BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan

Peralatan yang Digunakan

1) Gas Cromatoghraphy Mass Spectrofotometry (GCMS) QP 2010 Shimadzu

Japan dengan kolom RTx1-MS, Restech 30 m x 0,25 mm ID, Polymethyl

xyloxane.

2) Spektrofotometer Fourir transform Infra Red (FTIR) Spectrum one Perkin

Elmer, USA.

3) Refractometer

4) Oven

5) Beaker Glass

6) Corong pisah

7) Kertas saring

8) Tabung vial

9) Tabung Reaksi

10) Pipet tetes

11) Neraca Analitik

Bahan yang Digunakan

1) Lemak Ayam

2) Lemak Sapi

3) Lemak Babi

4) Larutan BF3 dalam methanol

5) Larutan n-Heksan

6) Na2SO4 anhidrus

11

3.2 Prosedur Kerja

A. Ekstraksi Lemak Padat (Metode Oven)

1) 2 gram sampel jaringan lemak dicuci, diris kecil-kecil dan dimasukkan

kedalam beaker glass.

2) Sampel dimasukkan kedalam dry oven yang sudah diatur suhunya

(75oC).

3) Dibiarkan selama 6 jam hingga jaringan lemaknya mencair.

4) Lemak padat yang sudak mencair dipisahkan dengan corong pisah

dengan penambahan n-heksan.

5) Lemak yang sudah dimurnikan disaring dalam kertas saring yang sudah

ditambahkan Na2SO4 untuk mengikat air yang masih ada pada lapisan

lemak.

6) Hasil ekstraksi ditimbang dan ditentukan persen rendemennya.

B. Pengujian Sifat Fisikokimia

Pengujian Sifat Fisikokimia dilakukan terhadap masing-masing lemak hewani

yang meliputi; bobot jenis, indeks bias, titik leleh, bilangan iodin, dan

bilangan penyabunan. Hasil analisa dibandingkan satu sama lain dan diuji

tingkat perbedaannya dengan uji keragaman.

C. Analisa Pola Spektrum Lemak Hewani dengan FTIR

1) Sampel lemak yang telah disaring dan dimurnikan diteteskan pada salah

satu permukaan sel KBr.

2) Diantara dua sel KBr diberi pembatas berupa politetrafluoroetilen (PTFE)

untuk menghasilkan ketebalan lapisan lemak 0,1 mm. Sel bagian lainnya

ditangkupkan hingga terbentuk lapisan tipis lemak.

3) Scanning dilakukan dengan kisaran panjang gelombang 4000 cm-1.

4) Hasil scanning direkam untuk analisa lebih lanjut.

12

D. Esterifikasi Asam Lemak

1) 2 gram sampel lemak yang telah diekstrak dimasukkan kedalam tabung

reaksi dan direaksikan dengan larutan BF3 dalam methanol.

2) Dikocok dan dipanaskan selama 15 menit.

3) Didiamkan sampai terbentuk 2 lapisan.

4) Lapisan atas dipisahkan dengan sentrifugasi dan dipurifikasi lebih lanjut

dengan penambahan Na2SO4 utuk menghilangkan kadar airnya.

5) Hasil esterifikasi selanjutnya dimasukkan dalam vial untuk dianalisa

dengan alat GCMS.

E. Analisa komposisi Asam Lemak dengan GCMS

1) 1 µL sampel lemak yang telah di esterifikasi diinjeksikan kedalam kolom

GC dengan metode autosampler.

2) Pemisahan dilakukan dalam kolom RTx 1-MS Restech, 30 m x 0,25mm

ID 0,25 µm, dengan fase diam Poly dimethyl xyloxan, suhu injektor

280oC, suhu kolom 70oC dinaikkan 10oC/menit, laju alir 1,15mL/menit.

3) Hasil analaisa berupa spektrum massa dibandingkan dengan library

WILLEY 147 dan NIST 47 yang terdapat pada software GCMS.

13