makalah biologi seluler-3

7/21/2019 Makalah Biologi Seluler-3

1/8

MAKALAH BIOLOGI SELULER

Analisis Sel dalam Jaringan

Oleh Kelompok 4:

Agusta Indahing Tyas (130644780!

Am"a# $a#esya (13063707%6!

Ayip &a#ouk ( 130644786'!

ug#ahi#ani )i*#ianti (130630766!

+had#ina I,,ati (1306370801!

FAKULTAS TEKNIK

UNIVERSITAS INDONESIA

DEPOK

!"#


2/8

ISI

I$ Penger%ian

+itohistologi te#di#i da#i : Sito yang "e#a#ti sel dan Histo yang "e#a#ti

*a#ingan- +ehingga sitohistologi me#upakan ilmu yang mempela*a#i tentang sel

dan *a#ingan

+el me#upakan komponen yang "e#si.at hidup dalam *a#ingan dan

me#upakan unit st#uktu#al dan .ungsional yang te#ke/il da#i o#ganisme- +edangkan

*a#ingan me#upakan kumpulan sel yang memiliki "entuk uku#an dan .ungsi yang

sama

eme#iksaan sel dalam *a#ingan sangat penting te#utama dalam duniakedokte#an- eme#iksaan sel dalam *a#ingan "e#tu*uan untuk mengetahui apakah

te#dapat suatu kea"no#malan pada sel dan *a#ingan "aik itu "e#upa ke#usakan

st#uktu#al maupun ke#usakan .ungsional-

Adanya peme#iksaan pada sito dan histo ini sangat penting untuk

mendiagnosa maupun men/egah semakin meluasnya kea"no#malan pada suatu

sel atau *a#ingan yang akan menga#ah pada keganasan atau kanke#-

II$ Prinsi& Dasar

#insip dasa# da#i sitohistologi adalah peme#iksaan ada atau tidaknya sel

a"no#mal atau sel kanke# dalam suatu *a#ingan- eme#iksaan sel ini dilakukan

dengan /a#a menyiapkan p#epa#at *a#ingan lalu dilan*utkan dengan p#oses

pe2a#naan sel sehingga dapat di"edakan anta#a sel no#mal dengan sel kanke#-

ada dasa#nya sel tidak "e#2a#na sehingga pe2a#naan sel dapat mem"antu

menganalisis sel dalam *a#ingan-

Teknik pemeriksaan sitologi dan histology

e#ikut adalah tahapantahapan dalam melakukan teknik sitohistologi

dimulai da#i mendapatkan *a#ingan sampai dihasilkan p#epa#at yang siap dipe#iksa

se/a#a mik#oskopis-

TahapanTeknik+ito)istologi:

1 $endapatkan 5a#ingan

&iksasi


3/8

3 ehid#asi

4 lea#ing

' m"edding

6 +e/tioning9utting

7 $ounting

8 +taining

% a"eling

10 eme#iksaan mik#oskopik

11 )asil peme#iksaan

Pengambilan sampel

em"uatan sediaan da#i suatu *a#ingan dimulai dengan ope#asi "iopsi

atau autopsi- +elain itu 5a#ingan *uga dapat dipe#oleh dengan *alan usapan atau

smea#- 5a#ingan yang diam"il kemudian dip#oses-

Fiksasi

$e#upakan suatu usaha untuk mempe#tahankan elemenelemen sel 9

*a#ingan aga# tetap pada tempatnya dan tidak mengalami pe#u"ahan "entuk dan

uku#an- ;at yang digunakan : .iksati.-

Dehidrasi

Adalah pena#ikan molekul ai# da#i dalam *a#ingan- ilakukan setelahp#oses .iksasi kegagalan 9 ketidaksempu#naan pada p#oses ini menye"a"kan

kegagalan pada langkah selan*utnya-

+el pada *a#ingan hidup mengandung ai# < 8'= ai# tidak te#/ampu# dengan

pa#a..in 9 seloidin sehingga pe#lu dehid#asi- Kemikalia yang digunakan : ethanol

io>ane A/etone ds"- ehid#asi menggunakan alkohol "e#tingkat mulai

konsent#asi #endah sampai a"solut-

#oses ehid#asi digunakan untuk memudahkan p#oses in.ilt#asi pa#a.in ke dalam

*a#ingan menggunakan alkohol da#i konsent#asi #endahtinggi

Penjernihan / clearing
http://wiki.unnes.ac.id/articles/a/u/t/Autopsi.htmlhttp://wiki.unnes.ac.id/articles/a/u/t/Autopsi.html


4/8

en*e#nihan 9 Kemikalia "e#.ungsi mem"uat *a#ingan men*adi *e#nih dan

t#anspa#an-

$e#upakan pe#anta#a anta#a p#oses dehid#asi dengan p#oses penanaman-

ila memakai alkohol pada dehid#asi pe#lu dilakukan dealkoholisasi- ?aktu yang dipe#gunakan te#gantung da#i : te"al *a#ingan9"esa# ke/ilnya

*a#ingan konsent#asi *a#ingan ma/am ,at .iksasi yang dipakai si.at /lea#ing

agent yang dipakai

Embedding

m"edding adalah #oses memasukkan *a#ingan ke dlm pa#a.in /ai# untuk

di"uat "lok yg padat

Sectioning / cutting

+e/tioning adalah p#oses pemotongan *a# dengan mik#otomuku#an sangat

tipis 410 @tem"us /ahaya saat dipe#iksa dengan mik#oskop

Mounting

$enempelkan potongan *a#ingan yg "aik ke o"yek glass

Staining

+taining me#upakan p#oses e2a#naan p#epa#at. $a/am pe2a#naan

"e#dasa#kan asal ,at 2a#na :

atu#al yes

A/id a#mine : ekst#ak se#angga "etina yang hidup di pohon kaktus di

dae#ah t#opis-

)emato>yline : getah pohon )aemato>yline/ampe/hianum

+ynteti/ yes

en,ene uinone Anilline-

#insip Ke#*a e2a#naan adalah se/a#a umum ,at 2a#na yang "e#si.at

asam akan me2a#nai "agian sel yang "e#si.at "asa dan se"aliknya /at net#al

(gugus asam dan gugus "asa keduanya "e#2a#na! $isal :Bomano2sky (amp

methylen lue C osin!

e#dasa#kan 2aktu p#oses pe2a#naan di"agi men*adi:

Direct Staining molekul ,at 2a#na langsung ditangkap oleh *a#ingan

misalnya osin


5/8

ndirect Staining molekul ,at 2a#na "a#u "isa ditangkap oleh *a#ingan *ika

menggunakan ,at pe#anta#a yang dise"ut $o#dant misalnya

)aemato>yline menggunakan otasium Alum se"agai mo#dantnya-

Pemeriksaan mikroskopik

#epa#at yang telah melalui se#angkaian p#oses kemudian diamati di

"a2ah mik#oskop dengan pem"esa#an o"*ekti. ke/il-

III$ '(n%() Analisis Sel dalam Jaringan

Im*n()is%(+imia

Imunohistokimia me#upakan suatu /a#a peme#iksaan untuk menguku#

de#a*at imunitas atau kada# anti"odi atau antigen dalam *a#ingan- Kata

imunohistokimia diam"il da#i kata immune yang menun*ukkan "ah2a p#insip

dasa# dalam p#oses ini adalah penggunaan anti"odi dan histo yang menun*ukkan

*a#ingan se/a#a mik#oskopis- engan kata lain imunohistokimia adalah metode

untuk mendeteksi ke"e#adaan antigen spesi.ik di dalam sel suatu *a#ingan denganmenggunakan p#insip pengikatan anta#a anti"odi (A"! dan antigen (Ag! pada

*a#ingan hidup- eme#iksaan ini mem"utuhkan *a#ingan dengan *umlah dan

kete"alan yang "e#Da#iasi te#gantung da#i tu*uan peme#iksaan-

Anti"odi adalah suatu imunoglo"ulin yang dihasilkan oleh sistem imun

dalam me#espon kehadi#an suatu antigen te#tentu- Anti"odi di"entuk "e#dasa#kan

antigen yang menginduksinya- e"e#apa anti"odi yang telah te#identi.ikasi adalah

IgA Ig Ig IgE dan Ig$-Antigen adalah suatu ,at atau su"stansi yang dapat

me#angsang sistem imun dan dapat "e#eaksi se/a#a spesi.ik dengan anti"odi

mem"entuk kompleks te#kon*ugasi- Ikatan anti"odiantigen diDisualisasikan

menggunakan senya2a la"el9ma#ke#-

Imunohistokimia (I)! me#upakan ga"ungan histologi imunologi dan

teknik "iokimia - I) memungkinkan identi.ikasi dan lokalisasi komponen sel di

dalam *a#ingan ka#akte#isasi suatu antigen te#tentu se#ta menentukan diagnosis


6/8

te#api dan p#ognosis kanke#- Teknik ini "anyak digunakan dalam diagnostik

patologi "edah te#hadap kanke# tumo# dan se"againya-

Teknik ini dia2ali dengan pem"uatan i#isan *a#ingan (histologi! untuk

diamati di"a2ah mik#oskop- Inte#aksi anta#a antigenanti"odi adalah #eaksi yang

tidak kasat mata- Tempat pengikatan anta#a anti"odi dengan p#otein spesi.ik

diidenti.ikasi dengan ma#ke# yang "iasanya dilekatkan pada anti"odi dan "isa

diDisualisasi se/a#a langsung atau dengan #eaksi untuk mengidenti.ikasi ma#ke#-

$a#ke# dapat "e#upa senya2a "e#2a#na yaitu lumines/en/eF ,at

"e#.luo#esensi yaitu .luo#es/ein um"elli.e#on tet#ametil #odhaminF logam "e#at

yaitu /olloidal mi/#osphe#e emas pe#akF la"el #adioakti.F dan en,im

yaitu )o#se Badish e#o>idase ()B! dan alkaline phosphatase- n,im yang

dipakai untuk mela"el selan*utnya di#eaksikan dengan su"st#at k#omogen yaitu

su"st#at yang menghasilkan p#oduk akhi# "e#2a#na dan tidak la#ut yang dapat

diamati dengan mik#oskop bright !ield(mik#oskop "idang te#ang!- Akan tetapi

sei#ing "e#kem"angnya ilmu pengetahuan khususnya dunia "iologi teknik

imunohistokimia dapat langsung diamati (tanpa di#eaksikan lagi dengan

k#omogen yang menghasilkan 2a#na! di"a2ah mik#oskop!luorescense-

Adapun ma#ke# untuk diagnosa I) adalah se"agai "e#ikut:

a#/inoem"#yoni/ antigen (A!: digunakan untuk

identi.ikasi adenocarcinoma-

ytoke#atins: digunakan untuk identi.ikasi carcinomatetapi *uga dapat

te#eksp#esi dalam "e"e#apa sa#koma-

1' and 30 : digunakan untuk identi.ikasiHodgkin"s disease

Alpha .etop#otein: untuk tumo#yolk sacdan ka#sinoma hepatosellule#

117 (KIT!: untukgastrointestinal stromal tumors(EI+T!

10 (AA!: untuk renal cell carcinomadan acute lymphoblastic

leukemia

#ostate spe/i.i/ antigen (+A!: untukprostate cancer

estrogensdanprogesterone staininguntuk identi.ikasi tumo#

Identi.ikasi sel lim.a menggunakan 0


7/8

Identi.ikasi sel T lim.a menggunakan 3

angkahlangkah dalam melakukan imunohistokimia di"agi men*adi dua

yaitu p#epa#asi sampel dansampe labelling-

1- #epa#asi sampel adalah pe#siapan untuk mem"entuk p#epa#at *a#ingan

da#i *a#ingan yang masih sega#-

#epa#asi sample te#di#i da#i :

a- pengam"ilan *a#ingan yang masih sega#

"- .iksasi *a#ingan "iasanya menggunakan .o#maldehid

/- em"edding *a#ingan dengan pa#a.in atau di"ekukan pada nit#ogen

/ai#

d- pemotongan *a#ingan dengan menggunakan mik#otom

e- depa#a.inisasi dan antigen #et#ieDal untuk mem"e"askan epitop

*a#ingan

.- "loking da#i p#otein tidak spesi.ik lain-

- +ampel la"eling adalah pem"e#ian "ahan"ahan untuk dapat me2a#nai

p#epa#at-

+ampel la"eling te#di#i da#i :

a- imunodeteksi menggunakan anti"odi p#ime# dan sekunde#

"- pem"e#ian su"st#at

/- /ounte#staining untuk me2a#nai *a#ingan lain di sekita#nya-

Te#dapat dua metode dasa# identi.ikasi antigen dalam *a#ingan dengan

imunohistokimia yaitu metode langsung (direct method! dan tidak langsung

(indirect method!- $etode langsung (direct method! me#upakan metode

penge/atan satu langkah ka#ena hanya meli"atkan satu *enis anti"odi yaitu

anti"odi yang te#la"el /ontohnya antise#um te#kon*ugasi!luorescein

isothiocyanate (&IT! atau #odhamin- $etode tidak langsung (indirect method!

menggunakan dua ma/am anti"odi yaitu anti"odi p#ime# (tidak "e#la"el! dan

anti"odi sekunde# ("e#la"el!- Anti"odi p#ime# "e#tugas mengenali antigen yang

diidenti.ikasi pada *a#ingan (!irst layer! sedangkan anti"odi sekunde# akan

"e#ikatan dengan anti"odi p#ime# (second layer!- Anti"odi kedua me#upakan anti

anti"odi p#ime#- ela"elan anti"odi sekunde# diikuti dengan penam"ahan su"st#at

"e#upa k#omogen- K#omogen me#upakan suatu gugus .ungsi senya2a kimia2i

yang dapat mem"entuk senya2a "e#2a#na "ila "e#eaksi dengan senya2a te#tentu-


8/8

isamping kedua metode di atas analisis imunohistokimia *uga dapat dilakukan

melalui metode e#o>idaseantie#o>idase dan metode ADidiniotinomple>

(A!-

$etode e#o>idaseantie#o>idase (A! adalah analisis imunohistokima

yang menggunakan tiga molekul pe#oksidase dan dua anti"ody yang mem"entuk

sepe#ti #otisand#ich- Teknik ini meman.aatkan a.initas anti"ody te#hadap antigen

(en,im! untuk mem"entuk kompleks imun sta"il se"agai pe#la2anan te#hadap

p#oses kimia te#kon*ugasi- )al unik da#i p#osedu# ini adalah te#"entuknya la#utan

en,imanti"odi dan kompleks imun A- n,im )o#se#adish e#o>idase dan

p#otein imunogenik digunakan untuk menyuntik spesies te#tentu dan me#espon

imun poliklonal yang dihasilkan te#hadap en,im- Antise#um ini dipanen dan

ditempatkan ke dalam la#utan en,im sehingga mem"entuk kompleks imun yang

la#ut- +edangkan metode ADidiniotinomple> (A! adalah metode analisis

imunohistokimia menggunakan a.initas te#hadap molekul aDidin"iotin oleh tiga

en,im pe#oksidase- engikatan "e"e#apa "iotin dalam molekul aDidin tet#aDalent

"e#tu*uan untuk ampli.ikasi dan #espon siyal yang disampaikan oleh antigen

ta#get-

Kele"ihan teknik imunohistokimia adalah anti"odi "e#ikatan dengan

antigen yang spesi.ik dapat digunakan untuk menentukan lokasi sel te#tentu dan

p#otein dapat digunakan untuk mengidenti.ikasi #espon sel (/ontoh : apoptosis!-

alam ilmu sa#a. I) memungkinkan peneliti untuk meme#iksa eksp#esi p#otein

dalam st#uktu# otak te#tentu- +ementa#a itu keku#angan da#i imunohistologi

adalah ku#ang spesi.ik te#hadap p#otein te#tentu tidak sepe#ti teknik imuno"lotting

yang dapat mendeteksi "e#at molekul p#otein dan sangat spesi.ik te#hadap p#otein

te#tentu-

makalah biologi seluler-3

Documents