Tahapan Penelitian

Prosedur NA ( Kultur stock dan Fresh Stock )

1. NA miring (Mas Tanto) di kultur dengan menggunakan ose pada 2 media agar miring.2. Diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam

Keterangan :a. Kultur stock (digunakan apabila kita membutuhkan untuk melakukan pengamatan, dll)b. Fresh Stock (disimpan di dalam kulkas sebagai stock dan dapat bertahan 2 – 3 minggu ).

Prosedur NB (Dibuat Duplo)

1. Inokulum 5 mL dimasukkan ke dalam cuvet, selanjutnya akan diukur nilai absorbansi dan transmitansinya menggunakan spektrofotometer.

2. Panjang gelombang yang digunakan yaitu 600 nm. Kepadatan populasi bakteri dibandingkan dengan kurva tumbuh penelitian sebelumnya

Prosedur Pewarnaan Gram

1. Isolat bakteri dari media padat NA (ditambahkan dengan Aquades) diambil 1 ose dan digores-goreskan pada permukaan preparat steril kemudian dilakukan fiksasi.

2. Kristal violet sebanyak 1 tetes ditambahkan ke permukaan preparat yang terdapat lapisan bakteri tersebut dan didiamkan selama 1 menit. Setelah 1 menit, preparat dibilas dengan air sampai zat warna luntur. Preparat dikeringkan di atas api spiritus.

3. Setelah kering, larutan iod/lugol sebanyak 1 tetes ditambahkan ke permukaan preparat tersebut dan didiamkan selama 1 menit. Setelah 1 menit, preparat dibilas dengan air.

4. Preparat dibilas dengan alkohol 96% sampai semua zat warna luntur kemudian dicuci dengan air. Preparat dikeringkan di atas api spiritus.

5. Setelah kering, safranin sebanyak 1 tetes ditambahkan ke permukaan preparat dan didiamkan selama 45 detik/1menit. Preparat dicuci dengan air dan dikeringkan. Preparat diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran 1000x. Pewarnaan diulang untuk isolat bakteri B, C dan D.

Agar Miring

Agar Miring (NA)

stock kultur

fresh kultur

NB dibuat duplo OD Spektofotometer

Pewarnaan Gram

Kristal violet

Lugol

Aseton ALkohol

Safranin

TPCBisa dilakukan dilakukan

3x pengamatan

Jam Ke- Isolat BakteriA13 B33 C12 C23 D42 B42 A43 D21 A22

2468101214161820222426283032

Tabel Kurva Pertumbuhan Bakteri