program studi kimia fakultas sains dan teknologi...
TRANSCRIPT
IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF ANTIOKSIDAN EKSTRAK BIJI
KURMA (Phoenix dactylifera)
CITRA HESTI WIDYOWATI
PROGRAM STUDI KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2015 M / 1437 H
ii
IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF ANTIOKSIDAN EKSTRAK BIJI
KURMA (Phoenix dactylifera)
SKRIPSI
Sebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh Gelar Sarjana Sains
Program Studi Kimia
Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
Oleh :
Citra Hesti Widyowati
1111096000069
PROGRAM STUDI KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2015 M / 1437 H
v
PERNYATAAN
DENGAN INI SAYA MENYATAKAN BAHWA SKRIPSI INI ADALAH HASIL
KARYA SENDIRI YANG BELUM PERNAH DIAJUKAN SEBAGAI SKRIPSI
ATAU KARYA ILMIAH PADA PERGURUAN TINGGI ATAU LEMBAGA
MANAPUN
Ciputat, 29 September 2015
Citra Hesti Widyowati
NIM. 1111096000069
vi
ABSTRAK
Citra Hesti Widyowati. Identifikasi Senyawa Aktif Antioksidan Ekstrak Biji Kurma
(Phoenix dactylifera). Dibawah bimbingan Yusraini Dian Inayati Siregar dan Adi
Riyadhi.
Biji kurma (Phoenix dactylifera) merupakan komponen dari buah kurma yang
besarnya sekitar 10-15%. Biji kurma di beberapa negara menjadi masalah besar pada
industri pengolahan buah kurma karena sampai saat ini biji kurma hanya menjadi
limbah dan sebagian kecil digunakan sebagai pakan hewan ternak. Penelitian ini
dilakukan untuk mengetahui metode ekstraksi yang menghasilkan aktivitas
antioksidasi tertinggi dan mengidentifikasi senyawa aktif antioksidan ekstrak biji
kurma. Isolasi senyawa aktif antioksidan dilakukan dengan metode ekstraksi maserasi,
sokletasi dan sonikasi. Penelitian yang dilakukan meliputi penapisan fitokimia, kadar
total fenolik, kadar total flavonoid, aktivitas antioksidasi dengan metode TBA dan
DPPH serta analisis senyawa aktif antioksidan menggunakan GC-MS. Berdasarkan
hasil penelitian ditunjukkan bahwa aktivitas antioksidasi tertinggi terdapat pada ekstrak
etanol biji kurma hasil sokletasi melalui metode DPPH dengan IC50 sebesar
4.307±0.368 dan pada ekstrak n-heksana biji kurma hasil maserasi melalui metode
TBA dengan nilai % daya hambat sebesar 82.265%. Berdasarkan hasil analisis
menggunakan GCMS ditunjukkan bahwa di dalam ekstrak etanol biji kurma terdapat
senyawa phenol,2,6-bis(1,1-dimethylethyl)-4-methyl, 1,2-benzenedicarboxyl acid,
dihydro methyl jasmonate dan di dalam ekstrak n-heksana biji kurma terdapat senyawa
9-octadecenoic acid (Z)-methyl ester.
Kata Kunci : Antioksidan, Biji Kurma (Phoenix dactylifera), DPPH, GC-MS, TBA.
vii
ABSTRACT
Citra Hesti Widyowati. Identification of Antioxidant Active Compounds from Dates
Pits Extract (Phoenix dactylifera) under the guidance of Yusraini Dian Inayati
Siregar and Adi Riyadhi.
Date pits (Phoenix dactylifera) are component of palm fruit which have 10 –
15% amount. In some countries, date pits become a major problem on palm fruit
processing industry due to the current date pits just be a waste and a small part is used
as animal feed. This study was conducted to determine the extraction method that
produces the highest antioxidant activity and for identify the antioxidant active
compounds of extract date pits. Isolation of antioxidant active compounds made by the
maceration, soxhletation and sonication method. The research was conducted on the
phytochemical screening, total phenolic content, total flavonoid content, antioxidant
activity with TBA and DPPH method, also analyze the antioxidant active compound
by GC-MS. The results had showed that the highest antioxidative activity contained in
the ethanol extract of date pits by soxhletation through DPPH method with IC50 of
4.307±0.368 and the n-hexane extract of date pits through the maceration with TBA
method by value % inhibition of 82.265%. Results of analysis using GCMS had
showed that the ethanol extract of the date pits contained phenol,2,6-bis(1,1-
dimethylethyl)-4-methyl compound, 1,2-benzenedicarboxyl acid, dihydro methyl
jasmonate and the n-hexane extract of the date pits contained 9-octadecenoic acid (Z)-
methyl ester compound.
Keywords : Antioxidant, Date Pits (Phoenix dactylifera), DPPH, GC-MS, TBA.
viii
KATA PENGANTAR
Assalammualaikum warohmatullahi wabarakatuh
Segala puji hanya milik Allah Ta’ala, karena atas izin-Nya penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini. Shalawat dan salam semoga selalu tercurah kepada Nabi
Muhammad Shallallahu ’Alaihi Wasallam, beserta keluarganya dan para sahabatnya
yang setia mengorbankan jiwa raga dan lainnya untuk tegaknya syi’ar Islam yang
pengaruh dan manfaatnya hingga kini masih terasa.
Skripsi yang berjudul “ Identifikasi Senyawa Aktif Antioksidan Ekstrak Biji
Kurma (Phoenix dactylifera)” ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Kimia di Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN)
Syarif Hidayatullah Jakarta.
Skripsi ini tidak mungkin selesai tanpa pihak-pihak yang terus memberikan
bimbingan dan dukungannya sehingga ucapan terimakasih penulis sampaikan kepada:
1. Yusraini D.I.S, M.Si., selaku pembimbing I yang telah dengan sabar memberikan
pengarahan, serta membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian dan skripsi.
2. Adi Riyadhi, M.Si, selaku pembimbing II yang telah memberikan bimbingan dan
pengarahan dalam menyelesaikan penelitian dan skripsi.
3. Dede Sukandar, M.Si, selaku Ketua Program Studi Kimia Fakultas Sains dan
Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
4. Dr. Agus Salim, M.Si selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi Universitas
Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
ix
5. Nurhasni, M.Si dan Anna Muawanah, M.Si., selaku Penguji I dan Penguji II
yang telah memberikan kritik dan saran yang membangun sehingga skripsi ini
menjadi lebih baik.
6. Seluruh dosen program studi kimia yang telah memberikan ilmu pengetahuan
kepada penulis selama menempuh pendidikan.
7. Ibu, bapa, kakak dan adik tercinta atas segala doa, motivasi dan dukungan yang
diberikan kepada penulis.
8. Fitriah Hatiningsih, S.Si, Nur Ernita, S.Si dan Nita Rosita, S.Si sebagai laboran
yang telah banyak memberikan bantuan kepada penulis selama melakukan
penelitian di laboratorium.
9. Rani, Mei, Husna, Heni, Dilah, Annisa, Indi, Eva, Suci, Maya, Alfindah, Rifqi,
Ika, Esti, seluruh teman-teman kimia angkatan 2011 (ELIXIR) yang selalu
memberikan semangat, saran, mendukung, dan memotivasi penulis.
10. Pihak-pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan skripsi ini masih jauh dari
sempurna untuk itu saran dan kritik yang membangun dari pembaca sangat penulis
harapkan.
Ciputat, 29 September 2015
Citra Hesti Widyowati
x
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR ....................................................................................... viii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... x
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiii
DAFTAR TABEL ............................................................................................. xvi
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xviii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan masalah ........................................................................................ 3
1.3 Hipotesis ...................................................................................................... 3
1.4 Tujuan penelitian ......................................................................................... 3
1.5 Manfaat penelitian ....................................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Kurma .......................................................................................................... 5
2.2 Biji Kurma ................................................................................................... 6
2.3 Ekstraksi ....................................................................................................... 7
2.3.1 Maserasi .............................................................................................. 8
2.3.2 Sokletasi ............................................................................................. 10
2.3.3 Sonikasi .............................................................................................. 11
2.4 Fitokimia ...................................................................................................... 12
2.5 Antioksidan .................................................................................................. 15
xi
2.6 Spektrofotometri UV-VIS ............................................................................ 22
2.7 GC-MS ......................................................................................................... 24
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ...................................................................... 27
3.2 Alat dan Bahan ............................................................................................. 27
3.2.1 Alat ..................................................................................................... 27
3.2.2 Bahan .................................................................................................. 27
3.3 Prosedur Penelitian ...................................................................................... 28
3.3.1 Pembuatan Serbuk Simplisia .............................................................. 28
3.3.2 Pembuatan Ekstrak ............................................................................. 28
3.3.3 Uji Fitokimia ...................................................................................... 30
3.3.4 Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak n-Heksana Biji Kurma
Menggunakan Metode TBA ............................................................... 32
3.3.5 Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak Etanol Biji Kurma
Menggunakan Metode
DPPH
................................................................................................
35
3.3.6 Penentuan Kandungan Total Fenolik ................................................. 37
3.3.7 Penentuan Kandungan Total Flavonoid ............................................. 38
3.3.8 Analisis Menggunakan GC-MS ......................................................... 39
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Preparasi Sampel .......................................................................................... 41
4.2 Ekstraksi Biji Kurma .................................................................................... 42
4.3 Hasil Uji Fitokimia ...................................................................................... 46
xii
4.4 Hasil Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak n-Heksana ................................... 53
4.5 Hasil Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak Etanol.......................................... 60
4.6 Hasil Uji Total Fenolik dan Total Flavonoid ............................................... 64
4.7 Hasil Analisis GC-MS ................................................................................. 70
BAB V SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan ...................................................................................................... 78
5.2 Saran ............................................................................................................ 78
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 79
LAMPIRAN ....................................................................................................... 89
xiii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Buah kurma .................................................................................... 6
Gambar 2. Biji kurma ...................................................................................... 6
Gambar 3. Maserasi ......................................................................................... 8
Gambar 4. Sokletasi ......................................................................................... 11
Gambar 5. Sonikator ........................................................................................ 11
Gambar 6. Struktur senyawa antioksidan alami .............................................. 17
Gambar 7. Struktur senyawa antioksidan sintetik ........................................... 17
Gambar 8. Reaksi resonansi molekul DPPH ................................................... 18
Gambar 9. Reaksi antioksidan dengan radikal DPPH ..................................... 19
Gambar 10. Senyawa malondialdehid ............................................................... 19
Gambar 11. Reaksi pembentukan kompleks senyawa MDA-TBA ................... 20
Gambar 12. Mekanisme senyawa polifenol ....................................................... 21
Gambar 13. Reaksi folin ciocalteu dengan senyawa fenol ................................ 22
Gambar 14. Komponen spektofotometer UV-VIS ............................................ 24
Gambar 15. Bagian-bagian instrumentasi GC-MS ............................................ 26
Gambar 16. Reaksi uji alkaloid pereaksi Wagner ............................................. 48
Gambar 17. Reaksi uji alkaloid pereaksi Dragendorf ........................................ 49
Gambar 18. Reaksi uji flavonoid ....................................................................... 50
xiv
Gambar 19. Reaksi uji terpenoid/steroid ........................................................... 51
Gambar 20. Reaksi uji tanin/fenolik .................................................................. 51
Gambar 21. Reaksi uji kuinon ........................................................................... 52
Gambar 22. Reaksi uji saponin .......................................................................... 52
Gambar 23. Peroksidasi lipid ............................................................................. 54
Gambar 24. Nilai serapan ikatan diena terkonjugasi asam linoleat ................... 54
Gambar 25. Pembentukan MDA ekstrak n-heksana biji kurma ........................ 57
Gambar 26. Persentase daya hambat ekstrak n-heksana biji kurma .................. 58
Gambar 27. Mekanisme reaksi penangkapan radikal bebas DPPH ................... 61
Gambar 28. Spektrum analisis GC-MS ekstrak etanol biji kurma .................... 71
Gambar 29. Spektrum analisis GC-MS ekstrak n-heksana biji kurma .............. 71
Gambar 30. Struktur senyawa phenol,2,6-bis(1,1-dimethylethyl)-4-methyl ...... 73
Gambar 31. Mekanisme reaksi BHT sebagai senyawa antioksidan .................. 73
Gambar 32. Struktur senyawa 1,2-Benzenedicarboxyl acid .............................. 74
Gambar 33. Struktur senyawa dihydro methyl jasmonate ................................. 74
Gambar 34. Struktur senyawa 9-Octadecenoic acid (Z)-methyl ester ............... 75
Gambar 35. Mekanisme senyawa 9-Octadecenoic acid (Z)-methyl ester
sebagai senyawa antioksidan ......................................................... 76
Gambar 36. Struktur senyawa phenol,2,4-bis(1,1-dimethylethyl) ..................... 76
Gambar 37. Buah kurma jenis Al-Saad ............................................................. 91
Gambar 38. Hasil uji alkaloid pereaksi Wagner ................................................ 94
Gambar 39. Hasil uji alkaloid pereaksi Dragendorf .......................................... 95
Gambar 40. Hasil uji flavonoid ......................................................................... 95
xv
Gambar 41. Hasil uji triterpenoi/steroid ............................................................ 95
Gambar 42. Hasil uji tanin ................................................................................. 96
Gambar 43. Hasil uji kuinon .............................................................................. 96
Gambar 44. Hasil uji saponin ............................................................................ 96
Gambar 45. Kurva penentuan absorbansi maksimum ....................................... 97
Gambar 46. Penentuan panjang gelombang maksimum TEP ........................... 97
Gambar 47. Kurva standar TEP ......................................................................... 98
Gambar 48. Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH ........................ 102
Gambar 49. Kurva ekstrak etanol hasil maserasi ulangan 1 .............................. 102
Gambar 50. Kurva ekstrak etanol hasil maserasi ulangan 2 .............................. 102
Gambar 51. Kurva ekstrak etanol hasil sokletasi ulangan 1 .............................. 103
Gambar 52. Kurva ekstrak etanol hasil sokletasi ulangan 2 .............................. 103
Gambar 53. Kurva ekstrak etanol hasil sonikasi ulangan 1 ............................... 103
Gambar 54. Kurva ekstrak etanol hasil sonikasi ulangan 2 ............................... 104
Gambar 55. Kurva asam askorbat ulangan 1 ..................................................... 104
Gambar 56. Kurva asam askorbat ulangan 2 ..................................................... 104
Gambar 57. Penentuan panjang gelombang maksimum asam galat .................. 105
Gambar 58. Kurva standar asam galat ............................................................... 106
Gambar 59. Penentuan panjang gelmbang maksimum kuersetin ...................... 107
Gambar 60. Kurva standar kuersetin ................................................................. 107
xvi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Komposisi kimia biji kurma ............................................................ 7
Tabel 2. Hasil rendemen ekstrak etanol dan n-heksana biji kurma ............... 45
Tabel 3. Hasil uji fitokimia ekstrak biji kurma .............................................. 46
Tabel 4. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol .................................. 62
Tabel 5. Hasil uji kadar total fenolik ............................................................. 65
Tabel 6. Hasil uji kadar total flavonoid ......................................................... 68
Tabel 7. Komponen kmia ekstrak etanol biji kurma ...................................... 72
Tabel 8. Spesifikasi bahan utama .................................................................. 91
Tabel 9. Hasil ekstraksi.................................................................................. 92
Tabel 10. Hasil penapisan kimia golongan alkaloid ekstrak biji kurma .......... 93
Tabel 11. Hasil penapisan kimia golongan flavonoid ekstrak biji kurma ....... 93
Tabel 12. Hasil penapisan kimia golongan terpenoid ekstrak biji kurma........ 93
Tabel 13. Hasil penapisan kimia golongan tanin ekstrak biji kurma ............... 94
Tabel 14. Hasil penapisan kimia golongan kuinon ekstrak biji kurma ............ 94
Tabel 15. Hasil penapisan kimia golongan saponin ekstrak biji kurma .......... 94
Tabel 16. Penentuan absorbansi waktu inkubasi ............................................. 97
Tabel 17. Penentuan absorbansi TEP .............................................................. 98
Tabel 18. Penentuan kandungan antioksidan dengan metode TBA ................ 99
xvii
Tabel 19. Penentukan kandungan antioksidan dengan metode DPPH ............ 100
Tabel 20. Pengukuran absorbansi asam galat .................................................. 105
Tabel 21. Penentuan kandungan total fenolik .................................................. 106
Tabel 22. Pengukuran absorbansi kuersetin .................................................... 107
Tabel 23. Penentuan kandungan total flavonoid .............................................. 108
Tabel 24. Korelasi total fenolik dengan aktivitas antioksidasi (IC50) .............. 110
Tabel 25. Korelasi total flavonoid dengan aktivitas antioksidasi (IC50) .......... 110
Tabel 26. Korelasi total fenolik dengan total flavonoid .................................. 110
Tabel 27. Korelasi total fenolik dengan aktivitas antioksidasi ........................ 111
Tabel 28. Korelasi total flavonoid dengan aktivitas antioksidasi .................... 111
xviii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Rancangan penelitian................................................................ 90
Lampiran 2. Spesifikasi bahan ...................................................................... 91
Lampiran 3. Hasil ekstraksi .......................................................................... 92
Lampiran 4. Hasil uji fitokimia ..................................................................... 93
Lampiran 5. Hasil uji antioksidan (TBA) ekstrak n-heksana biji kurma ...... 97
Lampiran 6. Hasil uji antioksidan (DPPH) ekstrak etanol biji kurma .......... 100
Lampiran 7. Hasil uji total fenolik ................................................................ 105
Lampiran 8. Hasil uji total flavonoid ............................................................ 107
Lampiran 9. Optimasi GC-MS ...................................................................... 109
Lampiran 10. Korelasi kadar total fenolik dan flavonoid ekstrak etanol biji
kurma dengan aktivitas
antioksidan
..................................................................................................
110
Lampiran 11. Korelasi kadar total fenolik dan flavonoid ekstrak n-
heksana biji kurma dengan aktivitas
antioksidan
.............................................................................................
111
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Kurma (Phoenix dactylifera) merupakan tanaman tertua yang dibudidayakan
oleh manusia. Tanaman ini banyak tersebar di wilayah Timur Tengah dan Afrika Utara.
Buah kurma ini digemari oleh banyak orang mulai dari anak-anak hingga orang lanjut
usia. Hal ini disebabkan buah kurma memiliki rasa manis yang khas, selain itu buah
kurma memiliki banyak manfaat terutama bagi kesehatan seperti mencegah pembekuan
darah, antiinflamasi, mencegah penyakit stroke, membantu pertumbuhan tulang,
membantu menguatkan saraf dan lain-lain (Setiyono, 2011).
Sebagian dari komoditi buah kurma impor di Indonesia digunakan sebagai
bahan baku pada industri pengolahan buah kurma, seperti industri sari kurma, selai
kurma, kurma dalam kemasan dan lain-lain. Kegiatan produksi industri ini
menghasilkan hasil samping yang berupa biji kurma. Banyak sekali industri
pengolahan buah kurma di beberapa negara termasuk Indonesia yang tidak mengolah
hasil samping berupa biji kurma tersebut sehingga menjadi suatu masalah bagi industri
pengolahan buah kurma karena sampai saat ini biji kurma hanya menjadi limbah.
Pengolahan limbah biji kurma ini merupakan hal yang sangat penting untuk
mengurangi limbah lingkungan, memberikan nilai tambah dari biji kurma dan
meningkatkan pendapatan pada sektor industri kurma.
Almana and Mahmoud (1994) menyatakan bahwa biji kurma dapat digunakan
sebagai sumber alternatif serat yang lebih baik dibandingkan dengan dedak gandum
2
karena biji kurma mengandung serat makanan (dietary fibre) dengan persentase yang
cukup tinggi yaitu sebesar 6.4-11.5%. Oleh sebab itu, dibeberapa negara wilayah Timur
Tengah biji kurma dimanfaatkan sebagai makanan ternak. Hamada et al., (2002)
menyatakan bahwa biji kurma dari 3 varietas yaitu Fard, Khalas dan Lulu mengandung
karbohidrat (71.9-73.4%), lemak (9.9-13.5%), moisture (7 -10.3%), protein (5.0-6.3%)
dan kadar abu (1.0-1.8%). Penelitian Al-Farsi and Lee (2007) melaporkan bahwa
optimasi metode ekstraksi dilakukan menggunakan cara maserasi dengan pelarut etanol
pada perbandingan antara massa sampel dengan volume pelarut sebesar 1: 40 (b/v).
Metode ekstraksi menggunakan metode maserasi dinilai kurang efisien apabila
ditinjau dari segi waktu, hal ini disebabkan karena maserasi membutuhkan waktu
ekstraksi lebih lama dibandingkan dengan metode sokletasi dan sonikasi. Zhang et al.,
(2011) menyatakan bahwa ekstraksi dengan metode sonikasi menghasilkan rendemen
yang lebih besar dan waktu yang lebih cepat dibandingkan dengan metode
konvensional seperti metode maserasi dan sokletasi.
Metode ekstraksi berpengaruh terhadap aktivitas antioksidasi suatu sampel
(Tania, 2009). Ekstrak kulit durian petruk hasil sokletasi memiliki aktivitas
antioksidasi yang lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak kulit durian petruk hasil
maserasi (Widiastuti and Dhika, 2012). Berdasarkan latar belakang tersebut, maka
dilakukan metode ekstraksi menggunakan sokletasi dan sonikasi yang diharapkan
metode tersebut lebih efektif dan efisien. Selain itu uji aktivitas antioksidan di dalam
ekstrak biji kurma menggunakan metode TBA dan metode DPPH serta dilakukan
analisis senyawa aktif antioksidan dalam ekstrak biji kurma (Phoenix dactylifera)
menggunakan GC-MS.
3
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang penelitian, maka rumusan masalah dalam penelitian
ini adalah :
1. Metode ekstraksi manakah yang sesuai untuk mendapatkan senyawa yang
memiliki bioaktivitas sebagai antioksidan tertinggi ?
2. Senyawa kimia apakah yang memiliki bioaktivitas antioksidan di dalam
ekstrak biji kurma berdasarkan hasil analisis menggunakan GC-MS ?
1.3 Hipotesa Penelitian
Berdasarkan rumusan masalah penelitian, maka hipotesis dalam penelitian ini
adalah :
1. Terdapat metode ekstraksi yang sesuai untuk mendapatkan senyawa yang
memiliki bioaktivitas sebagai antioksidan tertinggi.
2. Senyawa golongan fenolik dan senyawa golongan flavonoid memiliki
bioaktivitas antioksidan di dalam ekstrak biji kurma berdasarkan hasil
analisis menggunakan GC-MS.
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah mengevaluasi aktivitas antioksidan ekstrak biji
kurma (Phoenic dactylifera). Secara khusus tujuan peneitian ini adalah :
1. Menentukan metode ekstraksi yang sesuai untuk mendapatkan senyawa
yang memiliki bioaktivitas sebagai antioksidan tertinggi.
4
2. Menentukan senyawa kimia yang memiliki bioaktivitas antioksidan di dalam
ekstrak biji kurma berdasarkan hasil analisis menggunakan GC-MS.
1.5 Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan nilai tambah biji kurma dan
pemanfaatan biji kurma sebagai ekstrak yang mempunyai bioaktivitas antioksidan serta
dapat diaplikasikan nantinya sebagai obat ataupun bahan pangan fungsional.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
5
2.1 Kurma
Kurma adalah sejenis tumbuhan palem yang buahnya dapat dimakan karena
memiliki rasa manis yang khas (Satuhu, 2010). Buah kurma menjadi kebutuhan utama
dan sektor ekonomi penting di daerah Timur Tengah. United States Departement of
Agriculture (USDA) menyatakan bahwa klasifikasi botani dari tanaman kurma
(Phoenix dactylifera) adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Super divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Liliopsida
Sub-kelas : Arecidae
Ordo : Arecales
Family : Arecaceae
Genus : Phoenix
Species : Phoenix dactylifera.
Buah kurma yang masih muda umumnya berwarna merah cerah hingga kuning
terang, namun apabila dilakukan proses pengeringan buah kurma mengalami
perubahan warna menjadi coklat kegelapan. Hal ini disebabkan selama proses
pengeringan umumnya buah mengalami proses oksidasi. Satu diantara pigmen yang
menghasilkan warna gelap dalam buah yaitu pigmen oenosianin (Apriadji, 2007).
Buah kurma mengandung karbohidrat (44-88% total gula), 0.2-0.5% lemak,
6.4-11.5% serat pangan (dietary fibre), 2.3-5.6% protein dan beberapa vitamin antara
6
lain vitamin A, tiamin (B1), riboflavin (B2), niasin dan vitamin E (Satuhu, 2010). Buah
kurma juga mengandung mineral seperti selenium, kalium, magnesium, flourin dan
seng (Frederickson, 2000). Berikut ini merupakan gambar dari buah kurma seperti
ditunjukkan pada Gambar1.
Gambar 1. Buah kurma
2.2 Biji Kurma
Kurma merupakan tumbuhan biji yang berkeping tunggal (monokotil). Ciri-ciri
tumbuhan biji yang berkeping tunggal adalah memiliki biji tunggal karena hanya
memiliki satu daun lembaga, berakar serabut, tulang daun sejajar dan berbentuk pita.
Biji kurma (Gambar 2) tidak memiliki aroma atau tidak berbau dan memiliki rasa
hambar yang sedikit pahit. Umumnya biji kurma memiliki warna coklat terang dan
coklat gelap (Hamada et al., 2002).
Gambar 2. Biji kurma
Penelitian Al-Farsi and Lee (2008) melaporkan bahwa biji kurma mengandung
total fenolik dan antioksidan berturut-turut sebesar 3942 µg/100 g dan 80400 µmol/100
g. Almana and Mahmoud (1994) menyatakan bahwa komponen biji kurma kira-kira
10% dari buah kurma. Biji kurma berpotensi digunakan sebagai bahan pangan bagi
7
manusia (Hamada et al., 2002). Hal ini dapat ditinjau dari komposisi kimia yang
terkandung pada biji kurma seperti ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Komposisi kimia biji kurma (Hamada, 2002)
Komponen Persentase (%)
Kadar air 7.1 – 10.3
Karbohidrat 71.9 – 73.4
Protein 5 – 6.3
Lemak 9.9 – 13.5
Abu 1 – 1.8
Serat 6.4 – 11.5
2.3 Ekstraksi
Komponen kimia yang terkandung di dalam bahan organik seperti yang
terdapat di dalam tumbuh-tumbuhan sangat dibutuhkan oleh keperluan hidup manusia
baik digunakan untuk keperluan industri maupun untuk bahan obat-obatan. Komponen
kimia dapat diperoleh dengan metode ekstraksi. Ekstraksi merupakan proses pelarutan
komponen kimia dalam bahan organik menggunakan suatu pelarut. Tujuan ekstraksi
adalah untuk menarik komponen kimia yang terdapat pada bahan alam. Ekstraksi ini
didasarkan pada prinsip perpindahan massa komponen zat ke dalam pelarut,
perpindahan mulai terjadi pada lapisan antar muka kemudian berdifusi masuk ke dalam
pelarut.
2.3.1 Maserasi
8
Maserasi (Gambar 3) istilah aslinya adalah macerace (bahasa Latin artinya
merendam). Maserasi adalah satu diantara jenis metode ekstraksi dengan sistem
tanpa pemanasan atau dikenal dengan istilah ekstraksi dingin. Maserasi merupakan
teknik ekstraksi yang dapat digunakan untuk senyawa yang tidak tahan panas ataupun
tahan panas. Darwis (2000) menyatakan bahwa maserasi merupakan proses
perendaman sampel dengan pelarut organik yang digunakan pada temperatur ruangan.
Gambar 3. Maserasi
Prinsip maserasi adalah pengikatan/pelarutan zat aktif berdasarkan sifat
kelarutannya dalam suatu pelarut (like dissolved like). Ketika simplisia yang akan di
maserasi direndam dalam pelarut yang dipilih maka ketika direndam cairan penyari
akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam sel yang penuh dengan zat aktif dan
karena ada pertemuan antara zat aktif dan penyari itu terjadi proses pelarutan (zat
aktifnya larut dalam penyari) sehingga penyari yang masuk ke dalam sel tersebut
akhirnya akan mengandung zat aktif, sementara penyari yang berada di luar sel belum
terisi zat aktif akibat adanya perbedaan konsentrasi zat aktif di dalam dan di luar sel ini
akan muncul gaya difusi, larutan yang terpekat akan di desak menuju keluar berusaha
mencapai keseimbangan konsentrasi antara zat aktif di dalam dan di luar sel. Proses
keseimbangan ini akan berhenti, setelah terjadi keseimbangan konsentrasi. Proses
9
ekstraksi dinyatakan selesai pada kondisi ini, maka zat aktif di dalam dan di luar sel
akan memiliki konsentrasi yang sama. Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi
senyawa bahan alam karena dengan perendaman sampel tumbuhan akan terjadi
pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan
diluar sel sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam
pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempuma karena dapat diatur lama
perendaman yang dilakukan. Hargono et al., (1986) menyatakan bahwa terdapat
beberapa variasi metode maserasi diantaranya :
a. Maserasi digesti
Maserasi digesti merupakan maserasi menggunakan pemanasan lemah dengan
temperatur 40-50 oC. Teknik maserasi ini hanya dapat dilakukan untuk simplisia yang
tahan terhadap pemanasan (Depkes RI, 1986).
b. Remaserasi
Remaserasi merupakan maserasi yang dilakukan beberapa kali. Teknik
maserasi ini terjadi pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan
maserat pertama dan seterusnya. Pelarut kedua biasanya ditambahkan sebanyak
penambahan pelarut pertama (Depkes RI, 2000). Remaserasi dinilai lebih efisien
dibandingkan maserasi tunggal, hal ini terjadi karena ada kemungkinan sejumlah besar
senyawa aktif masih tertinggal dalam sampel pada proses maserasi yang pertama
(Handa et al., 2008).
c. Maserasi dengan mesin pengaduk
10
Maserasi dengan mesin pengaduk menggunakan mesin pengaduk yang berputar
terus-menerus, waktu proses maserasi dapat dipersingkat menjadi 8 hingga 24 jam
(Depkes RI, 1986).
d. Maserasi melingkar
Maserasi melingkar merupakan maserasi yang cairan pengekstrak selalu
bergerak dan menyebar, dengan cara ini penyari selalu mengalir kembali
berkesinambungan melalui serbuk simplisia dan melarutkan zat aktifnya (Depkes RI,
1986).
2.3.2 Sokletasi
Sokletasi (Gambar 4) adalah metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut
selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi
secara terus-menerus dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin
balik. Ekstraksi soklet hanya diperlukan bila senyawa yang diinginkan memiliki
kemampuan terbatas dalam suatu pelarut. Keuntungan dari metode ini adalah
banyaknya bagian tanaman akan terlarut dengan kondisi pemanasan. Kelemahannya
adalah tidak dapat digunakan untuk senyawa yang tidak tahan terhadap pemanasan
yang berkepanjangan dapat menyebabkan degradasi senyawa aktif (Nikhal et al.,
2010).
11
Gambar 4. Sokletasi
2.3.3 Sonikasi
Ekstraksi sonikasi (ultrasonik) dapat dijadikan metode alternatif. Reaktor
ultrasonik/sonikator (Gambar 5) mengandung gelombang ultrasonik yang digunakan
untuk membuat gelembung kavitasi (cavitation bubbles) pada material larutan. Ketika
gelembung pecah dekat dengan dinding sel maka akan terbentuk gelombang dan
pancaran cairan (liquid jets) yang akan membuat dinding sel pecah. Pecahnya dinding
sel akan membuat komponen di dalam sel keluar bercampur dengan larutan. Cara
ekstraksi ini biasanya lebih cepat dan lebih efisien dibandingkan cara-cara ekstraksi
yang terdahulu (Cintas and Cravotto, 2005).
Gambar 5. Sonikator
12
2.4 Fitokimia
Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam suatu penelitian
fitokimia yang bertujuan untuk memberikan gambaran mengenai golongan senyawa
yang terkandung dalam tanaman yang sedang diteliti. Metode skrining fitokimia
dilakukan dengan melihat reaksi pengujian warna menggunakan suatu pereaksi. Hal-
hal yang berperan penting dalam skrining fitokimia adalah pemilihan pelarut dan
metode ekstraksi (Kristianti et al., 2008).
Tumbuhan umumnya mengandung senyawa aktif dalam bentuk metabolit
sekunder seperti flavonoid, tanin, alkaloid, triterpenoid, steroid, saponin dan lain-lain.
Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang umumnya mempunyai
kemampuan bioaktivitas (Lenny, 2006). Berikut ini merupakan golongan senyawa
fitokimia :
a. Alkaloid
Alkaloid adalah senyawa organik siklik yang mengadung paling sedikit satu
atom nitrogen yang biasanya bersifat basa dan dalam sebagian besar atom nitrogen ini
merupakan bagian dari cincin heterosiklik (Lenny, 2006).
Pengujian fitokimia senyawa alkaloid menunjukkan hasil yang positif dengan
terbentuknya endapan berwarna coklat ketika direaksikan dengan pereaksi Wagner dan
terbentuk endapan berwarna jingga kemerahan ketika direaksikan dengan pereaksi
Dragendorf (Harborne, 1996). Prinsip dari metode analisis ini adalah reaksi
pengendapan yang terjadi karena adanya penggantian ligan. Atom nitrogen yang
mempunyai pasangan elektron bebas pada alkaloid dapat mengganti ion iodo dalam
pereaksi Wagner dan Dragendorf. Amoniak digunakan untuk melarutkan alkaloid
13
dalam sampel. Selain itu amoniak juga berfungsi untuk memutus ikatan glikosida pada
alkaloid. Ikatan glikosida adalah ikatan karbon dioksida yaitu 1 karbon dalam atom
terikat pada 2 gugus OR dan cara pemutusan ikatan glikosida adalah dengan
penambahan amoniak, atom H dari NH3 akan masuk menggantikan R pada OR
(Fessenden and Fessenden, 1999). Perlakuan ekstrak sebelum diberi penambahan
pereaksi yaitu dengan penambahan H2SO4 yang bertujuan karena alkaloid bersifat basa
sehingga biasanya diekstrak dengan pelarut yang bersifat asam (Harborne, 1996).
b. Flavonoid
Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang tersebar luas di alam. Golongan
flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6 yang artinya kerangka
karbonnya terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzen tersubstitusi) disambungkan oleh
rantai alifatik tiga-karbon (Robinson, 1995). Flavonoid termasuk dalam golongan
senyawa fenol yang memiliki banyak gugus -OH dengan adanya perbedaan
keelektronegatifan yang tinggi sehingga bersifat polar. Golongan senyawa ini mudah
terekstrak dalam pelarut etanol yang memiliki sifat polar karena adanya gugus
hidroksil.
Flavonoid dapat diuji keberadaannya menggunakan Mg dan HCl pekat. Hasil
positif uji flavonoid ditandai dengan terbentuknya warna jingga, kuning ataupun merah
(Harborne, 1996). Beragam warna yang dihasilkan ketika pengujian dipengaruhi oleh
pelarut dan prosedur yang digunakan (Sangi et al., 2008).
c. Terpenoid dan Steroid
14
Terpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan
isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik yaitu skualena.
Senyawa ini berstruktur siklik yang kebanyakan berupa alkohol, aldehida atau asam
karboksilat (Harborne, 1996).
Steroid tersusun dari isoprena-isoprena dari rantai panjang hidrokarbon yang
menyebabkan sifatnya non-polar. Beberapa senyawaan steroid mengandung gugus -
OH yang sering disebut dengan sterol, sehingga sifatnya yang cenderung lebih polar.
Pengujian steroid dan terpenoid dalam CH3COOH dengan H2SO4 pekat
didasarkan pada kemampuan senyawa steroid dan terpenoid dalam membentuk warna
biru atau hijau untuk steroid dan merah atau ungu untuk terpenoid (Harborne, 1996).
d. Tanin
Secara kimia tanin dibagi menjadi dua golongan, yaitu tanin terkondensasi atau
tanin katekin dan tanin terhidrolisis atau tanin galat (Robinson, 1995). Identifikasi
terhadap senyawa fenolik/tanin dilakukan melalui penambahan FeCl3. Ketika larutan
sampel ditambahkan larutan FeCl3 1% maka akan terjadi perubahan warna seperti biru
kehitaman atau hijau kehitaman yang menandakan adanya senyawa fenolik/tanin
(Harborne, 1996).
e. Kuinon
Senyawa dalam jaringan yang mengalami oksidasi dari bentuk kuinol menjadi
kuinon. Identifikasi senyawa kuinon dilakukan melalui penambahan NaOH 10% dan
etanol 95%. Hasil positif uji kuinon ditandai dengan terbentuknya larutan berwarna
kuning, jingga, coklat ataupun merah (Harborne, 1996).
f. Saponin
15
Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang kuat, menimbulkan busa
jika dikocok dengan air. Sifatnya sebagai senyawa aktif permukaan disebabkan karena
adanya kombinasi antara aglikon yang bersifat lipofilik dengan gula yang bersifat
hidrofilik (Houghton and Raman, 1998). Saponin jauh lebih polar daripada sapogenin
karena ikatan glikosidanya (Harborne, 1987). Identifikasi senyawa saponin dilakukan
melalui penambahan akuades. Hasil positif uji saponin ditandai dengan terbentuknya
busa yang tahan selama 15 menit (Harborne, 1996).
2.5 Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron atau reduktan. Senyawa ini
memiliki berat molekul yang kecil, tetapi mampu menghambat reaksi oksidasi dengan
mengikat radikal bebas dan molekul yang reaktif. Radikal bebas adalah atom atau
molekul yang tidak stabil karena memiliki elektron yang tidak berpasangan dalam
orbital luarnya sehingga sangat reaktif untuk mendapatkan pasangan elektron dengan
mengikat sel-sel tubuh. Apabila hal tersebut terjadi secara terus menerus dapat
menyebabkan kerusakan dan kematian sel (Lautan, 1997). Antioksidan ditujukan untuk
mencegah dan mengobati penyakit seperti aterosklerosis, stroke, diabetes, alzheimer
dan kanker (Aqil et al., 2006).
Secara umum, antioksidan dikelompokkan menjadi dua (Winarsi, 2007) yaitu :
1. Antioksidan enzimatis (misalnya: enzim superoksida dismutase, katalase dan
glutation peroksidase) merupakan sistem pertahanan utama (primer) terhadap
kondisi stress oksidatif. Enzim-enzim tersebut merupakan metaloenzim yang
aktivitasnya sangat tergantung pada adanya ion logam.
16
2. Antioksidan non-enzimatis dapat berupa senyawa nutrisi maupun non-nutrisi.
Antioksidan ini disebut juga antioksidan sekunder karena dapat diperoleh dari
asupan bahan makanan, seperti tokoferol, karotenoid, flavonoid, kuinon,
bilirubin, asam askorbat, asam urat, protein pengikat logam dan protein
pengikat heme. Senyawa-senyawa ini berfungsi menangkap senyawa oksidan
dan mencegah terjadinya reaksi berantai.
Berdasarkan sumbernya terdapat dua jenis antioksidan (Pratt, 1992) yaitu:
1. Antioksidan alami
Senyawa antioksidan alami diisolasi dari sumber alami yang berasal dari
tumbuhan. Antioksidan alami tersebar di beberapa bagian tanaman, seperti pada kayu,
kulit kayu, akar, daun, buah, bunga, biji dan serbuk sari (Pratt, 1992). Senyawa
antioksidan alami umumnya adalah vitamin A, vitamin C, vitamin E, β-karoten,
senyawa fenolik atau polifenolik yang dapat berupa golongan flavonoid, turunan asam
sinamat dan asam-asam organik polifungsional (Pratt and Hudson, 1990). Struktur
senyawa-senyawa antioksidan alami ditunjukkan pada Gambar 6:
O
OH OH
O
OH
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3 CH3 CH3
CH3 CH3
(a) (b)
O
O
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
(c) (d)
OH
O
OH
CH3
CH3CH3CH3 CH3
17
(e) (f)
Gambar 6. Struktur senyawa antioksidan alami: Vitamin C (a), β-karoten (b),
Flavonoid (c), Vitamin E (d), Asam Sinamat (e) dan Vitamin A (f).
2. Antioksidan sintetik
Antioksidan sintetik adalah antioksidan yang ditambahkan pada makanan,
seperti Butil Hidroksi Anisol (BHA), Butil Hidroksi Toluen (BHT), Propil Galat (PG)
dan Tert-Butil Hidoksi Quinon (TBHQ). Antioksidan ini merupakan antioksidan alami
yang telah diproduksi secara sintetik untuk tujuan komersial (Buck, 1991). Struktur
senyawa-senyawa antioksidan sintetik dapat ditunjukkan pada Gambar 7.
(a) (b) (c) (d)
Gambar 7. Struktur senyawa antioksidan sintetik: Butil Hidroksi Anisol (BHA) (a),
Butil Hidroksi Toluen (BHT) (b), Tert-Butil Hidroksi Quinon (TBHQ) (c)
dan Propil Galat (d)
Satu diantara metode uji untuk menentukan aktivitas antioksidan adalah uji
DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Metode DPPH merupakan suatu metode yang
cepat, sederhana dan murah untuk mengukur aktivitas antioksidasi. DPPH merupakan
radikal sintetik stabil yang ditandai oleh delokalisasi cadangan elektron disekeliling
molekulnya secara keseluruhan dengan baik sehingga tidak akan membentuk dimer
seperti yang terjadi pada kebanyakan radikal bebas lainnya (Pisoschi et al., 2009).
Metode DPPH banyak digunakan untuk menguji kemampuan dan untuk mengevaluasi
aktivitas antioksidasi suatu senyawa dalam mendonorkan atom hidrogennya kepada
senyawa radikal bebas. Pratimasari (2009) menyatakan bahwa senyawa DPPH
berwarna ungu karena adanya delokalisasi elektron pada atom nitrogen yang semula
18
(N-N) menjadi (N=N). Hal ini mengakibatkan ikatan rangkap terkonjugasi menjadi
lebih panjang sehingga panjang gelombang DPPH bergeser ke panjang gelombang
yang lebih panjang dengan absorbansi yang kuat pada λ max 516 nm (Gambar 8).
Gambar 8. Reaksi resonansi molekul DPPH (Pratimasari, 2009)
Larutan DPPH yang berisi ekstrak sampel diukur serapan cahayanya dan
dihitung aktivitas antioksidasinya dengan persen inhibisi, yaitu banyaknya aktivitas
senyawa antioksidan yang dapat menangkap radikal bebas DPPH. Parameter yang
umum digunakan untuk mengetahui besarnya aktivitas antioksidasi pada suatu ekstrak
bahan adalah dengan menentukan nilai inhibitor concentration 50% (IC50) bahan
antioksidan tersebut. IC50 didefinisikan sebagai konsentrasi zat uji yang dapat
menyebabkan kehilangan 50% aktivitas dari DPPH (berkaitan dengan berkurangnya
intensitas warna dari DPPH). Zat uji yang memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi
adalah zat yang memiliki nilai IC50 yang paling rendah. Waktu reaksi yang dibutuhkan
dengan menggunakan metode ini adalah 30 menit (Molyneux, 2004). Berikut ini
merupakan reaksi kimia antara antioksidan dengan radikal DPPH seperti ditunjukkan
pada Gambar 9.
19
Gambar 9. Reaksi antioksidan dengan radikal DPPH (Molyeux, 2004)
Selain metode DPPH, terdapat metode lain untuk uji aktivitas antioksidasi
dalam suatu bahan yaitu metode Thio Barbituric Acid (TBA) yang pengukurannya
berdasarkan terbentuknya senyawa TBA-reacting substance (TBArs) seperti
malondialdehid (MDA) melalui proses autooksidasi (Kikuzaki and Nakatani, 1993).
MDA (Gambar10) merupakan senyawa dialdehida yang tersusun atas 3 karbon yang
gugus karbonil terletak pada posisi C1 dan C3 yang reaktif sehingga menjadi penanda
toksisitas sel, mutagenesis dan penguraian lipid pada membran sel (Tukozkan et al.,
2006). Pengukuran MDA dilakukan sebagai indeks tidak langsung dari kerusakan
oksidatif yang disebabkan oleh peroksidasi lipid.
Gambar 10. Senyawa malondialdehid
Senyawa MDA yang terbentuk dari hasil autooksidasi akan lebih sedikit apabila
diberi penambahan senyawa antioksidan. Nilai serapan yang diperoleh akan sebaing
dengan konsentrasi MDA yang terbentuk dan berbanding terbalik dengan aktivitas
antioksidasinya. MDA hasil terminasi diukur sebagai TBArs karena terjadi reaksi
antara gugus karbonil MDA dengan asam 2- tiobarbiturat (TBA) membentuk kompleks
senyawa MDA-TBA (Gambar 11) yang berwarna merah muda dan serapannya diukur
menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm (Tokur et al., 2006).
20
Intensitas warna merah yang terukur sebanding dengan tingkat peroksidasi lipid oleh
radikal lipid, radikal lipid peroksil dan radikal peroksil (Tukozkan et al., 2006).
Gambar 11. Reaksi pembentukan kompleks senyawa MDA-TBA
Aktivitas antioksidasi suatu sampel merupakan kontribusi dari senyawa
golongan flavonoid terutama dari senyawa flavon dan flavonol karena penentuan kadar
total flavonoid menggunakan metode penambahan alumunium klorida (AlCl3)
(Alvarez et al., 2009). Prinsip penetapan kadar flavonoid adalah adanya reaksi antara
flavonoid dengan AlCl3 membentuk kompleks berwarna kuning dan dengan
penambahan NaOH akan membentuk senyawa kompleks berwarna merah muda yang
diukur absorbansinya pada panjang gelombang 510 nm (Rohman, 2009). Mekanisme
senyawa flavonoid dapat bertindak sebagai antioksidan ditunjukkan oleh posisi gugus
hidroksilnya yang mampu menangkap langsung radikal bebas. Aktivitas antioksidan
flavonoid ditunjukkan melalui potensinya sebagai agen pereduksi, donor hidrogen dan
pengkelat metal (Winarsi, 2007).
Salah (1995) dan Rice (1996) menyatakan bahwa berbagai karakteristik
struktur senyawa fenolik bertanggung jawab untuk menentukan tingkat aktivitas
antioksidan, seperti jumlah dan susunan gugus hidroksil. Mekanisme senyawa
polifenol sebagai free radical scavenger (Gambar 12) berdasarkan reaksi senyawa
polifenol yang teroksidasi oleh radikal bebas, sehingga spesies radikal menjadi lebih
stabil dan kurang reaktif. Reaktivitas yang tinggi dari gugus hidroksil yang terdapat
pada senyawa polifenol menyebabkan radikal bebas menjadi inaktif. Reaksi tersebut
21
juga mengakibatkan terbentuknya senyawa polifenol radikal yang dapat distabilkan
oleh resonansi (Porskjaer et al., 2014 and Nijveldt et al., 2001).
Gambar 12. Mekanisme antioksidan polifenol (Porskjaer et al., 2014)
Metode Folin Ciocalteu sering digunakan untuk mengevaluasi kandungan total
fenolik pada bahan alam, meskipun terdapat gangguan dari pengujian ini yang
disebabkan karena reagen Folin Ciocalteu yang terdiri dari asam fosfotungstat dan
asam fosfomolibdat mampu bereaksi dengan senyawa pereduksi non-fenolik lainnya
seperti asam askorbat (Ferreira et al., 2009) yang menyebabkan peningkatan nilai
absorbansi dalam penentuan fenolik.
Penentuan kandungan total fenol dengan metode Folin-Ciocalteu dilakukan
berdasarkan kemampuan reagen Folin-Ciocalteu mengoksidasi gugus hidroksil (OH-)
dari senyawa golongan fenol. Senyawa fenolik mereduksi fosfomolibdat fosfotungstat
dalam Folin-Ciocalteu membentuk kompleks molybdenum yang berwarna biru
(Gambar 13). Intensitas warna biru ditentukan dengan banyaknya kandungan fenol
dalam larutan sampel. Semakin besar konsentrasi senyawa fenolik dalam sampel maka
semakin pekat warna biru yang terlihat.
22
Gambar 13. Reaksi folin ciocalteu dengan senyawa fenol
2.6 Spektrofotometri UV-VIS
Spektofotometri uv-vis adalah teknik analisa spektroskopi yang memakai
sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-
780 nm) dengan memakai instrumen spektrofotometer (Mulja and Suharman, 1995).
Prinsip spektrofotometri uv-vis yakni radiasi pada rentang panjang gelombang 200-
800 nm dilewatkan melalui suatu larutan senyawa. Elektron-elektron pada ikatan di
dalam molekul menjadi tereksitasi sehingga menempati keadaan kuantum yang lebih
tinggi dan dalam proses menyerap sejumlah energi yang melewati larutan tersebut. Dua
hukum empiris telah diformulasikan tentang intensitas serapan. Hukum Lambert’s
menyatakan bahwa fraksi sinar yang diserap tidak tergantung terhadap intensitas
sumber sinar. Hukum Beer’s menyatakan bahwa serapan tergantung jumlah molekul
yang terserap. Kedua hukum tersebut dapat disajikan ke dalam persamaan berikut :
𝐴 = 𝑙𝑜𝑔𝐼𝑜
𝐼= 𝑘𝑐𝑏
Keterangan :
A = absorbansi Io = intensitas sinar awal
I = intensitas sinar yang diteruskan c = konsentrasi sampel
b = tebal sel yang dilalui sampel k = koefisien ekstingsi
23
Spektrofotometer uv-vis adalah alat yang digunakan untuk menghitung
banyaknya sinar yang diserap oleh berbagai senyawa yang dilewati spektrum uv dan
visible atau tampak. Bagian-bagian dari instrumen spektrofotometer uv-vis adalah :
a. Sumber sinar
Sumber sinar yang digunakan adalah lampu deuteurium untuk mendapatkan
spektrum uv dan lampu tungsten atau halogen untuk mendapatkan spektrum tampak.
b. Monokromator
Monokromator berfungsi untuk mendispersikan sinar ke dalam komponen-
komponen panjang gelombangnya. Kisi difraksi terletak di dalam monokromator yang
berfungsi untuk memisahkan sinar menjadi komponen-komponen warnanya. Tanda
panah berwarna biru menunjukkan jalur berbagai panjang gelombang sinar diteruskan
dengan arah yang berbeda. Celah (slit) hanya menerima sinar pada daerah panjang
gelombang yang sangat sempit untuk diteruskan ke spektrofotometer.
c. Sel sampel dan reference cell
Sel sampel maupun reference cell merupakan wadah berbahan gelas atau
kuarsa kecil yang disebut kuvet. Kuvet dibuat sedemikian rupa sehingga jarak yang
dilalui berkas sinar adalah 1 cm. Sel sampel berisi larutan materi yang akan diuji
sedangkan sel reference cell berisi pelarut murni. Pelarut yang dipilih tidak menyerap
sinar secara signifikan pada daerah panjang gelombang yang digunakan (200-800 nm).
d. Detektor
Detektor mengubah sinar yang masuk menjadi arus listrik. Arus lebih tinggi
jikaintensitas sinarnya lebih tinggi. Absorbansi yang didapatkan berkisar 0 hingga 1.
24
Absorbansi 0 pada suatu panjang gelombang menyatakan bahwa tidak terdapat sinar
yang diserap pada panjang gelombang tersebut.
Berikut ini merupakan bagian-bagian dari spektrofotometer UV-VIS seperti
ditunjukkan pada Gambar 14.
Gambar 14. Komponen spektrofotometer UV-VIS
Penelitian dengan metode spektrofotometri UV-VIS telah dilakukan oleh
Ahmad et al., (2014) mengenai penentuan kandungan total fenolik dan aktivitas
antioksidan dari ekstrak rambut jagung serta penentuan kandungan total flavonoid pada
beberapa tanaman tradisional di desa Waitina (Lumbessy et al., 2013).
2.7 Gas Chromatography Mass Spectroscopy (GC-MS)
GCMS adalah teknik analisis yang menggabungkan dua metode yaitu
kromatografi gas dan spektroskopi massa. Kromatografi gas adalah metode analisis
sample yang terpisahkan secara fisik menjadi bentuk molekul-molekul yang lebih kecil
(hasil pemisahan dapat dilihat berupa kromatogram) sedangkan spektroskopi massa
adalah metode analisis sample yang dianalisis akan diubah menjadi ion-ion gas-nya
25
dan berdasarkan massa dari ion-ion tersebut dapat diukur berdasarkan hasil deteksi
berupa spektrum massa.
Pemisahan komponen senyawa dalam GCMS terjadi di dalam kolom (kapiler)
GC dengan melibatkan dua fase, yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam adalah zat
yang ada di dalam kolom, sedangkan fase gerak adalah gas pembawa (Helium ataupun
Hidrogen dengan kemurnian tinggi, yaitu ± 99,995%). Proses pemisahan dapat terjadi
karena terdapat perbedaan kecepatan alir dari tiap molekul di dalam kolom, perbedaan
tersebut dapat disebabkan oleh perbedaan afinitas antar molekul dengan fase diam yang
ada di dalam kolom. Selanjutnya komponen-komponen yang telah dipisahkan tersebut
masuk ke dalam ruang MS yang berfungsi sebagai detektor. Silverstein et al., (1991)
menyatakan bahwa konsep dari spektrometri massa yaitu suatu senyawa akan
diionisasi, ion akan dipisahkan berdasarkan massa/rasio muatan dan beberapa ion akan
menunjukkan masing-masing unit massa/muatan yang terekam sebagai spektrum
massa.
Bagian-bagian dari instrumen GC adalah sebagai berikut:
1. Pengatur aliran gas (Gas Flow Controller)
2. Tempat injeksi sample (Injector)
3. Kolom (tempat terjadinya pemisahan)
4. Lalu dihubungkan pada interface (fungsi interface adalah sebagai penghubung
antara GC dan MS).
Sedangkan bagian-bagian dari MS adalah sebagai berikut:
1. Tempat masuk sample (melalui interface)
26
2. Sumber ion (Ion Source)
3. Pompa vakum (Vacuum Pump)
4. Penganalisis Massa (Mass Analyzer)
5. Detektor (Electron Multiplier Detector)
6. Sistem Pengolah Data (Personal Computer)
Berikut ini merupakan bagian-bagian instrument GC-MS seperti ditunjukkan pada
Gambar 15.
Gambar 15. Bagian-bagian instrumentasi GC-MS
Metode kromatografi gas-spektrometri massa telah dilakukan oleh Agustal et
al., (1997) mengenai analisis kandungan kimia ekstrak daun katuk dan analisis
kandungan minyak atsiri dalam ekstrak rimpang kencur (Hasanah et al., 2011).
BAB III
27
METODE PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Organik, Pusat Laboratorium
Terpadu (PLT) Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Penelitian ini
dimulai dari bulan Januari 2015 hingga Juni 2015.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian antara lain alat-alat gelas seperlunya,
oven (Memmert), grinder (Fritsch), shaker incubator (Heidolph Unimax 1010), vortex
(Thermolyne Maxi Mix Plus), penanggas air (Heidolph MR 3001 K), pompa vakum,
rotary evaporator (Heidolph Laborota 4000), sonikator (Branson 3800), timbangan
analitik (Dhaus), perangkat sokletasi, spektrofotometer UV-VIS (Perkin Elmer
Lambda 25), incubator (Memmert) dan GC-MS (Agilent Technologies 7890A).
3.2.2 Bahan
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian antara lain biji kurma yang
diperoleh dari buah kurma jenis Al-Saad yang berasal dari United Arab Emirates
(Gambar 37). Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian antara lain kertas saring
Whatman no 41, etanol teknis, n-heksana teknis, metanol teknis, akuades, pereaksi
Mayer (Merck), pereaksi Wagner (Merck), pereaksi Dragendorf (Merck), natrium
hidroksida (Merck), asam klorida (Merck), serbuk magnesium (Merck), kloroform
28
(Merck), asam sulfat pekat (Merck), asam asetat anhidrat (Merck), asam asetat glasial
(Merck) pereaksi Liebermen Bunchard (Merck), asam galat (Sigma), Folin-Ciocalteu
(Merck), natrium karbonat (Merck), serbuk 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (Sigma),
asam askorbat (Sigma), etanol pekat (Smart Lab), buffer fosfat (Merck), virgin coconut
oil, larutan 1,1,3,3-tetraetoksipropana (Sigma), betakaroten (Sigma), thio barbituric
acid (Merck), tri chloro acetic acid (Merck), kuersetin (Sigma), alumunium klorida
(Merck) dan besi (III) klorida (Merck).
3.3 Prosedur Penelitian
3.3.1 Pembuatan Serbuk Simplisia
Serbuk simplisia biji kurma dibuat dari simplisia utuh yang terlebih dahulu
dicuci menggunakan air bersih. Lalu dikeringkan menggunakan oven pada temperatur
50 oC selama 48 jam. Selanjutnya simplisia dihancurkan dengan cara digrinder dan
disaring dengan saringan yang berukuran Ø : 18 Mesh.
3.3.2 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak dari biji kurma dibuat dengan 3 metode ekstraksi yaitu
maserasi, sonikasi dan sokletasi.
A. Metode Ekstraksi Maserasi
Percobaan dengan metode maserasi dilakukan dengan cara sejumlah
erlenmeyer disiapkan dan dimasukkan serbuk simplisia biji kurma sebanyak ±25 g ke
dalam erlenmeyer. Setelah itu, pelarut sebanyak 1000 mL dimasukkan ke dalam
masing-masing erlenmeyer. Pelarut yang digunakan adalah etanol dan n-heksana.
29
Kemudian ekstrak distirer selama 1 jam dengan kecepatan 300 rpm. Ekstraksi
dilakukan pada temperatur ruang selama 24 jam. Selanjutnya campuran disaring
menggunakan kertas saring Whatman no 41 dengan bantuan pompa vakum. Setelah itu
filtrat yang diperoleh selanjutnya dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada
temperatur 60 oC dengan kecepatan 90 rpm sehingga diperoleh ekstrak kental. Masing-
masing ekstrak yang diperoleh, ditimbang beratnya untuk mengetahui persentase
rendemen ekstrak (Al-Farsi and Lee, 2007).
B. Metode Ekstraksi Sokletasi
Percobaan dengan metode sokletasi dilakukan dengan cara terlebih dahulu alat
sokletasi disiapkan kemudian sampel sebanyak ±10 g dibungkus dengan kertas saring,
diikat dengan benang dan dimasukkan kedalam alat soklet. Setelah itu pelarut sebanyak
400 mL dimasukkan kedalam labu alas bulat. Pelarut yang digunakan adalah pelarut
etanol dan n-heksana. Sokletasi dilakukan pada temperatur 80-85 oC sampai tetesan
siklus tidak berwarna lagi atau kurang lebih selama 5 jam. Ekstrak yang diperoleh
selanjutnya dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada temperatur 60 oC dengan
kecepatan 90 rpm. Masing-masing ekstrak yang diperoleh ditimbang beratnya untuk
mengetahui persentase rendemen ekstrak (Tuty, 2008).
C. Metode Ekstraksi Sonikasi
Percobaan dengan metode ekstraksi sonikasi dilakukan dengan cara sejumlah
erlenmeyer disiapkan dan dimasukkan sebanyak ±25 g serbuk simplisia biji kurma ke
dalam erlenmeyer. Setelah itu masing-masing pelarut sebanyak 1000 mL dimasukkan
ke dalam erlenmeyer. Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi adalah etanol dan n-
heksana. Ekstraksi dilakukan menggunakan gelombang ultrasonik dengan frekuensi 50
30
khz pada temperatur 40 oC selama 50 menit (Tania, 2009). Setelah itu campuran
disaring menggunakan kertas saring Whatman no 41 dengan bantuan pompa vakum.
Kemudian filtrat yang diperoleh, dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada
temperatur 60 oC dengan kecepatan 90 rpm sehingga diperoleh ekstrak kental. Masing-
masing ekstrak yang diperoleh ditimbang beratnya untuk mengetahui persentase
rendemen ekstrak.
Hasil rendemen ekstrak etanol dan n-heksana dari masing-masing metode
ekstraksi dihitung dengan rumus sebagai berikut :
% 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 ∶𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑑𝑎𝑝𝑎𝑡
𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 𝑥 100%
3.3.3 Uji Fitokimia
A. Uji Alkaloid (Harborne, 1996)
Uji alkaloid dilakukan dengan metode Mayer, Wagner, dan Dragendorff.
Ekstrak pekat sebanyak 0.5 g ditambahkan dengan 10 mL kloroform-amoniak
kemudian campuran disaring dalam tabung reaksi tertutup. Filtrat ditambahkan 3-5
tetes H2SO4 2M dan dikocok menggunakan vortex. Selanjutnya didiamkan hingga
terjadi pemisahan. Lapisan asamnya (terdapat pada bagian atas) dipindahkan ke tabung
reaksi yang lain. Setelah itu masing-masing tabung reaksi ditambahkan pereaksi Mayer
(0.5 g KI dilarutkan dalam 10 mL akuades, ditambahkan dengan 1.36g MgCl2 dalam
60 mL akuades kemudian ditera hingga 100 mL), Dragendorf (8g Bi(NO3)3.5H2O
dalam 30% HNO3, ditambahkan dengan 27.2 g KI dalam 50 mL akuades kemudian
ditera hingga 100 mL), dan Wagner (4 g KI dilarutkan dalam 20mL akuades,
31
ditambahkan dengan 2 g I2 ditera hingga 100 mL) yang akan menimbulkan endapan
berturut-turut putih, jingga kemerahan dan coklat apabila positif mengandung alkaloid.
B. Uji Flavonoid ( Harborne, 1996)
Uji flavonoid dilakukan dengan cara sebanyak 0.5 g ekstrak pekat dimasukkan
ke dalam tabung reaksi dan 7 mL ditambahkan akuades panas. Setelah itu campuran
dididihkan di atas penanggas air selama 5 menit. Kemudian ditambahkan 5 mL larutan
HCl pekat dan 0.05 mg serbuk Mg. Selanjutnya dikocok menggunakan vortex. Apabila
terjadi perubahan warna jingga, kuning atau merah maka hal ini menunjukkan positif
mengandung flavonoid.
C. Uji Terpenoid dan Steroid (Harborne, 1996)
Uji terpenoid dan steroid dilakukan dengan metode Lieberman Burchard.
Ekstrak pekat sebanyak 0.5 g ditambahkan dengan 20 mL n-heksana dan didiamkan
selama 2 jam. Kemudian campuran disaring, ditambahkan asam asetat anhidrat dan
H2SO4 pekat sebanyak 2 tetes. Warna merah atau ungu yang terbentuk menunjukkan
adanya triterpenoid dan warna hijau atau biru menunjukkan adanya steroid.
D. Uji Tanin (Harborne, 1996)
Uji tanin dilakukan dengan cara ekstrak pekat sebanyak 0.5 g dimasukkan
kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 tetes FeCl3 1%. Sampel positif
mengandung tanin apabila menghasilkan warna biru atau hijau kehitaman.
E. Uji Kuinon (Harborne, 1996)
32
Uji kuinon dilakukan dengan cara ekstrak pekat sebanyak 0.5 g dimasukkan
kedalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 2 mL etanol 95% dan 1 mL NaOH
10%. Sampel positif mengandung kuinon apabila menghasilkan warna kuning, jingga,
coklat atau merah.
F. Uji Saponin (Harborne, 1996)
Uji saponin dilakukan dengan metode Forth. Ekstrak pekat sebanyak 0.5 g
dimasukkan kedalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 5 mL akuades panas.
Setelah itu, campuran dikocok. Sampel dinyatakan positif mengandung saponin apabila
terdapat busa yang bertahan selama 15 menit.
3.3.4 Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak n-Heksana Biji Kurma Menggunakan
Metode TBA (Kikuzaki and Nakatani, 1993)
A. Penentuan Waktu Inkubasi dengan Metode Diena Terkonjugasi
(Esterbaur et al., 1991)
Sebanyak 2 mL buffer fosfat 0.1 M pH 7, 2 mL virgin coconut oil 50 mM dalam
etanol 99.8% dan 1 mL akuades dicampurkan, dimasukkan kedalam tabung reaksi dan
diinkubasi pada temperatur 40 oC selama beberapa hari. Pengukuran intensitas
serapannya dilakukan dengan cara sebanyak 50 µl campuran asam linoleat yang telah
diinkubasi ditambahkan ke dalam 6 mL etanol 75%. Selanjutnya campuran dibaca
serapannya pada panjang gelombang 234 nm. Larutan etanol 75% digunakan sebagai
blanko. Pengukuran dilakukan setiap hari sampai tercapai serapan maksimum dan
memberikan hasil pengukuran yang cenderung turun.
B. Pengukuran Larutan Standar
33
Pembuatan kurva standar dilakukan dengan menggunakan larutan 1,1,3,3-
tetraetoksipropana (TEP) dengan konsentrasi 1.5, 3, 6, 9, 12, 15 dan 18 µM. Masing-
masing larutan dipipet sebanyak 1 mL, ditambahkan 2 mL larutan tri chloro acetic acid
(TCA) 20% dan 2 mL larutan TBA 1% dalam asam asetat 50%. Campuran reaksi
diletakkan dalam penangas air selama 10 menit pada temperatur 100 oC. Setelah itu,
campuran di vortex dan diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum.
Blanko yang digunakan adalah akuades dengan perlakuan yang sama (Yagi, 1994).
C. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan standar TEP konsentrasi 9 µM diukur serapannya menggunakan
Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 kisaran panjang gelombang 400-
700 nm dengan interval tertentu. Hasil yang diperoleh dibuat dalam bentuk kurva,
sumbu y sebagai absorbansi dan sumbu x sebagai panjang gelombang cahaya.
Kemudian ditentukan panjang gelombang yang memberikan serapan maksimum.
D. Pembuatan Larutan Ekstrak
Sejumlah 10 mg ekstrak n-heksana biji kurma dilarutkan dalam etanol 99.8%
dengan konsentrasi 1000 μg/mL sebagai larutan induk. Kemudian dibuat dalam
berbagai konsentrasi (50, 100, 200 dan 500 μg/mL).
E. Pengukuran Larutan Uji
Sampel sebanyak 1 mL ditambahkan dengan 2 mL larutan buffer fosfat 0.1 M
pH 7.0 dan 2 mL virgin coconut oil 50 mM dalam etanol 99.8%. Larutan kontrol positif
digunakan 1 mL betakaroten ditambahkan dengan 2 mL larutan buffer fosfat 0.1 M pH
7.0 dan 2 mL virgin coconut oil 50 mM dalam etanol 99.8% sedangkan kontrol negatif
digunakan 1 mL akuades ditambahkan dengan 2 mL larutan buffer fosfat 0.1 M pH 7.0
34
dan 2 mL virgin coconut oil 50 mM dalam etanol 99.8%. Setelah itu semua larutan
dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan diinkubasi di dalam oven yang temperaturnya
diatur tetap pada 40 oC selama waktu inkubasi optimum dari metode diena
terkonjugasi. Dua hari setelah waktu inkubasi maksimum, dilakukan pengukuran
malondialdehid melalui metode TBA dengan mengambil 1 mL dari setiap larutan
kemudian ditambahkan 2 mL larutan TCA 20% dan 2 mL larutan TBA 1% dalam asam
asetat 50%. Blanko yang digunakan adalah akuades dengan perlakuan yang sama.
Selanjutnya campuran reaksi diletakkan dalam penangas air selama 10 menit pada suhu
100 oC. Setelah itu campuran di vortex dan diukur serapannya pada panjang gelombang
maksimum.
F. Perhitungan % Daya Hambat
Setelah didapatkan nilai absorbansi dari masing-masing konsentrasi TEP, lalu
ditentukan persamaan y = a + bx dengan perhitungan secara regresi linear. Sumbu x
adalah konsentrasi (µM) dan y adalah absorbansi (A). Selanjutnya didapatkan kadar
MDA dari kontrol positif, kontrol negatif dan masing-masing sampel dari nilai x
setelah mensubsitusi nilai y dengan nilai absorbansi yang didapatkan. Kemudian
ditentukan nilai % daya hambat oksidasi dari masing-masing konsentrasi larutan
sampel dan kontrol positif dengan rumus :
% 𝐷𝑎𝑦𝑎 ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡 𝑜𝑘𝑠𝑖𝑑𝑎𝑠𝑖 =[𝑀𝐷𝐴]𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 − [𝑀𝐷𝐴]𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
[𝑀𝐷𝐴]𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 𝑥 100%
3.3.5 Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak Etanol Biji Kurma Menggunakan
Metode DPPH (Blois, 1958)
A. Pembuatan Larutan DPPH
35
Larutan DPPH yang digunakan dibuat dengan cara menimbang ±2 mg serbuk
DPPH kemudian dilarutkan dengan metanol ke dalam labu ukur 100 mL hingga tanda
batas sehingga didapat larutan DPPH dengan konsentrasi 0.002% (Molyneux, 2004).
B. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan blanko dibuat dengan cara sebanyak 2 mL metanol dipipet kemudian
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan DPPH 0.002%.
Setelah itu campuran dikocok hingga homogen dan diinkubasi pada temperatur ruang
selama 30 menit. Selanjutnya serapan larutan diukur menggunakan Spektrofotometer
UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 kisaran panjang gelombang 400-700 nm dengan
interval tertentu.
C. Pembuatan Larutan Asam Askorbat Sebagai Pembanding
1. Pembuatan larutan induk asam askorbat konsentrasi 50 ppm
Asam askorbat sebanyak 2.5 mg ditimbang dan dilarutkan dalam 50 mL
metanol. Kemudian dikocok hingga homogen.
2. Pembuatan larutan asam askorbat konsentrasi 0.25, 0.5, 1, 2 dan 4 ppm
Larutan induk asam askorbat sebanyak 0.05, 0.1, 0.2, 0.4 dan 0.8 mL masing-
masing dipipet kedalam labu ukur 10 mL. Setelah itu ditambahkan metanol hingga
tanda batas. Kemudian dipipet 2 mL masing-masing ke dalam tabung reaksi. Masing-
masing tabung ditambah 2 mL DPPH 0.002%. Selanjutnya campuran dikocok hingga
homogen lalu diinkubasi pada temperatur ruang selama 30 menit. Kemudian serapan
dari larutan tersebut diukur pada panjang gelombang maksimum.
D. Pembuatan Larutan Sampel Ekstrak Etanol
1. Pembuatan larutan sampel konsentrasi 500 ppm
36
Sampel sebanyak 25 mg ditimbang dan dilarutkan dalam 50 mL metanol.
Kemudian dikocok hingga homogen.
2. Pembuatan larutan sampel konsentrasi 0.3125, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 dan
20 ppm
Larutan induk sampel sebanyak 0.00625, 0.0125, 0.25, 0.05, 0.1, 0.2 dan 0,4mL
dipipet dan masing-masing dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL. Setelah itu
ditambahkan metanol hingga tanda batas. Kemudian dipipet 2 mL masing-masing ke
dalam tabung reaksi. Masing-masing tabung ditambahkan 2 mL DPPH 0.002%.
Selanjutnya campuran dikocok hingga homogen lalu diinkubasi pada temperatur ruang
selama 30 menit. Kemudian serapan dari larutan tersebut diukur pada panjang
gelombang maksimum.
E. Perhitungan Nilai IC50
Nilai IC50 dihitung berdasarkan persentase inhibisi terhadap radikal DPPH dari
masing-masing konsentrasi larutan sampel dengan rumus :
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 =𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 𝑥 100%
Setelah didapatkan persentase inhibisi dari masing-masing konsentrasi,
kemudian ditentukan persamaan y = a + bx dengan perhitungan secara regresi linear.
Sumbu x adalah konsentrasi (ppm) dan y adalah persentase inhibisi (%). Aktivitas
antioksidasi dinyatakan dengan Inhibition Concentration 50% (IC50) yaitu konsentrasi
sampel yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari
nilai x setelah mengganti y = 50.
37
3.3.6 Penentuan Kandungan Total Fenolik (Socha et al., 2009)
A. Pembuatan Larutan Standar Asam Galat 250 ppm
Asam galat ditimbang sebanyak 6.25 mg kemudian dimasukkan ke dalam labu
ukur 25 mL dan dilarutkan dengan akuades hingga tanda batas. Selanjutnya dibuat
serangkaian larutan standar dengan konsentrasi 0, 10, 20, 40, 60, 80 dan 100ppm.
B. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
Larutan asam galat konsentrasi 100 ppm diukur serapannya menggunakan
Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 kisaran panjang gelombang 600-
800 nm. Hasil yang diperoleh dibuat dalam bentuk kurva, sumbu y sebagai absorbansi
sedangkan sumbu x sebagai panjang gelombang. Blanko yang digunakan adalah
standar 0 ppm.
C. Pembuatan Kurva Standar Asam Galat
Larutan asam galat dengan variasi konsentrasi (0, 10, 20, 40, 60, 80 dan
100ppm) diambil masing-masing sebanyak 0.5 mL dan ditambahkan dengan 0.3 mL
Folin Ciocalteu, 2 mL Na2CO3 15%, dan 2.2 mL akuades. Campuran kemudian
diinkubasi selama 120 menit diruangan yang gelap. Setelah itu, campuran diukur
serapannya menggunakan Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 pada
panjang gelombang maksimum.
D. Penentuan Total Senyawa Fenolik
Ekstrak etanol dan n-heksana hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi masing-
masing sebanyak 10 g dilarutkan dalam 10 mL akuades. Selanjutnya masing-masing
sampel diambil sebanyak 0.5 mL dan ditambahkan dengan 0.3 mL Folin Ciocalteu,
2mL Na2CO3 15% dan 2.2 mL akuades. Larutan dikocok menggunakan vortex dan
38
diinkubasi selama 120 menit di dalam ruangan gelap. Setelah itu, sampel diukur
serapannya menggunakan Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 pada
panjang gelombang maksimum. Pengukuran dilakukan sebanyak 2 kali. Kandungan
total fenolik dinyatakan sebagai jumlah ekuivalen mg asam galat (GAE) per 1 g sampel.
3.3.7 Penentuan Kandungan Total Flavonoid (Meda et al., 2005)
A. Pembuatan Larutan Standar Kuersetin 100 ppm
Kuersetin ditimbang sebanyak 10 mg kemudian dimasukkan ke dalam labu
ukur 100 mL dan dilarutkan dengan metanol hingga tanda batas. Selanjutnya dibuat
serangkaian larutan standar dengan konsentrasi 0, 10, 20, 40, 60, 80 dan 100 ppm.
B. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin
Larutan standar kuersetin konsentrasi 40 ppm diukur serapannya menggunakan
Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 kisaran panjang gelombang 400-
700 nm dengan interval tertentu. Hasil yang diperoleh dibuat dalam bentuk kurva,
sumbu y sebagai absorbansi dan sumbu x sebagai panjang gelombang cahaya.
Kemudian ditentukan panjang gelombang yang memberikan serapan maksimum.
C. Pembuatan Kurva Standar Kuersetin
Larutan stok kuersetin dibuat dengan variasi konsentrasi (0, 10, 20, 40, 60, 80
dan 100 ppm) dalam labu ukur 20 mL. Masing-masing konsentrasi diambil sebanyak
5mL dan ditambahkan dengan 5 mL AlCl3 2% dalam metanol. Campuran kemudian
diinkubasi selama 10 menit. Setelah itu, campuran diukur serapannya menggunakan
Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer Lambda 25 pada panjang gelombang
maksimum. Blanko yang digunakan adalah larutan standar 0 ppm.
39
D. Penentuan Total Senyawa Flavonoid
Ekstrak etanol dan n-heksana hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi masing-
masing sebanyak 20 g dilarutkan dalam 20 mL metanol. Selanjutnya masing-masing
sampel diambil sebanyak 5 mL dan ditambahkan dengan 5 mL pereaksi AlCl3 2% (b/v).
Larutan dikocok menggunakan vortex dan diinkubasi selama 10 menit. Setelah itu,
sampel diukur serapannya menggunakan Spektrofotometer UV-VIS Perkin Elmer
Lambda 25 pada panjang gelombang maksimum. Pengukuran dilakukan sebanyak 2
kali. Kandungan total flavonoid dinyatakan sebagai jumlah ekuivalen mg quersetin
(QE) per 1 g sampel.
3.3.8 Analisis menggunakan GC-MS
Analisis yang dilakukan untuk mengetahui komponen ekstrak sampel dalam
penelitian ini adalah analisis GCMS. Kandungan masing-masing senyawa dalam
sampel mempunyai retention time dan luas peak area yang berbeda-beda pada
kromatogram sesuai dengan jenis senyawa. GCMS yang digunakan adalah Agilent
Technologies 7890A GC system dan Agilent Technologies 5975C MS system .
Sebanyak ±0.1 µl sampel dimasukkan dalam kolom tipe HP –5MS (60 m * 0.25 mm
* 0.25 mm) menggunakan helium sebagai gas pembawa dan split rasio 1 : 100 dan
sampel diinjeksi pada temperatur 100 °C.
40
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Preparasi Sampel
Pembuatan serbuk simplisia mula-mula diawali dengan mengeringkan biji
kurma yang telah bersih, hal ini bertujuan untuk menurunkan kandungan air agar
mencegah tumbuhnya bakteri dan jamur pada tahap penyimpanan (Katno, 2008).
41
Pengeringan dilakukan dengan cara simplisia dioven pada temperatur 50 oC. Hayati
(2010) melaporkan bahwa pengeringan menggunakan oven pada temperatur 60 oC
menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata dengan pengeringan menggunakan
temperatur 40 dan 50 oC dalam menurunkan kadar air pada biji kakao. Sirait (1985)
menyatakan bahwa temperatur pengeringan bergantung pada simplisia dan cara
pengeringannya. Bahan simplisia dapat dikeringkan pada temperatur 30-90 oC, tetapi
suhu yang terbaik adalah tidak melebihi 60 oC. Temperatur yang terlalu tinggi dapat
menyebabkan rusaknya senyawa aktif yang tidak tahan panas serta Face hardening
yaitu bagian luar bahan sudah kering sedangkan bagian dalamnya masih basah yang
dapat mengakibatkan kerusakan atau kebusukan di bagian dalam bahan.
Proses selanjutnya yaitu penghancuran simplisia yang membuat ukuran
partikel semakin kecil sehingga dapat memperluas kontak sampel dengan pelarutnya
dan memungkinkan semakin banyak senyawa aktif yang dapat terekstrak.
Penghancuran sampel bertujuan untuk memecah sel-sel yang terdapat dalam jaringan
sehingga senyawa aktif yang akan diekstrak mampu keluar dengan cepat. Hasil
penelitian Giao et al., (2009) menunjukkan bahwa pada ekstraksi daun Agrimonia
eupatoria daya antioksidan ekstrak meningkat dengan semakin kecilnya ukuran
partikel, hal ini disebabkan karena luas permukaan akan menyebabkan pemindahan
molekul lebih ekstensif dari padatan ke larutan.
4.2 Ekstraksi Biji Kurma
Ekstraksi bertujuan untuk mendapatkan senyawa organik atau senyawa
metabolit sekunder dari biomassa menggunakan pelarut tertentu. Kontak antara pelarut
42
dengan biomassa terjadi pada proses ekstraksi sehingga menyebabkan perpindahan
massa dari padatan ke pelarut (Utami et al., 2009). Ekstraksi dilakukan menggunakan
pelarut etanol dan n-heksana. Jenis pelarut mempengaruhi proses interaksi dengan
senyawa metabolit sekunder yang berada di dalam simplisia, hingga dapat terekstrak
atau terlarut dengan baik. Ekstraksi dilakukan menggunakan pelarut etanol karena
pelarut ini memiliki toksisitas yang rendah, tidak berbahaya dan mampu mengekstrak
senyawa antioksidan yang bersifat polar seperti senyawa fenolik. Robinson (1995)
menyatakan bahwa suatu senyawa fenol dengan gugus hidroksil yang bersifat polar
mampu untuk diekstrak dengan pelarut polar seperti pelarut etanol.
Pelarut n-heksana dipilih sebagai pengekstrak didasarkan pada polaritas,
polaritas bergantung kepada konstanta dielektrik. Konstanta dielektrik dinyatakan
sebagai gaya tolak menolak antara dua partikel yang bermuatan listrik dalam suatu
molekul. Semakin tinggi konstanta dielektriknya maka pelarut bersifat semakin polar.
Sudarmadji (1989) menyatakan bahwa konstanta dielektrik pelarut n-heksana sebesar
2.0 sehingga senyawa antioksidan yang bersifat non polar di dalam biji kurma dapat
terekstrak dalam pelarut n-heksana.
Ekstraksi dilakukan dengan teknik maserasi, sokletasi dan sonikasi. Maserasi
digunakan karena ekonomis serta dapat mengekstrak komponen yang bersifat volatil
dan tidak tahan terhadap panas (Wang and Weller, 2006). Proses maserasi terjadi ketika
pelarut menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang terdapat zat aktif,
kemudian zat aktif terlarut ke dalam pelarut. Perbedaan konsentrasi antara zat aktif di
dalam sel dengan pelarut menyebabkan lisis sel, sehingga zat aktif akan terdesak ke
43
luar sel. Peristiwa tersebut terjadi secara berulang hingga mencapai keseimbangan
konsentrasi di dalam dan di luar sel.
Prinsip ekstraksi dengan metode sokletasi terjadi sebagai siklus yang berulang
dengan penguapan pelarut sehingga pelarut yang digunakan untuk sokletasi selalu baru
dengan proses kondensasi akibat pemanasan kontinu. Pelarut tersebut berinteraksi
dengan sampel pada bagian thimble holder. Panas menyebabkan lisisnya dinding sel
dan membuat pelarut mudah berinteraksi untuk melarutkan senyawa-senyawa
metabolit pada sampel (Wang and Weller, 2006).
Sonikasi digunakan dalam proses ekstraksi karena teknik ekstraksi tersebut
dapat berlangsung dalam waktu yang lebih singkat. Teknik sonikasi mampu
mempercepat ekstraksi bahan aktif dengan cara memecah dinding sel sehingga dapat
meningkatkan perpindahan massa (Cintas and Cravotto, 2005). Teknik sonikasi
menggunakan energi akustik (energi mekanik tidak diserap oleh molekul melainkan
ditransmisikan ke medium dan pelarut) untuk mengekstrak komponen dari bahan alam
(Shirsath et al., 2012). Ultrasound ditransmisikan ke medium melalui gelombang.
Gelombang suara yang merambat ke media cair menghasilkan siklus tekanan tinggi
(compression) dan tekanan rendah (rarefraction) yang tergantung pada frekuensi
getaran gelombang suara. Siklus compression mendorong molekul, sedangkan siklus
rarefraction menarik molekul. Siklus rarefraction dalam cairan menyebabkan
renggangnya suatu molekul dengan molekul yang lain. Apabila intensitas ultrasound
cukup tinggi, siklus rarefraction akan membentuk gelembung di dalam cairan.
Gelembung akan membesar ketika tekanan rendah dan akan mengerut ketika tekanan
tinggi (Mandal et al., 2015). Fluktuasi tekanan yang dihasilkan oleh gelombang
44
ultrasound dalam medium cair menyebabkan gelembung tidak stabil dan pecah,
peristiwa ini dinamakan kavitasi (Shirsath et al., 2012). Pecahnya gelembung
menghasilkan peningkatan energi kinetik dari cairan atau pelarut hingga mencapai 280
m/s sehingga menyebabkan terganggunya dinding sel, pengurangan ukuran partikel
dan meningkatkan perpindahan massa melintasi membran sel (Mandal et al., 2015).
Berdasarkan hasil ekstraksi akan diperoleh % rendemen ekstrak (Tabel 2).
Rendemen merupakan persentase perbandingan antara berat bagian bahan yang dapat
dimanfaatkan dengan berat total bahan (Lampiran 3). Nilai rendemen digunakan untuk
mengetahui nilai ekonomis suatu produk atau bahan. Semakin tinggi nilai rendemennya
maka semakin tinggi pula nilai ekonomisnya sehingga pemanfaatannya menjadi lebih
efektif. Hernani et al., (2009) melaporkan bahwa produk ekstrak mempunyai banyak
keuntungan antara lain semua kandungan bioaktif tanaman terdapat dalam bentuk
konsentrat dan masih dalam bentuk matrik alami.
Tabel 2. Hasil rendemen ekstrak etanol dan n-heksana biji kurma
Sampel % Rendemen
Ekstrak etanol hasil maserasi 12.315
Ekstrak etanol hasil sokletasi 5.920
Ekstrak etanol hasil sonikasi 9.786
Ekstrak n-heksana hasil maserasi 5.740
Ekstrak n-heksana hasil sokletasi 6.483
Ekstrak n-heksana hasil sonikasi 4.600
Rendemen ekstrak yang diperoleh dari penelitian ini bervariasi yaitu berkisar
antara 4.6 hingga 12.315%. Hal ini dipengaruhi oleh jenis pelarut dan metode ekstraksi
yang digunakan. Persentase rendemen ekstrak etanol biji kurma tertinggi diperoleh dari
hasil maserasi, hal ini dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya lamanya waktu
45
ekstraksi dan pengadukan. Budhikarjono (1996) menyatakan bahwa waktu ekstraksi
dan pengadukan dapat mempengaruhi proses ekstraksi. Pengadukan berperan dalam
mempercepat perpindahan massa dari permukaan partikel ke dalam larutan dan
mencegah terjadinya pengendapan. Harlina et al., (2010) menyatakan bahwa
pengadukan bertujuan untuk memperbanyak kontak antara bahan dengan pelarut dan
mendapatkan derajat homogenitas yang tinggi. Semakin cepat putaran pengaduk maka
semakin besar perpindahan panas yang terjadi pada waktu tertentu dan semakin besar
kontak bahan dengan pelarut sehingga rendemen yang diperoleh akan semakin
meningkat. Waktu mempengaruhi proses ekstraksi karena semakin lama waktu
ekstraksi maka semakin banyak pula ekstrak yang dihasilkan, Namun jumlah ekstrak
akan menjadi konstan apabila tercapai kondisi seimbang atau ketika semua ekstrak biji
kurma telah terekstrak.
Persentase rendemen ekstrak n-heksana biji kurma tertinggi diperoleh dari hasil
sokletasi, hal ini dipengaruhi oleh faktor temperatur. Temperatur yang tinggi selama
ekstraksi dapat meningkatkan persentase rendemen karena dapat mempercepat difusi
pelarut kedalam jaringan tumbuhan. Panas menyebabkan viskositas minyak dalam biji
kurma menjadi lebih rendah sehingga menyebabkan minyak lebih banyak yang
terekstrak. Metode sonikasi dan maserasi menggunakan temperatur ekstraksi yang
lebih rendah dibandingkan dengan sokletasi, hal ini diduga masih terdapat banyak
minyak yang terperangkap dalam jaringan sel sehingga minyak yang terekstrak lebih
sedikit.
4.3 Hasil Uji Fitokimia
46
Skrining fitokimia dilakukan untuk memberikan gambaran mengenai golongan
senyawa aktif di dalam ekstrak biji kurma secara kualitatif dalam bentuk metabolit
sekunder seperti alkaloid, flavonoid, terpenoid, steroid, saponin, tanin, kuinon dan lain-
lain (Kristianti et al., 2008). Hasil uji skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak
biji kurma positif mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, terpenoid, kuinon, tanin
dan saponin (Tabel 3).
Tabel 3. Hasil uji fitokimia ekstrak biji kurma
No Golongan
Senyawa
Ekstrak Etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1 Alkaloid + + + - -
2 Flavonoid + + + - - -
3 Terpenoid + + + - - -
4 Kuinon + + + - - -
5 Tanin/Fenolik + + + - - -
6 Saponin - - - + + +
7 Steroid - - - - - -
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
Hasil ini sesuai dengan penelitian Delphin et al., (2014), skrining fitokimia pada
ekstrak etanol biji kurma (Phoenix dactylifera) menunjukkan adanya senyawa fenolik,
saponin dan terpenoid. Hal ini menjadi acuan untuk diidentifikasi lebih lanjut terutama
untuk aktivitas antioksidasi, karena seperti diungkapkan oleh Gordon (1990)
antioksidan primer adalah suatu zat atau senyawa yang menghentikan reaksi berantai
pembentukan radikal bebas melalui proses reaksi pemutusan rantai radikal bebas yang
sangat reaktif dan diubah menjadi senyawa yang stabil atau tidak reaktif seperti
senyawa Butylated Hidroxy Toluene (BHT), flavonoid, tokoferol dan senyawa-
senyawa thiol.
Hasil uji fitokimia terhadap ekstrak etanol positif mengandung alkaloid,
flavonoid, terpenoid, kuinon dan tanin/fenolik sedangkan hasil uji fitokimia terhadap
47
ekstrak n-heksana positif mengandung saponin. Pemilihan pelarut dalam ekstraksi
dapat mempengaruhi hasil kandungan senyawa metabolit sekunder yang dapat
terekstraksi. Pemilihan pelarut ekstraksi umumnya mengunakan prinsip like dissolves
like yaitu senyawa yang non polar akan larut dalam pelarut non polar sedangkan
senyawa yang polar akan larut dalam pelarut polar (Seidel, 2008).
Alkaloid mengandung gugus nitrogen sebagai bagian dari sistem sikliknya serta
mengandung substituen yang bervariasi seperti gugus amina, amida, fenol dan metoksi
sehingga alkaloid bersifat semipolar (Purba, 2001). Senyawa flavonoid dan tanin
memilliki gugus hidroksi (-OH) sehingga menyebabkan senyawa tersebut cenderung
bersifat polar (Harborne, 1996). Senyawa terpenoid tersusun dari rantai panjang
hidrokarbon C30 yang menyebabkan sifatnya nonpolar sehingga mudah terekstrak
dalam pelarut yang bersifat non polar, namun terdapat beberapa senyawa terpenoid
berstruktur siklik berupa alkohol, aldehid atau asam karboksilat (Harborne, 1996).
Senyawa berstruktur alkohol yang memiliki gugus -OH menyebabkan sifatnya
menjadi semipolar. Seluruh golongan senyawa ini terdapat dalam ekstrak etanol biji
kurma (Phoenix dactylifera) dikarenakan pelarut etanol memiliki indeks polaritas
sebesar 5.2 dan pelarut etanol dalam ekstraksi mampu meningkatkan permeabilitas
dinding sel simplisia sehingga proses ekstraksi menjadi lebih efisien dalam komponen
polar hingga semipolar (Seidel, 2008).
Hasil positif alkaloid pada uji Wagner ditandai dengan terbentuknya endapan
coklat seperti terlihat pada Gambar 38 (Lampiran 4). Endapan tersebut diperkirakan
adalah kalium-alkaloid. Pembuatan pereaksi Wagner, iodin bereaksi dengan ion I- dari
kalium iodida sehingga menghasilkan ion I3- yang berwarna coklat sedangkan dalam
48
uji Wagner, ion logam K+ akan membentuk ikatan kovalen koordinat dengan nitrogen
pada alkaloid sehingga membentuk kalium-alkaloid yang mengendap (Svehla,1990).
Reaksi yang terjadi pada uji Wagner ditunjukkan pada Gambar 16.
Gambar 16. Reaksi uji alkaloid pereaksi Wagner (Svehla, 1990)
Hasil positif alkaloid pada uji Dragendorf ditandai dengan terbentuknya
endapan jingga kemerahan seperti terlihat pada Gambar 39 (Lampiran 4). Endapan
tersebut adalah kalium-alkaloid. Pembuatan pereaksi Dragendorf, bismuth nitrat
dilarutkan dalam HNO3 agar tidak terjadi reaksi hidrolisis karena garam-garam
bismuth mudah terhidrolisis membentuk ion bismutil (BiO+), yang reaksinya sebagai
berikut :
Bi3+ + H2O BiO+ + 2H+
Larutan diberi penambahan asam agar ion Bi3+ tetap berada dalam larutan,
sehingga kesetimbangan akan bergeser ke arah kiri. Ion Bi3+ dari bismut nitrat bereaksi
dengan kalium iodida membentuk endapan hitam Bismut (III) iodida yang kemudian
melarut dalam kalium iodida berlebih membentuk kalium tetraiodobismutat (Svehla,
1990). Uji alkaloid dengan pereaksi Dragendorf, nitrogen digunakan untuk membentuk
ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang merupakan ion logam. Reaksi pada uji
Dragendorf ditunjukkan pada Gambar 17.
49
Gambar 17. Reaksi uji alkaloid pereaksi Dragendorf (Svehla, 1990)
Hasil skrining fitokimia menunjukkan ekstrak etanol biji kurma berwarna
jingga dan positif mengandung flavonoid seperti terlihat pada Gambar 40 (Lampiran4).
Penambahan asam klorida pekat menyebabkan terjadinya protonasi flavonoid (Gambar
18), namun asam klorida kurang reaktif jika dibandingkan dengan asam bromida bila
direaksikan dengan alkohol primer pada flavonoid. Oleh sebab itu, diperlukan katalis
berupa serbuk Mg untuk mempercepat reaksi dengan cara menurunkan energi aktivasi
sehingga terbentuknya garam flavilium hasil reduksi yang berwarna merah, kuning
atau jingga (Robinson, 1995).
Gambar 18. Reaksi uji flavonoid (Robinson,1995).
Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji kurma
membentuk endapan berwarna merah tua dan positif mengandung terpenoid seperti
terlihat pada Gambar 41 (Lampiran 4). Siadi (2012) menyatakan bahwa mekanisme
50
reaksi yang terjadi pada uji steroid atau terpenoid adalah kondensasi atau pelepasan
H2O dan penggabungan dengan karbokation. Penambahan asam sulfat pekat berfungsi
untuk mendestruksi kompleks asetil terpenoid. Reaksi ini diawali dengan proses
asetilasi gugus hidroksil menggunakan asam asetat anhidrat. Gugus asetil akan terlepas
sehingga terbentuk ikatan rangkap. Pelepasan gugus hidrogen beserta elektronnya yang
mengakibatkan ikatan rangkap berpindah. Senyawa ini mengalami resonansi yang
bertindak sebagai elektrofil atau karbokation. Serangan karbokation menyebabkan
adisi elektrofilik dan diikuti dengan pelepasan hidrogen. Gugus hidrogen beserta
elektronnya dilepas dan senyawa mengalami perpanjangan konjugasi yang
memperlihatkan munculnya warna hijau atau biru untuk steroid dan warna merah atau
ungu untuk terpenoid (Gambar 19).
Gambar 19. Reaksi uji terpenoid/steroid (Siadi, 2012)
Hasil skrining fitokimia menunjukkan ekstrak etanol biji kurma berwarna hijau
kehitaman yang menandakan positif mengandung tanin terkondensasi seperti terlihat
pada Gambar 41 (Lampiran 4). Sangi et al., (2008) menyatakan bahwa FeCl3 akan
51
bereaksi dengan satu diantara gugus hidroksil yang terdapat pada senyawa fenol dan
menghasilkan fenol terhidrolisis yang ditunjukkan dengan terbentuk larutan berwarna
biru kehitaman sedangkan fenol terkondensasi membentuk larutan berwarna hijau
kehitaman (Gambar 20).
Gambar 20. Reaksi uji tanin/fenolik (Sangi et al., 2008)
Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji kurma
berwarna coklat kemerahan dan positif mengandung kuinon seperti terlihat pada
Gambar 43 (Lampiran 4). Winarno (2008) menyatakan bahwa perubahan warna yang
terjadi disebabkan oleh perubahan senyawa yang semula berbentuk kuinol menjadi
kuinon melalui proses oksidasi (Gambar 21).
Gambar 21. Reaksi uji kuinon (Winarno, 2008).
Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana biji kurma
membentuk buih dan positif mengandung saponin seperti terlihat pada Gambar 44
(Lampiran 4). Rusdi (1990) menyatakan bahwa timbulnya busa pada uji Forth
menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam
air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan aglikon (Gambar 22). Saponin mempunyai
kombinasi struktur senyawa penyusunnya yaitu senyawa aglikon yang bersifat
nonpolar dan rantai glikon yang bersifat polar . Widyasari (2008) menyatakan bahwa
52
busa yang timbul disebabkan saponin mengandung senyawa yang sebagian larut dalam
air (hidrofilik) dan senyawa yang larut dalam pelarut nonpolar (hidrofobik) sebagai
surfaktan yang dapat menurunkan tegangan permukaan.
Gambar 22. Reaksi uji saponin (Rusdi, 1990)
4.4 Hasil Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak n-Heksana
Aktivitas antioksidasi ekstrak n-heksana biji kurma diukur menggunakan
metode Thio Barbituric Acid (TBA). Sebelum dilakukan analisis potensi aktivitas
antioksidasi ekstrak n-heksana biji kurma mula-mula dilakukan penentuan waktu
inkubasi asam linoleat menggunakan metode diena terkonjugasi berdasarkan
pengukuran serapan diena terkonjugasi yang terbentuk. Penentuan waktu inkubasi
asam linoleat ini bertujuan untuk menentukan waktu inkubasi asam linoleat pada uji
analisis aktivitas antioksidasi sampel. Asam linoleat yang digunakan berasal dari virgin
coconut oil (VCO) komersil. Wardani (2007) menyatakan bahwa vco tersusun dari
sekitar 90% asam lemak jenuh dan sekitar 10% asam lemak tidak jenuh. Berdasarkan
data Standar Nasional Indonesia (2008) bahwa syarat mutu VCO harus mengandung
asam linoleat berkisar 1.0% hingga 2.5%.
53
Selama masa inkubasi, asam linoleat akan dioksidasi oleh oksigen. Murray
(2003) menyatakan bahwa sebelum membentuk produk akhir peroksida lipid, mula-
mula asam linoleat akan kehilangan pasangan elektron pada ikatan rangkap. Reaksi ini
terjadi secara bertahap sehingga asam linoleat berubah menjadi radikal bebas dan akan
menstabilkan diri dengan cara menata ulang ikatan rangkapnya sehingga terbentuk
diena terkonjugasi, selanjutnya asam linoleat terdekomposisi menjadi senyawa yang
lebih sederhana dan relatif stabil yaitu malondialdehida (MDA) (Gambar 23). Tensiska
(2001) menyatakan bahwa ikatan diena terkonjugasi akan memberikan serapan spesifik
pada panjang gelombang 234 nm. Semakin banyak ikatan diena terkonjugasi yang
terbentuk, maka semakin besar pula nilai serapan yang dihasilkan.
Gambar 23. Peroksidasi lipid (Murray, 2003)
Analisis diena terkonjugasi memberikan hasil pengukuran yang meningkat dari
hari ke -1 dan menghasilkan absorbansi maksimum pada hari ke-2 (Gambar 24).
Pembentukan diena terkonjugasi pada hari ke-2 telah mencapai hasil yang maksimum
dan selanjutnya akan menurun pada hari berikutnya.
54
Gambar 24. Nilai serapan ikatan diena terkonjugasi asam linoleat.
Penurunan diena terkonjugasi terjadi karena mengalami dekomposisi secara
bertahap membentuk hidroperoksida dan berlanjut membentuk hasil akhir dari oksidasi
lipid berupa MDA. Proses penataan ulang pada asam linoleat yang terkena radikal
bebas dipengaruhi oleh temperatur inkubasi yang tidak stabil dan adanya oksigen
dalam campuran asam linoleat. Tensiska (2001) menyatakan bahwa pembentukan
diena terkonjugasi proporsional dengan konsumsi oksigen dan pembentukan peroksida
lipid selama tahap awal oksidasi.
Hasil penentuan waktu inkubasi asam linoleat dengan metode diena
terkonjugasi dipengaruhi oleh beberapa faktor yang dapat memberikan nilai absorbansi
maksimum pada hari yang berbeda-beda. Adikusuma (2007) menyatakan bahwa hasil
absorbansi maksimum pada asam linoleat diperoleh pada hari ke-6. Hasil yang berbeda
ditunjukkan Martolisch and Ekawati (2007) yang menyatakan bahwa absorbansi
maksimum dicapai pada hari ke-3. Syahrul (2008) menyatakan bahwa absorbansi
maksimum asam linoleat didapatkan pada hari ke-8. Faktor-faktor yang mempengaruhi
proses oksidasi asam linoleat adalah temperatur, cahaya, kualitas sumber asam linoleat,
oksigen dan ion logam (Schultz, 1963). Penelitian ini mengondisikan campuran asam
linoleat, larutan buffer fosfat dan akuades diinkubasi pada temperatur 40 oC, oleh sebab
itu faktor yang menyebabkan perbedaan hasil tersebut adalah kualitas sumber asam
0
0.005
0.01
0 2 4
Ab
sorb
ansi
Hari ke -
55
linoleat, temperatur inkubasi yang tidak konstan serta keberadaan oksigen. Jumlah hari
yang diperlukan pada inkubasi asam linoleat agar mencapai absorbansi maksimum
akan menentukan lamanya waktu inkubasi pada penentuan aktivitas antioksidasi
ekstrak n-heksana biji kurma.
Kikuzaki and Nakatani (1993) menyatakan bahwa untuk uji TBA yang
menggambarkan pengukuran malondialdehid dilakukan setelah satu atau beberapa hari
dari puncak absorbansi maksimum asam linoleat, oleh sebab itu pengukuran MDA
dilakukan setelah 2 hari dari waktu inkubasi maksimum yaitu pada hari ke-4. Hal ini
dilakukan dengan harapan asam linoleat yang diinkubasi telah mengalami dekomposisi
sempurna membentuk MDA sebagai produk akhir dari peroksidasi lipid.
Kurva standar yang digunakan adalah larutan 1,1,3,3-tetraetoksipropana (TEP)
dengan berbagai konsentrasi. TEP digunakan sebagai standar karena memiliki struktur
yang mirip dan lebih stabil dibandingkan MDA murni sebagai hasil akhir dari
peroksidasi lipid. Kurva standar TEP menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi
kompleks TEP-(TBA)2 maka semakin tinggi jumlah lipid yang teroksidasi yaitu
senyawa TEP seperti terlihat pada Gambar 47 (Lampiran 5). Persamaan garis linier
yang didapat adalah y = 0.041x – 0.0069 dengan nilai R2 = 0.9986. Persamaan regresi
linier yang diperoleh digunakan untuk menentukan konsentrasi MDA dalam ekstrak n-
heksana biji kurma.
Hasil uji TBA pada campuran asam linoleat dan buffer fosfat terlihat bahwa
secara keseluruhan ekstrak n-heksana biji kurma yang diekstrak melalui proses
maserasi, sokletasi dan sonikasi mampu menghambat terjadinya proses oksidasi asam
linoleat yang ditandai dengan semakin kecilnya konsentrasi MDA yang terukur
56
dibandingkan dengan kontrol negatif (akuades). Konsentrasi MDA dari setiap
perlakuan dapat dilihat pada Tabel 18 (Lampiran 5). Kontrol negatif menghasilkan
konsentrasi MDA yang tinggi dibandingkan dengan perlakuan lain yaitu 4.3755 µM.
Tidak adanya senyawa yang berperan sebagai antioksidan mengakibatkan asam
linoleat akan terus mengalami oksidasi membentuk MDA dalam jumlah yang cukup
banyak. Kontrol positif (beta karoten 100 ppm) memiliki konsentrasi MDA sebesar
3.6075 µM. Hal ini menunjukkan beta karoten sebagai antioksidan mampu
menghambat pembentukan MDA. Beta karoten bertindak sebagai donor ion hidrogen
dan dapat mengubah radikal peroksil (hasil peroksidasi lipid) menjadi radikal karoten
yang kurang reaktif sehingga tidak mampu merusak rantai asam linoleat. Pemilihan
beta karoten sebagai kontrol positif atau pembanding disebabkan karena beta karoten
merupakan senyawa yang besifat non polar sehingga dapat larut dalam pelarut non
polar seperti n-heksana. Chen et al., 1994 menyatakan bahwa beta karoten
mengandung banyak karbon yang berikatan rangkap sehingga memungkinkan
mempunyai banyak isomer geometris, isomerisasi beta karoten ditemukan lebih besar
pada pelarut non polar dibandingkan dengan pelarut polar. Selain itu senyawa
karotenoid dapat berfungsi sebagai pemadam oksigen singlet dan pendeaktifasi radikal
bebas (Krinsky, 1992). Fungsi karotenoid sebagai pendeaktivasi radikal bebas terjadi
melalui proses transfer elektron (Dutta et al., 2004).
Berdasarkan hasil penelitian didapatkan bahwa secara keseluruhan perlakuan
penambahan ekstrak n-heksana biji kurma yang melalui proses ekstraksi maserasi,
sokletasi dan sonikasi menunjukkan konsentrasi MDA lebih rendah dibandingkan
dengan kontrol positif (Gambar 25).
57
Gambar 25. Pembentukan MDA ekstrak n-heksana biji kurma
Konsentrasi MDA yang lebih rendah mengindikasikan bahwa ekstrak n-
heksana biji kurma memiliki kemampuan antioksidasi yang lebih baik dibandingkan
beta karoten. Hasil konsentrasi MDA pada ekstrak maserasi n-heksana biji kurma
konsentrasi 50, 100, 200, 500 dan 1000 ppm berturut-turut sebesar 0.77, 1.30, 1.47,
0.99 dan 1.81 µM. Hasil konsentrasi MDA pada ekstrak sokletasi n-heksana biji kurma
konsentrasi 50, 100, 200, 500 dan 1000 ppm berturut-turut sebesar 2.22, 2.34, 1.93,
2.12 dan 2.5 µM. Hasil konsentrasi MDA pada ekstrak sonikasi n-heksana biji kurma
konsentrasi 50, 100, 200, 500 dan 1000 ppm berturut-turut sebesar 1.51, 1.61, 1.83,
1.54 dan 2.22 µM.
Gambar 26. Persentase daya hambat ekstrak n-heksana biji kurma
0
1
2
3
4
5
K + K - 50 100 200 500 1000
Ko
nse
ntr
asi M
DA
(µ
M)
Perlakuan (ppm)
Maserasi
Sokletasi
Sonikasi
0
20
40
60
80
100
K + K - 50 100 200 500 1000
% d
aya
ham
bat
Perlakuan (ppm)
Maserasi
Sokletasi
Sonikasi
58
Aktivitas penghambatan (% daya hambat) terhadap pembentukan MDA dari
tiap perlakuan dapat dihitung berdasarkan kadar MDA yang diperoleh (Gambar 26).
Persentase daya hambat menggambarkan besarnya potensi dari masing-masing ekstrak
dengan berbagai konsentrasi dalam berperan sebagai antioksidan. Kontrol negatif
digunakan sebagai acuan untuk menentukan persentase daya hambat karena dalam
proses inkubasinya tidak diberikan perlakuan sehingga proses oksidasi berjalan normal
tanpa adanya hambatan dari ekstrak yang ditambahkan.
Kontrol positif beta karoten 100 ppm memiliki aktivitas penghambatan sebesar
17.552%. Aktivitas penghambatan ekstrak maserasi n-heksana biji kurma pada
konsentrasi 50, 100, 200, 500 dan 1000 ppm masing-masing sebesar 82.27%, 70.23%,
66.34%, 77.19% dan 58.53%. Aktivitas penghambatan ekstrak sokletasi n-heksana biji
kurma pada konsentrasi 50, 100, 200, 500 dan 1000 ppm masing-masing sebesar
49.33%, 46.54%, 55.74%, 51.56% dan 42.64%. Aktivitas penghambatan ekstrak
sonikasi n-heksana biji kurma pada konsentrasi 50, 100, 200, 500 dan 1000 ppm
masing-masing sebesar 65.49%, 63.27%, 58.26%, 64.94% dan 49.32%.
Berdasarkan hasil yang diperoleh secara umum ekstrak maserasi, sokletasi
maupun sonikasi biji kurma memiliki aktivitas penghambatan yang lebih baik
dibandingkan dengan beta karoten karena memiliki % daya hambat yang lebih tinggi.
Ekstrak n-heksana biji kurma hasil maserasi pada konsentrasi 50 ppm menunjukkan %
daya hambat tertinggi. Hal ini dipengaruhi oleh temperatur pada saat ekstraksi. Vatai
et al., (2009) menyatakan bahwa terdapat beberapa senyawa kimia yang sangat sensitif,
tidak stabil dan sangat rentan terhadap degradasi. Degradator paling utama adalah
temperatur, kandungan oksigen dan cahaya. Meningkatnya temperatur pada saat
59
ekstraksi akan menyebabkan kerusakan sebagian besar senyawa kimia satu diantaranya
senyawa fenolik.
Coopen (1983) menyatakan bahwa antioksidan yang ideal memiliki aktivitas
yang baik pada konsentrasi yang rendah. Berdasarkan data yang didapatkan dapat
dinyatakan bahwa ekstrak n-heksana biji kurma baik diekstrak melalui proses maserasi,
sokletasi maupun sonikasi mampu menjadi sumber antioksidan alternatif karena
memiliki keuntungan diantaranya hanya dibutuhkan sedikit ekstrak dengan konsentrasi
berkisar 50 ppm namun mampu menghambat pembentukan MDA dengan persen daya
hambat yang lebih tinggi dibandingkan dengan beta karoten.
4.5 Hasil Uji Aktivitas Antioksidasi Ekstrak Etanol
Aktivitas aktioksidasi ekstrak etanol biji kurma hasil maserasi, sokletasi dan
sonikasi dievaluasi menggunakan metode DPPH, metode ini dipilih berdasarkan
kemampuan ekstrak etanol biji kurma dalam mereduksi atau menangkap radikal DPPH.
Metode DPPH sangat tepat digunakan untuk menentukan aktivitas antioksidasi dari
komponen yang larut dalam pelarut organik terutama alkohol (Patil,2011). Berdasarkan
pada penelitian terdahulu metode ini paling umum digunakan untuk menguji aktivitas
antioksidasi sampel secara in vitro dan juga merupakan metode yang sederhana, mudah
dan cepat serta hanya memerlukan sedikit sampel untuk evaluasi aktivitas antioksidasi
dari senyawa bahan alam sehingga digunakan secara luas untuk menguji kemampuan
senyawa yang berperan sebagai pendonor elektron. Aktivitas antioksidasi dari ekstrak
60
ditandai dengan terjadinya perubahan warna ungu larutan DPPH menjadi warna kuning
setelah dilakukan inkubasi selama 30 menit disertai dengan penurunan nilai absorbansi
pada panjang gelombang maksimum (Kaisoon et al., 2011). Perubahan warna ini
terjadi akibat DPPH tereduksi menjadi DPPH-H karena adanya donor atom hidrogen
(hydrogen atom transfer) dari senyawa hidroksil (Marxen et al., 2007) yang diduga
terdapat dalam ekstrak etanol biji kurma kepada DPPH. Mekanisme reaksi antara
senyawa antioksidan dan DPPH dapat dilihat pada Gambar 27. Tujuan dilakukannya
inkubasi adalah mempercepat reaksi antara radikal DPPH dengan sampel yang
bertindak sebagai antioksidan.
Gambar 27. Mekanisme reaksi penangkapan radikal bebas DPPH
Sebelum dilakukan analisis potensi aktivitas antioksidasi ekstrak etanol biji
kurma, mula-mula dilakukan pengukuran absorbansi dan panjang gelombang
maksimum (λmaks) larutan DPPH 0.002% menggunakan spektrofotometer UV VIS
Perkin Elmer Lambda 25. Penentuan panjang gelombang maksimum larutan DPPH ini
merupakan acuan dalam menentukan panjang gelombang untuk analisis kuantitatif
larutan sampel dan kontrol positif (asam askorbat) agar mendapatkan nilai serapan
maksimal. Nilai absorbansi dan λmaks yang diperoleh pada penelitian ini adalah 0.24 A
dan 515.33 nm. Marxen et al., (2007) menyatakan bahwa DPPH dapat memberikan
serapan maksimum pada kisaran panjang gelombang 515-520 nm.
61
Semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin rendah absorbansi yang
dihasilkan seperti terlihat pada Tabel 19 (Lampiran 6). Absorbansi yang diukur adalah
absorbansi larutan DPPH sisa yang tidak bereaksi dengan senyawa antioksidan
(Josephy, 1997). Amrun and Umiyah, (2007) menyatakan bahwa adanya penurunan
absorbansi menunjukkan peningkatan kemampuan peredaman radikal bebas DPPH
yang artinya bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin besar aktivitas
antioksidasinya. Berdasarkan data kandungan antioksidan sampel (Lampiran 6) bahwa
konsentrasi ekstrak mempengaruhi % inhibisi radikal bebas DPPH, semakin tinggi
konsentrasi ekstrak maka semakin besar pula % inhibisi radikal bebas bebas DPPH
yang dihasilkan. Hanani (2005) menyatakan bahwa aktivitas antioksidasi dari suatu
ekstrak dinyatakan dalam persentase inhibisi terhadap radikal bebas DPPH. Hal ini
menunjukkan bahwa semakin besar aktivitas antioksidasi maka semakin besar pula %
inhibisi.
Tabel 4. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol
Penentuan nilai IC50 bertujuan untuk mengetahui berapa besar konsentrasi
ekstrak yang dapat memberikan peredaman DPPH sebesar 50%. Nilai IC50 dihitung
berdasarkan persamaan regresi linear yang didapatkan dengan cara memplotkan
konsentrasi larutan uji dengan % inhibisi (Lampiran 6). Hasil analisis diperlihatkan
pada Tabel 4, Aktivitas antioksidasi tertinggi terdapat pada ekstrak etanol biji kurma
hasil sokletasi dengan nilai IC50 sebesar 4.7307 ppm. Ekstrak etanol biji kurma hasil
Sampel IC50 (ppm)
Standar Vitamin C 2.072 ± 0.092
Ekstrak Etanol Hasil Maserasi 6.119 ± 0.597
Ekstrak Etanol Hasil Sokletasi 4.731 ± 0.368
Ekstrak Etanol Hasil Sonikasi 10.557 ± 0.36
62
sokletasi mempunyai aktivitas antioksidasi yang lebih kuat dibandingkan dengan hasil
maserasi dan sonikasi, hasil ini sesuai dengan penelitian Kadji et al., (2013) yang
menunjukkan bahwa % inhibisi daun soyogik dari ekstrak hasil sokletasi mengalami
peningkatan aktivitas antioksidasi dibandingkan dengan ekstrak hasil maserasi.
Widiastuti and Dhika (2012) menyatakan bahwa ekstrak hasil sokletasi mempunyai
aktivitas antioksidasi yang lebih kuat dibandingkan ekstrak hasil maserasi, hal ini
terjadi karena adanya pengaruh suhu ekstraksi. Suhu ekstraksi pada metode sokletasi
dapat diatur agar tidak merusak komponen antioksidan yang dibutuhkan. Penambahan
suhu ekstraksi menyebabkan komponen antioksidan yang dibutuhkan dapat terekstrak
sempurna sehingga semakin banyak komponen yang terlarut maka semakin besar
aktivitas antioksidannya. Murugan (2013) menyatakan bahwa komponen senyawa
termolabil yang diekstrak menggunakan metode sokletasi menunjukkan aktivitas
antioksidasi yang lebih baik dibandingkan dengan metode lain seperti maserasi dan
fraksinasi.
Penggunaan kontrol positif pada pengujian aktivitas antioksidasi adalah untuk
mengetahui seberapa kuat potensi antioksidan yang terdapat pada ekstrak etanol biji
kurma jika dibandingkan dengan vitamin C. Kontrol positif yang digunakan dalam
penelitian adalah vitamin C (asam askorbat). Hal ini disebabkan karena asam askorbat
mempunyai aktivitas antioksidasi yang tinggi (Prakash, 2001). Yanishlieva (2001)
menyatakan bahwa vitamin C termasuk golongan antioksidan sekunder yang mampu
menangkal berbagai radikal bebas ekstraselular dan mencegah terjadinya reaksi
berantai. Hal ini dikarenakan vitamin C mempunyai gugus hidroksi bebas yang
bertindak sebagai penangkap radikal bebas dan jika mempunyai gugus polihidroksi
63
akan meningkatkan aktivitas antioksidasinya (Isnindar et al., 2011). Hasil analisis
memperlihatkan bahwa nilai IC50 asam askorbat sebesar 2.0716 ppm. Nilai IC50 asam
askorbat dipengaruhi oleh beberapa faktor yang dapat memberikan nilai IC50 yang
berbeda-beda. Purwaningsih (2012) menyatakan bahwa nilai IC50 asam askorbat
sebesar 3.55 ppm. Selain itu menurut Ridho (2013), nilai IC50 asam askorbat
didapatkan sebesar 2.97125 ppm.
Faktor-faktor yang menyebabkan perbedaan hasil tersebut diantaranya kualitas
asam askorbat. Penurunan aktivitas antioksidasi asam askorbat disebabkan karena
asam askorbat mudah mengalami kerusakan akibat oksidasi, panas dan alkali (Novita,
2014). Asam askorbat sangat mudah teroksidasi menjadi asam L-dehidroaskorbat.
Asam askorbat dan asam L-dehidroaskorbat masih mempunyai keaktifan sebagai
vitamin C. Namun asam L-dehidroaskorbat bersifat sangat labil dan dapat mengalami
perubahan menjadi L-diketogulonat. L-diketogulonat yang terbentuk sudah tidak
memiliki keaktifan vitamin C kembali (George, 2009).
Berdasarkan hasil perhitungan didapatkan bahwa nilai IC50 ekstrak etanol biji
kurma hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi mendekati nilai IC50 asam askorbat maka
dapat dikatakan bahwa sampel berpotensi sebagai salah satu alternatif antioksidan yang
sangat kuat (Ridho, 2013). Aktivitas antioksidasi ekstrak etanol biji kurma hasil
maserasi, sokletasi dan sonikasi termasuk ke dalam kategori antioksidan sangat kuat
karena memiliki nilai IC50 < 50ppm. Molyneux (2004) menyatakan bahwa suatu
senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50 kurang dari 50
ppm, kuat apabila nilai IC50 berkisar antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC50
berkisar antara 100-150 ppm dan lemah apabila nilai IC50 berkisar antara 150-200 ppm.
64
4.6 Hasil Uji Total Fenolik dan Total Flavonoid
Pengujian aktivitas total fenolik merupakan uji dasar dilakukan pengujian
aktivitas antioksidasi karena diketahui bahwa senyawa fenolik berperan dalam
mencegah terjadinya peristiwa oksidasi. Analisis kandungan total fenolik pada ekstrak
etanol dan n-heksana biji kurma hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi dievaluasi
menggunakan metode spektrofotometri. Perubahan warna larutan terjadi setelah
sampel direaksikan dengan reagen Folin-Ciocalteu dan Natrium Karbonat, semakin
pekat warna yang dihasilkan maka nilai absorbansinya semakin tinggi. Hal ini
mengindikasikan bahwa kandungan total fenolik dari sampel juga semakin tinggi.
Singleton and Rossi (1965) menyatakan bahwa warna biru yang teramati berbanding
lurus dengan konsentrasi ion fenolat yang terbentuk, semakin besar konsentrasi
senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang terbentuk sehingga warna biru
yang dihasilkan semakin pekat. Ion fenolat hanya terdapat pada larutan basa, oleh sebab
itu diberi penambahan Na2CO3 yang bertujuan untuk membentuk suasana basa agar
terjadi reaksi reduksi Folin-Ciocalteu oleh gugus hidroksil dari fenolik di dalam
sampel.
Tabel 5. Hasil uji kadar total fenolik
Sampel Kadar Total Fenolik
(mg GAE/g sampel)
Ekstrak etanol hasil maserasi 933.325 ± 78.566
Ekstrak etanol hasil sokletasi 970.365 ± 26.184
Ekstrak etanol hasil sonikasi 840.735 ± 52.375
Ekstrak n-heksana hasil maserasi 12.666 ± 0.262
Ekstrak n-heksana hasil sokletasi 16.555 ± 3.143
Ekstrak n-heksana hasil sonikasi 14.333 ± 3.048
65
Standar yang digunakan dalam penelitian ini adalah asam galat. Hal ini
disebabkan asam galat merupakan senyawa polifenol yang terdapat di hampir semua
tanaman. Kandungan fenol asam organik ini bersifat murni dan stabil (Kusumaningati,
2009). Asam galat sangat efektif mendonorkan atom hidrogen kepada ion molibdat dan
membentuk kompleks yang berwarna biru. Persamaan garis lurus standar asam galat
yang diperoleh adalah y = 0.0027x – 0.0077 dengan nilai R2= 0.9977.
Kandungan total fenolik pada masing-masing ekstrak dinyatakan sebagai
ekuivalen asam galat atau Gallic Acid Equivalent (GAE). GAE merupakan acuan
umum untuk mengukur sejumlah senyawa fenolik yang terdapat dalam suatu bahan
(Mongkolsilp et al., 2004). Berdasarkan hasil penelitian, kadar total fenolik dari ekstrak
etanol dan n-heksana biji kurma hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi berkisar antara
12.6665 mg GAE/g sampel hingga 970.365 mg GAE/g sampel (Tabel5). Kadar total
fenol tertinggi terdapat pada ekstrak etanol biji kurma hasil sokletasi yaitu sebesar
970.365 mg GAE/g sampel yang artinya setiap gram ekstrak setara dengan 970.365 mg
asam galat. Tingginya kandungan fenol yang terekstraksi dikarenakan pengaruh pelarut
yang digunakan, etanol merupakan pelarut yang sangat luas digunakan dan efektif
untuk ekstraksi komponen-komponen fenolik dari bahan alam (Katja et al., 2009).
Harborne (1996) menyatakan bahwa senyawa fenol cenderung lebih larut pada pelarut
polar. Perbedaan tingkat kepolaran pelarut menentukan struktur kimia senyawa fenol
yang terekstrak. Deore (2009) menyatakan bahwa pengujian total fenol sangat
tergantung pada struktur kimianya. Senyawa fenol yang mempunyai gugus fungsi
hidroksil yang banyak atau dalam kondisi bebas (aglikon) akan menghasilkan kadar
total fenol yang tinggi, hal ini membuktikan bahwa ekstrak etanol memiliki gugus
66
fungsi hidroksil atau aglikon lebih banyak dbandingkan ekstrak n-heksana. Harborne
(1996) menyatakan bahwa etanol merupakan pelarut polar yang dapat melarutkan
senyawa polar pada dinding sel seperti flavonoid glikon. Flavonoid glikon adalah
senyawa fenolik yang cenderung lebih mudah larut dalam pelarut polar. Senyawa fenol
ini diduga berpengaruh terhadap kandungan senyawa antioksidan dalam ekstrak etanol
biji kurma.
Pengujian kandungan total flavonoid pada ekstrak dilakukan sebagai indikator
keefektifannya sebagai penangkal radikal bebas. Analisis kandungan total flavonoid
pada ekstrak etanol dan n-heksana biji kurma hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi
dievaluasi menggunakan metode kolorimetri alumunium klorida (Chang et al., 2002).
Prinsip penetapan total flavonoid adalah pembentukan kompleks AlCl3 dengan gugus
keto pada atom C4 dan dengan gugus hidroksil pada atom C3 atau C4 yang bertetangga
dari senyawa flavon dan flavonol, sehingga metode ini dapat digunakan untuk
menentukan jumlah flavonoid golongan flavon dan flavonol. Pembentukan kompleks
inilah yang menyebabkan flavonoid mempunyai serapan yang kuat pada panjang
gelombang 350-450 nm.
Penentuan kurva baku kuersetin digunakan sebagai standar pada penentuan
total flavonoid, hal ini disebabkan karena kuersetin merupakan flavonoid golongan
flavonol yang memiliki gugus keto pada C4 dan memiliki gugus hidroksi pada atom C3
atau C5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol. Panjang gelombang maksimum
yang dihasilkan dari pengukuran kuersetin adalah 435.27 nm. Setelah ditentukan
panjang gelombang maksimum maka selanjutnya dapat ditentukan kurva standar
kuersetin. Kenaikan nilai absorbansi seiring dengan semakin tingginya konsentrasi
67
standar (Lampiran 8). Persamaan regresi linier standar kuersetin yang diperoleh adalah
y = 0.0303x – 0.0327 dan harga koefisien korelasi (R2) = 0.9985. Persamaan regresi
linier menyatakan hubungan antara konsentrasi kuersetin dan absorbansi pada
pengukuran menggunakan spektrofotometer uv-vis.
Tabel 6. Hasil uji kadar total flavonoid
Sampel Kadar Total Flavonoid
(mgQE/g sampel)
Ekstrak etanol hasil maserasi 14.942 ± 0.424
Ekstrak etanol hasil sokletasi 16.157 ± 0.203
Ekstrak etanol hasil sonikasi 11.566 ± 0.203
Ekstrak n-heksana hasil maserasi 8.327 ± 0.000
Ekstrak n-heksana hasil sokletasi 8.327 ± 0.000
Ekstrak n-heksana hasil sonikasi 8.327 ± 0.000
Kandungan total flavonoid pada masing-masing ekstrak dinyatakan sebagai
ekuivalen kuersetin atau Quercetin Equivalent (QE). QE merupakan acuan umum
untuk mengukur sejumlah senyawa flavonoid yang terdapat dalam suatu bahan
(Mongkolsilp et al., 2004). Berdasarkan hasil penelitian, kadar total flavonoid dari
ekstrak etanol dan n-heksana biji kurma hasil maserasi, sokletasi dan sonikasi berkisar
antara 8.327 mg QE/g sampel hingga 16 mg QE/g sampel (Tabel 6). Kadar total
flavonoid tertinggi terdapat pada ekstrak etanol biji kurma hasil sokletasi yaitu sebesar
16.157 mg QE/g sampel yang artinya setiap gram ekstrak setara dengan 16.157 mg
kuersetin. Secara keseluruhan ekstrak etanol memiliki kandungan total flavonoid yang
lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak n-heksana, hal ini disebabkan karena
senyawa flavonoid memiliki sejumlah gugus hidroksi atau suatu gula sehingga
68
menyebabkan senyawa flavonoid bersifat polar yang cenderung larut dalam pelarut
polar yaitu etanol.
Penelitian mengenai kadar total flavonoid dan total fenolik ekstrak biji kurma
telah dilakukan sebelumnya namun mendapatkan hasil yang berbeda-beda. Mistrello
et al., (2004) meneliti kadar total senyawa flavonoid pada biji kurma jenis Zahidi,
Deglet Nour dan Khouat allig berturut-turut sebesar 14.25, 19.32 dan 12.71 mg QE/g
sampel. Reza et al ., (2009) meneliti kadar total senyawa fenolik ekstrak etanol pada
biji kurma jenis Shahani, Shekar, Shahabi, Khenizi, Maktub dan Lasht berturut-turut
sebesar 968, 817, 873, 954, 961 dan 971 mg GAE/g sampel. Hal ini menunjukkan
bahwa biji kurma yang berasal dari beragam jenis buah kurma mengandung kadar total
flavonoid dan total fenolik yang berbeda-beda karena dipengaruhi perbedaan faktor
geografis, faktor genetik, sumber tanaman, kondisi iklim dan kondisi penyimpanan
bahan (Gorinstein et al., 2009). Faktor-faktor yang memengaruhi pertumbuhan seperti
cahaya, temperatur, kelembaban, jenis tanah, penggunaan pupuk, kerusakan yang
disebabkan oleh mikroorganisme dan serangga, stres yang disebabkan oleh radiasi UV,
paparan logam berat dan penggunaan pestisida juga dapat mengubah komposisi
senyawa metabolit sekunder dalam tumbuhan (Wang et al., 2009).
Analisis korelasi antara kadar total flavonoid dan kadar total fenolik ekstrak
etanol biji kurma dengan aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH dilakukan
dengan interpretasi nilai r berdasarkan korelasi Pearson. Korelasi dengan nilai r = -
0.972 (Lampiran 10) ditemukan antara nilai IC50 ekstrak etanol biji kurma hasil
maserasi, sokletasi dan sonikasi dengan kadar total flavonoid. Korelasi dengan nilai r
= - 0.990 (Lampiran 10) ditemukan antara nilai IC50 ekstrak etanol biji kurma hasil
69
maserasi, sokletasi dan sonikasi dengan kadar total fenolik. Tanda korelasi negatif
menyatakan bahwa semakin tinggi kadar total flavonoid dan kadar total fenolik yang
terkandung dalam sampel maka semakin kecil nilai IC50 yang mengindikasikan
semakin kuatnya aktivitas antioksidasi. Hubungan cukup kuat terlihat antara total
flavonoid dan total fenolik dengan aktivitas antioksidasi dari ekstrak etanol biji kurma.
Selain itu, juga terlihat adanya korelasi positif antara kadar total flavonoid dan
kadar total fenolik dari ekstrak etanol biji kurma dalam penelitian ini (r = 0,994)
(Lampiran 10). Berdasarkan hasil tersebut maka dapat dinyatakan bahwa flavonoid
merupakan penyumbang dominan dari senyawa fenolik. Tingginya kadar fenolik linear
terhadap kadar flavonoid dikarenakan flavonoid merupakan komponen terbesar dari
senyawa fenolik (Lugasi et al., 2003). Maisuthisakul et al., (2008) menyatakan bahwa
semakin tinggi kandungan fenolik dalam suatu bahan mengindikasikan semakin tinggi
kandungan flavonoidnya.
Hasil yang berbeda ditunjukkan pada ekstrak n-heksana biji kurma.
Berdasarkan hasil analisis korelasi Pearson terlihat korelasi yang sangat rendah (r =
0.064) antara kadar total flavonoid dengan aktivitas antioksidasi ekstrak n-heksana biji
kurma sedangkan antara kadar total fenolik dengan aktivitas antioksidasi ekstrak n-
heksana biji kurma terlihat korelasi yang agak rendah (r = 0.476) (Lampiran 11). Hal
ini diduga bahwa senyawa yang memiliki aktivitas antioksidasi di dalam ekstrak n-
heksana biji kurma bukan berasal dari golongan senyawa fenolik maupun flavonoid.
4.7 Hasil Analisis GC-MS
70
Ekstrak etanol dan n-heksana biji kurma dianalisis menggunakan GCMS (Gas
Chromatography Mass Spectrometry) dengan kolom HP-5MS yang bersifat non polar.
Optimasi pada kolom terlampir pada lampiran 9. Identifikasi spektrum GCMS
dilakukan dengan membandingkan spektra massa dari senyawa target dengan standar
yang terdapat pada library yaitu Willey 11. Spektrum hasil analisis GC-MS ekstrak
etanol dan n-heksana biji kurma berturut-turut ditunjukkan pada Gambar 28 dan
Gambar 29.
Gambar 28. Spektrum analisis GC-MS ekstrak etanol biji kurma
71
Gambar 29. Spektrum analisis GC-MS eksreak n-heksana biji kurma
Hasil analisis GC-MS ekstrak etanol dan n-heksana biji kurma sedikitnya
masing-masing ekstrak terdapat 12 komponen senyawa yang terkandung di dalamnya
seperti ditunjukkan pada Tabel 7.
Tabel 7. Komponen kimia ekstrak etanol biji kurma
Sampel No RT Senyawa yang Teridentifikasi BM % Luas Area Similaritas
Ekstrak
etanol
biji
kurma
1 6.292 1-Propanol 134 3.68 64
2 6.463 2-(2-hydroxypropoxy) 134 0.09 59
3 9.549 Phenol, 2,6-bis(1,1-
dimethylethyl)-4-methyl
220 2.28 91
4 10.336 1,2-Benzenedcarboxylic acid 330 22.88 97
5 10.763 Dihydro methyl jasmonate 226 32.11 98
6 10.968 Cyclopentanetic acid 226 16.68 96
7 11.704 9-Ethyl-9-methylfluorene 208 4.37 43
8 12.618 7-Acetyl-6-ethyl-1,1,4,4-
tetramethyltetralin
258 5.72 92
9 13.157 Methyl-3-(3,5-ditertbutyl-4-
hydrxyphenyl)propionate
292 5.56 93
10 13.681 Eicosane 282 2.00 25
11 16.175 2,2-Dimethyl-3-(1-
octylamino)-4-nonanol
281 1.81 43
12 20.210 3,4-Dihydro-6,7-
dimethoxyisoquinoline 2-
oxide
207 2.84 52
72
Ekstrak
n-
heksan
a biji
kurma
1 9.498 Phenol,2,4-bis(1,1-
dimethylethyl)
206 4.37 95
2 11.643 Octadecane 254 3.22 95
3 12.524 Nonadecane 268 3.04 98
4 13.516 Eicosane 282 10.44 98
5 14.678 Heneicosane 296 6.16 98
6 14.789 9-octadecenoic acid (Z)-
methylester
296 4.45 99
7 16.106 Docosane 310 13.15 97
8 17.884 Tricosane 324 9.86 97
9 20.141 Tetracosane 338 12.82 98
10 23.039 Pentacosane 352 9.78 91
11 26.800 Tetratriacontane 479 12.76 87
12 31.681 Icosane 282 9.97 95
Berdasarkan hasil analisis GC-MS terdapat 3 senyawa yang diduga memiliki
aktivitas antioksidasi di dalam ekstrak etanol biji kurma diantaranya senyawa
phenol,2,6-bis(1,1-dimethylethyl)-4-methy, senyawa 1,2-Benzenedicarboxyl acid dan
senyawa dihydro methyl jasmonate.
Senyawa phenol,2,6-bis(1,1-dimethylethyl)-4-methyl (Gambar 30) atau BHT
dengan rumus kimia C15H24O diduga memiliki aktivitas antioksidasi. BHT banyak
digunakan dalam bidang industri sebagai zat aditif antioksidan pada makanan,
kosmetik, farmasi, produk karet dan sebagainya.
Gambar 30. Struktur senyawa phenol,2,6-bis(1,1-dimethylethyl)-4-methyl
BHT memiliki fungsi sebagai zat yang mencegah reaksi autooksidasi atau
oksidasi yang disebabkan oleh O2 dari udara. Miryanti et al., (2011) menyatakan bahwa
senyawa BHT termasuk kedalam antioksidan primer yaitu senyawa-senyawa fenol
73
yang mampu memutus rantai reaksi pembentukan radikal bebas asam lemak melalui
pemberian atom hidrogen yang berasal dari gugus hidroksi senyawa fenol sehingga
terbentuk senyawa yang stabil. Berikut ini merupakan mekanisme reaksi BHT sebagai
senyawa antioksidan (Gambar 31):
Gambar 31. Mekanisme reaksi BHT sebagai senyawa antioksidan
Senyawa 1,2-Benzenedicarboxyl acid (Gambar 32) atau sesuai dengan IUPAC
name sering disebut dengan Phtalic Acid merupakan golongan senyawa terpenoid dan
jenis asam dikarboksilat aromatik yang diduga memiliki aktivitas antioksidasi.
Senyawa dengan rumus kimia C16H22O4 ini memiliki luas area sebesar 22.88% dan
muncul pada retention time 10.336. Khotimah et al., (2013) menyatakan bahwa
terdapat senyawa 1,2-Benzenedicarboxyl acid di dalam ekstrak alga coklat yang
berpotensi sebagai antioksidan. Perumal and Ramasamy (2012) melaporkan bahwa
ditemukan senyawa 1,2-Benzenedicarboxyl acid dalam jumlah cukup banyak dalam
ekstrak etanol tanaman Polygonum chinense L. yang berpotensi sebagai antioksidan,
antimikroba dan antiperadangan.
Gambar 32. Struktur senyawa 1,2-Benzenedicarboxyl acid
Senyawa dihydro methyl jasmonate (Gambar 33) dengan rumus kimia
C13H22O3 ini memiliki luas area 32.11% dengan similaritas 98% diduga memiliki
+ R.
+ RH
74
aktivitas antioksidasi. Wang et al., (2008) melaporkan bahwa terdapat senyawa dihydro
methyl jasmonate di dalam Rubus sp yang mampu meningkatkan aktivitas antioksidasi
dan kandungan flavonoid.
Gambar 33. Struktur senyawa dihydro methyl jasmonate
Berdasarkan hasil analisis GCMS terdapat satu senyawa yang diduga memiliki
aktivitas antioksidasi di dalam ekstrak n-heksana biji kurma yaitu senyawa 9-
Octadecenoic acid (Z) -methyl ester. Senyawa 9-Octadecenoic acid (Z) -methyl ester
(Gambar 34) dengan rumus kimia C19H36O2 ini muncul pada retention time 14.789
dengan luas area 4.45%. Senyawa ini diduga memiliki aktivitas antioksidasi. Akpuaka
et al., (2013) menyatakan bahwa terdapat senyawa 9-Octadecenoic acid (Z) -methyl
ester di dalam ekstrak n-heksana Azadirachta indica yang merupakan satu diantara
senyawa kimia yang memiliki aktivitas antioksidasi.
Gambar 34. Struktur senyawa 9-Octadecenoic acid (Z) -methyl ester
Senyawa 9-Octadecenoic acid (Z) -methyl ester termasuk kedalam asam lemak
tak jenuh tunggal (Mono Unsaturated Fatty Acid/ MUFA). Senyawa ini diduga
berperan sebagai senyawa antioksidan yang mampu untuk memperlambat maupun
mencegah proses oksidasi lipid (Shui et al., 2004). Tahap inisiasi, asam lemak tidak
jenuh mendonorkan atom hidrogennya kepada radikal bebas (R. ) sehingga terbentuk
RH non radikal dan radikal lipid. Tahap propagasi terjadi oksogenasi radikal lipid
75
membentuk radikal peroksida lipid. Radikal peroksida yang terbentuk akan bereaksi
dengan asam lemak lain membentuk hidroperoksida dan radikal lipid baru. Tahap
terminasi, radikal bebas bereaksi satu sama lain membentuk spesies non radikal
sedangkan hidroperoksida akan terdekomposisi menjadi produk alkohol, asam, keton
dan substrat lain yang lebih stabil (Gordon, 1990). Berikut ini merupakan mekanisme
reaksi senyawa 9-Octadecenoic acid (Z) -methyl ester sebagai senyawa antioksidan
(Gambar 35) :
Gambar 35. Mekanisme senyawa 9-Octadecenoic acid (Z) -methyl ester sebagai
senyawa antioksidan
Hasil analisis GCMS ekstrak n-heksana biji kurma diketahui bahwa terdapat
senyawa kimia golongan fenolik yaitu senyawa phenol,2,4-bis(1,1-dimethylethyl)
(Gambar 36). Senyawa golongan fenolik ini diduga tidak memiliki aktivitas
antioksidasi melainkan antibakteri. Hal ini didukung oleh penelitian Seow et al., (2012)
yang melaporkan bahwa pada fraksi etil asetat daun dewa Gymura segetum diketahui
adanya senyawa phenol,2,4-bis(1,1-dimethylethyl) yang diduga berkontribusi pada
76
aktivitas antimikroba. Abdullah et al., (2011) menyatakan bahwa terdapat senyawa
phenol,2,4-bis(1,1-dimethylethyl) di dalam ekstrak memiliki aktivitas antibakteri.
Gambar 36. Struktur senyawa phenol,2,4-bis(1,1-dimethylethyl)
Guenther (1987) menyatakan bahwa mekanisme senyawa fenol sebagai
antibakteri melalui mekanisme pembentukan kompleks antara senyawa fenol dengan
protein sel yang dapat menghambat kerja enzim pada sel bakteri sehingga
menyebabkan kerusakan pada dinding sel. Kerusakan dinding sel akan mengakibatkan
terjadinya perubahan-perubahan yang mengarah pada kematian sel karena dinding sel
berfungsi sebagai pengatur pertukaran zat-zat dari luar dan kedalam sel (Pelczar and
Chan, 1998).
77
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa :
1. Metode sokletasi menghasilkan aktivitas antioksidasi tertinggi pada ekstrak
etanol biji kurma dengan nilai IC50 sebesar 4.7307 ± 0.368 ppm dan metode
maserasi menghasilkan aktivitas antioksidasi tertinggi pada ekstrak n-
heksana biji kurma dengan nilai % daya hambat oksidasi pada konsentrasi
50 ppm sebesar 82.265%.
2. Hasil analisis GC-MS menunjukkan bahwa di dalam ekstrak etanol biji
kurma terdapat senyawa phenol,2,6-bis(1,1-dimethylethyl)-4-methyl, 1,2-
benzenedicarboxyl acid, dihydro methyl jasmonate dan senyawa 9-
octadecenoic acid (Z)-methyl ester di dalam ekstrak n-heksana biji kurma
yang memiliki aktivitas antioksidasi.
78
5.2 Saran
Saran untuk penelitian selanjutnya adalah perlu dilakukan lebih lanjut
mengenai isolasi dan karakterisasi senyawa dari biji kurma (Phoenix dactylifera)
sehingga dapat meningkatkan aktivitas antioksidasinya serta perlu dilakukan pengujian
aktivitas biologis lainnya terutama aktivitas antibakteri.
DAFTAR PUSTAKA
Abdullah, H., Mirghani, S., and Jamal, P. 2011. Antibacterial Activity of Malaysian
Mango Kernel. Journal of Biotechnology. 10 (81) : 18739-18748.
Adikusuma, F. 2007. Daya Antioksidasi Ekstrak Isoflavon Whey Tahu Terstandar
pada Proses Produksi Tahu yang Berbeda. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
Agustal, A., Harapini, M., and Chairul, Analisis Kandungan Kimia Ekstrak Daun
Katuk (Sauropus Androgynus) dengan GCMS. Jurnal Tumbuhan Obat
Indonesia. 3 (3) : 1-6.
Ahmad, A., Bialangi, N., and Salimi, Y.K. 2014. Penentuan Kandungan Fenolik Total
dan Aktivitas Antioksidan dari Rambut Jagung (Zea Mays) yang Tumbuh di
Daerah Gorontalo. Jurnal Kimia Bahan Alam. 1 (1) : 1-7.
Akpuaka, A., Dashak, D., and Ekwenchi, M. 2013. Biological Activities of
Characterized Isolates of n-Hexane Extract of Azadirachta Indica a.Juss (Neem)
Leaves. Journal of Nature and Science. 11 (5) : 1-7.
Al-Farsi, M.A., and Lee, C.Y. 2007. Optimization of Phenolics and Dietary Fibre
Extraction From Date Seeds. Journal of Food Chemistry. 108 : 977-985.
Al-Farsi, M.A., and Lee, C.Y. 2008. Nutritional and Functional Properties of Dates : a
Review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 48 (10) : 877-887.
Almana, H.A., and Mahmoud, R.M. 1994. Palm Date Seeds as an Alternative Source
of Dietary Fibre in Saudi Bread. Journal Ecology of Food and Nutrition. 32 :
261-270.
Alvarez, A.P., Maya, E.R., and Suarez, L.A. 2009. Analysis of Capsaicin and
Dihydrocapsaicin in Peppers and Sauce Pepper by Solid Phase Microextraction
79
Gas Chromatography-Mass Spectrometry. Journal of Chromatography. 18 :
2843-2847.
Amrun, .M., and Umiyah. 2007. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air dan Ekstrak
Metanol Beberapa Variasi Buah Kenitu (Chrysophyllumcainito L.) dari Daerah
Jember. Journal of Chemistry. 13 : 45-50.
Apriadji, W. 2007. Cake dan Kue Manis. Jakarta : PT Gramedia Pustaka Utama.
Aqil, F., Ahmad, I., and Mehmood, Z. 2006. Antioxidant and Free Radical Scavenging
Properties of Twelve Traditionally Used Indian Medicinal Plants. Turk Journal
Biology. 17 : 177-183.
Blois, M.S. 1958. Antioxidant Determinations by The Use of a Stable Free Radical.
Journal of Nature. 181 : 1199-1200.
Buck, D.F. 1991. Antioxidants. UK : Blackie Academic & Profesional Glasgow.
Budhikarjono, K. 1996. Alat Industri Kimia. Surabaya : Institut Teknologi Sepuluh
November.
Chang, C.C., Yang, M.H., and Wen, H.M. 2002. Estimation of Total Flavonoids
Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods. Journal of
Food Drug Analysis. 10 : 178-182.
Cintas, P., and Cravotto, G. 2005. Power Ultrasound in Organic Synthesis: Moving
Cavitational Chemistry from Academia to Innovative and Large-Scale
Applications. The Royal Society Journal of Chemistry. 35 : 180-196.
Coppen, P. 1983. The Use of Antioxidant Rancidity in Foods. London : Apllied Science
Publishers.
Darwis, D. 2000. Teknik Dasar Laboratorium dalam Penelitian Senyawa Bahan Alam
Hayati Workshop Pengembangan Sumber Daya Manusia dalam Bidang Kimia
Organik Bahan Alam Hayati. Skripsi. Universitas Andalas.
Delphin, D.V., Haripriya, R., Jothi, D., and Thirumalai, V. 2014. Phytochemical
Screening of Various Ethanolic Seed Extracts. World Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences. 7 (3) : 1041-1048.
Deore, S.L. 2009. In Vitro Antioxidant Activity and Phenolic Content of Croton
caudatum. International Journal of Chemical Technology Research. 1(2) : 174-
176.
Depkes RI. 1986. Sedian Galenik. Jakarta : Direktorat Jenderal Pangan Obat dan
Makanan.
80
Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta :
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dutta, D., Raychaudhuri, U., and Chakraborty, R. 2004. Retention of β-Carotene in
Frozen Carrots Under Frying Condition of Temperature and Time of Storage.
African Journal of Biotechnology. 4 (1) : 102-103.
Ekawati, R.A. 2007. Potensi Antioksidasi Daun Salam (Eugina polyantha) pada
Lingkungan Agrofisik yang Berbeda. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
Esterbauer, H., Schaur, R.J., and Zollner, H. 1991. Chemistry and Biochemistry of 4-
Hydroxynonenal, Malonaldehyde and Related Aldehydes. Journal of Radical
Biology. 11(1) : 81-128.
Febriani, K. 2012. Uji Aktivitas Antiioksidan Ekstrak dan Fraksi Daun Cocculus
orbiculatus dengan Metode DPPH dan Identifikasi Golongan Senyawa Kimia
dari Fraksi yang Aktif. Skripsi. Universitas Indonesia.
Ferreira, C.F., Aires, E., and Barreira, C.M. 2009. Antioxidant Activity of Potuguese
Honey Samples: Different Contributions of The Entire Honey and Phenolic
Extract. Journal of Food Chemistry. 114 : 1438-1443.
Fessenden, R.J., and Fessenden, J.S. 1999. Kimia Organik. Jakarta : Erlangga
Frederickson, C.J. 2000. Importance of Zinc in The Central Nervous System : The Zinc
Containing Neuron. Journal of Nutrition. 130 : 1471-1483.
George, F.M. 2009. Vitamins in Foods : Analysis, Bioavailability and Stability. New
York : CRC Press Taylor and Francis.
Giao, M.S., Claudia, I., and Foncesa, S.C. 2009. Effect of Particle Size Upon The
Extent of Extraction of Antioxidant Power from The Plants Agrimonia eupatoria,
Salvia sp. and Satureja montana. Journal of Food Chemistry. 117 : 412-416.
Gordon, M. 1990. The Mechanism of Antioxidant Action in Vitro. Journal of Food
Antioxidant. 1 (3) : 1-18.
Gorinstein, S., Haruenkit, R., and Poovarodom, S. 2009. The Comparative
Characteristics of Snake and Kiwi Fruits. Journal of Food and Chemical
Toxicology. 47 : 1884-1891.
Gross, J. 1991. Pigments in Vegetable, Chlorophylls and Carotenoids. New York : Van
Nostrand Reinhold.
Guenther, E. 1987. Minyak Atsiri Jilid 1. Jakarta : Universitas Indonesia.
Hamada, J.S., Hashim, I.B., and Sharif, F.A. 2002. Preliminary Analysis and Potential
Uses of Date Pits in Foods. Journal of Food Chemistry. 76 : 135-137.
81
Hanani, E., Mun’im, A., and Sekarini, R. 2005. Identifikasi Senyawa Antioksidan
dalam Spons Callyspongia sp dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu
Kefarmasian. 2 (3) : 127-133.
Handa, S.S., Khanuja, S.P., and Longo, G. 2008. Extraction Technologies for
Medicinal and Aromatic Plant. Trieste : International Centre for Science and
High Technology.
Harborne, J. 1996. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Bandung : Institut Teknologi Bandung.
Harlina, K., Devi, S., and Laili, S. 2010. Ekstraksi Teripang Pasir (Holothuria scabra)
Sebagai Sumber Testosteron pada Berbagai Kecepatan dan Lama Pengadukan.
Jurnal ISSN 1693-4393. 7 : 1-7.
Hasanah, A.N., Nazaruddin, F., and Febrina, E. Analisis Kandungan Minyak Atsiri dan
Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Rimpang Kencur (Kaempferia Galanga L.).
Jurnal Matematika dan Sains. 3 (16) : 1-6.
Hayati, R. 2010. Pengaruh Fermentasi dan Suhu Pengeringan pada Mutu Biji Kakao
(Theobroma Cacao L.). Jurnal Kimia Bahan Alam. 1 (3) : 1-6.
Hernani, Winarti, C., and Marwati, T. 2009. Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun 59
Belimbing Wuluh Terhadap Penurunan Tekanan Darah pada Hewan Uji. Jurnal
Pascapanen. 6 (1) : 54-61.
Houghton, P., and Raman, A. 1998. Laboratory Handbook for The Fractionation of
Natural Extracts. London : Thomson Science.
Isnindar, Wahyuono, S., and Setyowati, E.P. 2011. Isolasi dan Identifikasi Senyawa
Antioksidan Daun Kesemek (Diospyros kaki Thunb) dengan Metode DPPH.
Majalah Obat Tradisional. 16 (3) : 157-164.
Josephy, P.D. 1997. Molecular Toxicology. New York : Oxford University Press.
Kadji, H.K., Runtuwene, R.J., and Citraningtyas, G. 2013. Uji Fitokimia dan Aktivitas
Antioksidan dari Ekstrak Etanol Daun Soyogik (Saurauia bracteosa). Jurnal
Kimia Bahan Alam. 1 (7) : 1-8.
Kaisoon, O., Sirithon, S., and Meeso., N. 2011. Phenolic Compounds and Antioxidant
Activities of Edible Flowers from Thailand. Journal of Functional Food. 3 : 88-
99.
Katja, D.G., Suryanto, E., and Wehantouw, F. 2009. Potensi Daun Alpukat (Persea
americana) Sebagai Sumber Antioksidan Alami. Chemistry Prog. 2 (1) : 58-64.
82
Katno. 2008. Tingkat Manfaat, Keamanan dan Efektifitas Tanaman Obat dan Obat
Tradisional. Karanganyar : Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan
Departemen Kesehatan RI.
Khotimah, K., Darius, and Bambang, B.S. 2013. Uji Aktivitas Senyawa Aktif Alga
Coklat (Sargassum fillipendulla) Sebagai Antioksidan pada Minyak Ikan
Lemuru (Sardinella longiceps). THPi Student Journal. 1(1) : 10-20.
Kikuzaki, H., and Nakatani, N. 1993. Antioxidant Effects of Some Ginger
Constituents. Journal of Food Science. 58 (6) : 1407-1410.
Krinsky, I. 1992. Mechanism of Action of Biological Antioxidants. Boston : The
Society for Experimental Biology an Medicine.
Kristianingsih. 2005. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Triterpenoid dari Akar
Tanaman Kedondong Laut (Polyscias fruticosa). Skripsi. Universitas Brawijaya.
Kristianti, A.F., Aminah, N.S., and Tanjung, M. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya
: Universitas Airlangga.
Kusumaningati, R.W. 2009. Analisa Kandungan Fenol Total Jahe (Zingiber officinale)
Secara in Vitro. Jakarta : UI Press.
Lautan. 1997. Radikal Bebas pada Eritrosit dan Leukosit. Jurnal Kesehatan. 116 : 49-
52
Lenny, S. 2006. Senyawa Flavonoid, Fenilpropanoida dan Alkaloida. Medan :
Universitas Sumatera Utara.
Lumbessy, M., Abidjulu, J., and Paendong, J. 2013. Uji Total Flavonoid pada Beberapa
Tanaman Obat Tradisional di Desa Waitina Kecamatan Mangoli Timur
Kabupaten Kepulauan Sula Provinsi Maluku Utara. Jurnal Matematika dan
Sains. 1 (2) : 1-7.
Lugasi, A., Hovari, J., and Sagi, K. 2003. The Role of Antioxidant Phytonutrients in
The Prevention of Diseases. Acta Biologica Szegediensis. 47(1-4) : 119-125.
Maisuthisakul, P., Pasuk, S., and Ritthiruangdej, P. 2008. Relationship Between
Antioxidant Properties and Chemical Composition of Some Thai Plants. Journal
of Food Composition and Analysis. 21: 229-240.
Mandal, S.C., Vivelananda, M., and Anup, D. 2015. Essentials of Botanical Extraction
Principles and Applications. New York : Academic Press.
Martsolich, K.A. 2007. Potensi Antioksidasi Ekstrak Air dan Ekstrak Etanol 70% Daun
Jati Belanda (Guazuma ulmifolia). Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
83
Marxen, K., Vanselow, K.H., and Lippemeier, S. 2007. Determination of DPPH
Radical Oxidation Caused by Methanolic Extract of Some Microalgal Species by
Linier Regression Analysis of Spectrophotometric Measurements. Journal of
Sensors. 7 : 2080-2095.
Miryanti, A., Sapei, L., and Budiono, K. 2011. Ekstraksi Antioksidan dari Kulit Buah
Manggis (Garcinia mangostana). Skripsi. Universitas Katolik Parahyangan.
Mistrello, J., Sameera, D.S., Abdollah, G., and Marshall, R.J. 2014. Determination of
The Antioxidant Capacity, Total Phenolic and Flavonoid Contents of Seeds From
Three Commercial Varieties of Culinary Dates. International Journal of Food
Studies. 4 : 34-44.
Meda, A., Lamien, C.E., and Romito, M. 2005. Determination of The Total Phenolic,
Flavonoid and Proline Contents in Burkina Fasan Honey As Well As Their
Radical Scavenging Activity. Journal of Food Chemistry. 91: 571-577.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhidrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Journal of Science Technology. 26
(2) : 211-219.
Mongkolsilp, S., Pongbupakit, I., and Sea-Lee, N. 2004. Radical Scavenging Activity
and Total Phenolic Content of Medical Plant Use in Primary Health Care.
Journal of Pharmacy Science. 9 : 32-35.
Mulja, M., and Suharman. 1995. Analisis Instrumental. Surabaya : Airlangga
University Press.
Murray, R.K. 2003. Biokimia Harper Edisi 25. Jakarta : EGC.
Murugan, R. 2013. Comparative Evaluation of Different Extraction Methods for
Antioxidant and Anti-Inflammatory Properties from Osbeckia parvifolia.
Journal of King Saud University Science. 11 (1) : 6-8.
Nely, F. 2007. Aktivitas Antioksidan Rempah Pasar dan Bubuk Rempah Pabrik dengan
Metode Polifenol dan Uji AOM (Active Oxygen Method). Skripsi. Institut
Pertanian Bogor.
Nijveldt, R.J., Van, N.E., and Van Hoorn. 2001. Flavonoids : a Review of Probable
Mechanisms of Action and Potential Applications. Am Journal Clin Nutr. 74 (4)
: 418-25.
Nikhal, S.B., Dambe, P.A., and Ghongade, D.B. 2010. Hidroalcoholic Extraction of
Mangifera indica Leaves by Soxhletion. International Journal of
Pharmaceutical Science. 2 (1) : 30-32.
Novita, K. 2014. Kandungan Serat, Vitamin C, Aktivitas Antioksidan dan Organoleptik
Keripik Ampas Brokoli Panggang. Skripsi. Universitas Diponegoro.
84
Patil, A.P. 2011. Evaluation of In Vitro Antioxidant Activity of Seeds of Blue and
White Flowered Varieties of Clitoria ternatea Linn. Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences. 4 : 3.
Pelczar, M.J., and Chan, E.C.S. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI Press.
Perumal, B., and Ramasamy, N. 2012. GC-MS Analysis of Phytocomponents in The
Ethanol Extract of Polygonum chinense L. Pharmacognosy Research. 4 (1) : 11-
14.
Pisoschi, A.M., Cheregi, M.C., and Danen, A.F. 2009. Total Antioxidant Capacity of
Some Commercial Fruit Juices Electrochemical and Spectrophotometrical
Approaches. Journal of Molecules. 14 : 480-493.
Purwaningsih, S. 2012. Aktivitas Antioksidan dan Komposisi Kimia Keong Matah
Merah (Cerithidea obtusa). Jurnal Ilmu Kelautan. 17 (1) : 39-48.
Porskjaer, L., Kathrine, C., and Christensen, B. 2014. The Role of Direct and Indirect
Polyphenolic Antioxidants in Protection Against Oxidative Stress. Journal of
Polyphenol in Human Helath and Disease.12 : 289-309.
Prakash, A. 2001. Antioxidant Activity Medallion Laboratories-Analytical Progress.
Journal of Analytics. 19 : 1-4.
Praptiwi, Dewi, P., and Harapini, M. 2006. Nilai Peroksida dan Aktivitas AntiRadikal
Bebas DPPH Ekstrak Metanol Knema laurina. Majalah Farmasi Indonesia. 17
(1) : 32-36.
Pratimasari, D. 2009. Uji Aktivitas Penangkap Radikal Buah Carica Papaya dengan
Metode DPPH dan Penetapan Kadar Fenolik serta Flavonoid Totalnya. Skripsi.
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Pratt, D.E., and Hudson, B.J.F. 1990. Natural Antioxidants not Exploited
Commercially. Journal Applied Food Science Series. 1 (5) : 171-191.
Pratt, D.E. 1992. Natural Antioxidants From Plant Material. Washington D.C :
American Society.
Purba, R.D. 2001. Analisis Komposisi Alkaloid Daun Handeuleum (Graptophyllum
pictum Linn) yang Dibudidayakan dengan Taraf Nitrogen yang Berbeda. Skripsi.
Institut Pertanian Bogor.
Reza, M., Khanavi, M., Mannan, H., and Maryam, J. 2010. Comparison of Antioxidant
Activity and Total Phenol Contents of some Date Seed Varieties from Iran. Iran
Journal of Pharmacy. 9 (2) : 141-146.
Rice, E.C. 1996. Structure Antioxidant Activity Relationship of Flavonoids and
Phenolic Acids. Journal of Free Radic BioMed. 20 (7) : 933-56.
85
Ridho, E. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Buah Lakum (Cayratia
trifolia) dengan Metode DPPH. Skripsi. Universitas Tanjung Pura.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung : Institut
Teknologi Bandung.
Rohman, A. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Yogyakarta : Penerbit Graha
Ilmu.
Rusdi. 1990. Tetumbuhan Sebagai Sumber Bahan Obat. Padang : Pusat Penelitian
Universitas Andalas.
Salah, N. 1995. Polyphenolic Flavanols as Scavengers of Aqueous Phase Radicals and
as Chain-Breaking Antioxidants. Journal of Arch Biochem Biophys. 322 (2) :
339-46.
Sangi, M., Runtuwene1, M.R.J., and Simbala, H.E.I. 2008. Analisis Fitokimia
Tumbuhan Obat di Kabupaten Minahasa Utara. Skripsi. Institut Teknologi
Bandung.
Satuhu, S. 2010. Kurma Kasiat dan Olahannya Edisi I. Jakarta : Penebar Swadaya.
Schultz, H.W. 1963. Symposium on Food : Lipid and Their Oxidation. Connecticut:
The Avi Publishing.
Seidel, V. 2008. Initial and Bulk Extraction Natural Products Isolation 2nd Edition.
New Jersey : Humana Press.
Seow, L.J., Beh, H.K., and Ibrahim, P. 2012. Antimicrobial Activity of Gynura
segetum’s Leaf Extracts and Its Active Fractions. Journal of Genuine Traditional
Medicine. 2 : 2
Setiyono, L. 2011. Pemanfaatan Biji Kurma Sebagai Tepung dan Analisis Perubahan
Mutunya Selama Penyimpanan. Skripsi. Instutut Pertanian Bogor.
Shirsath, S.R., Sonowane, S.H., and Gogate, P.R. 2012. Intensification of Extraction
of Natural Products Using Ultrasonic Irradiations-a Review of Current Status.
Journal of Chemical Engineering and Processing. 53 : 10-23.
Shui, G., Wong, S.P., and Leong, L.P. 2004. Characterization of Antioxidants and
Change of Antioxidant Levels During Storage of Manilkara zapota L. Journal of
Agricultural and Food Chemistry. 52 : 7834-7841
Siadi, K. 2012. Ekstrak Bungkil Buji Jarak Pagar (Jatropha curcas) Sebagai
Biopestisida yang Efektif dengan Penambahan NaCl. Jurnal MIPA. 35 (1) : 1-5.
86
Silverstein, R.M., Sonowane, S.H., and Gogate, P.R. 1991. Spectrometric
Identification of Organic Compounds (5th edition). New York : John Wiley and
Sons.
Singleton, V.L., and Rossi, J.A. 1965. Colorimetry of Total Phenolic with
Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid Reagent. Journal of Chemistry. 16 : 2-
5.
Sirait, M. 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta : Direktorat Jenderal Pengawasan
Obat dan Makanan.
SNI. 2008. Minyak Kelapa Virgin (VCO). Jakarta : Badan Standarisasi Nasional.
Socha, R., Juszczak, L., and Pietrzyk, S. 2009. Antioxidant Activity and Phenolic
Composition of Herbhoneys. Journal of Food Chemistry. 113 : 568-574.
Sudarmadji, S. 1989. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Yogyakarta : Penerbit
Liberty.
Svehla, G. 1990. Buku Teks Analisis Anorganik Kualitatif Makro dan Semimikro.
Jakarta : PT Kalman Media Pusaka.
Syahrul, F. 2008. Aktivitas Antioksidasi Ekstrak Jamur Kuping Hitam (Auricularia
polytricha). Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
Tania, S.U. 2009. Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Simpur
(Dillenia indica) dari Berbagai Metode Ekstraksi dengan Uji ANOVA. Jurnal
Kimia Bahan Alam. 12 : 5-6.
Tensiska. 2001. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah Andaliman (Zanthoxylum
acanthopodium) dalam Beberapa Sistem Pangan dan Kestabilan Aktivitasnya
Terhadap Suhu dan pH. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
Tukozkan, N., Erdamar, H., and Seven, I. 2006. Measurement of Total
Malondialdehyde in Plasma and Tissue by High-Performance Liquid
Chromatrography and Thiobarbituric Acid Assay. Journal of Firat tip Dergisi.
11 : 88-92.
Tuty, E.A. 2008. Pengaruh Variabel Operasi Terhadap Ekstraksi Minyak dari Biji
Karet dengan Pelarut Heksana dan Etanol. Jurnal Kimia Bahan Alam. 9 : 21-25.
Tokur, B., Korkmaz, K., and Ayas, D. 2006. Comparison of Two Thiobarbituric Acid
(TBA) Method for Monitoring Lipid Oxidation in Fish. EU Journal of Fisheries
& Aquatic Sciences. 23 (3-4) : 331-334.
Utami, T.S., Arbianti, R., and Reza, A. 2009. Perbandingan Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun Simpur (Dillenia indica) dari Berbagai Metode Ekstraksi
dengan Uji Anova. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
87
Vatai, T., Skerget, M., and Knez, Z. 2009. Extraction of Phenolic Compounds from
Elder Berry and Different Grape Marc Varieties Using Organic Solvents and/or
Supercritical Carbondioxide. Journal of Food Eng. 12 (2) : 1-7.
Wang, L., and Weller, C.L. 2006. Recent Advances in Extraction of Nutraceuticals from
Plants. Journal of Trends in Food Science & Technology. 1 (17) : 300-312.
Wang, S.Y., Chen, C., and Wang, C.Y. 2009. The Influence of Light and Maturity on
Fruits Quality and Flavonoid Content of Red Raspberries. Journal of Food
Chemistry. 112 : 76-84.
Wang, S.V., Linda, B., and Ding, M. 2008. Methyl Jasmonate Enhances Antioxidant
Activity and Flavonoid Content in Blackberries (Rubus sp.) and Promotes
Antiproliferation of Human Cancer Cells. Journal of Food Chemistry. 107 :
1261-1269.
Wardani, E. 2007. Uji Kualitas VCO Berdasarkan Cara Pembuatan dari Proses
Pengadukan Tanpa Pemancingan dan Proses Pengadukan dengan
Pemancingan. Skripsi. Universitas Negeri Semarang.
Widiastuti, A.E., and Dhika, R.D. 2012. Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap
Aktivitas Antioksidan Kulit Buah Durian (Durio zibethinus) Varietas Petruk.
Jurnal Kimia Bahan Alam. 1 (7) : 1-8.
Widyasari, A.R. 2008. Karakterisasi dan Uji Antibakteri Senyawa Kimia Fraksi n-
Heksana dari Kulit Batang Pohon Angsret (Spathoda campanulata). Skripsi.
Universitas Brawijaya.
Winarno, F.G. 2008. Kimia Pangan dan Gizi. Bogor : M-Brio Press.
Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas: Potensi dan Aplikasinya
dalam Kesehatan. Yogyakarta : Penerbit Kanisius.
Yagi, K. 1994. Lipid Peroxides in Hepatic, Gastrointestinal and Pancreatic Diseases.
New York : Plenum Press.
Yanishlieva, M. 2001. Antioxidant in Food Practical Apllication. California :
Publishing Ltd and CRC Press LLC.
Zhang, L.J., Liu, J.F., and Zhang, P.P. 2011. Ionic Liquid- Based Ultrasound-Assisted
Extraction of Chlorogenic Acid from Lonicera japonica Thunb. Journal of
Chemistry. 1 (3) : 1-5.
88
LAMPIRAN
89
Lampiran 1. Rancangan penelitian
Pembuatan Serbuk
Biji Kurma
Ekstraksi
Maserasi Sokletasi Sonikasi
Ekstrak Dipekatkan dengan
Rotary Evaporator
Analisis % Rendemen
Uji Fitokimia Uji Total
Fenolik
Uji Total
Flavonoid
Uji Aktivitas
Antioksidasi
Analisis dengan
Instrumen
Metode DPPH Metode TBA GC-MS Alkaloid
Flavonoid
Steroid
Triterpenoid
Tanin
Kuinon
Saponin
90
Lampiran 2. Spesifikasi bahan
Gambar 37. Buah kurma jenis Al-Saad
Tabel 8. Spesifikasi bahan utama
Spesifikasi Keterangan
Nama jenis Kurma
Nama dagang Al-Saad
Produksi Al-Foah company, United arab emirates
Perusahaan impor PT Exindokarsa Agung Jakarta
Kode produksi Agustus 2014
Expired time Februari 2016
91
Lampiran 3. Hasil ekstraksi
Tabel 9. Hasil ekstraksi
Sampel Ulangan Berat awal
(g)
Berat akhir
(g) % Rendemen
% Rendemen
rata-rata
Ekstrak
etanol hasil
maserasi
I 25 3.057 12.228
12.315 II 25 3.100 12.400
III 25 3.079 12.316
Ekstrak
etanol hasil
sokletasi
I 10 0.590 5.900
5.920 II 10 0.600 6.000
III 10 0.586 5.860
Ekstrak
etanol hasil
sonikasi
I 25 2.380 9.520
9.786 II 25 2.420 9.680
III 25 2.540 10.160
Eksrak n-
heksana hasil
maserasi
I 25 1.407 5.628
5.740 II 25 1.382 5.528
III 25 1.516 6.064
Ekstrak n-
heksana hasil
sokletasi
I 10 0.635 6.35
6.483 II 10 0.664 6.64
III 10 0.646 6.46
Ekstrak n-
heksana hasil
sonikasi
I 25 1.120 4.48
4.600 II 25 1.170 4.68
III 25 1.160 4.64
Contoh perhitungan:
Rendemen = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙𝑘𝑎𝑛
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 × 100%
Hasil maserasi ekstrak etanol % Rendemen = 12.228
25 × 100% = 12.315%
92
Lampiran 4. Hasil uji fitokimia
Tabel 10. Hasil penapisan kimia golongan alkaloid ekstrak biji kurma
No Pereaksi Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1 Mayer (-)
Endapan
jingga
(-)
Endapan
jingga
(-)
Endapan
jingga
(-)
Larutan
Bening
(-)
Larutan
Bening
(-)
Larutan
Bening
2 Wagner (+)
Endapan
coklat
(+)
Endapan
coklat
(+)
Endapan
coklat
(-)
Larutan
berwarna
ungu pada
bagian atas
dan hijau
pada bagian
bawah
(-)
Larutan
berwarna
ungu pada
bagian atas
dan hijau
pada bagian
bawah
(-)
Larutan
berwarna
ungu pada
bagian atas
dan hijau
pada bagian
bawah
3 Dragendorf (+)
Endapan
jingga
kemerahan
(+)
Endapan
jingga
kemerahan
(+)
Endapan
jingga
kemerahan
(-)
Larutan
berwarna
ungu pada
bagian atas
dan jingga
pada bagian
bawah
(-)
Larutan
berwarna
ungu pada
bagian atas
dan jingga
pada bagian
bawah
(-)
Larutan
berwarna
ungu pada
bagian atas
dan jingga
pada bagian
bawah
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
Tabel 11. Hasil penapisan kimia golongan flavonoid ekstrak biji kurma
No Pereaksi Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1 Serbuk
Mg
(+)
Endapan
jingga
(+)
Endapan
jingga
(+)
Endapan
jingga
(-)
Larutan
Bening
(-)
Larutan
Bening
(-)
Larutan
Bening
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
Tabel 12. Hasil penapisan kimia golongan terpenoid ekstrak biji kurma
No Pereaksi Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1 Lieberman-
Burchard
(+)
Endapan
merah tua
(+)
Endapan
merah tua
(+)
Endapan
merah tua
(-)
Endapan
coklat
(-)
Endapan
coklat
(-)
Endapan
coklat
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
93
Tabel 13. Hasil penapisan kimia golongan tanin ekstrak biji kurma
No Pereaksi Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1 FeCl3
1%
(+)
Endapan
hijau
kehitaman
(+)
Endapan
hijau
kehitaman
(+)
Endapan
hijau
kehitaman
(-)
Larutan
kuning
(-)
Larutan
kuning
(-)
Larutan
kuning
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
Tabel 14. Hasil penapisan kimia golongan kuinon ekstrak biji kurma
No Pereaksi Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1
Etanol
95%-
NaOH
10%
(+)
Endapan
coklat
kemerahan
(+)
Endapan
coklat
kemerahan
(+)
Endapan
coklat
kemerahan
(-)
Larutan
kuning
muda
(-)
Larutan
kuning
muda
(-)
Larutan
kuning
muda
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
Tabel 15. Hasil penapisan kimia golongan saponin ekstrak biji kurma
No Pereaksi Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana
Maserasi Sokletasi Sonikasi Maserasi Sokletasi Sonikasi
1 Aquades
(-)
Tidak
terbentuk
busa
(-)
Tidak
terbentuk
busa
(-)
Tidak
terbentuk
busa
(+)
Terbentuk
busa
(+)
Terbentuk
busa
(+)
Terbentuk
busa
Keterangan : + : terdeteksi - : tidak terdeteksi
Dokumentasi hasil uji fitokimia
Keterangan : a) hasil maserasi; b) hasil sokletasi; c) hasil sonikasi
a) b) c)
Gambar 38. Hasil uji alkaloid pereaksi Wagner
94
a) b) c)
Gambar 39. Hasil uji alkaloid pereaksi Dragendorf
a) b) c)
Gambar 40. Hasil uji flavonoid
a) b) c)
Gambar 41. Hasil uji triterpenoid/steroid
95
a) b) c)
Gambar 42. Hasil uji tanin
a) b) c)
Gambar 43. Hasil uji kuinon
a) b) c)
Gambar 44. Hasil uji saponin
96
Lampiran 5. Hasil uji antioksidasi (TBA) ekstrak n-heksana biji kurma
Tabel 16. Penentuan absorbansi waktu inkubasi
Hari ke - Absorbansi (A)
1 0.00585
2 0.009
3 0.004
Gambar 45. Kurva penentuan absorbansi maksimum
Gambar 46. Penentuan panjang gelombang maksimum TEP
0
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0 1 2 3 4
Ab
sorb
ansi
Hari ke -
sampel 18.Sample
Name Description
400 650450 500 550 600
0.66
-0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
nm
A
531.71nm, 0.65A
97
Tabel 17. Penentuan absorbansi TEP
Konsentrasi TEP
(µM)
Absorbansi
(A)
0 0
1.5 0.058
3 0.109
6 0.035
9 0.066
12 0.465
15 0.622
18 0.733
Gambar 47. Kurva standar TEP
Contoh perhitungan kandungan antioksidan ekstrak n-heksana biji kurma
Konsentrasi MDA dalam sampel (µM)
Misal Absorbansi maserasi ekstrak n-heksana (ulangan 1) = 0.025
Substitusi absorbansi ke persamaan garis regresi y = ax + b
y = 0.041x – 0.0069
𝑥 =0.025 + 0.0069
0.041= 0.778 µ𝑀
Contoh perhitungan % daya hambat ekstrak maserasi n-heksana (ulangan 1).
% 𝐷𝑎𝑦𝑎 ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡 𝑜𝑘𝑠𝑖𝑑𝑎𝑠𝑖 =[𝑀𝐷𝐴]𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 − [𝑀𝐷𝐴]𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
[𝑀𝐷𝐴]𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 𝑥 100%
=4.3755−0.776
4.3755 𝑥 100% = 82.265%
y = 0.041x - 0.0069R² = 0.9986
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
0 10 20
Ab
sorb
ansi
(A
)
Konsentrasi (µM)
Series1
Linear(Series1)
98
Tabel 18. Penentuan kandungan antioksidan dengan metode TBA
Sampel Absorban
hari ke-2
[MDA] hari
ke-2 (µM)
Rerata [MDA]
(µM) SD
Daya hambat
oksidasi (%)
Kontrol positif- a 0.142 3.632 3.6075 0.03465 17.552%
Kontrol positif- b 0.140 3.583
Kontrol negatif-a 0.172 4.363 4.3755 0.01768 0%
Kontrol negatif- b 0.173 4.388
Maserasi 50 ppm-a 0.025 0.778 0.776 0.01697 82.265%
Maserasi 50 ppm-b 0.024 0.754
Maserasi 100 ppm-a 0.046 1.290 1.3025 0.01768 70.232%
Maserasi 100 ppm-b 0.047 1.315
Maserasi 200 ppm-a 0.056 1.534 1.473 0.08627 66.335%
Maserasi 200 ppm-b 0.051 1.412
Maserasi 500 ppm-a 0.034 0.998 0.998 0.000 77.191%
Maserasi 500 ppm-b 0.034 0.998
Maserasi 1000 ppm-a 0.072 1.924 1.8145 0.15486 58.530%
Maserasi 1000 ppm-b 0.063 1.705
Sokletasi 50 ppm-a 0.082 2.168 2.217 0.0693 49.331%
Sokletasi 50 ppm-b 0.086 2.266
Sokletasi 100 ppm-a 0.089 2.339 2.339 0.000 46.543%
Sokletasi 100 ppm-b 0.089 2.339
Sokletasi 200 ppm-a 0.069 1.851 1.9365 0.12092 55.742%
Sokletasi 200 ppm-b 0.076 2.022
Sokletasi 500 ppm-a 0.079 2.095 2.1195 0.03465 51.560%
Sokletasi 500 ppm-b 0.081 2.144
Sokletasi 1000 ppm-a 0.096 2.510 2.510 0.000 42.635%
Sokletasi 1000 ppm-b 0.096 2.510
Sonikasi 50 ppm-a 0.052 1.437 1.51 0.10324 65.490%
Sonikasi 50 ppm-b 0.058 1.583
Sonikasi 100 ppm-a 0.059 1.607 1.607 0.000 63.272%
Sonikasi 100 ppm-b 0.059 1.607
Sonikasi 200 ppm-a 0.064 1.729 1.8265 0.13789 58.256%
Sonikasi 200 ppm-b 0.072 1.924
Sonikasi 500 ppm-a 0.051 1.412 1.534 0.17253 64.941%
Sonikasi 500 ppm-b 0.061 1.656
Sonikasi 1000 ppm-a 0.080 2.120 2.2175 0.13789 49.320%
Sonikasi 1000 ppm-b 0.088 2.315
99
Lampiran 6. Hasil uji antioksidan (DPPH) ekstrak etanol biji kurma.
Tabel 19. Penentukan kandungan antioksidan dengan metode DPPH
Contoh perhitungan IC50 sampel maserasi ekstrak etanol (ulangan 1)
Sampel Konsentrasi
(ppm)
Absorbansi % Inhibisi IC50 (ppm) IC50(ppm)
(Mean±SD) I II I II I II
Maserasi
Blanko 0.221 0.216 - -
6.541
5.696
6.119 ± 0.597
0.25 0.212 0.213 4.072 1.388
0.5 0.213 0.215 3.620 0.463
1 0.199 0.199 9.955 7.870
2 0.187 0.183 15.385 15.278
4 0.148 0.14 33.032 35.185
8 0.099 0.063 60.181 70.833
16 0.028 0.03 87.330 86.111
Sokletasi
Blanko 0.17 0.167 - -
4.470
4.991
4.731 ± 0.368
0.125 0.153 0.15 10 10.179
0.25 0.135 0.145 20.588 13.174
0.5 0.14 0.143 17.047 14.371
1 0.138 0.136 18.824 18.563
2 0.121 0.128 28.824 23.353
4 0.101 0.096 40.588 42.515
8 0.026 0.044 84.706 73.653
Sonikasi
Blanko 0.279 0.276 - -
10.811
10.302
10.557 ± 0.36
0.5 0.265 0.267 5.018 3.261
1 0.261 0.257 6.452 6.884
2 0.243 0.248 12.903 10.145
4 0.218 0.217 21.864 21.377
8 0.16 0.165 42.652 40.217
16 0.072 0.079 74.194 71.377
Asam
askorbat
Blanko 0.245 0.264 - -
2.137
2.006
2.072 ± 0.092
0.25 0.229 0.245 6.530 7.197
0.5 0.226 0.231 7.755 12.5
1 0.191 0.198 22.041 25
2 0.132 0.121 46.122 54.166
4 0.01 0.01 95.918 96.212
100
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 =𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑥 100%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 0.25 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.212
0.221 𝑥 100% = 4.072398%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 0.5 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.213
0.221 𝑥 100% = 3.61991%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 1 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.199
0.221 𝑥 100% = 9.954751%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 2 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.187
0.221 𝑥 100% = 15.38462%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 4 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.148
0.221 𝑥 100% = 33.03167%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 8 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.099
0.221 𝑥 100% = 60.181%
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 16 𝑝𝑝𝑚 =0.221 − 0.028
0.221 𝑥 100% = 87.33032%
Diperoleh regresi linier : y = 7.2973 x + 2.268 dengan nilai R2 = 0.9976
IC50 = 7.2973 x + 2.268
50 = 7.2973 x + 2.268
𝑥 =50 − 2.268
7.2973= 6.54105 𝑝𝑝𝑚
IC50 sampel maserasi ekstrak etanol (ulangan 1)sebesar 6,54105 ppm.
Perhitungan standar deviasi
Rata –rata : 𝑥 =∑𝑥𝑖
𝑛 =
6.54105 𝑝𝑝𝑚+5.6964 𝑝𝑝𝑚
2= 6.1187 𝑝𝑝𝑚
Standar deviasi : 𝑆𝐷 = √∑(𝑥𝑖−𝑥)2
𝑛−1= √
(6.54105−6.1187)2 +(5.6964−6.1187)2
2−1 = 0.597
101
Gambar 48. Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH
Gambar 49. Kurva ekstrak etanol hasil maserasi ulangan 1
Gambar 50. Kurva ekstrak etanol hasil maserasi ulangan 2
blanko dpph.Sample
Name Description
450 700500 550 600 650
0.40
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
nm
A515.33nm, 0.24A
y = 7.2973x + 2.268R² = 0.9976
0
20
40
60
80
0 5 10
% in
hib
isi
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
y = 9.0269x - 1.4209R² = 0.9992
0
20
40
60
80
0 5 10
% In
hib
isi
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
Linear (%inhibisi)
102
Gambar 51. Kurva ekstrak etanol hasil sokletasi ulangan 1
Gambar 52. Kurva ekstrak etanol hasil sokletasi ulangan 2
Gambar 53. Kurva ekstrak etanol hasil sonikasi ulangan 1
y = 9.2792x + 8.5187R² = 0.9902
0
20
40
60
80
100
0 5 10
% In
hib
isi
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
y = 7.9362x + 10.39R² = 0.9992
0
20
40
60
80
0 5 10
% In
hib
isi
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
y = 4.3978x + 2.4551R² = 0.996
0
20
40
60
80
0 5 10 15 20
% In
hib
isi
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
Linear (%inhibisi)
103
Gambar 54. Kurva ekstrak etanol hasil sonikasi ulangan 2
Gambar 55. Kurva asam askorbat ulangan 1
Gambar 56. Kurva asam askorbat ulangan 2
y = 4.5166x + 3.4683R² = 0.9959
0
20
40
60
80
0 5 10 15 20%
Inh
ibis
i
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
Linear (%inhibisi)
y = 24.409x - 2.1599R² = 0.9978
0
20
40
60
80
100
120
0 2 4 6
% In
hib
iai
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
Linear (% inhibisi)
y = 24.071x + 1.7045R² = 0.9955
0
20
40
60
80
100
120
0 2 4 6
% In
hib
isi
Konsentrasi (ppm)
% inhibisi
Linear (% inhibisi)
104
Lampiran 7. Hasil uji total fenolik
Gambar 57. Penentuan panjang gelombang maksimum asam galat
Tabel 20. Pengukuran absorbansi asam galat
Gambar 58. Kurva standar asam galat
standar 100 ppm.Sample
Name
asam galat
Description
500 900600 700 800
0.30
0.14
0.16
0.18
0.20
0.22
0.24
0.26
0.28
nm
A
750.95nm, 0.25A
Konsentrasi (ppm) Absorbansi (A)
0 0.000
10 0.017
20 0.044
40 0.096
60 0.120
80 0.217
100 0.266
y = 0.0027x - 0.0077R² = 0.9977
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0 50 100 150
Ab
sorb
ansi
(A
)
Konsentrasi (ppm)
Series1
Linear (Series1)
105
Tabel 21. Penentuan kandungan total fenolik
Sampel
Absorbansi Pengen
ceran
Konsentrasi Kadar total fenolik
(Mg GAE/g sampel) Kadar total fenolik
(Mg GAE/g sampel)
(Mean ± SD) 1 2 1 2 1 2
Maserasi
ekstrak
etanol
0.016
0.019
100
8.7777
9.8888
877.77
988.88
933.325 ± 78.566
Sokletasi
ekstrak
etanol
0.018
0.019
100
9.5185
9.8888
951.85
988.88
970.365 ± 26.184
Sonikasi
ekstrak
etanol
0.014
0.016
100
8.0370
8.7777
803.70
877.77
840.735 ± 52.375
Maserasi
ekstrak n-
heksana
0.027
0.026
-
12.8518
12.4815
12.8518
12.4815
12.666 ± 0.262
Sokletasi
ekstrak n-
heksana
0.043
0.031
-
18.7777
14.3333
18.7777
14.3333
16.555 ± 3.143
Sonikasi
ekstrak n-
heksana
0.033
0.029
-
15.0740
13.5926
15.0740
13.5926
14.333 ±3.048
Contoh perhitungan kadar total fenolik
Konsentrasi sampel (ppm)
Misal Absorbansi maserasi ekstrak etanol (ulangan 1) = 0.016
Subsitusi absorbansi ke persamaan garis regresi y = a x + b
y = 0.0027 x – 0.0077
𝑥 =0.016+0.0077
0.0027 = 8.777 𝑝𝑝𝑚
Total fenolik sampel (mg GAE/g sampel )
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑓𝑒𝑛𝑜𝑙𝑖𝑘 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 =𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (
𝑚𝑔𝐿 )
𝑀𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔) 𝑥 𝑉𝑜𝑙. 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟 (𝐿) 𝑥 𝐹𝑝
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑓𝑒𝑛𝑜𝑙𝑖𝑘 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 =8.7777 (
𝑚𝑔𝐿 )
0.01 𝑔 𝑥 0.01𝐿 𝑥 100 = 877.77 𝑚𝑔𝐺𝐴𝐸/𝑔𝑟 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
106
Lampiran 8. Hasil uji total flavonoid
Gambar 59. Penentuan panjang gelombang maksimum kuersetin
Tabel 22. Pengukuran absorbansi kuersetin
Konsentrasi (ppm) Absorbansi (A)
0 0.000
10 0.229
20 0.558
30 0.884
40 1.188
50 1.501
60 1.767
Gambar 60. Kurva standar kuersetin
y = 0.0303x - 0.0327R² = 0.9985
-0.5
0
0.5
1
1.5
2
0 20 40 60 80
Ab
sorb
ansi
(A
)
Konsentrasi (ppm)
Series1
107
Tabel 23. Penentuan kandungan total flavonoid
Contoh perhitungan kadar total flavonoid
Konsentrasi sampel (ppm)
Misal Absorbansi maserasi ekstrak etanol (ulangan 1) = 0.018
Subsitusi absorbansi ke persamaan garis regresi y = a x + b
y = 0.0303x – 0.0328
𝑥 =0.018+0.0328
0.0303 = 1.677 𝑝𝑝𝑚
Total flavonoid sampel (mg QE/g sampel )
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑓𝑙𝑎𝑣𝑜𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 =𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (
𝑚𝑔𝐿 )
𝑀𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔) 𝑥 𝑉𝑜𝑙. 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟 (𝐿) 𝑥 𝐹𝑝
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑓𝑙𝑎𝑣𝑜𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 =1.677 (
𝑚𝑔𝐿 )
0.0022 𝑔 𝑥 0.02𝐿 = 15.242 𝑚𝑔
𝑄𝐸
𝑔𝑟𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
Lampiran 9. Optimasi GC-MS
Sampel
Absorbansi Konsentrasi Kadar total flavonoid
(Mg QE/g sampel) Kadar total flavonoid
(Mg QE/g sampel)
(Mean ± SD) 1 2 1 2 1 2
Maserasi ekstrak
etanol
0.018
0.016
1.677
1.611
15.242
14.642
14.942 ± 0.424
Sokletasi ekstrak
etanol
0.023
0.024
1.842
1.875
16.014
16.300
16.157 ± 0.203
Sonikasi ekstrak
etanol
0.008
0.007
1.347
1.314
11.709
11.422
11.566 ± 0.203
Maserasi ekstrak
n-heksana
0.000
0.000
1.083
1.083
8.327
8.327
8.327 ± 0
Sokletasi ekstrak
n-heksana
0.000
0.000
1.083
1.083
8.327
8.327
8.327 ± 0
Sonikasi ekstrak
n-heksana
0.000
0.000
1.083
1.083
8.327
8.327
8.327 ± 0
108
COLUMN
Capillary Column
Model number : AGILENT
Column type : HP- 5 MS 60 m x 0.25 µm x 0.25 µm
Component Colomn : 5% phenyl – 95% methylpolyxiloxane
Max. temperature : 325 oC
Nominal length : 59.0 m
Nominal diameter : 250.00 µm
Nominal film thickness : 0.25 µm
Mode : Constant flow
Initial flow : 1 mL/min
Nominal init pressure : 20.369 psi
Average velocity : 26.821 cm/sec
Inlet : Front inlet
Outlet : MSD
Outlet pressure : Vacuum
FRONT INLET
EKSTRAK N-HEKSANA
Mode : Split
Initial temperature : 290 oC
Pressure : 20.369 psi
Splir ratio : 100 : 1
Split flow : 100 mL/min
Total flow : 104 mL/min
Gas saver : ON
Saver flow : 20.0 mL/min
Saver time : 2.00 min
Gas type : Helium
EKSTRAK ETANOL
Mode : Split
Initial temperature : 290 oC
Pressure : 20.369 psi
Split ratio : 300 : 1
Split flow : 300 mL/min
Total flow : 304 mL/min
Gas saver : ON
Saver flow : 20.0 mL/min
Saver time : 2.00 min
Gas type : Helium
Lampiran 10. Korelasi kadar total fenolik dan flavonoid ekstrak etanol biji kurma
dengan aktivitas antioksidasi
109
Tabel 24. Korelasi total fenolik dengan aktivitas antioksidasi (IC50) Correlations
IC_50 Total_Fenolik
IC_50
Pearson Correlation 1 -.990**
Sig. (2-tailed) .000
6 N 6
Total_Fenolik
Pearson Correlation -.990** 1
Sig. (2-tailed) .000
N 6 6
**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).
Tabel 25. Korelasi total flavonoid dengan aktivitas antioksidasi (IC50) Correlations
IC_50 Total_flavonoid
IC_50
Pearson Correlation 1 -.972**
Sig. (2-tailed) .001
N 6 6
Total_flavonoid
Pearson Correlation -.972** 1
Sig. (2-tailed) .001
N 6 6
**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).
Tabel 26. Korelasi total fenolik dengan total flavonoid Correlations
Total_fenolik Total_flavonoid
Total_fenolik
Pearson Correlation 1 .994**
Sig. (2-tailed) .000
N 6 6
Total_flavonoid
Pearson Correlation .994** 1
Sig. (2-tailed) .000
N 6 6
**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).
Lampiran 11. Korelasi kadar total fenolik dan flavonoid ekstrak n-heksana biji
kurma dengan aktivitas antioksidasi
Tabel 27. Korelasi total fenolik dengan aktivitas antioksidasi (% daya hambat) Correlations
110
daya_hambat total_fenolik
daya_hambat
Pearson Correlation 1 .467
Sig. (2-tailed) .351
N 6 6
total_fenolik
Pearson Correlation .467 1
Sig. (2-tailed) .351
N 6 6
Tabel 28. Korelasi total flavonoid dengan aktivitas antioksidasi (% daya hambat) Correlations
daya_hambat total_flavonoid
daya_hambat
Pearson Correlation 1 .064
Sig. (2-tailed) .904
N 6 6
total_flavonoid
Pearson Correlation .064 1
Sig. (2-tailed) .904
N 6 6