semua lampiran

69

LAMPIRAN

Lampiran 1

Pembuatan Media1. Larutan Butterfields phosphate buffered (BFP)

a. Alat dan bahan

Autoklaf

Hot plate

1 buah Botol schott dan magnetic stirer

2 buah

Erlenmeyer

1 buah

Dispensette

1 buah KH2PO4

34 gram Aquades

2 L NaOHb. Prosedur

Sebagai larutan stock, larutan BFP dibuat dengan menimbang 34 gram KH2PO4, dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan ditambahkan 1 L aquades, pH ditepatkan 7.2 dengan 1 N NaOH lalu dihomogenkan pada hot plate. Setelah homogen, larutan dimasukkan ke dalam botol schott 1 L untuk disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 oC selama 15 menit.Sebagai pelarut, 1.25 ml larutan stock diambil untuk dimasukkan ke dalam erlenmeyer baru dan ditambah 1 L aquades. Kemudian dihomogenkan pada hot plate, pH ditepatkan 7 dengan 1 N NaOH. Setelah homogen, larutan dimasukkan ke dalam botol shott 500 ml sebanyak 225 ml untuk disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. Untuk pemakaian, suhu pelarut harus mencapai suhu ruangan.

Sebagai pengencer, 1.25 ml larutan stock diambil sebagaimana pembuatan pelarut, namun setelah homogen, larutan dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 9 ml kemudian ditutup dengan kapas. Setelah semua tabung reaksi diisi dengan larutan BFP pengencer, tabung reaksi dimasukkan ke dalam wadah kemudian ditutup kertas dan diikat untuk disterilisasi pada suhu 121 oC selama 15 menit. Untuk pemakaian, suhu pelarut harus mencapai suhu ruangan. Sisa larutan stock disimpan dalam refrigerator dan dapat dipakai dalam waktu 1 bulan.2. Plate Count Agar (PCA)

a. Alat dan bahan

Autoklaf

Waterbath

Hot plate

1 buah

Botol schott dan magnetic stirer

1 buah Tryptone

5 gram Yeast extract

22.5 gram Dextrose

1 gram Agar

15 gram Aquades

1 Lb. ProsedurSebanyak 5 gram tryptone, 22.5 gram yeast extract, 1 gram dextrose, dan 15 gram agar dilarutkan dalam 1 L aquades lalu dihomogenkan dan dipanaskan hingga mendidih. Kemudian disterilisasi pada suhu 121 oC selama 15 menit. Selanjutnya disimpan dalam waterbath dengan suhu 45 1 oC.

3. Lauryl Tryptose Broth (LTB)a. Alat dan bahan

Autoklaf

Hot plate

1 buah Pipet, pipet boy, dan dispensette

1 buah

Erlenmeyer

1 buah Tabung reaksi dan tabung durham

10 buah

Wadah untuk tabung reaksi

1 buah

Tryptose atau trypticase

20 gram

Lactose

5 gram

K2HPO4

2.75 gram KH2PO4

2.75 gram

NaCl

5 gram

Sodium lauryl sulfate

0.1 gram Aquades

1 L

b. ProsedurSebanyak 20 gram tryptose, 5 gram lactose, 2.75 gram K2HPO4, 2.75 gram KH2PO4, dan 5 gram NaCl, 0.1 gram sodium lauryl sulfate dilarutkan dalam 1 L aquades lalu dihomogenkan dengan pH 6.8 0.2. Selanjutnya pipet menggunakan dispensette atau pipet boy sebanyak 9 ml ke dalam tabung reaksi berisi tabung durham, kemudian dimasukkan ke dalam wadah dan ditutup kertas untuk disterilisasi pada suhu 121 oC selama 15 menit.

4. EC Brotha. Alat dan bahan Autoklaf

Pipet, pipet boy, dan dispensette

1 buah

Erlenmeyer

1 buah

Tabung reaksi dan tabung durham

10 buah

Wadah untuk tabung reaksi

1 buah

Trypticase atau tryptose

20 gram Bile salt

31.5 gram Lactose

5 gram K2HPO4

4 gram KH2PO4

1.5 gram NaCl

5 gram Aquades

1 Lb. ProsedurBahan-bahan tersebut dicampur dalam erlenmeyer dan larutkan dengan 1 L aquades, kemudian dihomogenkan dengan ditepatkan pH 6.8 0.2. Selanjutnya dipipet 9 ml ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham untuk disterilisasi pada suhu 121 oC selama 15 menit.5. Chromocult agara. Alat dan bahan

Water bath

Cawan petri Erlenmeyer

1 buah Peptone

3 gram Sodium chloride

5 gram Sodium dihydrogen phosphate

2.2 gram Disodium hydrogen phosphate

2.7 gram Sodium pyruvate

1 gram Tryptophan

1 gram Agar

10 gram Sorbitol

1 gram Tergitol7

0.15 gram Chromogenic mixture

0.4 gram Aquades

1 Lb. Prosedur

Semua bahan disuspensikan dalam 1 L aquades dalam erlenmeyer pada water bath dan diaduk selama 35 menit dan pH 6.8 0.2. Setelah homogen, media dituang ke cawan petri. Media berwarna kekuningan dan disimpan dalam show case.Lampiran 2

Pembacaan dan Perhitungan KoloniA. Cawan yang mengandung jumlah 25-250 koloni dan bebas spreaderCatat pengenceran yang digunakan dan hitung jumlah total koloni dengan rumus:

N = jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per ml atau koloni per g

C = jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung

n1 = jumlah cawan pada pengenceran pertama yang dihitung

n2 = jumlah cawan pada pengenceran kedua yang dihitung d = pengenceran pertama yang dihitung

Contoh:

Pengenceran: 10-2

10-3Jumlah koloni: 232 dan 244

33 dan 28

=

= 24409

24000B. Cawan dengan jumlah koloni lebih besar dari 250

Bila jumlah koloni per cawan lebih besar dari 250 maka laporkan sebagai terlalu banyak untuk dihitung (TBUD), tetapi jika jumlah koloni mendekati 250 laporkan sebagai perkiraan ALT.

Contoh:

Pengenceran

: 10-2

10-3Jumlah koloni

: TBUD640

Perkiraan ALT koloni per ml atau per gram: 640000 (dikalikan 103)C. SpreaderKoloni spreader dibedakan menjadi 3 tipe:

1. Rantai koloni antara koloni saling menyambung yang disebabkan karena bakteri yang saling mengelompok.

2. Spreader berasal dari lapisan air antara agar dan dasar cawan.

3. Spreader berasal dari lapisan air pada sisi/pingir cawan atau pada permukaan agar.

Spreader tipe 1, jika hanya ada 1 rantau maka nyatakan sebagai 1 koloni.

Jika 1 atau lebih rantai terlihat berasal dari sumber yang berbeda, laporkan masing-masing sumber sebagai 1 koloni.

Spreader tipe 2 dan 3 umumnya berasal dari koloni yang berbeda dan laporkan masing-masing sebagai 1 koloni.

Jumlahkan spreader dan koloni untuk menghitung angka lempeng total.D. Jumlah koloni semua cawan kurang dari 25 koloni atau cawan tanpa koloni

Bila pada kedua pengenceran yang digunakan diperoleh koloni kurang dari 25, caat koloni yang ada, tetapi nyatakan perhitungan sebagai kurang dari 25 dan dikalikan dengan faktor pengenceran pertama yang digunakan dan dilaporkan sebagai perkiraan ALT.

Contoh:

Pengenceran

: 10-2

10-3Jumlah koloni

: 18 dan 02 dan 0

Perkiraan ALT koloni per ml atau koloni per gram: < 2500< 2500

Bila cawan dari semua pengenceran tidak menghasilkan koloni, laporkan angka lempeng total sebagai kurang dari satu kali pengenceran terendah yang digunakan.

Contoh:

Pengenceran

: 10-2

10-3Jumlah koloni

: 0 dan 00 dan 0

Perkiraan ALT koloni per ml atau koloni per gram: < 100

< 100E. Pelaporan

Untuk menghasilkan perhitungan yang akurat dan teliti, maka laporkan hasilnya dengan dua angka (digit) pertama sebagai hasil pembulatan.

Bulatkan ke atas dengan cara menaikkan angka kedua menjadi angka yanglebih tinggi bila nagka ketiga adalah 6, 7, 8, atau 9 dan gunakan angka 0 untuk masing-masing angka pada digit berikutnya.

Bulatkan ke bawah bila angka ketiga adalah 1, 2, 3, atau 4. Bila angka ketiga 5, bulatkan ke atas bila angka kedua ganjil dan bulatkan ke bawah bila angka kedua genap

Contoh:

Hasil perhitungan ALT

12.700

13.000

12.400

12.000

15.500

16.000

14.500

14.000

Beri tanda bintang (*) untuk cawan yang kurang dari 25 koloni

Contoh:

Pengenceran

: 1 : 1001 : 1000

Jumlah koloni

: 18 dan 02 dan 0

Perkiraan ALT koloni per ml atau per g: < 2500*< 2500*Tab positifAPM/gTk kepercayaanTab positifAPM/gTk kepercayaan

101102103BawahAtas101102103BawahAtas

0001100420-

Lampiran 3

Indeks APM dengan tingkat kepercayaan 95% untuk berbagai kombinasi hasil positif dari 3 seri tabung pengenceran

Lampiran 4

Perhitungan ALT

Pengenceran10-110-210-310-410-5

Hasil enumerasiTBUD1691910

ALT/g17000

Perhitungan ini mengambil nilai dari pengenceran 10-2 dan 10-3. Nilai yang diambil adalah nilai standar yaitu antara 25-250 koloni, maka nilai yang diambil adalah nilai dari pengenceran 10-2 yaitu 169. Selanjutnya 169 dikalikan dengan faktor pengenceran, sehingga menjadi:

169 x 100 = 16900

Nilai tersebut dilaporkan menjadi 1,7 x 104 ALT/g. Nilai ini lah yang menjadi SPC (Standar Plate Count)

Jadwal Kegiatan Praktek Kerja Lapangan (PKL)

NoKegiatanJuliAgustus

12-36-89-1314-152223-243-56-89-11

1Berangkat ke lokasi PKL

2Pelaksanaan kegiatan PKL, meliputi:

Pengenalan kegiatan uji di laboratorium mikrobiologi

Penyiapan media dan sterilisasi alat dan media

Preparasi sampel

Analisis uji mikrobiologi ditinjau dari parameter TPC, E.coli, Samonella, Vibrio, dan Staphylococcus

Pengenalan kegiatan uji di laboratorium kimia

Preparasi sampel

Analisis uji kimia ditinjau dari parameter kadar air, kadar garam, TVB-TMA, antibiotik, histamin, dan logam berat

3Pengumpulan data

4Pengolahan data

5Kembali ke kampus

Lampiran 6

Log Book Kegiatan PKL di UPT PPMHP Surabaya

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

Jalan Ketintang Gedung C3 Lt. 2 Surabaya 60231

Telp: +6231-8280009

+6231-8298382

LOG BOOK

NAMA MAHASISWA : Nuril Trisnawati

NIM : 12030244002

DOSEN PEMBIMBING : DR. Tjipto Haryono, M. Si.

INSTANSI PKL : UPT PPMHP Surabaya

TanggalDeskripsi Kegiatan

1-7-15Permohonan izin masuk kepada kepala seksi pengujian Bapak Suhadi

Pembagian ruang kerja: memasuki laboratorium mikrobiologi

Briefing dengan penyelia laboratorium mikrobiologi

Mengerjakan soal pre-test di ruang tamu laboratorium mikrobiologi

Mempelajari buku SNI sebagai acuan normatif dalam pengujian mutu hasil perikanan di ruang inokulasi

2-7-15Preparasi untuk pengujian ALT dan analisis E. coli di ruang preparasi

Melihat proses pengenceran untuk analisis E. coli dan pengujian ALT mulai dari tahap pengenceran hingga penuangan PCA ke dalam cawan petri di ruang inokulasi

Melihat proses analisis E. coli mulai dari uji pendugaan dan penegasan coliform (hasil inkubasi BGLB Broth tanggal 29 Juni) serta pendugaan E. coli (hasil inkubasi EC Broth tanggal 29 Juni) di ruang inokulasi

3-7-15Preparasi untuk pengujian ALT dan analisis E. coli di ruang preparasi

Melihat proses pengenceran untuk analisis E. coli dan pengujian ALT mulai dari tahap pengenceran hingga penuangan PCA ke dalam cawan petri di ruang inokulasi

Melihat proses analisis E. coli mulai dari uji pendugaan dan penegasan coliform (hasil inkubasi BGLB Broth tanggal 1 Juli) serta pendugaan E. coli (hasil inkubasi EC Broth tanggal 1 Juli) di ruang inokulasi

6-7-15Preparasi sampel dari bahan Scar Snap Fillet dan Scarlet Snap Portion di ruang preparasi

Melihat proses pengisian BFP ke dalam tabung reaksi di ruang inokulasi (tahap persiapan media)

Melihat proses pengenceran untuk analisis E. coli dan pengujian ALT mulai hingga penuangan PCA ke dalam cawan petri di ruang inokulasi

Melihat proses streak plate pada media LEMB agar (dari tabung EC Broth positif yang diinkubasi tanggal 4 Juli) di ruang inokulasi

Melihat proses inokulasi dari tabung LTB positif ke tabung EC Broth di ruang inokulasi (tahap pendugaan E. coli)

7-7-15Preparasi sampel dari bahan Chirimen, Himego, FZ Raw Shrimp, Baracuda Steak, Yellowfish Tuna Fillet, Emperor Steak, PD Van Blok, Cat Fish and Milk Fish, dan Baracuda WR di ruang preparasi

Preparasi media untuk pengujian ALT dan analisis E. coli kemudian disterilkan di ruang autoklaf

Melakukan pengenceran ke dalam tabung reaksi dan cawan petri untuk uji ALT dan analisis E. coli di ruang inokulasi

Melakukan pengenceran tiga seri ke dalam tabung reaksi berisi LTB di ruang inokulasi (tahap pendugaan coliform)

8-7-15Melihat proses inokulasi dari tabung LTB positif tanggal 6 Juli ke tabung EC Broth kemudian menginkubasikannya di dalam waterbath di ruang inkubasi (tahap pendugaan E. coli)

Preparasi sampel dari bahan udang di ruang preparasi


Melakukan pra-pengkayaan Salmonella di media LB

Menginokulasi Salmonella dari media RV Broth (hasil inkubasi tangal 7 Juli) ke media selektif HE dan XLD (metode Streak Plate) di ruang inokulasi

Melakukan pengenceran tiga seri ke dalam tabung reaksi berisi LTB (tahap pendugaan coliform) dan inokulasi dari tabung LTB positif ke tabung EC Broth di ruang inokulasi (tahap pendugaan E. coli)

Menginokulasi E. coli dari tabung EC Broth positif tanggal 6 Juli ke media selektif chromocult dan LEMB (metode Streak Plate) di ruang inokulasi (tahap penegasan E. coli)

9-7-15Membuat media EC Broth dan BFP serta menyiapkan alat-alat untuk disterilkan (tahap persiapan alat dan media)

Preparasi sampel dari bahan King Fish Steak di ruang preparasi

Menghitung koloni hasil pour plate uji ALT tanggal 7 Juli di ruang inokulasi


Menginokulasi Salmonella dari media LB yang telah diinkubasi tanggal 8 Juli ke media selektif HE dan XLD (metode Streak Plate) di ruang inokulasi

Melakukan pengenceran tiga seri ke dalam tabung reaksi berisi LTB (tahap pendugaan coliform) dan inokulasi dari tabung LTB positif yang telah diinkubasi tanggal 7 Juli ke tabung EC Broth di ruang inokulasi (tahap pendugaan E. coli)

10-7-15Preparasi sampel dari bahan Himego; Stingray, skin, bone, and shark fin; dan Yellowfish Tuna Fillet

Menuangkan media BFP ke dalam tabung reaksi dan disterilkan (tahap persiapan media)

Menghitung koloni hasil pour plate uji ALT tanggal 8 Juli di ruang inokulasi

Pengecekan koloni Salmonella yang tumbuh di media selektif HE dan XLD yang diinokulasi tanggal 9 Juli di ruang inokulasi


Pengecekan tabung EC Broth positif yang diinokulasikan tanggal 9 Juli di ruang inokulasi

Menginokulasi bakteri dari tabung LTB positif yang telah diinkubasi tanggal 8 Juli ke tabung EC Broth di ruang inokulasi (tahap pendugaan E. coli)

13-7-15Preparasi sampel dari bahan Breaded Shrimp, udang Van PND, dan kulit hiu-pari kering

Pengecekan tabung LTB positif hasil pengenceran tanggal 10 Juli di ruang inokulasi

Pengecekan tabung EC Broth positif hasil inokulasi dari tabung LTB positif tanggal 9 dan 10 Juli di ruang inokulasi (tahap pendugaan E. coli)

Menginokulasi bakteri dari tabung LTB positif ke tabung EC Broth hasil pengenceran tanggal 10 Juli di ruang inokulasi (tahap pendugaan E. coli)


Melakukan rapid untuk deteksi E. coli dan Salmonella pada Rapid Test di ruang inokulasi

Menginokulasi E.coli pada media chromocult hasil inkubasi tabung EC Broth postif tanggal 11 Juli di ruang inokulasi

14-7-15Preparasi sampel dari bahan frogleg, Surimi itoyori, Raw PDTO Breaded Tail Blanched, Chirimen di ruang preparasi

Mengecek E.coli dan colliform yang tumbuh pada media kromokal hasil inokulasi tanggal 13 Juli di ruang inokulasi

Menyiapkan bahan dan alat untuk pengenceran uji ALT dan analisis E. coli


22-7-15Preparasi sampel dari bahan udang di ruang preparasi


Melakukan pengenceran tiga seri ke dalam tabung reaksi berisi LTB di ruang inokulasi (tahap pendugaan coliform)

Inokulasi E. coli dari biakan murni ke dalam tabung LTB sebagai kontrol

23-7-15Pindah ruang kerja: memasuki laboratorium kimia

Memasukkan ACN dan Meat Extract Buffer ke dalam tabung centrifuge berisi potongan udang hingga proses homogenasi di ruang asap (uji antibiotik SDZ)

Memasukkan supernatan ACN ke dalam tabung centrifuge baru di ruang asap (uji antibiotik SDZ)

Mengeringkan tabung centrifuge yang berisi supernatan ACN pada Nitrogen Evaporator di ruang asap (uji antibiotik SDZ)

24-7-15Memasukkan sampel extraction buffer dan N-hexana ke dalam tabung centrifuge yang telah dikeringkan tanggal 23 Juli di ruang asap (uji antibiotik SDZ)

Menghomogenkan tabung centrifuge dengan vortex dan centrifuge di ruang asap (uji antibiotik SDZ)

3-8-15Preparasi sampel dari bahan tuna loin, tuna steak, Red Snapper Fillet, Van HL EZ Peel, Parrot Fish WGS, dan Ruby Snap WGS di ruang preparasi

Menimbang sampel dengan waterpass di ruang preparasi

Melarutkan sampel dengan larutan UPC lalu menghomogenkannya menggunakan vortex dan mesin rotary di ruang asap (uji histamin)

Menginkubasi homogenat di waterbath selama 30 menit dengan suhu 60 oC di ruang asap (uji histamin)

Mensentrifuse sampel di ruang asap (uji histamin)

Memasukkan supernatan ke dalam microtube di ruang asap (uji histamin)

Melakukan standarisasi media untuk uji kadar garam dan kadar air di ruang preparasi

4-8-15Preparasi sampel dari bahan Baby Get WC (uji LB), tuna steak (uji histamin), tuna loin (uji HLSI), Octopus Sliced (uji LB), Octopus Flowered (uji LB), Kakap Merah Fillet (uji TVB dan TMA), dan rumput laut (uji kadar air) di ruang preparasi

Menimbang sampel untuk uji histamin di ruang preparasi

Melihat penimbangan sampel untuk uji garam di ruang preparasi

Menimbang sampel untuk uji TVB dan TMA di ruang preparasi

Melakukan pengujian TVB-TMA hingga tahap inkubasi di ruang asap

Membuat Mobile Phase untuk uji histamin di ruang karyawan lantai 2

Membaca kadar histamin menggunakan alat HPLC dari sampel tanggal 3 Agustus di ruang HPLC

5-8-15Preparasi sampel dari bahan fresh albacore (uji histamin), albacore (uji histamin), fresh tuna loin (uji histamin), dan yellowfish tuna (uji histamin) di ruang preparasi

Mentitrasi sampel tanggal 4 Agustus uji TVB-TMA di ruang asap

Belajar membaca kadar histamin melalui software HPLC

6-8-15Menimbang sampel tanggal 5 Agustus di ruang preparasi

Memasukkan metanol 75% ke dalam tabung centrifuge lalu menghomogenkan dengan vortex dan rotary up-down di ruang asap

Menginkubasi centrifuge ke dalam waterbath di ruang preparasi

Menghomogenkan dengan rotary lalu memisahkan supernatan dengan centrifuge di ruang asap

Memasukkan supernatan ke dalam microtube di ruang asap

7-8-15Preparasi sampel dari bahan Raw Layur (uji Hg, Pb, Cd, dan As), PUD yellow (uji kimia), PD Van BF (uji kimia), Raw Van BRD Torpedo (uji kimia), Raw Van PND Skewer (uji kimia), dan F Raw Shrimp (uji kimia) di ruang preparasi

Menimbang sampel untuk uji antibiotik

Melakukan uji antibiotik sampai pada tahap menginkubasi di inkubator

Memasukkan sampel dan NaOH ke dalam microtube di ruang HPLC

10-8-15Preparasi sampel dari bahan raw pink HL, raw BT HO, udang pink, raw WHO & raw HL, raw shrimp, dan FZ swordfish DWT di ruang preparasi

Persiapan reagen untuk validasi di ruang asap


Menghomogenkan, menginkubasi, dan mensentrifuge sampel untuk uji histamin di ruang asap

11-8-15Preparasi F. Raw Shrimp (kimia), FZ Pink Shrimp (uji mercury, cadmium, dan plumbum), IQF Octopus Sliced Blanched (uji cadmium dan plumbum), rumput laut (vis impuritis dan kadar air), Tuna Shredded in Oil (LB), Tuna Chunk in Oil (LB) di ruang preparasi

Menimbang sampel untuk uji logam berat di ruang preparasi


Menghomogenkan, menginkubasi, dan mensentrifuge sampel untuk uji histamin di ruang asap

Lampiran 7

Dokumentasi Penelitian (Kegiatan PKL)

Lampiran 5

57

Foto 1. Pembuatan media

Foto 2. Memasukkan media LTB ke tabung reaksi menggunakan dispensette

Foto 3. Tabung reaksi berisi LTB dan tabung durham ditutup dengan kapas

Foto 4. Tabung LTB dimasukkan ke dalam wadah untuk disterilisasi

Foto 5. Berbagai sampel yang akan diuji termasuk sampel barakuda steak

Foto 6. Preparasi sampel

Foto 7. Memasukkan sampel ke dalam cawan petri untuk uji ALT

Foto 8. Menginokulasi bakteri dari tabung LTB ke tabung EC Broth

Foto 9. Tabung EC Broth diinkubasi di waterbath

Foto 10. Tempat kerja uji ALT dan E. coli

Foto 11. Ruang inkubasi

45

semua lampiran

Documents