pengaruh konsumsi ikan asin kuniran upeneus sulphureus...

PENGARUH KONSUMSI IKAN ASIN KUNIRAN (Upeneus sulphureus) BERFORMALIN TERHADAP

PERTUMBUHAN DAN ORGAN DALAM TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus)

LAPORAN SKRIPSI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

Oleh: DYAH INNAMASARI

NIM. 0210830026

UNIVERSITAS BRAWIJAYA FAKULTAS PERIKANAN

MALANG 2007

PENGARUH KONSUMSI IKAN ASIN KUNIRAN (Upeneus sulphureus) BERFORMALIN TERHADAP

PERTUMBUHAN DAN ORGAN DALAM TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus)

Laporan Skripsi Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar Sarjana

Perikanan Pada Fakultas Perikanan Universitas Brawijaya Malang

DYAH INNAMASARI 0210830026

MENYETUJUI, DOSEN PENGUJI I DOSEN PEMBIMBING I

Ir. TITIK DWI S, MP Ir. JA. SUMARDI, MS Tanggal : Tanggal :

DOSEN PENGUJI II DOSEN PEMBIMBING II

Ir. HARTATI KARTIKA N, MS Dr. Ir. HARDOKO, MS Tanggal : Tanggal :

MENGETAHUI, KETUA JURUSAN

Ir. MAHENO SRI WIDODO, MS Tanggal :

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan

rahmat dan karuniaNya sehingga penulisan laporan skripsi yang berjudul “Pengaruh

Konsumsi Ikan Asin Kuniran (Upeneus sulphureus) Berformalin terhadap Pertumbuhan

dan Organ Dalam Tikus Wistar (Rattus novergicus)” dapat diselesaikan oleh penulis.

Laporan ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana di

Fakultas Perikanan Universitas Brawijaya.

Atas terselesaikannya laporan skripsi ini, penulis mengucapkan banyak terima

kasih kepada:

1. Bapak Ir. J. A. Sumardi, MS dan Dr. Ir. Hardoko, MS selaku dosen pembimbing

yang telah banyak memberikan pengarahan dan bimbingan

2. Seluruh staf dan karyawan Laboratorium Biokimia Fakultas Perikanan

Universitas Brawijaya Malang, Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu

(LPPT), Laboratorium Pangan dan Gizi, Pusat Antar Universitas (PAU) dan

Laboratorium Patologi Fakultas Kedokteran Hewan (FKH) Universitas Gadjah

Mada Yogyakarta yang telah memberikan bantuan fasilitas dan masukan selama

penelitian

3. Keluargaku tercinta (Bapak (alm), Ibu dan kakak-kakakku) yang telah membantu

dalam do’a dan materi, serta dukungan yang tiada hentinya

4. Teman-teman THP ’02 dan semua pihak yang telah membantu sampai

terselesaikannya laporan ini yang tidak dapat saya sebutkan satu per satu

Penulis menyadari bahwa laporan ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu,

kritik dan saran yang bersifat membangun sangat penulis harapkan. Akhirnya penulis

berharap semoga karya ini bermanfaat dan dapat memberikan informasi bagi semua

pihak yang berminat dan membutuhkan.

Malang, Agustus 2007

Penulis

iii

DAFTAR ISI

Halaman

RINGKASAN ....................................................................................................... i

KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii

DAFTAR ISI......................................................................................................... iv

DAFTAR TABEL................................................................................................. vii

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... viii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xi

1. PENDAHULUAN ............................................................................................ 1

1.1 Latar Belakang ............................................................................................... 1

1.2 Perumusan Masalah ....................................................................................... 3

1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................................ 3

1.4 Kegunaan Penelitian ...................................................................................... 4

1.5 Hipotesis ......................................................................................................... 4

1.6 Tempat dan Waktu ......................................................................................... 4

2. TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................. 5

2.1 Ikan Asin ......................................................................................................... 5

2.2 Ikan Kuniran (Upeneus sulphureus) ............................................................... 7

2.3 Formalin ......................................................................................................... 7

2.2.1 Tinjauan umum .................................................................................... 7

2.2.2 Penggunaan formalin sebagai pengawet makanan................................ 8

2.2.3 Toksisitas formalin................................................................................ 9

2.2.4 Ambang batas penggunaan formalin .................................................... 10

2.2.5 Mekanisme formalin dalam tubuh ........................................................ 11

3. MATERI DAN METODE PENELITIAN ....................................................... 13

3.1 Bahan ............................................................................................................. 13

3.1.1 Bahan yang diuji ................................................................................... 13

3.1.2 Bahan untuk ransum.............................................................................. 13

iv

3.1.3 Bahan untuk analisis kimia .................................................................. 14

3.1.4 Bahan untuk analisis organ ................................................................... 14

3.2 Peralatan ......................................................................................................... 15

3.3 Metode Penelitian .......................................................................................... 18

3.3.1 Prosedur penelitian ............................................................................... 19

3.3.1.1 Preparasi bahan uji ................................................................. 19

3.3.1.2 Pembuatan ransum ................................................................. 19

3.3.1.3 Prosedur pelaksanaan percobaan ............................................ 20

3.3.2 Parameter uji ........................................................................................ 24

3.3.2.1 Analisis proksimat tepung ikan dan ransum ........................... 24

3.3.2.2 Analisis formalin dalam ransum ............................................. 29

3.3.2.3 Jumlah ransum yang dikonsumsi dan berat badan tikus ......... 31

3.3.2.4 Analisis organ ......................................................................... 32

3.4 Analisis Data ................................................................................................... 34

4. HASIL DAN PEMBAHASAN......................................................................... 35

4.1 Komposisi Gizi .............................................................................................. 35

4.1.1 Ikan asin kuniran (Upeneus sulphureus) ................................................ 35

4.1.2 Ransum................................................................................................... 36

4.1.3 Konsentrasi formalin .............................................................................. 37

4.2 Pengaruh Jenis Ransum Terhadap Jumlah Konsumsi dan Berat Badan Tikus................................................................................................................ 40

4.2.1 Jumlah konsumsi ransum ....................................................................... 40

4.2.2 Berat badan tikus .................................................................................... 43

4.3 Pengaruh Konsumsi Ransum Berformalin Terhadap Berat dan Histologi Organ Dalam (Hati, Ginjal, Limpa) Tikus Percobaan .................................... 50

4.3.1 Hati ......................................................................................................... 50

4.3.2 Ginjal ..................................................................................................... 58

4.3.3 Limpa...................................................................................................... 65

5. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 71

5.1 Kesimpulan ............................................................................................... 71

5.2 Saran.......................................................................................................... 71

v

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 72

LAMPIRAN ......................................................................................................... 78

vi

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Daftar komposisi kimia ikan asin per 100 gr bahan ................................. 7

2. Sifat-sifat umum formaldehyde ................................................................ 8

3. Komposisi ransum tikus ............................................................................ 14

4. Denah rancangan faktor perlakuan ........................................................... 18

5. Hasil analisis proksimat ikan asin kuniran ............................................... 35

6. Komposisi gizi ransum standar dan perlakuan (%) ................................... 36

7. Kandungan formalin ransum perlakuan (%) ............................................. 37

8. Penurunan konsentrasi formalin setelah menjadi ransum.......................... 38

9. Data rerata berat hati dan persentase berat hati pada akhir konsumsi........ 51

10. Hasil diagnosa pada hati tikus percobaan .................................................. 53

11. Data rerata berat ginjal dan persentase berat ginjal pada akhir konsumsi . 59

12. Hasil diagnosa pada ginjal tikus kontrol dan perlakuan ............................ 61

13. Data rerata berat limpa dan persentase berat limpa pada akhir konsumsi . 66

14. Hasil diagnosa pada limpa tikus kontrol dan perlakuan ............................ 68

vii

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1. Prosedur pembuatan tepung ikan asin kuniran berformalin ...................... 19

2. Prosedur kerja penelitian ........................................................................... 23

3. Prosedur pembuatan kurva standar formaldehid ....................................... 31

4. Reaksi formaldehid dengan protein ........................................................... 39

5. Grafik pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap jumlah ransum yang dikonsumsi tikus (A) lama konsumsi 1 bulan dan (B) lama konsumsi 2 bulan .................................... 40

6. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap jumlah konsumsi ransum pada tikus 42

7. Grafik pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat badan tikus (A) lama konsumsi 1 bulan dan (B) lama konsumsi 2 bulan.................................................................. 44

8. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat badan rata-rata tikus ............... 46

9. Grafik laju pertumbuhan berat badan tikus (A) lama konsumsi 1 bulan, (B) lama konsumsi 2 bulan ........................................................................ 48

10. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap laju pertumbuhan berat badan tikus 50

11. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat hati tikus................................. 52

12. Struktur histologis jaringan hati tikus kontrol (1 bulan) normal............... 53

13. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) normal............................................... 53

14. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) DH .................................................... 54

15. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (1 bulan) normal............................................. 54

16. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (1 bulan) DV .................................................. 54


18. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 5%:15% (1 bulan) DV .................................................... 54

viii


20. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 0%:20% (1 bulan) DH .................................................... 55

21. Struktur histologis jaringan hati tikus kontrol (2 bulan) normal............... 55


23. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (2 bulan) DV............................................................ 55


25. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (2 bulan) DV .................................................. 55




29. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat ginjal tikus.............................. 60

30. Struktur histologis jaringan ginjal tikus kontrol (1 bulan) normal ........... 62

31. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) normal ............................................. 62

32. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan 10%:10% (1 bulan) normal ........................................................................................................ 62

33. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 5%:15% (1 bulan) normal.............................................. 62

34. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 5%:15% (1 bulan) N, CA................................................ 62


36. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 0%:20% (1 bulan) N,CA................................................ 63

37. Struktur histologis jaringan ginjal tikus kontrol (2 bulan) normal ............ 63


ix

39. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (2 bulan) N,CA................................................ 63

40. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (2 bulan) normal............................................ 63

41. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (2 bulan) N,CA.............................................. 63


43. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 5%:15% (2 bulan) N,CA................................................. 64

44. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 0%:20% (2 bulan) N,CA................................................. 64

45. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat limpa tikus.............................. 67

46. Struktur histologis jaringan limpa tikus kontrol (1 bulan) normal............. 69

47. Struktur histologis jaringan limpa tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) normal............................................... 69

48. Struktur histologis jaringan limpa tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (1 bulan) normal............................................. 69



51. Struktur histologis jaringan limpa tikus kontrol (2 bulan) normal ............ 69


53. Struktur histologis jaringan limpa tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (2 bulan) normal............................................. 70



x

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman 1. Komposisi mineral mix dalam 1000 g ............................................................ 78

2. Komposisi vitamin "Superviton" setiap 2 kaplet ........................................... 79

3. Perhitungan jumlah tepung ikan yang dibutuhkan sebagai pengganti kasein. 80

4. Perhitungan kasar jumlah residu formalin yang berada pada ransum............. 82

5. Perhitungan pembuatan larutan formalin 7,5%............................................... 83

6. Kurva Standar Formaldehid ............................................................................ 84

7. Data jumlah ransum yang dikonsumsi tikus per 3 hari selama 1 bulan perlakuan (g) ................................................................................................... 85

8. Data jumlah ransum yang dikonsumsi tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g) ................................................................................................... 86

9. Data berat badan tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g) ..................... 87

10. Data berat badan tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g) ..................... 88

11. Data laju pertumbuhan berat badan tikus per 3 hari selama 1 bulan perlakuan (g/hari) ............................................................................................ 89

12. Data laju pertumbuhan berat badan tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g/hari) ............................................................................................ 90

13. Data berat organ dalam (hati, ginjal, limpa) tikus (g) ..................................... 91

14. Hasil analisis statistik jumlah ransum yang dikonsumsi tikus ........................ 92

15. Hasil analisis statistik berat badan tikus ......................................................... 96

16. Hasil analisis statistik laju pertumbuhan berat badan tikus ............................ 99

17. Hasil analisis statistik berat hati tikus ............................................................. 103

18. Hasil analisis statistik berat ginjal tikus .......................................................... 107

19. Hasil analisis statistik berat limpa tikus .......................................................... 111

20. Data rerata berat badan awal (hari ke-0) selama pemeliharaan ...................... 115

21. Hasil analisis homogenitas berat badan hari ke-0 .......................................... 116

22. Dokumentasi selama penelitian ...................................................................... 118

xi

RINGKASAN DYAH INNAMASARI. 0210830026. Pengaruh Konsumsi Ikan Asin Kuniran (Upeneus sulphureus) Berformalin Terhadap Pertumbuhan dan Organ Dalam Tikus Wistar (Rattus novergicus). (Dibawah bimbingan Ir. J. A. SUMARDI, MS dan Dr. Ir. HARDOKO, MS).

Pada penghujung tahun 2005, marak pemberitaan tentang beredarnya produk

makanan yang mengandung formalin di tengah masyarakat. Keberadaan formalin dalam

beberapa jenis makanan sebenarnya bukan hal baru. Namun kurangnya informasi atau

sosialisasi mengenai bahaya zat tersebut, dan sulitnya membedakan produk yang

diawetkan dengan formalin boleh jadi sebagai salah satu penyebab masyarakat seperti

bersikap tidak ambil peduli. Perilaku sebagian konsumen yang masih senang memilih

produk yang awet dan harga yang murah ditenggarai juga menjadi penyebab lain

mengapa formalin masih digunakan pada makanan. Beberapa survey menunjukkan

alasan produsen menggunakannya sebagai bahan pengawet karena daya awet serta mutu

produk yang dihasilkan menjadi lebih bagus.

Penggunaan formalin dalam bahan pangan sangat disesalkan karena formalin

merupakan bahan kimia berbahaya yang bersifat karsinogenik (penyebab kanker) dan

mutagen (menyebabkan perubahan fungsi sel dan jaringan). Kandungan formalin yang

tinggi dalam tubuh menyebabkan iritasi lambung, alergi, keracunan dan bahkan

kematian. Apabila tertelan ke dalam mulut maka dapat terjadi kerusakan hati, jantung,

otak, limpa, pankreas, sistem susunan syaraf pusat dan ginjal. Namun menurut

Yuswanto (2006), formalin yang berada di makanan tidak berbahaya karena

metabolisme formalin yang masuk ke tubuh manusia sangat cepat. Tubuh manusia akan

mengubah formalin menjadi CO2 dan air seni dalam waktu 1,5 menit. Jadi meski

formalin dikonsumsi dalam jangka waktu yang cukup lama, tidak akan terjadi proses

akumulasi dan menyebabkan toksifikasi.

Secara umum, penelitian ini bertujuan untuk mempelajari pengaruh makanan

berformalin terhadap kesehatan tikus percobaan. Adapun tujuan khususnya adalah untuk

menentukan efek konsumsi ikan asin berformalin dengan variasi konsentrasi yang

berbeda terhadap pertumbuhan dan organ dalam (hati, ginjal dan limpa) pada tikus

percobaan.

i

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Perikanan

Universitas Brawijaya Malang, Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT)

dan Laboratorium Pangan dan Gizi, Pusat Antar Universitas (PAU) Universitas Gadjah

Mada, Yogyakarta pada bulan Januari-Maret 2007.

Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen dengan

menggunakan Rancangan Acak Lengkap Faktorial. Data yang diperoleh kemudian

dianalisis dengan menggunakan ANOVA (Analysis of Variance) dan dianalisis lebih

lanjut dengan uji Tukey. Pada penelitian ini digunakan 2 faktor perlakuan dengan 3 kali

ulangan. Faktor perlakuan tersebut terdiri dari jangka waktu pemberian ransum (A) yang

terdiri dari 1 bulan (A1) dan 2 bulan (A2), dan faktor perbandingan konsentrasi kasein

dan tepung ikan asin berformalin pada ransum (B) terdiri dari 20%:0% (kontrol) (B1),

15%:5% (B2), 10%:10% (B3), 5%:15% (B4) dan 0%:20% (B5). Parameter uji yang

dilakukan meliputi analisis proksimat tepung ikan, ransum standar dan ransum

perlakuan, uji residu formalin ransum, jumlah ransum yang dikonsumsi, penimbangan

berat badan setiap 3 hari sekali dan penimbangan berat organ dalam (hati, ginjal dan

limpa) serta foto jaringan pada akhir pemeliharaan.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsumsi ransum yang mengandung ikan

asin berformalin mengakibatkan penurunan berat badan seiring dengan peningkatan

konsentrasi formalin. Berat badan paling rendah terdapat pada tikus perlakuan dengan

ransum (0%:20%). Adanya formalin dalam ransum menyebabkan jumlah konsumsi tikus

perlakuan menjadi rendah. Jumlah konsumsi paling rendah terdapat pada tikus perlakuan

dengan ransum (0%:20%). Konsumsi ransum yang mengandung ikan asin berformalin

pada tikus percobaan dapat mengakibatkan terjadinya degenerasi vakuola dan degenerasi

hidrofik pada hati dan nekrosis pada ginjal.

Saran untuk penelitian selanjutnya adalah perlu adanya penelitian lebih lanjut

tentang pengaruh konsumsi ransum berformalin terhadap kadar formaldehid dalam darah

dan urine pada tikus percobaan. Serta sebaiknya tidak menggunakan formalin sebagai

bahan pengawet makanan.

ii

1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pada penghujung tahun 2005, marak pemberitaan tentang beredarnya produk

makanan yang mengandung formalin di tengah masyarakat. Keberadaan formalin dalam

beberapa jenis makanan sebenarnya bukan hal baru. Namun kurangnya informasi atau

sosialisasi mengenai bahaya zat tersebut, dan sulitnya membedakan produk yang

diawetkan dengan formalin boleh jadi sebagai salah satu penyebab masyarakat kita

seperti bersikap tidak ambil peduli. Perilaku sebagian konsumen yang masih senang

memilih produk yang awet dan harga yang murah ditenggarai juga menjadi penyebab

lain mengapa formalin masih digunakan pada makanan (Indra, 2006).

Alasan dari penyalahgunaan zat kimia berbahaya ini adalah alasan ekonomi,

dimana harga dari formalin yang relatif murah yaitu berkisar antara Rp. 3000,00 hingga

Rp. 8000,00 per liter, sehingga setiap orang mudah untuk mendapatkannya

(Anonymous, 2005a). Selain itu juga tingkat pengetahuan yang rendah mengenai bahan

pengawet juga merupakan faktor penyebab penggunaan formalin pada bahan pangan.

Beberapa survey menunjukkan alasan produsen menggunakannya sebagai bahan

pengawet karena daya awet serta mutu produk yang dihasilkan menjadi lebih bagus

(Astawan, 2006). Namun, makanan yang ditambahkan formalin dapat terlihat berbeda

secara fisik. Ikan basah yang ditambah formalin mempunyai ciri antara lain: warnanya

putih bersih, daging kenyal, insangnya berwarna merah tua bukan merah segar, daya

awet sampai beberapa hari dan tidak mudah busuk (Anonymous, 2005b).

Semula penggunaan formalin hanya disinyalir digunakan hanya pada bakso dan

mie, tetapi kemudian hampir semua bahan makanan yang biasa kita konsumsi

2

dinyatakan mengandung bahan kimia yang biasa digunakan sebagai pengawet mayat

tersebut (Anonymous, 2005a). Berdasarkan hasil penyelidikan Balai Pengawasan Obat

dan Makanan (Balai POM) membuktikan bahwa tahu, mi basah, ayam potong, bakso,

ikan asin, cumi dan jenis ikan lainnya adalah sebagian jenis makanan dengan kandungan

formalin berkadar tinggi yang beredar di masyarakat (Anonymous, 2006a). Menurut

hasil uji laboratorium manunjukkan hasil positif untuk hampir semua produk ikan asin di

teluk Jakarta. Dalam ikan asin kecil seperti jambal dan cumi-cumi, untuk setiap 10

gramnya terdapat lebih dari 1,5 ppm formalin ( Anonymous, 2005c).

Ikan asin merupakan produk yang tidak asing lagi bagi rakyat Indonesia karena

harganya murah dan mudah membuatnya. Hampir semua jenis ikan dapat dibuat

menjadi ikan asin, termasuk cumi-cumi, udang, daging kerang, teripang dan sebagainya

(Hadiwiyoto, 1993). Salah satu ikan asin yang terdapat di pasaran adalah ikan asin

kuniran. Berdasarkan penelitian Elvandari (2006), di beberapa pasar di Malang

ditemukan ikan asin kuniran yang mengandung formalin dengan residu 0,2% (2000

ppm) – 1,3% (13000 ppm).

Penggunaan formalin dalam bahan pangan sangat disesalkan karena formalin

merupakan bahan kimia berbahaya yang bersifat karsinogenik (penyebab kanker) dan

mutagen (menyebabkan perubahan fungsi sel dan jaringan). Kandungan formalin yang

tinggi dalam tubuh menyebabkan iritasi lambung, alergi, keracunan dan bahkan

kematian (Anonymous, 2006b). Ditambahkan oleh Judarwanto (2006), apabila tertelan

ke dalam mulut maka dapat terjadi kerusakan hati, jantung, otak, limpa, pankreas, sistem

susunan syaraf pusat dan ginjal. Menurut Koeman (1988), hati dan ginjal rentan

terhadap pengaruh bahan atau zat kimia. Kerentanan itu sebagian dapat diterangkan

berdasarkan posisinya dalam sirkulasi cairan badan. Seperti diketahui, hati dapat mudah

3

berhubungan melalui vena portae dengan zat yang diserap dari lambung-usus dan ginjal,

karena fungsi ekskresinya berhubungan erat sekali dengan darah dan zat yang terdapat di

dalamnya.

Namun menurut Yuswanto (2006), formalin yang berada di makanan tidak

berbahaya karena metabolisme formalin yang masuk ke tubuh manusia sangat cepat.

Tubuh manusia akan mengubah formalin menjadi CO2 dan air seni dalam waktu 1,5

menit. Jadi meski formalin dikonsumsi dalam jangka waktu yang cukup lama, tidak akan

terjadi proses akumulasi dan menyebabkan toksifikasi.

1.2 Perumusan Masalah

Pemakaian formalin dalam bahan makanan sangat berbahaya. Karena konsumsi

formalin dapat berdampak pada kesehatan manusia, baik bersifat akut (mual, muntah,

pusing, sakit perut, alergi) maupun kronis (gangguan pada pencernaan, hati, ginjal,

pankreas, sistem syaraf pusat dan kanker). Salah satu makanan yang mengandung

formalin yang ada di pasaran yaitu ikan asin kuniran. Menurut Elvandari (2006) residu

formalin ikan asin kuniran di pasaran yaitu 0,2% (2000ppm) – 1,3% (13000ppm).

Berdasarkan gambaran di atas, permasalahan penelitian adalah apakah konsumsi ikan

asin kuniran berformalin sesuai kisaran residu di pasaran selama 2 bulan dapat

mempengaruhi pertumbuhan (berat badan) dan organ dalam (hati, ginjal, limpa) tikus

percobaan?

1.3 Tujuan Penelitian

Secara umum, penelitian ini bertujuan untuk mempelajari pengaruh makanan

berformalin terhadap kesehatan tikus percobaan.

4

Adapun tujuan khususnya adalah untuk mempelajari efek konsumsi ikan asin

berformalin dengan variasi konsentrasi yang berbeda terhadap pertumbuhan dan organ

dalam (hati, ginjal dan limpa) pada tikus percobaan.

1.4 Kegunaan Penelitian

Kegunaan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui apakah penggunaan

formalin sebagai bahan pengawet makanan dapat berpengaruh buruk terhadap kesehatan

khususnya pada organ hati, ginjal dan limpa.

1.5 Hipotesis

Diduga pemberian ikan asin kuniran berformalin sesuai residu di pasaran (0,2%

(2000ppm) – 1,3% (13000ppm)) selama 2 bulan berpengaruh terhadap pertumbuhan dan

organ dalam (hati, ginjal, limpa) tikus percobaan.

1.6 Tempat dan Waktu

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu

(LPPT) dan Laboratorium Pangan dan Gizi, Pusat Antar Universitas (PAU) Universitas

Gadjah Mada, Yogyakarta pada bulan Januari-Maret 2007.

2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Ikan asin

Ikan asin merupakan produk yang tidak asing lagi bagi rakyat Indonesia karena

harganya murah dan mudah membuatnya. Hampir semua jenis ikan dapat dibuat

menjadi ikan asin, termasuk cumi-cumi, udang, daging kerang, teripang dan sebagainya.

Langkah-langkah dalam proses pembuatanya meliputi : penyiangan, pencucian,

penggaraman, dan pengeringan (Hadiwiyoto, 1993). Ditambahkan oleh Murniyati dan

Sunarman (2000), ikan asin adalah ikan ikan yang telah mengalami proses penggaraman

dan pengeringan. Dalam skala nasional, ikan asin merupakan salah satu produk

perikanan yang mempunyai kedudukan penting, hampir 65% produk perikanan masih

diolah dan diawetkan dengan cara penggaraman.

Menurut Afrianto dan Liviawaty (1989), metode penggaraman ikan dapat

dilakukan dengan 4 cara, yaitu :

1. Penggaraman kering

Penggaraman kering menggunakan garam berbentuk kristal, caranya yaitu

menaburi ikan dengan garam kemudian disusun secara berlapis-lapis. Lapisan garam

akan menyerap keluar cairan di dalam tubuh ikan, sehingga kristal garam berubah

menjadi larutan garam yang dapat merendam seluruh lapisan ikan.

2. Penggaraman basah

Proses penggaraman dengan metode ini menggunakan larutan garam sebagai

media untuk merendam ikan. Larutan garam dipakai untuk mendehidrasi air/cairan

pada tubuh ikan sehingga kadar airnya berkurang.

6

3. Pelumuran garam (Kench salting)

Pengggaraman dengan cara ini hampir serupa dengan penggaraman kering,

bedanya metode ini tidak menggunakan bak kedap air. Ikan hanya ditumpuk dengan

menggunakan keranjang dan agar tidak dihinggapi lalat, permukaan ikan ditutup

dengan lapisan garam.

4. Penggaraman diikuti proses perebusan

Ikan pindang merupakan contoh ikan yang mengalami proses penggaraman yang

diikuti dengan perebusan.

Oleh karena itu, kita dapat menjumpai 3 macam ikan asin, yaitu ikan asin basah,

ikan asin kering, dan ikan asin rebus (Murniyati dan Sunarman, 2000).

Pengeringan ikan dapat dilakukan dengan cara tradisional yaitu dengan

menggunakan sinar matahari ataupun dengan menggunakan alat pengering mekanik.

Bila ikan dikeringkan tidak sampai cukup kering berbagai kerusakan timbul sebagai

akibat perubahan bakteri, jamur dan mungkin juga serangan serangga. Karena itu selama

proses pengeringan harus diperhatikan faktor-faktor penting yang mempengaruhinya

antara lain seperti kelembaban udara, suhu udara, kecepatan udara dan keadaan ikan

(Zaelanie dan Nurdiani, 2004).

Adapun komposisi kimia ikan asin dapat dilihat pada Tabel 1.

7

Tabel 1. Daftar komposisi ikan asin per 100 gram bahan Komponen Jumlah

Air Protein Lemak

Karbohidrat Kalsium Fosfor

Vitamin B1Vitamin A

Besi Energi

Bagian yang dapat dimakan

40 g 42 g 1,5 g

0 200 mg 300 mg 0,01 mg

0 SI 2,5 mg 193 kal

70 g Sumber : Sediaoetomo (2000)

2.2 Ikan Kuniran

Ikan kuniran merupakan ikan dari famili Mullidae yang mempunyai ciri-ciri ikan

berukuran kecil sampai sedang, badan compressed, tidak terdapat jari-jari keras maupun

jari-jari yang terpisah dari sirip anal, terdapat 2 sungut yang panjang di belakang radang

bawah, sirip dorsal kedua pendek, sirip caudal bercagak, terdapat di laut tropik dan

subtropik (Rahman et al., 1984). Nelson (1984) menyatakan bahwa ikan kuniran

merupakan jenis ikan demersal yang hidup di perairan pantai sampai kedalaman 40 m

dan memiliki panjang maksimum 28 cm dan umumnya 20 cm.

2.3 Formalin

2.2.1 Tinjauan umum

Formalin adalah larutan yang tidak berwarna dan baunya sangat menusuk. Dalam

formalin terkandung sekitar 37% formaldehid dalam air. Biasanya ditambahkan

methanol hingga 15% sebagai pengawet. Formalin dikenal luas sebagai bahan

pembunuh hama (desinfektan) dan banyak digunakan dalam industri. Penggunaan

formalin adalah sebagai pembunuh kuman sehingga dapat dimanfaatkan untuk

8

pembersih lantai, kapal, gudang, dan pakaian; bahan pada pembuatan sutra buatan, zat

pewarna, cermin kaca, dan bahan peledak; bahan pengawet produk kosmetika dan

pengeras kuku; pencegah korosi untuk sumur minyak; cairan pembalsam ( pengawet

mayat ); dan dalam konsentrasi yang sangat kecil ( < 1% ) digunakan sebagai pengawet

untuk berbagai barang konsumen seperti pembersih rumah tangga, cairan pencuci piring,

pelembut, perawat sepatu, sampo mobil, lilin dan pembersih karpet (Anonymousc,

2006). Adapun sifat-siat umum formaldehid dapat dilihat pada Tabel 2.

Tabel 2. Sifat-sifat umum formaldehid Sifat-sifat umum formaldehid

Rumus molekul CH2O Densitas dan fase 1 g/m3, gas Kelarutan dalam air >100 g/100 ml (200C) Kelarutan dalam ethanol,acethon dan DMSO >100 g/100 ml Kelarutan dalam ether, benzene dan pelarut organik

Larut

Kelarutan dalam kloroform Tidak larut Titik cair -1170C (1560K) Titik didih -19,30C (253,90K)

Sumber : Anonymous (2006d)

Sejauh ini, pemanfaatan formalin tidak dilarang untuk bahan pembunuh hama

(desinfektan) dan bahan dalam berbagai industri. Namun, setiap pekerja yang terlibat

dalam pengangkutan dan pengolahan bahan ini harus berhati-hati mengingat risiko yang

berkaitan dengan bahan ini cukup besar (Anonymous, 2005b).

2.2.2 Penggunaan formalin sebagai bahan pengawet makanan

Keberadaan formalin dalam beberapa jenis makanan sebenarnya bukan hal baru.

Namun kurangnya informasi atau sosialisasi mengenai bahaya zat tersebut, dan sulitnya

membedakan produk yang diawetkan dengan formalin boleh jadi sebagai salah satu

penyebab masyarakat kita seperti bersikap tidak ambil peduli. Perilaku sebagian

9

konsumen yang masih senang memilih produk yang awet dan harga yang murah

ditenggarai juga menjadi penyebab lain mengapa formalin masih digunakan pada

makanan (Indra, 2006). Untuk memastikan apakah sebuah produk pangan mengandung

formalin atau tidak dibutuhkan uji laboratorium. Namun, makanan yang ditambahkan

formalin dapat terlihat berbeda secara fisik. Ikan basah yang ditambah formalin

mempunyai ciri antara lain: warnanya putih bersih, daging kenyal, insangnya berwarna

merah tua bukan merah segar, daya awet sampai beberapa hari dan tidak mudah busuk

(Anonymous, 2005b).

Penggunaan formalin untuk mengawetkan produk perikanan oleh para nelayan

dipicu oleh tingginya harga solar dan mahalnya harga es batu untuk mengawetkan ikan.

Penggunaan formalin dapat mengurangi biaya operasional melaut karena harganya cuma

Rp 7.000 per liter. Setelah dicampur air, satu liter formalin cukup untuk mengawetkan

10 ton ikan hasil tangkapan di tengah laut. Padahal, jika menggunakan es balok,

membutuhkan sekitar 350 es balok seharga Rp 2,62 juta. Sehingga selisihnya sangat

jauh. Oleh karena itu, nelayan lebih memilih menggunakan formalin dari pada es balok

untuk megawetkan ikan. Mereka tidak mempertimbangkan dampak penggunaan obat

berbahaya tersebut bagi kesehatan konsumen (Anonymous, 2005 ). a

2.2.3 Toksisitas formalin

Dampak konsumsi formalin pada kesehatan manusia dapat bersifat:

Akut : efek pada kesehatan manusia yang dapat langsung terlihat, seperti:

iritasi, alergi, mata memerah dan berair, mual, muntah, rasa terbakar pada

tenggorokan, sakit perut dan pusing.

10

Kronik : efek pada kesehatan manusia yang akan terlihat setelah terkena dalam

jangka waktu yang lama dan berulang, seperti: iritasi kemungkin parah, mata berair,

gangguan pada : pencernaan, hati, ginjal, pankreas, sistem syaraf pusat, menstruasi

dan pada hewan percobaan dapat menyebabkan kanker sedangkan pada manusia

diduga bersifat karsinogen (menyebabkan kanker). Mengkonsumsi bahan makanan

yang mengandung formalin, efek sampingnya terlihat setelah jangka panjang, karena

terjadi akumulasi formalin dalam tubuh (Anonymous, 2005b).

Formalin termasuk karsinogenik golongan IIA. Golongan I adalah yang sudah

pasti menyebabkan kanker, berdasarkan uji lengkap. Sedangkan golongan IIA adalah

baru taraf diduga karena data hasil uji pada manusia masih kurang lengkap. Dalam

jumlah sedikit formalin akan larut dalam air serta akan dibuang ke luar bersama cairan

tubuh. Faktor imunitas tubuh sangat berperan terhadap dampak formalin di dalam tubuh,

jika imunitas rendah, sangat mungkin formalin dengan kadar yang rendah pun bisa

berdampak buruk terhadap kesehatan (Astawan, 2006).

Meskipun demikian, perendaman dalam air selama 60 menit mampu

menurunkan kadar formalin sampai 61,25 persen, dengan air leri mencapai 66,03 persen,

sedang pada air garam hingga 89,53 persen. Ini artinya hanya dengan perlakuan dan

pengetahuan yang baik sebelum dikonsumsi, kadar formalin akan hilang (Sukesi, 2006).

2.2.4 Ambang batas penggunaan formalin

Formaldehid secara alami sudah ada dalam bahan makanan mentah dalam

kisaran 1 mg/kg hingga 90 mg/kg. American Conference of Govermental and Industrial

Hygienist (ACGIH) menetapkan ambang batas untuk formaldehid adalah 0,4 ppm.

Sementara National Institute for Occupational Safety and Health (NIOSH)

11

merekomendasikan paparan limit untuk para pekerja adalah 0,016 ppm selama periode 8

jam, sedangkan untuk 15 menit 0,1 ppm, sedangkan yang berbahaya bagi kesehatan pada

kadar 20 ppm (Anonymous, 2005d).

Menurut International Programme on Chemical Safety (IPCS), secara umum

ambang batas aman di dalam tubuh adalah 1 miligram per liter. IPCS adalah lembaga

khusus dari tiga organisasi di PBB, yaitu ILO, UNEP, serta WHO, yang mengkhususkan

pada keselamatan penggunaan bahan kimiawi. Bila formalin masuk ke tubuh melebihi

ambang batas tersebut maka dapat mengakibatkan gangguan pada organ dan sistem

tubuh manusia. Akibat yang ditimbulkan tersebut dapat terjadi dalam waktu singkat atau

jangka pendek dan dalam jangka panjang, bisa melalui hirupan, kontak langsung atau

tertelan (Judarwanto, 2006).

2.2.5 Mekanisme formalin dalam tubuh

Proses metabolisme formalin yang masuk ke dalam tubuh manusia sangat cepat.

Tubuh manusia akan mengubah formalin menjadi CO2 dan air seni dalam waktu 1,5

menit. Secara alami, setiap liter darah manusia mengandung formalin 3 mililiter.

Sedangkan formalin yang masuk bersama makanan akan didegradasi menjadi CO2 dan

dibuang melaui alat pernapasan. Jadi, meskipun formalin dikonsumsi dalam jangka

waktu yang cukup lama, tidak akan terjadi proses akumulasi dan menyebabkan

toksifikasi (Yuswanto, 2006).

Formaldehid dapat masuk dalam tubuh setelah kita menghirup, meminum

ataupun memakannya atau ketika formaldehid kontak langsung dengan kulit.

Formaldehid dengan cepat terserap dari hidung masuk ke paru-paru. Begitu juga dengan

formaldehid yang termakan atau terminum, juga akan dengan cepat terserap. Sedangkan

12

untuk kontak dengan kulit, hanya bagian kecil saja yang terserap. Sekali terserap

formaldehid dimetabolisme dengan sangat cepat. Hampir semua jaringan dalam tubuh

mempunyai kemampuan untuk memetabolismekan dan memecah formaldehid. Salah

satunya membentuk asam format dan dikeluarkan melalui urine. Formaldehid juga dapat

dikeluarkan sebagai CO2 dalam tubuh. Tubuh juga diperkirakan bisa memetabolisme

formaldehid dan bereaksi dengan DNA atau protein untuk membentuk molekul yang

lebih besar sebagai tambahan DNA atau protein tubuh. Formaldehid tidak disimpan

dalam jaringan lemak (Anonymous, 1999).

Ditambahkan oleh Judarwanto (2006), dalam jumlah sedikit, formalin akan larut

dalam air serta akan terbuang ke luar bersama cairan tubuh. Sehingga formalin sulit

terdeteksi keberadaannya di dalam darah. Imunitas tubuh sangat berperan dalam

berdampak tidaknya formalin di dalam tubuh. Jika imunitas tubuh rendah atau

mekanisme pertahanan tubuh rendah, sangat mungkin formalin dengan kadar rendah pun

bisa berdampak buruk terhadap kesehatan. Usia anak khususnya bayi dan balita adalah

salah satu usia yang rentan untuk mengalami gangguan ini. Secara mekanik integritas

mukosa (permukaan) usus dan peristaltik (gerakan usus) merupakan pelindung

masuknya zat asing masuk ke dalam tubuh. Secara kimiawi asam lambung dan enzim

pencernaan menyebabkan denaturasi zat berbahaya tersebut. Secara imunologik sIgA

(sekretori Imunoglobulin A) pada permukaan mukosa dan limfosit pada lamina propia

dapat menangkal zat asing masuk ke dalam tubuh. Pada usia anak, usus imatur (belum

sempurna) atau sistem pertahanan tubuh tersebut masih lemah dan gagal berfungsi

sehingga memudahkan bahan berbahaya masuk ke dalam tubuh yang sulit untuk

dikeluarkan. Hal ini juga akan lebih mengganggu pada penderita gangguan saluran cerna

yang kronis seperti pada penderita autism, alergi dan sebagainya.

3. MATERI DAN METODE PENELITIAN

3.1 Bahan

3.1.1 Bahan yang diuji

Bahan yang diuji adalah ikan kuniran (Upeneus sulphureus) yang diasin yaitu

dibuat dari ikan kuniran segar dengan panjang 20-25 cm dan berat ± 150 gram/ekor,

yang diperoleh dari Muncar Banyuwangi sebanyak 5 kg yang kemudian dibuat menjadi

ikan asin di Laboratorium. Ikan asin ini dibuat dengan penambahan formalin pada saat

perendaman (selama 12 jam) dengan konsentrasi 7,5% dari pengenceran formalin 37%

dihitung berdasarkan volume per volume dan selanjutnya diolah menjadi tepung.

3.1.2 Bahan untuk ransum

Pada penelitian ini terdapat 2 macam ransum tikus percobaan, yaitu ransum

standar dan ransum perlakuan. Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam pembuatan

kedua ransum tersebut yaitu :

• protein (kasein) yang diperoleh dari Pusat Antar Universitas (PAU) Universitas

Gadjah Mada Yogyakarta

• lemak (minyak jagung) produksi PT. Intiboga Sejahtera Jakarta, diperoleh dari

toko Candra Malang

• Carboxy Methyl Cellulose (CMC) makanan diperoleh dari Laboratorium

Penelitian Pusat Antar Universitas (PAU) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

• vitamin merk ”Superviton” produksi PT. Erela Semarang diperoleh dari apotek

Sejati, Malang

• mineral mix diperoleh dari PT. Panadia Corporation Indonesia Malang

14

• karbohidrat (tepung maizena) "Honiq" diperoleh dari toko Candra Malang.

Komposisi ransum standar dan perlakuan dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3. Komposisi ransum tikus Jenis ransum

Ransum perlakuan (%) Bahan Ransum standar (%)* 15 : 5 10 : 10 5 : 15 0 : 20

Kasein : Tepung ikan Minyak jagung CMC makanan Mineral mix1

Vitamin mix2

Air Tepung maizena

20 : 0 5 5 4 1 5 60

15 : 5 5 5 4 1 5 60

10 : 10 5 5 4 1 5 60

5 : 15 5 5 4 1 5 60

0 : 20 5 5 4 1 5 60

Keterangan: 1) Lampiran 1. 2) Lampiran 2. *) National Research Council (NRC), 1978.

3.1.3 Bahan untuk analisis kimia

Bahan kimia yang digunakan untuk analisis meliputi bahan untuk uji proksimat

dan uji residu formalin. Bahan kimia untuk analisis proksimat antara lain : petroleum

benzene, kertas saring, aquades, H2SO4 pekat, K2S2O4, HgO, indikator metil merah,

NaOH, HCl dan larutan K2S. Bahan yang digunakan untuk uji residu formalin antara

lain : phenylhidrasine hydrochloride 7,5%; Potasium Ferricyanide 5%; Sodium

hydroxide 10% dan isopropil alkohol 45%.

3.1.4 Bahan untuk analisis organ

Bahan yang digunakan untuk membuat preparat organ yang akan dianalisis

meliputi : fiksatif bouin; alkohol (30%, 50%, 70%, 80%, 90% dan 100%); alkohol:xilol

dengan perbandingan 3:1; 1:1; 1:3; xilol:parafin dengan perbandingan 3:1; 1:1; 1:3; xilol

murni; parafin; Meyer’s albumin; Hematoxilin-eosin; kertas filter; Canada balsam;

aquadest.

15

3.2 Peralatan

Penelitian ini menggunakan hewan percobaan tikus putih wistar (Rattus

norvegicus) yang diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT)

Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Tikus wistar (Rattus norvegicus) yang digunakan

berjenis kelamin jantan yang berumur 21 hari dengan berat antara 48,20 – 61,80 gram.

Data rerata berat badan awal pemeliharaan dapat dilihat pada Lampiran 20. Tikus ini

merupakan salah satu hewan coba yang banyak digunakan dalam penelitian karena : (1)

bersifat omnivore (pemakan segala); (2) mempunyai jaringan yang hampir sama dengan

manusia; (3) kebutuhan zat gizinya serupa dengan manusia. Tikus strain ini pertama kali

dikembangkan oleh Wistar Institut of Biology and Anatomy, secara luas digunakan untuk

penelitian laboratorium. Ukuran tubuhnya lebih kecil daripada tikus Spraque-Dowley

dan sangat mudah menyesuaikan diri dengan lingkungannya. Sifatnya sangat jinak

asalkan tidak diganggu (Astuti, 1986).

Alat yang digunakan untuk membuat tepung ikan antara lain adalah pisau,

baskom plastik, blender, ayakan, dan loyang alumunium. Alat yang digunakan untuk

membuat ransum pakan tikus antara lain timbangan, baskom plastik, cetakan pelet,

loyang, dan oven. Sedangkan alat yang digunakan untuk analisis proksimat seperti

timbangan analitik "Mettler Toledo" dengan kapasitas maximum 210 g dan minimum

0,01 g, kertas saring, erlenmeyer "Pyrex-Iwaki glass" 250 ml, gelas piala, gelas ukur

"Pyrex-Iwaki glass" 100 ml, buret, mortar, rangkaian alat destruksi, pipet volume 25 ml,

statif, bola hisap, spatula, labu destruksi, labu destilasi, peralatan untuk ekstraksi lemak

(goldfisch), oven "Binder", desikator "Nikko", dan muffle "Nabertherm". Alat yang

digunakan untuk analisis residu formalin antara lain timbangan analitik, mortar, pipet

16

volume 10 ml, pipet volume 25 ml, beaker glass 500 ml, kertas saring,

spectrophotometer ”Genesis 20” dengan panjang gelombang 520-1000 nm.

Alat yang digunakan untuk pemeliharaan tikus terdiri dari kandang tikus berupa

box persegi panjang terbuat dari plat tembaga dengan tutup di bagian atas kandang dan

nampan penampung sisa pakan serta feses tikus dibagian bawahnya. Ukuran kandang,

panjang x lebar x tinggi = 62,5cm x 20cm x 15cm dengan bagian dalam disekat sehingga

menjadi 5 bagian. Kandang tikus dilengkapi dengan perlengkapan lain seperti tempat

ransum dan botol minum. Sebagai tempat ransum digunakan tempat pakan burung yang

dikaitkan dengan menggunakan kawat. Botol minum terbuat dari bahan gelas yang pada

bagian mulutnya disumbat dengan karet dan pada bagian tengahnya diberi lubang untuk

meletakkan pipa aluminium yang berguna untuk pengeluaran air.

Alat yang digunakan untuk membuat preparat organ (histologi) dengan metode

”Parafin” terdiri dari : beaker glass ”Duran” 100 ml, spatula, labu ukur ”Duran” 100 ml

dan 10 ml, mikrotom putar AO 820, oven ”Memmert” tipe U 30 dan S 25, obyek dan

cover glass ”Assintent dan Sea Gull no 18”, mikroskop monokuler ”Euromex” tipe

3402, mikroskop fotomikrografi ”Nikon 300”, mikrometer okuler dan obyektif, neraca

digital elektrik (sartorius), gelas pewarnaan, hot plate dan dissection set.

3.3 Metode Penelitian

Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen.

Percobaan eksperimen adalah untuk menyelidiki ada tidaknya hubungan sebab akibat

serta seberapa besar hubungan tersebut dengan cara memberi perlakuan tertentu pada

kelompok eksperimen dan menyelidiki kontrol untuk pembanding (Nazir, 1988).

17

Pada penelitian ini akan dilakukan pengujian pengaruh konsumsi ransum yang

kaseinnya disubtitusi dengan ikan asin kuniran (Upeneus sulphureus) berformalin

selama 1 dan 2 bulan terhadap pertumbuhan dan organ dalam (hati, ginjal dan limpa)

tikus wistar (Rattus novergicus), caranya dengan membandingkan berat badan, berat

masing-masing organ dalam (hati, ginjal dan limpa) serta kondisi organ itu sendiri antara

tikus kontrol dan tikus perlakuan dengan pemberian ikan asin kuniran berformalin. Pada

penelitian ini digunakan 2 faktor perlakuan yaitu :

1. Jangka waktu pemberian ransum (A), dengan sub perlakuan yang terdiri dari :

- Lama pemberian ransum 1 bulan (A1)

- Lama pemberian ransum 2 bulan (A2)

2. Perbandingan konsentrasi kasein dan tepung ikan asin berformalin pada ransum (B),

dengan sub perlakuan yang terdiri dari :

- ransum dengan perbandingan antara kasein dan tepung ikan asin kuniran 20%:0%

(kontrol) (B1)


(B2)


(B3)


(B4)


(B5)

Adapun denah rancangan faktor perlakuan dapat dilihat pada Tabel 4.

18

Tabel 4. Denah rancangan faktor perlakuan Ulangan

A B I II III Total Rata-rata

B1 B2 B3 B4

A1 B5

B1 B2 B3 B4

A2 B5

Berdasarkan perlakuan yang dilakukan maka penelitian ini dapat dirancang

dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap Faktorial. Menurut Yitnosumanto

(1993), model untuk Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial adalah:

Yijk = μ + αi + βj+ (αβ)ij + εijk

Dimana: Yijk = Nilai pengamatan untuk perlakuan ke-i pada ulangan ke-j

μ = Nilai tengah umum

αi = Pengaruh waktu pada taraf ke-j

βj = Pengaruh substitusi konsentrasi tepung ikan berformalin pada taraf ke-i

(αβ)ij = Pengaruh interaksi lama waktu perlakuan dan substitusi konsentrasi tepung

ikan berformalin pada taraf ke-i dan ke-j

εijk = Galat percobaan pada perlakuan A taraf ke-i, perlakuan B taraf ke-j

Data yang diperoleh kemudian dianalisis dengan menggunakan ANOVA

(Analysis of Variance) dan dianalisis lebih lanjut dengan uji Tukey. Digunakannya uji

Tukey adalah dimaksudkan untuk mengetahui perbedaan yang terjadi antara faktor

perlakuan yang digunakan beserta interaksinya.

19

3.3.1 Prosedur penelitian

3.3.1.1 Preparasi bahan uji

Sebelum dilakukan penelitian, langkah pertama dalam penelitian ini adalah

preparasi bahan uji yaitu pembuatan tepung ikan asin. Ikan direndam dalam larutan

garam 30% dan formalin 7,5% selama 12 jam. Prosedur pembuatan tepung ikan asin

kuniran berformalin dapat dilihat pada Gambar 1.

Ikan kuniran segar

Air bersih Dicuci dan disiangi

Direndam dalam larutan garam 30% dan formalin 7,5%

Didiamkan 12 jam

Dikeringkan dalam oven pada suhu 70oC selama 6 jam

Ikan asin kuniran kering

Digiling

Diayak

Tepung ikan

Gambar 1. Prosedur pembuatan tepung ikan asin kuniran berformalin (Afrianto dan Liviawaty, 1989, modifikasi)

3.3.1.2 Pembuatan ransum

Pada penelitian ini terdapat 2 jenis ransum tikus precobaan, yaitu ransum standar

dan ransum perlakuan. Komposisi ransum standar yang digunakan dalam penelitian ini

20

mengikuti ransum standar National Research Council (NRC) (1978). Adapun komposisi

ransum standar ini adalah kasein, minyak jagung, Carboxy Methyl Cellulose (CMC)

makanan, mineral mix, vitamin mix, air, dan tepung maizena (lihat Tabel 3). Komposisi

ransum perlakuan, yaitu ransum standar yang kaseinnya 20% diganti dengan tepung

ikan asin berformalin dengan konsentrasi masing-masing 5%, 10%, 15% dan 20% (lihat

Tabel 3).

Cara pembuatan kedua jenis ransum sama, yaitu semua bahan ransum

dimasukkan satu per satu, dicampur dan diaduk secara merata. Bahan-bahan yang telah

tercampur rata dibentuk menjadi pellet kemudian dioven selama 21 jam, suhu 60°C dan

selanjutnya diukur residu formalin yang terkandung di dalamnya. Ransum dibuat tiap 2

hari sekali, ransum standar dan perlakuan setelah dikemas dalam plastik disimpan pada

suhu kamar. Pembuatan ransum perlakuan dilakukan dengan mengganti proporsi kasein

dengan tepung ikan asin dan menyetarakan kandungan kalorinya berdasarkan base

kalori. Penyetaraan kalori ini dilakukan dengan menghitung kalori pada tepung ikan asin

dengan menggunakan perbandingan protein : lemak : karbohidrat = 4 : 9 : 4 (Yuniati,

2004). Perhitungan substitusi kasein dengan tepung ikan asin dapat dilihat pada

Lampiran 3.

3.3.1.3 Prosedur pelaksanaan percobaan

Secara garis besar prosedur penelitian dapat dilihat pada Gambar 2. Mula-mula

tikus wistar jantan berumur 21 hari diadaptasi selama 7 hari dengan lingkungan

pemeliharaan dengan cara menempatkan setiap tikus dalam kandangnya (dikandangkan

secara individu) dengan kondisi kandang sebagai berikut: cukup cahaya, ventilasi udara

dalam kandang cukup dan suhu udara pada suhu kamar. Tujuan tikus dikandangkan

21

secara individu dan tertutup adalah agar tikus tidak terpengaruh atau terganggu dengan

tikus yang lain dan agar lebih mudah untuk mengontrol kebutuhan ransum pakan dan air

minum serta jumlah feses yang dihasilkan. Tujuan dari tikus diadaptasi selama 7 hari

adalah untuk penyesuaian dengan lingkungan, mengontrol kesehatan dan berat

badannya, serta menyeragamkan makanannya (Wikanta et al., 2003).

Pada saat adaptasi, tikus diberi makan dengan ransum standar dan minum secara

ad libitum, yaitu tikus diberi kebebasan untuk makan dan minum sesuai dengan

keinginannya. Pemberian ransum tikus setiap harinya dapat dihitung berdasarkan berat

badannya yaitu 5% dari berat badan tikus (Wasito, 1991/1992). Pemberian ransum setiap

harinya sebesar 10–15 gram. Menurut Astuti (1986), rata-rata kebutuhan makanan tikus

dewasa perharinya sebesar 15 gram. Kemudian tikus ditimbang berat badannya.

Setelah masa adaptasi, tikus dibagi menjadi 5 kelompok dimana kelompok 1

merupakan kelompok kontrol (20% kasein : 0% tepung ikan) yaitu tikus yang diberi

ransum standar; kelompok 2 yaitu tikus diberi ransum perlakuan dengan konsumsi

tepung ikan asin berformalin (bahan baku tepung ikan telah direndam formalin 7,5%

selama 12 jam) dengan perbandingan kasein : protein ikan = 15% : 5%; kelompok 3

yaitu tikus yang diberi ransum perlakuan dengan konsumsi tepung ikan asin berformalin

(bahan baku tepung ikan telah di rendam formalin 7,5% selama 12 jam) dengan

perbandingan kasein : protein ikan = 10% : 10%; kelompok 4 yaitu tikus yang diberi

ransum perlakuan dengan konsumsi tepung ikan asin berformalin (bahan baku tepung

ikan telah di rendam formalin 7,5% selama 12 jam) dengan perbandingan kasein :

protein ikan = 5% : 15%; kelompok 5 yaitu tikus yang diberi ransum perlakuan dengan

konsumsi tepung ikan asin berformalin (bahan baku tepung ikan telah di rendam

formalin 7,5% selama 12 jam) dengan perbandingan kasein : protein ikan 0% : 20%.

22

Pemberian ransum secara ad libitum. Kemudian tikus dipelihara selama 60 hari

dan dilakukan penimbangan berat badan setiap 3 hari sekali. Pada hari terakhir dari

bulan pertama dan bulan kedua pemeliharaan, dilakukan pembedahan untuk mengamati

bagian-bagian organ dalam tikus, yaitu : hati, ginjal dan limpa untuk ditimbang dan

diamati. Adapun prosedur kerjanya dapat dilihat pada Gambar 2.

23

Tikus jantan berumur 21 hari (30 ekor)

Ditimbang

Ditimbang berat badan setelah adaptasi

Dibagi menjadi 2 kelompok

Diadaptasi selama 7 hari dengan pemberian ransum standart

1 kelompok dipelihara selama 1 bulan dan dibagi menjadi 5 sub

kelompok perlakuan yaitu: 20%:0% (kontrol); 15%:5%; 10%:10%;

5%:15%; dan 0%:20%

1 kelompok dipelihara selama 2 bulan dan dibagi menjadi 5 sub

kelompok perlakuan yaitu: 20%:0% (kontrol); 15%:5%; 10%:10%;

5%:15%; dan 0%:20%

Ransum diberikan secara ad libitum tiap hari

Ditimbang berat badan tiap 3 hari sekali selama

pemeliharaan

- Dibedah, diambil organnya (hati, ginjal, dan limpa) (pada akhir pemeliharaan)

- Ditimbang berat masing-masing organ (pada akhir pemeliharaan)

- Pemeriksaan anatomi organ (pada akhir pemeliharaan)

Gambar 2. Prosedur kerja penelitian

24

3.3.2 Parameter uji

Parameter uji yang dilakukan pada penelitian ini meliputi analisis proksimat

tepung ikan asin, analisis proksimat ransum standart (kasein 20%) dan ransum perlakuan

(kasein diganti dengan 5%, 10%, 15% dan 20% tepung ikan asin berformalin) yang

bertujuan untuk mengetahui kandungan gizi dan kalori pada ransum standar dan

perlakuan sehingga diharapkan tikus mendapatkan asupan gizi dan kalori yang sesuai,

jumlah ransum yang dikonsumsi, uji residu formalin ransum, penimbangan berat badan

setiap 3 hari sekali dan penimbangan berat organ dalam serta uji anatomi organ dalam

pada akhir pemeliharaan bulan pertama dan kedua.

3.3.2.1 Analisis proksimat tepung ikan dan ransum

• Kadar Air (Sudarmadji et al., 1997)

Metode yang digunakan untuk menentukan kadar air adalah metode

Thermogravitimetri. Menurut Sudarmadji et al. (1989), prinsip dari metode ini adalah

menguapkan air yang ada dalam bahan dengan jalan pemanasan. Kemudian menimbang

bahan sampai berat konstan yang berarti semua air sudah diuapkan.

Tujuan dari analisis kadar air ini adalah untuk mengetahui kadar air pada ransum

perlakuan untuk selanjutnya dibandingkan dengan ransum standar dan untuk mengetahui

pengaruh pemberian formalin pada ransum pakan perlakuan terhadap kadar air.

Menurut Sudarmadji et al. (1997) penentuan kadar air dengan menggunakan

metode Termogravimetri adalah sebagai berikut:

- Timbang sampel yang berupa serbuk sebanyak 2 gram dalam botol timbang yang telah

diketahui beratnya. Kemudian keringkan dalam oven pada suhu (100-105)0C selama

semalam, kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang beratnya.

25

- Pengurangan berat merupakan banyaknya air dalam bahan, dengan perhitungan:

Wet bases (wb) =sampelberat

akhirberatsampel)berattimbangbotol(berat −+ x 100%

Dry bases (db) = timbangbotolberatakhirberat

akhirberatsampel)berattimbangbotol(berat−

−+ x 100%

Hasil analisis kadar air dalam tepung ikan berformalin dapat dilihat pada Tabel 5

dan ransum dapat dilihat pada Tabel 6.

• Kadar Abu (Sudarmadji et al., 1997)

Metode yang digunakan untuk penentuan kadar abu adalah metode secara

langsung atau sering disebut metode Muffle, yaitu bila suatu contoh jika dipijarkan

sampai suhu sekitar 650oC, maka akan mengakibatkan kandungan dari semua zat

organik dalam contoh akan hilang menguap karena teroksidasi dan yang tersisa hanya

mineral yang disebut abu (Anonymous, 1975).

Tujuan dari analisis kadar abu adalah untuk menera jumlah mineral dalam

ransum perlakuan dan dibandingkan dengan ransum standar. Menurut Sudarmadji et al.

(1997) prosedur penentuan kadar abu dengan menggunakan metode pemanasan adalah

sebagai berikut: timbang 2 gram sampel dalam krus porselen yang telah kering dan telah

diketahui beratnya, kemudian pijarkan dalam muffle sampai diperoleh abu berwarna

keputih-putihan dengan suhu (550-660)0C. Masukkan kurs yang berisi abu ke dalam

desikator dan ditimbang kadar abu setelah dingin.

Kadar abu = 100%x akhirberat

porselen kursberat -akhirberat

Hasil analisis kadar abu dalam tepung ikan berformalin dapat dilihat pada Tabel

5 dan ransum dapat dilihat pada Tabel 6.

26

• Kadar Protein (Sudarmadji et al., 1997)

Metode yang digunakan untuk penentuan kadar protein adalah metode makro

Kjeldahl. Prinsip dari metode ini adalah penentuan protein berdasarkan oksidasi bahan-

bahan berkarbon dan konversi nitrogen menjadi amonia. Selanjutnya amonia bereaksi

dengan kelebihan asam membentuk amonium sulfat. Larutan dibuat menjadi basa, dan

amonia diuapkan untuk kemudian diserap dalam larutan asam borat. Nitrogen yang

terkandung dalam larutan dapat ditentukan jumlahnya dengan titrasi menggunakan HCl

0,02N (Apriyantono et al., 1989).

Tujuan analisis kadar protein adalah untuk mengetahui kadar protein pada

ransum perlakuan setelah disubtitusi dengan tepung ikan sehingga diharapkan tikus

percobaan mendapat asupan gizi dan kalori yang sesuai.

Menurut Sudarmadji et al. (1997) prosedur penentuan kadar protein dengan

menggunakan metode makro Kjeldahl adalah sebagai berikut:

- Timbang 1 g bahan dan masukkan dalam labu Kjeldahl. Kemudian tambahkan 7,5 g

K2S2O4, 0,35 g HgO dan 15 ml H2SO4 pekat. Panaskan semua bahan dalam labu

Kjeldahl dalam lemari asam sampai mendidih dan cairan jernih. Teruskan pemanasan

tambahan lebih kurang 1 jam. Matikan api pemanas dan biarkan menjadi dingin.

Kemudian tambahkan 100 ml aquades dalam labu Kjeldahl dan beberapa lempeng Zn,

juga ditambahkan 15 ml larutan K2S 4 % dan akhirnya tambahkan perlahan-lahan

larutan NaOH 50% sebanyak 50 ml. Pasanglah labu Kjeldahl dengan segera pada alat

destilasi.

− Panaskan labu Kjeldahl perlahan-lahan sampai dua lapisan cairan tercampur,

kemudian panaskan dengan cepat sampai mendidih.

27

− Destilat ini ditampung dalam erlenmeyer yang telah diisi dengan 50 ml larutan

standar HCl 0,1 N dan 5 tetes indikator metil merah. Lakukan destilasi sampai

destilat yang tertampung sebanyak 75 ml.

− Titrasi destilat yang diperoleh dengan standar NaOH (0,1 N) sampai warna kuning.

− Buatlah juga larutan blanko dengan mengganti bahan dengan aquades, lakukan

destruksi, destilasi dan titrasi seperti pada sampel.

− Perhitungan :

% kadar N = ( ) 14,008x100x 1000 x sampel gram

sampel NaOH mlblanko NaOH ml −

Hasil analisis kadar protein dalam tepung ikan berformalin dapat dilihat pada

Tabel 5 dan ransum dapat dilihat pada Tabel 6.

• Kadar Lemak (Sudarmadji et al., 1997)

Tujuan analisis kadar lemak adalah untuk mengetahui kadar lemak pada ransum

perlakuan setelah disubtitusi dengan tepung ikan sehingga diharapkan tikus percobaan

mendapat asupan gizi dan kalori yang sesuai.

Metode yang digunakan adalah metode goldfisch. Prinsip dari analisis kadar

lemak adalah untuk mengetahui kandungan lemak atau minyak suatu sampel dengan

cara mengekstraksi dengan pelarut organik non polar seperti petroleum ether (PE) dan

pelarut polar seperti metanol. Lemak yang dipisahkan dapat diketahui beratnya setelah

pelarut diuapkan atau tidak secara langsung dengan menimbang sisa sampel yang tidak

terekstraksi. Tujuan dari analisis kadar lemak adalah menentukan kadar lemak yang

terdapat dalam ransum yang diberikan.

Prosedur kerja analisis kadar lemak adalah sebagai berikut sampel kering

sebanyak 5 gram dibungkus dengan kertas saring yang telah diketahui beratnya dan

28

dimasukkan dalam thimble lalu dipasang pada gelas penyangga yang berada tepat

dibawah kondensor alat destilasi Goldfisch. Selanjutnya petroleum ether sebagai pelarut

dimasukkan dalam gelas piala dan dipasang pada kondensator kemudian air pendingin

pada kondensor dialirkan. Ekstraksi ini dilakukan selama 3-4 jam. Setelah ekstraksi

selesai, sampel dalam thimble diambil dan dilakukan pengeringan dalam oven pada suhu

1000C sampai konstan. Berat residu (hasil ekstraksi) dalam botol timbang dinyatakan

sebagai berat lemak. Perhitungan kadar lemak sebagai berikut :

(berat sampel+berat kertas saring)-berat akhir % kadar lemak = x 100 % berat sampel awal

Hasil analisis kadar lemak dalam tepung ikan berformalin dapat dilihat pada

Tabel 5 dan ransum dapat dilihat pada Tabel 6.

• Kadar Karbohidrat (Winarno, 1992)

Tujuan analisis kadar karbohidrat adalah untuk mengetahui kadar karbohidrat

pada tepung ikan asin berformalin dan ransum perlakuan setelah disubtitusi dengan

tepung ikan sehingga diharapkan tikus percobaan mendapat asupan gizi dan kalori yang

sesuai. Kadar karbohidrat ditentukan sebagai karbohidrat by difference. Karbohidrat by

difference diperhitungkan sebagai 100 persen dikurangi kadar protein, kadar lemak,

kadar air, dan kadar abu. Menurut Winarno (1992), ada beberapa cara analisis yang

dapat digunakan untuk memperkirakan kandungan karbohidrat dalam bahan makanan,

yang paling mudah adalah dengan cara perhitungan kasar (proximat analysis) atau juga

disebut Carbohydrate by Difference. Ditambahkan bahwa yang dimaksud dengan

proximat analysis adalah suatu analisis dimana kandungan karbohidrat termasuk serat

kasar diketahui bukan melalui analisis tetapi melalui perhitungan :

% karbohidrat = 100 % - % ( protein + lemak + abu + air )

29

Hasil analisis kadar karbohidrat dalam tepung ikan berformalin dapat dilihat

pada Tabel 5 dan ransum dapat dilihat pada Tabel 6.

3.3.2.2 Analisis formalin dalam ransum (Barbour, B and C. Packers, 1962)

Tujuan dari analisis kadar formalin pada ransum adalah untuk mengetahui

apakah konsentrasi formalin pada ransum yang akan dikonsumsi oleh tikus sesuai

dengan kisaran residu formalin pada produk perikanan di pasaran (0,2%-1,3%). Adapun

prosedur preparasi sampel dan uji formalin adalah sebagai berikut.

a. Preparasi sampel

1. Timbang sebanyak 20 gram sampel dan larutkan dalam isopropyl 45% hingga

volumenya 250 ml.

2. Haluskan dengan blender selama 2 menit.

3. Sentrifuge dengan kecepatan 250 rpm, lalu saring dengan kertas saring.

b. Prosedur uji

1. Ambil larutan sampel sebanyak 0,5 ml dalam tabung reaksi dan tambahkan 0,5

ml isopropyl alkohol 45%, kemudian tambahkan 0,5 ml phenylhydrazine

hydrochoride. Biarkan dalam keadaan tegak selama 10 menit.

2. Tambahkan 0,3 ml potassium ferricyanide dan biarkan dalam keadaan tegak

selama 5 menit.

3. Tambahkan 2 ml larutan NaOH dan tunggu selama 4 menit.

4. Encerkan larutan tersebut hingga 20 ml dalam tabung reaksi dengan

menambahkan isopropyl alkohol 45%.

5. Encerkan dengan aquades sampai volumenya 25 ml.

30

6. 10 menit setelah pengenceran awal (menjadi 20 ml), larutan tersebut diukur

absorbansinya menggunakan spektrofotometer panjang gelombang 580 nm

terhadap blanko reagen.

7. Tentukan jumlah kandungan formalin dengan cara membandingkan dengan

kurva standart absorbansi formalin.

Prosedur pembuatan kurva standar menurut Sastrohamidjodo (1992) adalah

sebagai berikut:

1. Membuat larutan formaldehid 1%; 2%; 3%; 4% dan 5% dari larutan formaldehid

37% dengan perhitungan V1 x M1 = V2 x M2 sama seperti disebutkan di atas.

Berdasarkan perhitungan pada pembuatan kurva standart, yang diukur adalah

kadar formaldehid dalam produk. Untuk mengembalikan ke kadar formalin

dalam produk yaitu dengan mengalikan konsentrasi formaldehid dengan 37%.

Sebagai contoh kadar formaldehid 0,0729% maka: 0,0729 x 37% = 0,027

2. Ukur nilai absorbansinya dengan menggunakan spektronik 20 dengan panjang

gelombang 580 nm.

3. Buat kurva dari nilai-nilai absorbansi yang diperoleh, hingga didapatkan

persamaan garis liniernya. Skema kerja pembuatan kurva standar dapat dilihat

pada Gambar 3, sedangkan kurva standar formaldehid dapat dilihat pada

Lampiran 6.

31

3 ml larutan standar formaldehid konsentrasi 1%; 2%; 3%; 4%, dan 5%

diukur nilai absorbansinya dengan spektronik 20 λ 580 nm

data absorbansi larutan standar formalin

dibuat kurva standar dan dicari persamaan garisnya

persamaan kurva standar formaldehid

Gambar 3. Prosedur pembuatan kurva standar formaldehid

3.3.2.3 Jumlah ransum yang dikonsumsi dan berat badan tikus

Prinsip pemberian ransum adalah berdasarkan persentase berat badan tikus.

Menurut Wasito (1992), konsumsi pakan untuk tikus adalah 5% dari berat badan tikus.

Ransum diberikan pada tikus secara ad libitum (bebas makan). Jumlah ransum yang

dikonsumsi dapat diketahui dengan menghitung selisih ransum yang diberikan dengan

sisa ransum. Sisa ransum ditimbang setiap hari dimana sebelum ditimbang, sisa ransum

tersebut dikeringkan di bawah sinar matahari selama satu hari.

Berat badan tikus dapat diketahui dengan menimbang tikus dengan

menggunakan timbangan. Menimbang tikus, prinsipnya adalah tikus dipegang pada

bagian dada, telunjuk dan ibu jari diletakkan dibawah rahang, masukkan ke dalam

timbangan dan catat beratnya (Astuti, 1986). Berat badan tikus dihitung tiap 3 hari sekali

dengan menggunakan timbangan analitik sebelum tikus diberi makan. Jumlah ransum

yang dikonsumsi dan berat badan tikus secara berurutan dapat dilihat dengan jelas pada

Gambar 6 dan Gambar 8.

32

3.3.2.4 Analisis organ (Sudarwati, et al., 1983)

Tujuan analisis organ tikus wistar adalah untuk mengetahui pengaruh konsumsi

ransum berformalin terhadap kesehatan, khususnya organ dalam tikus wistar (hati, ginjal

dan limpa). Tikus dibunuh dengan pemotongan vena jugularis di leher dan dibedah pada

bagian perut dengan mengunakan gunting dan pinset. Organ hati, ginjal dan limpa

diambil dan ditimbang beratnya dengan menggunakan timbangan analitik. Kemudian

dimasukkan ke dalam botol organ yang telah berisi formalin 10%. Untuk analisa

jaringan, organ-organ tersebut dimasukkan dalam Phosphat Buffer Sallin (PBS),

dipotong kecil-kecil 0,5 cm3 dan dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali. Potongan organ

dimasukkan cawan petri yang berisi larutan Eagle’s MEM yang telah dicampur horse

serum (dengan membandingkan konsentrasi horse serum 5% dari Eagle’s MEM).

Tahapan pembuatan preparat organ dengan metode parafin meliputi :

1. Fiksasi dengan merendam jaringan dalam larutan Bouin selam 24 jam.

2. Pencucian dengan menggunakan alkohol 50% yang ditujukan untuk menghilangkan

sisa-sisa bahan fiksatif.

3. Dehidrasi

Pada tahap ini dilakukan dengan merendam jaringan dalam alkohol dari konsentrasi

rendah ke konsentrasi tinggi (alkohol 50%, 70%, 90%, 95% dan 100%). Perlakuan

ini dilakukan untuk menghilangkan air dari jaringan.

4. Penjernihan

33

Tahap ini dilakukan dengan merendam jaringan dalam larutan alkohol:xylol dengan

perbandingan 3:1; 1:1; 1:3 dan kemudian dilanjutkan dengan perendaman dalam

xylol murni. Proses ini berfungsi untuk menghilangkan sisa-sisa dehidran.

5. Infiltrasi

Tahap ini dilakukan dengan merendam jaringan dalam larutan xylol:parafin (parafin

420C-460C) dengan perbandingan 3:1; 1:1; 1:3 dan kemudian dilanjutkan dengan

perendaman pada parafin murni. Proses ini berfungsi untuk mengisi rongga-rongga

dalam jaringan.

6. Embedding

Tahap ini dilakukan dengan memasukkan jaringan dalam parafin keras (560C-580C)

yang berfungsi untuk menyelubungi jaringan untuk memudahkan pengirisan.

7. Pengirisan

Pengirisan dilakukan dengan menggunakan mikrotom dengan ketebalan 5-6μm.

Hasil pengirisan berupa pita-pita yang berisi jaringan.

8. Penempelan

Proses ini dilakukan dengan menempelkan pita-pita jaringan pada kaca preparat

dengan menggunakan perekat Meyer’s-Albumin, kemudian dipanaskan di atas hot

plate dengan suhu 100C.

9. Deparafinasi

Proses ini dilakukan dengan merendam preparat dalam xylol. Proses ini bertujuan

untuk menghilangkan sisa-sisa parafin dalam jaringan.

34

10. Pewarnaan

Proses ini dilakukan secara simultan dengan menggunakan Hematoxilin-eosin.

11. Penutupan

Preparat yang selesai diwarnai ditutup dengan kaca penutup dengan menggunakan

perekat entellan.

12. Pengamatan

Pengamatan preparat dilakukan dibawah mikroskop cahaya binokuler perbesaran

400x dan 1000x dan untuk memperjelas penampakan preparat, dilakukan pemfotoan

jaringan dengan mikroskop fotomikrografi.

13. Hasil

Hasil dari foto jaringan pada organ hati, ginjal dan limpa berturut-turut dapat dilihat

pada Gambar 12, 13, dan 14; Gambar 16 dan 17; Gambar 19 dan 20.

3.4 Analisis Data Data yang diperoleh kemudian dianalisis dengan menggunakan ANOVA

(Analysis of Variance) dan dianalisis lebih lanjut dengan uji Tukey HSD (SPSS versi

11.50) yang bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan yang terjadi antara

faktor perlakuan dengan yang digunakan beserta interaksinya.

4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Komposisi Gizi

4.1.1 Ikan asin kuniran (Upeneus sulphureus)

Pada penelitian ini, penambahan ikan berformalin pada ransum tikus dilakukan

dalam bentuk tepung. Hal ini bertujuan untuk memudahkan tercampurnya ikan

berformalin dengan bahan-bahan lain dalam pembuatan ransum. Hasil analisis proksimat

dari tepung ikan asin dapat dilihat pada Tabel 5.

Tabel 5. Hasil analisis proksimat ikan asin kuniran

Keterangan : *) PT. New Zealand **) Anonymous (2005e) ***) 2 ulangan

Tujuan dari analisis proksimat tepung ikan asin berformalin ini adalah untuk

mengetahui kandungan gizi tepung ikan yang akan digunakan sebagai pengganti kasein

pada ransum tikus perlakuan sehingga diharapkan kebutuhan tikus perlakuan terpenuhi.

Hasil analisis proksimat tepung ikan asin berformalin (direndam dengan 7,5% formalin

dan 30% garam) menunjukkan bahwa kandungan gizi terbesar adalah protein yaitu

sebesar 72,02%. Menurut Winarno (1992) protein merupakan salah satu sumber bahan

pangan yang berfungsi sebagai bahan bakar, zat pembangun dan pengatur dalam tubuh.

Kadar proksimat tepung ikan (%) Parameter Uji Kasein

(%)* Tanpa direndam

formalin ** Direndam dengan formalin 7,5%***

Protein Lemak Air Abu

88,53 0

11,47 0

71,62 4,24 10,95 7,09

Karbohidrat (by difference) 0 6,1

72,02±0,94 3,74±0,40 10,18±0,04 10,53±0,55 3,54±1,13

4.1.2 Ransum

Analisis proksimat juga dilakukan pada ransum, baik pada ransum standar

maupun ransum perlakuan. Tujuannya adalah untuk mengetahui jumlah komposisi gizi

yang terdapat dalam setiap ransum yang berfungsi sebagai zat nutrisi (protein, lemak,

karbohidrat, vitamin dan mineral), selain itu untuk menunjang proses pertumbuhan tikus.

Hasil analisis proksimat ransum tikus dapat dilihat pada Tabel 6.

Tabel 6. Komposisi gizi ransum standar dan perlakuan (%) Jenis Ransum

Perlakuan (kasein : tepung ikan berformalin (%))* Parameter

Uji Standar 15 : 5 10 : 10 5 : 15 0 : 20

Protein Lemak Air Abu Karbohidrat

21,5±0,69 4,97±0,03 9,68±0,68 4,5±0,78

59,36±0,56

19,60±0,09 5,17±0,07 10,09±0,16 5,58±0,23 59,56±0,38

18,01±0,13 5,28±0,09 10,21±0,03 6,06±0,27 60,45±0,26

16,15±0,1 6,12±0,46

10,27±0,13 6,82±0,06 60,65±0,44

14,20±0,18 6,87±0,15 10,61±0,21 7,48±0,23 60,84±0,42

Keterangan : * = 2 ulangan

Hasil analisis proksimat menunjukkan bahwa proporsi zat gizi pada ransum

perlakuan yang dibutuhkan oleh tikus sudah sesuai dengan standar National Research

Council (NRC). Berdasarkan hasil analisis proksimat dapat diketahui bahwa kadar

protein pada ransum perlakuan sedikit lebih rendah dibandingkan dengan ransum

standar, sedangkan untuk kadar lemak, air, abu dan karbohidrat cenderung lebih tinggi.

Hal ini dikarenakan adanya substitusi tepung ikan asin berformalin pada ransum

perlakuan yang didasarkan pada base kalori, dimana komposisi gizi yang terkandung

dalam tepung ikan asin berformalin terdiri atas protein, karbohidrat, lemak, air dan abu

sedangkan komposisi gizi kasein hanya protein. Selain itu formalin yang terkandung

pada ransum perlakuan juga mempengaruhi kandungan air pada ransum perlakuan,

dimana menurut Kiernan (2000) formalin mengandung 37%-40% formaldehid dan 60%-

63% air. Ditambahkan oleh Small (2004) bahwa reaksi antara formaldehid dan air akan

menghasilkan metilen glikol selanjutnya dapat berpolimerisasi membentuk polisimetilen

dan air. Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada reaksi berikut :

CH2O + H2O HO-CH2-OH HO-CH2-OH + HO-CH2-OH HO- (CH2O)2-H + H2O HO-(CH2O)n-1-H + HO-CH2-OH HO-(CH2O)n-H + H2O

4.1.3 Konsentrasi formalin

Pada penelitian ini juga dilakukan analisis kadar formalin (kuantitatif) pada

tepung ikan asin dan juga ransum perlakuan. Berdasarkan analisis kadar formalin yang

dilakukan diketahui kandungan formalin pada ikan asin sebesar 3,35%. Sedangkan

kandungan formalin pada ransum perlakuan dapat dilihat pada Tabel 7.

Tabel 7. Kandungan formalin ransum perlakuan (%) Parameter uji Perbandingan (%) jenis

ransum perlakuan Kadar formaldehid (%) Kadar formalin (%) 15 : 5 0,381±0,0008 0,141±0,0003 10 : 10 0,762±0,0019 0,282±0,0007 5 : 15 1,146±0,0038 0,424±0,0014 0 : 20 1,522±0,0019 0,563±0,0007

Keterangan : ulangan = 2

Tujuan dari analisis formalin secara kuantitatif pada ransum perlakuan adalah

untuk mengetahui seberapa besar residu formalin pada tiap ransum perlakuan.

Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui bahwa kisaran residu formalin pada ransum

perlakuan masih dalam kisaran residu formalin di pasaran (± 0,2%) yaitu antara 0,1410

% sampai 0,5623 %. Semakin tinggi jumlah tepung ikan yang disubtitusikan maka

semakin tinggi pula residu formalinnya. Residu formalin paling rendah terdapat pada

ransum perlakuan dengan subtitusi kasein dengan tepung ikan asin berformalin 5%.

Residu formalin tertinggi terdapat pada ransum perlakuan subtitusi kasein dengan

tepung ikan asin berformalin 20%. Sehingga dapat diketahui bahwa semakin tinggi

proporsi tepung ikan yang terkandung pada ransum maka semakin tinggi pula

konsentrasi formalin yang terkandung dalam ransum. Data penurunan konsentrasi

formalin pada ransum perlakuan dapat dilihat pada Tabel 8.

Tabel 8. Penurunan konsentrasi formalin setelah menjadi ransum Perbandingan (%)

jenis ransum (kasein : tepung ikan

berformalin)

Konsentrasi formalin sebelum diproses menjadi

ransum (%)

Konsentrasi formalin setelah diproses menjadi

ransum (%)

Penurunan konsentrasi

formalin (%)

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

0 0,1675 0,3351 0,5052 0,6712

0 0,141±0,0003 0,282±0,0007 0,424±0,0014 0,563±0,0007

0 15,80±0,17 15,875±0,22 15,645±0,29 16,015±0,22

Keterangan : ulangan = 2

Menurut Elvandari (2006), penurunan konsentrasi formalin dapat dihitung

dengan rumus :

%1001

21 xX

XXX −=

Ket : X = penurunan konsentrasi formalin (%)

X 1 = konsentrasi formalin awal

X2 = konsentrasi formalin ransum

Berdasarkan Tabel 8 dapat diketahui bahwa penurunan konsentrasi formalin pada

ransum perlakuan cukup rendah meskipun pada proses pembuatan ransum dilakukan

proses pengeringan pada suhu 600C selama 21 jam. Hal tersebut dapat terjadi karena

titik didih formalin berada di atas 600C. Menurut Instanref (2006), jika formaldehid

dalam bentuk larutan seperti formalin, titik didihnya meningkat menjadi 96ºC.

Tingginya residu formalin yang terdapat pada ransum perlakuan selain disebabkan oleh

tingginya titik didih formalin juga disebabkan karena ikan memiliki kandungan protein

yang tinggi sehingga dapat dengan mudah berikatan dengan formalin. Menurut Kiernan

(2000), kelompok aldehid dapat berkombinasi dengan nitrogen dan beberapa atom

karbon pada protein membentuk ikatan silang -CH2- yang dinamakan dengan jembatan

metilen. Lebih jelasnya dapat dilihat pada Gambar 4.

Gambar 4. Reaksi formaldehid dengan protein

Pada Gambar 4 (A) merupakan reaksi penambahan formaldehid pada protein, (B)

reaksi formaldehid dengan molekul protein yang lain membentuk ikatan silang metilen

dan (C) menjelaskan lebih detail tentang ikatan silang rantai samping dari lisin dengan

atom nitrogen dari peptida. Berdasarkan hal tersebut menjelaskan bahwa tidak

menurunnya kandungan formalin secara signifikan pada ransum yang telah melalui

proses pengeringan pada suhu 600C selama 21 jam disebabkan karena formalin telah

berikatan dengan protein yang terdapat pada ikan asin kuniran.

4.2 Pengaruh Jenis Ransum Terhadap Jumlah Konsumsi dan Berat Badan Tikus 4.2.1 Jumlah konsumsi ransum

Jumlah ransum yang dikonsumsi oleh tikus dapat diketahui dengan menghitung

selisih antara jumlah ransum yang diberikan dengan sisa ransum masing–masing tikus.

Penghitungan jumlah ransum yang dikonsumsi tikus dihitung setiap hari selama 1 dan 2

bulan. Jumlah ransum yang dikonsumsi tikus dengan selang 3 hari dapat dilihat pada

Lampiran 7 dan Lampiran 8. Jumlah konsumsi ransum rata-rata (g/g berat badan) per 3

hari selama pemeliharaan 1 dan 2 bulan dapat dilihat pada Gambar 5.

0.00

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

0.12

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

lama konsumsi (hari)

jum

lah

kons

umsi

(g

/g b

erat

bad

an/h

ari)

20% : 0% 15 % : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

(A)

0.00

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

0.12

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60

lama konsumsi (hari)

jum

lah

kons

umsi

(g

/g b

erat

bad

an/h

ari)

20% : 0% 15 % : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

(B) Gambar 5. Grafik pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang

berbeda terhadap konsumsi ransum (A) lama konsumsi 1 bulan dan (B) lama konsumsi 2 bulan

Gambar di atas menunjukkan bahwa jumlah konsumsi tikus kontrol dan

perlakuan pada hari ke-0 baik pada bulan pertama maupun pada bulan kedua tidak ada

perbedaan yang menonjol. Namun di antara perlakuan-perlakuan yang ada dapat

diketahui bahwa tikus perlakuan dengan ransum (0% : 20%) jumlah yang dikonsumsi

adalah paling rendah baik pada bulan pertama maupun kedua.

Analisis statistik (Lampiran 14) menunjukkan bahwa ransum dengan subtitusi

kasein dengan tepung ikan berformalin dengan konsentrasi yang berbeda berpengaruh

nyata terhadap jumlah ransum yang dikonsumsi (p<0,05). Hal ini berarti bahwa jumlah

ransum yang dikonsumsi tikus dipengaruhi oleh perbedaan konsentrasi formalin tepung

ikan dalam ransum. Sedangkan lama konsumsi tidak berpengaruh nyata terhadap jumlah

ransum yang dikonsumsi (p>0,05), dan tidak terjadi interaksi antara konsentrasi ransum

berformalin dengan lama konsumsi terhadap jumlah ransum yang dikonsumsi oleh tikus

(p>0,05). Dari hasil uji BNJ (Beda Nyata Jujur) untuk konsentrasi formalin ransum,

jumlah ransum yang dikonsumsi tikus kontrol tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan tikus

perlakuan (5% : 15%); (10% : 10%); dan (15% : 5%), tetapi berbeda nyata (p<0,05)

dengan tikus perlakuan (0% : 20%). Sedangkan jumlah konsumsi ransum tikus

perlakuan (0% : 20%) berbeda nyata (p<0,05) dengan tikus perlakuan kontrol (20% :

0%); (5% : 15%); (10% : 10%); dan (15% : 5%). Jumlah konsumsi tikus perlakuan (0% :

20%) adalah yang paling rendah. Hal ini dikarenakan oleh tingginya konsentrasi

formalin tepung ikan yang disubtitusikan dalam ransum, yaitu 20%. Sehingga tikus

mengalami penurunan nafsu makan. Hal ini karena ransum berformalin mempunyai bau

yang menyengat (formalin) sehingga tikus tidak mau makan dan akhirnya tikus sakit.

Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada Gambar 6.

(0.0

682±

0.00

98)b

(0.0

788±

0.01

23)b

(0.0

747±

0.00

19)b

(0.0

775±

0.00

46)b

(0.0

552±

0.00

06)a

(0.0

705±

0.00

16)b

(0.0

692±

0.00

17)b

(0.0

787±

0.00

52)b

(0.0

792±

0.00

25)b

(0.0

580±

0.00

13)a

0.00

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

0.09

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

ransum yang dikonsumsi

jum

lah

kons

umsi

(g

/g b

erat

bad

an/h

ari)

konsumsi 1 bulan konsumsi 2 bulan

Gambar 6. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan

berformalin yang berbeda terhadap jumlah konsumsi ransum pada tikus

Pada Gambar 6 dapat dilihat bahwa jumlah konsumsi ransum paling tinggi

adalah pada tikus dengan perlakuan subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin

(15% : 5%) dengan lama konsumsi 1 bulan. Jumlah konsumsi terendah terdapat tikus

pada perlakuan subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin (0% : 20%) dengan

lama konsumsi 1 bulan. Hal ini diduga karena tikus perlakuan (0% : 20%) sudah

mengalami sakit sehingga nafsu makannya menurun. Menurut Lu (1995), adanya suatu

zat kimia dalam makanan dapat mengganggu selera makan sehingga akhirnya

menurunkan konsumsi makanan, dimana konsumsi makanan merupakan salah satu

respons bertingkat, respons akan meningkat bersama meningkatnya dosis atau asupan.

Secara umum jumlah ransum yang dikonsumsi tikus kontrol dan perlakuan dalam

penelitian sudah sesuai dengan standar. Menurut Wasito (1991/1992), konsumsi pakan

untuk tikus adalah 5% dari berat badan tikus, dimana berat badan tikus berkisar antara

138,21-40,09g.

4.2.2 Berat badan tikus

Penimbangan berat badan tikus bertujuan untuk mengetahui perkembangan berat

badan tikus yang telah diberi ransum standar dan ransum perlakuan secara ad libitum.

Penimbangan berat badan ini dilakukan setiap 3 hari sekali selama 30 hari pada lama

konsumsi 1 bulan dan 60 hari pada lama konsumsi 2 bulan. Penimbangan dilakukan

dengan menggunakan timbangan digital dan dilakukan sebelum pemberian ransum pada

hari itu. Data berat badan tikus per 3 hari selama pemeliharaan dapat dilihat pada

Lampiran 9 dan Lampiran 10. Grafik perkembangan berat badan per 3 hari selama 1

bulan dan 2 bulan dapat dilihat pada Gambar 7.

0

20

40

60

80

100

120

140

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

lama pemeliharaan (hari)

bera

t bad

an (g

)

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

(A)

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60

lama pemeliharaan (hari)

bera

t bad

an (g

)

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

(B) Gambar 7. Grafik pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang

berbeda terhadap berat badan tikus (A) lama konsumsi 1 bulan dan (B) lama konsumsi 2 bulan

Berdasarkan grafik di atas dapat diketahui bahwa berat badan tikus pada awal

pemeliharaan pada umumnya sama yaitu antara 48,20 – 61,80 gram. Data rerata berat

badan awal (hari ke-0) selama pemeliharaan dapat dilihat Lampiran 20 dan hasil analisis

homogenitas berat badan hari ke-0 dapat dilihat pada Lampiran 21. Pada tikus kontrol

dan tikus dengan perlakuan subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin (15% : 5%);

(10% : 10%); dan (5% : 15%) mulai hari ke-3 sampai akhir bulan pertama dan kedua

terus mengalami kenaikan. Sedangkan untuk tikus dengan perlakuan (0% : 20%) mulai

hari ke-3 sampai akhir bulan pertama dan kedua mengalami penurunan berat badan. Hal

ini sebanding dengan jumlah konsumsi rata-rata yang memang rendah, dan diduga

karena ransum mengandung formalin dengan konsentrasi yang cukup tinggi sehingga

menurunkan nafsu makan, yang pada akhirnya berat badan tikus menjadi turun. Menurut

Lu (1995), adanya suatu zat kimia dalam makanan dapat menurunkan berat badan,

dimana berat badan merupakan salah satu respons bertingkat, respons akan meningkat

bersama meningkatnya dosis atau asupan.

Hasil analisis statistik (Lampiran 15) menunjukkan bahwa perbedaan konsentrasi

formalin dalam ransum dan lama konsumsi berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap berat

badan tikus. Terjadi interaksi antara konsentrasi formalin ransum dengan lama

pemeliharaan terhadap berat badan tikus. Hasil analisis ragam antara lama konsumsi

dengan berat badan rata-rata tikus, menunjukkan bahwa berat badan tikus selama 1

bulan berbeda nyata dengan berat badan tikus yang selama 2 bulan (p<0,05). Hal ini

berarti bahwa lama pemeliharaan dan perbedaan konsentrasi formalin dalam tepung ikan

yang disubtitusi pada ransum memberikan pengaruh terhadap berat badan tikus.

Berdasarkan uji BNJ (Beda Nyata Jujur) untuk konsentrasi ransum,

menunjukkan bahwa berat badan tikus kontrol (20% : 0%) berbeda nyata (p<0,05)

dengan tikus perlakuan (15% : 5%), (5% : 15%) dan (0% : 20%), tetapi tidak berbeda

nyata (p>0,05) dengan tikus perlakuan (10% : 10%). Sedangkan untuk tikus perlakuan

(15% : 5%) tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan tikus perlakuan (10% : 10%), tetapi

berbeda nyata dengan tikus perlakuan (20% : 0%), (5% : 15%) dan (0% : 20%).

Sehingga dapat diketahui bahwa berat badan tikus dipengaruhi oleh perbedaan

konsentrasi formalin dalam ransum, semakin tinggi konsentrasi formalin maka berat

badan tikus akan semakin rendah. Berat badan tikus perlakuan (0% : 20%) adalah yang

paling rendah. Hal ini dikarenakan oleh tingginya konsentrasi formalin tepung ikan yang

disubtitusikan dalam ransum, yaitu 20%. Sehingga tikus mengalami penurunan nafsu

makan yang mengakibatkan berat badan turun. Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada

Gambar 8.

(48.

98±3

.72)

a

(78.

14±1

.30)

b

(87.

06±4

.40)

cd

(84.

78±5

.83)

c

(87.

07±0

.85)

d

(52.

03±4

.42)

a

(100

.44±

2.98

)b

(128

.45±

6.07

)cd

(123

.25±

6.58

)c

(138

.20±

5.69

)d

0.00

20.00

40.00

60.00

80.00

100.00

120.00

140.00

160.00

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%


bera

t bad

an (g

)

pemeliharaan 1 bulan pemeliharaan 2 bulan

Gambar 8. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat badan rata-rata tikus

Berdasarkan Gambar 8, dapat diketahui bahwa semakin tinggi konsentrasi

subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin semakin rendah berat badan tikus. Berat

badan tertinggi terdapat pada tikus dengan perlakuan kontrol (20% : 0%) dengan

konsumsi selama 2 bulan, sedangkan berat badan terendah terdapat pada tikus dengan

perlakuan (0% : 20%). Hal tersebut terjadi karena jumlah konsumsi yang rendah (pada

perlakuan (0% : 20%)) dan nilai gizi ransum yang mengandung formalin menjadi rendah

karena zat-zat gizi pada ransum terutama protein telah berikatan dengan gugus aldehid

dalam formalin sehingga sulit dicerna dan mengganggu proses metabolisme makanan

yang pada akhirnya dapat mengganggu pertumbuhan tikus sehingga tubuh tikus menjadi

kurus.

Berdasarkan data berat tikus yang diperoleh, dapat dihitung laju pertumbuhan

tikus selama masa pemeliharaan. Menurut Effendie (1997), laju pertumbuhan relatif

adalah panjang/bobot yang dicapai dalam suatu periode tertentu yang dibandingkan

dengan panjang/bobot tubuh awal periode. Faktor-faktor yang mempengaruhi laju

pertumbuhan relatif adalah jumlah pakan yang tersedia, ukuran/berat awal, dan jumlah

pakan yang dikonsumsi. Menurut Sitompul dan Bambang. G (1995), laju pertumbuhan

relatif berat badan tikus dapat dihitung dengan perhitungan sebagai berikut:

LPR (g/hari) = 12

12

ttWW

−−

Ket : W2 = Berat badan pada hari ke-x

W1= Berat badan pada hari sebelumnya

t2 = Hari ke-x

t1 = Hari sebelumnya

Data laju pertumbuhan berat badan tikus selama 1 bulan dan 2 bulan dapat dilihat

pada Lampiran 11 dan Lampiran 12. Sedangkan grafik laju pertumbuhannya dapat

dilihat pada Gambar 9.

-2.00

-1.00

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

Lama pemeliharaan (hari)

Laju

per

tum

buha

n (g

/har

i)

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

(A)

-2.00

-1.00

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60

lama pemeliharan (hari)

Laju

per

tum

buha

n (g

/har

i)

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

(B) Gambar 9. Grafik laju pertumbuhan berat badan tikus (A) lama konsumsi 1 bulan, (B)

lama konsumsi 2 bulan

Grafik diatas menunjukkan bahwa laju pertumbuhan berat badan tikus tidak

stabil. Hal ini diduga karena tikus tidak dapat beradaptasi dengan ransum yang diberikan

sehingga jumlah konsumsi menjadi tidak stabil yang mengakibatkan laju pertumbuhan

juga tidak stabil.

Berdasarkan hasil analisis statistik (Lampiran 16) menunjukkan bahwa subtitusi

kasein dengan tepung ikan berformalin pada ransum dengan konsentrasi yang berbeda

dan lama pemeliharaan berpengaruh nyata terhadap laju pertumbuhan relatif berat badan

tikus (p<0,05). Tidak terjadi interaksi antara konsentrasi formalin ransum dengan lama

konsumsi terhadap laju pertumbuhan relatif berat badan tikus (p>0,05). Hal ini berarti

bahwa perbedaan konsentrasi formalin tepung ikan yang disubtitusikan dalam ransum

dan lama pemeliharaan mempengaruhi laju pertumbuhan tikus, dimana semakin tinggi

konsentrasi formalin dalam ransum maka semakin rendah laju pertumbuhannya.

Berdasarkan hasil uji BNJ (Beda Nyata Jujur) pada laju pertumbuhan berat badan

tikus, menunjukkan bahwa laju pertumbuhan berat badan rata-rata tikus kontrol berbeda

nyata (p<0,05) terhadap laju pertumbuhan berat badan tikus perlakuan (5% : 15%) dan

(0% : 20%), dan tidak berbeda nyata (p>0,05) terhadap laju pertumbuhan berat badan

tikus perlakuan (15% : 5%) dan (10% : 10%). Sedangkan laju pertumbuhan berat badan

tikus perlakuan (15%:5%) tidak berbeda nyata terhadap laju pertumbuhan berat badan

tikus perlakuan (20% : 0%) atau kontrol, tetapi berbeda nyata dengan tikus perlakuan

(10% : 10%); (5% : 15%) dan (0% : 20%). Perbedaan laju pertumbuhan ini disebabkan

karena pertambahan berat badan pada tiap tikus tidak sama atau berbeda sehingga laju

pertumbuhannya juga berbeda. Hasil analisis ragam antara lama konsumsi dengan laju

pertumbuhan berat badan tikus, menunjukkan bahwa laju pertumbuhan berat badan tikus

pada bulan pertama berbeda nyata dengan laju pertumbuhan berat badan pada bulan

kedua (p<0,05). Untuk lebih jelasnya dapat dilihat dalam bentuk histogram pada Gambar

10.

(2.0

2±0.

50)c

d

(1.8

7±0.

02)c

(2.1

6±0.

07)d

(1.4

5±0.

01)b

(-0.3

9±0.

04)a(2.4

8±0.

02)c

d

(2.0

6±0.

08)c

(2.4

2±0.

09)d

(1.5

2±0.

08)b

(-0.1

1±0.

10)a

-2.00

-1.00

0.00

1.00

2.00

3.00

0% 5% 10% 15% 20%

konsentrasi formalin

laju

per

tum

buha

n (g

/har

i)


Gambar 10. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin

yang berbeda terhadap laju pertumbuhan berat badan tikus Berdasarkan histogram di atas dapat dilihat bahwa laju pertumbuhan berat badan

rata-rata tertinggi terdapat pada tikus kontrol atau perlakuan (20% : 0%) pada lama

konsumsi 2 bulan. Sedangkan laju pertumbuhan berat badan rata-rata pada tikus

perlakuan lebih rendah, terutama pada tikus dengan perlakuan (0% : 20%) pada lama

konsumsi 1 bulan. Hal ini disebabkan karena adanya formalin dalam ransum perlakuan

yang mengakibatkan berat badan pada tikus perlakuan rendah sehingga laju

pertumbuhannya juga rendah.

4.3 Pengaruh Konsumsi Ransum Berformalin Terhadap Berat dan Histologi

Organ Dalam (Hati, Ginjal, Limpa) Tikus Percobaan 4.3.1 Hati

Hati merupakan organ parenkim yang ukurannya terbesar, mempunyai fungsi

yang banyak dan kompleks, antara lain : berperan metabolisme karbohidrat, protein dan

lemak, penyimpanan vitamin, besi dan tembaga, konyugasi dan ekstraksi steroid adrenal

dan gonad, dan detoksifikasi sejumlah zat endogen dan eksogen (Price dan Wilson,

1988). Pengukuran berat hati tikus dilakukan untuk mengetahui berat hati tikus setelah

diberi ransum perlakuan selama 1 dan 2 bulan. Penimbangan hati tikus dilakukan setelah

tikus dibedah dan diambil hatinya kemudian dimasukkan dalam timbangan dan dicatat

beratnya. Penimbangan berat hati tikus diukur pada akhir pemeliharaan 1 bulan dan 2

bulan. Data berat hati tikus dapat dilihat pada Lampiran 13 dan untuk data rerata berat

hati dan persentase berat hati pada 1 dan 2 bulan dapat dilihat pada Tabel 9.

Tabel 9. Data rerata berat hati dan persentase berat hati pada akhir konsumsi Lama

pemeliharaan (bulan)

Jenis ransum

Berat hati (g)

Berat badan sebelum dibedah

(g)

Persentase berat hati (%)*

20% : 0% 4,47±0,153 123,10±9,48 3,638±0,21 15% : 5% 4,30±0,000 119,83±0,42 3,599±0,03 10% : 10% 4,47±0,115 126,97±5,61 3,518±0,12 5% : 15% 3,77±0,115 105,83±0,45 3,568±0,09

1

0% : 20% 1,63±0,153 44,37±3,91 3,755±0,05 20% : 0% 6,87±0,551 208,30±1,30 3,295±0,24 15% : 5% 5,90±0,265 187,98±5,37 3,299±0,29 10% : 10% 6,37±0,252 206,83±6,44 3,085±0,10 5% : 15% 4,90±0,266 153,47±5,13 3,340±0,20

2

0% : 20% 1,77±0,250 51,10±6,56 3,510±0,05 Keterangan : ulangan = 3

* = berat hati / berat badan sebelum dibedah x 100%

Berdasarkan hasil analisis statistik pada (Lampiran 17) menunjukkan bahwa

perbedaan konsentrasi formalin pada ransum dan lama pemeliharaan berpengaruh nyata

(p<0,05) terhadap berat hati tikus, dan tidak terjadi interaksi (p>0,05) antara konsentrasi

formalin pakan dengan lama konsumsi terhadap berat hati tikus. Hal ini berarti bahwa

perbedaan konsentrasi formalin tepung ikan pada ransum memberikan pengaruh pada

persentase berat hati tikus, dimana dengan adanya formalin dalam ransum

mengakibatkan berat hati tikus menjadi besar karena mengalami pembengkakan. Untuk

lebih jelasnya dapat dilihat dalam bentuk histogram pada Gambar 11.

(3.6

38±0

.21)

ab

(3.5

99±0

.03)

a

(3.5

18±.

12)a

(3.5

68±0

.09)

ab

(3.7

55±0

.05)

b

(3.2

95±0

.24)

ab

(3.2

99±0

.29)

a

(3.0

85±0

.10)

a

(3.3

40±0

.20)

ab

(3.5

10±0

.05)

b

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

4.00

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%


pers

enta

se b

erat

hat

i (%

)


Gambar 11. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat hati tikus

Berdasarkan gambar di atas, dapat dilihat bahwa adanya formalin yang

terkandung dalam ransum yang dikonsumsi membuat persentase berat hati semakin

besar, sehingga dapat disimpulkan bahwa organ hati berkembang tidak normal karena

organ hati mengalami pembengkakan.

Pada penelitian ini juga dilakukan foto jaringan pada organ hati yang bertujuan

untuk mengetahui anatomi jaringan hati sehingga dapat diketahui pengaruh konsumsi

ikan berformalin terhadap organ dalam tikus yang salah satunya adalah hati.

Berdasarkan hasil foto jaringan maka dapat dilakukan pemeriksaan histopatologi

(anatomi jaringan) untuk mengetahui ada atau tidak pengaruh dari konsumsi ransum

yang mengandung ikan berformalin dengan konsentrasi dan lama konsumsi yang

berbeda terhadap anatomi jaringan hati tikus. Hasil diagnosa pada hati tikus dapat dilihat

pada Tabel 10. Sedangkan hasil dari foto jaringan organ hati dapat dilihat pada Gambar

12 sampai Gambar 28.

Tabel 10. Hasil diagnosa pada hati tikus percobaan

Keterangan :

TAP : Tidak ada perubahan spesifik dari jaringan atau organ

DV : Adanya bentukan vakuola lemak yang berbatas jelas pada sitoplasma sel hati

DH : Degenerasi hidrofik (ditandai dengan kebengkakan sel), perubahan bisa bersifat reversibel atau irreversibel

Gambar 12. Struktur histologis jaringan

hati tikus kontrol (1 bulan) normal


hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) normal

Faktor Jumlah tikus (ekor)

Lama pemeliharaan

(bulan)

Jenis ransum (kasein : tepung ikan

berformalin) (%)

Normal (TAP)

Mengalami degenerasi

vakuola (DV)

Mengalami degenerasi

hidrofik (DH)

20% : 0% 3 0 0 15% : 5% 2 0 1 10% : 10% 2 1 0 5% : 15% 2 1 0

1

0% : 20% 2 0 1 20% : 0% 3 0 0 15% : 5% 2 1 0 10% : 10% 1 2 0 5% : 15% 1 2 0

2

0% : 20% 0 3 0

1

4

2 3

1

2 3

4


hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) DH


hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (1 bulan) DV





3

1 2

4

5

3

1

5

3

1

2

1

3

6

3

1

4

2

Gambar 17. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 5%:15% (1 bulan) normal

1

4

3 6

3 2

Gambar 19. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 0%:20% (1 bulan) normal


hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 0%:20% (1 bulan) DH





1 3

5

1

2

3

4

Gambar 21. Struktur histologis jaringan hati tikus kontrol (2 bulan) normal

1

2

6

6

3

3

2

4

Gambar 23. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (2 bulan) yang DV

1 3

2

2

6

3

Gambar 25. Struktur histologis jaringan hati tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (2 bulan) DV





1

6

3

2

3

4

1 Gambar 27. Struktur histologis jaringan


Keterangan : Penampang melintang;

pewarnaan HE; pembesaran 400X; 1.Vena sentralis; 2. Sinusoid (mengalami penyempitan akibat pembengkakan sel); 3. Inti; 4. Hepatosit; 5. Timbunan air; 6. Timbunan lemak trigliserida

2

6

3

Berdasarkan pada Tabel 10 dapat diketahui bahwa organ hati pada bulan pertama

pada semua tikus kontrol (20% : 0%) tidak mengalami perubahan yang spesifik, pada

tikus perlakuan (15% : 5%) dan (0% : 20%) masing-masing 2 tikus tidak mengalami

perubahan yang spesifik dan 1 tikus mengalami DH (Degenerasi Hidrofik), pada tikus

perlakuan (10% : 10%) dan (5% : 15%) masing-masing 2 tikus tidak mengalami

perubahan yang spesifik dan 1 tikus mengalami DV (Degenerasi Vakuola). Sedangkan

organ hati pada bulan kedua pada tikus kontrol (20% : 0%) tidak mengalami perubahan

yang spesifik, pada tikus perlakuan (15% : 5%) 2 tikus tidak mengalami perubahan yang

spesifik dan 1 tikus mengalami DV (Degenerasi Vakuola), pada tikus perlakuan (10% :

10%) dan (5% : 15%) masing-masing 1 tikus tidak mengalami perubahan yang spesifik

dan 2 tikus mengalami DV (Degenerasi Vakuola), dan pada tikus perlakuan (0% : 20%)

semua tikus mengalami DV.

Hati ialah alat tubuh yang termudah terkena perlemakan, perubahan biasanya

mulai di pusat (sentral) (Djojopranoto, 1960). Pada Gambar 13, dapat dilihat hati

mengalami Degenerasi Vakuola atau perlemakan hati, yaitu terjadi karena adanya

penimbunan lemak berlebih pada sitoplasma hati. Perlemakan hati disebabkan terjadinya

defisiensi protein, karena protein terikat dengan formaldehid sehingga sulit dicerna dan

disintesis. Defisiensi protein ini mengakibatkan, berkurangnya penggunaan trigliserida

dari pemecahan lemak dalam pembentukan lipoprotein, yang merupakan bentuk lemak

yang bisa masuk dalam sistem sirkulasi, baik saluran darah maupun limpa. Trigliserida

berlebih tersebut akan tertimbun dalam hati (Price dan Wilson, 1985).

Menurut Atmodjo (1990), degenerasi hidropik merupakan pembengkakan sel

dengan penimbunan lebih banyak air dan metabolit dalam vakuola-vakuola yang

terbentuk dalam sitoplasma. Pada Gambar 14 dapat dilihat bahwa sel-sel hati mengalami

degenerasi hidropik, yang mirip dengan perlemakan hati, hanya saja sitoplasma sel yang

terkena tampak bervakuola, tetapi isinya air bukan lemak. Penyebab dari degenerasi

hidropik hampir sama dengan perlemakan hati, yaitu adanya gangguan metabolisme dan

cedera sel. Cedera pada sel mengakibatkan hilangnya pengaturan volume pada bagian-

bagian sel. Biasanya, untuk menjaga kestabilan lingkungan di dalam sel, harus

mengeluarkan energi metabolik untuk memompa ion natrium keluar dari sel. Jika ada

gangguan, baik itu proses metabolismenya ataupun adanya cedera sel, misal pada

membran, maka sel tidak dapat memompa ion natrium yang cukup. Terjadinya kenaikan

konsentrasi ion natrium di dalam sel, menyebabkan osmosis air masuk dalam sel.

Akibatnya sel mengalami pembengkakan. Pada saat air tertimbun dalam sitoplasma,

organel-organel sitoplasma juga menyerapnya, sehingga menyebabkan pembengkakan

seluruh isi sel (Price dan Wilson, 1985).

Menurut Djojopranoto (1960), kerusakan sel DH lebih berat dan sel dapat mati,

meskipun pada dasarnya degenerasi ini juga bersifat reversibel. Kelainan ini dapat

disebabkan karena keracunan kloroform dan karbon tetraklorida dan pada anoxia. Pada

penelitian ini degenerasi vakuola dan degenerasi hidropik yang terjadi pada hati tikus

termasuk degenerasi vakuola yang disebabkan oleh intoksifikasi zat kimia, dimana zat

kimia yang digunakan pada penelitian ini adalah formalin.

4.3.2 Ginjal

Ginjal merupakan fungsi vital sebagai pengatur volume dan komposisi kimia

darah (dan lingkungan internal) dengan mengekskresikan cairan dan air secara selektif.

Kalau kedua ginjal karena sesuatu hal gagal melakukan fungsinya, maka kematian akan

terjadi dalam waktu 3 sampai 4 minggu kemudian. Fungsi vital ginjal dilakukan dalam

organ dengan filtrasi plasma darah melalui glomerulus, diikuti dengan proses reabsorpsi

sejumlah cairan dan air yang dibutuhkan di sepanjang tubulus ginjal (Price dan Wilson,

1982). Setiap ginjal dilingkupi kapsul tipis dari jaringan fibrus yang rapat

membungkusnya, dan membentuk pembungkus yang halus. Di dalamnya terdapat

struktur-struktur ginjal. Warnanya ungu tua dan terdiri atas bagian korteks di sebelah

luar, dan bagian medula di sebelah dalam (Pearce, 1982).

Pengukuran berat ginjal tikus dilakukan untuk mengetahui berat ginjal tikus

setelah diberi ransum perlakuan selama 1 dan 2 bulan. Penimbangan ginjal tikus

dilakukan setelah tikus di bedah dan diambil ginjalnya kemudian dimasukkan dalam

timbangan dan dicatat beratnya. Penimbangan berat ginjal tikus diukur pada akhir

pemeliharaan 1 bulan dan 2 bulan. Data berat ginjal tikus dapat dilihat pada Lampiran 13

dan untuk data rerata berat ginjal dan persentase berat ginjal pada 1 dan 2 bulan dapat

dilihat pada Tabel 11.

Tabel 11. Data rerata berat ginjal dan persentase berat ginjal pada akhir konsumsi Lama


Jenis ransum

Berat ginjal (g)


(g)

Persentase berat ginjal (%)*

20% : 0% 1,09±0,10 123,10±9,48 0,896±0,18 15% : 5% 1,13±0,06 119,83±0,42 0,900±0,08 10% : 10% 0,97±0,06 126,97±5,61 0,905±0,02 5% : 15% 0,50±0,10 105,83±0,45 0,907±0,05

1

0% : 20% 2,17±0,11 44,37±3,91 1,073±0,11 20% : 0% 1,97±0,06 208,30±1,30 1,040±0,05 15% : 5% 2,13±0.06 187,98±5,37 1,056±0,04 10% : 10% 1,63±0,11 206,83±6,44 1,039±0,01 5% : 15% 0,67±0,06 153,47±5,13 1,048±0,03

2


* = berat ginjal / berat badan sebelum dibedah x 100%


subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin pada ransum dengan konsentrasi yang

berbeda berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap berat ginjal tikus, lama pemeliharaa

berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap berat ginjal tikus, dan tidak terjadi interaksi

(p>0,05) antara konsentrasi formalin pakan dengan lama konsumsi terhadap berat ginjal

tikus. Hal ini berarti bahwa perbedaan konsentrasi formalin tepung ikan pada ransum

memberikan pengaruh pada persentase berat ginjal tikus, adanya formalin dalam ransum

mengakibatkan berat ginjal tikus menjadi besar. Berdasarkan uji BNJ untuk konsentrasi

formalin dalam pakan, menunjukkan bahwa berat organ ginjal tikus kontrol tidak

berbeda nyata (p>0,05) dengan tikus perlakuan (15% : 5%); (10% : 10%); (5% : 15%),

tetapi berbeda nyata (p<0,05) dengan tikus perlakuan (0% : 20%). Semakin tinggi

konsentrasi formalin dalam ransum maka semakin besar persentase berat ginjal. Pada

tikus perlakuan (0% : 20%) berat ginjal paling tinggi, hal ini dikarenakan oleh tingginya

konsentrasi formalin dalam ransum. Untuk lebih jelasnya dapat dilihat dalam bentuk

histogram pada Gambar 29. (0

.896

±0.1

8)a

(0.9

00±0

.08)

a

(0.9

05±0

.02)

a

(0.9

07±0

.05)

a

(1.0

73±0

.11)

b

(1.0

40±0

.05)

a

(1.1

52±0

.14)

b

(1.0

48±0

.03)

a

(1.0

39±0

.01)

a

(1.0

56±0

.04)

a

0.00

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

1.20

1.40

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

jenis ransum yang dikonsumsi

pers

enta

se b

erat

gin

jal (

%)


Gambar 29. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat ginjal tikus

Berdasarkan Gambar 29 dapat diketahui bahwa berat ginjal tikus berbeda pada

tiap bulan dan konsentrasi, dimana berat ginjal tikus perlakuan lebih tinggi dari pada

berat ginjal tikus kontrol. Berat ginjal tikus tertinggi terdapat pada tikus dengan ransum

perlakuan subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin pada konsentrasi (0% : 20%)

dengan lama konsumsi 2 bulan, dan berat ginjal tikus terendah terdapat pada tikus yang

diberi ransum kontrol (20% : 0%) dengan lama konsumsi 1 bulan. Sehingga dapat

disimpulkan bahwa ginjal berkembang tidak normal dimana ginjal mengalami

pembengkakan yang diakibatkan oleh banyaknya sel-sel mati yang menyumbat tubuli

ginjal. Menurut Koeman, 1987), terjadinya nekrosis pada sel tubuli primer akan disertai

dengan penyumbatan dengan material yang telah mati di dalam tubuli ginjal sehingga

ginjal akan membengkak dan fungsinya terganggu.

Pada penelitian ini juga dilakukan foto jaringan pada organ ginjal yang bertujuan

untuk mengetahui anatomi jaringan ginjal sehingga dapat diketahui pengaruh konsumsi

ikan berformalin terhadap organ dalam tikus yang salah satunya adalah ginjal.




berbeda terhadap anatomi jaringan ginjal tikus. Hasil diagnosa pada ginjal tikus dapat

dilihat pada Tabel 12. Sedangkan hasil dari foto jaringan organ ginjal dapat dilihat pada

Gambar 30 sampai Gambar 44.

Tabel 12. Hasil diagnosa pada ginjal tikus kontrol dan perlakuan

Keterangan :

Faktor Jumlah tikus (ekor) Lama



berformalin) (%) Normal (TAP) Mengalami nekrosis

(N,CA)

20% : 0% 3 0 15% : 5% 3 0 10% : 10% 3 0 5% : 15% 2 1

1

0% : 20% 2 1 20% : 0% 3 0 15% : 5% 1 2 10% : 10% 1 2 5% : 15% 1 2

2

0% : 20% 0 3

TAP : Tidak ada perubahan spesifik dari jaringan atau organ N : Nekrosis (kematian sel yang ditandai dengan lisis atau piknotik pada inti dan

sitoplasma eosinofilik) pada epitel tubuli ginjal CA : Timbunan massa kalsium yang berwarna kebiruan pada daerah tubuli ginjal

yang mengalami nekrosis


ginjal tikus kontrol (1 bulan) normal


ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 10%:10% (1 bulan) normal


ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 5%:15% (1 bulan) N,CA

3 5

6 3

1 4 2 1 5 2


ginjal tikus perlakuan kasein :tepung ikan asin berformalin 15%:5% (1 bulan) normal

3

5 2 1 2 1 5 Gambar 33. Struktur histologis jaringan


2 7

5 8 2 1 Gambar 35. Struktur histologis jaringan



ginjal tikus perlakuan kasein :tepung ikan asin berformalin 0%:20% (1 bulan) N, CA





1 2

5

2

8

Gambar 37. Struktur histologis jaringan ginjal tikus kontrol (2 bulan) normal


ginjal tikus perlakuan kasein : tepung ikan asin berformalin 15%:5% (2 bulan) N, CA



7 3 3

3

8

7 5

8

2

9 1

3

5





2

9

7 5 1

2 3

Gambar 43. Struktur histologis jaringan ginjal tikus perlakuan kasein :tepung ikan asin berformalin 5%:15% (2 bulan) N, CA Keterangan: Penampang melintang;

pewarnaan HE; pembesaran 400X; 1. Glomerulus; 2. Kapsul Bowman; 3. Tubula berpilin proksimal; 4.Tubula berpilin distal; 5. Inti sel normal 6. Lapisan parietal; 7.Timbunan masa kalsium; 8. Inti sel mengalami piknosis; 9. Inti sel mengalami karioreksis

2

1 8

7

Berdasarkan Tabel 12 dapat diketahui bahwa organ ginjal pada bulan pertama

pada semua tikus kontrol (20% : 0%) dan tikus perlakuan (15%: 5%); (10% : 10%)

tidak mengalami perubahan yang spesifik dari jaringan atau organ, pada perlakuan (5% :

15%) dan (0% : 20%) masing-masing terdapat 2 tikus normal dan 1 tikus mengalami

N,CA (Nekrosis, Calsifikasi; nekrosis pada epitel tubuli ginjal dan timbunan massa

kalsium yang berwarna kebiruan pada daerah tubuli ginjal yang mengalami nekrosis).

Sedangkan organ ginjal tikus pada bulan kedua pada perlakuan (0% : 20%) tidak

mengalami perubahan yang spesifik atau normal, pada perlakuan (15%: 5%); (10% :

10%); dan (5% : 15%) masing-masing terdapat 1 tikus normal dan 2 tikus mengalami

N,CA, dan pada perlakuan (0% : 20%) semua tikus mengalami N,CA. Sehingga dapat

diketahui bahwa konsentrasi dan lama konsumsi (lama pemaparan formalin pada tubuh

tikus) berpengaruh terhadap terjadinya kerusakan anataomi jaringan ginjal tikus (N,CA).

Jika kandungan formalin dalam tubuh tinggi maka formalin akan bereaksi secara kimia

dengan hampir semua zat didalam sel, sehingga menekan fungsi sel dan menyebabkan

kematian sel yang menyebabkan kerusakan pada organ tubuh (Anonymous, 2006b).

Menurut Djojopranoto (1960), nekrosis adalah kematian sel/sekelompok sel,

atau sebagian dari pada alat tubuh yang masih mempunyai hubungan dengan tubuh yang

hidup dan tanda-tanda kematian sel terdapat pada inti sel, nekrosis juga merupakan suatu

proses yang dinamik sehingga memerlukan waktu untuk mengadakan berbagai

perubahan morfologi. Ditambahkan oleh Atmodjo (1990), pada nekrosis tahapan

perubahan morfologi yang nyata pada inti sel adalah 1. piknosis (penggumpalan

kromatin dengan selaput inti berkerut), 2. karyorheksis (membran inti pecah dan isinya

mengadakan fragmentasi), 3. karyolisis atau kromatolisis (melarutnya seluruh inti).

Pada dasarnya nekrosis terjadi akibat organ kekurangan asupan O2 yang dapat terjadi

karena beberapa sebab, antara lain: ischamia atau anemia lokal, agens fisik, agens kimia,

agens biologik, dan kepekaan yang berlebihan. Pada penelitian ini N,CA yang terjadi

pada ginjal tikus disebabkan oleh agens kimia, yaitu formalin.

4.3.3 Limpa

Limpa adalah suatu massa besar sel-sel limfoid dan retikuloendotel yang terletak

dalam aliran darah. Sinusoid-sinusoid limpa terisi darah bukan cairan limfe. Struktur

limpa memungkinkan interaksi yang erat antara limfosit, makrofag, dan benda-benda

yang dibawa aliran darah (Price dan Wilson, 1985). Limpa terdiri atas jalinan struktur

jaringan ikat. Di antara jalinan-jalinan itu terbentuk isi limpa atau pulpa yang terdiri atas

jaringan limfe dan sejumlah besar sel darah. Limpa dibungkus oleh kapsul yang terdiri

atas jaringan kolagen dan elastik dan beberapa serabut otot halus (Pearce, 1982).

Pengukuran berat limpa tikus dilakukan untuk mengetahui berat limpa tikus

setelah diberi ransum perlakuan selama 1 dan 2 bulan. Penimbangan limpa tikus

dilakukan setelah tikus di bedah dan diambil limpanya kemudian dimasukkan dalam

timbangan dan dicatat beratnya. Penimbangan berat limpa tikus diukur pada akhir

pemeliharaan 1 bulan dan 2 bulan. Data berat limpa tikus dapat dilihat pada Lampiran 13

dan untuk data rerata berat limpa tikus dan persentase berat badan pada 1 dan 2 bulan

dapat dilihat pada Tabel 13.

Tabel 13. Data rerata berat limpa dan persentase berat limpa pada akhir konsumsi Lama


Jenis ransum

Berat limpa (g)


(g)

Persentase berat limpa (%)*

20% : 0% 0,37±0,07 123,10±9,48 0,298±0,04 15% : 5% 0,37±0,08 119,83±0,42 0,300±0,04 10% : 10% 0,33±0,09 126,97±5,61 0,283±0,03 5% : 15% 0,17±0,06 105,83±0,45 0,313±0,05

1

0% : 20% 0,80±0,10 44,37±3,91 0,334±0,11 20% : 0% 0,73±0,06 208,30±1,30 0,384±0,05 15% : 5% 0,83±0,06 187,98±5,37 0,388±0,04 10% : 10% 0,6±0,00 206,83±6,44 0,400±0,02 5% : 15% 0,2±0,00 153,47±5,13 0,386±0,02

2


* = berat limpa / berat badan sebelum dibedah x 100%


subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin pada ransum dengan konsentrasi yang

berbeda tidak berpengaruh nyata terhadap berat limpa tikus (p>0,05), tetapi lama

konsumsi berpengaruh nyata terhadap berat limpa tikus (p<0,05), dan tidak terjadi

interaksi antara konsentrasi formalin pakan dengan lama konsumsi terhadap berat limfa

tikus (p>0,05). Berdasarkan uji BNJ untuk konsentrasi formalin dalam ransum,

menunjukkan bahwa berat organ limpa tikus kontrol tidak berbeda nyata dengan tikus

perlakuan (p>0,05). Untuk lebih jelasnya dapat dilihat dalam bentuk histogram pada

Gambar 45. (0

.298

±0.0

4)a

(0.3

00±0

.04)

a

(0.2

83±0

.03)

a

(0.3

13±0

.05)

a

(0.3

34±0

.11)

a

(0.3

84±0

.05)

a

(0.3

88±0

.04)

a

(0.4

00±0

.02)

a

(0.3

86±0

.02)

a

8(0.

346±

0.02

)a

0.0000.0500.100

0.1500.2000.2500.300

0.3500.4000.450

20% : 0% 15% : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

jenis ransum yang dikonsumsi

pers

enta

se b

erat

lim

pa (%

)


Gambar 45. Histogram pengaruh konsumsi ransum dengan konsentrasi ikan berformalin yang berbeda terhadap berat limpa tikus

Berdasarkan histogram diatas dapat dilihat bahwa berat limpa tikus berbeda pada

tiap bulan dan konsentrasi, berat limpa tikus tertinggi terdapat pada tikus yang diberi

ransum perlakuan subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin pada konsentrasi

(10% : 10%) dengan lama konsumsi 2 bulan dan berat limpa terendah terdapat pada

tikus yang diberi ransum perlakuan subtitusi kasein dengan tepung ikan berformalin

pada konsentrasi (10% : 10%) dengan lama konsumsi 1 bulan.

Pada penelitian ini juga dilakukan foto jaringan pada organ limpa tikus yang

bertujuan untuk mengetahui anatomi jaringan limpa sehingga dapat diketahui pengaruh

konsumsi ikan berformalin terhadap organ dalam tikus yang salah satunya adalah limpa.




berbeda terhadap anatomi jaringan limpa tikus. Hasil diagnosa pada limpa tikus dapat

dilihat pada Tabel 14. Sedangkan hasil dari foto jaringan organ limpa dapat dilihat pada

Gambar 46 sampai Gambar 55.

Tabel 14. Hasil diagnosa pada limpa tikus kontrol dan perlakuan

Keterangan :

Faktor Jumlah tikus (ekor)

Lama pemeliharaan

(bulan)


berformalin) (%) Normal (TAP)

Mengalami degenerasi vakuola

atau nekrosis (DV/N,CA)

20% : 0% 3 0 15% : 5% 3 0 10% : 10% 3 0 5% : 15% 3 0

1

0% : 20% 3 0 20% : 0% 3 0 15% : 5% 3 0 10% : 10% 3 0 5% : 15% 3 0

2

0% : 20% 3 0

TAP = Tidak ada perubahan spesifik dari jaringan atau organ

N = Nekrosis (kematian sel yang ditandai dengan lisis atau piknotik pada inti dan

sitoplasma eosinofilik) pada epitel tubuli ginjal

CA = Timbunan massa kalsium yang berwarna kebiruan pada daerah tubuli ginjal

yang mengalami nekrosis

DV = Adanya bentukan vakuola lemak yang berbatas jelas pada sitoplasma sel hati


limpa tikus kontrol (1 bulan) normal


limpa tikus perlakuan kasein :tepung ikan asin berformalin 10%:10% (1 bulan) normal



4 4

2

2 1

4 1 3 Gambar 47. Struktur histologis jaringan


4 4

1

2 3 1



1 1

3 3 Gambar 51. Struktur histologis jaringan

limpa tikus kontrol (2 bulan) normal

2 4





2




limpa tikus perlakuan 0%:20% (2 bulan) normal

Keterangan: Penampang melintang; pewarnaan HE; pembesaran 400X 1. Pusat pembenihan; 2. Pulpa putih; 3. Pulpa merah; 4. Inti.

Berdasarkan hasil pemeriksaan anatomi jaringan limpa pada Tabel 14, dapat

diketahui bahwa pada semua jaringan limpa tikus perlakuan tidak terjadi perubahan

morfologi atau dapat dikatakan semua jaringan limpa tikus masih normal.

1

2

1 3

3 2

1

3 1

2 4

5. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

Penggantian kasein dengan tepung ikan asin berformalin (sesuai dengan kisaran

residu di pasaran) pada ransum pakan tikus berbahaya bagi pertumbuhan dan

kesehatan tikus.

Pengkonsumsian ikan asin berformalin mengakibatkan penurunan berat badan

seiring dengan peningkatan konsentrasi formalin. Berat badan paling rendah terdapat

pada tikus perlakuan dengan ransum (0%:20%).

Adanya formalin dalam ransum menyebabkan jumlah konsumsi tikus perlakuan

menjadi rendah. Jumlah konsumsi paling rendah terdapat pada tikus perlakuan

dengan ransum (0%:20%).

Pengkonsumsian ikan asin berformalin dapat mengakibatkan terjadinya degenerasi

vakuola dan degenerasi hidrofik pada hati dan nekrosis pada ginjal.

5.2. Saran

Sebaiknya tidak menggunakan formalin sebagai bahan pengawet makanan

Perlu adanya penelitian lebih lanjut tentang pengaruh konsumsi ransum berformalin

terhadap kadar formaldehid dalam darah dan urine pada tikus percobaan.

DAFTAR PUSTAKA

Afrianto, E. dan E. Liviawaty. 1989. Pengawetan dan Pengolahan Ikan. Penerbit Kanisius. Yogyakarta. 125 hal

. 1975. Prosedur Analisa kimia Komposisi Dan Kesegaran Ikan. Akademi Usaha Perikanan. Jakarta. 55 hal

. 1999. Formaldehyde. http://www.eco-usa.net.formaldehyde.htm. Diakses 19 Maret 2006. 2 hal

. 2005 . a Kami Terpaksa Menggunakan Formalin.

http://www.kompas.com/Kesehatan/news. Diakses 8 Agustus 2006. 1 hal

. 2005b. Formalin. http://www.pom.go.id. 2 hal

. 2005c. Ancaman Ikan Asin, Mie Basah, Baso, Tahu. http://www.blog.boleh.com/s/sn/snhadi/?pv43092. Diales 30 Maret 2006. 1-2 pp.

. 2005d. Mengenal Formalin. http://www.suarapembaharuan.com. Diakses

20 Juli 2006. 2 hal . 2005e. Pengembangan Limbah Sebagai Bahan Baku Sekunder Untuk

Pakan dan Pupuk. http://www.ampl.or.id.mht. Diakses 21 Agustus 2006. 1 hal . 2006a. Awas Bahaya Formalin. http://www.suara-merdeka.co.id. Diakses

20 Juli 2006. 3 hal.

. 2006b. Tahu, Makanan Favorit yang Keamanannya Perlu Diwaspadai. http://www.indosiar.com. Diakses 20 Juli 2006. 1 hal

. 2006c. Mengenal Formalin dan Bahayanya. http://www.pom.go.id. 2 hal

. 2006d. Formaldehyde. http://www.wikipedia.org/wiki/formaldehyde.

Diakses 6 Agustus 2006. 3 hal AOAC. 1990. Official of Analysis of The Assosiation of Official Analytical Chemist.

Editor: Horwitsz, W. Assosiation of Official Analytical Chemist. Washington Apriyantono, A., D. Fardiaz, N.L. Puspitasari, Sedarnawati dan S. Budiyanto. 1989.

Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Institut Pertanian Bogor. Bogor. 229 hal

http://www.eco-usa.net.formaldehyde.htm/

http://www.pom.go.id/

http://www.blog.boleh.com/s/sn/snhadi/?pv43092

http://www.suara-merdeka.co.id/

http://www.indosiar.com/


http://www.wikipedia.org/wiki/formaldehyde.%20Diakses%206%20Agustus%202006

http://www.wikipedia.org/wiki/formaldehyde.%20Diakses%206%20Agustus%202006

73

Astawan, M. 2006. Mi, Lezat Bergizi Tetapi Rawan Formalin. http://www.indosiar.com. Diakses 6 Agustus 2006. 5 hal

Astuti, M. 1986. Uji Gizi I. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi. Universitas

Gadjah Mada. Yogyakarta. 57 hal Atmodjo, P, A. 2001. Album Patologi Anatomi : Fakultas Kedokteran Universitas

Airlangga. Surabaya. 83 hal Barbour, B and C. Packers. 1962. Collected Method Pacific Fisheries Technologist. P.

7a. Kanada. Djojopranoto, M. 1963. Buku Pelajaran Patologi. Djilid I. Dasar-dasar Patologi. Fakultas

Kedokteran Universitas Airlangga. Surabaya. 183 hal Effendie, M. I. 1997. Biologi Perikanan. Yayasan Pustaka Nusantara. Yogyakarta. 163

hal Elvandari, R. 2006. Pengaruh Cara dan Konsentrasi Perendaman Larutan Formalin

dalam Pembuatan Ikan Asin Kuniran (Upeneus moluccensis) Terhadap Residunya dalam Produk Setelah Digoreng. Skripsi. Teknologi Hasil Perikanan. Fakultas Perikanan. Universitas Brawijaya. Malang. Tidak dipublikasikan. 91 hal.

Hadiwiyoto, S. 1993. Teknologi Hasil Perikanan. Jilid 1. Penerbit Liberty. Yogyakarta.

275 hal Instanref. 2006. Chemical, Toxicity, Safety and Enviromental Analysis Information for

Formadehyde. http://instatref.com/formald.htm. diakses tanggal 20 juli 2006.2pp Indra. 2006. Ancaman Formalin di Makanan Kita. http://www.pom.go.id. Diakses 8

Agustus 2006. 2 hal Judarwanto, W. 2006. Pengaruh Formalin Bagi Sistem Tubuh. http://puterakembara.org.

Diakses tanggal 8 Agustus 2006. 3 hal Kiernan. J.A. 2000. Formaldehyde, Formalin, Paraformaldehyde and Glutaraldehyde:

What They Are and What They Do. http://publish.uwo.cankiernan/foermglut.htm. Diakses tanggal 20 juli 2006. 1-2 pp.

Koeman, J. D. 1988. Pengantar Umum Toksikologi. Penerjemah : R.H. Yudono. Gadjah

Mada University Press. Yogyakarta. Hal 34-81 Lu, F. C. 1995. Toksikologi Dasar : Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko.

Penerjemah : Edi Nugroho, Zunilda S. B dan Iwan Darmansyah. Universuitas Indonesia Press. Jakarta

http://www.indosiar.com/

http://instatref.com/formald.htm


http://puterakembara.org/

http://publish.uwo.cankiernan/foermglut.htm

74

Muhammad, S. 1992. Diktat Kuliah: Dasar-dasar Metodologi Penelitian dan Rancangan Percobaan. Fakultas Perikanan Universitas Brawijaya. Malang. 317 hal

Murniyati, A.S. dan Sunarman. 2000. Pendinginan Pembekuan dan Pengawetan Ikan.

Kanisius. Yogyakarta. 220 hal Murrachman; Soetrisno, I. dan J. A. Sumardi. 1983. Cara Analisa Komposisi Kimia

Daging Ikan dan Hasil Perairan Lainnya. Universitas Brawijaya. Malang Nasional Research Council (NRC). 1978. Nutrient Requirements of Laboratory Animal.

Nacional Academy of Sciences. Washington. Page 23 Nazir, M. 1988. Metode Penelitian. Ghalia Indonesia. Jakarta. 622 hal Nelson, J. S. 1984. Fishes of the World. 2nd edition. A Willey Interscience Publication.

United States of America Pearce, E. 1982. Anatomi dan Fisiologi untuk Paramedis. PT. Gramedia. Jakarta. 344 hal Price, S. A dan L. M Wilson. 1982. Patofisiologi Konsep Klinik Proses-proses Penyakit.

Bagian 2. Edisi 2. Alih Bahasa : Adji Dharma. EGC Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta. 486 hal

_______________________. 1985. Patofisiologi Konsep Klinik Proses-proses Penyakit.

Bagian 1. Edisi 2. Alih Bahasa : Adji Dharma. EGC Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta. 645 hal

PT. New Zealand. 2005. Komposisi Protein Pada Produk Calcium Caseinat. Jakarta Rachman A.D., D. Afriati, dan Sutyiati, M. 1984. Icthyologi I. Fakultas Perikanan

Universitas Brawijaya. Malang. 91 hal Sediaoetama, A. D. 2000. Ilmu Gizi Untuk Mahasiswa dan Profesi. Jilid 1. Dian Rakyat.

Jakarta. 319 hal Sitompul, S.M., Bambang, G. 1995. Analisis Pertumbuhan Tanaman. Universitas Gajah

Mada Press. Yogyakarta. 72 hal Small, N. E. 2004. Using Activities for Reaction Kinetics.

http://chemical.good.uk/people/jack/Projects/proj2003.net/small.LAP.doc. Diakses pada tanggal 6 Agustus 2006. 7 hal.

Sudarmadji, S., B. Haryono dan Suhardi. 1989. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian.

Liberty. Yogyakarta. 171 hal Sudarmadji. S, B. Haryono dan Suhardi. 1997. Prosedur Analisa Untuk Bahan Makanan

dan Pertanian. Liberty. Yogyakarta. 160 Hal

http://chemical.good.uk/people/jack/Projects/proj2003.net/small.LAP.doc

75

Sudarwati, S., Suntoro, dan S. Handari. 1983. Metode Pewarnaan (Histologi dan Histokimia). Bhratara Karya Aksara. Jakarta. 394 hal

Sukesi. 2006. Cara Baru Kurangi Kadar Formalin. http://www.its.ac.id. Diakses 8

Agustus 2006. 1 hal Wasito. 1991/1992. Hewan Model Dalam Uji Gizi. Pusat Antar Universitas. Pangan dan

Gizi. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. 175 Hal Wikanta, T. Khaerani dan L. Rahayu. 2003. Pengaruh Pemberian Natrium Alginat Pada

Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia Volume 8 Nomor 6. hal 22-23

Winarno, F. G. 1992. Kimia Pangan dan Gizi. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.

247 hal Yitnosumanto, S. 1993. Percobaan Analisis dan Interpretasinya. PT Gramedia Pustaka

Utama. Jakarta. 299 hal Yuniati, H. 2004. Analisis Zat Gizi Bahan Makanan untuk Melengkapi Daftar

Komposisi Bahan Makanan. Kumpulan Laporan Penelitian. http://www.p3gizi.litbang.depkes.go.id. Diakses 21 Agustus 2006. 1 hal

Yuswanto. 2006. Formalin Tidak Berbahaya. http://www.jawapos.co.id. Diakses 20 Juli

2006. 2 hal Zaelanie, K. dan R. Nurdiani. 2004. Diktat Kuliah Teknologi Hasil Perikanan I. Fakultas

Perikanan Universitas Brawijaya. Malang

http://www.its.ac.id/

Lampiran 1. Komposisi mineral mix dalam 1000 g

Sumber : Muchtadi, 1989.

Jenis mineral Jumlah mineral NaCl

KI

KH2PO4

MgSO4 anhidrid

CaCO3

FeSO4 7H2O

MnSO4 7H2O

ZnSO4 7H2O

CuSO4 5H2O

139,3

0,79

389

57,3

381,4

27,0

4,01

0,548

0,477

CoCl2 6H2O 0.023

Lampiran 2. Komposisi vitamin ”Superviton” setiap 2 Kaplet Komposisi Jumlah

Vitamin A

Vitamin D

Vitamin B1

Vitamin B2

Vitamin B6

Vitamin B12

Vitamin C

Niacinamide

Choline Bitartrate

Vitamin H

Vitamin E

Vitamin K

Dx-Calcium Pantothenas

Inositol

Folic Acid

dl-Methionone

Glutamic Acid

Molybdenum

I-Lysine Monohydrochloride

Para-Aminobenzoic Acid

Iron (Ferrous Sulphate)

Iodine (Pot iodide)

Copper (Cupric Sulphate)

Manganese (Mang Sulphate)

Phosporous (Calcium Phosph)

Magnesium (Mag. Sulphate)

Zinc (Zinc Sulphate)

Sulphur Brewer’s Yeast

Sodium

Potassium

Calcium (Calcium Phosph)

5000 IU

400 IU

5,0 mg

2,0 mg

1,0 mg

5,0 mg

25,0 mg 10,0 mg

3,0 mg

0,1 ng

5,0 mg 2,0mg 1,0 mg

0,5 mg

0,25 mg

1,25mg

5,0 mg

0,25mg

1,25 mg

5,0 mg

0,25 mg

0,25 mg

1,0 mg

10,0 mg

0,3 mg 1,0mg

0,5 mg

10,0 mg

0,1mg 1,0mg

0,05 mg

2,0 mg

0,05 mg

5,0 mg

5,0 mg

10,0 mg

Sumber: PT. Erela, Semarang

Lampiran 3. Perhitungan jumlah tepung ikan asin kuniran berformalin yang dibutuhkan sebagai pengganti kasein

• Rata-rata kebutuhan makanan tikus dewasa perharinya sebesar 15 gram

• Faktor perlakuan sebanyak 4, yaitu perbandingan tepung ikan dan kasein 5%:15%; 10%:10%; 15%:5% dan 20%:0%.

• Lama pengamatan 1 dan 2 bulan

• Persentase kasein dalam 15 gram (kebutuhan pakan perhari) 20% (3 gram).

• Kandungan protein kasein dalam 10 gram adalah 88,53% sehingga dalam 3 gram

= gramx 66,23100

53,88=

• Kandungan kalori kasein dalam 3 gram = 2,66 gram x 4 Kkal = 10,64 Kkal.

• Kandungan protein tepung ikan asin kuniran berformalin dalam 100 gram = 72,02 gram Kandungan lemak tepung ikan asin kuniran berformalin dalam 100 gram = 3,74 gram Kandungan karbohidrat tepung ikan asin kuniran berformalin dalam 100 gram = 3,54 gram

• Kandungan kalori tepung ikan dalam 3 gram :

Protein dalam 3 gram = 606,202,72100

3=x gram ; 2,606 gram x 4 Kkal = 8,64

Kkal

Lemak dalam 3 gram = 112,074,3100

3=x gram; 0,112 gram x 9 Kkal = 1,0098

Kkal

Karbohidrat dalam 3 gram = 1062,054,3100

3=x gram; 0,1062 gram x 4 Kkal =

0,425 Kkal Kandungan kalori total = 8,64 Kkal + 1,0098 Kkal + 0,425 Kkal = 10,07 Kkal

Perlakuan 1. Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan : kasein (5%:15%):

• Kandungan kalori kasein = KkalKkal 66,24

64,10=

• Substitusi = gramgramx 792,0307,1066,2

=

Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan : kasein (5%:15%) : 0,792 gram x 3 ulangan x 90 hari = 213,84 gram

Perlakuan 2. Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan : kasein (10%:10%):

• Kandungan kalori kasein = KkalxKkal 32,52

64,10


=

Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan: kasein (10%:10%) : 1,585 gram x 3 ulangan x 90 hari = 427,95 gram Perlakuan 3. Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan : kasein (15%:5%) :

• Kandungan kalori kasein = gramKkalx 98,7464,103

=


=

Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan: kasein (15%:5%) : 2,377 gram x 3 ulangan x 90 hari = 641,79 gram Perlakuan 4. Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan : kasein (20%:0%):

• Kandungan kalori kasein = 8,325 Kkal.


=

Jumlah tepung ikan yang dibutuhkan pada proporsi tepung ikan : kasein (0%:20%): 3,14 gram x 3 ulangan x 90 hari = 847,8 gram

Sehingga jumlah total tepung ikan yang dibutuhkan (gram)

= 213,84 g + 427,95 g + 641,79 g + 847,8 g = 2131,38 gram

Lampiran 4. Perhitungan kasar jumlah residu formalin yang berada pada ransum

Perendaman ikan dilakukan menggunakan formalin 7,5% selama 12 jam dan

didapatkan residu 3,35%.

Residu formalin yang ada di pasaran sebesar 0,2% (berdasarkan residu formalin

pada ikan hasil survei yang dilakukan pada penelitian sebelumnya)

Jumlah residu formalin setelah ditambahkan pada per 100 gram :

Perlakuan 1. Proporsi kasein : tepung ikan = 15:5

M1 x n1 = M2 x n2

100 x n1 = 5 x 3,35% n1 = 0,1675%

Perlakuan 2. Proporsi kasein : tepung ikan = 10:10

M1 x n1 = M2 x n2

100 x n1 = 10 x 3,35% n1 = 0,335%

Perlakuan 3. Proporsi kasein : tepung ikan = 5:15 M1 x n1 = M2 x n2

100 x n1 = 15 x 3,35% n1 = 0,5025%

Perlakuan 4. Proporsi kasein : tepung ikan = 0:20 M1 x n1 = M2 x n2

100 x n1 = 20 x 3,35% n1 = 0,67%

Lampiran 5. Perhitungan pembuatan larutan formalin 7,5%

N1 x V1 = N2 x V2

37% x V1= 7,5% x (500 ml - V1)

V1 = 84,27 ml

Larutan formalin 37% yang dibutuhkan untuk membuat larutan formalin 7,5% sebanyak

500 ml adalah 84,27 ml.

Lampiran 6. Kurva Standar Formaldehid

Lampiran 7. Data jumlah ransum pakan yang dikonsumsi tikus per 3 hari selama 1 bulan perlakuan (g)

Perlakuan (kasein : tepung ikan berformalin) Hari ke- 20% : 0% 15 % : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0 2.8 2.4 2.5 3.60 1.70 3.40 2.00 2.60 3.10 1.80 4.40 2.90 3.10 2.90 1.803 4.03 4.73 4.07 4.40 2.90 5.30 3.67 3.87 4.10 2.47 6.20 2.97 2.87 2.63 3.306 4.1 5.23 4.13 5.50 4.60 6.53 5.70 5.23 7.17 5.20 7.57 6.23 3.00 2.93 3.209 4.77 6.3 4.7 6.10 4.97 7.97 2.97 6.20 6.80 6.97 5.27 5.07 2.97 3.23 3.0712 6.63 5.97 6.63 7.33 7.23 8.27 6.60 6.83 7.07 6.93 6.90 7.10 3.00 3.07 3.2515 7.57 7.1 7.53 7.80 7.30 8.30 5.20 6.90 7.67 6.17 4.83 6.47 3.13 2.94 2.5318 5.6 7.83 5.53 8.27 8.00 8.27 5.97 7.30 8.33 6.60 6.67 6.77 3.04 2.75 2.9321 5.47 8.93 5.6 8.00 8.10 7.63 7.13 8.00 8.80 6.97 5.10 6.97 2.95 3.03 3.5024 6.1 9.23 6.13 8.33 8.07 8.20 9.50 8.87 8.83 7.37 6.63 7.53 3.10 3.05 3.1027 4.67 7.93 4.57 8.20 7.80 8.10 10.03 9.40 9.23 7.30 6.60 7.27 3.08 2.98 2.8230 6.55 10.55 6.55 8.20 8.05 8.30 8.70 9.85 9.50 7.25 7.75 7.50 2.86 2.95 3.18

Lampiran 8. Data jumlah ransum pakan yang dikonsumsi tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g)


1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0 2.50 2.40 2.20 3.80 1.00 2.40 3.50 2.00 2.20 1.10 2.30 1.90 2.20 1.20 1.803 4.63 5.07 5.20 5.43 3.27 4.13 3.03 6.70 6.20 3.43 5.07 5.13 1.83 4.83 1.706 5.03 6.17 6.17 4.20 6.40 5.47 5.70 7.70 7.77 7.40 6.07 6.77 3.23 4.50 3.909 6.33 7.63 7.63 7.03 7.07 6.77 4.97 7.83 8.80 7.97 6.53 5.83 4.30 4.70 3.6312 5.87 7.07 7.23 7.90 7.57 7.60 6.17 8.57 8.73 8.23 7.93 6.50 2.50 2.70 3.7715 7.03 8.03 8.93 7.53 8.37 7.13 5.87 8.90 8.83 6.33 6.97 6.27 2.90 3.07 2.4718 7.90 8.77 9.43 8.13 8.23 8.37 6.43 8.70 8.83 8.00 6.37 7.70 3.23 3.13 3.8021 8.90 8.90 8.80 8.50 8.03 8.07 7.90 10.33 10.33 7.80 7.53 7.60 4.63 4.77 3.6324 8.20 7.80 7.83 8.43 8.37 7.67 10.20 11.30 11.53 7.60 7.83 8.13 3.60 5.00 4.6327 7.97 10.00 9.97 8.37 8.20 10.23 9.67 11.13 11.33 8.87 7.50 8.27 3.27 3.63 5.3730 10.27 10.53 10.60 7.97 8.87 8.33 10.23 11.63 11.67 9.23 7.93 9.13 2.90 3.80 3.8333 9.20 11.13 11.30 8.53 8.33 8.80 10.60 11.20 11.30 9.67 7.30 9.50 4.83 2.60 3.5736 9.77 11.03 11.37 8.40 8.97 10.03 10.87 11.53 11.47 8.27 9.67 10.03 2.53 2.00 4.1039 9.47 11.60 11.33 8.77 8.83 9.50 10.67 11.33 11.43 8.03 9.40 9.93 4.10 4.33 4.3742 9.50 11.20 11.23 6.47 9.10 8.77 11.43 11.47 11.23 4.60 9.10 10.47 3.87 4.47 3.1345 10.10 11.40 11.27 5.83 11.37 9.20 11.30 11.57 11.30 5.87 8.47 9.60 3.00 2.40 3.6348 11.20 12.40 12.43 7.60 12.40 10.80 11.40 12.97 11.60 8.13 10.17 12.43 3.50 4.90 3.6051 11.97 11.83 11.77 7.47 12.60 11.17 11.57 13.27 13.43 9.77 11.07 12.33 2.43 2.07 2.7354 13.47 13.80 13.63 8.43 12.93 11.57 11.83 12.73 12.53 11.00 10.57 11.47 3.00 3.83 3.7057 12.83 11.97 12.03 9.33 13.63 10.70 12.00 13.20 12.80 9.63 9.70 7.23 2.40 2.97 2.5360 11.00 10.70 10.30 9.60 12.80 11.40 11.90 12.00 8.50 7.10 9.60 9.60 3.60 2.60 2.85

Lampiran 9. Data berat badan tikus per 3 hari selama 1 bulan perlakuan (g)


1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0 48.20 59.50 61.20 57.10 59.10 58.20 51.80 58.70 56.40 57.80 58.10 58.20 59.40 58.30 54.303 48.60 56.60 58.30 55.90 67.50 55.70 53.70 62.00 59.90 56.50 57.60 56.30 57.30 54.50 52.906 58.30 65.60 67.30 59.70 76.80 55.40 61.40 65.70 65.10 60.20 58.30 61.20 55.40 51.60 48.609 65.00 66.50 68.20 66.20 75.60 62.80 62.70 72.90 71.10 64.00 62.10 67.10 52.20 52.10 44.70

12 76.50 80.90 82.60 69.90 90.10 68.60 72.40 78.60 78.60 68.10 68.70 74.80 50.40 50.70 42.3015 83.00 90.20 91.90 79.50 92.30 74.80 78.80 87.90 85.90 74.30 74.80 79.00 52.80 48.40 39.8018 94.10 95.70 97.40 87.60 100.90 84.20 84.90 95.30 95.80 80.60 81.10 85.90 51.10 46.90 41.8021 107.20 101.80 103.50 96.40 102.20 94.50 92.70 102.20 106.50 86.80 88.80 90.20 48.50 48.60 44.6024 118.00 105.30 107.00 103.80 106.40 101.30 104.00 109.40 117.30 95.40 96.30 95.40 49.00 48.40 42.0027 124.80 109.60 111.30 110.00 114.60 111.20 118.80 119.70 122.00 100.00 101.50 101.90 48.80 45.80 42.2030 134.00 116.80 118.50 119.50 120.30 119.70 120.60 131.20 129.10 105.40 106.30 105.80 48.10 44.70 40.30

Lampiran 10. Data berat badan tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g)

Perlakuan (kasein : tepung ikan berformalin) Hari ke- 20% : 0% 15 % : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20% 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0 49.70 54.60 52.30 54.10 57.10 58.20 53.10 54.50 56.40 57.40 58.30 56.50 57.50 58.10 57.803 50.10 53.60 51.30 51.80 59.20 55.80 57.00 57.80 60.40 56.40 56.40 57.10 52.00 59.40 56.206 59.80 65.30 63.00 58.60 68.60 62.10 63.10 62.50 66.20 60.40 58.90 60.80 47.60 55.80 52.809 66.50 74.70 72.40 68.80 76.70 61.50 66.80 70.30 74.20 63.80 63.80 65.60 47.60 51.30 50.70

12 78.00 85.60 83.30 80.40 86.70 70.00 74.10 78.50 82.80 71.00 68.20 68.90 47.70 49.20 48.8015 84.50 98.60 96.30 86.60 91.50 76.30 80.50 87.20 91.90 76.70 73.70 73.80 48.40 51.00 46.8018 95.60 111.40 109.10 98.30 100.80 85.20 86.30 95.20 101.80 81.60 78.30 77.30 46.80 50.00 49.5021 108.70 118.20 115.90 107.00 109.20 94.60 93.30 104.40 111.40 89.00 82.90 82.00 47.90 57.00 53.1024 119.50 127.00 124.70 115.40 114.60 101.70 102.70 111.10 120.20 96.90 90.80 88.50 47.50 54.80 50.9027 126.30 140.40 138.10 125.40 122.90 114.60 113.50 118.10 125.50 100.10 94.90 93.90 44.10 54.90 51.5030 135.50 151.50 149.20 132.00 129.40 122.40 118.70 127.60 136.00 104.90 100.50 98.00 41.20 55.20 50.8033 147.60 159.80 157.50 135.60 134.50 129.60 125.00 136.80 142.90 108.60 107.70 102.60 43.40 53.10 49.0036 158.20 172.10 169.80 146.30 141.10 140.00 136.50 146.80 152.90 112.20 112.40 106.00 44.90 54.80 51.3039 160.00 177.30 175.00 146.60 150.30 146.00 143.60 154.20 158.40 116.50 115.00 109.10 46.80 57.10 54.2042 163.00 184.00 181.70 144.30 155.90 157.80 154.80 159.10 167.50 117.70 120.40 115.60 47.90 59.70 52.7045 176.80 190.70 188.40 148.80 162.70 165.00 163.20 169.40 173.00 118.60 123.80 117.70 47.70 59.80 53.1048 195.10 194.80 192.50 151.90 167.80 169.90 170.90 180.20 182.70 123.70 130.10 126.00 48.60 60.90 54.8051 192.00 208.90 206.60 161.30 167.80 180.60 180.80 190.60 192.60 130.10 138.50 134.90 49.60 60.90 54.4054 204.60 198.90 196.60 171.60 178.20 189.90 187.70 198.20 198.30 137.30 146.70 144.70 50.40 61.20 55.3057 200.80 210.20 207.90 176.20 188.70 195.20 193.80 205.90 203.00 142.60 152.00 149.40 47.00 59.40 52.7060 207.60 209.80 207.50 182.90 187.40 193.60 200.00 212.80 207.70 147.80 157.80 154.80 44.40 57.50 51.40

Lampiran 11. Data laju pertumbuhan berat badan tikus per 3 hari selama 1 bulan perlakuan (g/hari)

perlakuan (kasein : tepung ikan berformalin) Hari ke- 20% : 0% 15 % : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.003 0.13 -0.97 -0.97 -0.40 2.80 -0.83 0.63 1.10 1.17 -0.43 -0.17 -0.63 -0.70 -1.27 -0.476 3.23 3.00 3.00 1.27 3.10 -0.10 2.57 1.23 1.73 1.23 0.23 1.63 -0.63 -0.97 -1.439 2.23 0.30 0.30 2.17 -0.40 2.47 0.43 2.40 2.00 1.27 1.27 1.97 -1.07 0.17 -1.30

12 3.83 4.80 4.80 1.23 4.83 1.93 3.23 1.90 2.50 1.37 2.20 2.57 -0.60 -0.47 -0.8015 2.17 3.10 3.10 3.20 0.73 2.07 2.13 3.10 2.43 2.07 2.03 1.40 0.80 -0.77 -0.8318 3.70 1.83 1.83 2.70 2.87 3.13 2.03 2.47 3.30 2.10 2.10 2.30 -0.57 -0.50 0.6721 4.37 2.03 2.03 2.93 0.43 3.43 2.60 2.30 3.57 2.07 2.57 1.43 -0.87 0.57 0.9324 3.60 1.17 1.17 2.47 1.40 2.27 3.77 2.40 3.60 2.87 2.50 1.73 0.17 -0.07 -0.8727 2.27 1.43 1.43 2.07 2.73 3.30 4.93 3.43 1.57 1.53 1.73 2.17 -0.07 -0.87 0.0730 3.07 2.40 2.40 3.17 1.90 2.83 0.60 3.83 2.37 1.80 1.60 1.30 -0.23 -0.37 -0.63

Lampiran 12. Data laju pertumbuhan berat badan tikus per 3 hari selama 2 bulan perlakuan (g/hari)

perlakuan (kasein : tepung ikan berformalin) 20% : 0% 15 % : 5% 10% : 10% 5% : 15% 0% : 20%

Hari ke-

1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 3 0.13 -0.33 -0.33 -0.77 0.70 -0.80 1.30 1.10 1.33 -0.33 -0.63 0.20 -1.83 0.43 -0.536 3.23 3.90 3.90 2.27 1.60 2.10 2.03 1.57 1.93 1.33 0.83 1.23 -1.47 -1.20 -1.139 2.23 3.13 3.13 3.40 2.70 -0.20 1.23 2.60 2.67 1.13 1.63 1.60 0.00 -1.50 -0.7012 3.83 3.63 3.63 3.87 3.33 2.83 2.43 2.73 2.87 2.40 1.47 1.10 0.03 -0.70 -0.6315 2.17 4.33 4.33 2.07 1.60 2.10 2.13 2.90 3.03 1.90 1.83 1.63 0.23 0.60 -0.6718 3.70 4.27 4.27 3.90 3.10 2.97 1.93 2.67 3.30 1.63 1.53 1.17 -0.53 -0.33 0.90 21 4.37 2.27 2.27 2.90 2.80 3.13 2.33 3.07 3.20 2.47 1.53 1.57 0.37 2.33 1.20 24 3.60 2.93 2.93 2.80 1.80 2.37 3.13 2.23 2.93 2.63 2.63 2.17 -0.13 -0.73 -0.7327 2.27 4.47 4.47 3.33 2.77 4.30 3.60 2.33 1.77 1.07 1.37 1.80 -1.13 0.03 0.20 30 3.07 3.70 3.70 2.20 2.17 2.60 1.73 3.17 3.50 1.60 1.87 1.37 -0.97 0.10 -0.2333 4.03 2.77 2.77 1.20 1.70 2.40 2.10 3.07 2.30 1.23 2.40 1.53 0.73 -0.70 -0.6036 3.53 4.10 4.10 3.57 2.20 3.47 3.83 3.33 3.33 1.20 1.57 1.13 0.50 0.57 0.77 39 0.60 1.73 1.73 0.10 3.07 2.00 2.37 2.47 1.83 1.43 0.87 1.03 0.63 0.77 0.97 42 1.00 2.23 2.23 -0.77 1.87 3.93 3.73 1.63 3.03 0.40 1.80 2.17 0.37 0.87 -0.5045 4.60 2.23 2.23 1.50 2.27 2.40 2.80 3.43 1.83 0.30 1.13 0.70 -0.07 0.03 0.13 48 6.10 1.37 1.37 1.03 1.70 1.63 2.57 3.60 3.23 1.70 2.10 2.77 0.30 0.37 0.57 51 -1.03 4.70 4.70 3.13 0.00 3.57 3.30 3.47 3.30 2.13 2.80 2.97 0.33 0.00 -0.1354 4.20 -3.33 -3.33 3.43 3.47 3.10 2.30 2.53 1.90 2.40 2.73 3.27 0.27 0.10 0.30 57 -1.27 3.77 3.77 1.53 3.50 1.77 2.03 2.57 1.57 1.77 1.77 1.57 -1.13 -0.60 -0.8760 2.27 -0.13 -0.13 2.23 -0.43 -0.53 2.07 2.30 1.57 1.73 1.93 1.80 -0.87 -0.63 -0.43

Lampiran 13. Data berat organ dalam (hati, ginjal, limpa) tikus (g)

Hati

Faktor perlakuan Ulangan Lama konsumsi Konsentrasi 1 2 3

20% : 0% 4.60 4.50 4.3015% : 5% 4.30 4.30 4.3010% : 10% 4.40 4.60 4.405% : 15% 3.70 3.90 3.70

1 bulan 0% : 20% 1.80 1.60 1.50

20% : 0% 6.50 7.50 6.6015% : 5% 6.10 5.60 6.0010% : 10% 6.10 6.40 6.605% : 15% 4.60 5.10 5.00

2 bulan

0% : 20% 1.50 2.00 1.80 Ginjal


20% : 0% 1.10 0.90 1.3015% : 5% 1.06 1.00 1.2010% : 10% 1.10 1.20 1.105% : 15% 0.90 1.00 1.00

1 bulan 0% : 20% 0.60 0.50 0.40

20% : 0% 2.10 2.30 2.1015% : 5% 2.00 1.90 2.0010% : 10% 2.10 2.20 2.105% : 15% 1.50 1.70 1.70

2 bulan 0% : 20% 0.60 0.70 0.70

Limpa


20% : 0% 0.40 0.40 0.3015% : 5% 0.40 0.30 0.4010% : 10% 0.30 0.40 0.405% : 15% 0.30 0.30 0.40

1 bulan 0% : 20% 0.20 0.10 0.20

20% : 0% 0.90 0.70 0.8015% : 5% 0.70 0.80 0.7010% : 10% 0.80 0.80 0.905% : 15% 0.60 0.60 0.60

2 bulan 0% : 20% 0.20 0.20 0.20

Lampiran 14. Hasil analisis statistik jumlah ransum pakan yang dikonsumsi tikus

Between-Subjects Factors

0% 65% 610% 615% 620% 61 bulan 152 bulan 15

01234

konsentrasiformalin

12

lama konsumsi

Value Label N

Descriptive Statistics

Dependent Variable: jumlah konsumsi

6.8167 .97521 37.0533 .15948 36.9350 .63827 67.8800 1.23305 36.9200 .17436 37.4000 .94700 67.4733 .18771 37.8700 .52374 37.6717 .41354 67.7533 .45960 37.9133 .25146 37.8333 .34273 65.5167 .06429 35.8033 .13204 35.6600 .18243 67.0880 1.09308 157.1120 .83369 157.1000 .95524 30

lama konsumsi1 bulan2 bulanTotal1 bulan2 bulanTotal1 bulan2 bulanTotal1 bulan2 bulanTotal1 bulan2 bulanTotal1 bulan2 bulanTotal

konsentrasi formalin0%

5%

10%

15%

20%

Total

Mean Std. Deviation N

Tests of Between-Subjects Effects


20.197a 9 2.244 7.163 .000 .7631512.300 1 1512.300 4827.260 .000 .996

18.332 4 4.583 14.629 .000 .7454.320E-03 1 4.320E-03 .014 .908 .001

1.860 4 .465 1.484 .244 .2296.266 20 .313

1538.762 3026.462 29

SourceCorrected ModelInterceptKONSENTBULANKONSENT * BULANErrorTotalCorrected Total

Type III Sumof Squares df Mean Square F Sig.

Partial EtaSquared

R Squared = .763 (Adjusted R Squared = .657)a.

1. konsentrasi formalin

Univariate Tests


18.332 4 4.583 14.629 .000 .7456.266 20 .313

ContrastError

Sum ofSquares df Mean Square F Sig.

Partial EtaSquared

The F tests the effect of konsentrasi formalin. This test is based on the linearly independentpairwise comparisons among the estimated marginal means.

2. lama konsumsi

Univariate Tests


4.320E-03 1 4.320E-03 .014 .908 .0016.266 20 .313

ContrastError


Partial EtaSquared

The F tests the effect of lama konsumsi. This test is based on the linearly independentpairwise comparisons among the estimated marginal means.

3. lama konsumsi * konsentrasi formalin


6.817 .323 6.143 7.4917.880 .323 7.206 8.5547.473 .323 6.799 8.1477.753 .323 7.079 8.4275.517 .323 4.843 6.1917.053 .323 6.379 7.7276.920 .323 6.246 7.5947.870 .323 7.196 8.5447.913 .323 7.239 8.5875.803 .323 5.129 6.477

konsentrasi formalin0%5%10%15%20%0%5%10%15%20%

lama konsumsi1 bulan

2 bulan

Mean Std. Error Lower Bound Upper Bound95% Confidence Interval

Post Hoc Tests konsentrasi formalin

Multiple Comparisons

Dependent Variable: jumlah konsumsiTukey HSD

-.4650 .32315 .611 -1.4320 .5020-.7367 .32315 .193 -1.7037 .2303-.8983 .32315 .077 -1.8653 .06871.2750* .32315 .006 .3080 2.2420

.4650 .32315 .611 -.5020 1.4320-.2717 .32315 .915 -1.2387 .6953-.4333 .32315 .670 -1.4003 .53371.7400* .32315 .000 .7730 2.7070

.7367 .32315 .193 -.2303 1.7037

.2717 .32315 .915 -.6953 1.2387-.1617 .32315 .986 -1.1287 .80532.0117* .32315 .000 1.0447 2.9787

.8983 .32315 .077 -.0687 1.8653

.4333 .32315 .670 -.5337 1.4003

.1617 .32315 .986 -.8053 1.12872.1733* .32315 .000 1.2063 3.1403

-1.2750* .32315 .006 -2.2420 -.3080-1.7400* .32315 .000 -2.7070 -.7730-2.0117* .32315 .000 -2.9787 -1.0447-2.1733* .32315 .000 -3.1403 -1.2063

(J) konsentrasi formal5%10%15%20%0%10%15%20%0%5%15%20%0%5%10%20%0%5%10%15%

(I) konsentrasi formal0%

5%

10%

15%

20%

MeanDifference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound95% Confidence Interval

Based on observed means.The mean difference is significant at the .05 level.*.

Homogeneous Subsets jumlah konsumsi

Tukey HSDa,b

6 5.66006 6.93506 7.40006 7.67176 7.8333

1.000 .077

konsentrasi formalin20%0%5%10%15%Sig.

N 1 2Subset

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Based on Type III Sum of SquaresThe error term is Mean Square(Error) = .313.

Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.a.

Alpha = .05.b.

jumlah konsumsi * konsentrasi formalin

ANOVA Table

18.332 4 4.583 14.094 .0008.130 25 .325

26.462 29

(Combined)Between GrouWithin GroupsTotal

jumlah konsumsi konsentrasi forma


jumlah konsumsi * lama konsumsi

ANOVA Table

.004 1 .004 .005 .94726.458 28 .94526.462 29

(Combined)Between GroupWithin GroupsTotal

jumlah konsum* lama konsums


Lampiran 15. Hasil analisis statistik berat badan tikus


0% 66666

1 bulan 152 bulan 15

05101520

konsentrasiformalin

12

lama konsumsi

Value Label N


Dependent Variable: berat badan

24734.602a 9 2748.289 174.635 .000 .987258583.538 1 258583.538 16431.238 .000 .999

15264.644 4 3816.161 242.491 .000 .9807331.721 1 7331.721 465.881 .000 .9592138.237 4 534.559 33.968 .000 .872

314.746 20 15.737283632.887 30

25049.348 29

SourceCorrected ModelInterceptKONSENTLAMAKONSENT * LAMAErrorTotalCorrected Total


Partial EtaSquared


1. konsentrasi formalin Univariate Tests


15264.644 4 3816.161 242.491 .000 .980314.746 20 15.737

ContrastError


Partial EtaSquared


2. lama konsumsi Univariate Tests


7331.721 1 7331.721 465.881 .000 .959314.746 20 15.737

ContrastError


Partial EtaSquared


3. konsentrasi formalin * lama konsumsi


87.073 2.290 82.296 91.851138.200 2.290 133.422 142.978

84.783 2.290 80.006 89.561123.253 2.290 118.476 128.031

87.063 2.290 82.286 91.841128.450 2.290 123.672 133.228

78.137 2.290 73.359 82.914100.437 2.290 95.659 105.214

48.983 2.290 44.206 53.76152.030 2.290 47.252 56.808

lama konsumsi1 bulan2 bulan1 bulan2 bulan1 bulan2 bulan1 bulan2 bulan1 bulan2 bulan


5

10

15

20




Dependent Variable: berat badanTukey HSD

8.6183* 2.29036 .010 1.7647 15.47204.8800 2.29036 .246 -1.9736 11.7336

23.3500* 2.29036 .000 16.4964 30.203662.1300* 2.29036 .000 55.2764 68.9836-8.6183* 2.29036 .010 -15.4720 -1.7647-3.7383 2.29036 .495 -10.5920 3.115314.7317* 2.29036 .000 7.8780 21.585353.5117* 2.29036 .000 46.6580 60.3653-4.8800 2.29036 .246 -11.7336 1.97363.7383 2.29036 .495 -3.1153 10.5920

18.4700* 2.29036 .000 11.6164 25.323657.2500* 2.29036 .000 50.3964 64.1036

-23.3500* 2.29036 .000 -30.2036 -16.4964-14.7317* 2.29036 .000 -21.5853 -7.8780-18.4700* 2.29036 .000 -25.3236 -11.616438.7800* 2.29036 .000 31.9264 45.6336

-62.1300* 2.29036 .000 -68.9836 -55.2764-53.5117* 2.29036 .000 -60.3653 -46.6580-57.2500* 2.29036 .000 -64.1036 -50.3964-38.7800* 2.29036 .000 -45.6336 -31.9264

(J) konsentrasi forma51015200%1015200%515200%510200%51015

(I) konsentrasi forma0%

5

10

15

20

MeanDifference

(I-J) Std. Error Sig. Lower BoundUpper Bound95% Confidence Interval


Homogeneous Subsets berat badan

Tukey HSDa,b

6 50.50676 89.28676 104.01836 107.7567 107.75676 112.6367

1.000 1.000 .495 .246

konsentrasi formalin20155100%Sig.

N 1 2 3 4Subset

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Based on Type III Sum of SquaresThe error term is Mean Square(Error) = 15.737.


Alpha = .05.b.

Means berat badan * konsentrasi formalin

ANOVA Table

5264.644 4 3816.161 9.750 .0009784.704 25 391.3885049.348 29


berat badan *konsentrasi forma


berat badan * lama konsumsi

ANOVA Table

7331.721 1 7331.721 11.587 .0027717.628 28 632.7725049.348 29


berat badan *lama konsums


Univariate Tests


7524.951 1 7524.951 409.507 .000 .953367.512 20 18.376

ContrastError


Partial EtaSquared


Lampiran 16. Hasil analisis statistik laju pertumbuhan berat badan tikus


0% 65% 610% 615% 620% 61 bulan 152 bulan 15

01234

konsentrasiformalin

12

lama konsumsi

Value Label N


Dependent Variable: laju pertumbuhan

2.0267 .49652 32.4767 .02887 32.2517 .39962 61.8667 .02082 32.0633 .07767 31.9650 .11912 62.1600 .06928 32.4133 .09074 32.2867 .15642 61.4467 .01155 31.5233 .08145 31.4850 .06686 6-.3900 .04359 3-.1367 .06351 3-.2633 .14706 61.4220 .98863 151.6680 .99936 151.5450 .98470 30



5%

10%

15%

20%

Total




27.560a 9 3.062 109.535 .000 .98071.611 1 71.611 2561.491 .000 .99226.997 4 6.749 241.419 .000 .980

.454 1 .454 16.235 .001 .448

.109 4 2.731E-02 .977 .442 .163

.559 20 2.796E-0299.730 3028.119 29



Partial EtaSquared




26.997 4 6.749 241.419 .000 .980.559 20 2.796E-02

ContrastError


Partial EtaSquared




.454 1 .454 16.235 .001 .448

.559 20 2.796E-02ContrastError


Partial EtaSquared




2.027 .097 1.825 2.2282.477 .097 2.275 2.6781.867 .097 1.665 2.0682.063 .097 1.862 2.2652.160 .097 1.959 2.3612.413 .097 2.212 2.6151.447 .097 1.245 1.6481.523 .097 1.322 1.725-.390 .097 -.591 -.189-.137 .097 -.338 6.470E-02



5%

10%

15%

20%




Dependent Variable: laju pertumbuhanTukey HSD

.2867 .09653 .052 -.0022 .5755-.0350 .09653 .996 -.3239 .2539.7667* .09653 .000 .4778 1.0555

2.5150* .09653 .000 2.2261 2.8039-.2867 .09653 .052 -.5755 .0022-.3217* .09653 .025 -.6105 -.0328.4800* .09653 .001 .1911 .7689

2.2283* .09653 .000 1.9395 2.5172.0350 .09653 .996 -.2539 .3239.3217* .09653 .025 .0328 .6105.8017* .09653 .000 .5128 1.0905

2.5500* .09653 .000 2.2611 2.8389-.7667* .09653 .000 -1.0555 -.4778-.4800* .09653 .001 -.7689 -.1911-.8017* .09653 .000 -1.0905 -.51281.7483* .09653 .000 1.4595 2.0372

-2.5150* .09653 .000 -2.8039 -2.2261-2.2283* .09653 .000 -2.5172 -1.9395-2.5500* .09653 .000 -2.8389 -2.2611-1.7483* .09653 .000 -2.0372 -1.4595

(J) konsentrasi forma5%10%15%20%0%10%15%20%0%5%15%20%0%5%10%20%0%5%10%15%


5%

10%

15%

20%

MeanDifference



Homogeneous Subsets laju pertumbuhan

Tukey HSDa,b

6 -.26336 1.48506 1.96506 2.2517 2.25176 2.2867

1.000 1.000 .052 .996


N 1 2 3 4Subset

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Based on Type III Sum of SquaresThe error term is Mean Square(Error) = 2.796E-02.


Alpha = .05.b.

laju pertumbuhan * konsentrasi formalin ANOVA Table

26.997 4 6.749 150.351 .0001.122 25 .045

28.119 29


laju pertumbuhan konsentrasi forma


laju pertumbuhan * lama konsumsi

ANOVA Table

.454 1 .454 .459 .50327.665 28 .98828.119 29


laju pertumbuha* lama konsums


Lampiran 17. Hasil analisis statistik berat hati tikus Between-Subjects Factors

0% 65% 610% 615% 620% 61 bulan 152 bulan 15

01234

konsentrasiformalin

12

lama konsumsi

Value Label N


Dependent Variable: berat hati

3.63833 .210155 33.29533 .243537 33.46683 .276921 63.59933 .026026 33.29933 .295121 33.44933 .249218 63.51800 .124435 33.08500 .099242 33.30150 .257643 63.56800 .087790 33.34033 .203525 33.45417 .187620 63.75500 .051643 33.50967 .049166 33.63233 .141740 63.61573 .130224 153.30593 .219604 153.46083 .237255 30



5%

10%

15%

20%

Total




1.091a 9 .121 4.476 .003359.321 1 359.321 13269.067 .000

.330 4 8.252E-02 3.047 .041

.720 1 .720 26.582 .0004.092E-02 4 1.023E-02 .378 .822

.542 20 2.708E-02360.953 30

1.632 29





Dependent Variable: berat ginjal

9.268E-02 4 2.317E-02 3.098 .039.150 20 7.480E-03

ContrastError


The F tests the effect of konsentrasi formalin. This test is based on the linearlyindependent pairwise comparisons among the estimated marginal means.



.128 1 .128 17.137 .001



The F tests the effect of lama konsumsi. This test is based on the linearlyindependent pairwise comparisons among the estimated marginal means.



3.638 .095 3.440 3.8373.295 .095 3.097 3.4943.599 .095 3.401 3.7983.299 .095 3.101 3.4983.518 .095 3.320 3.7163.085 .095 2.887 3.2833.568 .095 3.370 3.7663.340 .095 3.142 3.5393.755 .095 3.557 3.9533.510 .095 3.311 3.708



5%

10%

15%

20%




Dependent Variable: berat hatiTukey HSD

.01750 .095008 1.000 -.26680 .30180

.16533 .095008 .433 -.11897 .44963

.01267 .095008 1.000 -.27163 .29697-.16550 .095008 .433 -.44980 .11880-.01750 .095008 1.000 -.30180 .26680.14783 .095008 .540 -.13647 .43213

-.00483 .095008 1.000 -.28913 .27947-.18300 .095008 .336 -.46730 .10130-.16533 .095008 .433 -.44963 .11897-.14783 .095008 .540 -.43213 .13647-.15267 .095008 .510 -.43697 .13163-.33083* .095008 .018 -.61513 -.04653-.01267 .095008 1.000 -.29697 .27163.00483 .095008 1.000 -.27947 .28913.15267 .095008 .510 -.13163 .43697

-.17817 .095008 .362 -.46247 .10613.16550 .095008 .433 -.11880 .44980.18300 .095008 .336 -.10130 .46730.33083* .095008 .018 .04653 .61513.17817 .095008 .362 -.10613 .46247



5%

10%

15%

20%

MeanDifference



Homogeneous Subsets

berat hati

Tukey HSDa,b

6 3.301506 3.44933 3.449336 3.45417 3.454176 3.46683 3.466836 3.63233

.433 .336


N 1 2Subset



Alpha = .05.b.

berat hati * konsentrasi formalin

ANOVA Table

.330 4 .083 1.584 .2091.302 25 .0521.632 29


berat hati *konsentrasi forma


berat hati * lama konsumsi

ANOVA Table

.720 1 .720 22.086 .000

.913 28 .0331.632 29


berat hati *lama konsums


Lampiran 18. Hasil analisis statistik berat ginjal tikus


0% 65% 610% 615% 620% 61 bulan 152 bulan 15

01234

konsentrasiformalin

12

lama konsumsi

Value Label N



.89633 .175571 31.04000 .048497 3

.96817 .139510 6

.89933 .075884 31.05567 .039678 3

.97750 .101317 6

.90467 .015373 31.03933 .009238 3

.97200 .074627 6

.90767 .046929 31.04767 .029143 3

.97767 .084265 61.07300 .109503 31.15200 .137568 31.11250 .119326 6

.93620 .110983 151.06693 .073308 151.00157 .113845 30



5%

10%

15%

20%

Total




.226a 9 2.514E-02 3.361 .01130.094 1 30.094 4023.308 .000

9.268E-02 4 2.317E-02 3.098 .039.128 1 .128 17.137 .001

5.400E-03 4 1.350E-03 .180 .946.150 20 7.480E-03

30.470 30.376 29






9.268E-02 4 2.317E-02 3.098 .039.150 20 7.480E-03

ContrastError





.128 1 .128 17.137 .001






.896 .050 .792 1.0001.040 .050 .936 1.144

.899 .050 .795 1.0031.056 .050 .952 1.160

.905 .050 .801 1.0091.039 .050 .935 1.143

.908 .050 .804 1.0121.048 .050 .944 1.1521.073 .050 .969 1.1771.152 .050 1.048 1.256



5%

10%

15%

20%




Dependent Variable: berat ginjalTukey HSD

-.00933 .049933 1.000 -.15875 .14009-.00383 .049933 1.000 -.15325 .14559-.00950 .049933 1.000 -.15892 .13992-.14433 .049933 .061 -.29375 .00509.00933 .049933 1.000 -.14009 .15875.00550 .049933 1.000 -.14392 .15492

-.00017 .049933 1.000 -.14959 .14925-.13500 .049933 .089 -.28442 .01442.00383 .049933 1.000 -.14559 .15325

-.00550 .049933 1.000 -.15492 .14392-.00567 .049933 1.000 -.15509 .14375-.14050 .049933 .072 -.28992 .00892.00950 .049933 1.000 -.13992 .15892.00017 .049933 1.000 -.14925 .14959.00567 .049933 1.000 -.14375 .15509

-.13483 .049933 .089 -.28425 .01459.14433 .049933 .061 -.00509 .29375.13500 .049933 .089 -.01442 .28442.14050 .049933 .072 -.00892 .28992.13483 .049933 .089 -.01459 .28425



5%

10%

15%

20%

MeanDifference


Based on observed means.

Homogeneous Subsets berat ginjal

Tukey HSDa,b

6 .968176 .972006 .977506 .977676 1.11250

.061


N 1Subset



Alpha = .05.b.

berat ginjal * konsentrasi formalin

ANOVA Table

.093 4 .023 2.045 .119

.283 25 .011

.376 29


berat ginjal *konsentrasi forma


berat ginjal * lama konsumsi

ANOVA Table

.128 1 .128 14.491 .001

.248 28 .009

.376 29


berat ginjal *lama konsums


Lampiran 19. Hasil analisis statistik berat limpa tikus


0% 65% 610% 615% 620% 61 bulan 152 bulan 15

.0001.0002.0003.0004.000

konsentrasiformalin

1.0002.000

lama konsumsi

Value Label N


Dependent Variable: berat limpa

.29800 .044508 3

.38467 .050013 3

.34133 .063610 6

.29933 .043662 3

.38767 .037220 3

.34350 .060477 6

.28333 .030072 3

.39967 .023502 3

.34150 .068137 6

.31267 .050540 3

.38567 .017786 3

.34917 .052412 6

.33400 .111718 3

.34633 .019296 3

.34017 .072021 6

.30547 .056062 15

.38080 .032890 15

.34313 .059222 30



5%

10%

15%

20%

Total




5.180E-02a 9 5.756E-03 2.306 .0573.532 1 3.532 1415.453 .000

3.075E-04 4 7.687E-05 .031 .9984.256E-02 1 4.256E-02 17.056 .0018.929E-03 4 2.232E-03 .895 .4854.991E-02 20 2.495E-03

3.634 30.102 29






3.075E-04 4 7.687E-05 .031 .9984.991E-02 20 2.495E-03

ContrastError





4.256E-02 1 4.256E-02 17.056 .0014.991E-02 20 2.495E-03

ContrastError





.298 .029 .238 .358

.385 .029 .325 .445

.299 .029 .239 .359

.388 .029 .328 .448

.283 .029 .223 .343

.400 .029 .340 .460

.313 .029 .253 .373

.386 .029 .326 .446

.334 .029 .274 .394

.346 .029 .286 .406



5%

10%

15%

20%




Dependent Variable: berat limpaTukey HSD

-.00217 .028841 1.000 -.08847 .08414-.00017 .028841 1.000 -.08647 .08614-.00783 .028841 .999 -.09414 .07847.00117 .028841 1.000 -.08514 .08747.00217 .028841 1.000 -.08414 .08847.00200 .028841 1.000 -.08430 .08830

-.00567 .028841 1.000 -.09197 .08064.00333 .028841 1.000 -.08297 .08964.00017 .028841 1.000 -.08614 .08647

-.00200 .028841 1.000 -.08830 .08430-.00767 .028841 .999 -.09397 .07864.00133 .028841 1.000 -.08497 .08764.00783 .028841 .999 -.07847 .09414.00567 .028841 1.000 -.08064 .09197.00767 .028841 .999 -.07864 .09397.00900 .028841 .998 -.07730 .09530

-.00117 .028841 1.000 -.08747 .08514-.00333 .028841 1.000 -.08964 .08297-.00133 .028841 1.000 -.08764 .08497-.00900 .028841 .998 -.09530 .07730



5%

10%

15%

20%

MeanDifference


Based on observed means.

Homogeneous Subsets berat limpa

Tukey HSDa,b

6 .340176 .341336 .341506 .343506 .34917

.998


N 1Subset



Alpha = .05.b.

berat limpa * konsentrasi formalin ANOVA Table

.000 4 .000 .019 .999

.101 25 .004

.102 29


berat limpa *konsentrasi forma


berat limpa * lama konsumsi

ANOVA Table

.043 1 .043 20.150 .000

.059 28 .002

.102 29


berat limpa *lama konsums


Lampiran 20. Data rerata berat badan awal (hari ke-0) selama pemeliharaan

Lama pemeliharaan Jenis ransum perlakuan 1 bulan 2 bulan 15% : 5% 56.30±7.07 52.20±2.45 10% : 10% 58.13±1.00 56.47±2.12 5% : 15% 55.63±3.51 54.67±1.66 0% : 20% 58.03±0.21 57.40±0.90

Lampiran 21. Hasil analisis homogenitas berat badan hari ke-0

Test of Homogeneity of Variances

berat badan awal

5.705 4 25 .002

LeveneStatistic df1 df2 Sig.

ANOVA

berat badan awal

60.538 4 15.134 1.882 .145201.072 25 8.043261.610 29

Between GroupsWithin GroupsTotal


Post Hoc Tests


Dependent Variable: berat badan awalTukey HSD

-3.0500 1.63736 .362 -7.8587 1.7587-.9000 1.63736 .981 -5.7087 3.9087

-3.4667 1.63736 .244 -8.2754 1.3421-3.3167 1.63736 .283 -8.1254 1.49213.0500 1.63736 .362 -1.7587 7.85872.1500 1.63736 .686 -2.6587 6.9587-.4167 1.63736 .999 -5.2254 4.3921-.2667 1.63736 1.000 -5.0754 4.5421.9000 1.63736 .981 -3.9087 5.7087

-2.1500 1.63736 .686 -6.9587 2.6587-2.5667 1.63736 .531 -7.3754 2.2421-2.4167 1.63736 .587 -7.2254 2.39213.4667 1.63736 .244 -1.3421 8.2754

.4167 1.63736 .999 -4.3921 5.22542.5667 1.63736 .531 -2.2421 7.3754

.1500 1.63736 1.000 -4.6587 4.95873.3167 1.63736 .283 -1.4921 8.1254

.2667 1.63736 1.000 -4.5421 5.07542.4167 1.63736 .587 -2.3921 7.2254-.1500 1.63736 1.000 -4.9587 4.6587



5%

10%

15%

20%

MeanDifference


Homogeneous Subsets berat badan awal

Tukey HSDa

6 54.25006 55.15006 57.30006 57.56676 57.7167

.244


N 1

Subsetfor alpha

= .05

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.a.

Lampiran 22. Dokumentasi selama penelitian

Gambar 1. Pembuatan ransum

Gambar 2. Ransum kontrol dan perlakuan

Gambar 3. Penimbangan ransum

Gambar 4. Tikus wistar jantan

Gambar 5. Kandang pemeliharaan tikus percobaan

Gambar 6. Penimbangan tikus

Gambar 7. Pembedahan pada bagian abdomen

Gambar 8. Pengambilan organ hati

Gambar 9. Pengambilan organ ginjal

Gambar 10. Pengambilan organ limpa

Gambar 11. Botol organ yang berisi formalin 10% dan

organ dalam tikus

pengaruh konsumsi ikan asin kuniran upeneus sulphureus...

Documents