praktikum biokimia muskuloskeletal

8/10/2019 Praktikum biokimia muskuloskeletal

1/14

Tujuan Praktikum

Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui struktur, sifat-sifat asam-asam amino, peptide dan

protein; mengetahui adanya ikatan peptida maupun sifat-sifat tertentu dari asam amino

dengan menggunakan reaksi warna dan mengetahui hasil reaksi pengendapan protein oleh

asam, reagen alkaloid, alkohol dan reaksi warna.

Tinjauan Pustaka

Sebagian besar ilmu kimia organisme hidup menyangkut 5 golongan senyawa utama, yaitu:

karbohidrat, lipida, mineral, asam nukleat dan protein. Protein menentukan kebanyakan sifat-

sifat yang ditemukan dalam kehidupan. Protein menentukan metabolisme, membentuk

jaringan dan membertikan kemungkinan bagai kita untuk bergerak. Protein juga berfungsi

mengangkut senyawa-senyawa dan melindungi kita dari penyebaran mikroorganisme yang

merugikan.

Bahkan sifat-sifat yang diturunkan oleh suatu organisme untuk membentuk bermacam-macam jenis protein dengan kecepatan yang berbeda (Gilvery, 1996). Selain itu proses kimia

dalam tubuh dapat berlangsung dengan baik karena adanya enzim, suatu protein yang

berfungsi sebagai biokatalis. Di samping itu hemoglobin dalam butir darah merah (eritrosit)

yang berfungsi mengangkut oksigen dari paru-paru ke seluruh jaringan tubuh adalah salah

satu jenis protein (Riawan, 1990).

Tumbuhan membentuk protein dari CO2, H2O dan senyawa nitrogen. Hewan yang memakan

tumbuhan mengubah protein nabati menjadi protein hewani. Di samping digunakan untuk

pembentukan sel-sel tubuh, protein juga dapat digunakan sebagai sumber energi bila tubuh

kita kekurangan karbohidrat dan lemak. Komposisi rata-rata unsur kimia yang terdapat dalam

protein ialah sebagai berikut: karbon 50%, hydrogen 7%, oksigen 23%, nitrogen 16%,

belerang 0-3% dan fosfor 0-3%. Dengan berpedoman pada kadar nitrogen sebesar 16%, dapat

dilakukan penentuan kandungan protein dalam suatu bahan makanan .

Protein memiliki molekul besar dengan berat molekul bervariasi antara 5000 hingga jutaan.

Dengan cara hidrolisis oleh asam atau oleh enzim, protein akan menghasilkan asam-asam

amino. Ada 20 jenis asam amino yang terdapat dalam molekul protein. Asam-asam amino ini

terikat satu dengan lain oleh ikatan peptide. Protein mudh dipengaruhi oleh suhu tinggi, pH,

dan pelarut organik (Riawan, 1990)

Asam amino adalah senyawa yang mempunyai gugus karbkosil (-COOH) dan gugus amino (-NH2). Rumus umum untuk asam amino adalah:

NH2

H-C-COOH

R

Dari rumus umum tersebut dapat dilihat bahwa atom karbon alfa adalah atom karbon

asimetrik, kecuali bila R adalah atom H. Oleh karena itu asam amino memiliki sifat memutar

bidang cahaya terpolarisasi atau aktivitas optik. Oleh karena aton karbon asimetrik, maka

molekul asam amino mempunyai dua konfigurasi D dan L. Molekul asam amino dikatakan

mempunyai konfigurasi L apabila gugusNH2 terdapat di sebelah kiri atom karbon alfa. Bila

posisi gugusNH2 di sebelah kanan, molekul asam amino itu memiliki konfigurasi D.


2/14

Hal ini seperti konfigurasi D-gliseraldehida yang memiliki gugusOH di sebelah kanan atom

karbon asimetrik. Asam-asam amino yang terdapat pada protein umumnya mempunyai

konfigurasi L. Asam amino yang mempunyai konfigurasi D dapat diperoleh dari organisme

mikro, misalnya D-asam glutamate dari Bacillus anthracis, D-alanin terdapat pula dalam

dinding sel bakteri. D-asam amino dapat pula diperoleh sebagai hasil hidrolisis antibiotic

gramisidin atau basitrasin. Konfigurasi asam amino tidak ada hubungannya dengan arahputaran cahaya terpolarisasi (Riawan, 1990).

Sifat-sifat Asam Amino

Seperti yang sudah diutarakan di atas, asam-asam alfa amino bersifat optis aktifkecuali glisin

(asam amino asetat). Pada umumnya mereka larut dalam air dan tidak larut dalam pelarut

organic non-polar seperti eter, aseton dan chloroform. Sifat asam amino ini berbeda dengan

asam karboksilat maupun dengan sifat amina. Asam karboksilat alifatik maupun aromatic

yang terdiri atas beberapa atom karbon umumnya kurang larut dalam air tetapi larut dalam

pelarut organik. Demikian pula amina pada umumnya tidak larut dalam air, tetapi larut dalam

pelarut organik(Riawan, 1990).

Apabila asam amino larut dalam air, gugus karboksilat akan melepaskan ion H+, sedangkan

gugus amina akan menerima ion H+ sebagaimana yang dituliskan di bawah ini

-COOH -COO- + H+

-NH2 + H+ -NH3

Oleh adanya kedua gugus tersebut, asam amino dalam larutan dapat membentuk ion yang

bermuatan positif dan juga negatif (zwitterions) atau ion amfoter (Riawan, 1990). Bila kadar

ion hydrogen meningkat, senyawa tersebut akan bersifat basa karena gugusan karboksilat

akan mengikat ion H+ sehingga terbentuklah gugusan COOH yang tidak bermuatan.

Gugusan ammonium akan menyebabkan ion tersebut bermuatan positif (bentuk kation).

Sebaliknya zwitterions akan bersifat asam karena gugus ammonium akan melepas ion H+

bila kadar ion H+ menurun, sehingga terbentuklah gugusan ammonium yang tidak

bermuatan. Akibatnya molekul tersebut menjadi bermuatan negatif (bentuk anion) (Gilvery,

1996).

Dalam suatu sistem elektroforesisyang mempunyai elektroda positif dan negatif, asam amino

akan bergerak menuju elektroda yang berlawanan dengan muatan ion asam amino yang

terdapat dalam larutan.

Oleh karena muatan itu tergantung pada pH larutan, maka pH larutan dapat diatur sedimikian

rupa sehingga ion asam amino tidak bergerak ke arah elektroda positif maupun elektroda

negatif dalam sistem elektroforesis. pH yang demikian itu disebut titik isolistrik (Riawan,

1990).

Sebagian dari molekul-molekul mungkin mempunyai muatan negatif, tetapi segera diimbangi

oleh molekul-molekul lain dengan muatan positif yang sama banyak: jumlah molekul

zwitterions pada titik isolistrik adalah yang paling banyak (Gilvery, 1996).

Pada pH di atas titik isolistrik protein bermuatan negatif, sedangkan di bawah titik isolistrik

protein bermuatan positif. Oleh karena itu untuk mengendapkan protein dengan ion logamdiperlukan pH larutan di atas titik isolistrik, sedangkan pengendapan dengan ion negatif


3/14

memerlukan pH di bawah titik isolistrik. Ion-ion positif yang mengendapkan protein antara

lain Ag+, Ca++, Zn++, Hg++, Fe++, Cu++ dan Pb++.

Sedangkan ion-ion negatif yang dapat mengendapkan protein ialah ion salisilat, trikloroasetat,

pikrat, tanat dan sulfosalisilat. Berdasarkan sifat tersebut putih telur atau susu dapat

digunakan sedagat antidote atau penawar racun apabila seseorang keracunan logam berat(Riawan, 1990).

Ditinjau dari strukturnya, protein dapat dibagi dalam dua golongan besar, yaitu golongan

protein sederhana dan protein gabungan. Protein sederhana adalah protein yang hanya terdiri

atas molekul asam-asam amino, sedangkan protein gabungan adalah protein yang terdiri atas

protein dan gugus bukan protein. Gugus ini disebutgugus prostetikdan terdiri atas

karbohidrat, lipid atau asam nukleat (Riawan, 1990).

Protein sederhana dapat dibagi dalam dua bagian menurut bentuk molekulnya, yaitu protein

fiber dan protein globular. Protein fiber mempunyai bentuk molekul panjang seperti serat

atau serabut, sedangkan protein globular berbentuk bulat (Riawan, 1990).

Molekul protein fiber terdiri atas beberapa rantai polipeptida yang memanjang dan

dihubungkan satu sama lain oleh beberapa ikatan silang sehingga merupakan bentuk serat

atau serabut yang stabil. Sifat umum protein fiber ialah tidak larut dalam air dan sukar

diuraikan dengan enzim (Riawan, 1990).

Kolagenadalah suatu jenis protein yang terdapat pada jaringan ikat. Protein ini mempunyai

struktur heliks tripel. Kolagen tidak larut dalam air dan tidak diuraikan dengan enzim. Namun

kolagen dapat diubah oleh pemanasan dalam air mendidih oleh larutan asam atau basa encer

menjadi gelatin yang mudah larut dan mudah dicernakann. Hampir 30% protein tubuh adalah

kolagen (Riawan, 1990).

Keratinadalah protein yang terdapat dalam bulu domba, sutera alam, rambut, kulit, kuku.

Apabila dipanaskan dengan air mendidih dan diregangkan maka konformasi berubah menjadi

lembaran berlipat parallel, karena ikatan hydrogen yang menunjang struktur terputus

(Riawan, 1990).

Protein globularumumnya berbentuk bulat atau elips dan terdiri atas rantai polipeptida yang

berlipat. Pada umumnya gugus R polar terletak di sebelah luar rantai peptida, sedangkan

gugus R yang hidrofob terletak di sebelah dalam molekul protein. Protein globular pada

umumnya mempunyai sifat dapat larut dalam air, dalam larutan asm dan basa dan etanol.Beberapa jenis protein globular adalah albumin, globulin, histon dan protemin (Riawan,

1990).

Albuminadalah protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas.

Larutan albumin dalam air dapat diendapkan dengan penambahan amonium sulfat hingga

jenuh. Albumin antara lain terdapat pada serum darah dan bagian putih telur (Riawan, 1990).

Globulinmempunyai sifat sukar larut dalam air murni, tetapi dapat larut dalam larutan garam

netral, misalnya larutan NaCl encer. Larutan globulin dapat diendapkan oleh penambahan

garam amonium sulfat hingga setengah jenuh. Globulin dapat diperoleh dengan jalan

mengekstrasikannya dengan larutan garam (5-10%) NaCl, kemudian ekstrak yang diperolehdiencerkan dengan penambahan air. Seperti albumin, globulin juga dapat terkoagulasi oleh


4/14

panas. Globulin antara lain tertdapat dalam serum darah, pada otot dan jaringan lain

(Riawan, 1990).

Protein gabunganadalah protein yang berikatan dengan senyawa yang bukan protein. Gugus

bukan protein ini disebut gugus prostetik. Ada beberapa jenis gabungan antara lain

mukoprotein, glikoprotein, lipoprotein dan nucleoprotein (Riawan, 1990).

Reaksi warna untuk asam amino spesifik

Alat dan Bahan

Alat - Alat

Tabung reaksi

Rak tabung reaksi

Pengangas air

Alat vortex

Gelas ukur

Pipet tetes

Gelas pengukur

Lampu spiritus dan penjepit tabung

Bahan-bahan

Larutan encer protein (albumin)

Larutan ZnSO4

Asam sulfosalisilat 20%

Larutan esbachKalium ferosianida 5%
http://3.bp.blogspot.com/_9MTK5JQmGDA/SuBW3D6QaaI/AAAAAAAAAP4/5cpgeXiRz8I/s1600-h/reaksi+asam+amino.jpg


5/14

Asam asetat glasial

Asam wolframat

Asam metafosfat

Larutan (NH4)SO4

Alkohol pekat, KOH 10%Larutan kasein 2%

Larutan ninhidrin 0,1%,

Larutan triptofan 0,01%

Larutan merkurisulfat 1%

Larutan NaNO2

Larutan formaldehida encer

Larutan H2SO4

Larutan HNO3 pekat

Larutan amoniak

Klorofenol merah

Na2CO3 2%

HNO3 encer

Larutan Na-hipobromida

Asam sulfosalisilat

Larutan kasein encer

Indikator brom kresel hijau

Asam asetat 2%

Larutan molibdat

GelatinEs batu

Larutan amonium sulfat ferosianida.

Cara Kerja

Pengendapan

1.1Pengendapan dengan menggunakan logam beratmelalui tahap-tahap sebagai berikut : ke

dalam 2 cc larutan encer protein (albumin) ditambahkan setetes demi setetes larutan ZnSO4

encer, setelah itu catat perubahan yang terjadi, kemudian tambahkan pereaksi tersebut sampai

berlebihan, endapan yang terjadi akan larut kembali.

1.2Pengendapan dengan menggunakan pereaksi alkaloidadalah sebagai berikut : ke dalam

empat tabung yang berbeda, masing-masing dimasukkan 2 ml larutan encer protein

(albumin). Kemudian pada tabung pertama ditambahkan pereaksi 1-2 tetes asam sulfoslisilat

20%, pada tabung kedua ditambahkan esbach sebanyak 2 ml, pada tabung ketiga

ditambahkan kalium ferosianida dan 5 tetes asam asetat glasial tetes demi tetes hingga

berlebihan, pada tabung keempat ditambahkan asam wolframat dan asam metafosfat hingga

terbentuk endapan. Setelah itu amati perubahan yang terjadi pada masing-masing tabung.


6/14

1.3Pengendapan dengan menggunakan garam netral dan alkoholmelalui tahap-tahap

sebagai berikut: tambahkan (NH4)2SO4 padat ke dalam 5 ml larutan protein encer (albumin).

Lama-kelamaan akan terjadi endapan yang jika diencerkan akan larut kembali. Pada tabung

yang berbeda, masukkan satu hingga dua tetes larutan protein pekat dan 2 ml alkohol pekat.

Endapan yang terjadi akan larut kembali jika diencerkan.

Reaksi warna

2.1 Uji Biuret

Dua millimeter larutan protein encer (albumin) dalam tabung reaksi dituangi dengan 2 ml

KOH 10% (atau 1 ml NaOH 40%). Tambahkan beberapa tetes CuSO4 0,1%, setelah itu amati

warnanya.

2.2 Uji Ninhidrin

Ke dalam tabung reaksi yang berisi 4 ml larutan kasein 2% ditambahkan 1 ml larutan 0,1%

ninhidrin. setelah divortex, didihkan dengan menggunakan lampu spirtus selama 1 menit.

Kemudian dicatat warna yang timbul.

2.3 Uji Triptofan

0,4 ml larutan triptofan 0,01% dalam tabung reaksi ditambahkan dengan pereaksi C setelah

itu campuran tersebut dipanaskan pada suhu 65oC selama 15 menit dalam penangas air.

Kemudian perubahan yang timbul diamati.

2.4 Uji MillonDalam 1 ml larutan protein encer ditambahkan 1 ml larutan merkurisulfat, setelah dipanaskan

hingga mendidih, perubahan yang terjadi diamati. Setelah itu didinginkan di bawah air

mengalir dan ditambahkan setetes demi setetes laritan NaNO2 1%, kemudian panaskan

kembali dan diamati perubahannya.

2.5 Triptofan (Hopkins-Cole)

Dituangkan 1 ml larutan protein encer (albumin) dengan 1 ml larutan formaldehida encer

pada tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 1 ml H2SO4 pekat melalui dinding tabung

sehingga terbentuk dua lapisan. Kemudian perubahan yang terjadi diamati dan setelah itu

tabung digojok.

2.6 Xanthoprotein

Sebuah tabung reaksi diisi dengan 3 ml larutan protein dan I ml HNO3 pekat, kemudian

campuran tersebut dididihkan dan kemudian langsung didinginkan. Isi tabung tersebut dibagi

ke dalam dua tabung yang berbeda. Pada salah satu tabung diisi dengan amoniak. Amati

perubahan yang terjadi dan dibandingkan.

Semua percobaan uji warna dilakukan pada larutan protein encer (albumin) dan gelatin.

Hidrolisis Protein


7/14

3.1 Metaprotein

Ke dalam tabung reaksi dituangkan 5 ml larutan protein (asam) dan setetes klorofenol merah

sehingga larutan menjadi kuning. Kemudian ditambahkan Na2CO3 2% hingga tercapai titik

isolistrik (pada pH 5,4 dan warna larutan menjadi merah muda). Perubahan yang terjadidiamati. Setelah itu larutan dibagi menjadi dua tabung. Tabung pertama dimasak dan

kemudian dibagi menjadi dua tabung lagi. Tabung yang pertama dari tabung yang pertama

dituangi satu tetes HNO3 encer dan tabung kedua dari tabung pertama dituangi dengan 1

hingga 2 tetes Na2CO3. Kemudian dicatat perubahan kelarutannya. Tabung kedua

ditambahkan Na2CO3 secara berlebihan dan kemudian dicatat perubahnnya.

3.2 Proteosa

Ke dalam beberapa ml larutan protein encer (albumin) tambahkan larutan (NH4)2 SO2

hingga jenuh dan kemudian didihkan. Pisahkan endapan yang terjadi kemudian endapan

dilarutkan dengan air panas dan digojok. 1 ml larutan itu diuji dengan menggunakan uji

biuret dan sisa filtratnya diuji dengan panas dan ferosianida.

Perbedaan sifat bermacam-macam protein

4.1 Albumin dan Globulin

Ke dalam dua tabung reaksi yang masing-masing berisi 2 ml serum encer ditambahkan 1

sampai 2 tetes asam sulfosalisilat pada tabung pertama dan 1 tetes klorofenol merah pada

tabung yang kedua. Kemudian warna endapan yang terjadi dicatat. Pada tabung kedua

ditambahkan asam asetat 2% dengan hati-hati hingga warna larutan hilang. Kemudian tabungkedua tersebut dimasak. Maka akan terjadi endapan. Setelah itu tabung kedua didinginkan.

Larutan tadi dibagi ke dalam dua tabung yang berbeda. Pada tabung pertama ditambahkan 2

ml asam nitrat encer dan pada tabung kedua ditambahkan 2 ml Na2CO3 encer. Perubahan

yang terjadi diamati.

4.2 Kasein

Ke dalam sebuah tabung reaksi yang berisi 5 ml larutan kasein encer yang alkalis

ditambahkan indicator brom kresel hijau. Kemudian setetes demi setetes asam asetat 2%

ditambahkan hingga warna larutan menjadi agak kehijau-hijauan. Endapan yang terjadi

dicatat.

4.3 Uji Newman terhadap P dalam Kasein

Ke dalam tabung reaksi yang berisi 2 ml kasein dituangkan 5 tetes HNO3 pekat dan 10 tetes

H2SO4 pekat. Kemudian tabung dipanaskan pada lampu spirtus hingga keluar asap putih.

Amati perubahan warna yang terjadi. Jika masih berwarna coklat atau hitam, maka dengan

hati-hati asam sulfat pekat dialirkan melalui dinding tabung secara hati-hati. Kemudian

larutan dipanaskan kembali hingga tidak berwarna. Tabung didinginkan dan sesudah itu

ditambahkan ammonium molibdat 2 ml. Setelah itu panaskan hingga 10 menit dan catat

warna endapan yang terjadi.


8/14

4.4 Gelatin

Sedikit gelatin dicampurkan dengan 10 ml air dalam sebuah tabung. Campuran tersebut

digojok hingga homogen. Setelah itu larutan dimasah pada penangas air selama 10 menit.

Dan sesudah itu larutan didinginkan dalam es batu. Kemudian, gelatin diambil sebanyak 5 ml

dan di tambahkan 1 ml ammonium sulfat ferosianida dan asam asetat beberapa tetes. Amatiperubahan yang terjadi.

Sesudah itu, gelatin yang tersisa dilakukan uji warna dan penambahan ammonium sulfat

padat.

Hasil Pengamatan

Pengendapan

1.1 Dengan menggunakan logam berat

Tabung 1. Larutan yang terjadi keruh setelah ditetesi sebanyak 13 kali dan warna endapannya

menjadi putih encer. Setelah tetesan yang ke -50 endapan putih hilang dan warna larutan

menjadi bening.

Tabung 2. larutan menjadi keruh dan terjadi endapan putih setelah ditetesi 10 tetes, setelah

tetesan ke 40 larutan menjadi bening namun masih terdapt endapan.

Albumin dengan kasein akan mengalami pengendapan karena mengalami titik isolistrikakibat reaksi antara albumin dan kasein (basa sehingga laritan bermuatan negatif) dengan Zn

mengakibatkan terjadinya denaturasi dan koagulasi. Warna keruh disebabkan karena terjadi

ikatan antara Zn dengan albumin menjadi Zn proteinat, Zn dapat menjenuhkan larutan hingga

pH larutan berada di atas pH isolistrik sehingga gumpalan larut kembali. Hal ini sesuai

dengan dasar teori yang dikemukakan oleh Riawan (1990), yang menyatakan bahwa logam

berat dapat mengendapkan protein dengan cara menaikkan pH di atas titik isolistrik.

1.2 Pengendapan dengan garam netral dan alkohol

Tabung 1. sebelum dikocok, ada endapan albumin di dasar tabung dan setelah dikocok,

endapan larut kembali

Tabung 2. warna larutan menjadi keruh setelah larutan albumin dicampur dengan alcohol

panas. Setelah tetesan aquades yang ke 70, warna larutan menjadi agak bening

Albumin mengalami denaturasi akibat adanya pengocokan dengan kuat. Denaturasi adalah

perubahan dalam struktur sekunder, tersier dan kkuartener dari suatu protein, baik itu dalam

bentuk enzim maupun hormon. Karena ikatan peptide tidak pecah, maka struktur primer tidak

terganggu. Selain dengan pengocokan yang kuat, denaturasi juga bias terjadi melalui kondisi

adanya penambahan larutan organik, garam dari logam berat, larutan urea dan lain-lain. Pada


9/14

percobaan di atas, albumin mengalami denaturasi sebab garam netral yang digunakan

(ammonium sulfat) dan senyawa organic (alkohol pekat) bersifat higroskopis yang dapat

mengikat air. Molekul air dalam albumin diikat oleh garam dan alcohol pekat sehingga

albumin tersebut menggumpal. Setelah pengocokan kuat dan penambahan aquades, endapan

akan larut kembali karena albumin sudah mendapatkan molekul air dari aquades yangditambahkan. Hal ini sesuai dengan tinjauan pustaka yang menyatakan bahwa salah satu sifat

protein adalah mengalami denaturasi dan koagulasi.

1.3 Pengendapan dengan menggunakan alkaloid

Tabung 1. Pada hasil percobaan, warna larutan menjadi berwarna putih susu.

Tabung 2. Pada hasil percobaan, terjadi endapan berwarna kuning.

Tabung 3. Terjadi endapan putih

Tabung 4. Terjadi endapan dengan asam wolframat tetes

Albumin akan mengalami pengendapan karena mengalami titik isolistrik akibat reaksi antara

albumin degan ion-ion negatif mengakibatkan terjadinya denaturasi dan koagulasi. Warna

keruh disebabkan karena terjadi ikatan antara ion salisilat dengan albumin, ion-ion negatif

dapat menjenuhkan larutan hingga pH larutan berada di bawah pH isolistrik sehingga

gumpalan larut kembali. Hal ini sesuai dengan dasar teori yang dikemukakan oleh Riawan

(1990), yang menyatakan bahwa logam berat dapat mengendapkan protein dengan cara

menurunkan pH di bawah titik isolistrik.

Reaksi Warna

2.1 Uji Biuret

Uji Biuret pada gelatin

Setelah 10 tetes mulai berubah warna (terbentuk cincin ungu), setelah pemberian 13 tetes

CuSO4 mulai terdapat cincin ungu di permukaan tabung.

Terjadinya cincin ungu terbentuk dari ikatan antara Cu dan N, unsur N terdapat pada peptida;

menghasilkan CuN yang terjadi dalam suasana basa (melalui penggunaan KOH atau NaOH).

Makin panjang suatu ikatan peptida, maka warna ungu yang terbentuk makin jelas dan makin

tua. Pada hasil percobaan, apabila tabung reaksi digoyang maka cincin ungunya akan hilang

menyebar yang berarti ikatan peptidanya lepas dan tidak kuat. Uji biuret berlaku untuk

senyawa yang mempunyai ikatan peptida lebih dari satu. Hasil percobaan ini sesuai dengan

tinjauan pustaka Riawan (1990) yang menyatakan bahwa protein memiliki ikatan peptida

yang ditunjukkan dengan adanya cincin ungu.

Uji Biuret pada albumin

Setelah pemberian KOH 10%, terjadi gumpalan putih susu. Setelah penambahan CuSO4


10/14

mulai terdapat cincin ungu muda di permukaan tabung.

Terjadinya cincin ungu terbentuk dari ikatan antara Cu dan N, unsur N terdapat pada peptida;

menghasilkan CuN yang terjadi dalam suasana basa (melalui penggunaan KOH atau NaOH).

Makin panjang suatu ikatan peptida, maka warna ungu yang terbentuk makin jelas dan makintua. Pada hasil percobaan, apabila tabung reaksi digoyang maka cincin ungunya akan hilang

menyebar yang berarti ikatan peptidanya lepas dan tidak kuat. Uji biuret berlaku untuk

senyawa yang mempunyai ikatan peptida lebih dari satu. Hasil percobaan ini sesuai dengan

tinjauan pustaka Gilvery (1996) yang menyatakan bahwa protein memiliki ikatan peptida

yang ditunjukkan dengan adanya cincin ungu.

2.2. Uji Millon

Uji Millon pada gelatin

Sebelum penambahan larutan NaNO3 tidak terdapat endapan dan tidak terjadi perubahan

warna. Setelah penambahan warna larutan menjadi putih dan tidak ada endapan

Percobaan ini kurang berhasil karena seharusnya Hg yang terdapat pada HgSO4 berikatan

dengan NaNO3 membentuk kompleks warna merah. Kegagalan percobaan ini mungkin

karena pipet yang digunakan kurang bersih atau sudah terkontaminasi dengan larutan lain.

Penambahan tetes NaNO3 mungkin juga tidak sama dengan prosedur yang seharusnya

dilakukan. Pada percobaan yang benar, seharusnya tidak terdapat warna merah yang

merupakan indikasi adanya asam amino tirosin. Karena protein yang digunakan adalahgelatin dan gelatin tidak mengandung asam amino tersebut, maka uji Millon tersebut berhasil

negatif.

Uji Millon pada albumin

Sebelum penambahan larutan NaNO3 tidak terdapat endapan dan tidak terjadi perubahan

warna. Setelah penambahan warna larutan menjadi putih keruh dan ada endapan berwarna

merah.

Pada percobaan terdapat warna merah yang merupakan indikasi adanya asam amino tirosin.

Endapan merah yang terjadi tersebut karena merkuri berikatan dengan hiroksi dari albumin

menjadi HgNO3. Karena protein yang digunakan adalah albumin dan albumin mengandung

asam amino tersebut, maka uji Millon tersebut berhasil positif. Hal ini sesuai dengan tinjauan

pustaka Harper (1980) yang menyatakan bahwa reaksi warna Millon bertujuan untuk

mengetahui adanya asam amino tirosin yang ditandai adanya warna endapan merah.

2.3 Uji Hopskin Cole

Uji Hopskin Cole pada gelatin


11/14

Pada hasil percobaan, sebelum tabung reaksi digojog, terbentuk cincin ungu. Setelah digojok,

cincin ungu memudar dan warna larutan menjadi bening.

Uji Hopskin Cole bertujuan untuk mengetahui apakah dalam suatu zat dan senyawa terdapat

asam amino triptofan atau tidak. Pada percobaan ini terdapan warna ungu yang merupakanindikasi adanya gugus triptofan pada gelatin. Untuk mengetahui apakah terdapat asam amino

ini, dengan penambahan formaldehida, aldehid akan berikatan dengan gugus indol asam

amino triptofan membentuk cincin ungu. Percobaan ini sesuai dengan tinjauan pustaka

Harper, 1980 yang menyatakan bahwa reaksi warna Hopskin Cole, bertujuan untuk

mengetahui adanya gugus triptofan yang jika berhasil positif, maka akan menunjukkan

indikasi warna ungu.

Uji Hopskin Cole pada albumin

Pada hasil percobaan, sebelum tabung reaksi digojog, terbentuk cincin ungu yang tipis.

Setelah digojok, terdapat endapan yang berwarna bening ungu.

Uji Hopskin Cole bertujuan untuk mengetahui apakah dalam suatu zat dan senyawa terdapat

asam amino triptofan atau tidak. Pada percobaan ini terdapan warna ungu yang merupakan

indikasi adanya gugus triptofan pada albumin. Untuk mengetahui apakah terdapat asam

amino ini, dengan penambahan formaldehida, aldehid akan berikatan dengan gugus indol

asam amino triptofan membentuk cincin ungu. Percobaan ini sesuai dengan tinjauan pustaka

Harper, 1980 yang menyatakan bahwa reaksi warna Hopskin Cole, bertujuan untuk

mengetahui adanya gugus triptofan yang jika berhasil positif, maka akan menunjukkanindikasi warna ungu.

2.4 Uji Xanthoprotein

Uji Xanthoprotein pada gelatin

Pada hasil percobaan terdapat endapan putih setelah dilakukan pemanasan. Pada tabung

pertama yang ditambah dengan amoniak, warna larutan menjadi berwarna kuning, sedangkan

tabung kedua yang tidak ditambah amoniak tidak berwarna.

Pada dasarnya, uji Xanthoprotein bertujuan untuk mengetahui adanya gugus aromatic

(benzene) yang berupa asam amino tirosin, triptofan dan fenilalanin. Pada uji ini terbentuk

warna kuning yang merupakan indikator adanya asam amino-asam amino tersebut. Hal ini

sesuai dengan dasar teori dan tinjauan pustaka Harper, 1980 yang menyatakan bahwa reaksi

warna Xanthoprotein bertujuan untuk mengetahui adanya gugus aromatik asam amino yang

memiliki gugus aromatik (benzene) yang ditunjukkan dengan adanya warna kuning.

Uji Xanthoprotein pada albumin

Pada hasil percobaan terdapat endapan putih susu setelah dilakukan pemanasan. Pada tabung


12/14

pertama yang ditambah dengan amoniak, warna larutan menjadi berwarna kuning, sedangkan

tabung kedua yang tidak ditambah amoniak tidak berwarna.

Pada dasarnya, uji Xanthoprotein bertujuan untuk mengetahui adanya gugus aromatic

(benzene) yang berupa asam amino tirosin, triptofan dan fenilalanin. Pada uji ini terbentukwarna kuning yang merupakan indikator adanya asam amino-asam amino tersebut. Hal ini

sesuai dengan dasar teori dan tinjauan pustaka Harper, 1980 yang menyatakan bahwa reaksi

warna Xanthoprotein bertujuan untuk mengetahui adanya gugus aromatik asam amino yang

memiliki gugus aromatik (benzene) yang ditunjukkan dengan adanya warna kuning.

2.5 Uji Molisch

Uji Molisch pada gelatin

Pada hasil percobaan tidak terdapat cincin ungu, warna yang terjadi malah hijau tua

Uji Molisch bertujuan untuk mengetahui adanya sakarida dan glikosida pada suatu senyawa

protein. Hasil yang positif seharusnya berwarna ungu. Pada hasil percobaan, warna yang

terjadi adalah hijau tua yang kemungkinan terjadi kontaminasi pipet atau gelatin yang

digunakan terlalu sedikit sehingga tidak tercapai efek yang diinginkan. Kadar karbohidrat

dalam gelatin sedikit. Karbohidrat dengan penambahan asam pekat mengalami dehidrasi

menjadi furfural. Jika furfural ditambahkan Molisch (-naphto) akan mengalami kondensasi

yang membentuk cincin ungu. Hal ini sesuai dengan tinjauan pustaka yang digunakan

(Harper, 1980) yang menyatakan bahwa uji Molisch memberikan reaksi warna jikadireaksikan dengan protein yag mengandung gugus sakarida.

Uji Molisch pada albumin

Pada hasil percobaan setelah ditambah dengan reagen molisch terjadi perubahan warna coklat

susu di bawahnya terjadi endapan putih. Selain itu terdapat endapan ungu kehitaman

Uji Molisch bertujuan untuk mengetahui adanya sakarida dan glikosida pada suatu senyawa

protein. Hasil yang positif seharusnya berwarna ungu. Pada hasil percobaan, warna yang

terjadi. Karbohidrat dengan penambahan asam pekat mengalami dehidrasi menjadi furfural.

Jika furfural ditambahkan Molisch (-naphto) akan mengalami kondensasi yang membentuk

cincin ungu. Hal ini sesuai dengan tinjauan pustaka yang digunakan (Harper, 1980) yang

menyatakan bahwa uji Molisch memberikan reaksi warna jika direaksikan dengan protein

yag mengandung gugus sakarida.

Perbedaan sifat protein

Albumin dan globulin

Tabung 1. Pada hasil percobaan larutan yang terjadi adalah keruh dan terdapat endapan

berwarna putih


13/14

Tabung 2. Setelah penambahan klorofenol red, warna larutan menjadi merah hati

Tabung A. Setelah penambahan asam asetat 2% dan penambahan asam nitrat 2 ml, larutan

menjadi kuning keruh dan endapan yang terjadi tidak larut kembali

Tabung B. Setelah penambahan asam asetat 2% dan penambahan Na2CO3 encer, larutan

menjadi keruh dan ada endapan yang tidak larut.

Serumadalah gabungan dari albumin dan globulin. Asam sulfosalisilat adalah alkaloid yang

bersifat asam dan mengikat protein. Pada albumin, kelarutan protein rendah sehingga

mengendap. Pada tabung kedua penambahan klorofenol pada serum yang mengakibatkan

perubahan warna larutan menjadi merah hati menunjukkan bahwa pH serum bersifat basa.

Klorofenol merupakan indicator pH yang akan berubah warna merah jika larutan bersifat

basa dan akan berwarna kuning jika larutan bersifat asam. Pada tabung A maupun B terjadi

endapan hasil pemanasan yang tidak larut dalam kedua asam yang digunakan (asam nitrat

dan Na2CO3). Endapan tersebut disebut koagulan. Sifat protein yang mengalami koagulasi

(denaturasi protein y ang bersifat irreversible dan permanent) sesuai dengan tinjauan pustaka

yang menyatakan bahwa protein memiliki sifat dapat mengalami koagulasi.

Kasein

Dengan penambahan asam asetat sebanyak 14 tetes tidak terjadi perubahan warna dan tidak

terjadi endapan.

Uji Newman terhadap kasein

Setelah dipanaskan di atas api, larutan menjadi bening dan mengeluarkan asap putih Larutan

menjadi tiga lapis yaitu dari atas ke bawah : bening, putih dan kuning. Setelah didinginkan

dan ditambah dengan ammonium molibdat mengeluarkan warna kuning kehijauan.

Bromkresol hijau merupakan indikator asam basa yang jika ditempatkan pada lingkungan

sedikit asam ataupun basa maka akan berwarna hijau dan jika ditempatkan di lingkungan

asam akan berwarna kuning. Tujuan dari penambahan asam asetat dan NaOH encer adalah

untuk menggumpalkan kasein pada pH isolistriknya (sekitar 4,6) NaOH yang bersifat basa

dan asam asetat yang bersifat asam akan menyebabkan kasein menemukan pH isolistriknya.

Pada uji Newman terhadap kasein, kasein mengalami denaturasi dengan penambahan HNO3

dan H2SO4. Ketika dipanaskan larutan akan mengeluarkan asap, fosfor yang terlepas dari

kasein menyebabkan ia menjadi asam fosfat yang berwarna kuning.

Reaksi pengendapan gelatin cair

Pada hasil percobaan terdapat endapan gelatin

Gelatin mengalami denaturasi setelah ditambahi ammonium sulfat atau kalium ferrosianida.

Ammonium sulfat adalah salah satu garam yang bersifat higroskopis yang dapat menyerap


14/14

air.

Kesimpulan

Protein dapat memberikan reaksi pengendapan untuk logam berat, alkohol pekat, garam danreagen-reagen alkaloid untuk dasar reaksi penetralan muatan, denaturasi, penarikan gugus air

dan titik isolistriknya. Terdapat reaksi-reaksi spesifik untuk protein yang dapat digunakan

untuk identifikasi kandungan protein antara lain uji biuret yang bertujuan untuk menunjukkan

adanya ikatan peptide, reaksi millon yang spesifik untuk tiroksin (gugus hidroksifenol) dan

reaksi triptofan hopskin cole yang spesifik untuk triptofan.

Melalui percobaan tersebut dapat diketahui adanya sifat-sifat protein yaitu mengendap

dengan reagen esbach, mengendap dengan alkohol pekat, memberi hasil positif terhadap

reaksi biuret. Dalam suasana basa, protein bermuatan negatif dan sebaliknya, dalam suasana

asam, protein bermuatan positif.

Denaturasi dapat terjadi karena pemanasan dan penambahan asam atau basa. Mekanisme

penyakit dapat dijelaskan dengan pendekatan biokimia.

Daftar Pustaka

Gilvery, et al. 1996. Biokimia suatu pendekatan fungsional. Edisi 3. Airlangga University

Press: Surabaya

Harper, et al. 1980. Biokimia (Review of Physiological Chemistry). Edisi 17. EGC: Jakarta

Riawan, S. 1990. Kimia Organik.Edisi 1. Binarupa Aksara: Jakarta

http://yukiicettea.blogspot.com/2009/10/biochemistry-laporan-biokimia-protein.html

praktikum biokimia muskuloskeletal

Documents