persentasi poster

Isolasi Senyawa Flavanon dari Daun Sirsak (Annona Muricata L.) dan Uji Antioksidan Menggunakan Metode Spektrofotometri Dengan Pereaksi DPPHSeptiani Martha1, Adek Zamrud Adnan 2, Erjon 1 1 Stifi Bhakti Pertiwi Palembang 2 Fakultas Farmasi Universitas Andalas, Padang

SEMINAR NASIONAL TANAMAN OBAT INDONESIA KE-44 TAHUN 2013

KLASIFIKASIKingdom Divisio Sub Divisio Class Ordo Famili Genus Species : Plantae : Spermatophyta : Angiospermae : Dicotyledonae : Polycarpiceae : Annonaceae : Annona : Annona muricata Linn

A. PENDAHULUAN Daun sirsak dulu sama sekali tidak dikenal, dibuang, tanpa digubris namun sekarang jauh berbeda. Sejak mulai dikeluarkan berbagai penelitian tentang manfaat daun sirsak, utamanya sebagai obat tumor dan kanker, daun sirsak menjadi daun yang dicari. Tanaman sirsak banyak sekali menyimpan manfaat, mulai dari buahnya, daun, bahkan pohonnya. Ternyata daun sirsak mempunyai manfaat sebagai bahan pengobatan herbal, dan menjaga kondisi tubuh.

B. TUJUAN PENELITIANReferensi Ilmiah

Khasiat

Efek Samping

Sehingga dari penelitian ini bertujuan mencari fraksi dari daun sirsak yang tidak memiliki kandungan alkaloid berbahaya, aman dan efektif digunakan untuk pengobatan serta memiliki aktifitas antioksidan yang kuat dengan mengisolasi senyawa antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri UV dan IR.

B. METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian

Waktu Tempat

Bulan Maret sampai bulan Mei 2012

Laboratorium Penelitian Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Bhakti Pertiwi Palembang Laboratorium Kimia Bahan Alam dan Laboraturium Analisa Fisiko Kimia Jurusan Farmasi Universitas Andalas Padang

Alat dan Bahan Seperangkat alat destilasi uap, corong pisah, EYELA rotary evaporator SB-1000, seperangkat alat Spektrum UV-1700 PharmaSpec (SHIMADZU), chamber, lampu UV-BETRACHTER (CAMAG), alat vakum, oven multi King MK 16, kromatografi kolom, kaca masir, lumpang agate, Thermo Scientifik: Nicolet iS10 dan alat-alat gelas lainnya.

Alat

Bahan

Simplisia folium Annona muricata L 1 kg, kloroform, kloroforom amoniak, pereaksi mayer, H2SO4 2N 0,5 ml, etanol 96 %, serbuk Mg, HCl Pekat, aquadest, FeCl3, asam asetat anhidrat, H2SO4 pekat, pasir bersih, norit, metanol destilat, heksan destilat, diklormetana, destilat, etil asetat destilat, asam asetat 5%, Na sulfat eksikatus, serbuk DPPH, plat KLT silika gel GF254, silika gel60, penampak bercak yakni iodium, sitrus borat, amoniak, pereaksi Dragendorff, serbuk KBr.

Prosedur Kerja1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Pengambilan Sampel Penyiapan Sampel Identifikasi Metabolit Sekunder Ekstraksi dan Fraksinasi Identifikasi Flavonoid & Alkaloid dengan KLT silika gel F254 Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH Pemisahan Flavonoid dari Fraksi Etil Asetat dengan Kromatografi Kolom Silika Gel 60 dan KLT Preparatif 8. Pengujian Antioksidan dari Hasil Elusi Fraksi Kromatografi Kolom (Senyawa DSK) 9. Karakterisasi Senyawa DS dengan Spektrofotometri UV-VIS dan Spektrofotometri IR

SKEMA KERJA Ekskrasi dan Fraksinasi

SKEMA KERJASkema Pengujian Pendahuluan Antioksidan dari Ekstrak Kering Etil asetat, Diklormetana dan Diklormetana basa & Spektrum Larutan 2,2-difenil-1Pikrilhidrazil 100M dalam Metanol

maks Absorbansi

: 515,8 nm : 0,712

Skema Isolasi Flavonoid Dari Fraksi Etil Asetat Dengan Kromatografi Kolom

Skema KLT Preparatif dan Spektrofotometri UV-VIS dan Spektrofotometri IR Hasil dari Kromatografi Kolom

Spektrum Serapan 2,2-difenil-1-Pikrilhidrazil 100M dalam Metanol & Skema Pengujian Antioksidan Fraksi dari Hasil Kromatografi Kolom

maks : 515 nm Absorbansi : 0,914

C. HASIL PERCOBAANHasil Pemeriksaan Pendahuluan Kandungan Metabolit Sekunder dari Daun Sirsak (Folium A. muricata L.) Metabolit Sekunder Alkaloid Flavonoid Fenolik Terpenoid Steroid Saponin Pereaksi Pereaksi Mayer Mg/HCl FeCl3 Liebermann-Burchard Liebermann-Burchard Kocok Hasil + + + -

Hasil Uji Pendahuluan Metabolit Sekunder dengan KLT dan Pengujian dengan Sianidin TestFraksi Alkaloid (P. Dragendorff) Flavonoid (Sitrus borat) Sianidin Test Fenolik (FeCl3)

n-HeksanDCM Etil Asetat DCM basa

+ +

+ -

+ -

+ -

Fase Diam Fase Gerak Penampak Warna Hasil Pereaksi Hasil

: Silika Gel GF254 : Metanol: Diklormetana (2:8) : FeCl3 : Ekstrak Etil Asetat Positif Fenolik : Mg/HCL : Ekstrak etil asetat positif flavonoid

Fase Diam Fase Gerak Penampak Warna HasilFase Diam Fase Gerak Penampak Warna Hasil

: Silika Gel GF254 : Metanol: Diklormetana (2:8) : Sitrus Borat : Ekstrak etil asetat positif flavonoid: Silika Gel GF254 : Metanol: Diklormetana (2:8) : Pereaksi Dragendorff : Ekstrak diklormetana & DCM basa positif alkaloid

Hasil Uji Pendahuluan Pemeriksaan Aktivitas AntioksidanKonsentrasi (ppm) 1000 500 250 125 62,5 Konsentrasi (ppm) 1000 500 250 125 62,5 Y Persamaan R2 DCM 0.136 0.281 0.407 0.476 0.526 Absorbansi DCM basa Etil asetat 0.06 0.037 0.127 0.056 0.316 0.077 0.446 0.086 0.517 0.118

Persen Inhibisi Sampel DCM(%) DCM basa(%) Etil asetat(%) 80,899 91,573 94,803 60,534 82,163 92,134 42,837 55,618 89,185 33,146 37,359 87,921 26,124 27,388 83,427 y = 0.057x + 26.52 y = 0.067x + 32.83 y = 0.010x + 85.51 R = 0,970 R = 0,849 R = 0.824

Hasil Uji Pendahuluan Pemeriksaan Aktivitas AntioksidanKonsentrasi (ppm)

Absorbansi

Persen Inhibisi (%)

Y Persamaan

R2

50ppm 25ppm 12,5ppm

0,111 0,444 0,569

84,41 37,64 20,084 Y = 1.651x + 0.005 0,993

6,25ppm3,125ppm

0,6430,654

9,6918,146

Hubungan Konsentrasi Sari Etil Asetat dengan Data Hasil Uji Antioksidan

Fraksi DiklormetanaPersen Peredaman (%)100 80 60 40 20 0 0 500 1000 1500 42.837 33.146 26.124 80.899 y = 0.057x + 26.52 R = 0,970

60.534

Fraksi Etil AsetatPersen Peredaman (%)100

8060 40 20 0 0 20.084 9.691 8.146 20 40 37.64

84.41 y = 1.651x + 0.005 R = 0,993

Konsentrasi (ppm)

60

Persen Peredaman (%)

120 100 80 60 40 20 0 0

Konsentrasi (ppm)82.163 55.618 37.359 27.388 500 1000 1500 91.573 y = 0.067x + 32.83 R = 0,849

Konsentrasi (ppm)

Fraksi DCM dalam Suasana Basa

Perbandingan Hasil IC50 dengan berbagai konsentrasi dari Fraksi Diklormetana, Etil Asetat, Diklormetana dalam Suasana Basa Fraksi IC50

Fraksi DiklormetanaFraksi Etil Asetat Fraksi Diklormetana dalam Suasana Basa

411,929 ppm30,282 ppm 256,3 ppm

Profil KLT Hasil Elusi dari Kromatografi Kolom pada Fase Gerak Metanol : Diklormetana (DCM) (2:8)

Fase Diam Fase Gerak Penampak Bercak

: Silika Gel GF254 : Metanol: Diklormetana (1:9) : Uap Iodium

Rf = 3,0 = 0,75 4

Profil KLT Preparatif

Fase Diam Fase Gerak

: Silika Gel GF 254 : Metanol: Diklormetana (2:8)

Hasil Pengujian Metabolit Sekunder dari KLT Preparatif Pada Fase Gerak Metanol : Diklormetan (2:8) dengan Penampak NodaMetabolit Sekunder Alkaloid Dragendroff Flavonoid Fenolik Sitrus Borat FeCl3 + + Penampak Bercak Pereaksi Hasil

Fase Diam Fase Gerak Penampak Warna

: Silika Gel GF 254 : Metanol: Diklormetana (2:8) : Uap Iodium, Sitrus borat, Dragendorff, FeCl3 (Kiri-Kanan)

Hasil Uji Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan Senyawa DSK dgn Pembanding Vitamin CKonsentrasi (ppm) Absorbansi Persen Peredaman (%) 95,842 78,884 Y = 0.218x + 44.42 62.5 31.25 0,39 0,458 57,330 49,890 R = 0.961 Y Persamaan & R2

250 125

0,038 0,193

15.625 Konsentrasi0,495 45,842 (Senyawa DS) dengan Hubungan Senyawa Hasil Isolasi Data Hasil Uji Antioksidan

Hasil Uji Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan Senyawa DSK dgn Pembanding Vitamin CKonsentrasi (ppm) 250 Absorbansi 0,029 Persen Peredaman (%) 96,827 Y Persamaan & R2

12562,5 31,25 15,625

0,1150,344 0,423 0,576

87,417y = 0.237x + 44.49 62,363 53,719 36,98 R = 0.849

Hubungan Konsentrasi Vitamin C dengan Data Hasil Uji Antioksidan

Profil Kurva PerbandinganPersen Peredaman (%)120 100 80 60 78.928

95.825 57.278 49.888 45.871

Profil Kurva Hubungan antara Konsentrasi Senyawa DSK dengan Persen Inhibisi

4020 0

y = 0.2181x + 44.429 R = 0.9619

0

100

200

300

Konsentrasi (ppm)120

Persen Peredaman (%)

Profil Kurva Hubungan antara Konsentrasi Vitamin C dengan Persen Inhibisi

100 80 60 40 20 0 0 100 200 62.363 53.719 36.98 87.417

96.827

y = 0.237x + 44.497 R = 0.849

IC 50 = 23,25300

Konsentrasi (ppm)

Hasil Perbandingan Nilai IC50Senyawa IC50

Senyawa DSKVitamin C

25,6 ppm23,25 ppm

Spektrum UV-VIS Senyawa DS dari Daun Sirsak (A.muricata L.) dalam MetanolPanjang Gelombang (nm) Absorbansi

422,5279,5 223

0,0690,568 2,376

576,5410 261,5

0,0020,068 0,523

Spektrum IR Senyawa DS Daun Sirsak (A.muricata L.) dengan Pelet KBrNO Bilangan Gelombang (cm-1) Interpretasi Gugus Fungsi

12 3

3446,802920,31 1743,27

Regang OHRegang C-H Regang C=O

45

1628,581465,60

Regang C=CRegang C-H Regang C-O

6

1099,83

Regang C-C

E. KESIMPULAN Dari pemeriksaan pendahuluan metabolit sekunder pada daun sirsak (Annona muricata L.) menunjukan hasil positif alkaloid, flavonoid, dan fenolik Berdasarkan pengujian dengan penampak bercak sitrus borat, fraksi etil asetat mengandung senyawa flavonoid sedangkan dari data pola spektrofotometri UV dan spektrofotometri IR yang dihasilkan, kemudian dibandingkan dengan literatur, senyawa hasil isolasi termasuk senyawa flavonoid diduga golongan flavanon, dan memiliki aktivitas antioksidannya kuat. Pengujian antioksidan senyawa hasil isolasi dengan metoda spektrofotome