ginjal tikus diabetes.

DESAIN DAN METODE PENELITIAN

Brown Norwegia (BN) tikus yang dibeli dari Charles River Laboratories

(Wilmington, MA). Perawatan, penggunaan, dan perawatan semua hewan dalam penelitian ini adalah

dalam perjanjian ketat dengan pedoman dalam perawatan dan penggunaan laboratorium

hewan yang ditetapkan oleh University of Oklahoma.

Diabetes eksperimental diinduksi oleh injeksi intraperitoneal STZ

(50 mg / kg di 10 mmol / l buffer sitrat; pH 4,5) ke dibius tikus BN (8

minggu usia) setelah semalam cepat. Tikus kontrol usia cocok menerima

injeksi buffer sitrat saja. Kadar glukosa darah diukur 24 jam setelah

injeksi STZ dan dipantau mingguan setelahnya. Hanya hewan dengan

kadar glukosa? 350 mg / dl dianggap diabetes.

Persiapan adenovirus mengungkapkan PEDF manusia. Sebuah membangun kustom

dibangun untuk ekspresi dari PEDF manusia full-length dan neon hijau

protein (GFP) di bawah promotor cytomegalovirus dalam vektor adenoviral yang

diperoleh dari sumber komersial (InVivoGen, San Diego, CA). Konstruk

urutan yang diberikan oleh produsen dikonfirmasi oleh DNA

sequencing (OMRF, Oklahoma City, OK). Rekombinan virus diamplifikasi,

dimurnikan, dan baru sembuh dianalisa dalam garis sel 293A mengikuti prosedur

direkomendasikan oleh produsen.

Pengiriman intravena adenovirus mengungkapkan PEDF manusia. Satu minggu

setelah injeksi STZ, tikus diabetes secara acak menjadi tiga

kelompok. Kelompok 1 menerima suntikan virus (n 5?); kelompok 2 dan 3 yang diterima

suntikan intravena adenovirus mengungkapkan PEDF manusia (Ad-PEDF)

(N? 7) dan adenovirus kontrol mengekspresikan GFP di bawah promotor CMV

(Adenovirus mengekspresikan GFP [Ad-GFP]; Qbiogene, Montreal, Kanada) (? N 5),

masing-masing, dengan dosis 4? 1010 partikel virus per tikus.

Evaluasi tikus mikroalbuminuria dan pengukuran kreatinin.

24-jam urin dikumpulkan dari masing-masing tikus dalam kandang metabolik individu dan

disentrifugasi pada 2,000g selama 5 menit. Untuk menghindari variasi yang disebabkan oleh peningkatan

volume urin pada tikus diabetes, total albumin dalam 24 jam itu dinormalisasi oleh

konsentrasi kreatinin. Tingkat Urine kreatinin diukur menggunakan

QuantiChrom Kreatinin Assay Kit (bioassay Systems, Hayward, CA), berikut

protokol pabrik. Urine albumin diukur dengan enzymelinked

Immunosorbent Assay (ELISA) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX).

Urine albumin ekskresi (UEA) telah dinormalisasi oleh ekskresi kreatinin dan

dinyatakan sebagai miligram albumin per miligram kreatinin dalam 24 jam urin.

Pengukuran PEDF, TGF-? 1, dan fibronektin dengan ELISA. Protein

tingkat PEDF, TGF-? 1, dan fibronektin di ginjal homogenat jaringan, urin,

atau sel berbudaya yang diukur menggunakan PEDF Quantikine komersial

ELISA kit (Chemicon, Temecula, CA), yang TGF-? 1 ELISA kit (R & D Systems,

Minneapolis, MN), dan fibronektin ELISA kit (Assaypro, Winfield, MO),

masing-masing, mengikuti protokol dari produsen. Hasil ELISA

yang dinormalisasi dengan konsentrasi total protein diukur dengan menggunakan BioRad

Protein Assay reagen.

Analisis Western blot dari CTGF. Analisis Western blot dilakukan sebagai

dijelaskan sebelumnya (16). Secara singkat, 50? G protein dari masing-masing sampel adalah

dihapuskan oleh antibodi anti-CTGF (R & D Systems). Membran yang sama yang

ditelanjangi dan reblotted dengan anti -? - antibodi aktin (Santa Cruz Biotechnology,

Santa Cruz, CA).

Penentuan tingkat mRNA matriks metaloproteinase-2 oleh

real-time RT-PCR. RNA total diekstraksi menggunakan Trizol reagen (Invitrogen)

menurut protokol pabrik. Kualitas RNA

sampel dievaluasi dengan elektroforesis gel agarosa dengan melalui ethidium

pewarnaan bromida. Primer spesifik untuk matriks metaloproteinase-2 (MMP-2)

(MMP-2 ke depan, 5 -CTGAGCTCCCGGAAAAGATTG-3 ?; MMP-2 terbalik, 5?? -

CCTGCGAAGAACACAGCCTT-3?) Digunakan untuk real-time RT-PCR. PCR adalah

dilakukan dengan menggunakan kit GeneAmp RNA PCR dan SYBR Hijau PCR Guru Mix

(Applied Biosystems, Foster City, CA). Efisiensi real-time PCR adalah

99,1%. Rata-rata ambang siklus (CT) dari unit fluoresensi digunakan untuk

menganalisis tingkat mRNA. Tingkat mRNA dari gen target yang dinormalisasi

oleh 18S tingkat RNA ribosom. Kuantifikasi dihitung sebagai tingkat mRNA

(persen control)? 2? (? CT) dengan? CT? Gen sasaran CT CT 18S RNA dan

? (? CT)? ? CT sampel normal? Sampel CT STZ-diabetes.

Smad uji translokasi nuklir. Primer HMC dikultur pada 4-ruang

slide (Nalge Nunc, Naperville, IL) mencapai 80% pertemuan. setelah

paparan 1,25 ng / ml TGF-? 1 dengan atau tanpa 160 nmol / l PEDF selama 1 jam,

Sel segera diperbaiki dengan 4% paraformaldehyde. Sel-sel yang

diinkubasi dengan anti-Smad2 / 3 antibodi (1: 200; Upstate, Lake Placid, NY) untuk

2 jam dan kemudian diinkubasi dengan keledai Cy3-terkonjugasi anti-kelinci IgG antibodi

selama 1 jam. Slide diperiksa dan dianalisa di bawah mikroskop fluorescent

(Olympus, Humburg, Jerman).

Analisis statistik. Data dihitung dan dinyatakan sebagai kelompok sarana

SD. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan uji t Student, ANOVA, dan

Beberapa tes perbandingan Bonferroni. Perbedaan statistik dianggap

signifikan pada nilai P? 0,05.

Figure1

Gambar. 1. ekspresi PEDF dimediasi oleh vektor adenovirus. 293 sel

baris terinfeksi dengan Ad-PEDF. Efisiensi infeksi dipantau

menggunakan GFP sebagai penanda bawah mikroskop fluorescent, 3 hari

setelah infeksi (A). Tingkat protein PEDF di media AC

dan di lisat sel diukur dengan ELISA (artinya? SD, n? 3)

(B). DMEM, dimodifikasi menengah Eagle Dulbecco dunia; FBS, janin sapi

serum.

HASIL

Tingginya kadar ekspresi PEDF dimediasi oleh Ad-

PEDF dalam sel berbudaya. Untuk mengkonfirmasi ekspresi

PEDF dimediasi oleh Ad-PEDF, 293A sel yang terinfeksi

dengan Ad-PEDF. Tiga hari setelah infeksi virus,

sel berbudaya menunjukkan tingkat tinggi GFP, penanda

vektor Ad-PEDF. Tingkat protein PEDF diukur

di media dan sel kultur lysates dari sel-sel yang terinfeksi oleh

Ad-PEDF menggunakan ELISA komersial. Hasil penelitian menunjukkan

tingkat PEDF signifikan lebih tinggi di media AC

dari sel yang terinfeksi oleh Ad-PEDF (P? 0,0001, n? 3).

The lysates dari sel yang terinfeksi dengan Ad-PEDF juga

menunjukkan peningkatan signifikan kadar PEDF alih kontrol

(P? 0.001, n? 3) (Gbr. 1).

Peningkatan kadar PEDF di ginjal dan urin di

tikus diabetes setelah pengiriman Ad-PEDF Peningkatan kadar PEDF di ginjal dan urin di

tikus diabetes setelah pengiriman Ad-PEDF. Entah Ad-

PEDF atau virus kontrol Ad-GFP disuntikkan ke dalam

ekor vena dari tikus diabetes yang diinduksi STZ 1 minggu setelah onset diabetes. 24-jam urin dikumpulkan dari masing-masing

tikus secara individual pada 0, 1, 2, 3, 4, dan 5 minggu setelah

suntikan Ad-PEDF. Total jumlah protein PEDF di

24-jam urin diukur dengan ELISA dan dinormalisasi oleh

kreatinin urin. Tingkat PEDF dalam urin yang

meningkat secara signifikan pada tikus diabetes disuntik dengan Ad-

PEDF dibandingkan dengan mereka disuntik dengan Ad-GFP, pada 2 dan 3 minggu

setelah injeksi virus (uji post hoc Bonferroni, P _

0,001, t _ 4.700 dan 4,273, masing-masing; Gambar. 2A). Tingkat PEDF dalam urin menurun ke tingkat kontrol setelah 4 minggu

(P _ 0,05; 2A Gambar.), Konsisten dengan program transien

ekspresi gen dari vektor adenoviral.

Tiga minggu setelah injeksi virus, tikus yang

membunuh, dan tingkat PEDF di ginjal diukur dengan menggunakan

ELISA. Tingkat PEDF ginjal pada tikus diabetes yang tidak diobati adalah

secara signifikan mengurangi dibandingkan usia yang sama nondiabetes yang normal

tikus (ANOVA, P _ 0,01, F _ 6,774;. Gambar 2B), menguatkan

laporan sebelumnya kami (16). Injeksi Ad-PEDF

tingkat PEDF dikembalikan dalam ginjal tikus diabetes dengan

tingkat mendekati bahwa kontrol normal (Bonferroni

post hoc tes, P _ 0,05, t _ 1,646 untuk tikus diabetes diobati

dengan Ad-PEDF dibandingkan kontrol normal; Gambar. 2B). Sebaliknya,

injeksi titer yang sama dari virus kontrol,

Ad-GFP, tidak menormalkan penurunan tingkat PEDF di

tikus diabetes (uji post hoc Bonferroni, P _ 0,05, t _

3,556 untuk tikus diabetes diobati dengan Ad-GFP dibandingkan yang normal

kontrol; Gambar. 2B), menunjukkan bahwa pemulihan PEDF

tingkat oleh Ad-PEDF bukan efek spesifik dari

infeksi adenovirus.

Pengiriman gen PEDF tidak mengubah glukosa darah

tingkat, berat badan, atau urin volume tikus diabetes.

Dibandingkan dengan tikus normal usia yang sama, yang STZ-diinduksi

tikus diabetes telah meningkat secara signifikan konsentrasi glukosa darah

(442,00 57,67 mg / dl) 48 jam setelah injeksi STZ dan

sesudahnya. Pada 1 minggu setelah onset diabetes, tidak ada yang signifikan

perbedaan berat badan yang diamati antara

tikus diabetes (128,55 5,37 g) dan kontrol seusianya

tikus (130 9,21 g). Pada 10 minggu setelah onset diabetes, yang

bobot tubuh tikus diabetes (138,7 27,4 g) yang

secara signifikan lebih rendah dibandingkan tikus kontrol seusianya

(192,8 3,7 g, P _ 0,01). Injeksi Ad-PEDF tidak mengubah

yang hiperglikemia atau berat badan bila dibandingkan

dengan tikus diabetes diobati dengan Ad-GFP (ANOVA, P _ 0,05,

F _ 0,9492 dan 1,095, masing-masing; Tabel 1). Seperti yang diharapkan,

tikus diabetes memiliki poliuria versus kontrol normal.

Pada 1 minggu setelah onset diabetes, volume urin di

tikus diabetes (46,7 12,9 ml) secara signifikan lebih tinggi daripada

yang di kontrol normal seusianya (5,2 0,8 ml, P _

0,001). Ada, bagaimanapun, tidak ada perbedaan dalam 24 jam urin

volume antara tikus diabetes diobati dengan Ad-PEDF dan

mereka yang diobati dengan Ad-GFP (P _ 0,1, n _ 4-7; Tabel 2).

Penurunan UAE oleh Ad-PEDF pada tikus diabetes. Mikroalbuminuria

adalah manifestasi klinis awal diabetes

nefropati (17). Dalam penelitian ini, albumin di

24-jam urin diukur dengan menggunakan ELISA khusus untuk tikus

albumin dan dinormalisasi oleh jumlah kreatinin urin.

Hasil menunjukkan bahwa tikus diabetes mengembangkan

mikroalbuminuria signifikan dengan onset sedini 1 minggu

setelah injeksi STZ (uji post hoc Bonferroni, P _

0,05, t _ 2,535; Gambar. 3). 24-jam UEA terus meningkat

komponen utama protein ECM, seperti kolagen dan

fibronectin (29,35). Di sisi lain, TGF-? menghambat

ECM degradasi dengan mengurangi sekresi protease dan

mengaktifkan protease inhibitor (36) dan inhibitor jaringan

metaloproteinase-1 (37). Di ginjal diabetes, berlebih yang

dari TGF-? diyakini menjadi mediator utama

bertanggung jawab untuk perubahan patologis awal diabetes

nefropati, termasuk membran basal glomerulus

penebalan dan mesangial matriks ekspansi

(9,20,34,38-40). Blokade TGF-? ekspresi atau fungsi

telah terbukti memperbaiki kerusakan patologis atau

untuk mencegah insufisiensi ginjal fungsional dalam nefropati diabetik

(9,10,29,41). Penelitian ini menunjukkan

bahwa pengiriman gen PEDF efektif menurunkan

urin TGF-? 1 ekskresi dan TGF-? 1 ekspresi di

ginjal, memberikan yang pertama di vivo bukti yang menunjukkan bahwa

Fungsi PEDF sebagai inhibitor endogen TGF-?

ekspresi. Data ini menunjukkan bahwa pengurangan ECM

akumulasi disebabkan oleh PEDF dapat dimediasi, setidaknya

sebagian, oleh downregulation dari TGF-? 1.

Jalur Smad dikenal untuk menengahi fungsi

TGF-? pada fibrogenesis ginjal dan akumulasi ECM berikutnya

di nefropati diabetik (13). Penelitian ini

menunjukkan bahwa TGF-? menginduksi translokasi nuklir Smad2 / 3,

langkah kunci dalam pengaktifan jalur Smad.

Selain itu, blok PEDF yang Smad2 / 3 translokasi nuklir

diinduksi oleh TGF-? di HMCS. Hasil ini menunjukkan bahwa

PEDF tidak hanya downregulates TGF-? ekspresi tetapi juga

blok fungsinya, kemungkinan melalui jalur Smad.

Sejumlah penelitian telah menunjukkan bahwa CTGF, sebuah

Asam amino sistein 349-kaya peptida, merupakan penting

mediator hilir efek fibrogenic dari TGF-? di

mengatur metabolisme matriks (42- 44). Semua kausal yang

faktor glomerulosklerosis diabetes, termasuk TGF-?

dan konsentrasi glukosa yang tinggi, yang disebabkan secara signifikan

Ekspresi CTGF dalam sel mesangial glomerulus (45). Dalam

tahap awal nefropati diabetik di db tikus / db, yang

Ekspresi CTGF di glomeruli meningkat secara signifikan

(45). Dalam sebuah penelitian terbaru di pasien diabetes tipe 1

dengan nefropati, ekskresi urin CTGF ditemukan

berkorelasi dengan keparahan nefropati diabetik (46).

Temuan ini mendukung gagasan bahwa CTGF adalah penting

mediator dari penyakit ginjal diabetes. Pada saat ini

studi, kami menunjukkan peningkatan regulasi ekspresi CTGF

pada ginjal tikus diabetes STZ-diinduksi, konsisten

dengan pengamatan sebelumnya dari db tikus / db dan

pasien diabetes (45,46). Selain itu, kami mencatat bahwa

Pengobatan PEDF dasarnya membatalkan berlebih yang

dari CTGF di ginjal diabetes, bersamaan dengan normalisasi

dari TGF-? 1 dan tingkat fibronektin untuk nondiabetes

Kisaran. Temuan ini menunjukkan PEDF yang mungkin

menekan mesangial akumulasi matriks melalui

blokade hiperglikemia yang diinduksi TGF-? 1 dan CTGF

ekspresi.

Singkatnya, data kami memberikan bukti pertama yang menunjukkan

yang menghalangi PEDF fibrogenesis di ginjal diabetes, melalui

penghambatan TGF-? dan ekspresi CTGF dan fungsi.

Kegiatan antifibrogenic dari PEDF mungkin bertanggung jawab, di

setidaknya sebagian, untuk efek yang bermanfaat dalam ginjal diabetes

komplikasi pada tipe 1 model tikus diabetes. Sebagai sebelumnya

penelitian telah menunjukkan bahwa anti-TGF-? terapi dapat memperbaiki

kelainan fungsional dan struktural diabetes

nefropati, kami mengusulkan PEDF itu, berdasarkan yang

anti-TGF-? dan sifat antifibrogenic, mungkin memiliki

potensi terapi di nefropati diabetik