7/18/2019 enzim amilase kuantitatif

http://slidepdf.com/reader/full/enzim-amilase-kuantitatif 1/2

METODOLOGI PEMBUATAN ENZIM AMILASE

A. Alat :

1. Sentrifugasi kee!atan 1".""" r!#

$. Magnetik stirrer

%. Ter#&#eter '. Alat ukur !an(ang gel&#)ang

*. Mi+er ,&rte+

-. ater)at/

0. Pi!et 1 #l * #l 2an 1" #l

3. St&!4at/

5. )&t&l

B. Ba/an :

1. Biakan )akteri Baillus Su)tilis 2an Baillus s! u#ur $' (a#

$. 16 !ati ta!i&ka

%. * gra# NaO7

'. 51 gra# 8aliu# Natriu# Tatrat*. * gra# natriu# sulfat

-. * gra# 2initr& ai2

0. A9ua2es

3. 1 gra# s&lu)le stra/ Merk;

5. *" #g #alt&sa

1". *" #l )uffer 7<L

<. <ara 8er(a

a. Pe#)uatan #e2ia

• Biakan )akteri )aillus su)tilis 2an )aillus s! u#ur $' (a# 2ala# larutan

kal2u nutrien• Dita#)a/kan 16 !ati ta!i&ka

• Setela/ itu 2isentrifugasi 2engan kee!atan 1"""" r!# sela# 1" #enit

2engan su/u '"&<

• Di2a!at ekstrak en=i# kasar 

 ). Pe#)uatan reagen DNS

• Diti#)ang * gra# NaO7

• Dita#)a/kan 51 gra# 8aliu# Natriu# Tartrat

• Dita#)a/kan * gra# Natriu# Sulfat

• Dita#)a/kan * gra# DNS

• Dilarutkan 2ala# a9ua2es /ingga ,&lu#e *"" #l• <a#!uran 2i/&#&genkan 2engan #egneti stirrer 

• Setela/ itu ketika larutan su2a/ (a2i 2isi#!an 2ala# )&t&l gela! 2engan

su/u >ang ren2a/

. Pe#)uatan su)strat

• Meni#)ang 1 gra# s&lu)le stra/ Merk;

• 8e#u2ian 2ilarutkan 2engan a9ua2es /ingga ,&lu#e 1"" #l

• Dia2uk 2an 2i!anaskan /ingga larutan tera#!ur se#!urna 2an terli/at

 (erni/

2. Pe#)uatan larutan stan2ar #alt&sa

• Larutkan *" #g #alt&sa 2ala# *" #l larutan )uffer 7<L

7/18/2019 enzim amilase kuantitatif

http://slidepdf.com/reader/full/enzim-amilase-kuantitatif 2/2

• Enerkan larutan se/ingga 2i!er&le/ st&k stan2ar 2engan k&nsentrasi 1"""

 !!#

• Lakukan !engeneran lagi larutan stan2ar #alt&sa #ulai 2ari " !!#

/ingga -"" !!#

•

Pi!et 1 #l larutan #alt&sa ke#u2ian 2ita#)a/kan % #l DNS• 8e#u2ian 2i inku)asi !a2a 4ater)at/ sela#a 1* #enit 2engan su/u '"O<

• Larutan 2i2inginkan ke#u2ian 2iukur a)s&r)ansin>a !a2a *"" n#

• Dari /asil a)s&r)ansi 2engan k&nsentrasi #alt&sa 2a!at 2igunakan untuk

#engukur ka2ar en=i#

e. Pengukuran akti,asi en=i# a#ilase

1. Pengukuran sa#!el

• Sia!kan ta)ung reaksi

• Pi!et 1 #l su)strat s&lu)le stra/ ke#u2ian 2ita#)a/kan 1 #l ekstrak

en=i# kasar

• setela/ itu 2i ,&rte+• ke#u2ian 2i inku)asi 2ala# 4ater)at/ 2engan su/u '" < sela#a 1* #enit

• 2ita#)a/kan % #l DNS lalu 2i ,&rte+

• 2i!anaskan 2engan air #en2i2i/ !a2a 1"" < sela#a 1" #enit

• 2inginkan lalu 2iukur a)s&r)ansin>a !a2a **" n#

$. !engukuran k&ntr&l

•  !i!et 1 #l su)strat s&lu)le 2ita#)a/kan % #l DNS 2iinku)asi 2ala#

4ater)at/ 2engan su/u '" < sela#a 1* #enit

• 2ita#)a/kan 1 #l ektrak en=i# kasar ke#u2ian 2i ,&rte+

•  !anaskan 2engan air #en2i2i/ !a2a su/u 1"" < sela#a 1* #enit

•  2inginkan lalu 2iukur a)s&r)ansin>a !a2a **" n#

unit?#l @ k&nsentrasi #alt&sa + !?BM + + t

keterangan :

k&nsentrasi #alt&sa : !!#

! : akt&r !engeneran

BM : )erat #&lekul

: ,&lu#e >ang 2igunakan

t : 4aktu inku)asi 1* #enit;