efek paparan profilin toxoplasma gondii terhadap kadar ...repository.ub.ac.id/8040/1/lanisa...

EFEK PAPARAN PROFILIN Toxoplasma gondii TERHADAP KADAR

REACTIVE OXYGEN SPECIES (ROS) PADA TIKUS Rattus Norvegicus

STRAIN WISTAR

(STUDI HUBUNGAN INFEKSI Toxoplasma gondii DENGAN OBESITAS)

TUGAS AKHIR

Untuk Memenuhi Persyaratan

Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

Oleh:

Lanisa Hapsari

NIM 145070107111020

PROGRAM STUDI KEDOKTERAN

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2017

DAFTAR ISI

Halaman

Judul ................................................................................................................ i

Lembar Pengesahan ........................................................................................ iii

Pernyataan Keaslian Tulisan ........................................................................... iv

Kata Pengantar ................................................................................................ v

Abstrak ............................................................................................................. vii

Abstract ............................................................................................................ viii

Daftar Isi ........................................................................................................... ix

Daftar Tabel ...................................................................................................... xii

Daftar Gambar ................................................................................................. xiii

Daftar Lampiran ................................................................................................ xiv

Daftar Singkatan ............................................................................................... xv

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang .................................................................................. 1

1.2 Rumusan Masalah ............................................................................ 4

1.3 Tujuan Penelitian .............................................................................. 4

1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................ 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Obesitas ............................................................................................ 6

2.2 Toxoplasma gondii ........................................................................... 10

2.2.1 Morfologi dan Klasifikasi .................................................... 10

2.2.2 Daur Hidup ......................................................................... 11

2.2.3 Manifestasi Klinis ............................................................... 13

2.2.4 Pemeriksaan ...................................................................... 14

2.2.5 Pengobatan ....................................................................... 15

2.2.6 Hubungan Obesitas dengan Toxoplasma gondii ............... 15

2.3 Hubungan profilin Toxoplasma gondii dengan Obesitas .................. 16

2.4 Reactive Oxygen Species ................................................................ 17

BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep Penelitian ........................................................... 23

3.2 Hipotesis Penelitian ......................................................................... 23

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian ...................................................................... 24

4.2 Subjek Penelitian ............................................................................. 24

4.3 Variabel Penelitian ........................................................................... 25

4.4 Lokasi dan Waktu Penelitian ............................................................ 26

4.5 Bahan dan Alat/Instrumen Penelitian ............................................... 26

4.5.1 Alat dan Bahan Pemeliharaan Tikus ................................. 26

4.5.2 Alat dan Bahan Pengukuran Kadar ROS ......................... 27

4.6 Definisi Operasional Variabel ........................................................... 27

4.7 Prosedur Penelitian .......................................................................... 28

4.7.1 Pemeliharaan Tikus ........................................................... 28

4.7.2 Pembedahan Tikus ............................................................ 29

4.7.3 Pengukuran Kadar ROS .................................................... 29

4.8 Analisis Data ..................................................................................... 30

BAB V HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA

5.1 Hasil Penelitian ................................................................................ 32

5.2 Analisis Data .................................................................................... 35

5.2.1 Uji T Berpasangan Berat Badan ...................................... 37

5.2.2 Uji Normalitas ANOVA Berat Badan ................................ 38

5.2.3 Uji Homogenitas ANOVA Berat Badan ............................ 39

5.2.4 Uji One Way ANOVA Berat Badan.................................... 40

5.2.5 Uji Pengujian Berganda Berat Badan ............................... 41

5.2.6 Uji Normalitas ANOVA Kadar ROS .................................. 41

5.2.7 Uji Homogenitas ANOVA Kadar ROS .. ............................ 42

5.2.8 Uji One Way ANOVA Kadar ROS ...................................... 43

5.2.9 Uji Pengujian Berganda Kadar ROS.. ............................... 44

5.2.10 Uji T Berpasangan Kadar ROS ........................................ 45

BAB VI PEMBAHASAN

6.1 Pembahasan Hasil Penelitian .......................................................... 47

6.2 Implikasi terhadap Bidang Kedokteran ............................................ 50

6.3 Keterbatasan Penelitian ................................................................... 51

BAB VII PENUTUP

7.1 Kesimpulan ...................................................................................... 52

7.2 Saran ............................................................................................... 52

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 53

LAMPIRAN ........................................................................................................ 57

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 2.1. Klasifikasi overweight dan obesitas berdasarkan WHO .................. 6

Tabel 2.2. Klasifikasi overweight dan obesitas untuk orang Indonesia

menurut Depkes RI ............................................................................. 7

Tabel 5.1 Uji Normalitas untuk Uji T Berpasangan ............................................ 37

Tabel 5.2 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 1 Kali Injeksi .............. 37

Tabel 5.3 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 2 Kali Injeksi .............. 38

Tabel 5.4 Uji Normalitas Berat Badan ................................................................ 39

Tabel 5.5 Uji Homogenitas Berat Badan ............. .............................................. 39

Tabel 5.6 Uji ANOVA Berat Badan .......................... .......................................... 40

Tabel 5.7 Uji Normalitas Kelompok 1 Kali Injeksi ............................................... 42

Tabel 5.8 Uji Normalitas Kelompok 2 Kali Injeksi .............................................. 42

Tabel 5.9 Uji Homogenitas Kelompok 1 Kali Injeksi .......................................... 43

Tabel 5.10 Uji Homogenitas Kelompok 2 Kali Injeksi ......................................... 43

Tabel 5.11 Uji ANOVA Kelompok 1 Kali Injeksi ................................................. 44

Tabel 5.12 Uji ANOVA Kelompok 2 Kali Injeksi ................................................. 44

Tabel 5.13 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 15 μg/mL............ 45






DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Siklus Hidup Toxoplasma gondii .................................................. 12

Gambar 2.2 Alur Profilin Menyebabkan Inflamasi ............................................. 17

Gambar 2.3 Jalur Pembentukan ROS ............................................................... 22

Gambar 5.1 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin ........... 33

Gambar 5.2 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin ........... 33

Gambar 5.3 Rerata Kadar ROS pada Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin ............. 34

Gambar 5.4 Rerata Kadar ROS pada Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin .............. 35

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1 Keterangan Layak Etik .................................................................. 57

Lampiran 2 Data Rerata Berat Badan Tikus ..................................................... 58

Lampiran 3 Data Rerata Kadar ROS ................................................................ 58

Lampiran 4 Hasil Analisa Data ......................................................................... 59

Lampiran 5 Dokumentasi Kegiatan ................................................................... 73

DAFTAR SINGKATAN

BMI : Body Mass Index

WHO : World Health Organization

EASO : European Association for the Study of Obesity

TLR-11 : Toll-Like-Receptor 11

IL-12 : Interleukin 12

Sel NK : Sel Natural Killer

IFN-ɣ : Interferon gamma

LPL : Lipoprotein lipase

ROS : Reactive Oxygen Species

MCR-4 : Melanocortin 4

TNFα : Tumor Necrosis Factor Alpha

IL-6 : Interleukin 6

CSF : Cerebrospinal Fluid

IgM : Imunoglobulin M

IgG : Imunoglobulin G

ADP : Adenosin Difosfat

ATP : Adenosin Trifosfat

TgPRF : Toxoplasma gondii Profilin

NADP : Nikotinamida Adenina Dinukleotida

NADPH : Nikotinamida Adenosin Dinukleotida Hidrogen

DNA : Deoxyribo Nucleic Acid

LDL : Low-Density Lipoprotein

SOD : Superoxide Dismutase

CAT : Catalase

GPx : Glutathione Peroxidase

NO : Nitrit Oksida

ELISA : Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

ANOVA : Analisis Varians

EFEK PAPARAN PROFILIN Toxoplasma gondii TERHADAP KADAR

ROS (REACTIVE OXYGEN SPECIES) PADA TIKUS RATTUS

NORVEGICUS STRAIN WISTAR

(STUDI HUBUNGAN INFEKSI Toxoplasma gondii DENGAN OBESITAS)

Lanisa Hapsari, Sudjari, Sri Poeranto, Danik Agustin, Agustin Iskandar,

Dearikha Karina M

ABSTRAK Profilin merupakan protein pada Toxoplasma gondii yang telah terbukti dapat meningatkan ekspresi TLR-11 untuk meningkatkan sekresi IL-12. IL-12 akan mengaktivasi sel NK dan dan sel T. Selanjutnya akan dihasilkan IFN ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel. Proses inflamasi ini akan menimbulkan stress oksidatif, yaitu keadaan dimana terjadi peningkatan oksidan dan penurunan antioksidan. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek paparan profilin Toxoplasma gondii terhadap kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental laboratoris dengan rancangan true experimental-post test control group design. Sampel yang digunakan adalah 64 tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar jantan yang dibagi dalam 4 kelompok besar yaitu 1 kali injeksi dengan diet normal, 1 kali injeksi dengan diet hiperkalori, 2 kali injeksi dengan diet normal dan 2 kali injeksi dengan diet hiperkalori. Injeksi profilin dilakukan secara intraperitoneal dengan 3 dosis yaitu 15 μg/mL, 30 μg/mL, 45 μg/mL. Pada minggu ke 15 kadar ROS diperiksa menggunakan ELISA. Analisis data dengan uji One-Way ANOVA tidak didapatkan perbedaan makna rerata kadar ROS (p1injeksi=0.119; p2injeksi=0.245).Uji post-hoc Tukey membuktikan tidak terdapat perbedaan ROS dari semua kelompok (p>0.005). Selanjutnya dilakukan uji T berpasangan pada kelompok diet normal dan diet hiperkalori, namun hasilnya tidak signifikan pada semua kelompok (0,71 untuk kelompok 1 kali injeksi dengan dosis 15 μg/mL, 0,894 dengan dosis 30 μg/mL dan 0,848 dengan dosis 45 μg/mL. Untuk kelompok dengan 2 kali injeksi, 0,415 dengan dosis 15 μg/mL, 0,313 dengan dosis 30 μg/mL dan 0,125 dengan dosis 45 μg/mL. Kesimpulan dari penelitian ini adalah paparan profilin Toxoplasma gondii tidak memberikan efek terhadap kadar ROS pada tikus rattus Noervegicus Strain Wistar. Kata kunci: profilin; Toxoplasma gondii; hiperkalori; obesitas; inflamasi; ROS.

THE EFFECT OF Toxoplasma gondii’s PROFILIN EXPOSURE ON ROS

(REACTIVE OXYGEN SPECIES) LEVEL IN RATTUS NORVEGICUS

STRAIN WISTAR RATS

(STUDIES OF Toxoplasma gondii’s INFECTION WITH OBESITY)

Lanisa Hapsari, Sudjari, Sri Poeranto, Danik Agustin, Agustin Iskandar,

Dearikha Karina M

ABSTRACT

Profilin is a protein in Toxoplasma gondii that has been shown to alert the expression of TLR-11 to enhance IL-12 secretion. IL-12 will activate NK and T cells. Furthermore, IFN ɣ will be generated which plays a role in activating phagocytic cells and inflammation of cells. This inflammatory process will lead to oxidative stress, a state where there is an increase in oxidants and decreased antioxidants. This study was conducted to determine the effect of Toxoplasma gondii profilin exposure on levels of Reactive Oxygen Species (ROS) in Rattus Norvegicus Strain Wistar rat. This research uses laboratory experimental method with true experimental-post test control group design. The samples were 64 Rattus Norvegicus Strain Wistar male rats were divided into 4 large groups, 1 injection with normal diet, 1 injection with hypercalory diet, 2 injection with normal diet and 2 injections with hyperkalori diet. Profilin injection was done intraperitoneally with 3 doses of 15 μg / mL, 30 μg / mL, 45 μg / mL. At week 15 the ROS level is checked using ELISA. Data analysis with One-Way ANOVA test was not found difference mean on ROS’s mean level (p1injection = 0.119; p2injection= 0.245) .Tukey post-hoc test proved no difference of ROS from all group (p> 0.005). Paired T tests were followed in the normal diet group and hypercalory diet, but the results were not significant in all groups (0.71 for group 1 injection with 15 μg / mL doses, 0.894 with 30 μg / mL and 0.848 doses of 45 μg / For groups with 2 injections, 0.415 with a dose of 15 μg / mL, 0.313 with a dose of 30 μg / mL and 0.125 with a dose of 45 μg / mL.The conclusions of this study were exposure to Toxoplasma gondii profilin did not have an effect on ROS levels in rat Wistar rodus Noervegicus Strain.

Keywords: profilin; Toxoplasma gondii; hypercalory; obesity; inflammation; ROS.

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Obesitas didefinisikan sebagai keadaan abnormal atau kadar lemak

berlebihan yang mengganggu kesehatan seseorang. Body Mass Index

(BMI) adalah sebuah pengukuran sederhana untuk mengklasifikasikan

obesitas. WHO mendefiniskan obesitas sebagai BMI yang lebih atau

sama dengan 30 kg/m2 (World Health Organization, 2016). Pada tahun

2014, WHO melaporkan bahwa jumlah penderita obesitas mencapai 600

juta orang, dua kali lebih besar dari tahun 1980 yang hanya 300 juta

orang. Angka ini terus meningkat dari tahun ke tahun. Dari data yang

dikumpulkan oleh European Association for the Study of Obesity (EASO),

2.8 juta orang tiap tahunnya meninggal karena penyakit yang

berhubungan dengan obesitas. Peringkat pertama sejumlah 44% karena

diabetes diikuti 23% karena penyakit jantung (EASO, 2013).

Di sisi lain, prevalensi penyakit infeksi di negara berkembang masih

tinggi dan disebutkan bahwa terdapat hubungan antara infeksi dengan

obesitas. Selain faktor jumlah diet tinggi lemak yang berlebihan, aktivitas

fisik yang kurang, dan faktor genetik, ternyata beberapa penyakit seperti

hipotiroid, Cushing Syndrome, dan sindrom polikistik ovarium juga

memiliki andil terhadap naiknya angka obesitas (Balentine, 2015).

Penelitian oleh Desruisseaux (2007) juga menyebutkan bahwa ditemukan

pula hubungan antara Chaga’s Disease akibat infeksi Trypanosoma cruzi

yang target sel intraselulernya adalah sel adiposa sehingga terjadi

disfungsi adiposit yang menyebabkan terjadinya obesitas. Bahkan infeksi

virus yakni Adenovirus-36 (Adv36) yang sangat sering didapatkan pada

orang yang menderita flu disertai batuk dan bersin juga dapat membuat

pasien menjadi obesitas (Atkinson, et al., 2015)

Toxoplasma gondii merupakan penyebab kedua kematian di

Amerika Serikat yang dikarenakan foodborne ilness, atau penyakit yang

disebabkan makanan yang terkontaminasi oleh organisme. Setiap

tahunnya, Toxoplasma gondii menginfeksi lebih dari 1.1 juta orang di

Amerika Serikat (Jeffrey, et al., 2014). Orang sehat yang terinfeksi

Toxoplasma gondii biasanya asimptomatis pada fase awalnya, karena

sistem imun menjaga agar parasit tidak sampai menimbulkan gejala

penyakit. Gejala saat penyakit mulai muncul biasanya ringan seperti flu

dan kekauan otot yang akan hilang dalam beberapa minggu atau bulan.

Walau gejala mulai hilang, Toxoplasma gondii masih tetap ada dalam

bentuk inaktif dan bisa aktif saat imun seseorang mulai turun (Centers for

Disease Control and Prevention, 2013). Untuk menginvasi sel inang,

Toxoplasma gondii memiliki zat yang disebut profilin yang mampu

berikatan dengan TLR-11 sehingga menginduksi diekspresikannya IL-12.

IL-12 merupakan sitokin yang sebagian besar dihasilkan oleh sel fagositik

sebagai respon terhadap infeksi bakteri dan parasit intraseluler. IL-12

akan menstimulasi pembentukan sel NK (Natural Killer) dan sel T dari IFN-

ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel fagositik dan sel inflamasi

(Trinchieri, 1995).

Jika inflamasi akibat infeksi Toxoplasma gondii terjadi pada sel

adiposit, maka dapat menyebabkan disfungsi sel. Hal ini dapat

menyebabkan terjadinya obesitas. Selanjutnya pada pasien obesitas akan

terjadi peningkatan produksi ROS (Reactive Oxygen Species) atau radikal

bebas. Terdapat beberapa penyebab seperti peningkatan asam lemak

bebas, oksidasi mitokondria yang berlebihan dan distress retikulum

endoplasma (Sanchez, et al., 2011).

Selanjutnya hasil penelitian dari Iskandar, dkk (2011) menyebutkan

bahwa terdapat perbedaan kadar profilin yang bermakna antara individu

obese dengan individu yang sehat. Pada individu obese terdapat

peningkatan kadar profilin yang memicu peningkatan inflammatory

cytokine seperti IL-6 dan IL-12 yang merupakan petanda awal terjadinya

disfungsi adiposit pada individu obese. Selanjutnya Iskandar, dkk (2012)

juga melaporkan bahwa terdapat perbedaan kadar profilin Toxoplasma

gondii, adiponektin dan omentin yang bermakna antara individu obese

yang disertai sindroma metabolik dengan individu obese tanpa sindroma

metabolik. Hal tersebut mendukung dugaan bahwa infeksi Toxoplasma

gondii menjadi salah satu penyebab obesitas. Akan tetapi patomekanisme

yang jelas masih belum ditemukan secara pasti. Sehingga perlu dilakukan

penelitian untuk mengetahui hubungan dari infeksi Toxoplasma gondii

terhadap kadar ROS pada tikus obese.

1.2 Rumusan Masalah

Bagaimana efek paparan profilin Toxoplasma gondii terhadap

kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada tikus Rattus

Norvegicus Strain Wistar ?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Untuk mengetahui efek paparan profilin Toxoplasma gondii

terhadap kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada tikus

Rattus Norvegicus Strain Wistar.

1.3.2 Tujuan Khusus

1. Untuk mengetahui kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada

tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar normal


tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar yang diberi paparan

profilinToxoplasma gondii


tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar yang diberi paparan profilin

Toxoplasma gondii dan diinduksi diet hiperkalori

4. Untuk menganalisa efek paparan profilin Toxoplasma gondii

terhadap kadar ROS pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademis

Memberi pengetahuan mengenai obesitas yang diinduksi

oleh infeksi Toxoplasma gondii dengan mengukur kadar Reactive

Oxygen Species serta menjadi acuan untuk pengembangan ilmu

kedokteran bagian parasitologi.

1.4.2 Manfaat Praktis

Mengetahui keterkaitan Toxoplasma gondii terhadap

obesitas dengan mengukur kadar Reactive Oxygen Species.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Obesitas

Obesitas merupakan suatu penyakit multifaktorial, yang terjadi

akibat akumulasi jaringan lemak yang dapat mengganggu kesehatan.

Obesitas terjadi jika ukuran dan jumlah sel lemak bertambah. Bila

seseorang bertambah berat badannya, maka ukuran sel lemak akan

bertambah pula dan jumlahnya juga bertambah banyak. Cara menghitung

obesitas adalah menggunakan BMI (Body Mass Index) yaitu membagi

berat badan dalam kilogram dengan tinggi badan dalam meter yang

dikuadratkan (WHO, 2016).

Tabel 2.1. Klasifikasi overweight dan obesitas berdasarkan WHO

Klasifikasi BMI(kg/m2)

Normal 18.50 - 24.99

Overweight ≥ 25.00

Pra-obes 25.00 - 29.99

Obes ≥ 30.00

Obes kelas I 30.00 - 34.99

Obes kelas II 35.00 - 39.99

Obes kelas III ≥ 40.00

Sumber : WHO, 2004

Di Indonesia, menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia,

kriteria yang digunakan untuk overweight atau kelebihan berat badan

tingkat ringan adalah jika BMI 25,1-27 kg/m2, untuk obesitas jika BMI > 27

kg/m2.

Tabel 2.2. Klasifikasi overweight dan obesitas untuk orang Indonesia menurut Depkes RI

Kategori BMI (kg/m2)

Kurus Kekurangan BB tingkat berat < 17,0

Kekurangan BB tingkat ringan 17,0 – 18,4

Normal 18,5 – 25,0

Gemuk Kelebihan BB tingkat ringan (Berat Badan

lebih)

25,1 – 27,0

Kelebihan BB tingkat berat (Obesitas) >27,0

Sumber: Depkes RI 1994 dalamSupariasa, 2001.

BMI hanya digunakan untuk mengukur kegemukan, sebagai

dampak dari perubahan pola hidup, kebiasaan konsumsi makanan cepat

saji yang tinggi kadar lemak dan protein, serta rendah karbohidrat. BMI

tidak dapat membedakan otot dengan lemak dan tidak dapat

menunjukkan distribusi lemak di dalam tubuh yang merupakan faktor

penentu utama risiko gangguan metabolisme yang berkaitan dengan

kelebihan berat badan. Pola penyebaran lemak tubuh tersebut dapat

diestimasikan dengan mengukur lingkar pinggang. Lingkar pinggang

diukur pada titik yang tersempit. Menurut WHO, resiko seseorang

mengalami gangguan kesehatan akan meningkat jika lingkar pinggangnya

lebih dari 88 cm untuk wanita dan 102 cm untuk pria. Namun untuk

hubungan yang lebih kuat antara penyebaran lemak dengan resiko

gangguan kesehatan, maka harus dilakukan pengukuran lemak di perut.

Lokasi yang dipilih adalah perut karena penumpukan lemak di perut lebih

beresiko terhadap kesehatan daripada di tempat lain (Racette, et al.,

2003). Hal ini disebabkan karena abdomen mempunyai komposisi lemak

subkutan maupun viseral yang lebih tinggi sehingga meningkatkan resiko

munculnya hipertensi, penyakit jantung, dan diabetes (Health Status,

2016).

Obesitas merupakan hasil perubahan pada genetik, lingkungan,

pola hidup, aktivitas, psikologi, sosial dan budaya seseorang yang

mengarah pada ketidakseimbangan energi serta terbentuknya akumulasi

lemak yang berlebihan. Obesitas menunjukkan bahwa pola hidup dan

lingkungan (misalnya pola hidup yang pasif namun intak makanan

berlebihan) memegang peran paling penting dalam peningkatan jumlah

masyarakat yang mengalami obese pada 2 dekade terakhir (Racette, et

al, 2003). Pada pola hidup yang pasif, akan terjadi penurunan massa otot

dan peningkatan adipositas sehingga kadar lemak di dalam tubuh orang

yang mengalami obese akan lebih dari normal (Guyton, 2007).

Obesitas biasanya terjadi turun-temurun dalam keluarga. Namun

peran genetik yang pasti untuk menimbulkan obesitas masih sulit

ditemukan karena anggota keluarga umumnya memiliki kebiasaan makan

dan pola aktivitas fisik yang sama. Akan tetapi, bukti terkini menunjukkan

bahwa 20-25% kasus obesitas dapat disebabkan faktor genetik. Gen

dapat berperan dalam obesitas dengan menyebabkan kelainan satu atau

lebih jaras yang mengatur pusat makan dan pengeluaran energi serta

penyimpanan lemak. Penyebab monogenik (gen tunggal) dari obesitas

adalah mutasi MCR-4, yaitu penyebab monogenik tersering untuk

obesitas yang ditemukan sejauh ini, defisiensi leptin kongenital, yang

diakibatkan mutasi gen, yang sangat jarang dijumpai dan mutasi reseptor

leptin, yang juga jarang ditemui. Semua bentuk penyebab monogenik

tersebut hanya terjadi pada sejumlah kecil persentase dari seluruh kasus

obesitas. Banyak variasi gen sepertinya berinterakasi dengan faktor

lingkungan untuk mempengaruhi jumlah dan distribusi lemak (Guyton,

2007).

Faktor lain penyebab obesitas adalah perilaku makan yang kurang

baik. Perilaku makan yang kurang baik disebabkan oleh beberapa sebab,

diantaranya adalah karena faktor lingkungan dan sosial. Hal ini terbukti

dengan meningkatnya prevalensi obesitas di negara maju. Sebab lain

yang menyebabkan perilaku makan kurang baik adalah psikologis, dimana

perilaku makan dijadikan sebagai sarana untuk mengurangi stress atau

biasa disebut acting out. Perilaku makan yang tidak baik pada masa

kanak-kanak sehingga nantinya saat dewasa terjadi kelebihan nutrisi juga

memiliki kontribusi dalam obesitas. Hal ini didasarkan karena kecepatan

pembentukan sel-sel lemak yang baru meningkat pada awal kehidupan.

Makin besar kecepatan penyimpanan lemak, makin besar pula jumlah sel

lemak. Oleh karena itu, jika obesitas terjadi pada anak-anak, maka

kemungkinan besar akan tetap obesitas pada dewasanya nanti (Guyton,

2007).

Dari segi hormonal terdapat leptin, insulin, kortisol dan peptida

usus. Leptin adalah sitokin yang menyerupai polipeptida yang dihasilkan

oleh adiposit yang bekerja melalui aktivasi reseptor hipotalamus. Kadar

leptin yang tinggi akan mengakibatkan penurunan jumlah makanan yang

dikonsumsi. Insulin adalah anabolik hormon. Insulin diketahui

berhubungan langsung dalam penyimpanan dan penggunaan energi pada

sel adiposa. Sedangkan kortisol adalah glukokortikoid yang bekerja dalam

mobilisasi asam lemak yang tersimpan pada trigliserida, hepatic

glukoneogenesis dan proteolisis (Wilborn et al., 2005).

Faktor terakhir penyebab obesitas adalah dampak dari penyakit

lain. Penyakit-penyakit yang dapat menyebabkan obesitas adalah

hypogonadism, Cushing syndrome, hypothyroidism, insulinoma,

craniophryngioma dan gangguan lain pada hipotalamus. Beberapa

hipotesa menyatakan bahwa berat badan seseorang diregulasi baik oleh

endokrin dan komponenen neural. Berdasarkan hipotesa tersebut, maka

jika terdapat sedikit ketidakseimbangan pada regulasi ini, akan

mempunyai efek pada berat badan (Flier et al, 2005).

Obesitas merupakan penyakit kronis multifaktor. Obesitas dapat

didefinisikan sebagai meningkatnya akumulasi lemak di tubuh. Jaringan

lemak bukan hanya trigliserida pada organ tertentu, namun kini penelitian

terbaru menemukan bahwa jaringan lemak putih berperan pada

pembentukan beberapa zat bioaktif, yakni adipokin atau adipositokin.

Adipokin atau adipositokin merupakan hormon yang disekresikan jaringan

lemak yang fungsinya untuk mempertahankan homeostasis. Pada

obesitas, akan menginduksi produksi dari sitokin pro-inflamasi seperti

TNFα dan interleukin-6 (IL-6) sehinga jumlahnya akan meningkat.

Selanjutnya, TNFα dan interleukin-6 (IL-6) akan memproduksi Reactive

Oxygen Species (ROS) sehingga menimbulkan stress oksidatif serta

menimbulkan resistensi terhadap insulin (Sanches, et al., 2011).

2.2 Toxoplasma gondii

Toksoplasmosis adalah suatu penyakit yang disebabkan oleh

Toxoplasma gondii, merupakan penyakit parasit pada manusia dan juga

pada hewan. Hospes definitif dari Toxoplasma gondii adalah golongan

Felidae, sedangkan manusia berperan sebagai hospes perantaranya.

Manusia dapat terkena infeksi parasit ini dengan cara didapat (Aquired

toxoplasmosis) maupun diperoleh semenjak dalam kandungan

(Congenital toxoplasmosis). Gejalanya seringkali asimptomatis sehingga

Toksoplasmosis sangat susah untuk dideteksi secara dini (Chahaya,

2003).

2.2.1 Morfologi dan Klasifikasi

Toxoplasma gondii merupakan protozoa obligat intraseluler,

terdapat dalam tiga bentuk yaitu takizoit (bentuk proliferatif), kista (berisi

bradizoit) dan ookista (berisi sporozoit). Bentuk takizoit menyerupai bulan

sabit dengan ujung yang runcing dan ujung lain agak membulat. Ukuran

panjang 4-8 mikron, lebar 2-4 mikron dan mempunyai selaput sel, satu inti

yang terletak di tengah bulan sabit dan beberapa organel lain seperti

mitokondria dan badan golgi. Bentuk ini terdapat di dalam tubuh hospes

perantara seperti burung dan mamalia termasuk manusia dan kucing

sebagal hospes definitif. Takizoit ditemukan pada infeksi akut dalam

berbagai jaringan tubuh. Takizoit dapat memasuki tiap sel yang berinti.

Kista dibentuk di dalam sel hospes bila takizoit yang membelah telah

membentuk dinding. Ukuran kista berbeda-beda. Kista dalam tubuh

hospes dapat ditemukan seumur hidup terutama di otak, otot jantung, dan

otot bergaris. Di otak bentuk kista lonjong atau bulat, tetapi di dalam otot

bentuk kista mengikuti bentuk sel otot. Kista ini merupakan stadium

istirahat dari T. gondii. Menurut Levine (1990), pada infeksi kronis kista

dapat ditemukan dalam jaringan organ tubuh dan terutama di otak.

Ookista berbentuk lonjong, berukuran 11-14 x 9-11 mikron. Ookista

mempunyai dinding, berisi satu sporoblas yang membelah menjadi dua

sporoblas. Pada perkembangan selanjutnya ke dua sporoblas membentuk

dinding dan menjadi sporokista. Masing-masing sporokista tersebut berisi

4 sporozoit yang berukuran 8 x 2 mikron dan sebuah benda residu

(Chahaya, 2003).

2.2.2 Daur Hidup

Daur hidup T. gondii melalui dua siklus yaitu siklus enteroepitel

yang berada di tubuh hospes definitif dan siklus ekstraintestinal yang

berada di tubuh hospes perantara. Pada siklus ekstraintestinal, ookista

yang keluar bersama tinja kucing belum bersifat infektif. Setelah

mengalami sporulasi, ookista akan berisi sporozoit dan menjadi bentuk

yang infektif. Manusia dan hospes perantara lainnya akan terinfeksi jika

ookista tertelan. Di dalam ileum, dinding ookista akan hancur sehingga

sporozoit keluar. Sporozoit-sporozoit ini menembus mukosa ileum dan

mengikuti aliran darah dan limfa menuju berbagai organ tubuh seperti

otak, mata, hati dan jantung. Sporozoit bebas akan membentuk

pseudokista setelah berada dalam sel organ-organ tersebut. Pseudokista

tersebut berisi endozoit atau yang lebih dikenal sebagai takizoit. Takizoit

akan membelah. Kecepatan membelah takizoit ini akan melambat dan

kemudian terbentuk kista yang mengandung bradizoit. Bradizoit dalam

kista biasanya ditemukan pada infeksi menahun atau infeksi laten

(Yaudza, 2011).

Gambar 2.1. Siklus Hidup Toxoplasma gondii. Ookista yang keluar bersama tinja kucing akan mengalami sporulasi dan berisi sporozoit yang infektif. Jika tertelan manusia, dinding ookista akan hancur sehingga sporozoit bebas. Sporozoit ini akan menembus ileum dan mengikuti aliran darah (CDC, 2016).

Manusia dapat terinfeksi Toxoplasma gondii melalui daging

mentah atau kurang matang yang mengandung kista Toxoplasma gondii.

Atau bahkan dapat pula tertelan ookista setelah kontak langsung dengan

hewan yang membawa ookista. Selain itu pada pasien yang menerima

transplantasi organ tubuh, jika pendonor pernah terinfeksi Toxoplasma

gondii, maka resiko terinfeksi juga tinggi. Kasus yang sering muncul terjadi

karena infeksi kongenital, yaitu melalui plasenta (Chahaya, 2003).

2.2.3 Manifestasi klinis

Toksoplasmosis dapat dibagi menjadi toksoplasmosis akuisita

(dapatan) dan toksoplasmosis kongenital. Keduanya sebagian besar

adalah asimptomatis atau tidak menimbulkan gejala. Pada awalnya

bersifat akut dan jika tidak ditangani dengan baik akan menjadi kronik atau

laten. Gejalanya lebih sering tidak spesifik dan sulit dibedakan dengan

penyakit lain. Toksoplasmosis dapatan biasanya tidak diketahui karena

memang asimptomatis. Jika seorang ibu yang sedang hamil mendapat

infeksi primer, ada kemungkinan bahwa 50% akan melahirkan anak

dengan toksoplasmosis kongenital. Gejala yang dijumpai pada orang

dewasa maupun anak-anak umumnya ringan. Gejala klinis yang paling

sering dijumpai pada toksoplasmosis dapatan adalah limfadenopati dan

rasa lelah, disertai demam dan sakit kepala (Gandahusada, 2003).

Pada infeksi akut, limfadenopati sering dijumpai pada kelenjar

getah bening daerah leher bagian belakang. Gejala tersebut biasanya

disertai demam, mialgia dan malaise. Pada kulit, akan muncul ruam

makulopapuler yang mirip kelainan kulit pada demam titus. Pada jaringan

paru dapat terjadi pneumonia interstisial. Gambaran klinis toksoplasmosis

kongenital dapat bermacam-macam. Ada yang tampak normal pada waktu

lahir dan gejala klinisnya baru timbul setelah beberapa minggu sampai

beberapa tahun. Ada gambaran eritroblastosis, hidrops fetalis dan triad

klasik yang terdiri dari hidrosefalus, korioretinitis dan perkapuran

intrakranial atau tetrad sabin yang disertai kelainan psikomotorik

(Gandahusada, 2003).

Toksoplasmosis kongenital dapat menunjukkan gejala yang sangat

berat dan dapat menyebabkan kematian pada penderitanya karena

parasit telah tersebar luas di berbagai organ penting dan juga pada sistem

saraf penderita. Gejala susunan syaraf pusat sering meninggalkan gejala

sisa, misalnya retardasi mental dan gangguan motorik. Kadang-kadang

hanya ditemukan sikatriks pada retina yang dapat kambuh pada masa

anak-anak, remaja atau dewasa. Korioretinitis karena toksoplasmosis

pada remaja dan dewasa biasanya akibat infeksi kongenital. Akibat

kerusakan pada berbagai organ, maka kelainan yang sering terjadi

bermacam-macam jenisnya. Kelainan pada bayi dan anak-anak akibat

infeksi pada ibu selama kehamilan trimester pertama, dapat berupa

kerusakan yang sangat berat sehingga terjadi abortus atau lahir mati atau

bayi dilahirkan dengan kelainan seperti ensefalomielitis, hidrosefalus,

kalsifikasi serebral dan korioretinitis. Pada anak yang lahir prematur,

gejala klinis lebih berat dari anak yang lahir cukup bulan, dapat disertai

hepatosplenomegali, ikterus, limfadenopati, kelainan susunan syaraf pusat

dan lesi mata (Yaudza, 2011).

2.2.4 Pemeriksaan

Karena gejala dari Toxoplasmosis seringkali asimptomatis dan

sangat umum, maka untuk menegakkan diagnosis langsung harus

dilakukan uji laboratorium.

Spesimen. Berupa darah, sputum, sumsum tulang, CSF dan eksudat

Pemeriksaan mikroskopik. Hapusan yang diwarnai dengan teknik Giemsa

dapat memperlihatkan organisme. Jika tampak kista terutama dari

spesimen otak atau sistem saraf pusat yang lain, menunjukkan infeksi

kronis

Inokulasi. Seringkali digunakan untuk menegakan diagnosa definitif.

Berbagai spesimen diinokulasi secara intraperitoneal ke mencit yang tidak

terinfeksi. Lalu mencit diobservasi selama 6 minggu, kemudian darahnya

diuji untuk memeriksa antibodi spesifik. Diagnosis ditegakkan jika

terdapat kista

Serologi. Untuk memeriksa antibodi IgM dan IgG anti Toxoplasma gondii.

(Jawetz, et al, 2008).

2.2.5 Pengobatan

Untuk infeksi akut cukup diresepkan kombinasi pirimetamin dan

sulfadiazin atau trisulfapirimidin. Dapat pula ditambah obat lain seperti

spiramisin, klindamisin, trimetoprimsulfametoksazol dan berbgai obat

sulfonid lainnya. Untuk pasien yang sedang hamil dapat diberikan

spiramisin (Rovamycin) yang harus diteruskan sampai melahirkan

(Jawetz, et al, 2008).

2.2.6 Hubungan Obesitas dengan Toxoplasma gondii

Pada individu yang mengalami obesitas, ditemukan terjadinya

penurunan status pertahanan imun dibandingkan dengan individu yang

berat badannya normal. Terdapat perbedaan jumlah leukosit dan

komponennya serta aktivitas monosit pada oxidative burst. Pada pasien

obesitas, sel mononuklear akan memicu keluarnya agen proinflamasi

yang mengakibatkan terjadinya proses inflamasi kronik. Hal ini

menyebabkan terjadi penurunan status imun pada individu yang obesitas

sehingga resiko terjadinya infeksi lebih besar, salah satunya dapat terjadi

infeksi dari Toxoplasma gondii (Milner, 2012).

2.3 Hubungan profilin Toxoplasma gondii dan obesitas

Profilin merupakan protein actin-binding kecil yang mempengaruhi

sitoskeleton aktin. Profilin sendiri dapat ditemukan pada seluruh kingdom

eukariot. Profilin berinteraksi dengan beberapa molekul seperti

fosfatidilinositol-4,5-bifosfat (PtdIns(4,5)), protein yang mengandung

prolin, dan protein yang berkaitan dengan aktin. Interaksi ini akan

menghubungkan profilin dengan transduksi sinyal sehingga nantinya akan

terjadi reorganisasi dari sitoskeleton aktin (Gibbon, 2000).

Sitoskeleton aktin berperan penting dalam motilitas sebuah sel dan

bentuk dari sebuah sel (Bitko, et al, 2003). Sedangkan profilin mempunyai

kemampuan untuk mempengaruhi perkembangan dari aktin filamen

dengan menjadikan dirinya sebagai persediaan monomer aktin. Dari

kompleks profilin dan aktin akan dihasilkan aktin yang dapat

mempengaruhi polimerisasi filamen aktin pada berbagai sel (Kwiatkowski,

et al, 1987).

Profilin memicu polimerisasi aktin dengan menukar ADP ke ATP

pada aktin monomer dan mengantarkan ATP-aktin menuju filamen yang

tumbuh. Protozoa apicomplexan seperti Toxoplasma gondii menginvasi

sel host menggunakan aktin yang berperan pada pergerakan sel. Toll-like-

receptor (TLR) 11 merangsang sistem imun innate menggunakan

Toxoplasma gondii profilin (TgPRF). Struktur kristal dari TgPRF

menunjukkan bahwa permukaan parasit mengandung acidic loop, yang

diikuti oleh β-hairpin yang panjang. Penelitian menunjukkan bahwa TLR11

berhubungan dengan sekresi interleukin (IL)-12. Percobaan penambahan

acidic loop dan β-hairpin dari Toxoplasma gondii pada profilin bakteri akan

mengaktifkan signaling dari TLR11 sehingga sekresi IL-12 juga akan

meningkat (Kucera, et al., 2010). IL-12 merupakan sitokin yang sebagian

besar dihasilkan oleh sel fagositik sebagai respon terhadap bakteri dan

parasit intraseluler. IL-12 akan mengaktivasi sel NK dan dan sel T.

Selanjutnya akan dihasilkan IFN ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel

fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014). Selain itu profilin juga

berfungsi untuk menstimulasi gliding motility (untuk migrasi melewati

barier biologis) dan mengakibatkan virulensi di mencit (Plattner, et al.,

2008).

Gambar 2.2 Alur Profilin Menyebabkan Inflamasi. Profilin dari Toxoplasma gondii akan merangsang TLR11 yang akan meningkatkan sekresi IL12. IL12 akan mengaktivasi sel NK dan sel T. Selanjutnya akan dihasilkan IFN ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014).

2.4 Reactive Oxygen Species

ROS merupakan representasi katagori molekul yang luas yang

merupakan turunan dari oksigen radikal dan nonradikal. Turunan oksigen radikal

meliputi ion OH, superoksida, nitric oxide, dan peroxyl, sedangkan turunan dari

oksigen yang non-radikal meliputi ozone, singlet oksigen, lipid peroksida, dan

hydrogen peroksida. Turunan oksigen non-radikal selanjutnya akan mengambil

bagian dalam kaskade reaksi yang menghasilkan radikal bebas. Selain derivate

oksigen, radikal bebas juga dapat berasal dari derivate nitrogen seperti nitric

oxide, peroksi nitrit, dan ion nitroksil yang juga merupakan subklas dari ROS.

Berbagai macam ROS tersebut dapat bersumber dari dalam tubuh (intrinsik) atau

dari luar tubuh (ekstrinsik) (Widayati, 2012).

Radiasi sinar rontgen maupun sinar ultraviolet merupakan sumber

pembentukan ROS yang cukup penting, karena sinar-sinar tersebut dapat

melisiskan air menjadi radikal . Selain itu ion logam seperti Fe2+, Co2+ dan Cu+

juga dapat bereaksi dengan oksigen atau hydrogen peroksida (H2O2) yang

nantinya akan menghasilkan radikal . Nitrit oksida, suatu senyawa yang penting

untuk relaksasi pembuluh darah, selain merupakan senyawa radikal bebas, juga

dapat bereaksi dengan superoksida menghasilkan peroksinitrit, yang nantinya

juga akan membentuk radikal. Sumber ROS yang lain adalah berasal hasil

respiratory burst dari makrofag yang sudah teraktifkan. Aktivasi makrofag ini

dapat menyebabkan peningkatan penggunaan glukosa melalui lintasan pentose

fosfat yang dipakai untuk mereduksi NADP menjadi NADPH, dan peningkatan

penggunaan oksigen yang dipakai untuk mengoksidasi NADPH guna

menghasilkan superoksida dan halogen radikal sebagai agen yang sitotoksik

untuk membunuh mikroorganisme yang telah difagosit (Widayati, 2012).

Oksidasi terhadap koenzim flavin tereduksi di dalam mitokondria dan

rangkaian transport elektron dalam mikrosom berlangsung melalui beberapa

tahapan, radikal flavin semiquanon akan distabilkan oleh protein pengikat yang

membentuk radikal oksigen (superoksida) sebagai hasil sementara atau

sampingan. Meskipun hasil akhirnya bukanlah radikal bebas, namun karena sifat

radikal yang tidak dapat diprediksi, diperkirakan terdapat kebocoran radikal

bebas, sebanyak 3 – 5% dari 30 mol oksigen yang dikonsumsi setiap hari atau

sebanyak 1.5 mol ROS. Jadi pembentukan ROS di dalam mitokondria selain oleh

kebocoran elektron kronis dari rantai pernafasan normal, juga dipicu oleh

respiratory burst intra-mitokondrial, sitoplasma, maupun ROS yang berasal dari

luar. Sedangkan di dalam, mitokondria superoksida dikonversi menjadi hidrogen

peroksida yang dapat menyebar dan kemudian dikonversi menjadi radikal . Oleh

karena itu produksi ROS dalam mitokondria menjadi hal penting dalam berbagai

patogenesis penyakit (Widayati, 2012).

ROS merupakan molekul yang tidak berpasangan sehingga molekulnya

bersifat sangat tidak stabil dan sangat reaktif. ROS hanya dapat bertahan dalam

hitungan millisecond (10-9 – 10-12) sebelum bereaksi dengan molekul lain untuk

menjadi stabil. Diketahui terdapat berbagai macam ROS, namun yang paling

banyak dipelajari karena efeknya yang berbahaya dan merusak adalah

superoksida (. O- ), hydroxyl (. OH), dan perhydroxyl (. O2H). Kerusakan jaringan

akibat serangan ROS dikenal dengan stres oksidatif, sedangkan faktor yang

dapat melindungi jaringan terhadap ROS disebut antioksidan. Berbagai jaringan

yang dapat mengalami kerusakan akibat ROS di antaranya adalah Deoxyribo

Nucleic Acid (DNA), lipid, dan protein. Interaksi ROS dengan basa dari DNA

dapat merubah struktur kimia DNA, dan apabila tidak direparasi akan

menyebabkan mutasi yang akan diturunkan, terutama bila terjadi pada DNA sel

germinal baik di dalam ovarium maupun testis. Sedangkan kerusakan DNA pada

sel somatik dapat mengarah pada inisiasi keganasan (Widayati, 2012).

Reaksi ROS terhadap lipid tidak jenuh membran sel dan plasma

lipoprotein menyebabkan pembentukan lipid peroksida (malondialdehyde) yang

secara kimia dapat memodifikasi protein dan basa asam nukleat. Selain itu ROS

secara kimia juga dapat memodifikasi langsung asam amino dalam protein,

sehingga tidak lagi dikenal sebagai milik sendiri (self) tetapi sebagai benda asing

yang tidak dikenali (nonself) oleh sistem imun. Antibodi yang dihasilkan juga

akan bereaksi silang dengan protein dari jaringan normal, sebagai awal dari

munculnya berbagai penyakit autoimun. Modifikasi kimia dalam protein dan

lemak pada lipoprotein (LDL) menyebabkan LDL tidak lagi dapat dikenali oleh

reseptor LDL liver, akibatnya LDL tidak dapat dibersihkan oleh liver. Sebaliknya,

LDL akan diambil oleh reseptor makrofag, yang kemudian membuat makrofag

mempunyai ukuran lebih besar dan menginfiltrasi lapisan pembuluh darah di

bawah endothelium, terutama bila sudah terjadi kerusakan endothelium

sebelumnya. Infiltrasi LDL tersebut kemudian ditutup oleh akumulasi kolesterol

yang tidak teresterifikasi. Keadaan ini mengarah pada perkembangan plak

aterosklerosis, sehingga pembuluh darah menjadi tersumbat. Selain itu

kerusakan tirosin residu dalam protein akibat ROS juga dapat mengarah pada

pembentukan dihidroxyphenilalanin yang selanjutnya mampu bereaksi secara

nonenzimatik untuk membentuk radikal bebas baru (Widayati, 2012).

Obesitas merupakan penyakit kronis yang multifaktor. Obesitas

didefinisikan sebagai meningkatnya akumulasi lemak tubuh. Jaringan

adiposa tidak hanya sebagai penyimpan trigliserida, tapi juga mempunyai

fungsi sebagai penghasil sebuah bioaktif yaitu adipokin. Adipokin atau

adipositokin merupakan hormon yang disekresikan jaringan lemak yang

fungsinya untuk mempertahankan homeostasis. Pada obesitas, akan

menginduksi produksi dari sitokin pro-inflamasi seperti TNFα dan

interleukin-6 (IL-6) sehinga jumlahnya akan meningkat. Selanjutnya, TNFα

dan interleukin-6 (IL-6) akan memproduksi Reactive Oxygen Species

(ROS) sehingga menimbulkan stress oksidatif serta menimbulkan

resistensi terhadap insulin. Sedangkan adipokin yang lain yaitu leptin

berfungsi sebagai pengatur jumlah makanan yang dikonsumsi seseorang,

sehingga memiliki efek langsung pada berat badan. Leptin mempengaruhi

kerja sistem limbik dengan menstimulasi dopamin, menimbulkan rasa

kenyang (Sanchez, et al., 2011).

Semua adipokin tersebut dapat meningkatkan produksi ROS, prosesnya

disebut oxidative stress. Terdapat beberapa mekanisme mengenai obesitas yang

menimbulkan stres oksidatif. Pertama adalah melalui oksidasi asam lemak di

mitokondria dan peroksisom yang dapat menghasilkan ROS melalui reaksi

oksidasi.

Selain itu konsumsi oksigen yang berlebihan pada penderita obesitas

juga akan membentuk radikal bebas di rantai pernafasan di mitokondria.

Penggunaan oksigen oleh otot selama aktivitas fisik maksimal dapat meningkat

sekitar 100–200 kali dibandingkan saat istirahat (Chevion et al., 2003). Saat

fosforilasi oksidatif di dalam mitokondria, oksigen direduksi oleh sistem transport

elektron mitokondria untuk membentuk adenosin trifosfat (ATP) dan air. Selama

proses fosforilasi oksidatif ini sekitar 2% molekul oksigen dapat berikatan dengan

elektron tunggal yang bocor dari karier elektron pada rantai pernafasan,

sehingga membentuk radikal superoksida (O2 . ). Radikal superoksida yang

terbentuk ini akan membentuk hidrogen peroksida (H2O2) dan hidroksil reaktif

(OH. ) dengan cara berinteraksi dengan logam transisi reaktif seperti tembaga

dan besi (Singh, 1992).

Dengan terjadinya peningkatan jumlah jaringan adiposa, akan terjadi

penurunan aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD),

catalase (CAT), dan glutathione peroxidase (GPx). Terjadinya peningkatan

produksi ROS dan penurunan kadar antioksidan akan memberikan dampak

seperti disfungsi endotel yang ditandai dengan penurunan bioavailabilitas

vasodilator seperti nitrit oksida (NO) dan peningkatan faktor kontraksi dari

endotel yang akhirnya dapat menyebabkan terjadinya aterosklerosis (Sanchez,

et al., 2011).

Gambar 2.3 Jalur Pembentukan ROS. Terdapat beberapa jalur pembentukan ROS; i) Pada pasien obesitas, terjadi High Metabolic Load yaitu ketidakteraturan dari metabolisme karbohidrat dan lipid yang menyebabkan oksidasi mitokondria berlebihan dan dapat berujung pada peningkatan generasi ROS. Selain itu kadar asam lemak bebas yang tinggi juga dapat mempengaruhi fungsi mitokondria yang berpotensi menghasilkan generasi ROS; ii) Inflamasi. Jika terjadi inflamasi kronis, maka sitokin proinflamasi (TNF, IL-6) akan meningkat dan terdapat infiltrasi

makrofag. Sitokin pro-inflamasi bekerja melalui reseptor membran untuk mengaktifkan oksidase

NADPH (NOX4), untuk mempercepat pembentukan ROS mitokondria, dan untuk menginduksi tekanan retikulum endoplasma (ER); iii) ER (Endoplasmic reticulum) distress yang terjadi pada jaringan adiposa pada obesitas. Seperti mitokondria, ER disfungsional bisa menjadi sumber sekaligus konsekuensi peningkatan generasi ROS; iv) Disregulasi endokrin: regulasi endokrin yang terganggu dapat menyebabkan perubahan tingkat hormon yang beredar (pada diabetes tipe 2, peningkatan kadar insulin yang disirkulasikan merupakan respons kompensasi yang umum terhadap resistensi insulin perifer) (Sanchez, et al., 2011)

BAB III

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep Penelitian

Infeksi Toxoplasma gondii

Profilin dari Toxoplasma gondii berikatan dengan TLR-11

Meningkatkan ekspresi adipositokin proinflamasi yaitu IL-12

IL-12 mengaktivasi sel NK menghasilkan IFN-ɣ

Proses fagositosis

Proses inflamasi

Destruksi parasit

Terjadi inflamasi pada berbagai jaringan termasuk jaringan adiposa

Disfungsi adiposa menyebabkan terjadinya obesitas

Asam lemak bebas berlebihan meningkatkan jalur oksidasi

asam lemak

Penurunan aktivitas enzim antioksidan

High Metabolic Load karena metabolisme karbohidrat dan lipid

meningkat

Peningkatan kadar ROS

Mempengaruhi Variabel yang diteliti

Toxoplasma gondii memiliki profilin yang berperan untuk berikatan

dengan TLR-11. Adanya peningkatan ekspresi profilin akan meningkatkan

ekspresi IL-12 sebagai akibat ikatan profilin dengan TLR-11 pada

membran adiposit. IL-12 merupakan sitokin yang sebagian besar

dihasilkan oleh sel fagositik sebagai respon terhadap bakteri dan parasit

intraseluler. Sekresi IL-12 akan mengaktivasi pembentukan sel NK dan

dan sel T. Selanjutnya akan memicu produksi IFN-ɣ yang berperan dalam

mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014). Salah satu

proses inflamasi juga terjadi di jaringan adiposa, sehingga menyebabkan

disfungsi adiposa yang menyebabkan terjadinya obesitas.

Terdapat beberapa mekanisme mengenai obesitas yang

menimbulkan stress oksidatif. Pertama adalah melalui oksidasi asam

lemak di mitokondria dan peroksisom yang dapat menghasilkan ROS

melalui reaksi oksidasi. Oksidasi asam lemak yang terjadi di mitokondria

akan menghasilkan NADH yang selanjutnya juga dapat memproduksi

ROS. Selain itu konsumsi oksigen yang berlebihan pada penderita

obesitas juga akan membentuk radikal bebas di rantai pernafasan di

mitokondria. Selanjutnya adalah dengan meningkatnya inflamasi jaringan

adiposa, aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD),

catalase (CAT), dan glutathione peroxidase (GPx) ditemukan menurun

(Sanchez, et al., 2011).

3.2 Hipotesis Penelitian

Paparan profilin Toxoplasma gondii menyebabkan peningkatan

kadar ROS pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar.

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium

dengan rancangan true eksperimental-post test only control group design

yang bertujuan untuk mengetahui dan membandingkan beberapa

kelompok perlakuan. Penelitian ini menggunakan tikus Rattus Norvegius

Strain Wistar dewasa.

4.2 Subjek Penelitian

Sebagai sampel penelitian digunakan 64 ekor tikus Rattus

Norvegicus Strain Wistar jantan berusia 12-20 minggu dengan berat

badan 50-100 gram yang diadaptasikan berupa diletakkan dalam

kandang berisi sekam dan diberi pakan normal selama dua minggu di

Laboratorium Farmakologi FKUB sebelum diberi perlakuan. Selanjutnya

dilakukan pengukuran dengan kriteria sebagai berikut :

Kriteria inklusi :

a) Tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar sehat

b) Jantan

c) Umur 12-20 minggu

d) Berat badan 50-100 gram

Penelitian ini menggunakan 13 kelompok yaitu :

a) Kontrol

b) 1 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet normal

c) 1 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet normal

d) 1 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet normal

e) 1 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet hiperkalori

f) 1 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet hiperkalori

g) 1 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet hiperkalori

h) 2 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet normal

i) 2 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet normal

j) 2 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet normal

k) 2 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet hiperkalori

l) 2 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet hiperkalori

m) 2 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet hiperkalori

Menurut rumus Federer untuk menentukan jumlah sampel yang

dibutuhkan pada uji eksperimen adalah :

(t-1)(r-1) ≥ 15

(13-1)(r-1) ≥ 15

r-1 ≥ 15/12

r ≥ 2,25

Maka jumlah sampel yang dibutuhkan untuk tiap kelompok perlakuan

adalah minimal 3.

4.3 Variabel Penelitian

Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah pemberian Profilin

Toxoplasma gondii.

Variabel Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah kadar Reactive Oxygen

Species (ROS) pada tikus Rattus Norvgicus Strain Wistar.

4.4 Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Parasitologi Fakultas

Kedokteran Brawijaya pada bulan Maret sampai Agustus 2017.

4.5 Bahan dan Alat/Instrumen Penelitian

4.5.1 Alat dan Bahan Pemeliharaan Tikus

Bahan yang digunakan dalam pemeliharaan tikus adalah sebagai

berikut :

a) Profilin Toxoplasma gondii yang merupakan rekombinan didapat

dari plasmid E.coli

b) Diet standart (pars 30 gram dan tepung terigu 10 gram)

c) Diet hiperkalori (kuning telur bebek 30 gram, minyak babi 180

gram, pars 600 gram, tepung terigu 200 gram)

Alat yang digunakan dalam pemeliharaan tikus adalah sebagai

berikut :

a) Sekam

b) Kandang

c) Spuit 1 cc untuk injeksi profilin

d) Timbangan tikus

e) Timbangan analitik

4.5.2 Alat dan Bahan Pembedahan Tikus

Alat dan bahan yang digunakan saat pembedahan tikus adalah

sebagai berikut :

a) Ketamin 50 mg/ml

b) Spuit 5 cc

c) Vacutainer

d) Sentrifuge

e) Eppendorf

4.5.2 Alat dan Bahan Pengukuran Kadar ROS

Kadar ROS pada tikus dihitung menggunakan ELISA kit dari

Bioassay Technology Laboratory. Alat dan bahan yang digunakan

adalah :

a) Eppendorf

b) Micropipet

c) Yellow tip

d) Sterile water

e) ELISA kit

4.6 Definisi Operasional Variabel

1. Model tikus obesitas diberikan diet hiperkalori yaitu kuning telur bebek 30

gram, minyak babi 180 gram, pars 600 gram, tepung terigu 200 gram

selama 14 minggu (Nascimento, 2006)

2. Profilin Toxoplasma gondii diberikan secara injeksi intraperitoneal

3. Pemeriksaan kadar ROS dengan ELISA kit ROS akan dilaksanakan pada

minggu ke 15

4.7 Prosedur Penelitian

4.7.1 Pemeliharaan Tikus

a) Tikus yang datang diadaptasi selama 2 minggu

b) Pakan tikus disesuaikan dengan kelompoknya. Terdapat

kelompok diet normal dan diet hiperkalori

c) Setiap minggu dilakukan penimbangan berat badan tikus

d) Pada tanggal 30 Maret 2017, dilakukan injeksi profilin pertama

secara intraperitoneal

Tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar jantan diadaptasi 2 minggu

Selanjutnya diinjeksi profilin intraperitoneal dengan dosis 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL.

Selanjutnya diinjeksi profilin intraperitoneal dengan dosis 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL.

Diberi pakan normal peroral selama 14 minggu bersamaan

dengan pemberian

profilin

Kontrol negatif hanya diberi pakan peroral

selama 14

minggu

Berat badan diukur setiap minggu

Pemeriksaan ROS dilakukan pada minggu ke 15

Diberi diet hiperkalori selama 14 minggu bersamaan dengan

pemberian profilin

Diberi pakan normal peroral selama 14 minggu bersamaan

dengan pemberian

profilin

Diberi diet hiperkalori selama 14 minggu bersamaan dengan

pemberian profilin

Minggu ke 10, diinjeksi profilin intraperitoneal kedua dengan dosis

15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL.

e) Pada tanggal 20 Juni 2017 dilakukan injeksi profilin kedua pada

kelompok 2 kali injeksi secara intraperitoneal

4.7.2 Pembedahan Tikus

Pembedahan tikus dilakukan mulai 18 Juli 2017 sampai 26 Juli

2017

a) Dilakukan pembiusan menggunakan ketamin 50 mg sebanyak

0,4 – 0,5 ml

b) Dilakukan pembedahan untuk mengambil sampel plasma darah

c) Plasma darah yang telah diambil dilakukan sentrifugasi dengan

kecepatan 3000 rpm selama 10 menit

d) Sampel yang sudah disentrifugasi diambil serumnya untuk

dipindahkan ke dalam eppendorf

e) Serum yang telah dimasukkan ke dalam eppendorf disimpan di

freezer (-2 sampai -8)

4.7.3 Pengukuran Kadar ROS

Pengukuran kadar ROS dilakukan pada 25 Agustus 2017

a) Menyiapkan larutan standart

b) Menambahkan 50 mikroliter sampel serum dan 10 mikroliter

antibodi anti-ROS ke dalam well

c) Tutup plate dengan penutup dan diinkubasi selama 60 menit

pada suhu 37

d) Sambil menunggu, siapkan Washing Buffer

e) Lakukan pencucian sebanyak 5 kali mengunakan Washing

Buffer. Keringkan setiap melakukan pencucian

f) Tambahkan Solution A dan Solution B. Lalu diinkubasi dalam

keadaan gelap dengan suhu 37 selama 10 menit

g) Tambahkan Stop Solution

h) Setelah didiamkan selama 30 menit, lakukan pembacaan kadar

ROS

4.8 Analisis Data

Analisis data yang paling awal adalah melakukan Uji T

berpasangan untuk mengetahui perbedaan berat badan tikus sebelum

dan sesudah perlakuan.

Selanjutnya, dilakukan uji ANOVA untuk mengetahui perbedaan

berat badan tikus dengan jumlah kelompok lebih dari 2. Sebelum

melakukan uji ANOVA, data tersebut harus memenuhi asumsi, yaitu

homogen dan distribusinya normal. Untuk menguji homogenitas data,

dilakukan uji Levene (Levene Test Homogenity of Variance). Sedangkan

untuk menentukan distribusi data yang normal dilakukan uji Kolmogorov-

Smirnov karena jumlah sampel lebih dari 50. Jika data terbukti homogen

dan distribusi normal, maka bisa dilanjutkan melakukan uji ANOVA. Jika

uji One-Way ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan, maka

dilannjutkan dengan Post Hoc Test (Tukey Test) yang merupakan analisis

lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk melihat adanya perbedaan

yang lebih spesifik.

Begitu pula untuk menentukan kadar ROS, maka dilakukan uji

ANOVA untuk mengetahui perbedaan rata-rata kadar ROS dengan jumlah

kelompok lebih dari 2. Sebelum melakukan uji ANOVA, data tersebut

harus memenuhi asumsi, yaitu homogen dan distribusinya normal. Untuk

menguji homogenitas data, dilakukan uji Levene (Levene Test

Homogenity of Variance). Sedangkan untuk menentukan distribusi data

yang normal dilakukan uji Kolmogorov-Smirnov karena jumlah sampel

lebih dari 50. Jika data terbukti homogen dan distribusi normal, maka bisa

dilanjutkan melakukan uji ANOVA. Jika uji One-Way ANOVA menunjukkan

hasil yang signifikan, maka dilannjutkan dengan Post Hoc Test (Tukey

Test) yang merupakan analisis lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk

melihat adanya perbedaan yang lebih spesifik.

Selanjutnya dilakukan Uji T berpasangan untuk kelompok dengan

diet normal dan diet hiperkalori. Uji ini untuk melihat perbedaan kadar

ROS pada tikus dengan diet normal dan diet hiperkalori.

BAB V

HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA

5.1 Hasil Penelitian

Penelitian efek paparan profilin Toxoplasma gondii terhadap kadar

ROS pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar dilakukan selama 4

bulan, mulai Maret 2017 sampai Juli 2017. Pada minggu pertama setelah

inkubasi yaitu tangal 30 Maret 2017, dilakukan injeksi profilin pertama

dengan 3 dosis, yaitu 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL. Selanjutnya

pada 20 Juni 2017, dilakukan injeksi profilin kedua pada kelompok terpilih

dengan dosis yang sama seperti injeksi pertama. Berikut adalah rerata

berat badan selama 14 minggu :

Gambar 5.1 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin. Pada gambar ditunjukkan bahwa semua tikus mengalami kenaikan berat badan

Gambar 5.2 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin. Pada gambar ditunjukkan bahwa semua tikus mengalami kenaikan berat badan

0

50

100

150

200

250

300

Hari 1 Hari 30 Hari 60 Hari 90 Hari 120

Be

rat

Bad

an (g

ram

)

Waktu

Kenaikan Berat Badan Tikus 1 kali Injeksi

Diet normal, prof 15



Diet hiperkalori, prof 15



0

50

100

150

200

250

300

350

Hari 1 Hari 30 Hari 60 Hari 90 Hari 120

Ber

at

Bad

an (g

ram

)

Waktu

Kenaikan Berat Badan Tikus 2 Kali Injeksi







Dari tabel 5.1 dan 5.2 maka dapat dilihat bahwa berat badan setiap

kelompok perlakuan mengalami peningkatan walaupun tidak sesuai

dengan penambahan dosis maupun jenis diet yang dikonsumsi.

Pada minggu ke 14, mulai tanggal 18 Juli 2017 sampai 26 Juli 2017

dilakukan pembedahan untuk mengambil plasma darah tikus yang

nantinya akan disentrifugasi dan serumnya diambil untuk pemeriksaan

kadar ROS menggunakan ELISA kit. DSetelah dilakukan penghitungan

rata-rata kadar ROS pada kelompok perlakuan, didapatkan hasil sebagai

berikut :

Gambar 5.3 Gambar Rerata Kadar ROS pada Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin. Kadar ROS yang paling tinggi adalah pada kelompok dengan diet normal dan injeksi profilin 45 μg/mL.

502

540.18

559.27

538.97545.03

549.27

Diet normal,prof 15

Diet normal,prof 30

Diet normal,prof 45

Diet hiperkalori,prof 15



Kadar ROS Tikus 1 kali Injeksi

Gambar 5.4 Gambar Rerata Kadar ROS pada Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin. Kadar ROS paling tinggi adalah pada kelompok dengan diet hiperkalori dan injeksi profilin 30 μg/mL.

Dari tabel 5.3 dan 5.4 dapat ditemukan bahwa kadar ROS pada

masing-masing kelompok menampilkan perbedaan. Dan dapat pula

ditemukan bahwa kadar ROS tikus yang diinjeksi profilin Toxoplasma

gondii sebanyak 1 kali lebih tinggi daripada yang 2 kali. Sedangkan kadar

ROS yang paling tinggi ditemukan pada kelompok dengan 1 kali injeksi

profilin dengan dosis 45 μg/mL namun dengan diet normal.

5.2 Analisis Data

Hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan bantuan program

SPSS versi 16. Hasil analisis yang didapatkan berupa output program

yang disertakan pada bagian Lampiran. Adapun penjelasan berdasarkan

output tersebut dijelaskan sebagai berikut.

Pengujian statistik yang digunakan adalah uji One-Way ANOVA.

Berikut ini adalah langkah-langkah yang harus dilakukan dalam

melakukan analisis data.

1. Melakukan Uji T berpasangan untuk mengetahui perbedaan rata-rata

berat badan tikus sebelum dan sesudah perlakuan

420.86 444374.91

477.09 479.82 457.82

Diet normal,prof 15

Diet normal,prof 30

Diet normal,prof 45




Kadar ROS Tikus 2 kali Injeksi

2. Memeriksa syarat untuk uji One-Way ANOVA untuk berat badan tikus,

yaitu uji distribusi data untuk melihat normalitas data dan uji homogenitas

ragam data. Apabila distribusi tidak normal dan tidak homogen, maka uji

One-Way ANOVA tidak dapat dilakukan dan diganti dengan uji

nonparametrik khususnya uji Kruskal-Wallis.

3. Melakukan uji One-Way ANOVA, untuk mengetahui berat badan

kelompok yang dibandingkan memiliki perbedaan yang signifikan

4. Analisa Post Hoc Test mengunakan uji Tukey dilakukan jika uji One-Way

ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan. Post Hoc Test merupakan

analisis lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk melihat adanya

perbedaan yang lebih spesifik antar kelompok perlakuan terhadap berat

badan tikus.

5. Memeriksa syarat untuk uji One-Way ANOVA untuk kadar ROS yaitu uji

distribusi data untuk melihat normalitas data dan uji homogenitas ragam

data. Apabila distribusi tidak normal dan tidak homogen, maka uji One-

Way ANOVA tidak dapat dilakukan dan diganti dengan uji nonparametrik

khususnya uji Kruskal-Wallis.

6. Melakukan uji One-Way ANOVA, untuk mengetahui kadar ROS kelompok

yang dibandingkan memiliki perbedaan yang signifikan

7. Analisa Post Hoc Test mengunakan uji Tukey dilakukan jika uji One-Way

ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan. Post Hoc Test merupakan

analisis lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk melihat adanya

perbedaan yang lebih spesifik antar kelompok perlakuan terhadap kadar

ROS.

8. Melakukan Uji T berpasangan untuk kelompok diet normal dan diet

hiperkalori untuk melihat perbedaan kadar ROS pada tikus yang diberi

diet normal dan diet hiperkalori.

5.2.1 Uji T Berpasangan

Uji T berpasangan dilakukan untuk mengetahui perbedaan rata-rata

berat badan tikus sebelum dan sesudah diinjeksi. Uji ini dilakukan pada

kelompok 1 kali dan 2 kali injeksi. Sebelum melakukan uji T berpasangan,

maka dilakukan uji normalitas pada distribusi data.

Tabel 5.1 Uji Normalitas untuk Uji T Berpasangan

Pada data berat badan, karena melihat perbedaan rata-rata berat

badan pada 13 kelompok, maka yang digunakan adalah data Saphiro-

Wilk karena jumlah data yang kurang dari 50. Pada kolom Sig.

Didapatkan angka 0.306 untuk berat badan sebelum perlakuan dan

0.669 untuk berat badan setelah perlakuan. Karena kedua data nilai

signifikannya p>0.05, maka dapat ditarik kesimpulan bahwa data

perbedaan rerata berat badan adalah normal dan dapat dilakukan uji T

berpasangan.

Tabel 5.2 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 1 Kali Injeksi

Pada kolom Sig. diperoleh nilai signifikan sebesar 0.000 dengan

selisih 36. Karena nilai p<0.005 dan perbedaan berat badan lebih dari

Tests of Normality

.227 12 .089 .922 12 .306

.199 12 .200* .952 12 .669

BB sbl

BB ssd

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Kolmogorov-Smirnova

Shapiro-Wilk

This is a lower bound of the true significance.*.

Lil liefors Significance Correctiona.

Paired Samples Test

-117.4583 16.75089 6.83852 -135.0373 -99.8794 -17.176 5 .000BB sbl - BB ssdPair 1

Mean Std. Deviation

Std. Error

Mean Lower Upper

95% Confidence

Interval of the

Difference

Paired Differences

t df Sig. (2-tailed)

2, maka terdapat perbedaan rerata berat badan yag signifikan sebelum

dan sesudah perlakuan pada kelompok tikus 1 kali injeksi.

Tabel 5.3 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 2 Kali Injeksi

Pada kolom Sig. diperoleh nilai signifikan sebesar 0.001 dengan

selisih 78. Karena nilai p<0.005 dan perbedaan berat badan lebih dari

2, maka terdapat perbedaan rerata berat badan yag signifikan sebelum

dan sesudah perlakuan pada kelompok tikus 2 kali injeksi.

5.2.2 Uji Normalitas ANOVA Berat Badan

Sebelum melakukan pengujian dengan menggunakan uji ANOVA,

maka dilakukan pengujian asumsi kenormalan data. Distribusi normal

merupakan distribusi teoritis dari variabel random yang kontinu. Kurva

yang menggambarkan distribusi normal adalah kurva normal yang

berbentuk simetris. Untuk menguji apakah sampel penelitian

merupakan jenis distribusi normal maka digunakan pengujian

Kolmogorov-Smirnov karena jumlah sampel lebih dari 50. Data

dikatakan memiliki distribusi normal jika nilai signifikansi (p-value) lebih

besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050.

Berdasarkan hasil pengujian distribusi normal data penelitian

menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov, terlihat bahwa data yang

diuji yaitu data hasil ROS menunjukkan nilai signifikansi (p-value)

0,200. Hal tersebut menunjukkan bahwa nilai signifikansi (0,200) lebih

besar dari alpha yang digunakan (0,050) sehingga dapat disimpulkan

Paired Samples Test

-120.4000 37.25630 15.20982 -159.4981 -81.3019 -7.916 5 .001BB sbl - BB ssdPair 1

Mean Std. Deviation

Std. Error

Mean Lower Upper

95% Confidence

Interval of the

Difference

Paired Differences


bahwa data penelitian yang diuji simetris mengikuti distribusi normal,

dengan kata lain asumsi normalitas data terpenuhi.

Tabel 5.4 Uji Normalitas Berat Badan

5.2.3 Uji Homogenitas ANOVA Berat Badan

Tahap selanjutnya sebelum melakukan uji ANOVA adalah data

harus homogen. Untuk menguji homogenitas data, maka dilakukan Uji

Homogenitas ragam data dengan menggunakan uji Levene (Levene

Test Homogenity of Variance). Dasar pengambilan keputusan yang

digunakan adalah dengan menggunakan nilai signifikansi (p-value).

Data dapat dikatakan memiliki homogenitas jika nilai signifikansi (p-

value) lebih besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050

Berdasarkan hasil analisis yang dilakukan didapatkan nilai

signifikansi (p-value) sebesar 0,518 Hal tersebut menunjukkan bahwa

nilai signifikansi (0,518) lebih besar dari alpha yang digunakan (0,050).

Sehingga dapat disimpulkan bahwa ragam data antar perlakuan yang

diamati adalah homogen, dengan kata lain asumsi homogenitas ragam

terpenuhi.

Tests of Normality

.076 65 .200* .967 65 .081Berat BadanStatistic df Sig. Statistic df Sig.

Kolmogorov-Smirnova

Shapiro-Wilk



Tabel 5.5 Uji Homogenitas Berat Badan

Karena data yang didapat memiliki distribusi yang normal dan

homogen, maka syarat untuk melakukan pengujian Uji One-Way

ANOVA telah terpenuhi.

5.2.4 Uji One-Way ANOVA Berat Badan

Jika data sudah memenuhi asumsi distribusi normal dan homogen,

maka dapat dilanjutkan ke uji ANOVA. Uji One-Way ANOVA

mempunyai tujuan untuk mengetahui perbedaan yang signifikan antara

kelompok perlakuan terhadap berat badan. Dasar pengambilan

keputusan berdasarkan hipotesis yang diajukan adalah dengan

menggunakan nilai signifikansi (p-value), di mana p-value yang lebih

kecil dari alpha (0,05) menunjukkan bahwa paling tidak terdapat dua

kelompok yang mempunyai rerata ROS yang berbeda maknanya

Tabel 5.6 Uji ANOVA Berat Badan

Berdasarkan hasil analisis uji One-Way ANOVA tersebut diperoleh

nilai signifikansi (p-value) sebesar 0,507 Hal tersebut menunjukkan

bahwa nilai signifikansi (0,507) lebih besar dari alpha (0,05). Sehingga

Test of Homogeneity of Variances

Berat Badan

.937 12 52 .518

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

ANOVA

Berat Badan

24726.017 12 2060.501 .949 .507

112875.4 52 2170.680

137601.4 64

Between Groups

Within Groups

Total

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan bermakna berat

badan tikus.

5.2.5 Uji Pengujian Berganda (Multiple Comparisons) Berat Badan

Dengan ditemukannya pengaruh signifikan pada perlakuan antar

kelompok terhadap kadar ROS, maka dilakukan pengujian lebih lanjut

untuk mengetahui perbedaan yang lebih spesifik antara perlakuan

kepada kelompok terhadap kadar ROS. Metode post hoc test

dilakukan sebagai uji pembandingan berganda (Multiple Comparison)

menggunakan uji Tukey.

Hasil uji post hoc dapat dilihat pada Lampiran. Tidak terdapat

perbedaan kadar ROS pada semua kelompok karena p>0.005.

5.2.6 Uji Normalitas ANOVA Kadar ROS

Sebelum melakukan pengujian dengan menggunakan uji ANOVA,

maka dilakukan pengujian asumsi kenormalan data. Distribusi normal

merupakan distribusi teoritis dari variabel random yang kontinu. Kurva

yang menggambarkan distribusi normal adalah kurva normal yang

berbentuk simetris. Untuk menguji apakah sampel penelitian

merupakan jenis distribusi normal maka digunakan pengujian

Kolmogorov-Smirnov karena jumlah sampel lebih dari 50. Data

dikatakan memiliki distribusi normal jika nilai signifikansi (p-value) lebih

besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050.

Berdasarkan hasil pengujian distribusi normal data penelitian

menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov, terlihat bahwa data yang

diuji yaitu data hasil ROS menunjukkan nilai signifikansi (p-value)

0,059 untuk kelompok 1 kali injeksi dan 0,755 untuk kelompok 2 kali

injeksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa nilai signifikansi (0,059 dan

0,755) lebih besar dari alpha yang digunakan (0,050) sehingga dapat

disimpulkan bahwa data penelitian yang diuji simetris mengikuti

distribusi normal, dengan kata lain asumsi normalitas data terpenuhi.

Tabel 5.7 Uji Normalitas Kelompok 1 Kali Injeksi

Tabel 5.8 Uji Normalitas Kelompok 2 Kali Injeksi

5.2.7 Uji Homogenitas ANOVA Kadar ROS

Tahap selanjutnya sebelum melakukan uji ANOVA adalah data

harus homogen. Untuk menguji homogenitas data, maka dilakukan Uji

Homogenitas ragam data dengan menggunakan uji Levene (Levene

Test Homogenity of Variance). Dasar pengambilan keputusan yang

digunakan adalah dengan menggunakan nilai signifikansi (p-value).

Tests of Normality

.149 35 .048 .941 35 .059ROS

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Kolmogorov-Smirnova

Shapiro-Wilk


Tests of Normality

.059 34 .200* .979 34 .755ROSStatistic df Sig. Statistic df Sig.

Kolmogorov-Smirnova

Shapiro-Wilk



Data dapat dikatakan memiliki homogenitas jika nilai signifikansi (p-

value) lebih besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050

Berdasarkan hasil analisis yang dilakukan didapatkan nilai

signifikansi (p-value) sebesar 0,137 untuk kelompok 1 kali injeksi dan

0,595 untuk kelompok 2 kali injeksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa

nilai signifikansi (0,137 dan 0,595) lebih besar dari alpha yang

digunakan (0,050). Sehingga dapat disimpulkan bahwa ragam data

antar perlakuan yang diamati adalah homogen, dengan kata lain

asumsi homogenitas ragam terpenuhi.

Tabel 5.9 Uji Homogenitas Kelompok 1 Kali Injeksi

Tabel 5.10 Uji Homogenitas Kelompok 2 Kali Injeksi

Karena data yang didapat memiliki distribusi yang normal dan

homogen, maka syarat untuk melakukan pengujian Uji One-Way

ANOVA telah terpenuhi.

5.2.8 Uji One-Way ANOVA Kadar ROS

Jika data sudah memenuhi asumsi distribusi normal dan homogen,

maka dapat dilanjutkan ke uji ANOVA. Uji One-Way ANOVA

mempunyai tujuan untuk mengetahui perbedaan yang signifikan antara


ROS

1.795 6 28 .137

Levene



ROS

.777 6 27 .595

Levene


kelompok perlakuan terhadap kadar ROS. Dasar pengambilan

keputusan berdasarkan hipotesis yang diajukan adalah dengan

menggunakan nilai signifikansi (p-value), di mana p-value yang lebih

kecil dari alpha (0,05) menunjukkan bahwa paling tidak terdapat dua

kelompok yang mempunyai rerata ROS yang berbeda maknanya

Tabel 5.11 Uji ANOVA Kelompok 1 Kali Injeksi

Tabel 5.12 Uji ANOVA Kelompok 2 Kali Injeksi

Berdasarkan hasil analisis uji One-Way ANOVA tersebut diperoleh

nilai signifikansi (p-value) sebesar 0,119 untuk kelompok 1 kali injeksi

dan 0,245 untuk kelompok 2 kali injeksi. Hal tersebut menunjukkan

bahwa nilai signifikansi (0,119 dan 0,245) lebih besar dari alpha (0,05).

Sehingga dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan makna

rerata kadar ROS.

ANOVA

ROS

110296.2 6 18382.696 1.885 .119

273059.0 28 9752.107

383355.2 34

Between Groups

Within Groups

Total

Sum of


ANOVA

ROS

52944.444 6 8824.074 1.415 .245

168415.0 27 6237.592

221359.4 33

Between Groups

Within Groups

Total

Sum of


5.2.9 Uji Pengujian Berganda (Multiple Comparisons) Kadar ROS

Dengan ditemukannya pengaruh signifikan pada perlakuan antar

kelompok terhadap kadar ROS, maka dilakukan pengujian lebih lanjut

untuk mengetahui perbedaan yang lebih spesifik antara perlakuan

kepada kelompok terhadap kadar ROS. Metode post hoc test

dilakukan sebagai uji pembandingan berganda (Multiple Comparison)

menggunakan uji Tukey.

Hasil uji post hoc dapat dilihat pada Lampiran. Tidak terdapat

perbedaan kadar ROS pada semua kelompok karena p>0.005.

5.2.10 Uji T Berpasangan Kadar ROS

Uji T berpasangan ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kadar

ROS pada tikus yang diberi diet normal dan diet hiperkalori. Uji T

berpasangan ini dilakukan pada masing-masing dosis yaitu 15 μg/mL,

30 μg/mL, dan 45 μg/mL serta pada masing-masing jumlah injeksi,

yaitu 1 kali injeksi dan 2 kali injeksi.

Tabel 5.13 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 15 μg/mL


Independent Samples Test

1.792 .218 -.397 8 .701 -36.9700 93.01753 -251.469 177.52882

-.471 6.781 .653 -36.9700 78.51942 -223.862 149.92201

Equal variances

assumed

Equal variances

not assumed

ROSF Sig.

Levene's Test for

Equality of Variances


Mean

Difference

Std. Error

Difference Lower Upper

95% Confidence

Interval of the

Difference

t-test for Equality of Means


3.968 .082 -.137 8 .894 -4.8487 35.31967 -86.29597 76.59863

-.167 5.937 .873 -4.8487 29.04752 -76.10857 66.41124

Equal variances

assumed

Equal variances

not assumed

ROSF Sig.

Levene's Test for



Mean

Difference

Std. Error


95% Confidence

Interval of the

Difference






Dari data diatas, nilai signifikan p pada masing-masing

kelompok >0,005 yaitu 0,71 untuk kelompok 1 kali injeksi dengan

dosis 15 μg/mL, 0,894 dengan dosis 30 μg/mL dan 0,848 dengan

dosis 45 μg/mL. Sedangkan untuk kelompok dengan 2 kali injeksi,

0,415 dengan dosis 15 μg/mL, 0,313 dengan dosis 30 μg/mL dan

0,125 dengan dosis 45 μg/mL. Sehingga dari uji T berpasangan ini


.212 .657 .198 8 .848 10.0001 50.55574 -106.582 126.58183

.190 5.708 .856 10.0001 52.61340 -120.355 140.35543

Equal variances

assumed

Equal variances

not assumed

ROSF Sig.

Levene's Test for



Mean

Difference

Std. Error


95% Confidence

Interval of the

Difference



.221 .653 -.867 7 .415 -56.2270 64.88060 -209.645 97.19119

-.870 6.669 .414 -56.2270 64.60193 -210.535 98.08055

Equal variances

assumed

Equal variances

not assumed

ROSF Sig.

Levene's Test for



Mean

Difference

Std. Error


95% Confidence

Interval of the

Difference



.477 .510 -1.077 8 .313 -35.8178 33.24832 -112.489 40.85297

-1.077 7.797 .314 -35.8178 33.24832 -112.837 41.20149

Equal variances

assumed

Equal variances

not assumed

ROSF Sig.

Levene's Test for



Mean

Difference

Std. Error


95% Confidence

Interval of the

Difference



.013 .912 -1.712 8 .125 -82.9090 48.43240 -194.594 28.77633

-1.712 7.929 .126 -82.9090 48.43240 -194.769 28.95065

Equal variances

assumed

Equal variances

not assumed

ROSF Sig.

Levene's Test for



Mean

Difference

Std. Error


95% Confidence

Interval of the

Difference


menunjukkan hasi yang tidak signifikan, yaitu tidak terdapat

perbedaan antara kelompok dengan diet normal dan diet hiperkalori.

BAB VI

PEMBAHASAN

6.1 Pembahasan Hasil Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek paparan profilin

Toxoplasma gondii terhadap kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada

tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar. Terdapat 2 kelompok perlakuan

utama, yaitu kelompok yang diinjeksi 1 kali dan yang diinjeksi 2 kali.

Injeksi profilin dilakukan intraperitoneal sesuai dosis yang sudah

ditentukan yaitu 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL. Pada minggu ke 15

setelah injeksi, dilakukan pembedahan untuk pengambilan plasma tikus

yang nantinya akan disentrifugasi dan serumnya digunakan untuk

penghitungan kadar ROS. Kadar ROS dihitung dengan metode ELISA.

Profilin Toxoplasma gondii yang digunakan merupakan ekstrak dari

takizoid Toxoplasma gondii dengan strain tertentu yang RNA profilinnya

dipecah dan diligasi ke dalam vector pET30a(+) serta diubah menjadi

Eschericia coli DH5a yang akan diambil plasmidnya dan diperbanyak

(Yuan, et al., 2015). Proses tersebut dilakukan di Amerika dan hasil

profilin rekombinannya diimpor ke Indonesia.Cara ekstraksi yang bersifat

molekuler ini dipakai karena reaktif terhadap antibodi telah dibuktikan

pada hewan coba kelinci dan gen yang dikode spesifik gen profilin

Toxoplasma gondii sehingga dapat menunjang hipotesis lebih kuat.

Toxoplasma gondii memiliki profilin yang berperan untuk berikatan

dengan TLR-11 untuk meningkatkan ekspresi dari IL-12. IL-12 merupakan

sitokin yang sebagian besar dihasilkan oleh sel fagositik sebagai respon

terhadap bakteri dan parasit intraseluler. IL-12 akan mengaktivasi sel NK

dan dan sel T. Selanjutnya akan terbentuk IFN ɣ yang berperan dalam

mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014). Salah satu

proses inflamasi juga terjadi di jaringan adiposa, sehingga menyebabkan

disfungsi adiposa yang menyebabkan terjadinya obesitas.

Terdapat beberapa mekanisme mengenai obesitas yang

menimbulkan stress oksidatif. Pertama adalah melalui oksidasi asam

lemak di mitokondria dan peroksisom yang dapat menghasilkan ROS

melalui reaksi oksidasi. Oksidasi asam lemak yang terjadi di mitokondria

akan menghasilkan NADH yang selanjutnya juga dapat memproduksi

ROS. Selain itu konsumsi oksigen yang berlebihan pada penderita

obesitas juga akan membentuk radikal bebas di rantai pernafasan di

mitokondria. Selanjutnya adalah dengan meningkatnya jaringan adiposa,

aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD), catalase

(CAT), dan glutathione peroxidase (GPx) ditemukan menurun (Sanchez,

et al., 2011) sedangkan kadar ROS akan meningkat.

Dari data hasil pengukuran ROS pada tabel 5.2 dan tabel 5.3, kadar

ROS ditemukan paling tinggi justru pada kelompok dengan 1 kali injeksi.

Pada kelompok dengan 2 kali injeksi baik diet normal maupun diet

hiperkalori, kadar ROS justru lebih rendah. Hasil penelitian ini berlawanan

dengan hipotesa penelitian. Hal ini bertentangan dengan landasan teori

yang menyatakan bahwa kadar ROS akan meningkat jika dosis profilinnya

juga meningkat.

Pertama, penelitian ini ingin membandingkan kadar ROS pada 2

kelompok perlakuan, yakni yang hanya 1 kali injeksi profilin dan 2 kali

injeksi profilin. Pada kelompok 1 kali injeksi, kadar ROS naik karena

terdapat stress oksidatif yang diakibatkan proses inflamasi oleh sel NK

(Natural Killer) dan sel T dari IFN-gamma. Stress oksidatif merupakan

akibat dari ketidakseimbangan antara kadar oksidan dengan anti oksidan

(Agarwal et al., 2005). Karena tubuh mempunyai sistem homeostasis yang

selalu berusaha membuat keadaan seimbang, maka saat kadar ROS naik,

tubuh akan mengeluarkan enzim antioksidan sebagai bentuk pertahanan

sekaligus penjaga agar tetap seimbang (Poljsak, 2013). Enzim antioksidan

sendiri adalah senyawa yang mampu menurunkan aktivitas stress

oksidatif dalam tubuh dengan memberikan elektron kepada senyawa yang

merupakan oksidan (Winarsi, 2007). Beberapa contoh dari enzim

antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), dan

katalase. Maka saat injeksi ke dua kadar ROS lebih rendah karena enzim-

enzim antioksidan sudah dikeluarkan saat injeksi pertama dan mulai

mengeliminasi ROS yang telah diproduksi pada injeksi pertama.

Namun pada uji ANOVA menunjukkan hasil yang tidak signifikan,

yaitu tidak terdapat perbedaan makna rerata kadar ROS antar kelompok 1

kali injeksi dan 2 kali injeksi. Hal ini dikarenakan kemungkinan adanya

pengaruh dari variabel lain selain frekuensi dan dosis injeksi, yaitu diet

yang dikonsumsi.

Maka selanjutnya dilakukan uji T berpasangan untuk tikus dengan

diet normal dan diet hiperkalori untuk mengetahui perbedaan kadar ROS

yang disebabkan oleh perbedaan diet. Namun nilai p semua kelompok

yang >0,005 menunjukkan hasil yang tidak signifikan, yaitu tidak terdapat

perbedaan kadar ROS pada tikus dengan diet normal dan diet hiperkalori.

Sehingga dari uji statistik yang sudah dilakukan, dapat ditarik

kesimpulan bahwa tidak terjadi perubahan kadar ROS yang bermakna

pada semua kelompok tikus coba. Selanjutnya bahwa frekuensi injeksi,

dosis profilin, dan diet yang diberikan juga tidak mempengaruhi kadar

ROS pada tikus secara signifikan.

Hal ini kemungkinan disebabkan karena pengukuran kadar ROS

hanya dilakukan pada minggu ke 15, yaitu sekitar hari ke 105. Padahal

untuk mengukur kadar ROS yang signifikan, lebih baik ditentukan fase

yang sedang terjadi terlebih dahulu melalui PCR. Untuk fase

toksoplasmosis akut, terjadi sekitar hari ke 5 sampai 7 setelah infeksi.

Sedangkan fase kronis toksoplasmosis, terjadi sekitar hari ke 45 setelah

infeksi. Pada fase akut, didapatkan peningkatan kadar GSH dan GPx

sehingga menimbulkan penurunan ROS. Selanjutnya pada fase kronis,

kadar GSH dan GPx akan menurun sehingga didapatkan peningkatan

kadar ROS. Pada penelitian ini, kadar ROS yang diukur hanya 1 kali yaitu

pada hari ke 105, sehingga sangat memungkinan sudah terjadi

peningkatan dan penurunan yang berulang kali pada kadar ROS sehingga

menyebabkan hasil yang tidak signifkan (Bahrami, et al., 2016).

Penyebab lain yang menimbulkan hasil tidak signifikan adalah

metode pengukuran ROS yang kurang sesuai. Radikal bebas memiliki

waktu paruh yang sangat pendek, sehingga susah diperiksa di

laboratorium (Poljsak, 2013). Sedangkan sampel serum dari penelitian ini

disimpan hingga hampir 1 bulan. Sehingga sangat memungkinkan terjadi

kesalahan dalam hasil ROS yang dikarenakan waktu penyimpanan yang

terlalu lama.

6.2 Implikasi terhadap Bidang Kedokteran

Penelitian ini diharapkan dapat menambah wawasan tentang

hubungan infeksi profilin Toxoplasma gondii terhadap kadar ROS sebagai

proses terjadinya inflamasi di dalam tubuh. Peningkatan kadar ROS pada

infeksi Toxoplasma gondii dapat menginduksi proses stress oksidatif

sehingga terbentuk ROS, namun dalam penelitian ini belum ditemukan

hubungan antara dosis profilin dengan kadar ROS

6.3 Keterbatasan Penelitian

Kelompok kontrol yang dilakukan penelitian ini adalah tikus yang

hanya diberi pakan normal. Seharusnya dibuat juga kelompok tikus kontrol

yang pakannya adalah hiperkalori, sehingga bisa mengetahui hubungan

dari diet hiperkalori dengan kadar ROS secara lebih pasti.

BAB VII

PENUTUP

7.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil analisa dan pembahasan yang telah dilakukan

pada bab sebelumnya, maka dapat ditarik kesimpulan bahwa paparan

profilin Toxoplasma gondii tidak memberikan efek terhadap kadar ROS

pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar.

7.2 Saran

Saran-saran yang dapat diberikan untuk penelitian selanjutnya

adalah :

1. Ditambahkan kelompok kontrol positif, yaitu tikus yang hanya diberi diet

hiperkalori. Sehingga jika terdapat kelompok ini, dapat mengukur

perubahan kadar ROS secara lebih pasti menggunakan uji ANOVA.

2. Dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai dosis profilin yang dapat

menyebabkan peningkatan kadar ROS. Karena dalam penelitian ini, dosis

profilin yang diujikan memberikan hasil yang tidak memiliki hubungan

terhadap kadar ROS.

3. Seharusnya ditentukan fase yang sedang terjadi melalui PCR, yaitu akut

toksoplasmosis atau kronis toxoplasmosis karena setiap fasenya memiliki

mekanisme masing-masing dalam pembentukan maupun eliminasi dari

kadar ROS sebagai salah satu hasil dari stress oksidatif

4. Proses pengukuran kadar ROS pada serum harus dilakukan sesegera

mungkin untuk mencegah perubahan kadar ROS karena waktu paruh

ROS sangat pendek.

DAFTAR PUSTAKA

1. Anonymous. 2013. European Association for Study Obesity. Obesity facts

and figures (Online), (http://easo.org/education-portal/obesity-facts-

figures/, diakses 2 Oktober 2016).

2. Anonymous. 2013. Centers for Disease Control and Prevention.

Parasites-Toxoplasmosis (Toxoplasma infection), (Online).

(https://www.cdc.gov/parasites/toxoplasmosis/, diakses 2 Oktober 2016).

3. Anonymous. 2016. Health Status. The Hidden Dangers of Your Excess

Abdominal Fat (Online), (www.healthstatus.com, diakses 20 Oktober

2017).

4. Anonymous. 2016. WHO. Obesity and overweight (Online),

(http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs311/en/, diakses 2 Oktober

2016).

5. Atkinson R.L., Dhurandhar N.V., Allison D.B., Bowen R.L., Israel B.A.,

Albu J.B., Augustus A.S. Human adenovirus-36 is associated with

increased body weight and paradoxical reduction of serum

lipids. Interntional Journal of Obesity. 2005;29:281–286.

6. Bahrami Somayeh, Ali Shahriari, Mehdi Tavalla, Somayeh Azadmanesh,

Hossein Hamidinejat. Blood Levels of Oxidant/Antioxidant Parameters in

Rats Infected with Toxoplasma gondii. Oxidative Medicine and Cellular

Longevity. 2016.

7. Balentine. 2015. Medicine Net. Obesity (Online),

http://www.staff.science.uu.nl/~ooste108/ExpC/website7/v3/obesitypage3.

html, diakes 2 Oktober 2016)

8. Bitko Vira, Anja Oldenburg, Nicolle E. Garmon, Sailen Barik. Profilin is

required for viral morphogenesis, synctium formation, and cell-specific

stress fiber induction by respiratory synctial virus. BMC Mirobiology.

2003;3:9.

9. Brooks Geo F., Janet S. Butel, Stephen A. Morse. 2004. Jawetz, Melnick

& Adelberg: Mikrobiologi Kedokteran. Huriawati Hartanto, et al.

(penerjemah), 2008, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal.699-

700.

http://easo.org/education-portal/obesity-facts-figures/

http://easo.org/education-portal/obesity-facts-figures/

https://www.cdc.gov/parasites/toxoplasmosis/

http://www.healthstatus.com/

http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs311/en/

http://www.staff.science.uu.nl/~ooste108/ExpC/website7/v3/obesitypage3.html

http://www.staff.science.uu.nl/~ooste108/ExpC/website7/v3/obesitypage3.html

10. Chahaya Indra. Epidimiologi “Toxoplasma gondii”. Jurnal Fakultas

kesehatan Mayarakat Universitas Sumatera Utara, 2003, 1-2.

11. Chevion, S., Moran, D.S., & Heled, Y., 2003, Serum antioxidant stress

and cell injury after severe physicaal exercise. Proceedings of The United

State of America. 100 (9) : 5119-5123.

12. Desruisseaux, S. M., Nagajyothi, Maria, E. T., Herbert, B. T., and Phillip,

E. S. Adipocyte, Adipose Tissue, and Infectious Disease. Infection and

Immunity. 2007;75 No. 3: 1066-1078.

13. Furukawa S., Fujita T., Shimabukuro M., Iwaki M., Yamada Y., Nakajima

Y, et al. Increased oxidative stress in obesity and its impact on metabolic

syndrome. The Journal of Clinical Investigation. 2004;114 (12):1752-61.

14. Gandahusada, S., Ilahude, H.H., dan Pribadi, W., 2003. Parasitologi

Kedokteran. Edisi ke-3. Jakarta: FKUI.

15. Gibbon B. C., Staiger C. J. Profilin. Actin: a Dynamic Framework for

Multiple Plant Cell Functions. 2000;45–65.

16. Guyton, A.C., dan Hall, J.E., 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi

11. Jakarta: EGC, 917-918.

17. Huang De, Chenchen Li, Huafeng Zhang. Hypoxia and cancer cell

metabolism. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2014;46(3).

18. Iskandar Agustin, Muhammad Rasjad Indra, Satuman. 2011. Profilin

sebagai biomarker disfungsi adiposit (Studi hubungan disfungsi adiposit

dengan infeksi Toxoplasma gondii pada individu obese). (Abstract).

19. Iskandar Agustin, Muhammad Rasjad Indra, Satuman, Novi Khila Firani,

Titin Andri Wihastuti. The levels of Toxoplasma gondii profilin and

adiponectin in obese patients complicated with or without metabolic

syndrome as compared to non-obese patients. Asian Pacific Journal of

Tropical Disease. 2016; 6(4): 265-268.

20. Jones Jeffrey L, Monica E. Parise, Anthony E. Fiore. Neglected Parasitic

Infections in the United States : Toxoplasmosis. The American Journal of

Tropical Medicine and Hygien. 2014;90(5):794-799.

21. Kucera K., Koblansky AA., Saunders LP., Frederick KB., De La Cruz EM.,

Ghosh S., et al. Structure-based analysis of Toxoplasma gondii profilin: a

parasite-specific motif is required for recognition by Toll-like receptor 11.

Journal of Molecular Biology. 2010;5;403(4):616-29

22. Milner JJ, Beck MA. Micronutrients, immunology and inflammation The

impact of obesity on the immune response to infection. The Proceedings

of the Nutrition Society. 2012;71(2):298-306

23. Nascimento, A., & Costa, A. (2006). Overweight induced by high-fat diet

delays rat cutaneous wound healing. British Journal of Nutrition, 96(6),

1069-1077

24. Plattner, F., Yarovinsky, F., Romero S., Didry D., Carlier M.F., Sher A.,

Soldatifavre D. Toxoplasma Profilin is essential for host cells invasion and

TLR-11-dependent induction of an Interleukin-12 Response. Cell Host

Microbe. 2008;3 (2): 77-87

25. Poljsak, B., Šuput, D. and Milisav, I. Achieving the balance between ROS

and antioxidants: When to use the synthetic antioxidants. Oxidative

Medicine and Cellular Longevity. 2013:1--11, 956792

26. Racette SB., Deusinger SS., Deusinger RH. Obesity: overview of

prevalence, etiology, and treatment. Journal of the American Physical

Therapy Association. 2003;83(3):276-88

27. Reeves Gloria M., Sara Mazaheri, Soren Snitker, Patricia Langenberg,

Ina Giegling, Annette M. Hartmann, et al. A Positive Association between

T. Gondii Seropositivity and Obesity. Frontiers in Public Health. 2013;

1:73.

28. Sanchez Alba Fernandez, Eduardo Madriqal-Santillan, Mirandeli Bautista,

Jaime Essquivel Soto, Angel Morales Gonzalez, Cesar Esquivel Chirino,

Irene Durante Montiel, et al. Inflammation, Oxidative Stress, and Obesity.

International Journal of Molecular Sciences. 2011;12(5):3117-3132.

29. Sudjari, M. Rasjad Indra, Hendra Susanto, Lulik Inggarwati. 2010. Profilin

menginduksi ekspresi TLR-11, IL-6, dan TNF- sebagai kandidat prediktor

disfungi adiposit akibat infeksi Toxoplasma gondii (Abstract). Jurnal

Kedokteran Brawijaya, 26(2);91-95.

30. Sugondo, S., 2007. Obesitas. Dalam : Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam

Jilid III Edisi IV. Jakarta : Pusat Penerbitan IPD FKUI, 1919-1924.

31. Trinchieri G. Interleukin-12: a proinflammatory cytokine with

immunoregulatory functions that bridge innate resistance and antigen-

specific adaptive immunity. Annual Review of Immunology. 1995;13:251-

76.

32. Weaver JU. Classical endocrine diseases causing obesity. Frontiers of

Hormone Research. 2008,36:212-28

33. Widayati E. Oksidasi biologi, radikal bebas, dan antioksidan. Jurnal

Fakultas Kedokteran Universitas Sultan Agung, 2012.

34. Wilborn Colin, Jacqueline Beckham, Bill Campbell, Travis Harvey, Melyn

Galbreath, Paul La Bounty. Obesity: Prevalence, Theories, Medical

Consequences, Management, and Research Directions. Journal of the

International Society of Sports Nutritions. 2005; 2(2): 4–31.

35. Witke W., Sutherland J.D., Sharpe A., Arai M., Kwiatkowski D.J. Profilin I

is essential for cell survival and cell division in early mouse

development. Proceeding of the National Academy of Sciences of The

United States of America. 2001;98:3832–3836.

36. Yarovinsky Felix. Innate immunity to Toxoplasma gondii infection. Nature

Reviews of Immunology. 2014;14:109-121.

37. Yaudza N. Toxoplasma gondii. Digital Library Universitas Sumatera

Utara. 2011.

efek paparan profilin toxoplasma gondii terhadap kadar ...repository.ub.ac.id/8040/1/lanisa...

Documents