KELOMPOK V

AINUL POHAN (8126142001)

EVA DIANTI (8126142006)

LENY NOVITA (8126142012)

ROWLAND DAVID SP SILITONGA (8126142017)

Immunoanalisis Elektrokimia

dari Mioglobin Jantung

(V. V. Shumyantseva1, T. V. Bulko, M.

Yu. Vagin, E. V. Suprun, and A. I.

Archakov)

Electrochemical Immunoanalysis

of Cardiac Myoglobin

A. PendahuluanPenyakit jantung merupakan salah satu

penyebab kematian. Maka dibutuhkan suatu

alat deteksi untuk menentukan apakah

seseorang mengidap penyakit jantung atau

tidak. Oleh karena itu penemuan infark

miokard infark miokard akut (AMI)

menentukan kebutuhan perancangan metode

yang mengungkapkan keakuratan deteksi

penyakit ini, sehingga mengakibatkan

diagnosa baru laboratorium biokimia dari AMI.

Troponin jantung sekarang dianggap sebagai penanda

yang paling spesifik dalam diagnosa dari AMI, dan Mb

ini adalah penanda awal dari AMI, yang terdeteksi

dalam 1-3 h. Setelah Mb kerusakan miokard (berat

molekul 17,8 kDa) dengan cepat dilepaskan ke dalam

darah dan daripada diekskresikan ke dalam urin dalam

keadaan tidak berubah dan konsentrasi adalah

tergantung pada fungsi ginjal. dalam konsentrasi Mb

AMI tajam melebihi nilai normal (dari 12-76 dan 19-92

ng / ml pada wanita dan laki-laki, masing-masing) dan

mencapai tingkat 1500 ng / ml. Tingkat Mb dapat

digunakan untuk evaluasi dari ukuran AMI karena

tingkat hypermyoglobinemia secara langsung

tergantung pada nekrosis (lesi) ukuran.Alpha

banyak metode yang telah digunakan untuk

penentuan Mb termasuk pendekatan

immunochemical direalisasikan sebagai alat tes

immunoenzyme padat-fase (ELISA) dengan deteksi

chemiluminescent, ditingkatkan fluoresensi pada

film silver pulau dan juga deteksi Mb dalam darah

utuh dikembangkan atas dasar uji sandwich yang

menggunakan fosfatase alkali sebagai label antibodi

enzimatik. Namun, metode analisis penentuan Mb

agak rumit, memakan waktu dan memerlukan

modifikasi tambahan antibodi, menggunakan

metode ini mungkin dapat digunaka untuk

menentukan hanya kisaran terbatas konsentrasi Mb.

Biosensor elektrokimia memiliki keunggulan yang lebih

nyata dibandingkan dengan sistem sensor lainnya. Ini

termasuk penentuan cepat, kemungkinan deteksi

langsung dari komponen ditentukan tanpa pengenalan

label tambahan, berbagai konsentrasi terdeteksi.

Penggunaan elektroda berstruktur nano secara signifikan

meningkatkan sensitivitas tes tersebut. Selain

menggunakan pendekatan bioelectrochemical adalah

mungkin untuk miniaturirasi perangkat sensor dengan

perspektif untuk miniaturirasi perangkat sensor dengan

perspektif pengembangan "laboratorium-on-a-chip"

prototipe.

Nano partikel logam yang digunakan untuk modifikasi

elektroda, yang menyediakan lingkungan mikro yang

menguntungkan bagi transfer elektron langsung antara

peningkatan protein aktif redoks dan elektroda.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk

mengembangkan sensor elektrokimia berdasarkan

elektroda berstruktur nano untuk penentuan Mb.

Metode ini didasarkan pada deteksi dari sinyal ini hemo

protein menggunakan elektroda dimodifikasi dengan

emas koloid dan pada penampilan dari arus katalitik

selama interaksi Mb berkurang dengan oksigen.

Spesifisitas analisis ini ditentukan oleh imobilisasi anti-

antibodi Mb.

B. MetodeI. Zat, bahan dan peralatan

Zat-zat yang dipergunakan dalam penelitian ini

senyawa reagen seperti: mioglobin jantung manusia

(sigma-Aldrich, kemurnian 95%) sperma ikan paus otot

skeletal mioglobin (sigma) bovine jantung sitokrom c

(merck) antibodi monoklonal untuk mioglobin jantung

manusia (Biodesign internasional) bromida

didodecyldimethylammonium (DDAB), HAuCl4, dan

NaBH4 yang diperoleh dari Sigma-Aldrich dan

Calbiochem.

Peralatan yang akan dipergunakan diantaranya

menggunakan AUTOLAB potensiostat (Eco Chemie,

belanda) dengan perangkat lunak GPES, tiga cabang

layar-cetak elektroda, Perak Klorida Ag / AgCl,

II. Prosedur penelitian

Solusi emas koloid (nanopartikel emas)

distabilkan oleh DDAB lalu larutan 10mm dari

HAuCl4 (0,5 mL) ditambahkan ke 1 mL dari

0,1 M DDAB dalam kloroform dengan

pengadukan intensif dan kemudian fresly siap

0,4 M NaBH4 solusi (0,2 mL) ditambahkan

dengan pengadukan intensif. setelah 2 ha

merah organik lapisan dipisahkan dari air dan

disimpan dalam lemari es pada +40 C. Emas

solusi koloid distabilkan oleh DDAB dalam

kloroform ditandai oleh UV-Vis

spektrofotometri λmax = 520 nm di 0,1 M

DDAB di kloroform menghitung sesuai sesuai

dengan reaksi stoikiometri.

Pengukuran semua dilakukan pada suhu kamar dalam 0,1

penyangga kalium fosfat M yang mengandung 0,05 M

NaCl pH 7,5. Pengukuran elektrokimia impedancewere

dilakukan dengan menggunakan frekuensi

responseanalyzer solartron 1255 dalam larutan elektrolit

diencerkan (0,01 M KCl). voltamogram siklik (cv) tercatat

menggunakan berbagai scan tarif dari 10 hingga 100 mV

/ s. parameter berikut digunakan mempelajari

gelombang persegi voltametri (SWV, reduksi, kondisi

aerobik) potensi awal 100, potensi akhir -600mV ,

langkah potensi 5 mV, amplitudo 20 mV, frekuensi dari

10 hingga 100 Hz.

parameter yang digunakan untuk voltametri

pulsa diferensial (DPV) adalah sebagai

berikut : impuls amplitudo 25 mV, potensi

akhir -600 mV, langkah potensial 1 mV, impuls

durasi 50 ms. tiga cabang layar-cetak

elektroda dengan bekerja grafit dan elektroda

tambahan dan juga perak / Perak Klorida Ag /

AgCl elektroda referensi yang digunakan

dalam penelitian ini. Diameter elektroda kerja

adalah 2mm. Seluruh potensi yang akan

ditampilkan versusu klorida perak / Perak Ag /

AgCl elektroda referensi.

Pengukuran semua dilakukan pada suhu kamar

dalam 0,1 penyangga kalium fosfat M yang

mengandung 0,05 M NaCl pH 7,5. Pengukuran

elektrokimia impedancewere dilakukan dengan

menggunakan frekuensi responseanalyzer solartron

1255 dalam larutan elektrolit diencerkan (0,01 M

KCl). voltamogram siklik (cv) tercatat menggunakan

berbagai scan tarif dari 10 hingga 100 mV / s.

parameter berikut digunakan mempelajari

gelombang persegi voltametri (SWV, reduksi,

kondisi aerobik) potensi awal 100, potensi akhir -

600mV , langkah potensi 5 mV, amplitudo 20 mV,

frekuensi dari 10 hingga 100 Hz.

parameter yang digunakan untuk voltametri pulsadiferensial (DPV) adalah sebagai berikut : impuls amplitudo25 mV, potensi akhir -600 mV, langkah potensial 1 mV,impuls durasi 50 ms. tiga cabang layar-cetak elektrodadengan bekerja grafit dan elektroda tambahan dan jugaperak / Perak Klorida Ag / AgCl elektroda referensi yangdigunakan dalam penelitian ini. Diameter elektroda kerjaadalah 2mm. Seluruh potensi yang akan ditampilkanversusu klorida perak / Perak Ag / AgCl elektroda referensi.

Elektroda persiapan. Untuk elektroda 2 ml modifikasi emaskoloid distabilkan oleh DDAB di chloform (DDAB / Au)diaplikasikan pada grafit elektroda kerja dan elektrodakemudian dikeringkan selama 30 menit pada suhu ruangandi bawah 2 µl udara. Untuk modifikasi selanjutnya denganmioglobin 2 ml larutan mioglobin (dengan konsentrasi yangdiminta) diaplikasikan pada elektroda kerja pra-dimodifikasidengan DDAB / Au. elektroda kemudian disimpan pada+40C selama 12 jam.

Untuk penurunan respon spesifik elektroda

dimodifikasi dengan antibodi solusi antibodi (70ng/ml,

1 ml) diterapkan pada elektroda kerja pra-dimodifikasi

dengan DDAB / Au. elektroda dikeringkan selama 10

menit dan disimpan pada +40 C selama 12 jam. untuk

penurunan respon spesifik elektroda dimodifikasi

dengan antibodi diobati dengan 2 ml buffer memblokir

(0,1 M kalium dapar fosfat, pH 7,5, mengandung 1%

albumin serum bovine, dan 0,05% tween-21 ).

Elektroda dikeringkan selama 10 menit dan kemudian

diinkubasi dalam udara pada suhu kamar atau 12 jam

pada +40C. Kelebihan antibodi telah dihapus oleh

seorang cuci triple dengan air suling.

Untuk reaksi antara antigen dan antibodi amobil pada

DDAB / Au elektroda elektroda diperlakukan dengan 2

µl larutan dengan konsentrasi mioglobin diminta (0-

1750ng/ml). elektroda kemudian ditempatkan dalam

ruang tertutup dan diinkubasi 30 menit pada 370C

terikat molekul mioglobin. telah dihapus oleh

pencucian tiga dari elektroda dengan 0,1M penyangga

kalium fosfat yang mengandung 0,05 M NaCl, pH 7,5.

C. HasilHasil yang diperoleh dalam penelitian

amperometri biosensor dari mioglobin jantung

menggunakan didodecyldimethylammonium

(DDAB) meliputi perubahan ketinggian

puncak potensial maksimum dari oksidasi dan

reduksi pada voltamogram

D. Kesimpulan Perpindahan elektron secara langsung antara

elektroda yang dimodifikasi dengan

nanopartikel emas dan miglobin telah

dikembangkan pada perubahan kandungan

miglobin. Antibodi monoclonal pada miglobin

jantung manusia tidak bergerak pada

elektroda yang telah ditetapkan dan

dimodifikasi dengan elektroda nanopartikel

emas.

Reaksi dari afinitas biologi diikat oleh mioglobin

dan antibodi anti mioglobin didata menggunakan

pengukuran elektrokimia spektroskopi dari

pertukaran permukaan bahan dengan elektroda.

Parameter analisis dari biosensor menggunakan

gelombang voltametri oleh perubahan signal dari

mioglobin. Biosensor elektrokimia untuk

mendeteksi mioglobin, plasma darah atau serum.

Pengembangan metodenya dapat memakai

format analisa diagnosa awal.