uji efek kombinasi antibiotik ampicillin dengan … · ibu dr. erna tri wulandari, ......

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMPICILLIN DENGAN

EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP

PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Diajukan Oleh:

Angelica Rivera Santoso

NIM: 148114050

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMPICILLIN DENGAN

EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP

PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Diajukan Oleh:

Angelica Rivera Santoso

NIM: 148114050

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017


ii


iii


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

I ONLY LIVE BY HIS GRACE.

Have Thine own way, Lord!

Karya ini kupersembahkan untuk:

Allah Bapa di Surga, Tuhan Yesus Kristus, dan Roh Kudus sebagai sumber berkat

dan pengharapanku

Papi, Mami, Adik, serta seluruh keluarga besar yang penuh cinta

Semua sahabat dan teman yang telah menemaniku dan menyemangatiku

Semua manusia yang menganggap karya ini bermanfaat

serta Almamaterku Universitas Sanata Dharma


v


vi


vii

PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas limpahan berkat dan kasih-

Nya, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Efek Kombinasi

Antibiotik Ampicillin dengan Ekstrak Metanol Daun Sirih (Piper betle L.)

Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus” dengan baik. Skripsi ini

disusun untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana

Farmasi (S.Farm.) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

Dalam penyusunan skripsi ini, penulis mendapatkan banyak bantuan,

dukungan, dan bimbingan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak

langsung. Oleh karena itu, pada kesempatan ini, penulis ingin mengucapkan

terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Apt., Ph.D., selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

2. Ibu Dr. Sri Hartati Yuliani, Apt., selaku Ketua Program Studi Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

3. Ibu Dr. Dewi Setyaningsih, Apt., selaku Kepala Laboratorium Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah memberikan izin untuk

penggunaan segala fasilitas laboratorium selama penelitian.

4. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt selaku Dosen Pembimbing skripsi yang telah

dengan sabar memberikan banyak kritik, saran, dan bimbingan selama

penelitian dan penyusunan skripsi.

5. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc., selaku dosen penguji atas kritik

dan saran selama penyusunan skripsi.

6. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. selaku dosen penguji atas kritik dan saran

selama penyusunan skripsi.

7. Mas Antonius Dwi Priyana dan Mas Sarwanto selaku Sekretariat S1 Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma yang memberikan informasi selama

perkuliahan dan ujian.

8. Pak Yohanes Wagiran, Pak Markus Suparlan, dan Ibu Novelia yang telah

membantu pengerjaan penelitian skripsi ini.


viii

9. Segenap dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta yang sudah mengajar dan membantu saya selama perkuliahan.

10. Keluarga terkasih, Bapak Herman Santoso, Ibu Juliana, dan Jose Ignacio yang

telah menyemangati dan memberi dukungan selama proses pengerjaan skripsi.

11. Sahabat-sahabat saya Maria Yosephin, Gusti Ayu Vivin, Gita Yanti, Grace

Nathania, Terra Biswani yang selalu mendukung dan menemani saya selama

perkuliahan.

12. Sahabat-sahabat saya Stephanie Pauline, Irene Santoso, Jessica Yohari, Fenny

Putri Y., Bella K.K.Y yang berada di Palembang yang selalu mendukung saya

dalam segala hal.

13. Teman-teman Blessed leaf seperjuangan Livia Setiastuti, Lintang Sari,

Valentina Natalia, Gusti Ayu Vivin untuk waktu, usaha, cerita, dan pelajaran

selama pengerjaan skripsi.

14. Teman-teman di Badan Eksekutif Mahasiswa 2016, Kementerian Dalam

Negeri 2016 yang sudah mengajarkan banyak hal di luar akademis.

15. Teman-teman FSM B 2014 dan seluruh angkatan 2014 yang telah

berdinamika, baik panitia maupun perkuliahan.

16. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis yang telah

membantu selama proses penyusunan skripsi ini.

Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna dan

dalam naskah skripsi ini masih terdapat kekurangan mengingat keterbatasan

pengetahuan dan kemampuan yang dimiliki oleh penulis. Oleh karena itu, penulis

mengharapkan adanya kritik dan saran yang membantu demi kemajuan di masa

yang akan datang. Akhir kata, penulis berharap agar skripsi ini dapat bermanfaat

bagi mahasiswa, lingkungan akademis, masyarakat serta dapat memberikan

sumbangan kecil bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang

kefarmasiaan.

Yogyakarta, 09 November 2017

Penulis


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................................... i

PERSETUJUAN PEMBIMBING .......................................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v

HALAMAN PERSETUJUAN ............................................................................... vi

PRAKATA ............................................................................................................ vii

DAFTAR ISI ......................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ................................................................................................... x

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii

ABSTRAK ........................................................................................................... xiii

ABSTRACT ......................................................................................................... xiv

PENDAHULUAN ................................................................................................. 1

METODE PENELITIAN ....................................................................................... 3

HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 8

KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................................. 14

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 15

LAMPIRAN .......................................................................................................... 19

BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 27


x

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Hasil Pengukuran Absorbansi atau Optical Density Ekstrak

Metanol Daun Sirih (EMDS), Ampicillin (AMP), dan

Kombinasinya .................................................................................. 10

Tabel 2. Hasil Uji Post Hoc dengan taraf kepercayaan 95 % ......................... 12


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Rancangan pengukuran dengan metode checkerboard ...................... 6

Gambar 2. Penentuan kadar air daun sirih ........................................................... 9


xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat determinasi tanaman (daun sirih).......................................... 19

Lampiran 2. Surat identifikasi bakteri Staphylococcus aureus .......................... 20

Lampiran 3. Bukti pengukuran dengan Microplate reader ................................ 21

Lampiran 4. Hasil pengukuran dengan Microplate reader ................................ 22

Lampiran 5. Sertifikat pengujian statistik dengan SPSS .................................... 23

Lampiran 6. Hasil perhitungan statistik .............................................................. 24


xiii

ABSTRAK

Latar belakang: Kejadian resistensi ampicillin oleh Staphylococcus aureus terus

meningkat menjadikan tantangan penemuan senyawa antimikroba baru,

memanfaatkan tanaman obat atau mengkombinasi senyawa antimikroba.

Kombinasi dapat dilakukan antara antibiotik dan tanaman obat yang memiliki

aktivitas antimikroba. Daun sirih diketahui memiliki efek sebagai antimikroba.

Dalam penelitian ini, efek kombinasi ekstrak metanol daun sirih (EMDS) dan

ampicillin (AMP) diuji untuk mengetahui efek dalam kombinasi.

Metode: Rancangan penelitian ini adalah post-test only control group design.

Metode Checkerboard dengan modifikasi digunakan untuk menentukan nilai

Minimal Inhibitory Concentration (MIC) dengan melihat Optical Density (OD).

Dari nilai MIC, dihitung nilai Fractional Inhibitory Concentration (FIC) untuk

menentukan efek yang terjadi dalam kombinasi. Data hasil pengukuran OD diuji

secara statistik dengan ANOVA dan perbedaan tiap kelompok diuji dengan post-

hoc TukeyHSD.

Hasil: MIC EMDS yang dipilih adalah 25 mg/ml, AMP tunggal 20 μg/ml, EMDS

dalam kombinasi 25 mg/ml, AMP dalam kombinasi 20 μg/ml. Nilai FIC: 2 yang

menunjukan efek dalam kombinasi adalah indifferent atau tidak ada perbedaan.

Analisis statistik dengan ANOVA menunjukan adanya perbedaan tiap perlakuan

(p < 0,05) dan terdapat perbedaan bermakna antara kombinasi dan ekstrak

metanol daun sirih tunggal (p= 0,02).

Kesimpulan: Nilai FIC kombinasi AMP dan EMDS dalam menghambat

Staphylococcus aureus adalah 2 yang menunjukan efek indifferent.

Kata kunci: ampicillin, kombinasi, daun sirih, checkerboard, MIC, FIC,

indifferent


xiv

ABSTRACT

Background: The develompment of ampicillin resistance by Staphylococcus

aureus making the challenge of discovering new antimicrobial compounds,

utilizing medicinal plants or combining antimicrobial compounds. Combinations

can be made between antibiotics and medicinal plants that have antimicrobial

activity. Piper betle L. leaf is known to have antimicrobial effect. In this study,

effect of Piper betle L. leaf methanol extract (EMDS) and ampicillin (AMP) was

tested to determine effect in combination.

Method: This study used post-test only control group design. Checkerboard

method with modification is used to determine Minimum Inhibitory Concentration

(MIC) by looking at Optical Density (OD). From MIC, the Fractional Inhibitory

Concentration (FIC) is calculated to determine the effect in combination. The OD

measurement were tested statistically with ANOVA and the differences in each

group were calculated with post-hoc TukeyHSD.

Results: MIC EMDS alone was 25 mg/ml, AMP alone 20 μg/ml, EMDS in

combination 25 mg/ml, AMP in combination 20 μg/ml. FIC: 2 which indicated

indifferent effect in combination. Statistical analysis with ANOVA showed the

difference of each treatment (p <0.05) and there was significant difference

between combination and EMDS alone (p=0,02).

Conclusion: The FIC of combination AMP and EMDS in inhibiting

Staphylococcus aureus was 2 which showed indifferent effect.

Keywords: ampicillin, combination, Piper betle leaf, checkerboard, MIC, FIC,

indifferent


1

PENDAHULUAN

Penyakit infeksi masih merupakan salah satu masalah kesehatan yang

menyebabkan kesakitan dan kematian masyarakat, khususnya pada negara

berkembang. Central for Disease Control and Prevention (2013) mencatat

jumlah kunjungan pasien ke fasilitas kesehatan untuk penyakit infeksi

sebanyak 19,3 juta. Penemuan antimikroba seperti antibiotik telah dilakukan

dan memberikan efek positif dalam menurunkan jumlah morbiditas dan

mortalitas akibat penyakit infeksi bakteri. Salah satu spesies bakteri yang

menjadi perhatian adalah Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus

merupakan bakteri Gram positif yang merupakan flora normal yang terdapat

pada kulit, nasofaring, saluran gastrointestinal, dan rektum (Brooks dkk.,

2013). Staphylococcus aureus dapat mengakibatkan penyakit karena

kemampuannya bermultiplikasi, menyebar pada jaringan, memproduksi

toksin yang memicu terjadinya bakteremia, dan menyebabkan nanah yang

menyebar luas di seluruh tubuh (Brooks dkk., 2013).

Selain masalah infeksi, masalah lain yang muncul adalah beberapa strain

Staphylococcus aureus menjadi resisten terhadap beberapa jenis antibiotik.

Salah satu jenis antibiotik yang dilaporkan adalah ampicillin. Naik dan Teclu

(2009) melaporkan bahwa tingkat resistensi isolat Staphylococcus aureus yang

diisolasi dari pegawai rumah sakit di Eritrea terhadap ampicillin sebesar 85%

dan tingkat resistensi isolat Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

(MRSA) terhadap ampicillin sebesar 96%.

Salah satu cara yang dapat dilakukan dalam mengatasi kejadian resistensi

adalah penggunaan tanaman obat sebagai alternatif antibiotic (Buhner, 1999).

Salah satu tanaman obat tanaman obat yang diyakini memiliki efek

antimikroba adalah tanaman sirih (Piper betle L.) khususnya pada bagian

daun. Banyak penelitian yang menunjukan bahwa ekstrak metanol daun sirih

menunjukan aktivitas antimikroba yang baik dalam menghambat

Staphylococcus aureus jika dibandingkan dengan ekstrak daun sirih dengan

pelarut lain. Contohnya penelitian oleh Khan dan Kumar (2011) melaporkan

ekstrak metanol daun Piper betle L. menunjukan zona hambat terhadap

Staphylococcus aureus lebih besar (25 mm) daripada ekstrak etanol (16 mm).


2

Penelitian Jayalakshmi dkk. (2013) juga menunjukan bahwa ekstrak metanol

daun Piper betle L. menunjukan diameter penghambatan paling besar (25 mm)

pada Staphylococcus aureus bila dibandingkan dengan ekstrak kloroform

(18.5 mm), etil asetat (20.5 mm) dan aqueous (0 mm).

Selain memanfaatkan tanaman obat, salah satu cara yang dapat dilakukan

adalah melakukan kombinasi obat antimikroba. Efek yang terjadi dalam

kombinasi dapat berupa: sinergis, apabila efek gabungan lebih kuat dari

jumlah efek agen tunggal; tidak ada perbedaan (indifferent), apabila efek

gabungan sama dengan efek masing-masing agen tunggal; antagonis, apabila

efek gabungan lebih lemah dari efek masing-masing agen tunggal (Blesson

dkk., 2015). Penelitian Nworu dan Esimone (2006) menunjukan kombinasi

antara Ampicillin dan Ciprofloxacin memberikan efek sinergis dalam

menghambat Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Selain kombinasi

antibiotik, terdapat pula penelitian kombinasi antibiotik dengan senyawa aktif

yang berasal tanaman. Taukoorah dkk. (2016) menyebutkan kombinasi

ekstrak daun sirih etil asetat, aqueous, dichloromethane dan kloramfenikol

serta ekstrak etanol daun sirih dengan streptomisin menunjukan efek sinergi.

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek yang terjadi dalam

kombinasi ekstrak metanol daun sirih dan antibiotik ampicillin dengan melihat

nilai Fractional Inhibition Concentration Index (FICIndex). Nilai FICIndex ≤ 0.5

menunjukan efek sinergis; FICIndex 0.5 – 4 indifferent, dan FICIndex > 4

menunjukan efek antagonis (Blesson dkk., 2015). Penelitian ini diharapkan

dapat memberikan informasi mengenai efek yang ditimbulkan dalam

mengkombinasi antibiotik ampicillin dan ekstrak metanol daun sirih terhadap

pertumbuhan Staphylococcus aureus dan menjadi pertimbangan untuk

penelitian selanjutnya dalam mengembangkan penggunaan daun sirih sebagai

pengobatan tambahan untuk penyakit yang disebabkan oleh Staphylococcus

aureus.


3

METODE PENELITIAN

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan antara lain: Alat-alat gelas (tabung reaksi, pipet

volume, erlenmeyer, cawan petri, labu takar, labu alas bulat 500 ml), blender,

oven, autoclave, shaker, rotary evaporator, pengayak, mikropipet, jarum ose,

pelubang sumuran, 96-well plate with Lid-Tissue Culture Treated Polystyrene

Flat Bottom, micro plate reader, inkubator, Biological Safety Cabinet (BSC)

Class II, nephelometer, alat destilasi (pendingin air balik, alat penampung, dan

tabung penerima), pemanas listrik, corong Buchner, timbangan analitik.

Bahan yang digunakan antara lain: bakteri Staphylococcus aureus, daun

sirih, ampicillin tablet 500 mg, Media Nutrient Agar (NA), Nutrient Broth

(NB), metanol teknis, toluene P, Dimetilsulfoksida (DMSO) 1%, aquadest,

Buffered Pepton Water (BPW).

Penyiapan bahan uji dan determinasi tanaman sirih

Daun sirih diperoleh dari daerah Sleman, Yogyakarta. Daun sirih yang

dipilih adalah daun sirih dengan permukaan halus, tidak berlubang, dan

berwarna hijau muda. Determinasi tanaman dilakukan di Fakultas Farmasi

bidang Biologi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Pembuatan simplisia daun sirih

Daun dipisahkan pengotor (tanah, rumput, bagian tanaman yang tidak

dibutuhkan, daun rusak dan dibersihkan dengan air mengalir sebanyak 3 kali.

Setelah dicuci, daun dipotong melintang hingga ukuran sedang atau kecil.

Setelah dipotong, daun dikeringkan dengan oven dengan suhu 30-45°C. Daun

yang telah kering diserbuk dengan blender dan diayak (Direktorat Jendral

Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011; Departemen Kesehatan RI,

1985).

Penetapan kadar air pada simplisia kering daun sirih

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode destilasi toluena menurut

Farmakope Herbal Indonesia (Direktorat Jendral Bina Kefarmasian

Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011). Prosedur kerja: Pereaksi toluen


4

jenuh air dibuat terlebih dahulu dengan cara mengocok toluen P dengan

sedikit air kemudian dipisahkan dengan air dengan corong pisah. 10 gram

simplisia kering daun sirih dan 200 ml toluen jenuh air dimasukan dalam labu.

Toluen jenuh air dimasukan ke tabung penerima melalui pendingin sampai

leher alat penampung dan labu dipanaskan selama 15 menit. Setelah toluen

mulai mendidih, penyulingan diatur dengan kecepatan lebih kurang 2 tetes tiap

detik, hingga sebagian besar air tersuling, kemudian kecepatan penyulingan

dinaikan hingga 4 tetes tiap detik selama 5 menit. Setelah selesai, tabung

penerima didinginkan hingga suhu ruang dan kemudian volume air dibaca

setelah air dan toluen terpisah. Kadar air dihitung dengan:

% Kadar air =volume air (ml)

berat simplisia yang ditimbang (g) x 100%

Pembuatan ekstrak metanol daun sirih

Pembuatan ekstrak metanol daun sirih dilakukan dengan maserasi menurut

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI (2010) dan jumlah serbuk yang

dimaserasi berjumlah 10 gram dan pelarut metanol sebanyak 100 ml. Tahapan:

10 gram serbuk daun sirih (10 bagian serbuk) dimasukan ke dalam erlenmeyer

kemudian dilarutkan dalam 75 ml pelarut metanol (75 bagian). Maserasi

dilakukan selama 2x24 jam dengan bantuan shaker. Hasil maserat yang

diperoleh disaring dengan corong Buchner yang dilapisi kertas saring dengan

bantuan pompa vakum. Serbuk hasil penyaringan dimaserasi dengan pelarut

baru sebanyak 25 ml selama 1x24 jam.

Hasil maserat pertama dan kedua kemudian diuapkan dengan rotary

evaporator pada suhu 60°C untuk menguapkan pelarut pada ekstrak. Ekstrak

diletakan pada cawan petri dan diuapkan kembali pada waterbath pada suhu

50-60°C untuk menghilangkan pelarut yang mungkin masih ada dalam

ekstrak. Ekstrak yang didapat merupakan ekstrak kental dengan bobot tetap

yang telah dipersyaratkan. Selanjutnya, rendemen dihitung dengan rumus:

% rendemen =bobot ekstrak (g)

bobot simplisia yang dihitung (g)


5

(Direktorat Jendral Bina Kefarmasian Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI,

2011).

Pembuatan larutan stok dan variasi konsentrasi ekstrak metanol daun

sirih

4 gram ekstrak kental ke dalam 10 ml DMSO 1% steril hingga diperoleh

konsentrasi larutan stok 400 mg/ml. Konsentrasi ekstrak metanol daun sirih

yang dibuat adalah 25, 50, 100, 200 mg/ml. Cara: larutan stok 400 mg/ml

diambil 5 ml dan ditambahkan DMSO 1% steril hingga 10 ml sehingga

konsentrasi 200 mg/ml. Pengenceran dilakukan dengan cara yang sama hingga

didapat konsentrasi 25 mg/ml.

Pembuatan larutan stok dan variasi konsentrasi ampicillin (AMP)

Tablet ampiciilin 500 mg digerus dan dilarutkan dalam 10 ml aquadest

steril sehingga didapat konsentrasi 50 mg/ml. Dari larutan 50 mg/ml diambil 4

ml kemudian ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml sehingga didapat

konsentrasi larutan 20 mg/ml. Dari konsentrasi 20 mg/ml diambil 2 ml

ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml untuk sehingga didapat larutan stok

4 mg/ml.

Konsentrasi ampicillin yang dibuat adalah 20, 40, 80 μg/ml. Cara: larutan

stok 4 mg/ml diambil 2.5 ml dan ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml

hingga didapat konsentrasi 1 mg/ml. Dari konsentrasi 1 mg/ml, diambil 1 ml

dan ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml sehingga didapatkan

konsentrasi ampicillin 0,1 mg/ml. Dari konsentrasi 0,1 mg/ml, diambil 4 ml

dan ditambahkan aquadest steril hingga 5 ml sehingga didapat konsentrasi 80

μg/ml. Dari konsentrasi 80 μg/ml, diambil 2,5 ml dan ditambahkan aquadest

steril hingga 5 ml sehingga didapat konsentrasi 40 μg/ml. Pengenceran

dilakukan dengan cara yang sama hingga didapat konsentrasi 20 μg/ml.

Penyiapan stok dan suspensi bakteri uji

Kultur bakteri Staphylococcus aureus diambil 2-3 ose ke Nutrient Broth

(NB) steril dan digores ke Nutrient Agar (NA) miring dan diinkubasi (37°C,

24 jam) untuk mendapatkan stok bakteri. Stok bakteri diambil secukupnya dan


6

diencerkan dengan Buffered Pepton Water (BPW) dan disetarakan

kekeruhannya dengan larutan standar Mc Farland 0.5 dengan nephelometer.

Penentuan Minimal Inhibitory Concentration (MIC) dengan metode

checkerboard

Metode checkerboard yang digunakan mengacu pada penelitian Hsieh

dkk. (1993) dengan modifikasi yakni hanya digunakan 3 seri konsentrasi

ampicillin dan EMDS dalam 96-well plate digunakan untuk menentukan

MIC. Pertumbuhan bakteri dideteksi dari nilai Optical Density (OD).

Pengukuran dilakukan dengan Microplate Reader di Laboratorium

Parasitologi, Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta

(Lampiran 3). Tiap perlakuan dilakukan 3 kali replikasi. MIC merupakan

konsentrasi terendah dari bahan uji yang menghambat pertumbuhan mikroba

(Herrera dkk., 2014).

Gambar 1. Rancangan Pengukuran dengan metode Checkerboard (Hijau

muda: variasi konsentrasi EMDS tunggal; Biru: variasi konsentrasi ampicillin

tunggal (kontrol positif); Kuning: kombinasi EMDS dan ampicillin; Abu-abu

(B1): blank media dan pelarut; Hijau tua B2: blank EMDS 25 mg/ml; Hijau

tua B3: blank EMDS 50 mg/ml; Hijau tua B4: blank EMDS 100 mg/ml;

Putih: well kosong)

Berikut penjelasan perlakuan:


7

a. Blank media dan pelarut (B1) berisi 50 μl NB dan pelarut aquadest,

DMSO 1%, dan BPW dengan perbandingan 1:1.

b. Blank ekstrak metanol daun sirih hanya berisikan variasi konsentrasi

ekstrak metanol daun sirih sebanyak 25 μl dibagi menjadi 3 yaitu: blank

ekstrak metanol daun sirih konsentrasi 25 mg/ml (B2), konsentrasi 50

mg/ml (B3), konsentrasi 100 mg/ml (B4).

c. Konsentrasi ampicillin yang diujikan adalah 20, 40, 80 μg/ml. Well B1-

D1, F1-H1, F2-H2 merupakan variasi konsentrasi ampicillin tunggal.

Cara: well diisi NB sebanyak 50 μl, 50 μl variasi konsentrasi ampicillin,

dan 50 μl suspensi bakteri.

d. Konsentrasi ekstrak metanol daun sirih yang diujikan adalah 25, 50, 100

mg/ml. Well A2-A10 merupakan variasi konsentrasi EMDS tunggal. Cara:

well diisi NB sebanyak 50 μl, 50 μl variasi konsentrasi EMDS , dan 50 μl

suspensi bakteri.

e. Well berwarna kuning adalah kombinasi ekstrak metanol daun sirih dan

ampicillin dengan berbagai variasi konsentrasi. Cara: well diisi NB

sebanyak 50 μl, 25 μl variasi konsentrasi EMDS, 25 μl variasi konsentrasi

ampicillin, dan 50 μl suspensi bakteri.

f. Kontrol pertumbuhan bakteri: 50 μl NB dan 50 μl suspensi bakteri.

Kontrol negatif: 50 μl NB dan pelarut aquadest, DMSO 1%, dan BPW

(masing-masing 17 μl), 50 μl suspensi bakteri.

Pengukuran nilai Fractional Inhibitory Concentration Index (FICIndex)

Penentuan nilai MIC digunakan dalam perhitungan nilai FICIndex.

Pengukuran nilai FICIndex bertujuan untuk melihat efek yang terjadi dalam

kombinasi. Adapun rumus perhitungan FICIndex menurut Hsieh dkk. (1993):

FICIndex =MIC EMDS dalam kombinasi

MIC EMDS tunggal+

MIC ampicillin dalam kombinasi

MIC ampicillin tunggal

Apabila nilai FICIndex ≤ 0.5, kombinasi menunjukan efek sinergis.

Apabila nilai FICIndex 0.5 – 4, kombinasi menunjukan indifferent

Apabila nilai FICIndex > 4, kombinasi menunjukan efek antagonis.


8

Analisis statistik

Analisis data pengukuran efek dalam kombinasi diukur secara statistik

yang diawali dengan menguji distribusi normalitas dengan uji Shapiro-Wilk.

Uji homogenitas dilakukan dengan uji Levene. Apabila didapati data

terdistribusi normal dan variansi data homogen, maka dilanjutkan dengan uji

One Way ANOVA. Apabila ditemukan perbedaan, maka dilanjutkan Post-Hoc

Tukey pada taraf kepercayaan 95%.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Tanaman yang digunakan dalam penelitian ini telah dilakukan determinasi

dengan melihat ciri-ciri tanaman tersebut. Hasil determinasi tanaman

ditunjukan pada surat keterangan (Lampiran 1.) yang menunjukan suku dan

spesies dari tanaman yang diidentifikasi adalah suku Piperaceae dan spesies

Piper betle L. sehingga tanaman yang digunakan dalam penelitian sudah

tepat. Daun sirih dikumpulkan dari daerah Sleman, Yogyakarta. Setelah

dikumpulkan, tahapan selanjutnya adalah:

1. Sortasi basah: untuk memisahkan kotoran atau bahan asing lainnya dari

bahan simplisia

2. Pencucian: menghilangkan pengotor yang melekat pada bahan simplisia

3. Perajangan: mempermudah proses pengeringan

4. Pengeringan: mengurangi kadar air pada bahan simplisia

5. Penyerbukan dan pengayakan: memperkecil ukuran partikel dan

memperbesar luas permukaan serbuk sehingga kontak pelarut dan serbuk

semakin besar dan mengoptimalkan proses penyarian).

Pada penelitian dilakukan penentuan kadar air dengan metode destilasi

toluena karena bahan simplisia diketahui memiliki senyawa termolabil (tidak

tahan panas) dan volatil. Adanya kelebihan air pada bahan simplisia akan

memudahkan pertumbuhan mikroba dan meningkatkan aktivitas enzim

tertentu untuk menguraikan senyawa aktif pada simplisia yang menyebabkan

penurunan mutu hingga kerusakan simplisia (Departemen Kesehatan RI,

1985). Menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan (2014), kadar air yang

dapat diterima adalah ≤ 10%.


9

Gambar 2. Penentuan kadar air daun sirih

Rumus perhitungan kadar air:

% 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑎𝑖𝑟 =𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑎𝑖𝑟 (𝑚𝑙)

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) 𝑥 100%

Volume air yang didapat adalah 0,2 ml dan berat serbuk yang ditimbang

adalah 9,9811 gram sehingga didapatkan % kadar air dalam simplisia adalah

2,0037%. Hasil menunjukan bahwa simplisia telah memenuhi persyaratan

kadar air yang ditetapkan yaitu tidak lebih dari 10%.

Proses ekstraksi dilakukan dengan maserasi. Maserasi dipilih karena

beberapa keuntungan yaitu dapat digunakan untuk mendapatkan senyawa

yang tak tahan panas, prosedur kerjanya sederhana dan mudah dilakukan

(Azmir dkk., 2013). Prinsipnya adalah perpindahan massa dari zat aktif yang

larut dari simplisia ke pelarut (Handa dkk., 2008). Hasil maserasi kemudian

disaring dengan corong buchner untuk memisahkan filtrat cair dan serbuk.

Filtrat cair kemudian diuapkan pada suhu 50-65 °C untuk menghilangkan

pelarut yang yaitu metanol yang diketahui titik didihnya adalah 65 °C

(International Labour Organization and World Health Organization, 2000).

Proses penguapan dilanjutkan hingga didapatkan ekstrak kental dengan

bobot tetap. Menurut Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat

Kesehatan (2011), bobot tetap diperoleh apabila perbedaan dua kali

penimbangan berturut-turut selama 1 jam tidak melebihi 0,5 mg. Rumus

perhitungan % rendemen:

% rendemen =bobot ekstrak kental (gram)

berat simplisia yang dihitung (g) x 100%


10

Bobot ekstrak kental yang didapat adalah 11,3313 gram dan berat serbuk

yang ditimbang adalah 59,9357 gram sehingga didapatkan % rendemen

adalah 18,9057 %.

Bakteri yang digunakan dalam penelitian telah melalui uji identifikasi

bakteri (Lampiran 2.) yang menunjukan bahwa bakteri uji yang digunakan

adalah bakteri Staphylococcus aureus. Sebelum digunakan, stok bakteri

diambil secukupnya dan diencerkan dengan Buffered Pepton Water (BPW)

kemudian disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar Mc Farland 0.5

agar jumlah bakteri yang digunakan untuk perlakuan tetap sama.

Dalam penelitian ini digunakan masing-masing 3 seri konsentrasi ekstrak

metanol daun sirih (25, 50, 100 mg/ml), ampicillin (20, 40, 80 μg/ml), serta

kombinasinya dan dilakukan replikasi 3 kali. Berikut rata-rata nilai

absorbansi bahan yang diujikan:

Tabel 1. Hasil Pengukuran Absorbansi atau Optical Density Ekstrak

Metanol Daun Sirih (EMDS), Ampicillin (AMP), dan Kombinasinya

Kelompok Mean ± SD

AMP 20 μg/ml 0,2844 ± 0,0225

AMP 40 μg/ml 0,2774 ± 0,0066

AMP 80 μg/ml 0,2674 ± 0,0130

EMDS 25 mg/ml 0,1345± 0,0342

EMDS 50 mg/ml 0,0597± 0,0135

EMDS 100 mg/ml 0,1659± 0,0115

Kombinasi AMP 20 μg/ml dan EMDS 25 mg/ml 0,2334± 0,0151









Kontrol Pertumbuhan Bakteri 0,4050± 0,0327

Kontrol Negatif 0,4140± 0,0463


11

N=3

*Nilai absorbansi perlakuan sudah dikurangi absorbansi blank media, pelarut, dan blank ekstrak

metanol daun sirih.

Minimun Inhibitory Concentration (MIC) merupakan konsentrasi terendah

dari bahan uji yang menghambat pertumbuhan mikroba (Herrera dkk., 2014).

MIC ditentukan berdasarkan nilai Optical Density (OD) atau absorbansi

dengan microplate reader. Kekeruhan menjadi indikator dalam menentukan

pertumbuhan atau konsentrasi bakteri. Cahaya yang ditransmisikan dari

sampel atau suspensi bakteri akan ditangkap oleh detektor kemudian

dikonversi menjadi absorbansi atau Optical Density (OD). Semakin keruh

suatu kultur, maka semakin banyak jumlah sel bakteri. (Duran dkk., 2014;

World Health Organization, 2008). Penurunan nilai OD perlakuan jika

dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan bakteri (tanpa bahan uji)

menunjukan adanya penurunan jumlah sel yang menandakan adanya

penghambatan pertumbuhan bakteri. Tabel 1 menunjukan MIC EMDS

tunggal adalah 25 mg/ml, MIC AMP tunggal adalah 20 μg/ml, MIC EMDS

dalam kombinasi adalah 25 mg/ml, dan MIC AMP dalam kombinasi adalah

20 μg/ml.

Setelah menentukan nilai MIC, dilakukan perhitungan nilai FICIndex untuk

mengetahui efek dalam kombinasi dengan rumus:

FICIndex =MIC EMDS dalam kombinasi

MIC EMDS tunggal+

MIC ampicillin dalam kombinasi

MIC ampicillin tunggal,

sehingga nilai FICIndex yang terhitung: FICIndex =25

25+

20

20= 2 , yang

menunjukan efek yang terjadi dalam kombinasi adalah indifferent (nilai

FICIndex 0.5 - 4).

Analisis statistik untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antara

kelompok pertumbuhan bakteri, kontrol negatif, kombinasi dengan masing-

masing tunggalnya yang terpilih sebagai MIC. Hasil perhitungan statistik

(Lampiran 6.) dengan uji Shapiro-Wilk mendapati data terdistribusi normal.

Uji variansi levene mendapati data memiliki variansi homogen. Syarat

pengujian ANOVA terpenuhi sehingga dilakukan uji perbandingan lebih dari

dua kelompok dengan ANOVA-One Way. Hasil uji ANOVA menunjukan


12

adanya perbedaan signifikan pada data dengan nilai p dibawah 0,05 sehingga

dilanjutkan uji Post-Hoc Tukey yang disajikan pada tabel berikut:

Tabel 2. Hasil Uji Post Hoc dengan taraf kepercayaan 95 %

Perlakuan yang dibandingkan Nilai p Makna

Kontrol Pertumbuhan Kontrol Negatif 0,996 Tidak berbeda bermakna

EMDS tunggal 0,000 Berbeda bermakna

AMP tunggal 0,004 Berbeda bermakna

Kombinasi 0,000 Berbeda bermakna

EMDS tunggal AMP tunggal 0,001 Berbeda bermakna

Kombinasi 0,020 Berbeda bermakna

AMP tunggal Kombinasi 0,310 Tidak berbeda bermakna

*EMDS= Ekstrak Metanol Daun Sirih; AMP= Ampicillin

Tanaman kaya akan metabolit sekunder yang membentuk mekanisme

pertahanan melawan patogen sehingga memberikan efek antimikroba pada

berbagai jenis mikroba. Senyawa-senyawa dalam tanaman diketahui multi-

target yang berperan dalam menurunkan kemungkinan terjadinya peningkatan

kejadian resistensi. Penggunaan agen tunggal seiring waktu terus mengalami

kejadian resistensi sehingga kombinasi antimikroba memiliki efikasi yang

lebih baik untuk mengatasi bakteri patogen multi-drug resistant jika

dibandingkan dengan agen tunggal (Kyaw dkk., 2013).

Efek dalam kombinasi disebut indifferent apabila efek gabungan sama

dengan efek dari masing-masing agen tunggal (Blesson dkk., 2015). Ada

beberapa kemungkinan yang ditemukan mengenai efek indifferent dalam

kombinasi. Kemungkinan pertama dapat disebabkan oleh efek dari kedua

bahan yang diuji memiliki tempat pengikatan yang sama dari target aksi yang

sama sehingga terjadi aksi yang overlapping dan menghasilkan efek

indifferent. Jayamaran dkk. (2010) menyebutkan bahwa ciprofloxacin yang

targetnya adalah DNA gyrase dan DNA topoisomerase IV dapat

menimbulkan efek indifferent dengan beberapa senyawa dari tanaman seperti

quercetin dan myricetin yang juga mekanisme aksinya terikat pada DNA dan

menginduksi kerusakan DNA. Kemungkinan kedua dapat disebabkan adanya

interaksi secara molekuler antara antibiotik dan senyawa dari tanaman. Hu

dkk. (2002) menyebutkan kombinasi vankomisin dan epigallocatechin gallate


13

(EGCg) menunjukan efek indifferent karena EGCg dapat terikat secara

langsung pada struktur peptida antibiotik sehingga pada rasio tertentu dapat

menunjukan efek indifferent hingga antagonis.

Dalam penelitian ini, peneliti menduga adanya senyawa dari tanaman yang

memiliki mekanisme yang sama seperti antibiotik ampicillin sehingga efek

yang ditimbulkan dalam kombinasi adalah indifferent. Ampicillin memiliki

mekanisme aksi yaitu mengikat 1 atau lebih penicillin-binding protein (PBP)

yang ada pada membran sitoplasma (Castle, 2007). Ampicillin yang terikat

pada reseptor PBP menghambat reaksi transpeptidasi sehingga sintesis

peptidoglikan untuk pembentukan dinding sel terhambat. Dinding sel yang

lemah tidak dapat menahan enzim autolitik sehingga menyebabkan sel lisis

(Castle, 2007; Brooks dkk., 2013; Madigan dkk., 2015). Daun sirih diketahui

memiliki senyawa utama seperti carvacrol, eugenol, hydroxychavicol

(Ningrum dkk., 2014; Syahidah dkk., 2017). Menurut penelitian Oyedemi

dkk. (2009), eugenol memberikan kerusakan pada dinding sel (menginduksi

lisisnya sel) dan menyebabkan kebocoran protein. Carvacrol diketahui

memiliki mekanisme dalam meningkatkan permeabilitas membran sel dan

menganggu dinding sel (Haroun dan Al-Kayali, 2016). Hydroxychavicol

memiliki mekanisme mengubah struktur membran sel sehingga menganggu

permeabilitas membran mikroba (Sharma dkk., 2009). Adanya kesamaan

mekanisme target aksi dalam menghambat pertumbuhan bakteri dapat

menjadi salah satu alasan efek dalam kombinasi ekstrak metanol daun sirih

dan ampicillin pada rentang konsentrasi yang diujikan masih dikategorikan

indifferent.

Terapi kombinasi dapat menghasilkan efek sinergi dalam mengobati

infeksi bakteri dan telah menunjukan penghambatan terhadap kejadian

resistensi. Sebagai contoh, methicillin dan vankomisin yang merupakan

inhibitor sintesis dinding sel bakteri jika dikombinasi dengan senyawa

triterpenoid pentasiklik (triterpenoid pentasklik memiliki struktur yang

berbeda dari kedua antibiotik tersebut) menunjukan efek sinergi karena

bekerja pada target aksi yang berbeda (Chung dkk., 2011).


14

Tanaman herbal memiliki campuran bioaktif yang kompleks. Hal ini

menyebabkan tanaman herbal sulit untuk dinilai kontribusinya dari masing-

masing komponen dari keseluruhan aktivitas yang ditimbulkan dan sulit

untuk mengevaluasi kemungkinan interaksi yang terjadi dengan obat

(Williamson dkk., 2009). Masih sedikit penelitian yang membahas

mekanisme aksi yang menyebabkan efek indifferent dalam kombinasi

sehingga perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk mengetahui interaksi yang

terjadi dalam kombinasi.

KESIMPULAN DAN SARAN

Nilai Fractional Inhibitory Concentration (FICIndex) kombinasi ampicillin

dan ekstrak metanol daun sirih dalam menghambat Staphylococcus aureus

adalah 2 yang menunjukan efek indifferent atau tidak ada perbedaan.

Saran, perlu dilakukan penambahan seri konsentrasi sehingga dapat

menilai lebih jelas Minimal Inhibitory Concentration ekstrak metanol daun

sirih dan antibiotik ampicillin. Selain itu, dapat dilakukan identifikasi

senyawa lebih lanjut dari ekstrak metanol daun sirih dengan kromatografi

untuk memastikan komponen bioaktif yang ada dalam ekstrak metanol daun

sirih.


15

DAFTAR PUSTAKA

Azmir, J., Zaidul, I.S.M., Rahman, M.M., Sharif, K.M., Mohamed, A., Sahena, F.,

Jahurul, M.H.A., Ghafoor, K., Norulaini, N.A.N., Omar, A.K.M., 2013.

Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials: A

review. Journal of Food Engineering, Vol. 117, 426–436.

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010. Acuan Sediaan Herbal. Volume 5,

Edisi 1, Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan, 6-8.

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2014. Peraturan Kepala Badan Pengawas

Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor 12 Tahun 2014 Tentang

Persyaratan Mutu Obat Tradisional. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan

Makanan, 9-11.

Blesson, J., Saji, C.V., Nivya, R.M., Kumar, R., 2015. Synergistic Antibacterial

Activity of Natural Plant Extracts and Antibiotics Against Methicillin

Resistant Staphylococcus aureus (MRSA). World Journal Of Pharmacy

And Pharmaceutical Sciences, 4(3), 741-763.

Brooks, G.F., Carroll, K.C., Butel, J.S., Stephen A. Morse, S.A., Timothy A.

Mietzner, T.A., 2013. Medical Microbiology. 26th ed., USA: McGraw-

Hill Companies, 166, 202, 372.

Buhner, S.H., 1999. Herbal Antibiotics : Natural Alternatives for Treating Drug-

Resistant Bacteria. United States: R.R. Donnelley, 17-19.

Castle, S.S., 2007. xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference.

Nethderland: Elsevier, 905-909.

Central for Disease Control and Prevention, 2013, Infectious Disease,

https://www.cdc.gov/nchs/fastats/infectious-disease.htm, diunduh 18

Februari 2017.

Chung, P.Y, Navaratnam, P., Chung, L.Y., 2011. Synergistic antimicrobial

activity between pentacyclic triterpenoids and antibiotics against

Staphylococcus aureus strains. Annals of Clinical Microbiology and

Antimicrobials, 10(25), 1-4.

Departemen Kesehatan RI, 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta:

Departemen Kesehatan RI, 1-18.


16

Departemen Kesehatan RI, 2000. Parameter Standar Umum Esktrak Tumbuhan

Obat. Cetakan 1, Jakarta: Departemen Kesehatan RI, 9-12.

Direktorat Jendral Bina Kefarmasian Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011.

Farmakope Herbal. Suplemen II. Edisi I, Jakarta: Kementerian Kesehatan

RI, 110-111.

Duran, N., Silvia, S.G., Oswaldo, L..A., 2014. Nanotoxicology: Material,

Methodologies, and Assessment. New York: Springer, 372.

Handa, S.S., Khanuja, S.P.S., Longo, G., Rakes, D.D., 2008. Extraction

Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. Italy: United Nations

Industrial Development Organization and the International Centre for

Science and High Technology, 22, 31.

Haroun, M.F., Al-Kayali, R., 2016. Synergistic effect of Thymbra spicata L.

extracts with antibiotic against multidrug-resistant Staphylococcus aureus

and Klebsiella pneumoniae strains. Iranian Journal of Basic Medical

Sciences, 19, 1193-1200.

Herrera, A.H., Ospina, L.F., Fang, L., Caballero, A.D., 2014. Susceptibility of

Porphyromonas gingivalis and Streptococcus mutans to Antibacterial

Effect from Mammea americana. Advances in Pharmacological Sciences,

2014, 1-6.

Hsieh, M.H., Yu, C.M., Yu, V.L., Chow, J.W., 1993. Synergy Assessed by

Checkerboard. Diagn. Microbiol. Infect Dis., Vol. 16, 343-349.

Hu, Z.Q., Zhao, W.H., Yoda, Y., Nozomi, A., Yukihiko, H., Tadakatsu, S., 2002.

Additive, indifferent, and antagonistic effect in combinations of

epigallocatechin gallate with 12 non-ß-lactam antibiotics against

methicillin-resistant staphylococcus aureus. Journal of Antimicrobial

Chemotherapy, 1-4.

International Labour Organization and World Health Organization, 2000.

Methanol. Belgium: European Commision, 1.

Khan, J.A., Kumar, N., 2011. Evaluation of Antibacterial Properties of Extracts of

Piper betel Leaf. JPBMS, 11(1), 1-3.


17

Kyaw, B.M., Arora, S., Lim, C.S., 2012. Bactericidal Antibiotic Phytochemical

Combination Against Methicillin Resistant Staphylococcus aureus.

Brazilian Journal of Microbiology, 938-945.

Jayalakshmi, A., Raveesha, K.A., Murali, M., Amruthesh, K.N., 2013.

Phytochemical, Antibacterial And Antioxidant Studies On Leaf Extracts

Of Piper Betle L. Int J Pharm Pharm Sci, 7(10), 23-29.

Jayamaran, P., Meena, K.S., Chu, S.L., Thean, H.T., Kishore, R.S., 2010. Activity

and interacion of antibiotic and phytochemical combinations against

Pseudomonas aeruginosa in vitro.Int. J. Biol. Sci., 6, 556-568.

Madigan, M.T., Martinko, J.M., Bender, K.S., Buckley, D.H., Stahl, D.A., 2015.

Brock biology of microorganisms. 14th ed., USA: Pearson Education, 814,

843, 868-869.

Naik, D. Dan Teclu, A., 2009. A study on antimicrobial susceptibility pattern in

clinical isolates of Staphylococcus aureus in Eritrea. Pan African Medical

Journal, 3 (1), 1-5.

Ningrum, M.R., Abdul, C., Syamsuddin, D., Edi, P.U., 2014. Pengaruh Pemberian

Ekstrak Daun Sirih Sebagai Fungisida Nabati terhadap Penyakit Hawar

Daun Jagung pada Konsentrasi yang Berbeda. Jurnal Hama dan Penyakit

Tumbuhan, 2 (1), 1-6.

Nworu, C.S., Esimone, C.O., 2006. Comparative Evaluation of Three In Vitro

Techiniques in the Interaction of Ampicillin and Ciprofloxacin against

Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Tropical Jpurnal of

Pharmaceutical Research, 5(2), 605-611.

Oyedemi, S.S., Okoh, A.I., Mabinya, L.V., Pirochenva, G., Afolayan, A.J., 2009.

The proposed mechanism of bactericidal action eugenol, α-terpineol, γ-

terpinene against Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogenes,

Proteus vulgaris, and Escherichia coli. African Journal of Technology,

8(7), 1280-1286.

Sendy, V.A.A., Pujiastuti, P., dan Ernawati, T., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak

Daun Sirih Merah terhadap Porphyromonas gingivalis. Artikel Ilmiah

Hasil Penelitian Mahasiswa Universitas Jember, 1-5.


18

Sharma, S., Inshad, A.K., Intzar, A., Furqan, A., Manoj, K.,Ashwani, K., 2009.

Evaluation of the Microbial, Antioxidant, and Anti-Inflammatory Activites

of Hydroxychavicol for Its Potential Use as an Oral Care Agent.

Antimicrob. Agents Chemother.,53, 216-222.

Syahidah A., Saad, C.R., Hassan, M.D., Rukayadi, Y., Norazian, M.H.,

Kamarudin, M.S., 2017. Phytochemical Analysis, Identification and

Quantification of Antibacterial Active Compounds in Betel Leaves, Piper

betle Methanolic Extract. Pak. J. Biol. Sci., 20 (2), 70-81.

Taukoorah, U., Lall, N., Mahomoodally, A., 2016. Piper betle L. (betel quid)

shows bacteriostatic, additive, and synergistic antimicrobial action when

combined with conventional antibiotics. South African Journal of Botany,

Vol. 105, 133–140.

Williamson, E., Samuel, D., Karen, B., 2009. Stockley’s Herbal Medicine

Interaction. USA: Pharmaceutical Press, 6.

World Health Organization, 2008. Maintenance manual for laboratory equipment.

2ed., Switzerland: World Health Organization, 1.


19

LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat determinasi tanaman (daun sirih)


20

Lampiran 2. Surat identifikasi bakteri Staphylococcus aureus


21

Lampiran 3. Bukti pengukuran dengan Microplate reader


22

Lampiran 4. Hasil pengukuran dengan Microplate reader


23

Lampiran 5. Sertifikat pengujian statistik dengan SPSS


24

Lampiran 6. Hasil perhitungan statistik

Test of Homogeneity of Variances

MIC

Levene Statistic df1 df2 Sig.

1,689 4 10 ,228

Tests of Normality

Kelompok

Shapiro-Wilk

Statistic df Sig.

MIC Kontrol Pertumbuhan Bakteri ,882 3 ,331

Kontrol Negatif ,869 3 ,293

MIC Ekstrak Metanol Daun Sirih ,927 3 ,479

MIC Antibiotik Ampicillin ,871 3 ,298

MIC Kombinasi EMDS dan Ampicillin ,977 3 ,708

a. Lilliefors Significance Correction

Descriptives

MIC

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimum Maximum

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol

Pertumbuhan

Bakteri

3 ,419644 ,0463257 ,0267462 ,304565 ,534724 ,3853 ,4723

Kontrol Negatif 3 ,410633 ,0327159 ,0188886 ,329362 ,491904 ,3733 ,4343

MIC Ekstrak

Metanol Daun

Sirih

3 ,134967 ,0342685 ,0197850 ,049839 ,220094 ,1073 ,1733

MIC Antibiotik

Ampicillin 3 ,289967 ,0225019 ,0129915 ,234069 ,345864 ,2643 ,3063

MIC Kombinasi

EMDS dan

Ampicillin

3 ,236333 ,0151767 ,0087623 ,198632 ,274034 ,2200 ,2500

Total 15 ,298309 ,1146566 ,0296042 ,234814 ,361804 ,1073 ,4723

ANOVA Source of SS df F P-value F crit


25

Variation

Between Groups 0,173795 4 42,38356 0,00000306742 3,47805

Within Groups 0,010251 10 Total 0,184047 14

Multiple Comparisons

Dependent Variable: MIC

Tukey HSD

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean

Difference (I-

J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol

Pertumbuhan

Bakteri

Kontrol Negatif ,0090110 ,0261468 ,996 -,077040 ,095062

MIC Ekstrak

Metanol Daun Sirih ,2846777

* ,0261468 ,000 ,198626 ,370729

MIC Antibiotik

Ampicillin ,1296777

* ,0261468 ,004 ,043626 ,215729

MIC Kombinasi

EMDS dan

Ampicillin

,1833110* ,0261468 ,000 ,097260 ,269362

Kontrol Negatif Kontrol

Pertumbuhan

Bakteri

-,0090110 ,0261468 ,996 -,095062 ,077040

MIC Ekstrak


* ,0261468 ,000 ,189615 ,361718

MIC Antibiotik

Ampicillin ,1206667

* ,0261468 ,007 ,034615 ,206718

MIC Kombinasi

EMDS dan

Ampicillin

,1743000* ,0261468 ,000 ,088249 ,260351

MIC Ekstrak

Metanol Daun Sirih

Kontrol

Pertumbuhan

Bakteri

-,2846777* ,0261468 ,000 -,370729 -,198626

Kontrol Negatif -,2756667* ,0261468 ,000 -,361718 -,189615

MIC Antibiotik

Ampicillin -,1550000

* ,0261468 ,001 -,241051 -,068949

MIC Kombinasi

EMDS dan

Ampicillin

-,1013667* ,0261468 ,020 -,187418 -,015315


26

MIC Antibiotik

Ampicillin

Kontrol

Pertumbuhan

Bakteri

-,1296777* ,0261468 ,004 -,215729 -,043626

Kontrol Negatif -,1206667* ,0261468 ,007 -,206718 -,034615

MIC Ekstrak


* ,0261468 ,001 ,068949 ,241051

MIC Kombinasi

EMDS dan

Ampicillin

,0536333 ,0261468 ,310 -,032418 ,139685

MIC Kombinasi

EMDS dan

Ampicillin

Kontrol

Pertumbuhan

Bakteri

-,1833110* ,0261468 ,000 -,269362 -,097260

Kontrol Negatif -,1743000* ,0261468 ,000 -,260351 -,088249

MIC Ekstrak


* ,0261468 ,020 ,015315 ,187418

MIC Antibiotik

Ampicillin -,0536333 ,0261468 ,310 -,139685 ,032418

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


27

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi bernama Angelica Rivera Santoso, lahir di

Palembang pada tanggal 12 Desember 1996. Penulis yang

akrab dipanggil Angel merupakan anak pertama dari dua

bersaudara dari pasangan Herman Santoso dan Juliana.

Penulis menempuh pendidikannya di SD Xaverius 1

Palembang, SMP Xaverius 1 Palembang, SMA Xaverius

1 Palembang, dan pada tahun 2014 melanjutkan

pendidikan di Program Studi Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Selama perkuliahan, penulis aktif dalam mengikuti kegiatan seminar, kepanitiaan

dan organisasi seperti Kampanye Informasi Obat, Pelepasan Wisuda 2, Latihan

Kepemimpinan 1, Student Exchange Programme, Badan Eksekutif Mahasiswa

Universitas Sanata Dharma 2015/2016, dan International Society for

Pharmaceutical Engineering Student Chapter Regional DIY-Jateng. Selain itu,

penulis juga pernah menjadi peserta lomba Olimpiade Farmasi Klinis Indonesia

dan Debat Nasional Kefarmasian UGM dan pernah melakukan program

pertukaran pelajar (Summer Student Exchange Programme) di Prague, Czech

Republic.


uji efek kombinasi antibiotik ampicillin dengan … · ibu dr. erna tri wulandari, ......

Documents