laporan kadar glukosa puput

8/10/2019 Laporan Kadar Glukosa Puput

1/17

A. JUDUL PERCOBAAN

Penentuan Kadar Glukosa Darah

B. HARI, TANGGAL PERCOBAAN

Kamis, 23 Oktober 2014

C. TUJUAN PERCOBAAN

1.

Menentukan kadar glukosa dalam darah

D. KAJIAN TEORI

Gula darah merupakan istilah yang mengacu kepada tingkat glukosa yang ada di

dalam darah. Glukosa dibentuk dari senyawa-senyawa glukogenik yang mengalami

glukogenesis. Glukoneogenesis memenuhi kebutuhan akan glukosa pada saat karbohidrat

tidak tersedia dalam jumlah yang cukup dalam makanan. Pasokan glukosa yang terus

menerus diperlukan sebagai sumber energi, khususnya bagi sistem saraf dan eritrosit.

Glukosa juga diperlukan di dalam jaringan adipose sebagai sumber gliseralida-gliserol dan

glukosa juga mempunyai peran dalam mempertahankan kadar intermediet pada siklus asam

sitrat di seluruh jaringan tubuh. Glukosa juga merupakan satu-satunya bahan bakar yang

memasok energi bagi otot rangka pada keadaan anaerob.

Glukosa darah adalah gula yang terdapat dalam darah yang terbentuk dari karbohidrat

dalam makanan dan disimpan sebagai glikogen di hati dan otot rangka.

Sebagian besar karbohidrat, terutama golongan monosakarida dan disakarida

mempunyai sifat mereduksi dari karbohidrat disebabkan oleh adanya gugus aldehida atau

gugus keton bebas atau karena mempunyai gugus hidroksil (-OH) bebas yang reaktif. Pada

molekul glukosa (aldosa), gugus pereduksi terletak pada atom C nomor 1.

Glukosa adalah suatu aldoheksosa dan sering disebut dekstrosa karena mempunyai

sifat dapat memutar cahaya terpolarisasi ke arah kanan. Di alam, glukosa terdapat dalam

buah-buahan dan madu lebah. Darah manusia normal mengandung glukosa dalam jumlah

atau konsentrasi tetap, yaitu antara 70-100 mg tiap 100 ml darah. Glukosa darah ini dapat

bertambah setelah kita makan makanan sumber karbohidrat, namun kira-kira 2 jam setelah

itu, jumlah glukosa darah akan kembali pada keadaan semula. Pada orang yang menderita

diabetes mellitus atau kencing manis, jumlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg per 100

ml darah.


2/17

Deproteinasi adalah proses pelepasan protein dari ikatannya. Protein yang terikat

secara kovalen dapat didegradasi dengan perlakuan kimia yaitu pelarutan dalam larutan basa

kuat atau dengan perlakuan biologis. Pada prinsipnya, deproteinasi dilakukan dengan

pemberian kondisi basa yang diikuti pemanasan selama rentang waktu tertentu. Sebagai basa,

banyak dipilih NaOH, sebab, selain lebih efektif, bahan ini juga relatif murah dan mudah

didapatkan. Pemberian basa dimaksudkan untuk mendenaturasi protein menjadi bentuk

primernya yang akan mengendap. Selanjutnya dilakukan penyaringan untuk memisahkan

endapan dengan supernatannya. Filtrat kemudian diproses lebih lanjut.

Glukosa darah akan mereduksi ion Cu2+ dalam suasana basa, yang hasil reduksinya

akan bereaksi dengan arseno molibdat menghasilkan warna biru. Larutan ini diukur

absorbansinya pada panjang gelombang maksimum, yaitu 660 nm. Dengan menggunakan

Lambert-Beer menyatakan:

A= k x c x l

Di mana: A : Absorbansi (serapan cahaya)

k : Koefisien ekstinski molar larutan

l : Tebal kuvet

c : Konsentrasi sampel

Penentuan kadar gula reduksi dalam suatu contoh karbohidrat dapat dilakukan dengan

beberapa cara, di antaranya dengan titrasi metode Luff Schoorl dan cara spektrofotometri

metode Nelson-Somogyi.

Spektrometer menghasilkan sinar spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan

fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi.

Jadi, spektrofotometer digunakan untuk mengukur energi secara relatif jika energi tersebut

ditransmisikan, direfleksikan, atau diemisikan sebagai fungsi panjang gelombang. Bila

cahaya (monokromatik maupun campuran) jatuh pada suatu medium homogen, sebagian dari

sinar masuk akan dipantulkan sebagian diserap dalam medium itu, dan sisanya diteruskan.

Pembuatan kurva baku dibuat seri larutan baku dari zat yang akan dianalisis dengan

berbagai konsentrasi. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi diukur,

kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi.

Bila hukum Lambert-Beer terpenuhi maka kurva baku berupa garis lurus.


3/17

Diabetes melitus sangat erat kaitannya dengan mekanisme pengaturan gula normal.

Pada kondisi normal, kadar gula tubuh akan selalu terkendali, berkisar 70-110 mg/dl, oleh

pengaruh kerja hormon insulin yang diproduksi oleh kelenjar pankreas. Setiap sehabis

makan, terjadi penyerapan makanan seperti tepung-tepungan (karbohidrat) di usus dan kadar

gula darah akan meningkat. Peningkatan kadar gula darah ini akan memicu produksi hormon

insulin oleh kelenjar pankreas. Berkat pengaruh hormon insulin ini, gula dalam darah

sebagian besar akan masuk ke dalam berbagai macam sel tubuh (terbanyak sel otot) dan akan

digunakan sebagai bahan energi dalam sel tersebut. Sel otot kemudian menggunakan gula

untuk beberapa keperluan yakni sebagai energi, sebagian disimpan sebagai glikogen dan jika

masih ada sisa, sisa sebagian tersebut diubah menjadi lemak dan protein.


4/17

E. ALAT DAN BAHAN

1. Alat-alat

- Spektrofotometri UV-Vis

- Sentrifuge

- Tabung reaksi

-

Penangas Air

- Gelas ukur

-

Gelas piala

-

Pipet

- Pengaduk

2.

Bahan-bahan

-

Larutan Cu alkalis

- Larutan Ba(OH)20,3 N

- Larutan ZnSO4.7H2O 5%

- Larutan standar glukosa 1mg/L

- Pereaksi arsenemolibdat

- Darah yang oxalated


5/17

F. ALUR KERJA

1. Deproteinase Filtrat Darah

2. Penentuan Kadar Glukosa Darah

0,1 mL darah oxalated

Filtrat

- Diambil sedikit lalu diuji biuret

- Dimasukkan dalam tabung sentrifuge yang berisi 1,90 aquades

- + 1,5 mL Ba(OH)2 0,3 N diaduk hingga rata

- + 1,5 mL ZnSO4.7H2O 5%, dicampur dan didiamkan 5 menit

- Disentrifuge selama 30 menit

- Didekantasi

Hasil

1 ml filtrat Darah

- Dimasukkan dalam tabung reaksi

- + 1,0 mL pereaksi Cu alkalis

- Dimasukkan air mendidih selama 20 menit

- Dimasukkan dalam air dingin

- + 1,0 ml pereaksi arseno molibdat

- Diaduk sampai merata

- Diuji dengan alat spektronik 20 pada 660 nm

Absorbansi


6/17


7/17

G. Hasil Pengamatan

No Prosedur Percobaan Hasil Pengamatan Dugaan / Reaksi Kesimpulan

1 Deproteinasi Filtrat Darah Sebelum :

Darah : merah kental

Aquades : jernih

Ba(OH)2 0,3 N : tidakberwarna

ZnSO4.7H2O : tidak

berwarna

Sesudah :

Darah + aquades :

merah pudar

Darah + aquades +

Ba(OH)2: merah pudar

(++)

Darah + aquades +

Ba(OH)2+ ZnSO4 :

merah pudar (+)

Uji biuret larutan

keruh

Kadar glukosa normal

dalam darah : 60 120

mg/L

Sampel darah tidak

berubah warna ketika

diuji biuret menandakan

sampel darah sudahtidak mengandung

protein

0,1 mL darah oxalated

Filtrat

-

Diambil sedikit lalu

diuji biuret

-

Dimasukkan dalam tabung sentrifuge yang

berisi 1,90 aquades

- + 1,5 mL Ba(OH)20,3 N diaduk hingga rata

- + 1,5 mL ZnSO4.7H2O 5%, dicampur dan

didiamkan 5 menit

- Disentrifuge selama 30 menit

- Didekantasi

Hasil


8/17

2 Penentuan Kadar Glukosa Darah Arseno molibdat : tidsk

berwarna

Filtrat darah : tidak

berwarna + cu alkalis :

biru (+++)

Filtrat + cu alkalis : biru

(++)

Darah putri :

Filtrat + cu alkalis +

arseno molibdat

kuning kehijauan (++)

Darah wilda :

Filtrat + cu alkalis +

arseno molibdat

kuning kehijauan (+)

R2 : 0,986

Berdasarkan percobaan

yang dilakukan

didapatkan kadar

glukosa dalam darah

a. Putri sebesar

22,8 mg/ml

b.

Wilda sebesar

11,68 mg/ml

1 ml filtrat Darah

- Dimasukkan dalam tabung reaksi

-

+ 1,0 mL pereaksi Cu alkalis

-

Dimasukkan air mendidih selama 20 menit

-

Dimasukkan dalam air dingin

- + 1,0 ml pereaksi arseno molibdat

- Diaduk sampai merata

- Diuji dengan alat spektronik 20 pada 660

nm

Absorbansi


9/17

3 Pembuatan Kurva Standar Larutan glukosa : tidak

berwarna

Cu alkalis : biru

Arseno molibdat : tidak

berwarna

Larutan glukosa + cu

alkalis 0,08 mg/ml :

hijau (+++)

Konsentrasi :

0,06 mg/ml : hijau

(+++)

0,04 mg/ml : hijau (++)

0,02 mg/ml : hijau (+)

Semakin besar

konsentrasi maka

semakin besar

absorbansi

1,0 mL larutan glukosa dengan

konsentrasi 0,01 mg/L; 0,02 mg/L;

0,03 mg/L; 0,04 mg/L; 0,05 mg/L

-

Dimasukkan pada tiap tabung reaksi-+ 1,0 mL pereaksi Cu alkalis

-Dimasukkan dalam air mendidih selam 20

menit

-

Dimasukkan dalam air dingin

-+ 1,0 pereaksi arseno molibdat

-Diaduk sampai merata

-Diuji dengan alat spektronik 20 dengan =

660 nm

Absorbansi


10/17

4 Penetapan Larutan Blanko Aquades : tidak

berwarna

Aquades + cu alkalis

biru

Setelah didihkanbiru

Aquades + cu alkalis +

arseno molibdat

kuning

1 ml aquades

-Dimasukkan dalam tabung reaksi

-

Dimasukkan dalam air mendidih selam 20

menit

-Dimasukkan dalam air dingin

-+ 1,0 mL pereaksi arseno molibdat

-Diaduk sampai merata

-

Diuji dengan alat spektronik 20 pada = 660

nm

Absorbansi


11/17

H. ANALISIS DAN PEMBAHASAN

Analisis dan Pembahasan dari percobaan Penentuan Kadar Glukosa Darah

dalam praktikum Biokimia 1 akan dijabarkan sebagai berikut dengan pengambilan

sampel darah digunakan dua orang dalam kelompok, yaitu Putri dan Wilda.

Perbandingan yang digunakan adalah sesudah (sampel darah Putri) dan sebelum

(sampel darah Wilda) makan. Berikut adalah analisis-pembasaran yang akan

dijabarkan dari hasil pengamatan yang telah didapatkan.

1. Deproteinasi Filtrat Darah

Pada percobaan ini, bertujuan untuk memperoleh sampel filtrate darah yang

bebas protein. Pertama-tama, sampel yang didapat dimasukkan ke dalam tabung

sentrifuge yang telah berisi akuades, kemudian dicampur dengan baik. Di tahap ini

akan terjadi fenomena ketika albumin larut ke dalam akuades karena sifatnya.

Albumin adalah protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas

dan biasanya terdapat dalam serum darah. Setelah itu, ditambahkan larutan Ba(OH)2

(tidak berwarna) yang bertindak sebagai basa. Hal ini ditujukan untuk mendenaturasi

protein menjadi bentuk primernya yang akan mengendap, selanjutnya dilakukan

penyaringan untuk memisahkan endapan dengan supernatannya (Aulia, 2009).

Kemudian dilakukan penambahan ZanSO4.7H2O 5% (tidak berwarna) yang berfungsi

sebagai katalisator terhadap penambahan Ba(OH)2. Didiamkan beberapa saat dengan

tujuan reaksi yang terjadi akan berjalan dengan baik dan endapan albumin akan

terbentuk.

Setelah itu, dilakukan sentrifuge untuk semakin mengendapkan albumin yang

telah terendapkan. Dihasilkan supernatrant dan pellet yang kemudian supernatrantnya

diambil untuk diberi tindakan lebih lanjut. Selanjutnya, supernatrant ini akan disebut

sebagai filtrate darah bebas protein.

Untuk memastikan bahwa filtrate darah tersebut telah bebas dari protein,

dilakukan uji biuret dengan meneteskan beberapa reagen tersebut ke dalam sedikit

filtrate. Sekitar dua tetes ditambahkan, larutan tidak berubah warna menjadi merah

muda atau pun violet. Hal ini menandakan bahwa uji biuret yang dilakukan adalah

negatif, dengan artian bahwa filtrate tersebut bebas dari protein dan siap digunakan

untuk perlakuan lebih lanjut di mana setelahnya akan dilakukan penentuan kadarglukosa darah untuk dua sampel darah yang telah diambil sebelumnya.


12/17

2. Penentuan Kadar Glukosa Darah

Setelah dilakukan uji biuret dan hasilnya begatif, maka sampel filtrate bebas

protein siap digunakan untuk penentuan kadar glukosa dalam darah. Filtrat dari

masing-masing sampel yang telah dimasukkan ke dalam dua tabung reaksi berbeda,

kemudian ditambahkan pereaksi Cu alkalis yang berwarna biru jernih (+++).

Penambahan ini berfungsi sebagai pereduksi glukosa dalam sampel tersebut karena

Cu memiliki sifat oksidator kuat. Warna larutan yang didapatkan adalah biru tosca

(++). Kemudian dilakukan pemanasan dengan tujuan untuk mempercepat laju reaksi

Cu alkalis.

Larutan dalam tabung yang telah dipanaskan selama 20 menit kemudian

didinginkan. Lalu ditambahkan larutan arsenomolibdat yang menyebabkan larutan

yang berwarna biru tosca tersebut menjadi berwarna hijau dengan kekuatan warna

yang berbeda untuk filtrate darah Putri (++) dan filtrate darah Wilda (+). Penambahan

arsenomolibdat bertujuan agar pengukuran dapat dilakukan dengan menggunakan

spektrofotometri UV-Vis karena Cu+ memiliki warna serapan yang sangat kurang

kuat (merah) sehingga kurang sensitif yang dapat mengakibatkan kesalahan

pengukuran menjadi besar. Besar absorbansi yang didapatkan adalah 0,217 untuk

filtrate darah milik Putri dan 0,132 untuk filtrate darah milik Wilda.

3.

Pembuatan Kurva Standar

Percobaan ini bertujuan untuk mendapatkan kurva standard yang kemudian

akan diperoleh kurva yang memiliki persamaan regresi untuk kemudian digunakan

sebagai penentuan kadar glukosa darah pada percobaan sebelumnya.

Pembuatan kurva standar digunakan pula larutan blanko sebagai larutanstandar di mana dari larutan blanko ini dapat diperoleh nilai absorbansi yang

sebenarnya (murni) tanpa ada partikelpartikel lain di dalam larutan tersebut. Maka

dari itu, komposisi dari larutan blanko hanya akuades dan Cu alkalis.

Pada proses pembuatan larutan blanko dan larutan standar yang nantinya akan

diambil nilai absorbansinya, perlakuan yang diberikan tidak berbeda dengan apa yang

telah dilakukan pada filtrate sampel darah tanpa protein. Hanya saja pada tahap ini

warna hijau larutan setelah penambahan arsenomolibdat pada setiap larutan


13/17

didapatkan berbeda, tergantung pada konsentrasi glukosa yang digunakan. Berikut

adalah adsorbansi dengan konsentrasi glukosa pada masing-masing larutan standar.

-

0,08 mg/ml = hijau (++++)

- 0,06 mg/ml = hijau (+++)

- 0,04 mg/ml = hijau (++)

-

0,02 mg/ml = hijau (+)

Sehingga dilakukan pengukuran adsorbansinya menggunakan alat spektrofotometri

UV-Vis dan didapatkan nilai absorbansinya sebagai berikut:

-

0,02 = 0,009

- 0,04 = 0,039

-

0,06 = 0,059

Sehingga apabila diplotkan, akan diperoleh kurva standar sebagai berikut:

Hal ini dapat dibuktikan bahwa absorbansi berbanding lurus dengan

konsentrasi. Namun pada kurva standar tersebut tidak digunakan larutan standar pada

konsentrasi glukosa 0,08mg/ml karena pada aplikasi kurvanya, nilai yang didapatkan

tidak seperti yang diharapkan sehingga berpengaruh terhadap nilai regresinya. Pada

y = 1.25x - 0.014

R = 0.986

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07

absorbansi

konsentrasi

Konsentrasi vs Absorbansi


14/17

kurva yang tergambar ini, didaparkan nilai y = 1,25x+0,0143, dengan koefisien R2=

0,986.

Dari hasil kurva tersebut, barulah dapat dilakukan perhitungan kadar glukosa

darah dalam sampel sebagai berikut:

Kadar Glukosa Darah Putri

= + 0,014

1,25 =

0,271 + 0,014

1,25

= 0,228100

= 22,8

Kadar Glukosa Darah Wilda

= + 0,014

1,25 =

0,132 + 0,014

1,25

= 0,1168100

= 11,68

Berdasarkan perhitungan di atas yang menggunakan persamaan yang

dihasilkan oleh kurva strandar, dapat diketahui bahwa kadar glukosa darah Putri yaitu

22,8 mg/100mL sedangkan kadar glukosa darah wilda yaitu 11,68 mg/100mL.

I. KESIMPULAN

Adapun kesimpulan yang didapatkan dari percobaan ini berkaitan dengan

tujuan dari percobaan yang dilakukan, yaitu didapatkan data bahwa kadar glukosadarah Putri yaitu 22,8 mg/100mL sedangkan kadar glukosa darah wilda yaitu 11,68

mg/100mL.


15/17

J. DAFTAR PUSTAKA

Aulia (2009) dalam Amalia, Maimunah. 2010. Hubungan Asupan Karbohidrat Sederhana

dengan Kadar Gula Darah pada Penderita Diabetes Mellitus Tipe II Rawat Jalan di

Rumah Sakit Bhakti Wira Tamtama Semarang. Undergraduated (D3) Thesis Universitas

Muhammadiyah Semarang.

Basset, J. 1994.Buku Ajar Vogel : Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik. EGC: Jakarta.

Day, R.A dan Underwood, A.L. 2002.Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam. Alih bahasa:

I. Sopyan. Erlangga: Jakarta.

Joyce, Lee Fever (2007) dalam Permana, Chairul. 2011. Perbedaan Pemeriksaan Kadar

Glukosa Darah Puasa yang Diperiksa Segera dengan Ditunda Selama 1 Jam pada Suhu

Ruang. Undergraduated (D3) Thesis Universitas Muhammadiyah Semarang.

Khopkar, S.M. 2008. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press.

Lehninger A.L. 1982. Dasar-dasar Biokimia. Alih bahasa: Maggy Thenawijaya. Erlangga:

Jakarta.

Murray RK, DK Granner, VW Rodwell. 2006. Harpers Illustrated Biochemistry Ed. 27th.

The Mc Graw-Hill Companies, Inc.: USA.

Poedjiadi, A. 1994.Dasar-dasar Biokimia. UI Press: Jakarta.

Tim Dosen. 2012. Petunjuk Praktikum Biokimia. UNESA Press: Surabaya.

Yazid, Estien dan Nursanti, L. 2006. Penuntun Praktikum Kimia untuk Mahasiswa Analis.

Andi: Yogyakarta.


16/17

JAWABAN PERTANYAAN

1. Tentukan kadar glukosa darah dalam mg glukosa/ 100 mL darah!

2.

Apa fungsi proses pendidihan pada percobaan di atas?

3.

Jelaskan peranan hormone insulin dalam proses pengaturan kadar glukosa!

JAWABAN

1.

Kadar Glukosa Darah Putri

= + 0,014

1,25 =

0,271 + 0,014

1,25

= 0,228100

= 22,8

Kadar Glukosa Darah Wilda

= + 0,014

1,25 =

0,132 + 0,014

1,25

0,1168100

= 11,68

2. Fungsi dari proses pendidihan pada percobaan di atas adalah untuk mempercepat laju

reaksi oleh Cu alkalis.

3.

Peningkatan kadar gula darah ini akan memicu produksi hormon insulin oleh kelenjar

pankreas. Berkat pengaruh hormon insulin ini, gula dalam darah sebagian besar akan

masuk ke dalam berbagai macam sel tubuh (terbanyak sel otot) dan akan digunakan

sebagai bahan energi dalam sel tersebut. Sel otot kemudian menggunakan gula untuk

beberapa keperluan yakni sebagai energi, sebagian disimpan sebagai glikogen dan

jika masih ada sisa, sisa sebagian tersebut diubah menjadi lemak dan protein.

Menurunnya efektifitas hormon insulin mengakibatkan menurun pula kadar glukosa

yang masuk ke dalam sel. Akibatnya sel tubuh kekurangan glukosa dan berusaha

mendapatkan kalori dari pemecahan lemak. Pemecahan lemak akan menghasilkan

suatu keton yang dapat mengakibatkan terjadinya ketoasidosis.


17/17

laporan kadar glukosa puput

Documents