muhamd febry (pendidikan dokter 2011)

7/26/2019 Muhamd Febry (Pendidikan Dokter 2011)

1/65

PERBEDAAN PENYEMBUHAN LUKA SECARA HISTOPATOLOGI

DENGAN LAMANYA PEMBERIAN KORTIKOSTEROID SEBELUM

TERJADINYA LUKA PADA MENCIT (Mus musculus)

Skripsi

Diajukan ke Fakultas Kedokteran Universitas Andalas sebagai

pemenuhan salah satu syarat untuk mendapatkan

gelar Sarjana Kedokteran

oleh

MUHAMAD FEBRY

No.BP.1110311021

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS ANDALAS

PADANG

2014


2/65


3/65


4/65

i

KATA PENGANTAR

Segala puji hanyalah milik Allah, Rabb semesta alam yang menguasai

segenap isi bumi dan langit, yang senantiasa menggenggam hati-hati manusia.

Dengan limpahan rahmat dan petunjuknya, akhirnya penulis dapat menyelesaikan

skripsi dengan judul Perbedaan Penyembuhan Luka Secara Histopatologi

dengan Lamanya Pemberian Kortikosteroid Sebelum Terjadinya Luka Pada

Mencit (Mus musculus). Shalawat dan salam untuk Rasul mulia Muhammad

SAW, semoga kita semua selalu meneladani segala sisi kehidupannya. Skripsi ini

diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran

(S.Ked) pada Fakultas Kedokteran Universitas Andalas.

Terwujudkan skripsi ini tidak lepas dari bantuan, bimbingan, saran serta

dorongan maupun materil dari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis

menyampaikan ucapan terimaksih dan penghargaan yang setinggi-tingginya

kepada :

1.

Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Andalas Dr.dr. Masrul, Sp.GK

M.Sc, dan dr. Eka Nofita, M. Biomed selaku pembimbing akademik

terima kasih telah memfasilitasi dan membimbing penulis selama

menjalani pendidikan.

2. Ibu dr. Aswiyanti Asri, M.Si.Med, Sp.PA dan ibu dr. Laila Isrona, M.Sc

selaku pembimbing I dan pembimbing II yang telah mengorbankan

waktu, pikiran, dan tenaganya untuk memberi petunjuk serta saran pada

penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

3. dr. Asril Zahari, Sp.B KBD, Dr. Yusticia Katar, Apt, dan dr. Henny

Mulyani, Sp.PA, M.Biomed selaku penguji yang telah banyak

memberikan saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.4.

Dosen, residen dan staf Laboratorium Pataologi Anatomi yang telah

membantu penulis dalam pembuatan slide serta pembacaan hasil

patologi anatomi.

5.

Ayahanda (Basir) dibalik sosokmu yang diam tersimpan kepedulian

yang besar untuk anak-anakmu, terima kasih untuk keteladanannya.

Kepada Ibunda (Emi Yanti) yang selalu melimpahkan sejuta cinta dan

doa serta didikan yang membuat penulis senantiasa termotivasi dan


5/65

ii

yang telah mengajarkan arti hidup dan ketegaran. Kepada Adik-Adikku

(Nadia, Shella, Tasya) jadilah pribadi yang lebih baik dari abang, Ante

(Neng Aini), serta seluruh keluarga yang telah memberikan dukungan

moril dan materil yang tiada henti-hentinya, terima kasih untuk

cintanya.

6.

Rekan-rekan dan presidium Medicalstudent Research Centre (Riri,

Wulan, Dina, Dian, Nindo, Ibnu, Rido). Terima kasih untuk semangat

dan bantuan yang telah teman-teman berikan.

7. Saudara-saudaraku dihalaqah, Arif, Atif, Jaka, Nanang, Tama, Jola,

Andika Budi, Prima, Jaka, Dedi, Subhan, Reski, Fahri, Aji. Terima

kasih atas ilmu dan ukhuwah yang telah diberikan.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan,

karena keterbatasan kemampuan dan pengalaman yang penulis miliki. Untuk itu

dengan hati terbuka penulis menerima saran atau kritikan yang bersifat

membangun demi kesempurnaan skripsi ini.

Akhirnya penulis berharap skripsi ini dapat berguna dan bermanfaat bagi

kita semua, khususnya penulis sendiri, Amin.

Padang, Oktober 2014

Penulis


6/65

iii

ABSTRAK

PERBEDAAN PENYEMBUHAN LUKA SECARA HISTOPATOLOGI

DENGAN LAMANYA PEMBERIAN KORTIKOSTEROID SEBELUM

TERJADINYA LUKA PADA MENCIT (Mus musculus)

Oleh

Muhamad Febry

Proses penyembuhan luka, melalui beberapa tahapan yang cukup

kompleks. Pada awal terjadinya luka, akan dimulai dengan fase hemostasis,

dilanjutkan dengan fase inflamasi, kemudian proliferasi, dan terakhir fase

remodeling. Penggunaan kortikosteroid dalam waktu yang lama dapat

memperlambat proses penyembuhan luka, dengan cara menurunkan proses

pembentukan fibroblas, menurunkan jumlah gerakan dan fungsi leukosit,

mengurangi pergerakan polimorfonuklear (PMN) keluar dari kompartemenvaskular, dan mengurangi jumlah sirkulasi limfosit, monosit, dan eosinofil ,

terutama dengan cara meningkatkan gerakan sel radang keluar dari sirkulasi.

Tujuan penelitian ini adalah untuk melihat perbedaan penyembuhan luka Secara

histopatologi dengan Lamanya Pemberian Kortikosteroid Pada Mencit (Mus

musculus).

Desain penelitian adalah eksperimental dengan menggunakan rancangan

Randomized Post Test Control Group Design yang dilaksanakan pada Bulan

Februari 2014 hingga Oktober 2014 di Laboratorium Hewan, Biokimia, dan

Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Unand. Subjek penelitian adalah mencit

putih (Mus musculus) yang telah memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi kemudian

dibagi menjadi tiga kelompok, yaitu kelompok kontrol, perlakuan 1 (pemberian

kortikosteroid 10 hari sebelum luka), dan kelompok perlakuan 2 (pemberian

kortikosteroid 30 hari sebelum luka). Setelah hari ke-9 pembuatan luka, mencit

diterminasi untuk diambil jaringan luka, dan dilakukan pemeriksaan secara

histopatologi dan melihat pembentukan jaringan granulasi (neovaskular,

fibroblast, sel radang). Hasil penelitian menunjukkan terdapat terdapat perbedaan

secara signifikan antar kelompok dengan melihat nilai (p) berupa neovaskuler,

fibroblas, neutrofil, limfosit, berturut-turut 0,007; 0,025; 0,009;


7/65

iv

ABSTRACT

DIFFERENCE OF THE PROCESS OF WOUND HEALING FROM

HISTOPATHOLOGY VIEW WITH THE DURATION OF

CORTICOSTEROID CONSUME BEFORE WOUND IN MICE (Mus

muculus)by

Muhamad Febry

The process of wound healing is passing through several complex steps.

On the first step of wound, the hemostatic phase will start, followed by

inflammation phase, proliferation phase and ended with remodeling phase. The

using of corticosteroid for the long period can delay the wound healings process

by inhibit the fibroblasts formation, decrease the motility and function of

leucocyte, decrease the movement of Polymorph nuclear (PMN) coming out from

the compartment of vascular, and decrease the lymphocyte, monocyte and

eosinophil numbers in circulation, mainly by increase the movement ofinflammatory cell come out from circulation. The purpose of this research is to

determine the difference of the process of wound healing from histopathology

view with the duration of corticosteroid consume in mice (Mus muculus).

The research use experiment with Randomized Post Test Control Group

Design which held from February 2014 till October 2014 in Animals Laboratory,

Biochemistrys laboratory, and Pathologys laboratory of Medical Faculty,

University of Andalas. The subjects are the mice (Mus musculus) which already

fulfilled the inclusion and exclusions criterias. The subjects divided into 3

groups, the control group, 1stintervention (the injection of corticosteroid 10 days

before wound) and 2ndintervention (the injection of corticosteroid 30 days before

wound). After the 9thday of wound, the mice are terminates to take the wound

tissues and examine histologically to see the formation of granulation tissues

(neovascular, fibroblast, inflammation cell). The result shown that there is the

significance difference between intervention groups with p value from

neovascular, fibroblast, neutrophil, and lymphocyte in sequence are 0,007; 0,025;

0,009;


8/65

v

DAFTAR ISI

Halaman

Kata Pengantar i

Abstrak ii

Daftar Isi iv

Daftar Tabel vi

Daftar Gambar vii

Daftar Singkatan viii

BAB I. PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang 1

1.2 Rumusan Masalah 4

1.3 Tujuan Penelitian 4

1.3.1

Tujuan Umum 4

1.3.2 Tujuan Khusus 4

1.4 Manfaat Penelitian 4

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Penyembuhan Luka 6

2.1.1 Fase Inflamasi 6

2.1.2 Fase Proliferasi 7

2.2.3 Fase Remodeling 8

2.2 Kortikosteroid 9

2.2.1 Pengaruh Kortikosteroid Terhadap

Penyembuhan luka 12

BAB III. KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep 16

3.2 Hipotesis Penelitian 17


9/65

vi

BAB IV. METODELOGI PENELITIAN

4.1 Jenis Penelitian 18

4.2 Waktu dan Tempat 18

4.3 Populasi dan Sampel 19

4.3.1 Kriteria Inklusi 20

4.3.2 Kriteria Eksklusi 20

4.4 Variabel Penelitian 20

4.4.1 Klasifikasi Penelitian 20

4.4.2 Definisi Operasional 21

4.5 Bahan Penelitian 23

4.6 Instrumen Penelitian 24

4.7 Prosedur Penelitian 25

4.7.1 Pemeliharaan dan Perlakuan Hewan Coba 25

4.7.2 Penilaian Penyembuhan Luka Secara

Histopatologi 26

4.7.3 Pengolahan dan Analisa Data 27

4.7.4 Etika Penelitian 27

BAB V. HASIL PENELITIAN

5.1 Analisis Univariat 29

5.2 Analisis Bivariat 32

BAB VI. PEMBAHASAN

6.1 Perbedaan Rerata Pembuluh

Darah Baru (Neovaskuler) Antar Kelompok 35

6.2 Perbedaan fibroblas Antar Kelompok 37

6.3 Perbedaan Rerata Jumlah Sel Radang (Neutrofil,Limfosit, Makrofag) Antar Kelompok 39

BAB VII. KESIMPULAN DAN SARAN

7.1 Kesimpulan 42

7.2 Saran 42

DAFTAR PUSTAKA 43


10/65

vii

DAFTAR TABEL

Daftar Tabel Halaman

2.1 Hormon steroid adrenal dan sintetik, serta aktifitas 11

glukokortikoid dan mineralokortikoid.

5.1 Jumlah Pembuluh darah baru masing-masing kelompok 29

5.2 Jumlah fibroblas masing-masing kelompok 29

5.3 Jumlah neutrofil masing-masing kelompok 31

5.4 Jumlah limfosit masing-masing kelompok 31

5.5 Hasil uji normalitas data 33

5.6 Hasil analisis perbedaan penyembuhan luka 34

(neovaskuler, fibroblas, neutrofil, limfosit, makrofag)

tiap kelompok

5.7 Hasil analisiis Post-hoc LSD 34


11/65

viii

DAFTAR GAMBAR

Daftar Gambar Halaman

2.1 Fase normal pada penyembuhan luka 9

4.1 Rencana kerja dan perlakuan 18


12/65

ix

DAFTAR SINGKATAN

ACTH : Adenocorticotropin Hormon

EPCs :Endothelial Psogenitor Cells

FGF :fibroblas growth factor

K : Kelompok Kontrol

LPS : lipopolisakarida

LSD :Least Significan Differrence

PMN : Polimorfonuklear

SD : Standard Deviation

P1 : Kelompok Perlakuan 1

P2 : Kelompok Perlakuan 2

TGF- : Tumor Growth Factor betha

TNF- : Tumor Necrosis Factor alpha

VEGF : vascular endothelial growth factor

WHO : World Health Organization


13/65

1

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang

Luka adalah rusak atau hilangnya jaringan tubuh yang terjadi karena

adanya suatu faktor yang mengganggu sistem perlindungan tubuh. Faktor tersebut

seperti trauma, perubahan suhu, zat kimia, ledakan, sengatan listrik, atau gigitan

hewan. Proses penyembuhan luka, melalui beberapa tahapan yang cukup

kompleks. Pada awal terjadinya luka, akan dimulai dengan fase hemostasis,

dilanjutkan dengan fase inflamasi, kemudian proliferasi, dan terakhir fase

remodeling. Fase-fase ini dipengaruhi oleh berbagai interaksi seluler, serta diatur

oleh pelepasan sinyal-sinyal kimia lokal seperti sitokin, kemokin, faktor

pertumbuhan, dan faktor penghambat (Stephanie, R.G & Robert, F.D, 2010;

Sjamsuhidajat, R & Wim, D.J, 2005).

Setiap fase penyembuhan luka sangat dipengaruhi oleh beberapa faktor

kimiawi tertentu, diantaranya pada fase hemostasis ditentukan oleh adanya

beberapa faktor seperti trombosit, fibronektin, faktor von Willebrand, fibrinogen,

serta faktor pembekuan lainnya. Pada fase inflamasi dipengaruhi oleh adanya

neutrofil, sel mass, makrofag. Pada fase reepitelisasi dipengaruhi oleh fibroblast,

kolagen, sel epitel, sel endotel, sedangkan pada fase remodeling dilajutkan dengan

proses penggabungan benang-benang kolagen dan pembentukan jaringan parut,

serta masih banyak lagi pengaruh faktor-faktor lain dalam proses penyembuhan

luka. Pada saat terjadi gangguan pada fakor-faktor kimiawi itu, akan

menyebabkan terjadinya gangguan pada proses penyembuhan luka pada seseorang

(Diegelmann R.F & Evans, M.C, 2004).


14/65

2

Penggunaan kortikosteroid dalam waktu yang lama, lebih kurang 30 hari

dapat mempengaruhi proses penyembuhan luka, dengan cara menurunkan proses

pembentukan fibroblas, menurunkan jumlah gerakan dan fungsi leukosit,

mengurangi pergerakan polimorfonuklear (PMN) keluar dari kompartemen

vaskular, dan mengurangi jumlah sirkulasi limfosit, monosit, dan eosinofil ,

terutama dengan cara meningkatkan gerakan sel radang keluar dari sirkulasi.

Glukokortikoid juga menurunkan migrasi sel inflamasi (PMN, monosit, dan

limfosit) ke fokus cedera, sehingga penggunaan kortikosteroid dalam waktu yang

lama dapat meningkatkan kejadian infeksi, serta meyebabkan terjadinya

komplikasi dari penyembuhan luka (David G.G & Dolores, S, 2007).

National Surgical Quality Improvement Program Public di Amerika

melakukan penelitian retrospektif pada tahun 2005-2008 terhadap 20.434 pasien

yang menggunanakan terapi kortikosteroid baik secara parenteral maupun oral.

Dari penelitian tersebut didapatkan peningkatan kejadian infeksi dan komplikasi

penyembuhan luka setelah operasi. Pada penelitian lain disebutkan bahwa terjadi

peningkatan komplikasi penyembuhan luka pada pasien yang menggunakan

kortikosteroid sebanyak 2-5 kali lipat dibandingkan dengan pasien yang tidak

menggunakan kortikosteroid. Namun, pada penelitian lain didapatkan hasil yang

tidak signifikan terhadap komplikasi penyembuhan luka pada pasien yang

menggunakan kortikosteroid dosis terapi dalam waktu yang singkat (Wang, A.S,

Amstrong, E.J & Amstrong, A.W, 2012).

Kortikosteroid dalam dunia kedokteran dikenal dengan obat dewa, karena

hampir beberapa penyakit dapat diobati dengan obat ini, seperti pada artritis

reumatoid, lupus eritematosus, asma bronkial, dan beberapa penyakit lainnya.


15/65

3

Kortikosteroid dapat ditemukan dalam beberapa bentuk sediaan, antara lain oral,

parenteral (IV, IM, intarsinovial, dan intralesi). Analog sintetik dari golongan

kortikosteroid ini sangat beragam, salah satunya adalah deksametason

(Farmakologi dan Terapi, 2007).

Deksametason (glukokortikoid sintetik) sebagai obat antiinflamasi yang

banyak beredar di masyarakat, umumya digunakan untuk terapi pada artritis

rheumatoid dan alergi. Harganya yang murah dan mudah didapat mengakibatakan

obat ini masih menjadi andalan untuk terapi penyakit tersebut (Samsuri, 2011).

Deksametason memiliki kemampuan dalam menangulangi peradangan dan alergi

kurang lebih sepuluh kali lebih hebat dari pada yang dimiliki prednison. Sehingga

pada seseorang yang menggunakan kortikosteroid, tanpa pengawasan seorang

dokter, dapat meningkatakan efek samping penggunaan kortikosteroid, salah

satunya pada proses penyembuhan luka (Katzung GB, 2002). Penilaian pengaruh

kortikosteroid terhadap penyembuhan luka, banyak dilihat secara makroskopis,

namun sedikit penelitian yang menilai secara mikroskopis.

Berdasarakan uraian di atas peneliti tertarik untuk meneliti pengaruh

lamanya pemberian kortikosteroid terhadap penyembuhan luka, dengan

menggunakan mencit sebagai hewan coba dan kemudian dilihat gambaran

jaringan penyembuhan luka secara histopatologis.

1.2Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian dalam latar belakang masalah di atas, dapat dirumuskan

rumusan masalah penelitian sebagai berikut :

1. Apakah terdapat perbedaan jumlah pembuluh darah baru, fibroblas,

neutrofil, limfosit dan makrofag secara histopatologis pada mencit


16/65

4

sebelum diinsisi diberikan kortikosteroid 10 dan 30 hari dengan mencit

yang tidak diberikan kortikosteroid?

2.

Apakah terdapat perbedaan jumlah pembuluh darah baru, fibroblas,

neutrofil, limfosit dan makrofag secara histopatologis pada mencit yang

diberikan kortikosteroid sebelum diinsisi selama 10 hari dengan 30 hari?

1.3Tujuan Penelitian

1.3.1Tujuan Umum

Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan penyembuhan

luka secara histopatologis dengan lamanya pemberian kortikosteroid sebelum

terjadinya luka pada mencit.

1.3.2Tujuan Khusus

1. Mengetahui perbedaan jumlah pembuluh darah baru, fibroblas,


sebelum diinsisi diberikan kortikosteroid 10 dan 30 hari dengan

mencit yang tidak diberi kortikosteroid.

2. Mengetahui perbedaan jumlah pembuluh darah baru, fibroblas,


yang diberikan kortikosteroid sebelum diinsisi selama 10 hari dengan

30 hari.

1.4Manfaat Penelitian

1.4.1 Bagi Klinisi

Menambah pengetahuan tentang efek penggunaan kortikosteroid dalam

waktu lama (30 hari) sebelum terjadinya luka dapat memperlambat


17/65

5

penyembuhan luka pada seseorang, sehingga dapat diberikan terapi tambahan

untuk dapat mempercepat proses penyembuhan luka.

1.4.2 Bagi Ilmu pengetahuan

1. Memberikan kontribusi bagi ilmu pengetahuan mengenai hubungan

penyembuhan luka secara histopatologis dengan lamanya pemberian

kortikosteroid.

2. Dapat dijadikan sebagai data dasar bagi peneliti lain untuk melakukan

penelitian lebih lanjut mengenai penggunaan kortikosteroid dalam waktu

yang lama dapat mempengaruhi penyembuhan luka.

1.4.3 Bagi Masyarakat

Memberikan informasi kepada masyarakat mengenai salah satu efek

samping penggunaan kortikosteroid dalam waktu lama (30 hari) dapat

memperlambat penyembuhan luka.


18/65

6

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Penyembuhan Luka

Luka adalah rusak atau hilangnya jaringan tubuh yang terjadi karena

adanya suatu faktor yang mengganggu sistem perlindungan tubuh. Faktor

tersebut seperti trauma, perubahan suhu, zat kimia, ledakan, sengatan listrik,

atau gigitan hewan. Luka diklasifikasikan berdasarkan akut dan kronik, hal ini

dinilai berdasarkan waktu kemajuan kembalinya anatomi, fungsi dan struktur

normal dari jaringan yang luka tersebut. Luka juga dapat diklasifikasikan

berdasarkan sembuh secara total, dan sembuh minimal, dilihat dari anatomi

normal, fungsi dan struktur jaringan luka (Sjamsuhidajat, R & Wim, D.J,

2005; Lazarus G.S, Cooper, D.M & Knighton, D.R, 1994).

Penyembuhan luka merupakan suatu proses kompleks yang melibatkan

interaksi yang terus menerus antara sel dengan sel dan antara sel dengan matriks

yang terangkum dalam tiga fase yang saling tumpang tindih. Tiga fase mekanisme

penyembuhan luka yang terjadi yaitu fase inflamasi (0-3 hari), fase proliferasi dan

pembentukan jaringan (3-14 hari) (Reddy et al., 2012) serta fase remodeling

jaringan (bisa dimulai pada hari ke 8 dan berlangsung sampai 1 tahun)

(Broughton et al., 2006)). Hasil dari mekanisme penyembuhan luka ini tergantung

dari perluasan dan kedalaman luka, serta ada tidaknya komplikasi yang

mengganggu perjalanan proses penyembuhan luka yang alami. Gangguan pada

proses perbaikan jaringan yang menyebabkan proses penyembuhan luka yang

lama, terjadi pada berbagai kondisi seperti pada orang yang berusia lanjut,

pengobatan dengan steroid, dan yang menderita penyakit diabetes dan kanker


19/65

7

(Gurtner et al., 2008). Pada kondisi tersebut kemungkinan terjadinya infeksi lebih

besar

Gambar 2.1 Fase normal pada penyembuhan luka (Stephanie, R.G &

Robert, F.D, 2010)

2.1.1. Fase Inflamasi (0-3 hari)

Fase inflamasi kira-kira berlangsung sejak terjadinya luka sampai pada

hari kelima. Pembuluh darah yang terputus akibat luka akan menyebabkan

perdarahan dan tubuh akan berusaha menghentikannya dengan vasokontriksi,

pengerutan ujung pembuluh darah yang terputus (retraksi), dan reaksi

hemostasis. Hemostasis terjadi karena trombosit yang keluar dari pembuluh

darah saling melengket dan bersama jala fibrin yang terbentuk, sehingga

pembuluh darah yang luka menjadi tertutup (Sjamsuhidajat, R & Wim, D.J,

2005).

Jaringan yang rusak akan menyebabkan dikeluarkannya substansi-

substansi seperti histamin, bradikinin, serotonin, dan prostaglandin. Beberapa

dari substansi ini akan mengaktifkan sistem makrofag sehingga terjadi


20/65

8

fagositosis. Serotonin dan histamin akan meningkatakan permeabilitas kapiler

sehingga terjadi eksudasi, pengumpulan sel radang, disertai vasodilatasi

setempat, sehingga menyebabkan terjadinya udem. Tanda dan gejala klinis

pada reaksi peradangan, berupa warna kemerahan dikarenakan kapiler melebar

(rubor), rasa hangat (kalor), nyeri (dolor), dan pembengkakan (tumor)

(Sjamsuhidajat, R & Wim D.J, 2005).

Pada fase ini juga akan terjadi pergerakan leukosit menembus dinding

pembuluh darah (diapedesis) menuju luka karena daya kemotaksis. Leukosit

mengeluarkan enzim hidrolitik yang membantu mencerna bakteri dan kotoran

luka. Limfosit dan monosit yang kemudian muncul ikut berperan dalam

menghancurkan dan memakan kotoran luka dan bakteri (fagositosis).

(Sjamsuhidajat, R & Wim, D.J, 2005).

2.1.2. Fase Proliferasi (3-14 hari)

Pada fase proliferasi, luka dipenuhi sel radang, pembuluh darah baru,

fibroblast, dan kolagen, membentuk jaringan berwarna kemerahan dengan

permukaan yang berbenjol halus yang disebut jaringan granulasi. Granulosit

dan monosit fagositik memulai proses pembersihan. Pembuluh darah baru

mengeluarkan enzim litik untuk memecah fibrin dan memungkinkan

pembentukan anyaman. Tunas itu kemudian mengalami kanalisasi,

membentuk lengkung vaskuler yang menghasilkan penyediaan darah yang

kaya zat gizi dan oksigen. Selama reaksi vaskuler dan seluler yang hebat, juga

terjadi proses epitelisasi. Epitelium dengan cepat beregenerasi untuk

mengembalikan fungsi pelindungnya. Dalam 48 jam, selapis tipis epitelium

akan menutupi luka. Keadaan ini dimulai dengan mitosis sel basal epidermis


21/65

9

dan diikuti dengan perpindahan epitelium. Epitelium berpindah sampai

berkontak dengan sel epitel lain. Kekuatan regangan luka mencapai 25%

jaringan normal. Pada saat tertutupnya permukaan luka, pembentukan jaringan

granulasi juga akan terhenti dan dimulailah proses maturasi (Sjamsuhidajat, R

& Wim, D.J, 2005; Sabiston, D.J, 2011).

2.1.3. Fase Remodeling (8 hari 1 tahun)

Pada fase ini terjadi proses pematangan yang terdiri atas penyerapan

kembali jaringan yang berlebih, pengerutan sesuai dengan gaya grafitasi, dan

akhirnya terbentuk jaringan yang baru. Fase ini dapat berlangsung berbulan-

bulan dan dinyatakan berakhir kalau semua tanda radang sudah hilang. Udem

dan sel radang diserap, sel muda menjadi matang, kapiler baru menutup dan

diserap kembali, kolagen yang berlebih diserap dan sisanya mengerut sesuai

regangan yang ada. Selama proses ini dihasilkan jaringan parut yang pucat,

tipis, dan lemas, serta dapat dimobilisasi dari dasar, sehingga terjadi

pengerutan maksimal pada luka. Pada fase ini kulit mampu menahan regangan

kira-kira 80% dari kemampuan kulit normal. Hal ini tercapai kira-kira 3-6

bulan setelah penyembuhan (Sjamsuhidajat, R & Wim, D.J, 2005).


22/65

10

Gambar 2.1 Fase Inflamasi (1), Fase Proliferasi (2), Fase Remodelling (3a,

3b) (Romo, 2012)

2.2 Kortikosteroid

Kortikosteroid (adrenokortikal) merupakan salah satu hormon yang

disekresikan oleh kelenjar adrenal, tepatnya disekresikan oleh korteks adrenal.

Terdapat dua jenis hormon adrenokortikal yang utama, yaitu mineralokortikoid

dan glukokortikoid. Seluruh hormon ini disintesis dari kolesterol steroid, dan

semuanya memiliki rumus kimia yang sama. Akan tetapi, perbedaan yang sangat

sedikit dalam struktur molekulnya memberikan beberapa fungsi penting yang

berbeda. Pada korteks adrenal dapat dikenali lebih dari 30 jenis steroid, namun

hanya dua jenis yang berguna untuk fungsi endokrin manusia, yaitu aldosteron

yang merupakan mineralokortikoid utama, dan kortisol yang merupakan

glukokortikoid utama (Guyton, A.C & Hall, J.E, 2007).

Kortisoldan Aldosteron, disekresikan dari zona yang berbeda dari korteks

adrenal. Kortisol disekresikan dari zona fasikulata, yaitu lapisan tengah dan

terlebar, membentuk sekitar 75% dari korteks adrenal, sekresinya juga diatur

sebagian besar oleh sumbu hipotalamus-hipofisis lewat adrenocorticotropin

hormone (ACTH). Aldosteron disekresikan oleh zona glomerulosa, membentuk


23/65

11

sekitar 15% korteks adrenal, mengandung aldosterone sintase yang dibutuhkan

untuk sisntesis aldosteron, serta diatur terutama oleh konsentrasi angiotensin II

dan kalium cairan ekstra sel, yang keduanya merangsang sekresi aldosteron.

Kortisol memiliki fungsi antiinflamasi yang kuat melalui beberapa

mekanisme, diantaranya (Guyton, A.C & Hall, J.E, 2007) :

1.

Kortisol menstabilkan membran lisosom. Hal ini merupakan salah satu

efek antiinflamasi kortisol yang paling penting, karena kortisol

membuat membran lisosom intrasel menjadi lebih sulit pecah daripada

keadaan normal. Oleh karena itu, sebagian besar enzim proteolitik

yang disimpan dalam membran lisosom, sulit utuk dikeluarkan oleh

sel-sel yang rusak sehingga menurunkan proses inflamasi

2. Kortisol dapat menurunkan permeabilitas kapiler, yang merupakan

efek sekunder dari penurunan pelepasan enzim proteolitik, sehingga

mencegah sel plasma masuk kedalam jaringan.

3. Kortisol menurunkan migrasi leukosit ke daerah inflamasi dan

fagositosis sel yang rusak. Efek ini mungkin dihasilkan karena efek

dari kortisol yang dapat mengurangi pembentukan prostaglandin dan

leukotrin yang berfungsi meningkatkan vasodilatasi, permeabilitas

kapiler, dan mobilitas leukosit.

4.

Kortisol menekan sistem imun, sehingga menyebabkan reproduksi

limfosit menurun secara nyata. Jumlah sel T dan antibodi yang

berkurang di daerah inflamasi akan mengurangi reaksi jaringan,

sehingga menghambat proses inflamasi yang lebih lanjut.


24/65

12

5. Kortisol menurunkan demam terutama karena kortisol mengurangi

pelepasan interleukin-1 dari leukosit, yang merupakan salah satu

perangsang utama terhadap sistim pengaturan temperatur hipotalamus.

Penurunan temperatur selanjutnya mengurangi derajat vasodilatsi.

Jadi, kortisol memiliki efek yang hampir menyeluruh dalam mengurangi

semua akibat proses inflamasi. Sehingga, akan mempengaruhi terjadinya proses

penyembuhan suatu luka, dikarenakan proses-proses penting dalam penyembuhan

luka dihambat melalui efek kortisol yang merupakan salah satu enzim utama dari

glukokortikoid.

Glukokortikoid juga memiliki enzim lain, baik yang disekresikan sendiri

oleh korteks adrenal, maupun sintetik yang memiliki efek yang sama dengan

kortisol, diantaranya yaitu, kortikosteron (memiliki efek, kira-kira 4 persen

seluruh aktivitas glukokortikoid), kortison (sintetik, hampir sekuat kortisol),

prednison (sintetik, empat kali lebih kuat daripada kortisol), metilprednisolon

(sintetik, lima kali lebih kuat daripada kortisol), deksametason (sintetik, 30 kali

lebih kuat daripada kortisol).

Tabel 2.1 Hormon steroid adrenal dan sintetik, serta aktifitas glukokortikoid

dan mineralokortikoid (Guyton, A.C & Hall, J.E, 2007)

Steroid Aktifitas Glukokortikoid Aktifitas Mineralokortikoid

Steroid Adrenal

Kortisol 1 1Kortikosteron 0,3 15,0

Aldosteron 0,3 3000Deoksikortikosteron 0,2 100Dehidroepiandrosteron - -

Steroid Sintetik

Kortison 1,0 1,0

Prednisolon 4 0,8Metilprednisolon 5 -Deksametason 30 -

9-fluorokortisol 10 125


25/65

13

2.2.1. Pengaruh Kortikoseteroid Terhadap Penyembuhan Luka

Kortikosteroid menghambat jalannya proses penyembuhan luka, melalui

beberapa mekanisme seperti yang dijelaskan sebelumnya, dan ditambah dengan

beberapa mekanisme diantaranya, yang pertama dengan cara menurunkan jumlah

monosit pada sirkulasi, dan menurunkan jumlah masuknya makrofag pada

jaringan luka. Beberapa penelitian menunjukkan terjadinya penurunan jumlah

makrofag akan menyebabkan terjadinya penurunkan jumlah fagositosit maupun

produksi dari growth factor dan sitokin. Kortikosteroid juga dapat menghambat

terjadinya proses reepitelisasi, menurunkan respon pembentukan fibroblas,

memperlambat proses proliferasi dari pembuluh darah, serta menghambat

terjadinya proses sintesis kolagen dan maturasi dari jaringan luka (David, M.P &

Doughlas, D.R, 2010).

Gangguan penyembuhan luka, dapat dipengaruhi oleh infeksi yang lama

dikarenakan oleh efek samping penggunaan kortikosteroid melalui penurunan

proses inflamasi. Steroid menurunkan konsentrasi dan fungsi leukosit di perifer.

Terjadi peningkatan jumlah neutrofil oleh sumsum tulang, sebagai respon

penurunan jumlah leukosit lainnya, limfosit, monosit, basofil, dan eosinofil.

Kortikosteroid juga dapat menghambat fungsi makrofag, antigen-presenting cells

sehingga menurunkan fungsi kemotaksis, fagositosis, dan pelepasan sitokin

seperti tumor necrosis factor alpha (TNF-) dan interleukin-1. Kortikosteroid

juga dapat mengurangi pembentukan mediator inflamasi seperti prostaglandin,

leukotrien,danplatelet-activating factor, sedangkan pada dosis yang lebih tinggi

dapat menghambat Sel B sehingga menghambat pembentukan immunoglobulin.


26/65

14

Makrofag adalah sel inflamasi yang sangat berperan dalam penyembuhan

luka, walaupun perannya dalam penyembuhan luka masih belum sepenuhnya

dipahami. Makrofag memiliki banyak fungsi dalam luka, diantaranya fungsi

pertahanan pada sel, mempercepat proses peradangan, serta membantu proliferasi

sel dan pemulihan jaringan setelah cedera. Penelitian terbaru menunjukkan bahwa

peran makrofag pada beberapa negara memiliki fenotipik berbeda dalam

penyembuhan luka pada tiap-tiap tahap penyembuhan luka. Beberapa penelitian

menunjukkan bahwa, terjadinya disfungsi makrofag memegang peranan penting

dalam patogenesis sukarnya penyembuhan pada suatu luka. Oleh karena kemajuan

dalam pemahaman tentang sel multi-fungsi ini, makrofag terus menjadi sasaran

terapi untuk mengurangi fibrosis dan jaringan parut, serta untuk meningkatkan

penyembuhan luka kronis (Timothy J.K & Luisa A.D, 2013).

Pada beberapa binatang percobaan yang diberikan kortikosteroid

perioperatif terjadinya gangguan penyembuhan luka sebesar 30% saat diberikan

kortikosteroid sebanyak 15-40 mg/KgBB/hari. Pada beberapa literatur juga

ditemukan, pasien yang mendapatkan kortikosteroid dalam waktu kurang dari 10

hari, tidak memiliki efek yang signifikan secara klinik terhadap proses

penyembuhan luka. Pada pasien yang menggunakan kortikosteroid dalam waktu

yang lama, paling sedikit selama 30 hari sebelum tindakan pembedahan, terjadi

efek samping terhadap penyembuhan luka 2 sampai 5 kali dibandingkan dengan

pasien yang tidak menggunakan kortikosteroid. Komplikasi kortikosteroid

terhadap penyembuhan luka sangat bergantung pada jumlah dosis, lamanya

penggunaan, penyakit penyerta, dan jenis dari pembedahan yang dilakukan

(Wang, A.S, Amstrong, E.J, & Amstrong, A.W, 2012).


27/65

15

National Surgical Quality Improvement Program Public di Amerika,

melakukan penelitian retrospektif dari tahun 2005 sampai 2008 untuk melihat efek

penggunaan kortikosteroid. Pada penelitian ini, dari 635.265 pasien yang ada pada

database, didapatakan sebanyak 20.434 pasien (3,2%) yang mendapatkan

pengobatan kortikosteroid selama lebih kurang 30 hari baik secara parenteral

maupun oral, didapatkan hasil berupa terjadinya peningkatan efek samping berupa

infeksi yang signifikan setelah dilakukannya operasi, kira-kira 2,9% sampai 5%

atau terjadinya peningkatan 2 sampai 3 kali lipat dibandingkan dengan pasien

yang tidak mendapatkan kortikosteroid. Namun pada penelitian ini tidak

didapatkan dosis dan waktu pasti penggunaan kortikosteroid, serta keadaan pasien

yang mendapatkan terapi kortikosteroid (Ismael, H, Horst, M & Farooq, M,

2011).

Pada penelitian lain yang dilakukan pada hewan untuk melihat efek

penggunaan kortikosteroid setelah operasi, didapakan hasil pada hewan yang

diberikan kortikosteroid 3 hari atau lebih setelah terjadinya luka, tidak didapatkan

pengaruh hambatan pada penyembuhan luka. Jika diberikan kortikosteroid dalam

dosis yang besar setelah tindakan operasi dapat menyebabkan terjadinya

imunosupresi dan peningkatan kejadian infeksi, sehingga mendukung untuk

terjadinya komplikasi mekanik terhadap penyembuhan luka.


28/65

16

BAB 3

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konseptual

Keterangan :

= Variabel diteliti

= Variabel tidak diteliti

= Menghambat

Jaringan Granulasi

Efek :

1. Menurunkan jumlahmakrofag dan monositdisirkulasi.

2. Menghambat prosesreepitelisasi.

3. Menurunkanpembentukan

fibroblast.4. Menghambat sintesis

kolagen dan maturasi

jaringan luka.

Deksametason

Fase

Inflamasi

Hemostasis

Fase

Remodeling

Fase

Proliferasi

Filtrasi SelRadang

Luka Kulit

PenyembuhanLuka

Injeksi Subcutan


29/65

17

3.2 Hipotesis Penelitian

Berdasarkan latar belakang, rumusan masalah, tujuan, manfaat dan

tinjauan pustaka, maka hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah :

1. : Terdapat perbedaan penyembuhan luka secara histopatologis

antara mencit yang diberikan kortikosteroid sebelum terjadinya

luka dengan mencit yang tidak diberikan kortikosteroid

: Tidak terdapat perbedaan penyembuhan luka secara

histopatologis antara mencit yang diberikan kortikosteroid

sebelum terjadinya luka dengan mencit yang tidak diberikan

kortikosteroid

2. : Terdapat perbedaan penyembuhan luka secara histopatologis

pada mencit yang diberikan kortikosteroid sebelum terjadinya

luka berdasarkan lamanya pemberian.

: Tidak terdapat perbedaan penyembuhan luka secara

histopatologis pada mencit yang diberikan kortikosteroid

sebelum terjadinya luka berdasarkan lamanya pemberian.


30/65

18

PemeriksaanHistopatologi (Hari ke-

4 Setelah Luka)

Pembedahan

PemberianDeksametason 16

mg/kg/hari

Pembagian Kelompok

18 ekor mencit

Randomisasi dalam3 kelompok

Kontrol

Luka kulit

& pengambilanjaringan luka

Evaluasi jaringangranulasi

Perlakuan 1(10 Hari)

Luka Kulit

& pengambilan

jaringan luka


Perlakuan 2(30 hari)

Luka kulit

& pengambilanjaringan luka


BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian ini adalah eksperimental dengan menggunakan rancangan

Randomized Post Test Control Group Design untuk mengetahui pengaruh

lamanya pemberian kortikosteroid sebelum terjadinya luka pada beberapa

kelompok mencit, terhadap gambaran histopatologi jaringan lukanya. Subjek

penelitian adalah mencit (Mus musculus).

Gambar 4.1 Rencana kerja dan perlakuan.

4.2 Waktu dan Tempat

Pemelihraan hewan coba dan induksi kortikosteroid dilakukan di

Laboratorium Anatomi Fakultas Kedokteran.


31/65

19

Pemeriksaan jaringan luka secara histopatologi setelah perlakuan secara

histopatologi dilakukan di Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran

Universitas Andalas.

Penelitian ini berlangsung selama 34 hari, dengan rincian pemberian

kortikosteroid paling lama 30 hari, proses penyembuhan jaringan luka setelah luka

kulit selama 4 hari.

4.3 Populasi dan Sampel

Populasi penelitian ini adalah mencit putih (Mus musculus) yang berumur 8-

12 minggu, dengan berat badan berkisar 15-30 gram.

Penentuan besar sampel dicari dengan rumus (Dell, R.B, Holleran, S &

Ramakrishan, R, 2003) :

dimana, n = jumlah sampel tiap perlakuan, = 1 power penelitian dan p =

besar sampel yang diperkirakan tidak menunjukkan perubahan gambaran

histopatologis jaringan luka.

Jika power penelitian perlakuan yang didinginkan = 99% ( = 1 power=

1- 0,99 = 0,01) dan diperkirakan 60% dari smapel menunjukan perubahan

gambaran histopatologis jaringan luka ( p= 1- 0,6 = 0,4), maka :

Akan tetapi, untuk mencegah terjadinya drop-out di tengah-tengah

penelitian karena mencit mati atau sakit, maka dilakukan koreksi besar sampel

dengan menggunakan rumus :


32/65

20

( )

dengan besar sampel yang dikoreksi, = besar sampel yang dihitung, =

perkiraan proporsi drop-out. Proporsi drop-out sampel diperkirakan 10%,

sehingga didapat :

( )

( )

Jadi, dalam penelitian ini didapatkan besar sampel tiap perlakuan minimal 6

ekor mencit, sehingga jumlah total mencit yang dibutuhkan sebanyak 18 ekor

mencit.

Kortikosteroid yang digunakan pada penelitian, berupa deksametason

dengan dosis 16 mg/Kg BB perhari (Wang, A.S, Amstrong, E.J & Amstrong,

A.W, 2012).

4.3.1 Kriteria Inklusi

Mencit putih, dalam keadaan sehat, aktifitas dan tingkah laku normal,

berumur 812 minggu, dengan berat badan 15 - 30 gram.

4.3.2 Kriteria Eksklusi

Gerakan mencit tidak aktif, dan mencit mati dalam masa penelitian.

4.4 Variabel Penelitian

4.4.1 Klasifikasi Penelitian

1. Variabel Bebas : Pemberian deksametason 16 mg/Kg BB dan

lamanya pemberian deksametason pada masing-masing kelompok

perlakuan.

2.

Variabel Tergantung : Proses penyembuhan luka, dilihat dari jaringan

granulasi, reepitelisasi, dan neovaskuler.


33/65

21

3. Variabel Kontrol : Umur, berat badan, dan makanan mencit.

4.4.2 Defenisi Operasional

4.4.2.1 Pemberian Kortikosteroid

Pengertian : Pemberian deksametason sebanyak 16 mg/Kg BB

sehari sekali secara intravena.

4.4.2.2 Luka kulit

Pengertian : Luka yang hanya mengenai kulit dan subcutan

(Dorland, 2010).

4.4.2.3 Jaringan granulasi

Pengertian : Jaringan penyambung vaskuler yang membentuk

proyeksi garanular pada prmukaan luka yang

menyembuh, ulkus, atau permukaan luka yang

meradang (Dorland, 2010).

Cara ukur : Menghitung jumlah pembuluh darah baru, sel radang,

dan fibroblast. Perhitungan jumlah pembuluh darah

baru pada sediaan histopatologi menggunakan

mikroskop cahaya dengan perbesaran 40x10.

Perhitungan jumlah sel radang dengan menghitung

jumlah sel neutrophil, limfosit, makrofag pada sediaan

histopatologi menggunakan mikroskop cahaya dengan

perbesaran 40x10. Perhitungan jaringan fibroblas

dengan menggunakan mikroskop cahaya dengan

perbesaran 40x10. Perhitungan dilakukan sebanyak


34/65

22

tiga lapangan pandang kemudian dirata-ratakan (Fitria

M, 2013)

Alat ukur : Mikroskop cahaya

Skala ukur : Numerik

4.5 Bahan Penelitian

4.5.1. Hewan Coba dan Bahan untuk Pemeliharaan Hewan Coba

Delapan Belas (18) ekor mencit yang memenuhi kriteria inklusi

Pakan standar

Sekam

Alkohol 70%

Air

4.5.2. Bahan untuk Induksi Deksametason

Deksametason Injeksi

4.5.3. Bahan untuk Pembedahan Hewan Coba

Eter

Diazepam

Larutan NaCL 0,9% fisiologis (saline)

Alkohol 70%

Larutan povidone iodine (Betadine)

Kasa steril

Benang jahi Atraumatik 4,0

Selotip kertas

4.5.4. Bahan Pembuatan dan Pemeriksaan Preparat Histopatologi

Alkohol absolut 100%

New rapid


35/65

23

Alkohol 96% mounting medium

Alkohol 70% Gliserol

Larutan Bouin Parafin

Larutan hematoxylin Air suling

Larutan eosin Minyak imersi

Xylol

4.6 Instrumen Penelitian

4.6.1. Instrumen untuk Pemeliharaan Hewan Coba

Kandang hewan coba

Hands spray

Tempat makan dan minum hewan coba

Timbangan digital

4.6.2. Instrumen untuk Injeksi Deksametason

Spuit 1 mL

Jarum suntik 27 G

Wadah Kecil

4.6.3. Instrumen untuk Pembedahan Hewan Coba

Pisau cukur Papan bedah

Minor Set Spuit 1 mL

Jarum suntik 27 G Jarum jahit

Penggaris Sunkup

4.6.4. Instrumen untuk Pembuatan Preparat Histopatologi

Mikrotom Hotplate


36/65

24

Kuas Kecil Rak pewarnaan

Object glass Bak pewarnaan

Cover glass Pipet tetes

Water bath Histoplate

Inkubator Kaset jaringan

4.6.5. Instrumen untuk Pemeriksaan Histopatologi

Mikroskop Nixon XXI

4.6.6. Instrumen Sanitasi dan Higiene

Sarung tangan (hand gloves) Masker

Sabun cuci tangan antiseptik Alkohol

Jas Laboratorium Cotton balls

4.6.7. Instrumen Pengumpulan data

Buku (catatan perlakuan hewan coba) Pena

Penggaris

4.7 Prosedur Penelitian

4.7.1 Pemeliharaan dan Perlakuan Hewan Percobaan

Semua mencit yang akan diberikan perlakuan sebelumnya

diadaptasikan selama 7 hari dengan lingkungannya. Selama adaptasi tikus

ditimbang diawal dan akhir dari adaptasi. Mencit yang digunakan untuk

penelitian adalah mencit yang tidak mengalami penurunan berat badan

lebih dari 10% dan perilakunya normal.

Mencit dibagi kedalam tiga kelompok, dengan masing-masing

kelompok terdiri dari 6 ekor tikus. Setiap Kelompok memiliki perlakuan

yang berbeda, dengan rincian :


37/65

25

Kelompok I : Tanpa diberikan perlakuan (kontrol)

Kelompok II : Diberikan deksametason 16 mg/Kg BB selama 10 hari.

Kelompok III : Diberikan deksametason 16 mg/Kg BB selama 30 hari.

Untuk semua kelompok perlakuan akan diberikan pakan standar

AIN 93 M dan minum secara ad libitum setiap harinya.

Setelah diberikan perlakuan dengan jumlah hari yang berbeda pada

tiap kelompok, selanjutnya dilakukan pembuatan luka kulit pada

punggung mencit, kemudian dilakukan perawatan luka pada mencit selama

9 hari, pada masing-masing kelompok. Selanjutnya mencit dieuthanasia,

dilakukan di tempat yang terpisah dari keberadaan hewan lain (Komisi

Nasional Etik dan Penelitian Kesehatan RI, 2006). Setelah itu, diambil

beberapa bagian dari jaringan luka, dan dilakukan pemeriksaan secara

histopatolagi pada laboratorium patalogi anatomi.

4.7.2 Cara pembuatan luka

Pembuatan luka dermis dilakukan dengan cara (1) Tikus diberikan

anastesi berupa eter, secara inhalasi. (2) Bulu mencit sekitar sayatan (daerah

punggung) dicukur sampai licin, kemudian dibersihkan dengan kapas

beralkohol 70%. (3) Kemudian dilakukan perlukaan pada punggung mencit

dengan cara membuat sayatan sepanjang 2 cm menggunakan skapel yang

steril. Sayatan dibuat sejajar dengan tulang belakang.

4.7.3 Cara Penilaian penyembuhan luka secara histopatologi

1. Pada hari ke-9 setelah perlakuan masing-masing kelompok,

semua hewan coba dikorbankan, kemudian diambil jaringan

(insisi histopatologi) dengan irisan para median kiri dan kanan


38/65

26

untuk mengambil jaringan bekas operasi (dengan mengambil juga

jaringan normal disekitar luka) dan diteliti secara mikroskopis

untuk pemeriksaan histopatologinya.

2. Jaringan yang telah diambil dimasukkan ke dalam botol berisi

Formalin 10% untuk dikirim ke Laboratorium Patalogi Anatomi

Fakultas Kedokteran Unand untuk di periksa histopatologinya.

3. Cara penilaian sesuai dengan definisi operasional.

4.7.3 Pengolahan dan Analisis Data

Hasil pengamatan perubahan gambaran histopatologis pada jaringan

luka pada hewan coba dicatat, ditabulasi, dan dianalisis secara statistik

menggunakan program SPSS 20.0 versi Windows dengan interval

kepercayaan 95% dan taraf signifikansi 0,05 (p = 0,05). Analisis data

normalitas data (Shapiro-Wilks), uji homogenitas varian, dan uji One-Way

ANOVA diikuti uji post-hoc LSD (Least Significan Difference) dengan

alternatif uji non parametric Kruskal-Wallis diikuti uji post-hoc Mann-

Whitney.

Rerata (mean) dan simpangan baku (standard deviation)untuk tiap

kelompok dihitung dari data yang didapatkan. Nilai yang didapat dari data

hasil penelitian akan disajikan dalam bentuk rerata (mean) standar

deviasi (SD).

4.7.4 Etika penelitian

Oleh Karena pada penelitian ini digunakan mencit sebagai hewan

coba, maka sampel perlu dilakukan dengan layak, dengan cara dianastesi

pada saat laparatomi steril, kandang dibersihkan tiap hari, cahaya yang


39/65

27

cukup serta makanan dan minuman sesuai kebutuhan. Hewan coba

dikorbankan dengan over dosis anastesi sehingga memudahkan prosedur

kerja dan kematian bagi mencit tanpa menyiksa akhir hidupnya.


40/65

28

BAB 5

HASIL PENELITIAN

5.1 Analisis Univariat

Analisa Univariat mendeskripsikan distribusi frekuensi variabel yang

diteliti, yaitu pemeriksaan jaringan granulasi berupa pembuluh darah baru

(neovaskuler), fibroblast, dan sel radang (neutrophil, limfosit, dan makrofag).

5.1.1 Jaringan Granulasi

5.1.1.1Pembuluh Darah Baru

Tabel 5.1 Jumlah Pembuluh darah baru masing-masing kelompok

KelompokNomor

Sampel

Jumlah Rata-rata

LP Sampel

Rata- rata

LP

KelompokLP 1 LP 2 LP 3

Kontrol 1 15 14 12 13.62 14 12 11 12.3

3 15 14 10 13 13.1

4 20 12 9 13.6

5 17 10 12 13

Perlakuan 1 1 10 20 19 16.32 20 10 15 15

3 11 20 17 16 16.8

4 13 20 20 17.65 17 20 20 19

Perlakuan 2 1 27 31 19 25.7

2 46 26 18 303 12 10 44 22 22.24 12 7 39 19.35 12 15 15 14

LP : Lapangan Pandang

Tabel 5.1 menunjukkan jumlah pembuluh darah baru pada tiap kelompok,

penghitungan jumlah pembuluh darah dilakukan secara histopatologi pada hari

kesembilan setelah dilakukan pembuatan luka pada punggung mencit.

Penghitungan dilakukan sebanyak tiga lapangan pandang, kemudian dirata-

ratakan. Pada kelompok kontrol didapatkan jumlah rata-rata pembuluh darah

sebanyak 13,1, sedangkan pada kelompok perlakuan pertama didapatkan jumlah


41/65

29

rata-rata pembuluh darah sebanyak 16,8, selanjutnya pada kelompok perlakuan

kedua didapatkan jumlah rata-rata pembuluh darah sebanyak 22,8. Secara

keseluruhan jumlah pembuluh darah yang paling sedikit terdapat pada mencit dua

kelompok kontrol, sedangkan jumlah pembuluh darah terbanyak terdapat pada

mencit dua kelompok perlakuan dua.

5.1.1.2Fibroblas

Tabel 5.2 Jumlah Fibroblas masing-masing kelompok

Tabel 5.2 menunjukkan jumlah fibroblas pada tiap kelompok,

penghitungan jumlah fibroblas dilakukan secara histopatologi pada hari

kesembilan setelah dilakukan pembuatan luka pada punggung mencit.

Penghitungan dilakukan sebanyak tiga lapangan pandang, kemudian dirata-

ratakan. Pada kelompok kontrol jumlah rata rata-rata fibroblast sebanyak 11,

untuk kelompok perlakuan pertama didapatkan jumlah rata-rata fibroblast 11,5,

sedangkan pada kelompok perlakuan kedua didapatkan jumlah rata-rata fibroblas

sebanyak 8,1. Secara keseluruhan jumlah fibroblas yang paling sedikit terdapat

Kelompok NomorSampel

Jumlah Rata-rata

LPSampel

Rata-rata

LPKelompok

LP 1 LP 2 LP 3

Kontrol 1 12 10 13 11,6

2 12 11 12 11,6

3 15 10 13 12,6 11.54 10 12 10 10,6

5 11 11 11 11Perlakuan 1 1 11 10 10 10,3

2 10 11 10 10,33 11 12 11 11,3 114 12 13 11 12

5 13 10 11 11,3Perlakuan 2 1 11 8 7 8.7

2 10 3 8 73 6 6 6 6 8.14 9 5 3 5.75 13 15 11 13


42/65

30

pada mencit empat kelompok perlakuan kedua dengan jumlah rata-rata 5.7,

sedangkan jumlah fibroblas terbanyak terdapat pada mencit lima kelompok

perlakuan kedua dengan jumlah rata 13.

5.1.1.3Sel Radang

Tabel 5.3 Jumlah Neutrofil masing-masing kelompok

Tabel 5.4 Jumlah Limfosit masing-masing kelompok

KelompokNomor

Sampel

Jumlah Rata-rata

LP

Sampel

Rata-rata

LP

KelompokLP 1 LP 2 LP 3

Kontrol 1 4 6 4 4,6

2 4 4 5 4,3

3 3 5 4 4 3,764 2 4 5 3,6

5 1 2 4 2,3Perlakuan 1 1 12 13 12 12,3

2 14 12 12 12,63 16 12 13 13,6 12,564 10 12 12 11,35 16 11 12 13

Perlakuan 2 1 16 15 14 152 5 8 35 163 4 14 30 16 16,604 40 30 22 31,35 8 4 2 4,7

KelompokNomor

Sampel

Jumlah Rata-rata

LP

Sampel

Rata-rata

LP

Kelompok

LP 1 LP 2 LP 3

Kontrol 1 15 12 10 12,3

2 11 12 11 11,3

3 15 12 10 12,3 11,9

4 10 10 12 10,65 15 12 12 13

Perlakuan 1 1 10 10 11 10,32 10 12 12 11,33 8 10 10 9,3 10.34 11 10 9 105 11 11 10 10,6

Perlakuan 2 1 4 1 5 3.32 2 2 1 1.73 9 3 8 6.7 5,084 5 6 3 4.75 12 7 8 9


43/65

31

Tabel 5.3 dan 5.4 menunjukkan jumlah sel radang (neutrophil, limfosit)

pada tiap kelompok, penghitungan jumlah sel radang dilakukan secara

histopatologi pada hari kesembilan setelah dilakukan pembuatan luka pada

punggung mencit. Penghitungan dilakukan sebanyak tiga lapangan pandang,

kemudian dirata-ratakan. Pada kelompok kontrol didapatkan jumlah rata-rata

neutrofil sebanyak 3,76, limfosit sebanyak 11,9, makrrofag 0. Pada kelompok

perlakuan pertama didapatkan jumlah rata-rata neutrofil sebanyak 12,45, limfosit

sebanyak 10,3, makrrofag 0, sedangkan pada ke lompok perlakuan kedua

didapatkan jumlah rata-rata neutrofil sebanyak 16,6, limfosit 5, makrofag 0.

Secara keseluruhan jumlah neutrofil yang paling sedikit terdapat pada mencit lima

kelompok kontrol rata-rata 2.3, terbanyak terdapat pada mencit 4 kelompok

perlakuan kedua , sedangkan jumlah limfosit paling sedikit terdapat pada mencit

dua kelompok perlakuan kedua rata-rata 1.7, terbanyak terdapat pada mencit satu

dan tiga rata-rata 13.2, sedangkan untuk jumlah fibroblas pada seluruh kelompok

mencit tidak ditemukan pada saat pemeriksaan.


44/65

32

5.2 Analisis Bivariat

Analisis bivariat dilakukan untuk mengetahui perbedaan penyembuhan

luka terhadap lamanya pemberian kortikosteroid. Penyembuhan luka dilihat

dengan cara menghitung jumlah neovaskular, fibroblast, dan sel radang pada

masing-masing kelompok. Langkah pertama yaitu melakukan uji normalitas data

melalui ujishapiro wilk. Data terdistribusi normal jika p > dimana = 0,05.

Dari hasil uji shapiro wilk pada tabel 5.4, didapatkan nilai semua

kelompok baik kontrol maupun perlakuan dari keempat variable yang dilihat yaitu

(p > 0,05) sehingga dapat dikatakan semua data terdistribusi normal.

Untuk mengetahui perbedaan penyembuhan luka dengan lamanya

pemberian kortikosteroid sebelum terjadinya luka dilakukan analisa parametrik

berupa uji One-Way ANOVA diikuti uji post-hoc LSD (Least Significan

Difference). Hasil dianggap bermakna apabila nilai p < 0,05 (H0ditolak).

Tabel 5.5 Hasil uji normalitas data

N P Keterangan

Neovaskuler Kontrol 5 0,298 Normal

Perlakuan 1 5 0,841 Normal


Fibroblas Kontrol 5 0,735 Normal



Neutrofil Kontrol 5 0,395 Normal



Limfosit Kontrol 5 0,681 Normal



N : Jumlah Sampel

P : Nilai Kebermaknaan


45/65

33

Tabel 5.6 Hasil Analisis Perbedaan Penyembuhan Luka (neovaskuler,

fibroblas, neutrofil, limfosit, makrofag) Tiap Kelompok.

N Reratas.b P

Neovaskuler Kontrol 5 13,10 0,54 0,007

Perlakuan 1 5 16,78 1,54

Perlakuan 2 5 22,20 6,10

Fibroblas Kontrol 5 11,48 0,76 0,025

Perlakuan 1 5 11,04 0,73

Perlakuan 2 5 08,08 2,99

Neutrofil Kontrol 5 03,76 0,90 0,009

Perlakuan 1 5 12,56 0,86

Perlakuan 2 5 16,60 9,50

Limfosit Kontrol 5 11,90 0,95


46/65

34

Limfosit K vs P1 0,002 0,001 0,004 0,183

P1 vs P2 0,005 0,003 0,008 0,001

K vs P2 0,007 0,004 0,009 0,05), kemudian antara kelompok perlakuan satu dan

perlakuan dua terhadap neutrofil yaitu (p) 0,271 (p >0,05).


47/65

35

BAB 6

PEMBAHASAN

Telah dilakukan penelitian mengenai perbedaan penyembuhan luka secara

histopatologi dengan lamanya pemberian kortikosteroid sebelum terjadinya luka

pada mencit, penelitian ini dilakukan di Laboratorium Hewan, Laboratorium

Biokimia dan Laboratorium Patalogi Anatomi Universitas Andalas selama 8

bulan, dimulai pada bulan Februari sampai dengan September 2014. Sampel

adalah mencit putih (Musmusculus) yang telah dipilih secara acak sesuai dengan

kriteria inklusi berumur 812 minggu, dengan berat badan 15 - 30 gram. Mencit

berjumlah 18 ekor dibagi kedalam 3 kelompok, dimana tiap kelompok terdapat 5

ekor mencit ditambah dengan 1 ekor mencit untuk menghindari terjadinya drop-

out. Terhadap kelompok kontrol hanya dilakukan pembuatan luka insisi

dipunggung sepanjang 2 cm, sedangkan pada kelompok perlakuan dibuat luka

insisi yang sebelumnya diberikan kortikosteroid (deksmetason) masing-masing

dengan dosis 16 mg/kg/bb selama 10 hari dan 30 hari. Pada hari ke-9 setelah

insisi, mencit dikorbankan dan diambil jaringan luka untuk dilihat jaringan

granulasi (neovaskuler, fibroblast, neutrofil, limfosit, dan makrofag) sebagai

indikator penyembuhan luka. Seharusnya pembuatan insisi dan perawatan luka

selama 9 hari dilakukan secara bersama antara kelompok kontrol dan perlakuan,

dengan tujuan mengurangi terjadinya bias dan meningkatkan validitas penelitian,

hal ini perlu dilakukan dikarenakan saat pembuatan dan perawatan luka terdapat

faktor eksogen seperti infeksi dapat mempengaruhi proses inflamasi pada luka,

yang pada akhirnya dapat memperlambat pembentukan jaringan granulasi seperti,

neovaskuler dan fibroblas. Pada penelitian ini berdasarkan pertimbangan lamanya


48/65

36

waktu pengerjaan pembuatan insisi pada seluruh mencit kontrol dan perlakuan

jika dilakukan pada hari yang sama, maka pembuatan insisi dan perawatan luka

selama 9 hari dilakukan pada hari yang berbeda.

6.1 Perbedaan Rerata Pembuluh Darah Baru (Neovaskuler) Antar

Kelompok

Uji perbandingan rerata pembuluh darah baru antar kelompok menggunakan

uji One-Way ANOVA, menunjukkan terdapat perbedaan rerata neovaskuler yang

signifikan pada masing-masing kelompok, nila (p) 0,007 (p < 0,05) (tabel 5.5). Pada

ujipost-hocLSD didapatkan nilai (p) antara K vs P1 (p) 0,137; P1 vs P2 (p) 0,037; K

vs P2 (p) 0,020 (tabel 5.7).

Angiogenesis ditandai dengan migrasi sel endotel dan pembentukan

kapiler (Broughton et al., 2006). Terjadi pertumbuhan kapiler baru pada daerah

yang berdekatan dengan luka berupa tunas-tunas yang terbentuk dari pembuluh

darah dan akan berkembang menjadi percabangan baru pada jaringan luka. Hari

pertama sampai ketiga terjadinya luka, keadaan hipoksia merangsang makrofag untuk

mengeluarkan fibroblast growth factor (FGF) dan vascular endothelial-cell growth

factor (VEGF). Selanjutnya growth factor ini merangsang pembentukan pembuluh

darah baru pada tempat luka sekitar pada hari ke-4 dan berlanjut sampai hari ke-7.

Beberapa menit setelah lapisan barier epidermis rusak sehingga

menyebabkan jaringan dibawah kulit menjadi rusak, defek akan terisi oleh fibrin

clot yang berasal dari plasma dan platelet dari bocornya pembuluh darah.

Kemudian dalam beberapa jam sejak cidera, respon angiogenik yang masif terpicu

membentuk tunas-tunas pembuluh darah baru dan tepi epidermis mulai bermigrasi

ke depan satu dan yang lainnya menghubungkan antara jaringan ikat luka dan

keropeng. Selanjutnya ketika epidermis telah sembuh, vaskuler bertunas tadi


49/65

37

berubah dan jaringan ikat mengalami kontraksi untuk memperbaiki defek dan

akhirnya menyisakan jaringan parut pada dermis (Folkman, Shing, 2008).

Setelah dilakukan pemeriksaan jumlah pembuluh darah baru pada hari ke-9

setelah luka, didapatkan kelompok kontrol memiliki jumlah pembuluh darah baru

yang lebih sedikit dibandingkan kelompok perlakuan 1 dan perlakuan dua, hal ini

dapat terjadi dikarenakan pada setelah hari ke-7 setelah terjadi luka telah terjadinya

penurunan pembuluh darah baru dan menandakan bahwa luka telah terisi penuh

dengan jaringan granulasi baru, serta dimungkinkan karena pada fase proliferasi

fibroblas akan segera menghilang setelah matriks kolagen mengisi kavitas luka

dan serta pembentukan neovaskular akan menurun melalui proses apoptosis,

sehingga luka akan lebih cepat memasuki fase penyembuhan luka pada tahap akhir,

yaitu fase remodeling (Singer and Clark, 1999). Pada kelompok perlakuan 1 dan 2

masih didapatkan jumlah pembuluh darah baru dalam jumlah yang lebih banyak, hal

ini dapat terjadi karena efek pemberian kortikosteroid dapat menghambat terjadinya

proses reepitelisasi, menurunkan respon pembentukan fibroblas, serta

menghambat terjadinya proses sintesis kolagen dan maturasi dari jaringan luka,

sehingga jumlah pembuluh darah dalam jumlah yang banyak masih diperlukan

dalam proses fase proliferasi sebelum memasuki fase remodeling (David, M.P &

Doughlas, D.R, 2010).

Faktor proangiogenik yang diproduksi makrofag seperti vascular

endothelial growth factor (VEGF),fibroblas growth factor (FGF)-2, angiopoietin-

1 dan thrombospondin akan menstimulasi sel endotel membentuk neovaskular

melalui proses angiogenesis. Hal yang menarik dari fase proliferasi ini adalah

bahwa pada suatu titik tertentu, seluruh proses yang telah dijabarkan di atas harus

dihentikan. Fibroblas akan segera menghilang segera setelah matriks kolagen


50/65

38

mengisi kavitas luka dan pembentukan neovaskular akan menurun melalui proses

apoptosis. Kegagalan regulasi pada tahap inilah yang hingga saat ini dianggap

sebagai penyebab terjadinya kelainan fibrosis seperti jaringan parut hipertrofik,

dimana setelah terjadinya luka, biasanya akibat penbedahan dan trauma termal

akan terbentuk jaringan parut pada daerah kulit yang berwarna dan terbatas pada

jaringan yang rusak (Gurtner, 2007;Chaula L.S, 2007).

6.2 Perbedaan Rerata Fibroblas Antar Kelompok

Uji perbandingan rerata fibroblas antar kelompok menggunakan uji One-Way

ANOVA, menunjukkan terdapat perbedaan rerata fibroblast yang signifikan pada

masing-masing kelompok, nilai (p) 0,025 (p < 0,05) (tabel 5.5). Pada uji post-hoc

LSD didapatkan nilai (p) antara K vs P1 (p) 0,710; P1 vs P2 (p) 0,025; K vs P2 (p)

0,012 (tabel 5.6).

Pada pengamatan hari ke-9 setelah luka, terdapat peningkatan fibroblas yang

bermakna pada keseluruhan kelompok (p < 0,05). Terdapat perbedaan yang tidak

bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan 1, sehingga

secara statistik antara mencit yang tidak diberikan kortikosteroid dengan mencit

yang diberikan kortikosteroid selama 10 hari tidak mempengaruhi pembentukan,

jaringan fibroblas. Antara kelompok kontrol dan perlakuan 2 serta antara

kelompok peralakuan 1 dan 2 terdapat perbedaan penyembuhan luka yang

signifikan. Hal ini berarti pemberian kortikosteroid selama 30 hari sebelum luka

mempengaruhi pembentukan fibroblas.

Menurut literatur, jaringan granulasi baru menginvasi celah luka kira-kira 4

hari setelah terjadi perlukaan, bersamaan dengan kedatangan makrofag, fibroblas,

dan pembuluh darah baru. Makrofag merupakan sumber penting berbagai growth


51/65

39

factor yang berperan untuk merangsang fibroplasia dan angiogenesis (Singer and

Clark, 1999). Li et al. (2007) melaporkan bahwa pembentukan kembali dermis di

mulai kira-kira hari 3-4 setelah perlukaan, dengan ciri pembentukan

neovaskularisasi dan penumpukan fibroblas, dan menyebutkan bahwa sekresi

maksimal kolagen tipe III oleh fibroblas antara hari ke 5-7, dan setelah itu terjadi

perubahan fenotip dan fungsi fibroblas menjadi miofibroblas yang berperan pada

kontraksi luka.

Pada penelitian ini pemberian kortikosteroid 10 hari sebelum luka tidak

memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kelompok kontrol dikarenakan efek

kortikosteroid dalam waktu 10 hari sebelum luka dalam menghambat

pembentukan fibroblas tidak berpengaruh, sesuai dengan studi literatur yang

dilakukan oleh Wang, A.S pada tahun 2012 pasien yang mendapatkan

kortikosteroid dalam waktu kurang dari 10 hari, tidak memiliki efek yang

signifikan secara klinik terhadap proses penyembuhan luka. Pada pasien yang

menggunakan kortikosteroid dalam waktu yang lama, paling sedikit selama 30

hari sebelum tindakan pembedahan, terjadi efek samping terhadap penyembuhan

luka 2 sampai 5 kali dibandingkan dengan pasien yang tidak menggunakan

kortikosteroid. Komplikasi kortikosteroid terhadap penyembuhan luka sangat

bergantung pada jumlah dosis, lamanya penggunaan, penyakit penyerta, dan jenis

dari pembedahan yang dilakukan (Wang, A.S, Amstrong, E.J, & Amstrong, A.W,

2012).


52/65

40

6.3 Perbedaan Rerata Jumlah Sel Radang (Neutrofil, Limfosit, Makrofag)

Antar Kelompok

Uji perbandingan rerata jumlah sel radang antar kelompok menggunakan uji

One-Way ANOVA, menunjukkan terdapat perbedaan rerata Neutrofil, Limfosit,

yang signifikan pada masing-masing kelompok, nilai (p) 0,009; (p)


53/65

41

akut pada luka telah dilalui, sedangkan jumlah limfosit menandakan fase

penyembuhan luka siap menuju ke fase berikutnya, sesuai dengan sumber yang

menyebutkan bahwa limfosit dan mast cell merupakan sel terakhir yang bergerak

menuju luka dan dapat ditemukan setelah hari ke-5 pasca cidera, meskipun peran

keduanya masih belum jelas hingga saat ini (Gurtner, 2007).

Pada penelitian ini makrofag sulit ditemukan, hal ini mungkin dkarenakan

penglihatan jaringan granulasi pada hari ke-9 terutama makrofag sulit ditemukan.

Menurut teori dalam waktu dua sampai tiga hari, populasi sel radang didominasi

oleh monosit. Monosit dalam sirkulasi akan tertarik dan infiltrasi ke tempat luka.

Monosit ini akan berdiferensiasi menjadi makrofag dan bergabung dengan

makrofag setempat, dan memulai proses penyembuhan luka. Makrofag akan

mencapai puncaknya dalam waktu tiga sampai lima hari. Makrofag adalah sel

darah putih produk diferensiasi monosit. Makrofag merupakan sel dominan pada

hari kedua fase inflamasi menggantikan peran sel polymorpho nuclear (DiPietro,

Burns, 2003). Makrofag dirangsang oleh hipoksia jaringan untuk memacu

angiogenesis. Makrofag merupakan sel utama dalam proses penyembuhan luka

yang mendorong fase inflamasi memasuki fase proliferasi (Falanga, 2004).


54/65

42

BAB 7

KESIMPULAN DAN SARAN

7.1 Kesimpulan

1. Secara keseluruhan terdapat perbedaan penyembuhan luka secara statistik

pada kelompok kontrol, peralakuan 1 (pemberian kortikosteroid 10 hari

sebelum luka), perlakuan 2 (pemberian kortikosteroid 30 hari sebelum

luka) dengan melihat jaringan granulasi (Neovaskular, Fibroblas, neutrofil,

dan limfosit) masing-masing kelompok, sebagai indikator penyembuhan

luka.

2. Antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan 2, secara statistik

didapatkan perbedaan penyembuhan luka yang signifikan dari semua

jaringan granulasi yang dilihat (Neovaskular, Fibroblas, neutrofil, dan

limfosit).

3.

Antara kelompok kontrol dan perlakuan 1 dari semua jaringan granulasi

yang dilihat, hanya jumlah neutrofil yang memiliki perbedaan yang

bermakna.

4. Antara kelompok perlakuan 1 dan perlakuan 2 dari semua jaringan

granulasi yang dilihat, hanya jumlah neutrofil yang tidak memiliki

perbedaan yang bermakna.

7.2 Saran

1.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk melihat proses penyembuhan

luka pada tiap fasenya (inflamasi, proliferasi, dan remodeling), sehingga

didapatkan hasil yang lebih rinci dan akurat untuk melihat efek lamanya

pemberian kortikosteroid dalam menghambat proses penyembuhan luka.


55/65

43

2. Pembuatan luka insisi dan perawatan luka selama 9 hari pada kelompok

kontrol, perlakuan 1, dan perlakuan 2 seharusnya dilakukan dalam waktu

yang bersamaan sehingga dapat mengurangi bias pada penelitaian.


56/65

44

DAFTAR PUSTAKA

Broughton II, G., Janis, J.E., Attiger, C.E. 2006. Wound healing : an overview.

Plastic Reconstruction Surgery 117 (supplement) : 1eS-32eS.

Chaula L.S, 2007.Penggunaan Silicone Gel Sheet pada Keloid dan Jaringan Parut

Hipertrofik. Majalah Kedokteran Indonesia , Vol: 57, No: 2

David, G.G., Dolores, S., 2007. Greenspan`s Basic and Clinical Endocrinology.

Ed 8. McGraw-Hill Companies.

David, M.P., Doughlas, D.R., 2010.A comprehensive review of the adverse effevts

of systemic corticosteroids. Hal.157

Dell, R.B., Holleran, S., Ramakrishan, R., 2002. Sample Size Determination.

ILAR Journal, 43 (4), halaman 208213.

Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas

Indonesia. 2007. Farmakologi dan terapi. Ed 5. Jakarta: Gaya Baru ;

hal.496-516.

Diegelmann, R.F., Evans, M.C., Wound healing: an overview of acute, fibrotic

and delayed healing. Front Biosci 2004;9:2839.

DiPietro, L.A., Burns, A.L. (Eds). 2003. Wound Healing: Methods and Protocols.

Methods in Molecular Medicine. Totowa, N.J. Humana Press. Electronic

book.

Falanga, V. 2004. The chronic wound: impaired healing and solutions in the

context of wound bed preparation. Blood Cells, Molecules, and

Diseases.32 (1): 8894.


57/65

45

Fitria, M, 2013. Pengaruh Papain Getah Pepaya Terhadap Pembentukan Jaringan

Granulasi Pada Penyembuhan Luka Bakar Tikus Percobaan. Hal 28.

Folkman, J., Shing, Y. 2008. Angiogenesis. J Biol Chem. 267:10931-4.

Gurtner, G.C. 2007. Wound healing, normal and abnormal. In: Thorne CH,

Beasly, R.W., Aston, S.J., Bartlett, S.P., Gurtner, G.C., Spear, S.L. (Eds).

Grabb and Smiths plastic surgery. 6th ed. Philadelphia: Lippincott

Williams and Wilkins; p:15-22.

Guyton, A.C., Hall, J.E., 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 11. Jakarta:

Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Ismael, H., Horst, M., Farooq, M., et al, 2011. Adverse effects of preoperative

steroid use on surgical outcomes. Am J Surg;201:3058. Discussion 89.

Katzung, GB. 2002. Farmakologi dasar dan klinik; penerjemah dan editor:

Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Ed 8.

Jakarta: Salemba Medika; 582-90.

Komite Nasional Etik dan Penelitian Kesehatan RI, 2006. Pedoman Nasional Etik

Penelitian Kesehatan. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.

Lazarus, G.S., Cooper, D.M., Knighton, D.R., et al, 1994. Definitions and

guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing. Wound

Repair Regen 2(3):16570.

Li, J., Chen, J., Kirsner, R. 2007. Pathophysiology of acute wound healing. Clinics in

Dermatology. Vol: 25. p. 9-18.

Reddy, G.A.K., Priyanka, B., Saranya, Ch.S., Kumar, C.K.A. 2012. Wound

Healing Potential Of Indian Medicinal Plants. International Journal of

Pharmacy Review & Research. Vol: 2. p. 75-78.


58/65

46

Romo, T. 2012. Skin Wound Healing. Medscape reference. Available from:

http://www.charite.de/klinphysio/bioinfo/3_k-pathophy

fromm/05ws_skripten/Krause/webscript_krause.htm. Accessed : October

10, 2012.

Sabiston, D.C., 2011. Luka. Gregory, S.G., W. Christopher P., editors, Buku Ajar

BedahJilid 1, ed 17, 151-163. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Samsuri, Rahardjo, Sudjarwo, 2011. The influences of Dexamethasone sodium

phosphate to Insulin and Glucose level in young male rats body (Rattus

norvegicus). Hal 1-2.

Sjamsuhidajat, R., Wim, D.J., 2005. Luka. In Lisa, Y.H., Hardisiswo, S., and

Bisono, editors,Buku Ajar Ilmu Bedah, ed 3, 95-120. Jakarta: EGC.

Stephanie, R.G., Robert, F.D., 2010. Wound Healing Primer. Surg Clin N Am 90

11331146.

Singer, A.J. and Clark, R.A.F. 1999. Cutaneus Wound Healing.N England Medicine.

341 (10) : 738-754.

Timothy J. K., Luisa A.D., 2013. Inflammation and wound healing: The role of

the macrophage.

Wang, A.S., Amstrong, E.J., Amstrong, A.W., 2012. Corticosteroids and wound

healing: clinical considerations in the perioperative period.


59/65

Lampiran 1

Test of Normality

Tests of Normalityc,d,e

Mencit

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Neovaskuler Kontrol .226 5 .200* .877 5 .298

Perlakuan 1 .222 5 .200* .965 5 .841

Perlakuan 2 .117 5 .200* .997 5 .997

Fibroblas Kontrol .237 5 .200* .950 5 .735

Perlakuan 1 .243 5 .200* .874 5 .282

Perlakuan 2 .241 5 .200* .847 5 .186

Neutrofil Kontrol .229 5 .200* .897 5 .395

Perlakuan 1 .181 5 .200* .983 5 .950

Perlakuan 2 .325 5 .091 .890 5 .355

Limfosit Kontrol .264 5 .200* .942 5 .681

Perlakuan 1 .142 5 .200* .997 5 .997

Perlakuan 2 .153 5 .200* .983 5 .951

*. This is a lower bound of the true significance.

a. Lilliefors Significance Correction

c. Makrofag is constant when Mencit = Kontrol. It has been omitted.

d. Makrofag is constant when Mencit = Perlakuan 1. It has been omitted.

e. Makrofag is constant when Mencit = Perlakuan 2. It has been omitted.


60/65

Lampiran 2

One way ANOVA

ANOVA

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Neovaskuler Between Groups 209.548 2 104.774 7.880 .007

Within Groups 159.548 12 13.296

Total 369.096 14

Fibroblas Between Groups 34.192 2 17.096 5.105 .025

Within Groups 40.188 12 3.349

Total 74.380 14

Neutrofil Between Groups 431.045 2 215.523 7.045 .009

Within Groups 367.124 12 30.594

Total 798.169 14

Limfosit Between Groups 127.201 2 63.601 19.830 .000

Within Groups 38.488 12 3.207

Total 165.689 14

Makrofag Between Groups .000 2 .000 . .

Within Groups .000 12 .000

Total .000 14


61/65

Lampiran 3

Post-HocLSD

Multiple Comparisons

LSD

Dependent

Variable

(I) Mencit (J) Mencit Mean Difference

(I-J)

Std. Error Sig. 95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

Neovaskuler

KontrolPerlakuan 1 -3.6800 2.3061 .137 -8.705 1.345

Perlakuan 2 -9.1000* 2.3061 .002 -14.125 -4.075

Perlakuan 1Kontrol 3.6800 2.3061 .137 -1.345 8.705

Perlakuan 2 -5.4200* 2.3061 .037 -10.445 -.395

Perlakuan 2Kontrol 9.1000

* 2.3061 .002 4.075 14.125

Perlakuan 1 5.4200* 2.3061 .037 .395 10.445

Fibroblas

KontrolPerlakuan 1 .4400 1.1574 .710 -2.082 2.962

Perlakuan 2 3.4000* 1.1574 .012 .878 5.922

Perlakuan 1Kontrol -.4400 1.1574 .710 -2.962 2.082

Perlakuan 2 2.9600* 1.1574 .025 .438 5.482

Perlakuan 2Kontrol -3.4000

* 1.1574 .012 -5.922 -.878

Perlakuan 1 -2.9600* 1.1574 .025 -5.482 -.438

Neutrofil

Kontrol

Perlakuan 1 -8.8000* 3.4982 .027 -16.422 -1.178

Perlakuan 2 -12.8400* 3.4982 .003 -20.462 -5.218


* 3.4982 .027 1.178 16.422

Perlakuan 2 -4.0400 3.4982 .271 -11.662 3.582


* 3.4982 .003 5.218 20.462

Perlakuan 1 4.0400 3.4982 .271 -3.582 11.662

Limfosit

KontrolPerlakuan 1 1.6000 1.1327 .183 -.868 4.068

Perlakuan 2 6.8200* 1.1327 .000 4.352 9.288

Perlakuan 1Kontrol -1.6000 1.1327 .183 -4.068 .868

Perlakuan 2 5.2200* 1.1327 .001 2.752 7.688

Perlakuan 2Kontrol -6.8200

* 1.1327 .000 -9.288 -4.352

Perlakuan 1 -5.2200* 1.1327 .001 -7.688 -2.752

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


62/65

Lampiran 4

Gambar Penelitian

Tikus kontrol setelah luka Tikus perlakuan 1 setelah luka

Tikus perlakuan 2 setelah luka


63/65


64/65

Gambaran histopatologi mencit kontrol pembesaran 400X

Gambaran histopatologi mencit perlakuan 1 pembesaran 400X

Gambaran histopatologi mencit perlakuan 2 pembesaran 400X


65/65

Lampiran 5

Foto-foto penelitian

Alat dan bahan pembuatan luka Peneliti saat pembuatan luka

Kandang mencit sebelum luka Kandang mencit setelah luka

muhamd febry (pendidikan dokter 2011)

Documents