INSTRUKSI KERJA

MEDIUM PERTUMBUHAN

PENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI UNTUK MEDIA TUMBUH JAMUR

Bakteri dihambat dengan cara menambahkan antibiotik pada agar-agar. Karena hampir semua antibiotik berubah sifatnya dengan pemanasan, biasanya antibiotik ditambahkan pada agar-agar cair yang steril (tepat di atas suhu pemadatan agar-agar).

- Penisilin (50 unit per ml)- streptomisin (50 unit per ml) dan - tetrasiklin (30 unit per ml)

Dapat digunakan tersendiri atau dalam kombinasi. Khloramfenikol (50 mg per l) dapat diautoklaf dan ditambahkan pada saat persiapan.

Jumlah agar-agar yang ditambahkan ke media dalam resep berikut ini boleh jadi berbeda bergantung kepada merek agar-agar. Sebaiknya ditambahkan cukup banyak agar-agar untuk menghasilkan gelatin yang cukup kuat untuk digoreskan. Jika air leding diketahui mengandung kotoran beracun sebaiknya diganti dengan air suling (air steril).

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA PDA

Agar-agar Dekstrosa Kentang (Potato Dextrose Agar, PDA) adalah medium yang baik untuk pertumbuhan dan isolasi jamur. Bahan – bahan pembuat media PDA adalah sebagai berikut :

1. Bahan-bahan untuk PDA 2. Kentang 200 g 3. Dekstrosa (glukosa) 20 g 4. Agar-agar 20 g 5. Air leding 1 liter

Adapun langkah – langkah pembuatan media PDA adalah sebagai berikut :

1. Bersihkan kentang tanpa dikupas 2. Potonglah menjadi beberapa potongan dan rebus selama sekitar satu jam3. Kemudian saringlah kentang dan cairannya dengan saringan dan buanglah potongan-

potongan yang kasar. Cara lain, kocoklah seluruh campuran dengan blender listrik4. Selanjutnya, ke dalam filtrat kentang tambahkan larutan agar-agar dan dektrosa, aduk,

sambil menambahkan air leding hingga mencapai volume 1 liter5. Kemudian, campuran diautoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit.

Resep ini dapat diubah dengan menggunakan sayuran dan biji-bijian lainnya. Setengah atau seperempat persentase PDA dapat dibuat dengan mengurangi jumlah kentang dan dekstrosa menurut perbandingan.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA TWA

Agar-agar air leding (Tap water agar, TWA) adalah medium yang baik untuk mengisolasi banyak jamur.

Bahan – bahan pembuat media TWA adalah sebagai berikut :

1. Agar-agar 20 g 2. Air leding 1 liter

Adapun langkah – langkah pembuatan media TWA adalah sebagai berikut :

1. Campurkan agar-agar dalam air dan 2. autoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit.

Jerami gandum, biji serealia, atau material tanaman lainnya yang steril dapat ditempatkan ke media untuk merangsang sporulasi banyak jamur.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA V8

Agar-agar air sari V-8 (V-8 juice agar, V-8J) adalah medium yang baik untuk pertumbuhan jamur, terutama Phytophthora.

Bahan – bahan pembuat media V8 adalah sebagai berikut :

1. Air sari V-8 disaring sebanyak 200 ml 2. CaCO3 3 g 3. Agar-agar 20 g 4. Air suling (air steril) 800 ml

Langkah – langkah pembuatan media V8 adalah sebagai berikut :

1. Saring jus V-8 agar bebas dari kotoran2. Campur semua bahan dan3. Sterilisasikan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit

Bila air sari V-8 tidak dapat diperoleh, bahan ini dapat diganti dengan campuran air sari tomat, wortel, dan seledri.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA KBA

Agar-agar King’s B (King's B agar, KBA) adalah medium yang baik untuk isolasi secara umum bakteri patogen tanaman, terutama kelompok pseudomonad yang berpendarfluor (berfloresensi) dan jenis-jenis Erwinia.

Bahan – bahan pembuat media KBA adalah sebagai berikut :

1. Pepton proteose 20 g 2. Gliserol 10 g 3. K2HPO4 (tanpa air) 1,5 g 4. MgSO4.7H2O 1,5 g 5. Agar-agar 15 g 6. Air suling 1 liter

Langkah – langkah pembuatan media KBA

1. Sesuaikan keasaman (pH) medium menjadi 7,2 dan 2. sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 25 menit.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA NA

Agar-agar gizi (Nutrient Agar, NA) adalah medium serbaguna yang baik untuk bakteri.

Bahan – bahan pembuat media NA adalah sebagai berikut :

1. Ekstrak khamir 3 g 2. Pepton 5 g 3. NaCl 5 g 4. Agar-agar 15 g 5. Air suling (air steril) 1 liter

Langkah – langkah pembuatan media NA adalah sebagai berikut :

1. Sesuaikan pH menjadi 7,4 dan 2. Sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA SPA

Agar-agar pepton sukrosa (Sucrose Peptone Agar, SPA) adalah medium yang baik untuk pertumbuhan dan isolasi berbagai bakteri patogen tanaman.

Bahan-bahan untuk SPA

Sukrosa 20 g

Pepton 5 g

K2HPO4 (tanpa air) 0,5 g

MgSO4.7H2O 0,25 g

Agar-agar 12 g

Air suling 1 liter

Langkah – langkah pembuatan media SPA

1. Sesuaikan pH medium menjadi 7,2-7,4 dan 2. Sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA MEA

Agar-agar ekstrak malt (Malt Extract Agar, MEA) adalah medium yang baik untuk pertumbuhan dan isolasi berbagai jamur dan khamir. Jumlah ekstrak malt yang digunakan dapat beragam.

Bahan-bahan untuk MEA Ekstrak malt 2 – 20 g Agar-agar 20 g Air suling 1 liter

Langkah – langkah pembuatan media MEA1. Campurlah bahan-bahan dan 2. sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit.

INSTRUKSI KERJA

PEMBUATAN MEDIA GA

Agar-agar gliserol (Glycerol Agar, GA) digunakan untuk mengawetkan kultur agar-agar kering sebagai spesimen herbarium. Lempengan GA yang kering lebih mudah dilipat dan elastis seperti karet dibandingkan dengan medium agar-agar kering lainnya.

Bahan-bahan untuk GA

Gliserol 25 ml

Agar-agar 20 g

Air leding 1 liter

Langkah – langkah pembuatan media GA

1. Autoklaf medium ini pada suhu 121°C selama 20 menit.2. Kultur agar-agar yang telah agak kering adalah kultur mengambang dengan sisi

mengarah ke atas pada medium GA yang telah dituangkan ke dalam tutup cawan Petri yang terbalik. Lempengan ini kemudian dikeringkan selama 2-3 hari.