skripsi betha purba praja rahmatika g1a012141
TRANSCRIPT
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 1/93
SKRIPSI
Pengaruh Ekstrak Methanol Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria
macrocarpa (Scheff. ) Boerl dan Metformin terhadap Gambaran HistologiTubulus Proksimal Ginjal
Studi pada Tikus Model Diabetes Melitus Tipe-2
Oleh :
Betha Purba Praj Rahmatika
G1A012141
KEMENTERIAN RISET TEKNOLOGI DAN PENDIDIKAN TINGGI
UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN
FAKULTAS KEDOKTERAN
JURUSAN KEDOKTERAN UMUM
PURWOKERTO
2016
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 2/93
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 3/93
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala rahmat,
hidayah, beserta karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi
dengan judul ”Pengaruh Ekstrak Methanol Daging Buah Mahkota Dewa
( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl dan Metformin terhadap Gambaran
Histologi Tubulus Proksimal Ginjal pada Tikus Model DM Tipe-2”. Sholawat
serta salam ditujukkan kepada Nabi Agung Muhammad SAW, beserta sahabat dan
pengikutnya yang selalu setia sampai akhir zaman.
Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan memperoleh
gelar Sarjana Kedokteran pada Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal
Soedirman Purwokerto tahun 2016. Penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak
lepas dari bantuan berbagai pihak yang telah memberikan dukungan moral
maupun material. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis menyampaikan
ucapan terima kasih, penghargaan, serta rasa hormat kepada:
1. dr. Fitranto Arjadi, M.Kes., selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Jenderal Soedirman sekaligus penelaah yang telah memberikan kesempatan
untuk melaksanakan penelitian, memberikan masukan dan saran, serta
semangat dalam menyelesaikan skripsi ini.
2.
dr. M. Zaenuri Syamsu Hidayat, Sp.KF., M.Si., Med., selaku Ketua Jurusan
Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman yang telah memberikan
kesempatan untuk melaksanakan penelitian skripsi ini.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 4/93
3. dr. Joko Setyono, M.Sc., selaku Ketua Komisi Skripsi Jurusan Kedokteran
Universitas Jenderal Soedirman yang telah berkenan memberikan izin kepada
penulis untuk melaksanakan penelitian.
4. dr. Alfi Muntafiah, M.Sc., selaku pembimbing satu yang senantiasa
meluangkan waktu untuk membimbing, mengarahkan serta memberikan
semangat untuk penulis dalam menyelesaikan skripsi.
5. dr. Nur Signa Aini Gumilas, M.Biotech., selaku pembimbing dua yang
berkenan membimbing serta selalu memberikan masukan selama penulisan
skripsi.
6. dr. Ika Murti Harini, M.Sc selaku wakil dari tim komisi skripsi yang berkenan
memandu rangkaian seminar dan memberikan masukan kepada penulis.
7. dr. Nendyah Roestijawati, M.KK selaku ketua komisi skripsi yang telah
mengizinkan terlaksananya penelitian dan seminar hasil skripsi.
8.
dr. Evy Sulistyoningrum, M.Sc yang telah memberikan masukan dan saran.
9. dr. Hidayat Sulistyo, Sp.PA.,M.Si.Med yang telah membantu, membimbing,
dan mengedukasi penulis dalam pengamatan preparat.
10. Pak Wahyu selaku laboran Laboratorium Riset FK Unsoed yang telah
membantu dalam menyelesaikan pengerjaan preparat.
11.
Pak Mumuh selaku laboran laboratorium farmakologi dan hewan coba FK
Unpad yang telah membantu penulis dalam pelaksanaan perlakuan hewan
coba.
12.
Kedua orang tua penulis, Ir. H. Sugiono, MT. dan Dra. Hj. Sri Wahyuni yang
selalu memberikan do’a, semangat, bantuan, perhatian, dan dorongan baik
material maupun spiritual kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 5/93
13. Kakak dan adik dari penulis, Alfa Adib Ash-Shiddiqi dan Gama Candra Tri
Kartika yang selalu memberikan semangat kepada penulis dalam
menyelesaikan skripsi ini.
14. Teman spesial saya Agnes Indah Nugraheni yang senantiasa memberikan
semangat dan dukungan moril kepada penulis menyelesaikan skripsi ini.
15.
Rekan seperjuangan penelitian, Emma Puspadhini, Siti Syifa Rabiah, Firyal
Maulia, Tomy Gyanovan, Qurrotu ‘Aini, dan M. Helrino Fajar yang
senantiasa memberikan semangat dan masukan kepada penulis untuk
menyelesaikan skripsi ini.
16. Teman-teman Kost Bunda, Andini Senja Andira, Nadya Marcia, Ong Rey,
Inez Ann Marie, Agung Maulana, Ghiyas Ulinnuha, Andika Rianil, Giga
Hasabi Alkarani, Rendy Faris Anggono, Dev Anand Pramakrisna, Lintang
Sandya yang telah memberikan semangat dalam menyelesaikan skripsi ini.
17.
Teman-teman angkatan 2012 (Hypoglossus) Kedokteran Unsoed yang
senantiasa memberikan dukungan dalam menyelesaikan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Oleh
karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun agar menjadi
lebih baik. Penulis berharap semoga skripsi ini bisa memberikan manfaat bagi
semua pihak.
Purwokerto, Januari 2016
Penulis
Betha Purba Praj Rahmatika
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 6/93
iii
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................. ii
DAFTAR ISI ..................................................................................................... iii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ vDAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... vi
ABSTRAK ......................................................................................................... vii
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang ....................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah .................................................................................. 4
C. Tujuan Penelitian ................................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian ................................................................................. 5
II. TINJAUAN PUSTAKAA.
Landasan Teori
1. Mahkota Dewa ................................................................................. 6
2. Diabetes Melitus Tipe 2 ................................................................... 8
1) Definisi DM Tipe 2 .............................................................. 8
2) Patofisiologi ......................................................................... 9
3) Komplikasi DM Tipe 2 ........................................................ 10
4) Stress Oksidatif DM Tipe 2.................................................. 10
5)
Nefropati Diabetikum........................................................... 14
6) Atrofi dan Fibrosis Tubulus Proksimal Ginjal ..................... 15
3. Metformin ........................................................................................ 18
4. Streptozotocin dan Nicotinamid ....................................................... 20
B. Kerangka Teori....................................................................................... 22
C. Kerangka Konsep ................................................................................... 23
D. Hipotesis ................................................................................................. 23
III. METODE PENELITIAN
A.
Materi dan Bahan ................................................................................... 24
1. Hewan coba ...................................................................................... 24
2. Alat dan Bahan ................................................................................. 25
B. Metode Penelitian................................................................................... 26
C. Rancangan Percobaan ............................................................................ 27
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 7/93
iv
D. Variabel Penelitian ................................................................................. 28
E. Definisi Operasional............................................................................... 29
F. Cara Mengukur Variabel ........................................................................ 31
G.
Tata Urutan Kerja ................................................................................... 32
1. Persiapan hewan coba ...................................................................... 32
2. Pembuatan ekstrak ........................................................................... 32
3. Pemberian perlakuan ........................................................................ 33
4. Pengambilan dan fiksasi organ ........................................................ 34
5. Pembuatan preparat mikroskopis ..................................................... 34
6. Pengamatan mikroskopis dan dokumentasi ..................................... 36
7. Pengolahan dan analisis data ............................................................ 37
H. Analisis Data .......................................................................................... 37
I. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................ 37
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A.
Hasil Penelitian ....................................................................................... 39
1. Pelaksanaan penelitian ..................................................................... 39
2. Glukosa Darah Tikus ....................................................................... 40
3. Pengamatan Atrofi Tubulus Proksimal Ginjal ................................. 42
B.
Pembahasan............................................................................................. 46
C. Keterbatasan Penelitian ........................................................................... 54
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ............................................................................................. 55
B. Saran........................................................................................................ 56
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 57
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 8/93
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Tanaman Mahkota Dewa........................................................... 6
Gambar 2.2 Fibrosis Tubulus Proksimal Ginjal............................................. 18
Gambar 2.3 Atrofi Tubulus Proksimal Ginjal................................................ 18
Gambar 2.4 Kerangka Teori........................................................................... 22
Gambar 2.5 Kerangka Konsep....................................................................... 23
Gambar 4.1 Glukosa Darah Pre, Post Induksi dan post perlakuan................ 41
Gambar 4.2 Gambaran Mikroskopis Tubulus Proksimal Ginjal…………… 44
Gambar 4.3 Rerata (SD) Skor Atrofi Tubulus Proksimal Ginjal…………... 45
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 9/93
vi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Alur Penelitian .................................................................... 63
Lampiran 2. Penentuan Dosis ............................................................................. 64
Lampiran 3. Aspek Etik Penelitian ..................................................................... 65
Lampiran 4. Pemeriksaan Glukosa Darah Metode GOD-PAP ........................... 66
Lampiran 5. Kandungan Pakan Hewan Coba ..................................................... 67
Lampiran 6. Data Induk Glukosa Darah Hewan Coba ....................................... 68
Lampiran 7. Uji Normalitas Glukosa Darah Hewan Coba ................................. 69
Lampiran 8. Analisis T-Tes Berpasangan Glukosa Darah Hewan Coba ............ 70
Lampiran 9. Uji Interrater Reliability Kappa ..................................................... 71
Lampiran 10 Uji normalitas data Saphiro-Wilk .................................................. 72
Lampiran 11. Uji non parametrik Kruskall-Wallis. ............................................ 73
Lampiran 12. Uji Analisis post hoc Mann-Whitney ........................................... 74
Lampiran 13. Ethical Approval .......................................................................... 78
Lampiran 14. Determinasi Tumbuhan ................................................................ 79
Lampiran 15. Dokumentasi ................................................................................ 80
Lampiran 16. Surat Pernyataan Penelitian .......................................................... 81
Lampiran 17. Riwayat Hidup ............................................................................. 82
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 10/93
vii
Pengaruh Ekstrak Methanol DagingBuah Mahkota Dewa (Phaleri a macrocarpa
(Scheff. ) Boerl dan Metformin terhadap Gambaran Histologi Tubulus
Proksimal Ginjal pada Tikus Model DM Tipe-2
Studi pada Tikus Model Diabetes Melitus Tipe-2
ABSTRAK
Prevalensi diabetes melitus (DM) tipe-2 di Indonesia semakin meningkat.
Hiperglikemia pada DM menginduksi peningkatan ROS dan menyebabkan
glukotoksisitas pada sel tubulus ginjal. Kondisi tersebut mengakibatkan atrofi seltubulus proksimal ginjal. Mahkota dewa diketahui memiliki efek antihiperglikemia
dan antioksidan yang dapat memperbaiki gambaran atrofi tubulus proksimal ginjal.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak methanol dagingmahkota dewa dan metformin terhadap gambaran tubulus proksimal ginjal pada tikusmodel DM tipe-2. Tiga puluh ekor tikus putih galur Sprague Dawley dibagi ke dalam
enam kelompok yaitu: kelompok A (kontrol sehat), kelompok B (kontrol sakit),
kelompok C, D, E (tikus diabetik+ekstrak methanol mahkota dewa 200 mg/kgBB,250 mg/kgBB, 300 mg/kgBB), dan kelompok F (tikus diabetik+metformin 150
mg/kgBB). Perlakuan dilakukan selama 21 hari. Hari ke-22 tikus diterminasi dan
diambil ginjalnya kemudian dibuat sediaan dengan pewarnaan Periodic Acid Schiff .
Pengamatan atrofi tubulus proksimal ginjal dilakukan dengan memilih 10 tubulussecara acak dan dihitung dalam 5 lapang pandang. Atrofi tubulus diklasifikasikan
berdasarkan kriteria skoring 0-4 dimana 0 = 0%, 1= <10%, 2 = 10%-25%, 3 = 26%-
50%, 4 = >50%. Uji Kruskall-Wallis menunjukkan terdapat perbedaan bermakna skoratrofi tubulus proksimal ginjal pada minimal 2 kelompok perlakuan dengan nilai
(p=0,001). Dilanjutkan uji Mann-Whitnney yang menunjukkan hasil signifikan pada
kelompok A dengan B (p=0,016), B dengan C (p=0,029), B dengan E (p=0,016), Bdengan F (p=0,029) dan tidak signifikan pada kelompok C dengan D (0,686), D
dengan E (p=0,190), E dengan F (p=0,556). Hasil penelitian menunjukkan dosis
mahkota dewa 250 mg/kgBB dan metformin 150 mg/kgBB memiliki skor rerata
atrofi tubulus proksimal yang sama sebesar (1,75±0,5).
Kata kunci : diabetes melitus, mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa), metformin,
tubulus proksimal ginjal, skor atrofi
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 11/93
viii
The Effect Of Methanol Extract Of Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa
(Scheff.) Boerl.) Mesocarp and Metformin On Histological Structure Of Renal
Proximal Tubules
Study in Type 2 Diabetes Mellitus Rat Models
ABSTRACT
The prevalence of type 2 Diabetes mellitus (DM) in Indonesia continues to increase.
Hyperglycemia in DM induces the increase of reactive oxygen species (ROS) causing
glucotoxicity to renal proximal tubular cells atrophy. Mahkota Dewa known for
having antihyperglycemia and antioxidant effect which decrease renal proximal
tubular cells atrophy. The purpose of this study is to investigate the effect of
methanol extract of mahkota dewa and metformin on renal proximal tubuleshistogical changes in type 2 DM rat models. Thirty albino rats were divided into 6
groups. Group A (healthy control), group B (diabetic control), group C (MD 200
mg/kgBW/day), group D (MD 250 mg/kgBW/day), group E (MD 300
mg/kgBW/day), and group F (metformin 150 mg/kgBW/day). All of the rats were
treated using aquades, metformin, and mahkota dewa methanol extract for 21 days.
Termination was done at the 22nd day to take the kidney for renal histological
staining using Periodic Acid Schiff. Renal proximal tubular atrophy observation was
done by choosing 10 tubules randomly in 5 fields of view. Tubular atrophy was
classified by score 0-4: 0 = 0%, 1= <10%, 2 = 10%-25%, 3 = 26%-50%, 4 = >50%.
Kruskall-Wallis test result was significant (p=0,001) which means there weredifferences in mean of tubular atrophy scores in 2 groups minimum. Post hoc test
Mann-Whitney result was significant: group A and B (p=0,016), B and C (p=0,029),
B and E (p=0,016), B and F (p=0,029) and not significant in group C and D (0,686),
D and E (p=0,190), E and F (p=0,556). The result of this study showed methanol
extract of mahkota dewa 250mg/kgBW/day and metformin 150mg/kgBW/day had
the same mean of tubular atrophy score (1,75±0,5).
Keywords : diabetes mellitus, mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa), metformin,
renal proximal tubular, atrophy scores
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 12/93
1
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Diabetes melitus (DM) merupakan suatu kelompok penyakit metabolik
dengan karakteristik hiperglikemia kronik yang terjadi karena defek sekresi
insulin, kerja insulin atau kedua-duanya (Power, 2008; PERKENI, 2006).
Prevalensi DM di dunia terus meningkat. Di dunia pada tahun 2010, prevalensi
DM pada usia 20-79 tahun mencapai 6,4%. Pada tahun 2014 jumlah penderita
DM sebesar 387 juta jiwa dan diperkirakan tahun 2030 akan meningkat hingga
7,7%. Penderita DM diperkirakan pada tahun 2035 meningkat menjadi 592 juta
penderita. Pada tahun 2010 Indonesia menduduki rangking kelima jumlah
penderita diabetes terbanyak setelah China, India, Amerika Serikat dan Rusia
(Sicree et al., 2010). Tahun 2014 penderita DM tipe-2 di Indonesia mencapai 5,81
% atau sekitar 9,2 juta jiwa (PERKENI, 2011). Angka ini diprediksi akan
meningkat menjadi 21,3 juta pada tahun 2030 (IDF, 2014). Selain prevalensi yang
semakin meningkat setiap tahun, DM juga penyebab terjadinya komplikasi pada
berbagai organ.
Diabetes melitus menyebabkan komplikasi terhadap berbagai organ,
diantaranya yaitu ginjal akibat stres oksidatif pada kondisi hiperglikemia.
Hiperglikemia menginduksi peningkatan produksi reactive oxygen species (ROS)
seperti superoksida (O2), hidrogen peroksida (H2O2), nitrit oksida (NO) dan
penurunan kadar antioksidan endogen (Fioretto & Mauer, 2007; Wei et al., 2009).
Ketidakseimbangan jumlah radikal bebas dan antioksidan menimbulkan stress
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 13/93
2
oksidatif yang menyebabkan lesi pada glomerolus dan tubulus renalis (Taneda et
al . , 2010). Lesi pada tubulus renalis menunjukkan kerusakan yang bertahap dan
perubahan struktur sel tubulus renalis.Penelitian Singh & Farrington (2010) menunjukkan bahwa perubahan
struktur histologi dan fungsi tubulus terjadi karena proses glucotoxicity pada sel
tubulus akibat resistensi insulin pada kondisi hiperglikemia. Perubahan struktur
histologi tubulus terjadi secara bertahap. Pada tahap awal terjadi hipertrofi sel
tubulus, akumulasi glikogen intraseluler, penebalan membran basal tubulus dan
dilatasi tubulus. Pada tahap lanjut terjadi atrofi tubulus dan fibrosis peritubuler
(Singh & Farrington, 2010). Menurut Trihono (2011) atrofi tubulus proksimal
dipengaruhi oleh rekasi sitokin TGF-β. TGF-β mempunyai kapasitas untuk
mengaktivasi fibroblas interstisial dan menginduksi apoptosis sel, atrofi terjadi
terlebih dahulu dibandingkan dengan fibrosis, maka pada penelitian ini peneliti
hanya melihat perubahan atrofi saja. Salah satu obat lini pertama penurun kadar
glukosa dalam darah yang dapat mengurangi faktor resiko terjadinya glucotoxicity
adalah metformin.
Metformin merupakan obat hipoglikemik oral golongan biguanid, paling
banyak digunakan di dunia sebagai anti hiperglikemia oral dan telah ditetapkan
oleh American Diabetes Associations (ADA) sebagai obat lini pertama dalam
penatalaksanaan farmakologi DM tipe-2 (ADA, 2015). Obat ini memiliki efek
menurunkan kadar glukosa plasma puasa dan post prandial (Gong et al ., 2012).
Hampir 20% pasien dengan metformin mengalami mual muntah, diare serta kecap
logam (metalic taste), tetapi dengan menurunkan dosis keluhan-keluhan tersebut
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 14/93
3
segera hilang. Mekanisme obat ini yaitu mengurangi produksi glukosa berlebih
oleh hepar dengan menekan proses gluconeogenesis tanpa menaikkan kadar
insulin, dan jarang menyebabkan hipoglikemia secara signifikan jika digunakansebagai monoterapi (Nathan, 2009). Oleh karena itu secara luas dianggap sebagai
obat ideal lini pertama dalam pengobatan DM (Gunawan, 2012). Selain
metformin, menurut penelitian Arjadi et al . (2008) menyebutkan bahwa terdapat
tanaman herbal yang sudah banyak digunakan dalam pengobatan DM yaitu
mahkota dewa.
Mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl merupakan jenis
tanaman herbal asli Indonesia yang telah banyak digunakan dalam pengobatan
DM. Tanaman endemik Indonesia ini mudah dibiakkan di lingkungan pedesaan
dan berbuah sepanjang tahun. Kandungan flavonoid saponin dan alkaloid pada
daging buah mahkota dewa berpotensi sebagai zat antioksidan, antiperadangan,
dan antibakterial. Potensi mahkota dewa telah terbukti bermanfaat pada DM,
diantaranya menurunkan kadar glukosa darah dan memiliki efek protektif pada
jaringan ginjal pada kondisi diabetik (Arjadi et al., 2008; Sulistyoningrum et al .,
2013). Berdasarkan uraian di atas, peneliti tertarik melakukan penelitian
menggunakan ekstrak methanol daging buah mahkota dewa terhadap gambaran
histologi tubulus proksimal ginjal. Penelitian ini dilakukan untuk melihat potensi
ekstrak methanol daging buah mahkota dewa sebagai pengobatan herbal dalam
mencegah komplikasi DM, khususnya komplikasi nefropati.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 15/93
4
B. Rumusan Masalah
Apakah terdapat pengaruh ekstrak methanol daging buah mahkota dewa( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl dan metformin terhadap gambaran
histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM tipe-2
C. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak methanol daging buah mahkota
dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl dan metformin pada gambaran
histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM tipe-2
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui gambaran histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM
tipe-2 yang diberi ekstrak methanol daging buah mahkota dewa ( Phaleria
macrocarpa (Scheff. ) Boerl pada dosis 200 mg/KgBB/hari
b. Mengetahui gambaran histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM
tipe-2 yang diberi ekstrak methanol daging buah mahkota dewa ( Phaleria
macrocarpa (Scheff. ) Boerl pada dosis 250 mg/KgBB/hari
c. Mengetahui gambaran histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM
tipe-2 yang diberi ekstrak methanol daging buah mahkota dewa ( Phaleria
macrocarpa (Scheff. ) Boerl pada dosis 300 mg/KgBB/hari
d. Mengetahui gambaran histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM
tipe-2 yang diberi metformin dosis 150 mg/KgBB/hari
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 16/93
5
e. Menentukan dosis ekstrak methanol daging buah mahkota dewa ( Phaleria
macrocarpa (Scheff. ) Boerl yang berpengaruh paling efektif terhadap
gambaran histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM tipe-2.D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat Pendidikan / Keilmuan
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan ilmu
pengetahuan mengenai pengaruh ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl dan metformin terhadap gambaran
histologi tubulus proksimal ginjal tikus model DM tipe-2.
2. Manfaat Penelitian
a. Hasil penelitian ini diharapkan dapat menjadi bahan pertimbangan untuk
dilakukan uji klinis ekstrak methanol daging buah mahkota dewa kepada
manusia dalam pencegahan komplikasi DM.
b. Hasil penelitian ini diharapkan dapat menjadi bahan rujukan untuk
penelitian selanjutnya terutama mengenai pengaruh ekstrak methanol
daging buah makota dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl dalam
mencegah komplikasi DM.
3. Pelayanan Kesehatan
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi baru
mengenai pengaruh ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl terhadap pencegahan & pengobatan
komplikasi DM yang diujikan pada tikus model DM tipe-2.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 17/93
6
II. TINJAUAN PUSTAKA
1. Landasan Teori
1. Mahkota Dewa
Mahkota Dewa merupakan salah satu tanaman obat yang sering
digunakan di Indonesia. Mahkota dewa tumbuh sepanjang tahun pada
daerah tropis dan tumbuh subur pada dataran rendah dengan ketinggian
1200 m diatas permukaan laut (Soeksmanto et al ., 2007). Tinggi pohon
dapat mencapai 1-6 m. Struktur pohon terdiri dari batang, daun, bunga dan
buah. Buah mahkota dewa berbentuk bulat dengan diameter sekitar 3 cm
dan ketebalan kulit antara 0,1-0,5 mm. Warna buah hijau jika belum
matang dan berubah menjadi merah setelah matang. Mahkota dewa
berkembang biak secara generatif dan vegetatif sehingga memudahkan
pembudidayaan tanaman tersebut (Soeksmanto et al ., 2007; Hendra et al .,
2007).
Gambar 2.1. Tanaman Mahkota Dewahttp ://lipur .staf .isi-ska.ac.id/files/2011/05/IMG_15741.jpg
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 18/93
7
Mahkota Dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl , merupakan
tanaman obat yang sudah dikenal dan saat ini semakin diminati
masyarakat. Tanaman yang berasal dari Papua ini berkhasiat untukmengobati luka, diabetes, lever, flu, alergi, sesak nafas, desentri, penyakit
kulit, jantung, ginjal, kanker, darah tinggi, asam urat, penambah stamina,
ketergantungan narkoba, dan pemicu kontraksi rahim (Rohyami, 2008).
Komponen utama dari buah mahkota dewa adalah flavonoid. Tanaman ini
juga mengandung alkaloid, saponin, tanin, dan terpenoid (Dalimartha,
2003). Selain itu menurut Arjadi (2010), pada daging buah mahkota dewa
terdapat senyawa flavonoid, saponin dan alkaloid. Senyawa kimia aktif
yang diduga mempunyai efek hipoglikemik mirip insulin adalah
flavonoid. Salah satu zat flavonoid dengan efek hipoglikemik adalah
quercetin yang dapat meningkatkan pengeluaran insulin dari sel pulau
langerhans melalui perubahan metabolisme Ca2+.
Flavonoid yang terkandung dalam daging buah mahkota dewa
mempunyai kemampuan merangsang pengeluaran insulin atau mempunyai
senyawa mirip insulin yang dapat diekstraksi. Flavonoid yang terdapat
pada daging buah mahkota dewa diduga dapat menyebabkan regenerasi
sel pulau langerhans, meregenerasi sel β pankreas, merangsang
pengeluaran insulin dan atau sebagai senyawa mirip insulin. Quercetin
juga dapat menginduksi hepatik glukokinase dan hasilnya akan
menciptakan efek hipoglikemik (Yosie et al ., 2011).
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 19/93
8
Ekstrak methanol daging buah mahkota dewa mengandung salah
satu senyawa flavonoid yaitu magniferin yang telah terbukti memiliki
aktivitas hipoglikemik terhadap tikus DM tipe-2 yang diinduksi streptozotocin (Ali et al., 2012). Magniferin meningkatkan aktivitas enzim
hexokinase yang berperan dalam menurunkan glukosa darah pada proses
fosforilasi glukosa saat glikolisis. Selain itu, magniferin juga
meningkatkan aktivitas pyruvate kinase yang akan diikuti dengan
peningkatan utilisasi glukosa. Magniferin akan memperbaiki rasio
NAD+/NADH pada sitosol dengan meningkatkan kerja enzim laktat
dehydrogenase hingga mendekati aktivitas normal pada tikus DM tipe-2
yang diberikan magniferin. Magniferin mampu meningkatkan utilisasi
glukosa dengan meningkatkan aktivitas glucose-6-phosphate
dehydrogenase sekaligus menghambat proses gluconeogenesis dengan
menurunkan aktivitas glucose-6-phosphatase dan fructose-1,6-
bisphosphatase. Magniferin juga mempengaruhi metabolisme glikogen
yaitu mengurangi pemecahan glikogen menjadi glukosa dan
meningkatkan utilisasi glukosa menjadi glikogen dengan mengurangi
aktivitas glycogen phosporilase dan meningkatkan aktivitas glikogen
sintase (Sellamuthu et al ., 2008).
2. Diabetes Melitus Tipe 2
1) Definisi Diabetes Melitus tipe-2
Diabetes melitus tipe-2 merupakan penyakit hiperglikemi
akibat insensivitas sel terhadap insulin (insulin resistance). Kadar
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 20/93
9
insulin mungkin sedikit menurun atau berada dalam rentang normal.
Insulin tetap dihasilkan oleh sel β pankreas, sehingga diabetes melitus
tipe-2 dianggap sebagai non-insulin dependent diabetes melitus (Slamet, 2008). Diabetes melitus tipe-2 adalah penyakit gangguan
metabolik yang ditandai oleh kenaikan glukosa darah sewaktu >200
mg/dl akibat penurunan sekresi insulin oleh sel β pankreas (Bennet,
2008; Sujaya, 2009).
2) Patofisologi
Patofisiologi DM tipe-2 terjadi melalui beberapa keadaan yang
berperan yaitu :
a. Resistensi insulin
Resistensi insulin banyak terjadi akibat dari obesitas dan
kurangnya aktivitas fisik serta penuaan. Pada penderita DM tipe-2
dapat juga terjadi kerusakan sel β pancreas yang mengakibatkan
defesiensi insulin. Defisiensi fungsi insulin pada penderita DM tipe-
2 hanya bersifat relatif dan tidak absolut (Harding, 2003; Hastuti,
2008).
b. Disfungsi sel B pankreas
Pada awal perkembangan DM tipe-2, sel β pancreas
menunjukkan gangguan pada sekresi insulin fase pertama, artinya
sekresi insulin gagal mengkompensasi resistensi insulin. Apabila
tidak ditangani dengan baik, pada perkembangan selanjutnya akan
terjadi kerusakan sel-sel β pankreas. Kerusakan sel-sel β pankreas
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 21/93
10
akan terjadi secara progresif yang seringkali akan menyebabkan
defisiensi insulin, sehingga akhirnya penderita memerlukan insulin
eksogen. Pada penderita DM tipe-2 memang umumnya ditemukankedua faktor tersebut, yaitu resistensi insulin dan defisiensi insulin
(Bennet, 2008; Teixeria, 2011).
3) Komplikas DM Tipe 2
Komplikasi DM tipe-2 terbagi menjadi komplikasi
mikroangiopati yang dapat menyebabkan nefropati, retinopati,
neuropati dan komplikasi makroangiopati yang dapat menyebabkan
hipertensi, stroke, penyakit pembuluh darah kapiler (Permana, 2009).
4) Stres Oksidatif DM Tipe 2
Stres oksidatif disebabkan oleh ketidakseimbangan antara
produksi oksidan atau spesies oksigen reaktif dengan kapasitas sistem
biologis untuk mendetoksifikasi senyawa reaktif atau untuk
memperbaiki kerusakan yang dihasilkan. Hasil akhir dari stress
oksidatif adalah oksidasi makromolekul, termasuk protein, lemak,
karbohidrat, dan DNA. Bukti yang sedang berkembang
mengindikasikan bahwa stres oksidatif berperan vital terhadap
perkembangan komplikasi mikro dan makrovaskuler dari diabetes
(Forbes et al., 2008).
Spesies oksigen reaktif meliputi radikal bebas seperti
superoksida, hidroksil, dan peroksil, serta spesies nonradikal seperti
hidrogen dan peroksida. Terdapat pula spesies nitrogen reaktif, seperti
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 22/93
11
nitrit oksida radikal, nitrogen dioksida, peroksinitrit nonradikal. Jalur
pembentukan spesies nitrit reaktif mirip dengan jalur pembentukan
spesies oksigen reaktif (Giacco et al., 2010). Penelitian-penelitianterbaru menunjukkan peran berbagai enzim dan jalur dalam stres
oksidatif dan pengaktifan mekanisme inflamasi yang terlibat dalam
patofisiologi nefropati diabetikum. Beberapa jalur tersebut sebagai
berikut (Rodriguez et al., 2012) :
a. Jalur Polyol
Jalur polyol aktif ketika kadar glukosa intraseluler meningkat.
Enzim lini pertama pada jalur ini adalah aldose reductase yang
mereduksi glukosa menjadi sorbitol menggunakan nicotinamide
adenine dinucleotide phosphate (NADPH) sebagai kofaktor.
Sorbitol selanjutnya dimetabolisme menjadi fruktosa oleh enzim
sorbitol dehydrogenase yang menggunakan NAD+ sebagai
kofaktor. Afinitas enzim aldose reductase terhadap glukosa
meningkat pada keadaan hiperglikemia dan menyebabkan
penumpukan sorbitol dan peningkatan penggunaan NADPH.
Aktivasi dari aldose reductase sendiri dapat menimbulkan
kerusakan melalui pembentukan spesies oksigen reaktif.
Mekanisme lain dari kerusakan sel oleh enzim ini adalah melalui
pengaktifan protein kinase C (PKC) dan menimbulkan glikasi
protein (Chung et al., 2003; Ramana et al., 2005).
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 23/93
12
Pengaktifan jalur polyol berlebih menimbulkan penumpukan
fruktosa dan sorbitol intraseluler. Fruktosa mengalami fosforilasi
menjadi fructose-3-phospate yang akan dipecah lagi menjadi 3-
deoxyglucosone. Kedua senyawa tersebut adalah agen glikasi yang
sangat kuat dan berpartisipasi dalam pembentukan advanced
glycation end products (AGEs). Sorbitol merupakan senyawa
alkohol hidrofilik yang tidak dapat menembus membran sel,
sehingga menumpuk di dalam sel dan menyebabkan peningkatan
tekanan osmotik intrasel (Chung et al., 2003; Ramana et al., 2005).
b. Jalur Protein Kinase C (PKC)
Protein Kinase C adalah enzim dengan berbagai isoform
berbeda. PKC memfosforilasi beragam protein target yang
bertanggung jawab untuk transduksi sinyal yang terlibat pada
reglukosasi kontraktilitas, aliran, proliferasi sel, permeabilitas
vaskuler dan fungsi vaskuler. Aktivasi PKC menghasilkan
serangkaian efek berbahaya yang berhubungan dengan komplikasi
diabetes (Way et al., 2001; Geraldes et al., 2010).
Lingkungan hiperglikemik menginduksi peningkatan
aktivitas PKC-β2 pada sel endotel ginjal. Aktivitas PKC-β2 yang
meningkat memicu endotel untuk memproduksi prostaglandin E2
dan tromboksan A2, substansi yang mengubah permeabilitas dan
respon vaskuler terhadap angiostensin II. PKC juga berkontribusi
pada akumulasi protein matriks mikrovaskuler dengan menginduksi
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 24/93
13
tumor growth factor (TGF)-β, fibronektin, dan kolagen tipe IV pada
sel mesangial pada hewan coba (Way et al ., 2001; Geraldes et al .,
2010).c. Jalur Advanced Glycation End-Products (AGEs)
Serangkaian proses dan kaskade glikasi protein non-enzimatis
oleh glukosa yang menghasilkan berbagai senyawa heterogen yang
secara kumulatif sisebut sebagai produk akhir glikasi atau advanced
glycation end-products (AGEs). Proses ini dimulai dengan reaksi
Maillard , yaitu grup karbonil (aldehid atau keton) dari glukosa yang
mereduksi bereaksi dengan grup asam amino dari molekul organik
dan membentuk basa Schiff. Setelah proses awal ini, basa-basa
Schiff mengalami perubahan intramolekuler dan membentuk
produk Amadori. Produk Amadori pada akhirnya akan membentuk
AGEs permanen. Ketika AGEs terbentuk pada bagian vital pada
enzim atau protein, AGEs dapat merubah struktur dan fungsi enzim
dalam plasma, dinding arteri, sel-sel mesangial, dan membran basal
tubulus proksimal ginjal (Tan et al., 2007; Busch et al., 2010).
AGEs dapat memunculkan efeknya melalui ikatan dengan
reseptor spesifik AGEs (RAGEs) pada berbagai sel berbeda,
termasuk podosit, endotel, sel otot polos, mesangial, dan sel epitel
tubulus. Interaksi AGE-RAGE menentukan aktivasi jalur
pengiriman sinyal yang memicu pembentukan spesies oksigen
reaktif, pelepasan sitokin inflamasi seperti tumor necrosis factor
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 25/93
14
alpha (TNF)-α dan interleukin (IL)-1 dan 6, dan factor
pertumbuhan seperti connective tissue growth factor (CTGF) atau
TGF-β1 (Tan et al., 2007; Busch et al., 2010).Kemampuan sel untuk memproses glukosa adalah faktor
terpenting dalam pembentukan spesies oksigen reaktif yang
diinduksi hiperglikemia. Oleh karena itu, kontrol influks glukosa ke
dalam sitosol pada keadaan hiperglikemia sangat penting dalam
mempertahankan homeostasis glukosa intrasel (Tan et al., 2007;
Busch et al., 2010). Akan tetapi, populasi sel ginjal tertentu, seperti
endotel, sel mesangial, epitel dan sel tubulus sangat rentan karena
tidak dapat mengurangi laju transpor glukosa secara adekuat
(Thorens & Mueckler, 2010).
Faktor penting untuk mencegah kerusakan oksidatif oleh
spesies oksigen reaktif adalah sistem enzim antioksidan endogen.
Enzim-enzim yang termasuk dalam sistem ini adalah superoksida
dismutase (SOD), glutation peroksidase (GPx), dan katalase (CAT).
Reduksi pada ekspresi dan aktivitas enzim-enzim dibuktikan
terdapat pada penyakit mikrovaskuler diabetes. Ekspresi berlebih
enzim-enzim ini terbukti protektif melawan kerusakan pada hewan
model nefropati diabetikum (Rodriguez et al., 2012).
5) Nefropati diabetikum
Nefropati Diabetik (ND) merupakan salah satu komplikasi
diabetes mellitus (DM) yang mempunyai prevalensi di Indonesia
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 26/93
15
sebanyak 26-7,3%. Komplikasi DM ini menyerang nefron ginjal
mengakibatkan kerusakan struktur dan fungsi ginjal serta penyebab
tersering terjadinya end-stage renal disease (ESRD) di dunia (Lim,2012).
Diagnosis ND ditegakkan apabila ditemukan mikroalbuminuria
nyata yaitukadar albumin>30 mg/24 jam atau >20 µg/menit (Lubis,
2009). Keadaan hiperglikemi memicu ikatan biokimia antara glukosa
dan protein di matriks ginjal sehingga terbentuk advanced glycation
end-products (AGEs) yang lebih banyak melalui aktivasi beberapa
jalur seperti polyol pathway dan protein kinase C (PKC). AGEs
memicu apoptosis dan peningkatan ekspresi vascular endothelial
growth factor (VEGF) serta menstimulasi transforming growth factor-
β (TGF-β) (Yamagishi, 2010).
Peningkatan reactive oxygen species (ROS) akan bersifat
sitotoksik bagi ginjal dengan memicu inflamasi, stimulasi TGF-β, dan
reaksi fibrogenik. TGF-β yang dihasilkan karena adanya AGEs dan
ROS ini merupakan faktor fibrogenik yang menstimulasi sintesis
matriks dan menghambat degradasinya. Reaksi inflamasi, fibrogenik
dan peningkatan ROS akan memicu kondisi hipoksia pada tubulus
proksimal ginjal.
6) Atrofi dan Fibrosis Tubulus Proksimal Ginjal
Kerusakan tubulointerstisial akibat hipoksia melalui
mekanisme yang multifaktorial diantaranya adalah inflamasi, reaksi
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 27/93
16
fibrogenik dan peningkatan ROS. Hipoksia dapat mengaktivasi
fibroblas, perubahan metabolisme matriks ekstrasel pada sel-sel ginjal,
dan fibrogenesis. Aktivasi interstisial fibrosis akibat hipoksia dan peningkatan deposit matriks ekstrasel akan mengakibatkan gangguan
aliran darah dan asupan oksigen (Sastrawan & Suwitra, 2008).
Sel tubulus proksimal ginjal yang mengalami hipoksia lebih
mudah mengalami gangguan fungsi mitokondria dan defisit energi
yang menetap (Sastrawan & Suwitra, 2008). Observasi yang lebih
dalam dilaporkan pada penelitian korelasi antara penurunan aliran
kapiler peritubuler dan disfungsi tubular pada pasien DM tipe-2
dengan normoalbuminuria. Hasil penelitian ini mendukung konsep
hipoksia dapat menginduksi jejas tubulointerstisial, yang
mengakibatkan terjadinya gagal ginjal terminal, mengakibatkan
kerusakan sel epitel tubulus yang memipih akibat hipoksia yang
semakin lama menjadi sel atrofi dan jika terjadi kematian sel
(nekrosis), akan digantikan dengan jaring parut (fibrosis) (Sastrawan
& Suwitra, 2008).
Atrofi tubulus proksimal dipengaruhi oleh rekasi sitokin TGF-
β. TGF-β mempunyai kapasitas untuk mengaktivasi fibroblas
interstisial, menginduksi apoptosis (yang menyebabkan sel intrinsik
ginjal hilang, digantikan dengan jaringan fibrotik), dan diferensiasi sel
tubulus menjadi miofibroblas, sehingga terjadi pembentukan jaringan
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 28/93
17
parut ginjal. Jumlah TGF-β di daerah tubulo-interstisial berkorelasi
dengan derajat inflamasi interstisial dan atrofi tubulus. Gambaran
atrofi dapat dilihat dengan ciri-ciri hilangnya beberapa sel dengan pembentukan sel nekrotik dalam lumen tubulus proksimal, beberapa
ditandai deng sel epitel tubulus yang memipih. Keterlibatan TGF-β
pada pembentukan jaringan parut ginjal juga melalui peningkatan
sintesis matriks ekstra selular. Diketahui bahwa TGF-β berperan
dalam pembentukan atrofi tubulus proksimal ginjal (Trihono, 2011).
Penelitian Lubis (2013) menyatakan fibrosis pada ginjal timbul
melalui dua mediator yaitu tumor nekrotic factor α (TNF α) dan
angiotensin II. TNF α merupakan sitokin penyebab inflamasi yang
diproduksi oleh makrofage dan sel-sel epitel ginjal mesangial dan
tubular (Lubis et al ., 2013). Dalam menanggapi rangsangan inflamasi
sel ginjal intrinsik, termasuk sel-sel mesangial akan memproduksi
sitokin seperti platelet-derived growth factor (PDGF) dan TNF-α.
Angiotensin II merupakan peptida utama dari system rennin
angiotensin sebagai faktor pertumbuhan yang mengatur proliferasi sel,
apoptosis dan fibrosis. Angiotensin II sebagai mediator penyebab
inflamasi yang berperan dalam respon inflamasi, di ginjal angiotensin
II dan TNF-α berkontribusi menyebabkan atrofi yang semakin lama
sel akan mati (nekrosis) sehingga digantikan jaringan fibrous dan
terjadi fibrosis tubulus proksimal ginjal (Lubis et al., 2013).
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 29/93
18
Gambar 2.2. Fibrosis Tubulus Proksimal GinjalFibrosis terlihat dari peningkatan matriks ekstraseluler yang terjadi karena penumpukan sel
fibroblas “panah hitam”, akibat meregangnya sel epitel tubulus proksimal(Cotran et al ., 2007)
Gamabar 2.3. Atrofi Tubulus Proksimal GinjalAtrofi ditandai dengan hilangnya beberapa sel dengan pembentukan sel nekrotik “panahhitam” dalam lumen tubulus proksimal, meninggalkan membran dasar tubulus. Beberapa
ditandai dengan sel epitel tubulus yang memipih “panah merah” (http://www.kidneypathology.com)
3. Metformin
Metformin merupakan obat golongan biguanida berupa insulin-
sensitizing yang digunakan sebagai agen lini pertama untuk menurunkan
hiperglikemia pada DM tipe-2 (Rocha et al., 2013). Penjelesan mengenai
mekanisme kerja biguanida sulit dimengerti. Proses penurunan glukosa
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 30/93
19
darah golongan ini tidak tergantung fungsi sel beta pankreas. Mekanisme
kerja metformin berupa : 1) mengurangi glukoneogenesis hepatik dan
renal, 2) memperlambat absorpsi glukosa di gastrointestinal tract , yangmenyebabkan konversi glukosa menjadi laktat oleh enterosit, 3) stimulasi
glikolisis di jaringan dengan meningkatkan penggunaan glukosa darah,
dan 4) mengurangi level glukagon plasma (Katzung, 2006).
Metformin tidak terikat pada protein plasma, tidak dimetabolisme,
dan diekskresi oleh ginjal sebagai ikatan molekul yang aktif. Akibat dari
penghambatan glukoneogenesis oleh metformin adalah terganggunya
metabolisme asam laktat di hepar. Pada pasien dengan penurunan fungsi
ginjal, metformin dan bigudanida lainnya terakumulasi dan meningkatkan
resiko asidosis laktat (Katzung, 2006).
Menurut Erejuwa (2011) efek samping obat (ESO) metformin
adalah hipoglikemi, ketidakmampuan degenerasi pankreas, dan
komplikasi DM yang berkaitan dengan stres oksidatif dimana salah
satunya adalah ND. Namun, menurut Rocha et al . (2013) metformin
bukan obat dengan sifat nefrotoksik, karena metformin mampu
menghentikan apoptosis yang diinduksi oleh stres oksidatif di endotel
sehingga mencegah disfungsi vaskuler (Morales et al., 2010).
Hasil penelitian Morales et al . (2010) menunjukkan bahwa
metformin mampu mencegah kerusakan struktur histologi, fungsi, dan
biokimia ginjal pada induksi gentamisin yang meningkatkan stres
oksidatif pada ginjal. Tanda dari efek metformin adalah peningkatan renal
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 31/93
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 32/93
21
hidrofilik, serta stabil pada pH 7,4 dan suhu 37oC. STZ toksik terhadap sel
beta pankreas karena kemampuannya menempel pada glukosa dan
sifatnya yang hidrofilik sehingga mampu masuk ke sel beta melalui low
affinity glucose 2 transporter (GLUT 2) di membran plasma (Eleauzu et
al ., 2013).
Kerusakan sel beta pankreas menunjukkan bahwa GLUT 2 yang
terpapar STZ tidak menjadi resisten akan STZ namun menjadi lemah dan
rapuh. Sel lain yang juga mengekspresikan GLUT 2 seperti pada hepatosit
dan sel-sel ginjal mengalami kelemahan yang sama terhadap STZ. Inilah
yang mendasari bahwa induksi menggunakan STZ mengakibatkan hewan
coba mengalami kerusakan hati dan ginjal (Eleazu et al ., 2013).
Streptozotocin dosis 60 mg/kgBB terbukti dapat menginduksi
DM tipe 2 dengan dikombinasikan nicotinamide (NAD) 120 mg/kgBB.
NAD memiliki kemampuan untuk menurunkan radikal bebas akibat dari
efek sitotoksisitas yang ditimbulkan oleh STZ sehingga sel beta pankreas
hanya mengalami kerusakan minor. Kerusakan minor ini akan
memberikan situasi diabetes kronik seperti pada DM tipe 2 (Ahangarpour
et al., 2014). Pemberian NAD dapat mengurangi 40% alkilasi pada DNA
sel pankreas sehingga kematian sel beta pankreas tidak separah pada
model DM tipe 1 (Ghasemi, 2014; Szkudelski, 2001).
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 33/93
22
2. Kerangka Teori
Gambar 2.4. Kerangka Teori
Keterangan :
: Hubungan kausatif
: Memberi efek penghambatan
Streptozotocin (STZ) Nikotinamid
Kerusakan sel β pankreas
Defisiensi Insulin
Hiperglikemia
Jalur Poliol
Angiotensin II
VEGF & TGF β
TNF α
Deposit matriksekstraselSitokin inflamasimeningkat
Kondisi hipoksiadalam selApoptosis danFibrosis sel
Atrofi & FibrosisTubulus proksimal
Ekstrak MethanolMahkota Dewa
Metformin
Flavonoid(antioksidan):Quercetin,
Magniferin
Stres Oksidatif >>
AGEs Jalur PKC
Ginjal
GLUT-2
Hepar
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 34/93
23
3. Kerangka Konsep
Gambar 2.5. Kerangka Konsep
Keterangan :
: Mempengaruhi
4. Hipotesis
1. Ekstrak methanol daging buah mahkota dewa Phaleria macrocarpa
(scheff.) Boerl dapat memperbaiki gambaran histologi tubulus proksimal
ginjal tikus galur Sprague Dawley model DM tipe-2
2. Metformin dapat memperbaiki gambaran histologi tubulus proksimal ginjal
tikus galur Sprague Dawley model DM tipe-2
Pemberian berbagai dosis ekstrakmethanol daging buah mahkota dewa
( Phaleria macrocarpa (Scheff)Boerl.) pada tikus DM tipe-2
Pemberian metformin pada tikus
DM tipe-2 Gambaran HistologiTubulus Proksimal
Ginjal
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 35/93
24
III. METODE PENELITIAN
A. Materi dan Bahan
1. Hewan Coba
Pada penelitian ini, hewan yang digunakan adalah tikus putih (Rattus
norvegicus) jantan galur Sprague Dawley berumur 2-3 bulan, memiliki berat
badan 160-200 gram dan sehat. Hewan coba didapatkan dari Laboratorium
Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) Univeristas Padjadjaran (UNPAD)
Bandung beserta perlakuan sampai terminasi.
Tikus putih ( Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley
dipelihara dalam lingkungan dengan suhu 22 + 3 °C dan kelembaban 30%
serta siklus gelap-terang selama 12 jam. Hewan coba diaklimatisasi selama 7
hari dan ditempatkan dalam kandang dengan bahan, bentuk dan ukuran yang
sama, mendapat makanan dan minuman dengan jenis, jumlah dan komposisi
yang sama secara ad libitum (Kusumawati, 2004).
Jumlah hewan coba yang dibutuhkan untuk setiap kelompok
disesuaikan dengan banyaknya perlakuan yang diberikan, dan dihitung
berdasarkan rumus Federer seperti di bawah ini (Kemas, 2003):
Keterangan :
t :jumlah perlakuan
r :jumlah pengulangan
Maka, tikus yang digunakan tiap kelompok adalah:
(t - 1) (r - 1) ≥ 15
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 36/93
25
(t-1)(r-1) ≥ 15
(6-1)(r-1) ≥ 15
5(r-1) ≥ 15 (r-1) ≥ 15/5
r ≥ 3+1
r ≥ 4
Antisipasi drop out hewan coba:
r’ = r + 20% .r
= 4 + 20%.4
= 4 + 0,8
r’ = 4,8 ≈ 5
Berdasarkan perhitungan, dengan nilai t = 6 (enam kelompok
perlakuan), didapatkan nilai r ≥ 4, yang berarti setiap kelompok minimal
terdiri atas empat ekor hewan coba. Untuk mengantisipasi adanya drop out
hewan coba, maka peneliti menambahkan 20% dari jumlah minimal hewan
coba, sehingga jumlah hewan coba per kelompok menjadi lima ekor. Total
hewan coba yang dibutuhkan pada penelitian ini (dengan enam kelompok
perlakuan) berjumlah 30 ekor.
2. Alat dan Bahan
a. Alat
1) Timbangan elektrik skala gram Kenko®
2) Kandang tikus berukuran 60 x 30 x 30 cm
3) Timbangan tikus skala gram Foxanone®
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 37/93
26
4) Wadah penampung organ ginjal
5) Alat sonde oral OneMed®
6) Sarung tangan Gamex
®
7) Set alat bedah OneMed®
8) Seperangkat alat pembuat preparat
9) Mikroskop cahaya Motic®B2 series
10) Optilab®Viewer
b. Bahan
1) Hewan coba, yaitu tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur
Sprague Dawley.
2) Bahan ekstraksi daging buah mahkota dewa
3) Metformin Dexa Medica®
4) Streptozotocin & Nikotinamid Sigma®
5) Pelet 511® yang digunakan sebagai pakan tikus
6) Air isi ulang RO® yang digunakan untuk minum
7) Bahan pembuat sediaan histologi dengan pewarnaan Periodic Acid
Schiff (PAS), alkohol berbagai tingkat, parafin, dan mounting media.
B. Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental terhadap hewan coba
tikus putih ( Rattus norvegicus) jantan Sprague Dawley yang menggunakan post
test only with control group design.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 38/93
27
C. Rancangan Percobaan
Rancangan penelitian menggunakan metode Completely Randomized
Design (CRD) atau Rancangan Acak Lengkap (RAL). Hewan coba diaklimatisasiselama 7 hari dan diberi tanda untuk masing-masing kelompok dan masing-
masing tikus. Kemudian, masing-masing tikus pada lima kelompok perlakuan
diinduksi dengan nicotinamid 120 mg/kgBB dilarutkan dengan normal saline
melalui injeksi intraperitoneal satu kali. Enam puluh menit kemudian dilakukan
injeksi intraperitoneal menggunakan streptozotocin dosis 60 mg/kgBB yang
diencerkan dengan sitrat bufer pH 4,5. Induksi dinyatakan berhasil saat
pemeriksaan glukosa darah puasa menggunakan metode spektrofotometer GOD-
PAP setelah 72 jam > 250 mg/dL (Ahangarpour et al., 2014a., Ahangarpour et al .,
2014b).
Hewan coba dibagi menjadi enam kelompok perlakuan secara acak atau
random allocation untuk mulai diberikan intervensi dengan ketentuan sebagai
berikut :
1. Kelompok A : Hewan coba tidak diinduksi DM, hanya diberikan akuades
(kelompok kontrol sehat).
2. Kelompok B : Kelompok tikus DM diberi akuades (kelompok kontrol
sakit).
3. Kelompok C : Kelompok tikus DM diberi ekstrak methanol daging buah
mahkota dewa dosis 200 mg/kgBB per hari per sonde
lambung
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 39/93
28
4. Kelompok D : Kelompok tikus DM diberi ekstrak methanol daging buah
mahkota dewa dosis 250 mg/kgBB per hari per sonde
lambung5. Kelompok E : Kelompok tikus DM diberi ekstrak methanol daging buah
mahkota dewa dosis 300 mg/kgBB per hari per sonde
lambung
6. Kelompok F : Kelompok tikus DM diberi metformin dosis 150 mg/kgBB
per hari per sonde lambung
Perlakuan menggunakan ekstrak methanol daging buah mahkota dewa dan
metformin dilakukan setiap pagi selama 21 hari berturut-turut. Hari ke-22
dilakukan terminasi tikus dengan cara dekapitasi, kemudian dilakukan
pengambilan jaringan ginjal. Jaringan ginjal dibuat preparat histopatologis,
kemudian dilakukan pengamatan.
D. Variabel Penelitian Yang Diukur
1. Variabel Bebas : Pemberian antidiabetik, dibagi atas metformin 150
mg/kgBB/hari dan ekstrak methanol daging buah mahkota dewa dengan dosis
200 mg/kgBB/hari, 250 mg/kgBB/hari, dan 300 mg/kgBB/hari.
2. Variabel Terikat : Gambaran histologi tubulus proksimal ginjal tikus model
DM tipe-2.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 40/93
29
E. Definisi Operasional
1. Metformin
Definisi Operasional : Obat anti hiperglikemi lini pertama golongan biguanida. Merek generik Metformin HCL OGB
Dexa® produksi Dexa Medica dan didapatkan di
apotek. Bentuk sediaan obat adalah tablet yang
dibuat puyer dan dilarutkan dengan akuades.
Nilai : 150 mg/kgBB
Skala : Rasio
2. Ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
Definisi Operasional : Ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
[ Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl.] melalui
maserasi dengan menggunakan methanol merek
Brataco® selama 3 hari berturut-turut dengan
pergantian pelarut setelah itu dijadikan satu di
evaporator kemudian diuapkan dengan waterbath
sehingga menghasilkan ekstrak kental. Intervensi
menggunakan sonde lambung dengan bentuk
sediaan berupa ekstrak basah yang dilarutkan
dengan akuades.
Nilai : 200 mg/kgBB, 250 mg/kgBB, 300 mg/kgBB
Skala : Rasio
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 41/93
30
3. Gambaran Histologi Tubulus Proksimal Ginjal
Definisi Operasional : Gambaran histologi tubulus proksimal ginjal
meliputi gambaran atrofi tubulus, ditandaihilangnya beberapa sel dengan pembentukan sel
nekrotik dalam lumen tubulus proksimal,
beberapa juga ditandai dengan sel epitel tubulus
yang memipih dan terbentuk jaringan fibrous
sehingga membran basal terlihat tebal diikuti
penurunan diameter tubulus proksimal ginjal
(Trihono, 2011). Dihitung pada 10 tubulus secara
acak di korteks renalis pada 5 lapang pandang tiap
hewan coba dengan pewarnaan Periodic Acid
Schiff (PAS) yang diamati menggunakan
mikroskop cahaya Motic®B2 series dengan
perbesaran 400x (Zhang H et al ., 2009).
Nilai : Atrofi tubulus proksimal (Zhang H et al ., 2009).
0 = 0%
1 = <10%
2 = 10%-25%
3 = 26%-50%
4 = >50%
Skala : Rasio
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 42/93
31
F. Cara Mengukur Variabel
Pengambilan ginjal tikus dengan pembedahan dilakukan setelah tikus
didekapitasi. Ginjal yang sudah diambil difiksasi dalam larutan bufer formalin10%. Setiap kelompok diberikan kode untuk dimasukan pada larutan alcohol
bertingkat yang sebelumnya ginjal sudah dipotong menjadi dua pada bidang
median ginjal. Kemudian ginjal diberikan cairan paraffin dan setelah itu
dimasukan pada lemari es pada suhu minus dua derajat. Setelah semua
paraffin mengeras menjadi blok parafin yang sudah dikode kemudian dikirim
ke laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah
Mada untuk dilakukan pewarnaan Periodic acid Schiff (PAS). Penilaian
mikroskopis dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran
Universitas Jenderal Soedirman dengan menggunakan mikroskop cahaya
Motic®B2 series perbesaran 400x yang dihubungkan dengan Optilab®.
Pengamatan dilakukan terhadap kerusakan tubulus proksimal akibat nefropati
yang menjadikan gambaran atrofi pada sel tubulus proksimal ginjal tikus
model DM tipe-2, diamati dalam lima lapang pandang yaitu keempat sudut
dan bagian tengah dengan memilih 10 tubulus secara acak pada setiap area
pada 5 lapang pandang dengan pewarnaan PAS (Power, 2008;Wei et al .,
2009).
Atrofi tubulus proksimal ginjal adalah gambaran membran basal
tubulus yang tebal dengan penurunan diameter akibat glukotoksisitas sehingga
mengalami hipoksia yang berlanjut menjadi kematian sel tubulus. Sebelum
dilakukan pengamatan, tubulus dibandingkan dengan tubulus normal. Atrofi
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 43/93
32
tubulus diklasifikasikan berdasarkan kriteria skoring 0-4 dimana 0 = 0%, 1 =
<10%, 2 = 10% - 25%, 3 = 26% - 50%, 4 = > 50% (Zhang H et al ., 2009).
G. Tata Urutan Kerja
1. Persiapan hewan coba
Hewan coba ditimbang dan dipilih berat badannya antara 160-200
gram, dibagi menjadi enam kelompok perlakuan. Tikus dibagi menjadi 6
kelompok : Kelompok A (kontrol sehat) yang tidak diinduksi DM dan tidak
diberikan ekstrak methanol mahkota dewa. Kelompok B (kontrol sakit), yaitu
kelompok yang diinduksi DM dan diberikan aquades. Kelompok C, D dan E
merupakan kelompok tikus DM dan diberikan ekstrak methanol mahkota
dewa dengan dosis masing-masing 200 mg/KgBB (MD 200), 250 mg/KgBB
(MD 250), dan 300 mg/kgBB (MD 300) per hari per sonde lambung.
Kelompok F yaitu kelompok tikus DM yang diberikan metformin dengan
dosis 150 mg/KgBB per hari per sonde lambung.
Aklimatisasi dilakukan selama 7 hari pada kandang berukuran 60 x 30
x 30 cm dengan tujuan agar hewan coba dapat beradaptasi dengan lingkungan
laboratorium. Nutrisi hewan coba tetap diperhatikan dengan memberi pakan
berupa pelet 511® dan minum air isi ulang RO® yang diberikan secara ad
libitum (Kusumawati, 2004).
2. Pembuatan ekstrak
Pembuatan serbuk simplisia kulit mahkota dewa :
Buah diiris-iris dan dimasukan oven pada suhu 70o C selama 3 hari,
setelah buah kering, selanjutnya ditumbuk dan diperoleh serbuk berserat
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 44/93
33
(tidak bisa diblender karena liat sekali, banyak serat kasar). Kemudian
diperoleh 1800 gram serbuk simplisia kering.
Pembuatan ekstrak methanol daging buah mahkota dewa :Serbuk 900 gram ditambahkan methanol selama 3 hari berturut-turut
dengan pergantian pelarut yang baru. Hari pertama, serbuk ditambahkan
methanol 5,5 liter selama 24 jam, hari ke-2 serbuk yang telah direndam
kemudian disaring. Filtrat disimpan dan residu ditambahkan methanol 5,5
liter. Hari ke-3, dengan cara yang sama ditambahkan 4 liter methanol,
kemudian filtrat hari pertama, kedua dan ketiga dijadikan satu dievaporator.
Hasil evaporator (masih mengandung methanol) kemudian diuapkan dengan
waterbath sampai diperoleh ekstrak kental.
3. Pemberian perlakuan
Tahap pemberian perlakuan hewan coba pada tiap kelompok
dilakukan berdasarkan aturan sebagai berikut :
a. Kelompok perlakuan A (kontrol sehat) yaitu kelompok normal,
hanya diberikan akuades selama 21 hari.
b. Kelompok perlakuan B (kontrol sakit) yaitu kelompok diabetik, tikus
DM dan diberi plasebo (akuades) selama 21 hari.
c. Kelompok perlakuan C, yaitu kelompok tikus DM yang diberi
ekstrak methanol mahkota dewa dengan dosis 200 mg/kgBB per hari
per sonde lambung selama 21 hari.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 45/93
34
d. Kelompok perlakuan D, yaitu kelompok tikus DM yang diberi
ekstrak methanol mahkota dewa dengan dosis 250 mg/kgBB per hari
per sonde lambung selama 21 hari.e. Kelompok perlakuan E, yaitu kelompok tikus DM yang diberi
ekstrak methanol mahkota dewa dengan dosis 300 mg/kgBB per hari
per sonde lambung selama 21 hari.
f. Kelompok perlakuan F, yaitu kelompok tikus DM yang diberi
metformin dosis 150 mg/kgBB per hari per sonde lambung selama
21 hari.
4. Pengambilan dan fiksasi organ
Pengambilan organ dilakukan setelah terminasi hewan coba dengan
cara dekapitasi pada hari ke-22. Sebelum dekapitasi, hewan coba diukur kadar
glukosa darah terlebih dahulu dengan spektrofotometer metode GOD-PAP
sebagai hasil glukosa darah post perlakuan. Setelah dekapitasi, organ ginjal
diambil melalui pembedahan pada bagian perut bawah secara melintang,
kemudian dibedah vertikal sepanjang abdomen hingga bagian torakal,
sehingga membentuk seperti huruf T terbalik. Organ ginjal ditimbang, diukur
volumenya dan dimasukkan ke dalam pot untuk difiksasi dengan Neutral
Buffered Formalin (NBF) 10%.
5. Pembuatan preparat mikroskopis
a. Memotong jaringan organ
Organ ginjal yang sudah difiksasi dengan NBF 10% kemudian
ditiriskan pada saringan selanjutnya dipotong dari regio pusat dan kedua
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 46/93
35
sisi perifer organ dengan ketebalan + 2 cm dan dimasukkan ke dalam
keranjang khusus (basket ).
a. Proses dehidrasiKeranjang (basket ) berisi jaringan dimasukkan ke dalam mesin
processor otomatis. Jaringan mengalami proses dehidrasi bertahap yaitu
ethanol 70% (2 jam), ethanol 80% (2 jam), ethanol 90% (2 jam), ethanol
absolut (2 jam), ethanol absolut (2 jam), xylol (2 jam), xylol (2 jam),
parafin cair (2 jam), parafin cair (2 jam).
b. Vakum
Proses ini bermaksud untuk menghilangkan udara dari jaringan.
Keranjang jaringan diisi parafin cair dengan temperatur 59-60oC divakum
selama 30 menit. Keranjang kemudian disimpan pada temperatur 60oC
untuk sementar waktu sebelum pencetakan dilakukan dengan parafin cair.
c. Mencetak blok parafin
Isi tempat pengeblokan dengan sedikit parafin cair. Kemudian
jaringan diambil dari cassette kemudian diletakan di tempat pengeblokan.
Blok disempurnakan dengan memberikan parafin cair sampai terisi
hampir penuh atau ketebalan sekitar 8-10 mm. Tutup dengan cassette.
d. Memotong blok jaringan
Blok parafin yang berisi jaringan dibiarkan sampai konsistensinya
baik untuk dilakukan pemotongan. Konsistensi yang baik adalah yang
tidak lembek karena akan menyebabkan potongan jaringan menjadi
menggulung. Konsistensi terlalu keras juga tidak baik karena akan
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 47/93
36
menyebakan blok parafin hancur saat dipotong. Proses pemotongan blok
jaringan dilakukan dengan microtome.
e. Pewarnaan dengan Periodic Acid Schiff (PAS)Deparafinisasi dan hidrasi pada air tanpa ion (deionized water )
dilakukan pada jaringan, kemudian dioksidasi dengan larutan Periodic
Acid 0,5% selama 5 menit, bilas. Meletakkan spesimen ke dalam reagen
Schiff selama 15 menit dan spesimen menjadi berwarna pink terang. Cuci
di bawah air mengalir selama 5 menit, dan spesimen berubah menjadi
pink gelap. Dilakukan pewarnaan kontras dengan Mayer’s hematoxylin
selama 1 menit kemudian cuci di bawah air mengalir selama 5 menit dan
dilanjutkan dengan mounting .
6. Pengamatan miskrokopis dan dokumentasi
Pengamatan tubulus proksimal ginjal dilakukan oleh peneliti dan
dibantu oleh interobserver yang sebelumnya disupervisi oleh spesialis
Patologi Anatomi. Dilakukan pengamatan di Laboratorium Histologi, Jurusan
Kedokteran, Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman dengan
menggunakan mikroskop cahaya Motic®B2 series yang dihubungkan dengan
Optilab® untuk mempermudah pengamatan. Hasil pengamatan antara peneliti
dengan interobserver selanjutnya diuji dengan uji interrater Reability Kappa
dan mendapatkan hasil tidak didapatkan perbedaan di antara kedua data,
sehingga data dapat dikatakan valid. Setelah pengamatan, dilanjutkan
dokumentasi.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 48/93
37
7. Pengolahan dan analisis data
Pengolahan dan analisis data hasil penelitian dilakukan dengan
menggunakan perangkat lunak komputer.H. Analisa Data
Analisis dilakukan dengan bantuan piranti lunak SPSS® untuk Windows.
Karakteristik hewan coba ditampilkan dalam rerata ± standar deviasi (SD).
Penilaian normalitas dan distribusi data peneliti dan interobserver dilakukan
dengan uji interrater Reability Kappa yang sebelumnya sudah dilakukan supervisi
dengan dokter spesialis Patologi Anatomi. Dilakukan uji normalitas Saphiro-Wilk .
Pada analisis uji normalitas Saphiro-Wilk , diketahui data tidak terdistribusi normal
dan homogen, dilakukan transformasi Log dan uji distribusi ulang, namun data
masih tidak terdistribusi normal maka peneliti melakukan analisis statistik dengan
uji non parametrik Kruskall-Wallis yang dilanjutkan dengan analisis post hoc
Mann-Whitney, yang sebelumnya data sudah di uji validitas menggunakan
Wilcoxon.
I. Waktu dan Tempat Penelitian
1. Waku penelitian
Penelitian dilaksanakan selama 9 bulan dari Maret 2015-November 2015
2. Tempat penelitian
a. Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Fakultas Biologi, Universitas
Jenderal Soedirman sebagai tempat determinasi tumbuhan
b. Laboratorium Biologi, Jurusan Farmasi, FIK, Universitas Jenderal
Soedirman sebagai tempat pembuatan ekstrak
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 49/93
38
c. Animal house Laboratorium Farmakologi, Jurusan Kedokteran Umum, FK,
Universitas Padjajaran Bandung sebagai tempat pemberian perlakuan
hewan coba
d. Laboratorium Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah
Mada sebagai tempat pembuatan preparat histologi
e. Laboratorium Histologi, Jurusan Kedokteran Umum, FK, Universitas
Jenderal Soedirman sebagai tempat pengamatan dan dokumentasi preparat
histologi
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 50/93
39
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
1. Pelaksanaan penelitian
Penelitian dilakukan pada bulan Maret-November 2015. Perlakuan terhadap
hewan coba dilakukan di animal house Laboratorium Farmokologi Fakultas
Kedokteran Universitas Padjajaran. Penelitian bertujuan untuk mengetahui
pengaruh ekstrak methanol daging buah mahkota dewa dan metformin terhadap
gambaran atrofi tubulus proksimal ginjal pada tikus model diabetes mellitus (DM)
tipe 2. Penelitian ini menggunakan 30 ekor tikus putih yang dibagi dalam 6
kelompok yaitu kelompok A sebagai kontrol sehat, kelompok B sebagai kontrol
sakit, kelompok C diinduksi DM dan diberi ekstrak methanol mahkota dewa
sebanyak 200 mg/kgBB/hari (MD 200), kelompok D diinduksi DM dan diberi
ekstrak methanol mahkota dewa sebanyak 250 mg/kgBB/hari (MD 250), kelompok
E diinduksi DM dan diberi ekstrak methanol mahkota dewa sebanyak 300
mg/kgBB/hari (MD 300), serta kelompok F diinduksi DM dan diberi metformin
sebanyak 150 mg/kgBB/hari. Masing-masing 1 ekor tikus dari kelompok B, C, D,
dan F mati setelah diinduksi DM, sehingga total jumlah hewan coba yang dilibatkan
dalam penelitian ini sebanyak 26 ekor tikus. Menurut rumus Federer jumlah tikus
minimal untuk penelitian ini sebanyak 4 ekor, maka jumlah tikus yang hidup masih
dapat dianalisis secara kuantitatif.
Seluruh hewan coba diamati tingkah laku serta pola makan selama 21 hari
perlakuan, yang sebelumnya sudah diaklimatisasi selama 7 hari dan didapatkan
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 51/93
40
pada kelompok A kontrol sehat dan kelompok perlakuan C, D, E, dan F tidak
mengalami aktivitas berlebihan, pola makan dan frekuensi makan yang normal
selayaknya tikus sehat, akan tetapi hanya pada kelompok B yaitu kelompok sakityang mengalami peningkatan pola makan dan intensitas buang air kecil dan air
besar. Selama perlakuan tikus diberikan makanan berupa pelet 551®, diberikan
makan setiap hari sejumalah 500 gr/hari per kelompok tikus yang berisi 5 ekor tikus
dan diberikan minum air mineral RO®. Tikus dibuatkan kandang berukuran 48 x 30
cm dengan tinggi 14 cm untuk tiap kelompok, dibersihkan setiap hari. Alas
kandang diberikan bekas jerami untuk menjaga supaya tidak terlalu lembab, atap
kandang menggunakan kawat berlubang yang sudah disesuaikan ukurannya dengan
kandang.
2. Glukosa Darah Tikus
Kadar glukosa darah seluruh hewan coba diperiksa menggunakan
spektrofotometer metode GOD-PAP, sebelum dilakukan induksi ( pre induksi)
nikotinamid dan streptozotocyn, setelah induksi ( post induksi) dan setelah
perlakuan ( post perlakuan). Pemeriksaan kadar glukosa darah sebelum induksi ( pre
induksi) dilakukan untuk memastikan tikus dalam kondisi sehat, pemeriksaan kadar
glukosa darah setelah induksi ( post induksi) dilakukan untuk melihat keberhasilan
induksi, dan pemeriksaan kadar glukosa darah setelah perlakuan untuk mengetahui
efek perlakuan terhadap hewan coba. Gambar 4.1. menunjukkan rerata perubahan
glukosa darah sebelum induksi, setelah induksi dan setelah perlakuan. Semua
hewan coba dari kelompok B, C, D, E dan F memiliki kadar glukosa darah post
induksi > 250 mg/dL yang menunjukkan keberhasilan induksi nikotinamid dan
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 52/93
41
streptozotocyn. Data keseluruhan kadar glukosa darah hewan coba dapat dilihat
pada Lampiran 7.
Gambar 4.1. Rerata Kadar Glukosa Darah Pre, Post Induksi, dan Post PerlakuanKelompok A (kontrol sehat), kelompok B (kontrol sakit), kelompok C (MD 200), kelompok
D (MD 250), kelompok E (MD 300) *(p<0,05), kelompok F (metformin 150)
Kelompok A menunjukkan kadar glukosa darah sebelum induksi sebesar
111,8 mg/dL dan kadar glukosa darah setelah induksi sebesar 83,4 mg/dL. Hasil ini
tidak menunjukkan kegagalan karena kelompok ini tidak diinduksi streptozotocyn
n=5 n=5n=4n=4 n=4n=4
Kelompok
Kelompok
B
Kelompok
C
Kelompok
D
Kelompok
E
Kelompok
F
Kelompok
A
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 53/93
42
dan nikotinamid. Meskipun mengalami penurunan kadar glukosa darah, namun
masih berada dalam batas kadar glukosa darah normal. Kelompok ini digunakan
sebagai kelompok kontrol sehat. Setelah induksi dinyatakan berhasil, hewan cobadiberi perlakuan sesuai kelompok. Perlakuan diberikan selama 21 hari. Pada hari
ke-22, kadar glukosa darah hewan coba kembali diperiksa.
Gambar 4.1 menunjukkan perubahan kadar glukosa darah setelah diinduksi
dan setelah perlakuan. Kelompok B, C, D, dan E mengalami penurunan kadar
glukosa darah setelah diberi perlakuan berupa aquades RO® (kelompok B) dan
ekstrak methanol mahkota dewa (kelompok C, D, dan E). Kelompok A
menunjukkan kenaikan kadar glukosa darah, namun masih berada dalam range
kadar glukosa darah yang normal begitu juga pada kelompok F.
Penurunan glukosa darah signifikan (p<0,05) terjadi pada kelompok E yaitu
kelompok tikus yang diberi ekstrak methanol daging mahkota dewa dosis 300
mg/kgBB/hari dengan rerata penurunan kadar glukosa darah post induksi dan post
perlakuan sebesar 139 mg/dL (p=0,048). Sementara itu, kelompok B, C, dan D
mengalami penurunan kadar glukosa darah yang tidak signifikan, sedangkan
kelompok F mengalami peningkatan kadar glukosa darah setelah pemberian
metformin 150 mg/kgBB/hari selama 21 hari. Data rerata glukosa darah post
induksi dan post perlakuan serta analisis statistik perubahan glukosa darah dapat
dilihat pada Lampiran 8.
3. Pengamatan Atrofi Tubulus Proksimal Ginjal
Pada hari ke-22 dilakukan terminasi dan pengambilan jaringan ginjal.
Jaringan ginjal kemudian diproses untuk pembuatan preparat histologi di
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 54/93
43
laboratorium riset Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman. Fiksasi
dilakukan dengan larutan NBF 10% kemudian ditiriskan pada saringan, selanjutnya
dipotong dari regio pusat dan kedua sisi perifer organ dengan ketebalan + 2 cm dandimasukkan ke dalam keranjang (basket ). Setelah itu dilakukan proses dehidrasi
dengan ethanol bertingkat 70%, 80%, 90% dan absolute. Mencetak blok paraffin
dengan cara jaringan diambil dari cassette kemudian diletakkan di tempat
pengeblokan. Blok disempurnakan dengan memberikan parafin cair sampai
ketebalan sekitar 8-10 mm. Tutup dengan cassette dilanjutkan pemotongan jaringan
dengan microtome. Pewarnaan jaringan dilakukan dengan cara dioksidasi dengan
larutan Periodic Acid 0,5% selama 5 menit dan bilas dengan air mengalir. Spesimen
diletakkan dalam reagen schiff selama 15 menit sehingga berwarna pink terang
kemudian cuci di bawah air mengalir selama 5 menit sampai spesimen berubah
menjadi pink gelap, selanjutnya dilakukan pewarnaan kontras dengan Mayer’s
hematoxylin selama 1 menit, selanjutnya dilakukan pencucian di bawah air mengalir
selama 5 menit dan dilanjutkan dengan mounting .
Atrofi tubulus proksimal ginjal diamati pada 5 lapang pandang tiap preparat,
pada setiap lapang pandang dipilih 10 tubulus secara acak dan dilakukan
pengamatan dibawah mikroskop dengan perbesaran 400x. Jumlah sel atrofi pada
tiap tubulus dihitung pada tiap lapang pandang dalam 5 lapang pandang dan dibuat
presentase dan diberikan skoring atrofi tubulus proksimal ginjal. Skor 0 jika tidak
ditemukan atrofi, skor 1 jika terdapat presentase <10%, skor 2 jika terdapat
presentase 10%-25%, skor 3 jika terdapat persentase 26%-50%, dan skor 4 jika
terdapat persentase >50%. Atrofi tubulus proksimal ginjal ditandai hilangnya
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 55/93
44
beberapa sel dengan pembentukan sel nekrotik dalam lumen tubulus proksimal,
beberapa juga ditandai dengan sel epitel tubulus yang memipih dan terbentuk
jaringan fibrous sehingga membran basal terlihat tebal diikuti penurunan diametertubulus proksimal ginjal Gambar 4.2. (Trihono, 2011).
Gambar 4.2. Gambaran Mikroskopis Tubulus Proksimal Ginjal tiap Kelompokdilihat pada Perbesaran 400x dengan Pewarnaan Periodic Acid Schiff (PAS)
A: tubulus proksimal normal dengan ciri epitel berbentuk kuboid selapis dengan inti seltersusun berjarak disertai brush border, B: panah hitam menunjuk sel nekrotik yang
mengalami penyusutan inti menjadi padat dan berwarna gelap, C: panah hitam menunjuk selepitel yang memipih disertai kehilangan inti, D: panah hitam menunjuk membran basal
tubulus yang menebal akibat timbunan matriks ekstraseluler, E: panah hitam menunjuk selepitel atrofi ditandai dengan penyusutan inti sel dan ukuran sel epitel tubulus proksimal, F:
panah hitam menunjuk sel epitel yang memipih disertai kerusakan mikrovili dan terdapat sel
nekrotik disekitarnya
Pengamatan atrofi tubulus proksimal ginjal dilakukan oleh peneliti dan
interobserver. Sebelumnya terlebih dahulu dilakukan pengamatan dengan supervisi
oleh spesialis Patologi Anatomi. Hasil pengamatan diuji dengan interrater Reability
B
C
D
E F
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 56/93
45
Kelompok E(MD 300)
(Sumber: data primer yang diolah)Kelompok
Kappa (Lampiran 9) yang menunjukan tidak ada perbedaan pengamatan peneliti
dengan interobserver dengan nilai kappa 0,65 (nilai kappa >0,06).
Gambar 4.3. Rerata Standar Deviasi Skor Atrofi Tubulus Proksimal GinjalPada uji antar kelompok perlakuan menggunakan post hoc Mann-Whitney didapatkan hasil
signifikan pada kelompok A dengan B *(p=0,016), B dengan C *(p=0,029), B dengan E*(p=0,016), B dengan F *(p=0,029) dan tidak signifikan pada kelompok C dengan D (0,686),
D dengan E (p=0,190), E dengan F (p=0,556)
Gambar 4.3 adalah rerata standar deviasi ± (SD) skor atrofi tubulus
proksimal ginjal pada tiap kelompok. Kelompok A memiliki skor atrofi paling
sedikit dibandingkan kelompok lain. Kelompok D memilik jumlah skor atrofi
paling sedikit dibandingkan dengan kelompok B, C, dan E hal ini dibuktikan
dengan analisis statistik. Analisis juga menunjukkan kelompok F memiliki skor
Kelompok D(MD 250)
Kelompok F(Metformin 150)
Kelompok C(MD 200)
Kelompok A(KontrolSehat)
Kelompok B(Kontrol
Sakit)
Kelompok E(MD 300)
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 57/93
46
atrofi lebih kecil dibandingkan kelompok B, C, E, dan sebanding dengan kelompok
D.
Hasil pengamatan penelitian diuji normalitas data menggunakan Saphiro-
Wilk . Data penelitian dinyatakan tidak terdistribusi normal. Data penelitian
terdistribusi normal apabila nilai (p>0,05) (Lampiran 10). Selanjutnya dilakukan
transformasi Log yang dilanjutkan dengan uji normalitas kembali, namun data
penelitian dinyatakan tidak terdistribusi normal sehingga dilakukan uji non
parametrik. Uji non parametrik yang dilakukan adalah uji Kruskall-Wallis. Hasil uji
Kruskall-Wallis dapat dilihat pada (Lampiran 11) yang menunjukkan terdapat
perbedaan bermakna pada skor atrofi tubulus proksimal ginjal pada minimal dua
kelompok perlakuan dengan nilai p = 0,001 (p<0,05) dan dilanjutkan dengan uji
analisis post hoc Mann-Whitney. Uji post hoc Mann-Whitney dilakukan untuk
mengetahui perbedaan skoring atrofi tubulus proksimal tiap kelompok terdiri dari
kelompok A (kontrol sehat), kelompok B (kontrol sakit), kelompok C, D, E
perlakuan ekstrak mahkota dewa dosis bertingkat 200, 250, 300 mg/kgBB/hari dan
metformin dosis 150 mg/kgBB/hari (Lampiran 12).
B. Pembahasan
Pada penelitian, hasil uji kadar glukosa darah hewan coba menggunakan
spektrofotometer metode GOD-PAP menunjukkan bahwa kadar glukosa darah
kelompok B, C, D, dan E setelah perlakuan menunjukkan kadar glukosa darah
yang lebih rendah dibandingkan kadar glukosa darah setelah induksi nikotinamid
dan streptozotocyn (induksi DM), dengan perubahan glukosa darah yang bermakna
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 58/93
47
terjadi pada kelompok E. Rerata penurunan kadar glukosa darah post perlakuan
dengan ekstrak daging mahkota dewa dosis 300 mg/kgBB/hari sebesar 139 mg/dL,
dan secara statistik signifikan. Sehingga, pemberian ekstrak daging mahkota dewadosis 300 mg/kgBB/hari selama 21 hari dapat menurukan kadar glukosa darah
secara signifikan, meskipun masih berada dalam kondisi hiperglikemia
(Aharangpour, 2014a).
Penurunan kadar glukosa darah setelah diberikan terapi berupa ekstrak
daging buah mahkota dewa didukung beberapa penelitian. Penelitian oleh Sharma
(2014) mengatakan bahwa ekstrak daging buah mahkota dewa yang diberikan pada
tikus Sprague Dawley jantan terbukti mengandung senyawa antihiperglikemia
berupa flavonoid, tepenoid, dan tannin. Senyawa tersebut memiliki efek
penghambatan pada enzim alfa-glukosidase yang bisa menurunkan glukosa darah
post-prandial . Alfa-glukosidase adalah enzim yang berperan dalam konversi
karbohidrat menjadi glukosa, karbohidrat akan dicerna oleh enzim-enzim alfa-
glukosidasi (maltase, isomaltase, glukomaltase, dan sukrase) di dalam mulut dan
usus menjadi gula yang lebih sederhana kemudian diserap oleh tubuh yang
mengakibatkan peningkatan kadar glukosa darah. Dengan dihambatnya enzim
alfa-glukosidase, kadar glukosa darah dapat dikembalikan kedalam kondisi normal
(Bosenberg, 2008).
Penelitian lain menyatakan bahwa ekstrak daging buah mahkota dewa selain
sebagai antihiperglikemia juga memiliki efek protektif pada jaringan ginjal pada
kondisi diabetik (Arjadi et al ., 2008). Pada penelitian digunakan ekstrak methanol
daging buah mahkota dewa, ekstrak methanol mahkota dewa mengandung salah
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 59/93
48
satu senyawa flavonoid yaitu magniferin dan quercetin yang telah terbukti
memiliki aktivitas hipoglikemik terhadap tikus model DM tipe-2 yang diinduksi
streptozotocyn (Ali et al ., 2012).Kelompok F adalah kelompok dengan hewan coba yang diinduksi DM dan
diberikan perlakuan metformin 150 mg/kgBB/hari selama 21 hari. Terdapat
kenaikan rerata kadar glukosa darah post induksi kelompok ini sebesar 351,25 ±
44,92 mg/dL sedangkan kadar glukosa darah post perlakuannya sebesar 364,5 ±
62,34 mg/dL, namun kenaikan tersebut tidak signifikan secara statistik. Metformin
sebagai obat lini pertama DM tipe 2 seharusnya memiliki efek anti hiperglikemia,
namun pada kasus ini, kadar glukosa darah hewan coba meningkat. Hal ini
dikarenakan waktu pemaparan metformin yang singkat yaitu 21 hari sedangkan
menurut Erejuwa et al . (2011) metformin menunjukkan aktifitas penurunan kadar
glukosa darah pada hewan coba setelah 4 minggu atau 28 hari. Penelitian lain juga
menunjukkan bahwa tikus model diabetik yang diinduksi STZ dan diberikan obat
metformin mengalami peningkatan kadar glukosa darah dari hari pertama induksi
sampai hari ke lima puluh induksi, setelah hari ke lima puluh terjadi penurunan
yang signifikan pada kadar glukosa darah tikus (Syamsul, 2011).
Sedangkan pada kelompok A adalah kelompok kontrol sehat yang tidak
diinduksi DM. Rata-rata kadar glukosa kelompok A sebelum perlakuan adalah
83,4 ± 18,43 mg/dL sedangkan glukosa setelah perlakuan yang berupa pemberian
air mineral RO® dan pakan pellet 511® adalah 96,4 ± 14,40 mg/dL. Meskipun
terjadi kenaikan kadar glukosa darah namun, kenaikan ini tidak signifikan dan
masih dalam rentang kadar glukosa darah normal (Aharangpour et al ., 2014a).
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 60/93
49
Pengamatan dan analisis statistik pada skor atrofi tubulus proksimal
ginjal dilakukan oleh peneliti dan interobserver yang sebelumnya terlebih dahulu
dilakukan supervisi dengan dokter spesialis Patologi Anatomi. Tidak ada perbedaan antara data peneliti dan interobserver, sehingga analisis statistik dapat
dilanjutkan. Hasil analisis Mann-Whitney menunjukkan perbedaan signifikan
terjadi antara kelompok A dengan B, kelompok B dengan C, kelompok B dengan
D, kelompok B dengan E, dan B dengan F. Tidak signifikan pada kelompok C
dengan D, kelompok D dengan E, dan kelompok E dengan F.
Kelompok A sebagai kelompok kontrol sehat memiliki skor atrofi paling
sedikit dibanding kelompok lain dengan rerata SD 0,60 ± 0,89, namun pada
kelompok kontrol sehat seharusnya tidak diketemukan atrofi pada sel tubulus
proksimal. Hal tersebut dapat terjadi diakibatkan karena perawatan kandang yang
kurang ideal dapat menumbuhkan suatu jamur akibat makanan yang memiliki
kandungan protein yang bercampur dengan serabut jerami. Jamur yang tumbuh
dapat menghasilkan toksin jenis Ochratoxyn yang mampu menyebabkan
terjadingya kerusakan sel tubulus proksimal sehingga mengakibatkan gambaran
atrofi. Hifa yang masuk melalui kapiler glomerolus mengakibatkan kondisi
hipoksia jaringan ginjal (Hope, 2012).
Kelompok B sebagai kelompok kontrol sakit memilik skor atrofi paling
banyak dibanding kelompok lain dengan rerata SD 3,25 ± 0,5. Hal ini
menunjukkan bahwa kelompok B mengalami kondisi diabetik yang sangat tinggi
dikarenakan induksi nikotinamid dan streptozotocyn (STZ). Hal ini sesuai dengan
penelitian Chinedeum (2013) bahwa STZ sebagai agen diabetogenik lebih baik
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 61/93
50
dibandingkan dengan aloxan, dengan keefektifitasan lebih luas dalam berbagai
spesies hewan coba. Hewan coba yang diinduksi STZ dapat menyerupai
komplikasi akut dan kronik DM pada manusia serta memiliki kesamaan struktur,fungsi dan abnormalitas penyakit pada manusia.
Menurut penelitian Indranila (2013) kondisi hyperglycemic kronik pada
hewan coba yang diinduksi STZ mengakibatkan kerusakan microvascular yang
mirip dengan komplikasi nefropati diabetik. Nefropati diabetik (ND) memicu
ikatan biokimiawi antara glukosa dan protein di matriks ginjal sehingga terbentuk
advance glycation end-product (AGEs) yang teraktivasi lewat jalur polyol pathway
dan protein kinase C (PKC) yang memicu terjadinya apoptosis dan peningkatan
ekspresi vascular endothelial growth factor (VEGF) serta menstimulasi
transforming growth factor- β (TGF-B) (Yamagishi, 2010). Peningkatan ekspresi
VEGF & TGF-β memicu terjadinya peningkatan reactive oxygen species (ROS),
hal tersebut mengakibatkan terjadinya kerusakan sel tubulus proksimal sehingga
mengakibatkan atrofi (Trihono, 2011).
Pada kelompok perlakuan ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
dosis bertingkat 200, 250, 300 mg/kgBB/hari memiliki skor atrofi lebih tinggi dari
kelompok A (kontrol sehat), yaitu kelompok yang tidak diinduksi DM dan
diberikan aquades dengan skor rerata atrofi 0,60 ± 0,89. Kelompok C ekstrak
methanol daging buah mahkota dewa dosis 200 mg/kgBB/hari memiliki skor atrofi
lebih rendah dibanding dengan kelompok B (kontrol sakit) dengan skor rerata 2,25
± 0,5. Kelompok D dengan pemberian ekstrak methanol daging buah mahkota
dewa dosis 250 mg/kg/BB/hari memiliki skor atrofi tubulus proksimal paling
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 62/93
51
rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan mahkota dewa yang lain,
dengan rerata skor atrofi tubulus proksimal adalah 1,75 ± 0,5. Kelompok E ekstrak
methanol daging buah mahkota dewa dosis 300 mg/kgBB/hari memiliki skor rerataatrofi lebih kecil dibandingkan kelompok B (kontrol sakit) dan C (MD 200) yaitu
dengan rerata yaitu 1,8 ± 0,45. Berdasarkan analisis data skor atrofi yang sudah
dinyatakan tersebut, peneliti berpendapat bahwa ekstrak methanol mahkota dewa
dosis 250 mg/kgBB/hari mempunyai skor atrofi tubulus proksimal ginjal lebih baik
dibandingkan dengan dosis ekstrak methanol mahkota dewa 200 mg/kgBB/hari
dan 300 mg/kgBB/hari.
Hasil penelitian yang sudah dilakukan menyatakan bahwa tikus yang
diberikan perlakuan dengan ekstrak methanol daging buah mahkota dewa memiliki
skor atrofi lebih rendah dibandingkan dengan tikus yang diinduksi DM tipe-2
(kelompok sakit). Hal ini sesuai dengan penelitian Sellamuthu (2008) & Yosie et
al . (2011) yang menyatakan bahwa kandungan ekstrak methanol daging buah
mahkota dewa terutama senyawa flavonoid yang terdiri dari magniferin dan
quercetin, memiliki efek meningkatkan utilisasi glukosa dengan meningkatkan
aktivitas glucose-6-phosphate sekaligus meningkatkan pengeluaran insulin dari
sel β pankreas melalui perubahan metabolisme Ca2+ dan juga meregenerasi sel β
pancreas pada kondisi hiperglikemia.
Kondisi hiperglikemia dapat mengakibatkan glukotosisitas yang semakin
lama mengakibatkan hipoksia jaringan, terutama jaringan ginjal yang
mengakibatkan kerusakan sel. Dalam penelitian ini sel yang diteliti adalah sel
tubulus proksimal. Menurut Satrawan & Suwitran (2008) sel tubulus proksimal
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 63/93
52
ginjal yang mengalami hipoksia lebih mudah mengalami gangguan fungsi
mitokondria dan defisit energi yang menetap. Hipoksia dapat menginduksi jejas
tubulointerstisial, mengakibatkan kerusakan sel epitel tubulus yang memipihakibat hipoksia sehingga semakin lama menjadi sel atrofi dan jika terjadi kematian
sel (nekrosis) sehingga digantikan dengan jaringan parut (fibrosis) (Sastrawan &
Suwitra, 2008).
Pada kelompok F yang diberikan perlakuan metformin dosis 150
mg/kgBB/hari memiliki skor atrofi lebih tinggi dari kelompok A (kontrol sehat),
yaitu kelompok yang tidak diinduksi DM dan diberikan aquades dengan skor
rerata atrofi 0,60 ± 0,89. Namun, kelompok F memiliki rerata skor atrofi lebih
rendah dibanding kelompok B (kelompok sakit), kelompok C (MD 200),
kelompok E (MD 300) dan mempunyai rerata skor atrofi yang sama dengan
kelompok D (MD 250), dengan rerata 1,75 ± 0,5. Hasil ini menyatakan bahwa
metformin adalah obat lini pertama terapi DM tipe-2 menurut American Diabetes
Asscotiation (ADA, 2015) yang mampu menghentikan apoptosis yang diinduksi
oleh stres oksidatif di endotel sehingga mencegah disfungsi vaskuler (Morales et
al., 2010). Metformin dapat menghambat kondisi diabetik akibat hiperglikemia
dan menghambat keluarnya AGEs melalui aktivasi beberapa jalur seperti polyol
pathway dan protein kinase C (PKC). AGEs memicu apoptosis dan peningkatan
ekspresi vascular endothelial growth factor (VEGF) serta menstimulasi
transforming growth factor- β (TGF-β) (Ishibasi, 2012).
Hasil penelitian Morales et al . (2010) menunjukkan bahwa metformin
mampu mencegah kerusakan struktur histologi, fungsi, dan biokimia ginjal pada
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 64/93
53
induksi gentamisin yang meningkatkan stres oksidatif pada ginjal. Tanda dari efek
metformin adalah peningkatan renal blood flow dan aliran urin. Mekanisme
proteksi dari metformin adalah dengan memperbaiki mitokondria sel-sel ginjalyang rusak karena induksi dari gentamisin. Metformin juga menghambat
pembentukan reactive oxygen species (ROS) melalui aktivitas mitokondrial.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak methanol daging buah
mahkota dewa dosis 250 mg/kgBB/hari memberikan hasil gambaran histologi
yang sama menurut analisis data dengan metformin dosis 150 mg/kgBB/hari yang
dilihat dari skoring atrofi tubulus proksimal ginjal. Hal tersebut didukung dengan
penelitian sebelumnya, menyebutkan bahwa metformin dan ekstrak methanol
daging buah mahkota dewa dapat menurunkan ekspresi TGF-α dan VEGF
(Sulistyoningrum & Setiawati, 2013). Berdasarkan pernyataan Lubis et al . (2013)
bahwa TNF-α merupakan sitokin penyebab inflamasi yang diproduksi sel
macrofage dan sel epitel ginjal mesangial tubulus. Ekspresi sitokin lain yaitu TGF-
β mempunyai kapasitas untuk mengaktivasi fibroblas intersisial dan menginduksi
apoptosis sehingga terjadi hipoksia akibat peningkatan ROS yang mengakibatkan
terjadinya atrofi tubulus proksimal ginjal.
Berdasarkan hasil penelitian yang lain, hasil diatas menunjukkan
perbedaan dengan penelitian yang dilakukan Rabyah et al . (2012) yang
mengatakan bahwa ekstrak methanol mahkota dewa yang diberikan pada tikus
yang sudah diinduksi dengan STZ menunjukkan hasil yang signifikan dibanding
metformin, eter extract dan water extract . Akan tetapi hal tersebut hanya dapat
terjadi pada kondisi diabetik kronik, dikarenakan kandungan flavonoid dari ekstrak
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 65/93
54
methanol daging buah mahkota dewa bukan merupakan insulin secretogenic
melainkan meningkatkan kemampuan insulin untuk merangsang pembuangan
glukosa dalam darah.
C. Keterbatasan Penelitian
Keterbatasan pada penelitian ini adalah jarak yang jauh antara tempat
penelitian yang berada di Fakultas Kedokteran Universitas Padjadjaran dengan
peneliti yang berada di Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman
Purwokerto hal ini mengakibatkan kontrol terhadap hewan coba tidak dapat setiap
hari dilakukan, sehingga dikhawatirkan terdapat kesalahan prosedur dalam
melakukan perlakuan. Peneliti belum mengetahui tentang adanya efek toksik
ekstrak methanol daging buah mahkota dewa terhadap jaringan ginjal pada tikus
model diabetik. Peneliti hanya menghitung skor atrofi tubulus proksimal ginjal
saja, hal ini disebabkan jika ingin menghitung skor fibrosis tubulus proksimal
ginjal harus dilakukan pewarnaan khusus mengunakan pewarnaan trichome. Pada
penelitian juga belum dilakukan perlakuan hewan coba dengan menggunakan
kombinasi ekstrak methanol daging buah mahkota dewa dan metformin dengan
dosis yang sudah disesuaikan.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 66/93
55
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Gambaran histologi tubulus proksimal ginjal model DM tipe- 2 yang dinilai
dari skoring atrofi memperlihatkan hasil skor atrofi lebih rendah pada dosis
ekstrak methanol daging buah mahkota dewa dosis 200, 250, dan 300
mg/kgBB/hari dibandingkan dengan kelompok kontrol sakit yang diberikan
induksi DM dan plasebo akuades.
2. Gambaran histologi tubulus proksimal ginjal model DM tipe-2 yang dinilai
dari skoring atrofi memperlihatkan hasil skor atrofi lebih rendah pada dosis
metformin 150 mg/kgBB/hari dibandingkan dengan kelompok kontrol sakit
yang diberikan induksi DM dan plasebo akuades.
3. Gambaran histologi tubulus proksimal ginjal model DM tipe- 2 yang dinilai
dari skoring atrofi menurut analisis data bahwa skor atrofi ekstrak methanol
daging buah mahkota dewa 250 mg/kgBB/hari sebanding dengan metformin
150 mg/kgBB/hari.
4. Dosis ekstrak methanol daging buah mahkota dewa yang paling efektif
terhadap gambaran histologi tubulus proksimal ginjal yang dinilai dari
skoring atrofi terdapat pada dosis 250 mg/kgBB/hari.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 67/93
56
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang pengaruh ekstrak daging buah
mahkota dewa dengan gambaran fibrosis tubulus proksimal ginjal pada tikusmodel DM tipe-2.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang kandungan ekstrak methanol
daging buah mahkota sebagai agen antidiabetik dalam pengobatan
komplikasi DM.
3. Perlu dilakukan uji toksisitas ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
pada berbagai dosis terhadap organ ginjal.
4. Perlu dilakukan penelitian kombinasi ekstrak methanol daging buah mahkota
dewa dengan metformin terhadap gambaran histologi tubulus proksimal
ginjal.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 68/93
57
DAFTAR PUSTAKA
American Diabetes Association. 2015. Standards of Medical Care in Diabetes.
Diabetes Care, Vol. 38 Page 41-48Ahangarpour, A., Zamaneh, H.T., Jabari, A., Nia, H.M., Heidari. 2014.
Antidiabetic and Hypolipidemic Effects of Dorema aucheriHydroalcoholic Leave Extract in Streptozotocin-Nicotinamide InducedType 2 Diabetes in Male Rats. Iranian Journal of Basic Medicine
Sciences, Vol. 17 : 808-814.
Ali, R.B., Atangwho, N., Kaur, O.S., Abraika, M., Ahmad, R., Mahmud, M. Z.,Asmawi. 2012. Bioassay-Guided Antidiabetic Study of Phaleriamacrocarpa Fruit Extract. Molecules, Vol. 17: 4986-5000.
Arjadi, F., Mustofa, Sulistyoningrum, E. 2008. Kajian ekstrak buah mahkota dewa(Phaleria macrocarpa (scheff.)Boerl. terhadap regenerasi sel pulauLangerhans pankreas pada tikus putih (Rattus norvegicus) diabetes. Jurnal Kedokteran & Kesehatan. Vol. 40 : 1-4
Arjadi, F., Susanto, P. 2010. Regenerasi Sel Pulau Langerhans Pada Tikus Putih(Rattus norvegicus) Diabetes yang Diberi Rebusan Daging MahkotaDewa (Phaleria macrocarp (scheff.)Boerl.). Sains Medika Jurnal
Kedokteran dan Kesehatan.
Bennett, P., Fieto, K., Harley, N., Roowman. 2008. Epidemiology of Type2
Diabetes, Diabetes Millitusa Fundamental and Clinical Text .Philadelphia: Lippincott William & Wilkins Page : 43 (1): 544-547.
Bosenberg, L.H. 2008. The mechanism of action oral antdiabetic drugs: a reviewof recent literature. The Journal of Endocrinology. Metabolism and
Diabetes of South Africa, Vol. 13: 80-88
Buraerah, H. 2010. Analisis Faktor Risiko Diabetes Melitus tipe-2 di PuskesmasTanrutedong, Sidenreg Rappan. Jurnal Ilmiah Nasional ; Available:http://lib.atmajaya.ac.id/default.aspx?tabID=61&src=a&id=186192.
Busch, M.S., Franke, C., Rüster, G., Wolf. 2010. Advanced Glycation End-Products and The Kidney. European Journal of Clinical Investigation,Vol. 40: 742-755
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 69/93
58
Chinedum, O., Eleazu, K.C. 2013. Review of Mechanism of Cell Death Resultingfrom Streptozotocin Challenge in Experimental Animals, Its Practical Useand Potential Risk to Humans. Journal of Diabetes & Metabolic
Disorders, Vol. 12-60.
Chung, S.S.M., Ho, M.K.C., Lam, K.S., Chung, S.K. 2003. Contribution of PolyolPathway to Diabetes-Induced Oxidative Stress. Journal of American
Society of Nephrology, Vol. 14: 233-236
Cotran, R.S., Kumar, V. Robbins, S.L. 2007. Pathology Basic of Disease.6th edition. Philadelphia: W.B. Saunders Company.
Eleazu, C.O., Eleazu, K.C., Chukwuma, S., Essien, U.N. 2013. Review of themechanism of cell death resulting from streptozotocin challenge inexperimental animals, its practical use and potential risk to humans. Journal of Diabetes & Metabolic Disorders, Vol. 12: 1-7.
Erejuwa, O., Sulaiman, S., Wahab, M.S., Salam, Salleh, Gurtu. 2011. Comparisonof antioxidant effects of honey, glibenclamide, metformin, and theircombinations in the kidneys of streptozotocin induced diabetic rats. International Journal Molecular Science, Vol. 12: 829-843.
Fioretto, P., Mauer, M. 2007. Histopathology of diabetic nephropathy. Seminars of
Nephrology Journal, Vol. 27 : 195-207.
Forbes, J.M., Coughan, M.T., Cooper, M.E. 2008. Oxidative Stress As A MajorCulprit in Kidney Disease in Diabetes. American Diabetes Journal , Vol.57 :1446-1454
Gandhi, S., Srinivassan, B.P., Akarte, A.S. 2013. Potential Nephrotoxic EffectsProduced by Steroidal Saponin in STZ-induced Diabetic Rats. National
Center for Biotechnology Information, Vol. 2: 3-12
Geraldes, P., and King, G.L. 2010. Activation Protein Kinase C Isoform and ItsImpact on Diabetic Complications. Circulation Research, Vol. 106: 1319-1331
Ghasemi A. 2014. Streptozotocin-nicotinamid induced rat model of type 2diabetes. Acta Physiologica Hungaria, Vol. 101 : 408-420.
Gunawan, Gan S. 2012. Farmakologi dan terapi edisi 5. Departemen Farmakologidan Terapeutik. Jakarta: FKUI.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 70/93
59
Harding, Helen, A., Fierto, G., Alan, K.V., Augosto, S. 2003. Dietary Fat adn Riskof Clinic Type Diabetes. American Journal of Epidemiology, Vol.15;150-159.
Hastuti, R.T. 2008. Faktor-faktor Risiko Ulkus Diabetika Pada Penderita Diabetes Melitus Studi Kasus di RSUD Dr. Moewardi Surakarta
[dissertation]. Universitas Diponegoro (Semarang).
Hope, J.H. 2013. A Review of Diagnosis and Treatment of Ochratoxyn aInhalation Exposure Associated with Human Illness and Kidney Diseaseincluding Focal Segment Glomerulosklerosis. Journal of Environmental
and Public Health, Vol. 12 :1-20.
Indranila, K.S. 2013. Aspek Biomolekuler Apoptosis, Caspase-3 & RAK padaPemberian Morinda Citrofolia (Mengkudu) Tikus Sprague DawleyDiabetes Nefropati yang diinduksi Streptozotocy (STZ). Medica
Hospitalia, Journal of Clinical Medicine, Vol. 1 : 150-158
International Diabetes Federation. 2014. Diabetes Atlas Sixth Edition. International Diabetes Federation (IDF).
Ishibasi, Y., Matsui, T., Sho-ichi, Yamagishi. 2012. Beneficial effects ofMetformin and Irbestan on advance glycation end product (AGEs)-RAGE-induced proximal tubule injury. Journal Pharmacological
Research, Vol. 65 : 297-302
Katzung, Bertram G. 2006. Basic and Clinical Pharmacology.Edisi 10.USA : McGraw Hill Lange.
Kemas, A.H. 2003. Rancangan Percobaan: Teori dan Aplikasi. Edisi 3.Jakarta :PT. Raja Grafindo Persada.
Kusumawati, D. 2004. Bersahabat dengan Hewan Coba.Yogyakarta : GadjahMada University Press.
Kim, H.J., Kong, M.K., Kim, Y.C. 2008. Benefical effects of phellodendri cortexextract on hyperglycemia and diabetic nephropathy in streptozotocin-induced diabetic rats. British Medical Bulletin reports. Vol. 18 : 24-67
Lubis, M., Alvarino, Tofrizal, Erkaidus. 2013. Pengaruh Pemberian Valsartan dan Kurkumin Terhadap Pembentukan Fibrosis di Tubulus Proksimal Ginjal
Akibat Obstruksi Ureter Unilateral pada Tikus Wistar . Diakses dari:http://jurnal.fk.unand.ac.id
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 71/93
60
Lim, A.K.H. & Tesch, G.H. 2012. Inflammation in diabetic nephropathy. Hindawi
Publishing Corporation, page 1-12.
Morales, A.I., Detaille, D., Prieto, Marta., Puente, Angel., Briones, Elsa., Arevalo,
Miguel. 2010. Metformin prevents experimental gentamicin-inducednephropathy by a mitochondria-dependent pathway. Kidney International ,Vol. 77 : 861-869.
PB PERKENI. Konsensus Pengelolaan Diabetes Melitus tipe 2. Jakarta: PBPERKENI: 2006.
Permana, H. 2009. Komplikasi Kronik dan Penyakit Penyerta pada Diabetes.Bandung : Division of Endocrinology and Metabolism Departmen ofInternal Medicine Padjadjaran University Medical School
Perkumpulan Endokrinologi Indonesia. 2011. Konsensus Pengelolaan dan
Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2 di Indonesia. Jakarta: Perkeni.
Powers, A.C., Fauci, S.A., Kasper, L.D., Longo, D.L., Braunwald, E., Hauser,L.S., Jameson, J.L. 2008. Diabetes mellitus. In : Harrison’s Principles ofInternal Medicine, 17th ed.New York: McGraw-Hill. Page : 2275-2304.
Ramana, K.V., Friedrich, B., Tammali, R., West, M.B., Bhatnagar, M.B.,Srivastava, S.K. 2005. Requirement of Aldose Reductase forHyperglycemic Activation of Protein Kinase C and Formation ofDiacylglycerol in Vascular Smooth Muscle Cells. American Diabetes
Journal , Vol. 54: 818-829
Rabyah, B., Ali, Item, J., Atangwho, Navneet K., Elssnouassi, Mohammed, Ali, J.,Mohd, Z., Asmawi, Rohzianim. 2012. Hypoglycemic and anti-hyperglicemyc study of Phaleria macrocarpa Fruits pericarp. Academic
Journal . Penang : Malaysia.
Rohyami, Y. 2008. Penentuan Kandungan Flavonoid dari Ekstrak Metanol DagingBuah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Scheff Boerl). Jurnal
Penelitian & Pengabdian,Vol. 5 : 1
Rocha, Ana., Almeida, Marta., Santos, Josefina., Carvalho, Andre. 2013.
Metformin in patients with chronic kidney disease: strengths andweakness. Journal of Nephrology, Vol. 26 : 55-60.
Rodriguez, D.L., Castelao, A.M., Górriz, J.L., Álvaro, F.D., González, J.F.N.2012. Phatophysiological Role and Therapeutic Implications ofInflammation in Diabetic Nephropathy. World Journal of Diabetes, Vol.3: 7-18
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 72/93
61
Rudge, M.V.C. Zidayeh, F., Rudge, L., Komar, Z. 2014. Streptozotocin-InducedDiabetes Models: Pathophysiological Mechanisms and Fetal Outcomes.Hindawi Publishing Corporation. Biochemistry Medical Research
International ; Vol. 11, Article ID 819065, diakses di :http://dx.doi.org/10.1155/2014/819065.
Sastrawan, I.G.P., Suwitra, K. 2008. Peran Hipoksia pada Patogenesis PenyakitGinjal. Bali : FK UniversitasUdayana
Sellamuthu, P.S., Muniappan, B.P., Perumal, S.M., Kandasamy, M. 2009.Bioassay-Guided Antidiabetic Study of Phaleria macrocarpa FruitExtract. Journal of Health Sciences, Vol. 55: 206-214.
Sharma, T., Sidhu, M.C. 2014. A review on antidiabetic medicinal plants. World Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 2 : 1356-1374.
Singh, D.K., Farrington, K. 2010. The tubulointrstitium in early diabeticnephropathy: prime target or bystander. International Journal of Diabetesin Developing Country, Vol. 30 :1-4.
Sicree, J.E. Shaw, R.A., Zimmet P.Z. 2010. Global estimates of the prevalence ofdiabetes for 2010 and 2030. Diabetes Research and Clinical Practice,Volume 87: 4-14.
Szkudelski T. 2001. The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in BCells of The Rat Pancreas. Department of Animal Physiology andBiochemistry, University of Agriculture, Poznan, Poland. Physiology
Research, Vol. 50 : 536-546.
Slamet, S. 2008. Diet pada penyakit Diabetes. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam.Edisi III. Jakarta: Balai Penerbit FK-UI.
Sujaya, Nyoman I. 2009. Pola Konsumsi Makanan Tradisional Bali sebagai FaktorRisiko Diabetes Melitus Tipe 2 di Tabanan. Jurnal Skala Husada, Vol. 6:75-81.
Sulistyoningrum, E., Setiawati. 2013. Phaleria macrocarpa reduces glomerulargrowth factor expression in alloxan-induced diabetic rats, Universa
medicina, Vol. 3 :71-90
Syamsul, E.S., Nugroho, A.H., Pramono, S. 2011. Aktivitas antidiabeteskombinasi Ekstrak terpurifikasi Herba Sambiloto ( Andrographis
paniculata (Burn. F.) Ness.) dan Metformin pada tikus DM tipe-2Resisten Insulin. Majalah Obat Tradisional , Vol. 16 : 124-131
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 73/93
62
Taneda, S., Honda, K., Tomidokoro, K., Uto, K., Nitta, K. 2010. Eicosapentaenoicacid restores diabetic tubular injury through regulation oxidative stressand mitochondrial aoptosis. American Journal Renal Physiology, Vol.299 :1451 : 1461.
Tan, A.L, Forbes, J.M., Cooper, M.E. 2007. AGE, RAGE, and ROS in Diabetic Nephropathy. Seminars in Nephrology, Vol. 27: 130-143
Teixeria, L. 2011. Regulation glucose physical exercise training assists in preventing type 2 diabetes development: focus on its antioxidant andanti-inflammantory properties. Biomed Central Cardiovascular
Diabetology. Vol. 10 ;1-15.
Thorens, B., Mueckler, M. 2010. Glucose Transporters in The 21st Century. American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism,Vol. 298:141-145
Trihono, P.P. 2011. Peran Transforming Growth Factor B pada PenyakitGinjal.Jakarta : Sariperdiatri, Vol. 13:49-54
Way, K.J., Katai, N., King, G.L. 2001. Protein Kinase C and The Development ofDiabetic Vascular Complications. Diabetic Medicine, Vol. 18: 945-959
Wei, W., Liu, Q., Tan, Y., Liu, L., Cai, L. 2009. Oxidative stress, diabetes, anddiabetic complications. Hemoglobin, Vol. 33 :370-377.
Widyahening, S.I., Soewondo, P. 2012. Kapasitas Manajemen Diabetes MelitusTipe 2 (DM T2) di Pusat Pelayanan Kesehatan Primer di Indonesia.Jakarta : FKUI.
Yamagishi, S., Matsui, T. 2010. Advanced glycation end products, oxidative stressand diabetic nephropathy. Oxidative Medicine and Cellular Longetivity,Vol. 3 :101-108.
Yosie, Andriani, John, Roland, Diego, Xavier, Z. 2011. "Antibacterial, radical-
scavenging activities and cytotoxicity properties of Phaleria Macrocarpa
(Scheff.) Boerl leaves in HEPG2 cell lines. Journal of PharmaceuticalSciences and Research, Vol. 2 :1700-1706.
Zhang, H., Liu, J., Lim, S., Huang, Z. 2009. The Oxford classification of IgAnephropathy: rationale, clinicopathological correlations, andclassification. International Society of Nephrology.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 74/93
63
LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Alur Penelitian
v
Tikus putih (galur Sprague Dawley)
Pengelompokkan dengan random allocation
Aklimatisasi selama 7 hari
Akuades Akuades Mahkota dewa
200 mg/kgBB
Mahkota dewa
250 mg/kgBB
Kelompok A(Kontrol Sehat)
Mahkota dewa
300 mg/kgBB
Metformin
150 mg/kgBB
Perlakuan diberikan selama 21 hari
Terminasi dan pengambilan organ dengan fiksasi NBF 10%
Pembuatan preparat mikroskopis tubulus proksimal ginjal pewarnaan PAS
Kelompok B(Kontrol Sakit)
Pengamatan mikroskopis dan dokumentasi
Kelompok C(Perlakuan)
Pengolahan dan analisis data
Kelompok D(Perlakuan) Kelompok E(Perlakuan) Kelompok F(Perlakuan)
Tidak DiInduksi DM
Induksi DM Induksi DM Induksi DM Induksi DM Induksi DM
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 75/93
64
Lampiran 2. Penentuan Dosis
a. Metformin
Penentuan dosis metformin menggunakan dosis manusia yangdikonversikan menjadi dosis tikus. Bentuk sediaan metformin adalah tablet 500
mg yang dikonsumsi 3x sehari sehingga dalam sehari dosis metformin yang
diperlukan manusia adalah 1500 mg. Dosis konversi yang digunakan untuk tikus
dengan berat badan 200 gram adalah 0,018. Berikut adalah perhitungan besar dosis
konversi metformin :
Dosis manusia per hari x 0,018 = besar dosis konversi
1500 mg per hari x 0,018 = 27 mg per hari
≈ 30 mg per hari per 200 gram tikus
= 150 mg/kgBB
b. Ekstrak methanol daging buah mahkota dewa
Penelitian ini mencari dosis yang paling efektif dari ekstrak methanol
daging buah mahkota dewa. Penentuan dosis dalam penelitian ini menggunakan
penelitian sebelumnya yang dapat memberikan efek renoprotektif, yaitu 200
mg/kgBB, 250 mg/kgBB (Sulistyoningrum, 2013), dan 300 mg/kgBB (Yanti,
2014). Oleh karena itu, digunakan dosis tersebut untuk membuktikan efeknya
terhadap regenerasi sel β pankreas.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 76/93
65
Lampiran 3. Aspek Etik Penelitian
Penelitian ini menggunakan hewan coba yang akan diberi perlakuan yang
harus benar secara etik, yaitu :a. Penelitian ini berlangsung cukup lama yaitu 7 hari aklimatisasi dan 21 hari
perlakuan.
b. Hewan coba akan diberi perlakuan menggunakan obat yang mungkin memiliki
efek toksik.
c. Hewan coba akan dikorbankan, diambil organnya, dan dianalisis sesuai dengan
tujuan penelitian.
d. Setelah hewan coba dikorbankan terdapat sisa jaringan yang tidak digunakan.
e. Upaya untuk meminimalisir aspek etik dilakukan oleh peneliti menuruti prinsip
etik hewan coba. Reduction, peneliti meminimalkan jumlah hewan coba yang
digunakan dalam penelitian ini dengan menggunakan rumus Federer sehingga
memenuhi kaidah etik dan kaidan penelitian. Replacement , hewan coba yang
digunakan adalah hewan paling mirip dengan manusia namun memiliki
kemampuan reproduktif yang baik serta merupakan ordo terrendah yang mirip
dengan manusia. Refinement , peneliti mempertahankan kesejahteraan hewan coba
dengan menempatkan hewan coba pada kandang yang cukup dan bersih,
pemberian makan dan minum yang tepat waktu dan bergizi, penjagaan suhu dan
kelembaban ruang penyimpanan kandang, penetapan dosis yang berdasar untuk
meminimalisir efek toksik, penggunaan anestesi saat akan mengorbankan hewan
coba sehingga mengurangi morbiditas, dan sisa jaringan yang tidak digunakan
dimusnahkan dengan dikubur sehingga tidak mencemari lingkungan.
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 77/93
66
Lampiran 4. Pemeriksaan Glukosa Darah Metode GOD-PAP
a. Prinsip pemeriksaan
Tes enzymatic-colorimetric yang mengikuti kaidah reaksi seperti berikut :Glukosa + O2 + H2O Glukonat + H2O2
2H2O2 + fenol + 4-aminoantipirin 4-(p-bezoquinon-mono-
imino)fenazon + 4H2O
Glukosa dioksidasi oleh glukosa oksidase menjadi glukonat dan hidrogen
peroksida.Karena kemunculan peroksida, fenol bereaksi dengan 4-AAP dan
hidrogen peroksida untuk memproduksi quinonimin hijau, intensitas warna
tersebut diukur pada 505 nm.
b. Prosedur
Panjang gelombang yang digunakan adalah 546 nm (492-550 nm) dengan
spektrofotometer 505 nm dan reaksi end point .Inkubasi 8 menit pada suhu 37oC
atau 20-25oC.
c. Perhitungan
Konsentrasi glukosa (mg/dL) = ( Absorbance sampel / Absorbance standard) x
konsentrasi standard (mg/dL).
GOD
Peroksidase
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 78/93
67
Lampiran 5. Kandungan Pakan Hewan Coba
PAKAN AYAM PEDAGING 511®
Produksi : PT. CHAROEND POKPHAN INDONESIA
PROTEIN : Maks. 21-23 %
LEMAK : Min. 5-8 %
SERAT : 3 3-5 %
ABU : 2,0 4-7 %
KALORI : Maks. 2.800-3.100 kcal
AIR : 11-12 %
PHOSPOR : 1,0 %
ANTIBIOTIKA : +
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 79/93
68
Lampiran 6 . Data Induk Glukosa Darah Hewan Coba
Kelompok Awal Induksi Perlakuan SATUAN
A.1 120 72 90 mg/dlA.2 112 85 187 mg/dlA.3 100 60 112 mg/dlA.4 118 108 75 mg/dlA.5 109 92 105 mg/dl
B.1 113 198 371 mg/dlB.2 111 370 - mg/dlB.3 113 352 219 mg/dlB.4 119 376 385 mg/dl
B.5 117 417 120 mg/dl
C.1 116 370 274 mg/dlC.2 113 322 300 mg/dlC.3 112 344 313 mg/dlC.4 116 368 - mg/dlC.5 110 321 393 mg/dl
D.1 110 355 366 mg/dlD.2 125 389 205 mg/dl
D.3 119 357 150 mg/dlD.4 82 325 394 mg/dlD.5 107 163 - mg/dl
E.1 109 389 114 mg/dlE.2 107 409 195 mg/dlE.3 119 225 198 mg/dlE.4 104 154 392 mg/dlE.5 111 336 188 mg/dl
F.1 109 384 465 mg/dlF.2 108 296 398 mg/dlF.3 116 370 409 mg/dlF.4 122 401 378 mg/dlF.5 116 329 - mg/dl
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 80/93
69
Lampiran 7. Uji Normalitas Glukosa Darah Hewan Coba
Tests of Normality
Kelompok
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic Df Sig. Statistic df Sig.
Glukosa_Awal Kelompok A ,182 5 ,200* ,946 5 ,709
Kelompok B ,298 4 . ,849 4 ,224
Kelompok C ,210 4 . ,982 4 ,911
Kelompok D ,271 4 . ,888 4 ,373
Kelompok E ,250 5 ,200* ,885 5 ,332
Kelompok F ,285 4 . ,935 4 ,625
Glukosa_PP Kelompok A ,199 5 ,200* ,960 5 ,807
Kelompok B ,278 4 . ,888 4 ,372
Kelompok C ,304 4 . ,893 4 ,396
Kelompok D ,267 4 . ,881 4 ,344
Kelompok E ,337 5 ,066 ,874 5 ,284
Kelompok F ,336 4 . ,804 4 ,109
Glukosa_PI Kelompok A ,135 5 ,200* ,993 5 ,988
Kelompok B ,317 4 . ,869 4 ,295
Kelompok C ,273 4 . ,872 4 ,305
Kelompok D ,242 4 . ,958 4 ,764
Kelompok E ,255 5 ,200* ,877 5 ,298
Kelompok F ,162 4 . ,992 4 ,966
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 81/93
70
Lampiran 8. Analisis T-Tes Berpasangan Glukosa Darah Hewan Coba
Paired Samples Test
Paired Differences
t Df
Sig.
(2-
tailed)Mean
Std.
Deviation
Std. Error
Mean
95% Confidence Interval
of the Difference
Lower Upper
Pair 1 Glukosa_A_PI -
Glukosa_A_PP-13,00000 30,27375 13,53883 -50,58983 24,58983 -,960 4 ,391
Pair 2 Glukosa_B_PI -
Glukosa_B_PP 62,00000 200,44284 100,22142 -256,94929 380,94929 ,619 3 ,580
Pair 3 Glukosa_C_PI -
Glukosa_C_PP19,25000 69,19236 34,59618 -90,85049 129,35049 ,556 3 ,617
Pair 4 Glukosa_D_PI -
Glukosa_D_PP77,75000 138,33143 69,16571 -142,36617 297,86617 1,124 3 ,343
Pair 5 Glukosa_E_PI -
Glukosa_E_PP139,00000 110,01136 49,19858 2,40285 275,59715 2,825 4 ,048
Pair 6 Glukosa_F_PI -
Glukosa_F_PP-13,25000 72,97659 36,48830 -129,37205 102,87205 -,363 3 ,741
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 82/93
71
Lampiran 9. Uji Interrater Reliability Kappa
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 83/93
72
Lampiran 10. Uji normalitas data Saphiro-Wilk
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 84/93
73
Lampiran 11. Uji non parametrik Kruskall-Wallis
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 85/93
74
Lampiran 12. Uji Analisis post hoc Mann-Whitney
Kelompok A dengan B
Kelompok B dengan C
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 86/93
75
Kelompok B dengan E
Kelompok B dengan F
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 87/93
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 88/93
77
Kelompok E dengan F
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 89/93
78
Lampirann 13. Ethical Approval
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 90/93
79
Lampiran 14. Determinasi Tumbuhan
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 91/93
80
Lampiran 15. Dokumentasi
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 92/93
81
Lampiran 16. Surat Pernyataan Penelitian
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan dibawah ini :
Nama : Betha Purba Praj Rahmatika
NIM : G1A012141
Judul Skripsi : Pengaruh Ekstrak Methanol Daging Buah Mahkota Dewa
( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl dan Metformin terhadap
Gambaran Histologi Tubulus Proksimal Ginjal pada Tikus
Model DM Tipe-2
Pembimbing : I. dr. Alfi Muntafiah, M.Sc
II. dr. Nur Signa Aini G., M.Biotech
Menyatakan Bahwa :
1. Skripsi ini merupakan hasil karya sendiri bukan hasil plagiasi
2. Pelaksanaan penelitian ini merupakan bagian dari payung yang berjudul Efektifitas
Ekstrak Daging Buah Mahkota Dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff. ) Boerl Untuk
Pencegahan Nefropati Diabetika Sebagai Upaya Pengembangan Obat Herbal
dengan sususnan tim peneliti adalah dr. Nur Signa A.G., M.Biotech, dr. Mustofa,
M.Sc, dan Dr. dr. Eman Sutrisna, M.Kes.3. Hak kekayaan intelektual penelitian berikut data-data hasil penelitian menjadi
milik dr. Nur Signa A.G.,M.Biotech
4. Hak publikasi peneltian ini berada pada dr. Nur Signa A.G., M.Biotech.
Pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya tanpa paksaan atau tekanan dari
siapapun. Saya bersedia bertanggung jawab jika terdapat hal-hal yang tidak sesuai
di dalam penelitian ini.
Purwokerto, Januari 2016
Betha Purba Praj Rahmatika
G1A012141
8/16/2019 Skripsi Betha Purba Praja Rahmatika g1a012141
http://slidepdf.com/reader/full/skripsi-betha-purba-praja-rahmatika-g1a012141 93/93
82
Lampiran 17. Riwayat Hidup
RIWAYAT HIDUP
A. Data Pribadi1. Nama : Betha Purba Praj Rahmatika
2. Tempat, Tanggal Lahir : Kendal 24 Mei 1994
3. Jenis Kelamin : Laki-laki
4. Agama : Islam
5. Kewarganegaraan : Indonesia
6. Alamat : Tlogosari Parangkesit V/01 Semarang
7. No. HP : 085643706610
8. Email : [email protected]
B. Riwayat Pendidikan
2000-2006 : SD Negeri 1 Purwosari
2006-2009 : SMP Negeri 2 Kendal
2009-2012 : SMA Negeri 5 Semarang