1

PEMERIKSAAN LABORATORIUM KLINIK

SAMPLING DARAH

2

3

CARA PENGAMBILAN DARAH / SAMPLING

Spesimen darah untuk pemeriksaan lab dapat diambil dr : venapilihan utama arteri kapiler

Darah arteri terutama untuk pemeriksaan Analisa Gas Darah (AGD)

Darah kapiler terutama untuk : - anak kecil- dewasa ( darah yg diperlukan sedikit)

4

ANTI KOAGULAN1. EDTA (Etylene Diamin Tetraacetic Acid) Untuk pemeriksaa hematologi K2EDTA > larut dr Na2 EDTA Kadar 1 mg/ ml Kadar > 2mg / ml darah : LED

Hematokrit

Kadar EDTA teralu sedikit mikroaggregasihitung trombosit

Pencampuran EDTA dg darah tidak sempurna pembekuan darah

5

HEPARIN Untuk pemeriksaan kimia klinik Dosis 20 U / ml darah Harga mahal & kerja singkat Tidak dapat digunakan untuk sampel

hapusan darah dengan cat Wrightmenyebabkan latar belakang biru pd hapusan

6

TRI SODIUM SITRAT Untuk pemeriksaan faal koagulasi Kadar sitrat 3,4 atau 3,8 g/dl Untuk pemeriksaan faal koagulasi Bila antikoagulan :

terlalu sedikit darah membekuterlalu banyak faal koagulasi

memanjang

Jenis pemeriksaan laboratorium

7

Jenis pemeriksaan laboratorium cyto

8

Jenis pemeriksaan laboratorium Mikro

9

10

CARA PENGAMBILAN DARAH VENA Lokasi : v. cubiti media

(di fossa ante cubiti; terbaik)V. pergelangan tanganV. punggung tanganV. pergelangan kaki

■ ALAT : - Alkohol 70% - Kapas kering / kasa- Tabung - Semprit / vacutainer- Plester - Jarum ukuran 20 G - Panjang jarum

vena kecil 21-22 1 – 1,5 inchIndonesia 23 G

11

PROSEDUR PENGAMBILAN DARAH

Pastikan identitas penderita sesuai dg penderita Pasang tourniquet ± 10 – 15 cm dr daerah yg akan

dipungsi, palpasi vena yg dipilih, penderita diminta menggenggam tangan

Desinfeksi kulit dengan alkohol 70% secara sirkuler Pegang lengan bawah penderita di bawah daerah

pungsi, semprit/vacutainer holder dipegang di antara ibu jari & jari 3,4,5. Jari telunjuk sebagai petunjuk

Tusukan jarum (lubang menghadap ke atas) searah dg vena, membentuk sudut 15º dg permukaan kulit

12

Lanjutan prosedur sampling

Bila jarum masuk vena, terlihat darah di dlm semprit, tarik pelan2 alat penghisap

Genggaman tangan penderita dilepas segera setelah darah masuk dalam semprit. Bila memakai vacutainer, setelah jarum masuk vena tekan tabung pd vacutainer holder

Tourniquet dpt dikendorkan, pd waktu darah masuk semprit/ dibiarkan sampai volume darah yg dihisap cukup

Lepaskan tourniquet sebelum jarum ditarik dari vena. Tekan bekas tusukan dg kapas kering & cepat tarik jarum dr vena

13

Lanjutan prosedur sampling

Biarkan beberapa menit, kemudian :- pasang plester- lengan penderita angkat minimal setinggi jantung

Jika pakai semprit lepaskan jarum sebelum darah didistribusi ke dalam tabung / botol penampung

14

Bayi baru lahir tumit / ibu jari kaki Anak2 jari tangan 3,4 Dewasa jari tangan 3,4

cuping telingaHangatkan lokasi pengambilan darah dg

kain hangat 3 menitALAT :- Alkohol 70%- Kapas / kassa- Lancet steril- Pipet, mikropipet, tabung kecil

CARA PENGAMBILAN DARAH KAPILER

15

TAHAP-TAHAP: Bersihkan lokasi pengambilan darah dg

alkohol 70% Tunggu sampai alkohol kering Tusuk ujung jari dg lancet Usap tetesan I dg kapas kering Lakukan tekanan perlahan-lahan 1 cm di

atas tusukan, lepas kembali, berulang-ulang sampai volume darah yg keluar cukup

Tampung darah ke dalam tabung mikro/pipet kapiler

Tekan ujung tusukan dg kapas sampai darah berhenti

16

Petugas harus trampil Lokasi :

pergelangan tangan a. radialisfossa cubiti a. brachialislipatan paha a. femoralis

Jarum 18 – 20 G arteri besar23 – 25 G arteri kecil

CARA PENGAMBILAN DARAH ARTERI

17

Semprit dibilas dg larutan heparin 20 U / ml darah

Semprit gelas lebih baik dari plastik Desinfektan daerah arteri yg akan diambil

darahnya dg alkohol 70% Arteri diraba pulsasinya & dindingnya yg tebal Fiksasi arteri dg jari telunjuk proximal dr daerah

yg dipungsi Tusukan semprit pd permukaan kulit 5-10 ml

distal jari telunjuk Bila semprit gelas masuknya jarum

ke dalam arteri ditandai dg naiknya darah ke dalam semprit

TAHAP2 SAMPLING :

18

Lanjutan tahap sampling

Hisap darah perlahan-lahan secukupnya Tarik jarum & segera tekan bekas tusukan dg

kapas steril selama 5 menit Ujung semprit ditutup karet (tidak bolek ditekuk) Campur darah dg heparin dg cara memutar

semprit searah sumbu panjang Semprit masukan ke dalam plastik berisi es,

dibawa ke lab, kmd diperiksa dlm waktu 15 menit

19

BATAS WAKTU PENYIMPANAN DARAH PD SUHU KAMAR

Jenis pemeriksaan Diperiksa sebelumKadar Hb StabilJumlah lekosit 2 jamJumlah eritrosit 6 jamNilai hematokrit 6 jamLaju Endap Darah 2 jamJumlah trombosit 1 jamRetikulosit 6 jamSediaan apus 1 jam

20

PEMERIKSAAN DARAH

HEMOGLOBIN 1. Cara asam hematin ( cara Sahli)2. Cara cyanmethemoglobin

1.CARA SAHLIPrinsip : darah + as. Klorida (HCl) 0,1 N

hemoglobin diubah mjd as. Hematin (min 10 menit) Encerkan dg aquadest sp warna sama dg warna standar

Keuntungan : cepat, sederhana, tidak mahalKerugian : kurang teliti (kesalahan sp 10%)

21

Alat : 1. Hemoglobinometer Sahli Adam, t.d.:2. Gelas warna coklat (warna standar)3. Tabung haemometer dg pembagian

skala dlm g% atau g/dl4. Pipet Sahli vol 20 cmm5. Pengaduk gelas6. Pipet Pasteur

Reagen : 1.Lart HCl 0,1 N2.Aquadest

22

Cara : Tabung haemometer diisi lar HCl 0,1 N sp 2 g% Darah kapiler/vena +antikoagulan dihisap dg pipet Sahli

sp 20 cmm Bag luar pipet dibersihkan dg kapas kering/tissue (darah

jgn terhisap) Darah ditiup hati2 ke dalam tab berisi lar HCl, jgn sampai

timbul gelembung udara Sebelum pipet ditarik, pipet dibilas dulu dg cara hisap-

tiup beberapa kali Bag luar pipet dibilas dg aquadest/HCl 0,1N Tunggu 10 menit Encerkan as hematin dg aquadest setetes demi setetes

sambil diaduk, sp warna = standard Meniskus larutan dibaca (= Kadar Hb)

23

Hemoglobin

Bila warna standar berubah dikalibrasi thd cara cyanmetHb diberi koreksi faktor

1. Alat kurang sempurnaVol pipet tidak tepat 20 cmmWarna standard pucatKadar lart HCl tdk 0,1 N

2. Pengambilan darah kurang baik3. Mata lelah4. Penerangan kurang

Sumber kesalahan

24

Bleeding Time (Masa perdarahan) = BTMetode DUKEAlat: Lancet steril/disposable

Kertas filter sirkulerStopwatchAlkohol 70%

Prosedur : 1.Bersihkan cuping telinga dg alkohol 70%

biarkan kering2.Tusuk lobus telinga dg lancet steril & nyalakan

stopwatch3.Hisap darah dg kertas saring tiap 30 detik; kertas

jgn menyentuh kulit4. Jk perdarahan berhenti hentikan stopwatch

hitung Masa Perdarahan (BT)

Nilai Normal : 1-6 menit

Dipengaruhi : fungsi kapilerfungsi & jumlah trombosit

25

Clotting Time (Masa Pembekuan = CT)

CT memanjang pd : Hemofiliaafibrinogenemiaantikoagulan heparin

Metode Lee & WhiteAlat : Waterbath 37ºC

Tabung 13 x10mmStopwatchSemprit 10ml & jarum 20g

26

Prosedur px. CT1. Beri label 3 tabung dg 3 no : 1,2,32. Ambil darah 4 ml 3. Lepaskan jarum & masukkan 1 ml darah berturut2 pd

tab. 3,2,1 ; 1 ml darah terakhir dibuang Nyalakan stopwatch segera setelah darah masuk tabung ke 3

4. Masukkan tabung dlm waterbath 37ºC5. Setelah 5 menit, angkat tab 1 dg sudut 45º, ulangi tiap

30 detik; sampai darah beku catat waktu6. 30 detik setelah tab 1 beku, lakukan hal yg serupa dg

tab 2 & 37. Catat waktu pembekuan dari isi tab 3

Nilai Normal : 5 – 15 menit

27

Laju Endap Darah (LED)

Yi : px u/ mengukur kecepatan sedimentasi eritrosit di dalam plasma

Ada 2 cara: 1. Metode Westergren (pilihan terbaik) 2. Metode Wintrobe

Nilai normal : P = 0-20 mm/jam L = 0-15 mm/jam

LED meningkat pada :- Keadaan inflamasi - TBC- Infeksi - Multiple Myeloma- Rhematoid artritis

28

Cara pemeriksaan :Peralatan dan pereaksia. Pipet westergen & rak penyanggab. Darah EDTA atau darah sitrasc. Larutan NaCl 0,85%Cara kerja :1. Campur darah EDTA dg lart. NaCl 4 : 1

Cara : hisap NaCl dg pipet Westergren s/d angka 150, masukan dalam botol kecil; kemudian hisap darah EDTA sampai angka 0, masukkan dalam botol yg telah diisi lart NaCl, campur baik2 dg pengaduk atau hisap-tiup beberapa kali

29

Lanjutan px LED 2. Hisap campuran darah EDTA-NaCl dg tabung

Westergren sampai angka 03. Letakan tabung Westergen dengan posisi tegak

lurus pada rak penyangga4. Biarkan 1 jam dan catatlah berapa mm

menurunnya eritrosit (= nilai LED dalam mm/jam)

Sumber kesalahan :•Pemipetan yg tidak tepat•Kelebihan antikoaguan LED akan menurun•Lebih 1 jam hasilnya akan meningkat •Adanya gelembung mengakibatkan kesalahan hasil

30

Hitung Sel Darah

Prinsip :Darah diencerkan dan di cat dg larutan tertentu, sel-selnya dihitung dalam kamar hitung di bawah mikroskop

Alat : mikroskopkamar hitungpipet pengencer thoma

31

HITUNG LEUKOSITCara :1. Hisap darah kapiler atau darah EDTA dg pipet

Thoma (utk lekosit) sampai tanda 0,52. Encerkan sampai tanda 11 dg lart TURK

pengenceran 20x campur dg gerakan sejajar sumbu panjang

3. Buang 4 tetes pertama, tetes ke-5 masukkan kamar hitung tunggu 3 menit

4. Lihat di bawah mikroskop dg obyektif 40x, hitung jumlah lekosit pd 4 kotak lekosit (N)

5. Hitung lekosit = N x 50 /mmkNilai normal 4000-10000/mmk

32

HITUNG ERITROSIT

Cara :1. Hisap darah kapiler atau darah EDTA dg pipet

Thoma (utk eritrosit) sampai tanda 0,52. Encerkan sampai tanda 101 dg lart HAYEM

pengenceran 200x campur dg gerakan sejajar sumbu panjang

3. Buang 4 tetes pertama, tetes ke-5 masukkan kamar hitung tunggu 3 menit

4. Lihat di bawah mikroskop dg obyektif 40x, hitung jumlah eritrosit pd 5 kotak eritrosit (N)

5. Hitung lekosit = N x 10000 /mmk

Nilai normal L : 4,3 – 5,9 jt/mmkP : 3,9 – 4,8jt/mmk

33

HITUNG TROMBOSIT

I. Langsung = cara hitung lekosit, tetapi pipet yg dipakai adl

pipet eritrosit pengenceran 200x Larutan yg digunakan Rees Ecker Inkubasi 15 menit dalam petridisk yg diberi

tissue basah mencegah penguapan Hitung trombosit dalam 4 kotak lekosit (obyektif

40x) = N Hitung trombosit = N x 500

34

Hitung trombosit

II. Tidak Langsung Buat hapusan

darah dg cat giemsa / wright

Hitung jumlah trombosit sebanyak 40 lapangan pandang dg obyektif 100 x

Hasil dikalikan 1000

35

Skema kotak hitung

E E

E

E E

36

HITUNG JENIS LEKOSIT

Adalah : menetapkan prosentase jenis lekosit yg ada dalam darah dari preparat apus

Dibuat hitung macam2 lekosit per 100 lekosit dari sediaan apus hasil dilaporkan dalam %

37

Cara pembuatan preparat apus Sediakan 2 kaca obyek Teteskan 1 tetes darah pada 1cm dari ujung kaca (sebelah

kanan), ditengah2 dr ke-2 sisi panjang. Pegang sisi kaca dg ibu jari dan telunjuk tangan kiri. Ambil kaca ke-2 (sebagai pemulas), pegang dg tangan kanan,

letakkan di depan tetesan darah (pd kaca 1), dg sudut 25º, membuka ke kanan

Kaca pemulas di geser ke kanan shg menyinggung tetesan darah, darah akan segera menyebar sepanjang sisi kaca pemulas

Jaga agar sudut kedua kaca obyek tetap 25º, kmd geser kaca pemulas ke kiri dg mantap & cepat sepanjang kaca obyek 1. Keringkan di udara

38

Cara pengecatan preparat apusCara pengecatan dg cat GIEMSA :1. Letakkan sediaan apus di rak pengecatan dg

sediaan menghadap ke atas2. Genangi sediaan dg methanol selama 4 menit

& kemudian biarkan mengering3. Genangi sediaan dg cat Giemsa selama 20

menit4. Bilas dg air kran, kmd keringkan di udara

(Ingat kembali : Macam2 bentuk lekosit dlm darah tepi)

39

GOLONGAN DARAH

CARA :Teteskan masing2 1 tetes reagen anti-A, anti-B,

anti-AB, dan anti D (Rh)Teteskan masing2 1 tetes darah di sebelah reagenCampur / aduk dengan pengaduk, kmd goyangkan

kaca obyek ke depan & ke belakang, sambil diamati aglutinasi yg akan terjadi

Baca hasil dalam waktu 2 menti setelah pencampuran darah & reagen & catat hasilnya

40

INTERPRETASI

PENGAMATAN PENILAIAN

Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Gol. Darah Rh

+ _ + + A +

_ + + _ B _

+ + + + AB _

_ _ _ + O +

41

Reaksi aglutinasi

B

B

BB

Anti A

B

Hemaglutinasi= reaksi positif

B

B

Anti-B

+Anti-B

Anti-B

Anti-B

B

B

Golongan B

Y

Y

Y

Y

42

Reaksi aglutinasi

O

Tdk tjd hemaglutinasi= reaksi negatif

O

O

Anti-A

+

Anti-B

Golongan O

O -

Anti AAnti A

Anti A

-

-

Anti B Anti B

Anti BH

Anti-B Anti-AB

Anti-A Y Y

Y

43

Pemeriksaan cairan otak• Cairan otak keluar dr plexus choroideus &

merupakan filtrasi dr plasma

• Fungsi :1. Bantal cairan melindungi otak dr trauma2. Mempertahankan volume otak3. Pengangkut makanan & sisa2 metabolisme

• Pengambilan : dg cara punksi L3 – L4

44

Pemeriksaan Makroskopis Cairan Otak

Kekeruhan dibandingkan dg aquadest Normal : jernihWarna Normal : tidak berwarna

Patologis : Kekuningan (xanthochrom) Merah Coklat

45

Pemeriksaan mikroskopis cairan otakJumlah sel :

Isap lart Turk pekat dlm pipet lekosit sp tanda 1Isap cairan otak sampai tanda 11Tetesan pertama dibuangHitung dg kamar hitung ( pd 9 kotak) = NJumlah sel cairan otak = N x 5/4

Bedakan : sel polimorfonuklear (%)sel mononuklear (%)

Interpretasi : Normal : 0 – 5 sel/mmk Batas abnormal : 6 – 10 sel/mmk Abnormal : > 10 sel/mmk

46

Pemeriksaan KIMIAWITes PANDYPrinsip : Globulin + Albumin + r PANDY

mengendapCara :

1 ml r. PANDY + 1 tetes cairan otak ↓

kekeruhan

Interpretasi :– tidak keruh+ opalescent (berkabut)++ keruh+++ sangat keruh++++ keruh spt susu + endapan

47

Pemeriksaan KIMIAWITes NONNEPrinsip : Globulin + reagen NONNE (NH4)2SO4

terbentuk cincin putihCara : Masukkan dlm tabung 0,5 ml r. NONNE + 0,5 ml cairan otak scr

hati2 2 lapisan Tunggu 3 menit lihat cincin putih di antara 2 lapisan

Interpretasi :– tidak ada cincin+ cincin tipis++ cincin agak jelas, dikocok cairan berkabut+++ cincin jelas, dikocok cairan keruh++++ cincin jelas, dikocok cairan sangat keruh

48

Tes NONNE & PANDY Mengetahui protein scr KUALITATIF

Mengukur Protein & Glukosa scr kualitatif dg spektrofotometer

Nilai normal :

Glukosa : 50 – 80 mg/dl

Protein : Lumbal : 15 – 40 mg / dl

49

Transudat & EksudatTransudat Eksudat

Terjadi karena meningkatnya permeabilitas membran

Terjadi karena proses infeksi atau keganasan

Protein < 2,5 g/dl Protein > 3 g/dlTest Rivalta (–) Test Rivalta (+)Misalnya : pd ascites krn cirrhosis

Keganasan : liver cystoma ovarii

50

Cara test RIVALTA

Masukkan 1 tetes cairan peritoneal / pleura

5 ml r. RIVALTA

Hasil Test Rivalta (+) : keruh + presipitat

(–) : jernih

Reagen RIVALTA : 100 ml aquadest + 0,1 ml as. Cuka glasial

51

RAPID PLASMA REAGIN (RPR) Adalah pemeriksaan yg bertujuan untuk

mendeteksi kemungkinan adanya antibodi terhadap antigen treponema

Antigen ini dapat ditemukan pd penyakit lain (al : penyakit autoimun, lepra)

tidak spesifik untuk sifilis■ Antibodi yg terbentuk disebut reagin■ Pemeriksaan ini hanya digunakan untuk skrining

terhadap kemungkinan adanya sifilis, jika hasilnya positif, harus dilanjukan dg pemeriksaan yg lebih spesifik, misalnya dg TPHA

52

PEMERIKSAAN RPR Sampel yg diperiksa adalah serum atau plasma Prinsip pemeriksaan : Antibodi/reagin yang ada dlm tubuh penderita

akan bereaksi dengan antigen yg ada dipermukaan mikropartikel karbon membentuk agglutinasi (gumpalan)

Mikropartikel carbon dilais dg

antigen Antibodi/ reagin

dlm serum

+

aglutinasi

Hasil = REAKTIF

53

Cara pemeriksaan RPR : Satu tetes serum (≈ 50 uL) letakan pd lingkaran

hitam pada kartu tes dan ratakan dg pengaduk dispossable

Teteskan satu tetes reagen pd serum Kartu tes kmd di goyang dg rotator selama 8

menit Baca hasilnya di bawah sinar yg cukup Hasilnya :

reaktif atau reaktif lemah atau nonreaktif

54

TPHA = Teponemal Pallidum Haemagglutination Assay Pemeriksaan ini bertujuan untuk mendeteksi

antibodi spesifik untuk sifilis

Antibodi dlm serum

+

aglutinasi

Hasil = REAKTIF

Eritrosit dilapis dg antigen berasal dr T.

Pallidum (Nichol’s strain)

55

Cara pemeriksaan TPHA Buat pengenceran serum dg cara :

10 uL seruM + 190 uL diluent = 1/20 25 uL serum pengceneran 1/20 masukkan ke

dalam sumur, kemudian tambahkan pula 75 uL reagen

Sumur digoyang, agar cairan didalamnya dapat tercampur dg baik

Biarkan pada suhu kamar selama 45 – 60 menit Baca hasilnya ada agglutinasi = reaktif

tidak ada agglutinasi = non reaktif

56

PEMERIKSAAN HIV-ANTIBODI Metode bermacam-macam

Prinsip :Serum penderita HIV mengandung antibodi, dimana jika antibodi ini direaksikan dg antigen yg ada pada reagen atau strip pemeriksaan akan membentuk kompleks, yg ditandai dg adanya perubahan warna

Pengambilan Darah VENA

57

Pemeriksaan GOLONGAN DARAH

58