persentasi poster

Isolasi Senyawa Flavanon dari Daun Sirsak (Annona Muricata L.) dan Uji Antioksidan Menggunakan

Metode Spektrofotometri Dengan Pereaksi DPPH

Septiani Martha1, Adek Zamrud Adnan 2, Erjon 1

1 Stifi Bhakti Pertiwi Palembang2 Fakultas Farmasi Universitas Andalas, Padang

SEMINAR NASIONAL TANAMAN OBAT INDONESIA

KE-44TAHUN 2013

KLASIFIKASI Kingdom : Plantae

Divisio : Spermatophyta

Sub Divisio : Angiospermae

Class : Dicotyledonae

Ordo : Polycarpiceae

Famili : Annonaceae

Genus : Annona

Species : Annona muricata Linn

A. PENDAHULUAN• Daun sirsak dulu sama sekali tidak dikenal, dibuang,

tanpa digubris namun sekarang jauh berbeda. Sejak mulai dikeluarkan berbagai penelitian tentang manfaat daun sirsak, utamanya sebagai obat tumor dan kanker, daun sirsak menjadi daun yang dicari.

• Tanaman sirsak banyak sekali menyimpan manfaat, mulai dari buahnya, daun, bahkan pohonnya. Ternyata daun sirsak mempunyai manfaat sebagai bahan pengobatan herbal, dan menjaga kondisi tubuh.

B. TUJUAN PENELITIAN

Sehingga dari penelitian ini bertujuan mencari fraksi dari daun sirsak yang tidak memiliki kandungan alkaloid berbahaya, aman dan efektif digunakan untuk pengobatan serta memiliki aktifitas antioksidan yang kuat dengan mengisolasi senyawa antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri UV dan IR.

Referensi Ilmiah

Khasiat Efek Samping

Waktu dan Tempat Penelitian

B. METODOLOGI PENELITIAN

•Bulan Maret sampai bulan Mei 2012 Waktu

•Laboratorium Penelitian Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Bhakti Pertiwi Palembang•Laboratorium Kimia Bahan Alam dan Laboraturium Analisa Fisiko Kimia Jurusan Farmasi Universitas Andalas Padang

Tempat

Alat dan Bahan

•Seperangkat alat destilasi uap, corong pisah, EYELA rotary evaporator SB-1000, seperangkat alat Spektrum UV-1700 PharmaSpec (SHIMADZU), chamber, lampu UV-BETRACHTER (CAMAG), alat vakum, oven multi King MK 16, kromatografi kolom, kaca masir, lumpang agate, Thermo Scientifik: Nicolet iS10 dan alat-alat gelas lainnya.

Alat

•Simplisia folium Annona muricata L 1 kg, kloroform, kloroforom amoniak, pereaksi mayer, H2SO4 2N 0,5 ml, etanol 96 %, serbuk Mg, HCl Pekat, aquadest, FeCl3, asam asetat anhidrat, H2SO4 pekat, pasir bersih, norit, metanol destilat, heksan destilat, diklormetana, destilat, etil asetat destilat, asam asetat 5%, Na sulfat eksikatus, serbuk DPPH, plat KLT silika gel GF254, silika gel60, penampak bercak yakni iodium, sitrus borat, amoniak, pereaksi Dragendorff, serbuk KBr.

Bahan

Prosedur Kerja1. Pengambilan Sampel2. Penyiapan Sampel3. Identifikasi Metabolit Sekunder4. Ekstraksi dan Fraksinasi5. Identifikasi Flavonoid & Alkaloid dengan KLT silika gel F254 6. Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH7. Pemisahan Flavonoid dari Fraksi Etil Asetat dengan

Kromatografi Kolom Silika Gel 60 dan KLT Preparatif8. Pengujian Antioksidan dari Hasil Elusi Fraksi Kromatografi

Kolom (Senyawa DSK)9. Karakterisasi Senyawa DS dengan Spektrofotometri UV-VIS

dan Spektrofotometri IR

SKEMA KERJA Ekskrasi dan Fraksinasi

SKEMA KERJASkema Pengujian Pendahuluan Antioksidan dari Ekstrak Kering Etil asetat,

Diklormetana dan Diklormetana basa & Spektrum Larutan 2,2-difenil-1-Pikrilhidrazil 100µM dalam Metanol

λ maks : 515,8 nmAbsorbansi : 0,712

Skema Isolasi Flavonoid Dari Fraksi Etil Asetat Dengan Kromatografi Kolom

Skema KLT Preparatif dan Spektrofotometri UV-VIS dan Spektrofotometri IR Hasil dari Kromatografi Kolom

Spektrum Serapan 2,2-difenil-1-Pikrilhidrazil 100µM dalam Metanol & Skema Pengujian Antioksidan Fraksi

dari Hasil Kromatografi Kolom

λ maks : 515 nmAbsorbansi : 0,914

C. HASIL PERCOBAANHasil Pemeriksaan Pendahuluan Kandungan Metabolit Sekunder dari Daun Sirsak

(Folium A. muricata L.)

Metabolit Sekunder Pereaksi Hasil

Alkaloid Pereaksi Mayer +

Flavonoid Mg/HCl +

Fenolik FeCl3+

Terpenoid Liebermann-Burchard -

Steroid Liebermann-Burchard -

Saponin Kocok -

Hasil Uji Pendahuluan Metabolit Sekunder dengan KLT dan Pengujian dengan Sianidin Test

FraksiAlkaloid

(P. Dragendorff)

FlavonoidFenolik(FeCl3)(Sitrus borat) Sianidin Test

n-Heksan - - - -

DCM + - -+

-

Etil Asetat - + +

DCM basa + - - -

Fase Diam : Silika Gel GF254

Fase Gerak : Metanol: Diklormetana (2:8)Penampak Warna : FeCl3

Hasil : Ekstrak Etil Asetat Positif Fenolik

Pereaksi : Mg/HCLHasil : Ekstrak etil asetat positif flavonoid

Fase Diam : Silika Gel GF254

Fase Gerak : Metanol: Diklormetana (2:8)Penampak Warna : Sitrus BoratHasil : Ekstrak etil asetat positif flavonoid

Fase Diam : Silika Gel GF254

Fase Gerak : Metanol: Diklormetana (2:8)Penampak Warna : Pereaksi DragendorffHasil : Ekstrak diklormetana & DCM basa positif alkaloid

Hasil Uji Pendahuluan Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan

Konsentrasi(ppm)

Absorbansi

DCM DCM basa Etil asetat

1000 0.136 0.06 0.037500 0.281 0.127 0.056250 0.407 0.316 0.077125 0.476 0.446 0.08662,5 0.526 0.517 0.118

Konsentrasi(ppm)

Persen Inhibisi Sampel

DCM(%) DCM basa(%) Etil asetat(%)

1000 80,899 91,573 94,803500 60,534 82,163 92,134250 42,837 55,618 89,185125 33,146 37,359 87,92162,5 26,124 27,388 83,427

Y Persamaan y = 0.057x + 26.52 y = 0.067x + 32.83 y = 0.010x + 85.51R2 R² = 0,970 R² = 0,849 R² = 0.824

Hasil Uji Pendahuluan Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan

Konsentrasi(ppm)

AbsorbansiPersen

Inhibisi (%)Y Persamaan R2

50ppm 0,111 84,41

Y = 1.651x + 0.005

0,993

25ppm 0,444 37,64

12,5ppm 0,569 20,084

6,25ppm 0,643 9,691

3,125ppm 0,654 8,146

Hubungan Konsentrasi Sari Etil Asetat dengan Data Hasil Uji Antioksidan

0 200 400 600 800 1000 12000

20

40

60

80

100

80.899

60.534

42.83733.146

26.124

f(x) = 0.0572550537634409 x + 26.5216666666667R² = 0.970767859946529

Konsentrasi (ppm)

Per

sen

Per

edam

an

(%)

0 200 400 600 800 1000 12000

20

40

60

80

10091.573

82.163

55.618

37.35927.388

f(x) = 0.0670563225806452 x + 32.835875R² = 0.849556373169377

Konsentrasi (ppm)Per

sen

Per

edam

an

(%)

0 10 20 30 40 50 600

20

40

60

80

10084.41

37.6420.084

9.6918.146

f(x) = 1.65101892473118 x + 0.00570833333333454R² = 0.993405835303841

Konsentrasi (ppm)P

erse

n P

ered

aman

(%

)

Fraksi Etil Asetat

Fraksi Diklormetana

Fraksi DCM dalam Suasana Basa

Fraksi IC50

Fraksi Diklormetana 411,929 ppm

Fraksi Etil Asetat 30,282 ppm

Fraksi Diklormetana dalam Suasana Basa

256,3 ppm

Perbandingan Hasil IC50 dengan berbagai konsentrasi dari Fraksi Diklormetana, Etil Asetat, Diklormetana dalam Suasana Basa

Profil KLT Hasil Elusi dari Kromatografi Kolom pada Fase Gerak Metanol : Diklormetana (DCM) (2:8)

Fase Diam : Silika Gel GF254

Fase Gerak : Metanol: Diklormetana (1:9)Penampak Bercak : Uap Iodium 4

= 0,75Rf =3,0

Profil KLT Preparatif

Fase Diam : Silika Gel GF 254

Fase Gerak : Metanol: Diklormetana (2:8)

Hasil Pengujian Metabolit Sekunder dari KLT Preparatif Pada Fase Gerak Metanol : Diklormetan (2:8) dengan Penampak Noda

Metabolit Sekunder Penampak Bercak Hasil

AlkaloidPereaksi

Dragendroff-

Flavonoid Sitrus Borat +

Fenolik FeCl3 +

Fase Diam : Silika Gel GF 254Fase Gerak : Metanol: Diklormetana (2:8)Penampak Warna : Uap Iodium, Sitrus borat, Dragendorff, FeCl3 (Kiri-Kanan)

Hasil Uji Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan Senyawa DSK dgn Pembanding Vitamin C

Konsentrasi (ppm) Absorbansi

Persen Peredaman

(%)

Y Persamaan & R2

250 0,038 95,842

Y = 0.218x + 44.42

R² = 0.961

125 0,193 78,884

62.5 0,39 57,330

31.25 0,458 49,890

15.625 0,495 45,842Hubungan Konsentrasi Senyawa Hasil Isolasi (Senyawa DS) dengan

Data Hasil Uji Antioksidan

Konsentrasi(ppm)

AbsorbansiPersen Peredaman

(%)Y Persamaan & R2

250 0,029 96,827

y = 0.237x + 44.49

R² = 0.849

125 0,115 87,417

62,5 0,344 62,363

31,25 0,423 53,719

15,625 0,576 36,98

Hasil Uji Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan Senyawa DSK dgn Pembanding Vitamin C

Hubungan Konsentrasi Vitamin C dengan Data Hasil Uji Antioksidan

Profil Kurva Perbandingan

0 50 100 150 200 250 3000

20

40

60

80

100

120

95.825

78.928

57.27849.88845.871

f(x) = 0.218101075268817 x + 44.4294583333333R² = 0.961885298289698

Konsentrasi (ppm)

Per

sen

Per

edam

an (

%)

0 50 100 150 200 250 3000

20

40

60

80

100

120

96.82787.4170000000001

62.36353.719

36.98

f(x) = 0.237049806451613 x + 44.497R² = 0.848970225639752

Konsentrasi (ppm)

Per

sen

Per

edam

an (%

)

IC 50 = 23,25

Profil Kurva Hubungan antara Konsentrasi

Vitamin C dengan Persen Inhibisi

Profil Kurva Hubungan antara Konsentrasi Senyawa DSK dengan Persen Inhibisi

Hasil Perbandingan Nilai IC50

Senyawa IC50

Senyawa DSK 25,6 ppm

Vitamin C 23,25 ppm

Spektrum UV-VIS Senyawa DS dari Daun Sirsak (A.muricata L.) dalam Metanol

Panjang Gelombang

(nm)Absorbansi

422,5 0,069

279,5 0,568

223 2,376

576,5 0,002

410 0,068

261,5 0,523

Spektrum IR Senyawa DS Daun Sirsak (A.muricata L.) dengan Pelet KBr

NO Bilangan Gelombang

(cm-1)

Interpretasi

Gugus Fungsi

1 3446,80 Regang OH

2 2920,31 Regang C-H

3 1743,27 Regang C=O

4 1628,58 Regang C=C

5 1465,60 Regang C-H

6 1099,83

Regang C-O

Regang C-C

E. KESIMPULAN• Dari pemeriksaan pendahuluan metabolit sekunder pada daun

sirsak (Annona muricata L.) menunjukan hasil positif alkaloid, flavonoid, dan fenolik

• Berdasarkan pengujian dengan penampak bercak sitrus borat, fraksi etil asetat mengandung senyawa flavonoid sedangkan dari data pola spektrofotometri UV dan spektrofotometri IR yang dihasilkan, kemudian dibandingkan dengan literatur, senyawa hasil isolasi termasuk senyawa flavonoid diduga golongan flavanon, dan memiliki aktivitas antioksidannya kuat.

• Pengujian antioksidan senyawa hasil isolasi dengan metoda spektrofotometri VIS dengan pereaksi radikal DPPH menunjukkan IC50 25,6 ppm sedangkan IC50 dari senyawa pembanding vitamin C memberikan IC50 8,25 ppm.