i
EFEKTIVITAS KOMBINASI
ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI Andrographis
paniculata (Burm.f.) Nees DAN VITAMIN E DALAM
UPAYA PENCEGAHAN
KEJADIAN ATEROSKLEROSIS PADA
TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR
SKRIPSI
I MADE SANJAYA SAPANCA
1208505071
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
ii
Lembar Pengesahan
EFEKTIVITAS KOMBINASI
ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI Andrographis
paniculata (Burm.f.) Nees DAN VITAMIN E DALAM
UPAYA PENCEGAHAN
KEJADIAN ATEROSKLEROSIS PADA
TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR
SKRIPSI
Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm.) di
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana
OLEH
I MADE SANJAYA SAPANCA
NIM. 1208505071
Menyetujui:
Pembimbing I Pembimbing II
Ni Kadek Warditiani, S.Farm., M.Sc., Apt Luh Putu Febryana Larasanty, S.Farm, M.Sc., Apt.
NIP. 198310302008122001 NIP. 198402222008012008
Mengesahkan:
Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam
Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt
NIP. 196804201994021001
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas
berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Efektivitas Kombinasi Isolat Andrografolid dari Andrographis paniculata
(Burm.f.) Nees dan Vitamin E dalam Upaya Pencegahan Kejadian
Aterosklerosis pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1. Ni Kadek Warditiani, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, dukungan,
semangat, bimbingan, dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti
pendidikan di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan
skripsi ini.
2. Luh Putu Febryana Larasanty, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen
pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,
semangat, bimbingan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.
3. Bapak Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4. Bapak Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku
Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana.
iv
5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi ini.
6. Orang tua yang sangat saya cintai dan hormati, I Wayan Darmika Sapanca,
S.Pd. dan Ni Putu Widyiasih yang telah mengasuh dan membesarkan
penulis, membimbing dan memberi motivasi dengan penuh kasih sayang
dalam penyusunan skripsi ini.
7. Saudara saya yang tercinta Putu Agus Kurniawan Sapanca, serta keluarga
besar di Rumah Tabanan yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012 (Dioscury
Hygeia), khususnya Tim seperjuangan penulis: Widi, Rika, Dipa, Putri
Nejor, dan Kak Feb, serta para laboran Kak Anggi, Kak Pasek, Kak Nova
dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan memberikan semangat dalam
penyusunan skripsi ini.
9. Teman seperjuangan pada saat praktikum yaitu, Milka, Yudi, Ayu
Suryani, Kak Tata, Agas, Ulan, dan Inggrid.
10. Teman seperjuangan yang selalu menemani saya saat suka dan duka di
Pondok Pekak Ole: Dipa, Krisnawan, Dewa, Lanang, Widiangga, Made,
dan Pasek.
11. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011, khususnya Kak Gung
Ta, Kak Adit, Kak Putri Paramitha dan Kak Jeffry yang memberikan
semangat dan dukungan dalam pembuatan skripsi ini.
v
12. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan
skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
Bukit Jimbaran, Juni 2016
Penulis
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii
KATA PENGANTAR ..................................................................................... iii
DAFTAR ISI .................................................................................................... vi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ....................................................... viii
DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiii
ABSTRAK ....................................................................................................... xiv
ABSTRACT ..................................................................................................... xv
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................ 1
1.1. Latar Belakang ................................................................................. 1
1.2. Rumusan Masalah ............................................................................ 4
1.3. Tujuan Penelitian ............................................................................. 4
1.4. Manfaat Penelitian ........................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 5
2.1. Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees) ... 5
2.1.1. Klasifikasi Tanaman .............................................................. 5
2.1.2. Morfologi Tanaman ............................................................... 6
2.1.3. Kandungan Kimia .................................................................. 6
2.1.4. Kegunaan dan Bioaktivitas .................................................... 6
2.2. Andrografolid .................................................................................. 7
2.3. Aktivitas Farmakologi Andrografolid ............................................. 9
2.4. Ekstraksi dan Isolasi Metabolit Sekunder dari Bahan Alam ........... 10
2.5. Vitamin E ......................................................................................... 11
2.6. Antioksidan ...................................................................................... 12
2.7. Kolesterol ......................................................................................... 13
BAB III METODE ........................................................................................... 14
vii
3.1. Rancangan Penelitian....................................................................... 14
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................... 15
3.3. Subjek Penelitian ............................................................................. 15
3.4. Bahan Penelitian .............................................................................. 16
3.5. Alat Penelitian ................................................................................. 16
3.6. Prosedur Penelitian .......................................................................... 16
3.6.1. Determinasi Tanaman ............................................................ 16
3.6.2. Pembuatan Ekstrak Sambiloto dan Isolasi Andrografolid ..... 17
3.6.3. Uji Kemurnian Isolat Andrografolid. .................................... 17
3.6.4. Pengukuran Kadar Andrografolid dalam Isolat ..................... 18
3.6.5. Penyiapan dan Aklimatisasi Hewan Uji ................................ 18
3.6.6. Perlakuan Terhadap Hewan Uji ............................................. 18
3.6.7. Pengukuran Kadar Kolesterol Total ...................................... 20
3.7. Analisis Data .................................................................................... 20
3.8. Skema Rancangan Penelitian ........................................................... 21
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 22
4.1. Determinasi Tanaman ...................................................................... 22
4.2. Ekstraksi .......................................................................................... 22
4.3. Isolasi Andrografolid ....................................................................... 24
4.4. Kemurnian Isolat Andrografolid...................................................... 25
4.5. Kadar Andrografolid dalam Isolat ................................................... 25
4.6. Induksi Hiperkolesterol pada Hewan Uji ........................................ 29
4.7. Efektivitas Kombinasi Isolat Andrografolid dari Andrographis
paniculata (Burm. f.) Nees dan Vitamin E dalam Perubahan
Kadar Kolesterol Total .................................................................... 30
BAB V PENUTUP ........................................................................................... 35
5.1. Kesimpulan ...................................................................................... 35
5.2. Saran ................................................................................................ 35
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 36
LAMPIRAN ..................................................................................................... 42
viii
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Arteri koroner : Pembuluh pemasok darah beroksigen ke jantung
Arteri serebral : Pembuluh pemasok darah beroksigen ke otak
BB : Berat Badan
CMC Na : Carboxy Methyl Cellulose Natrium
Diet aterogenik : Makanan yang menginduksi aterosklerosis berupa lemak
babi : kuning telur bebek : pakan standar (15:5:80) setiap
hari dengan penambahan kalsium 0,1% setiap hari dan
Vitamin D3 20000 IU seminggu sekali
Ekstrak terpurifikasi : Ekstrak yang sudah mengalami proses purifikasi untuk
menghilangkan komponen yang dianggap sebagai
pengganggu seperti lemak, klorofil dan lain-lain sehingga
didapatkan komponen bahan alam yang lebih murni dan
bebas dari komponen kimia lain yang tidak dibutuhkan
Fatty Streak : Garis lemak yang merupakan lesi awal dari Aterosklerosis
Fibrosis : Pembentukan struktur seperti skar yang halus yang
menyebabkan jaringan mengeras dan mengurangi aliran
cairan melalui jaringan-jaringan
GPx : Glutathione Peroxidase
HDL : High Density Lipoprotein, yaitu lipoprotein yang
mengandung kolesterol sekitar 20-30%
HMG-CoA reductase : Hydroxymethylglutaryl-CoenzymeA reductase
ix
IDL : Intermediate Density Lipoprotein
In vitro : Percobaan dalam biakan dengan medium buatan, tidak
dalam sel atau jaringan hidup
In vivo : Eksperimen di dalam tubuh organisme
Isolat : Hasil dari proses isolasi
IU : International Unit, yaitu satuan khusus untuk vitamin
LCAT : Lecithin Cholesterol Acyltransferase
LDL : Low Density Lipoprotein, yaitu lipoprotein yang
mengandung kolesterol paling banyak yaitu 60-70% dan
10% trigliserida
MDA : Malondialdehid, produk akhir dari peroksidasi lipid yang
bersifat radikal dan juga merusak makromolekul lain
disekitarnya
p.o : Per oral, yaitu diberikan secara oral
Proliferasi : Pertumbuhan pesat menghasilkan jaringan baru
PUFAs : Polyunsaturated Faty Acid’s
RSD : Standar Deviasi Relatif
Sel busa : Bentukan makrofag berisi LDL yang teroksidasi
SOD : Superoksida Dismutase
Stroke : Penyakit yang terjadi akibat penyumbatan pada pembuluh
darah otak atau pecahnya pembuluh darah di otak
Ulserasi : Plak lemak yang mengandung kapur
UV : Ultra Violet
x
VCAM-1 : Vascular Cell Adhesion Molecules-1
VLDL : Very Low Density Lipoprotein
WHO : World Health Organization
xi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 4.1. Hasil maserasi serbuk kering herba sambiloto ................................... 23
Tabel 4.2. Hasil pengamatan KLT-Spektrodensitometri seri standar ................. 27
Tabel 4.3. Hasil Perhitungan Kadar Andrografolid dalam Isolat ....................... 28
xii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1. Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees ................................. 5
Gambar 2.2. Struktur Kimia Andrografolid .................................................... 8
Gambar 2.3. Spektrum KLT-Spektrofotodensitometri dari kristal
andrografolid pada panjang gelombang 235 ............................... 9
Gambar 3.1. Persamaan untuk penetapan kadar kolesterol total ..................... 20
Gambar 3.2. Skema Rancangan Penelitian ...................................................... 21
Gambar 4.1. Spektrum standar andrografolid dan isolat pada panjang gelombang
200 nm sampai 400 nm ............................................................... 26
Gambar 4.2. Kurva kalibrasi seri standar andrografolid .................................. 27
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Hasil Evaluasi Kelayakan Etik Hewan Uji ..................................... 43
Lampiran 2. Hasil Determinasi Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata
(Burm. f.) Nees) ............................................................................. 44
Lampiran 3. Data Hasil Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi Herba Sambiloto ..... 45
Lampiran 4. Perhitungan Rendemen Ekstrak dan Isolat ..................................... 46
Lampiran 5. Hasil Perhitungan Kadar Andrografolid dalam Isolat .................... 48
Lampiran 6. Output Kadar Kolesterol Total untuk Uji Shapiro-Wilk dan Uji
Levene untuk Uji Distribusi Normal dan Homogenitas ................. 51
xiv
ABSTRAK
Andrografolid merupakan komponen bioaktif utama tanaman sambiloto
(Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees) dan mampu mencegah aterosklerosis
melalui mekanismenya menghambat terbentuknya LDL teroksidasi. Vitamin E
merupakan antioksidan yang mencegah aterosklerosis dengan menghambat
oksidasi LDL pada lesi aterosklerosis. Dengan mempertimbangkan aktivitas yang
saling mendukung dari andrografolid dan vitamin E, maka kemungkinan
pemberian terapi kombinasi semakin baik apabila kedua senyawa bekerja secara
sinergis. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efektivitas kombinasi isolat
andrografolid dan vitamin E dalam penurunan kadar kolesterol total pada tikus
putih (Rattus norvegicus, L.) jantan galur wistar yang diinduksi diet aterogenik.
Penelitian ini meliputi beberapa tahapan yaitu: ekstraksi, isolasi
andrografolid, uji kemurnian dan penetapan kadar andrografolid, serta pengujian
efektivitas kombinasi isolat andrografolid dan vitamin E dengan melihat kadar
kolesterol dalam darah tikus. Pengujian dilakukan dengan mengelompokan hewan
uji menjadi 5 kelompok perlakuan antara lain: kontrol normal, kontrol negatif
(CMC Na 0,1%), perlakuan 1 (Vitamin E 10 IU/kg BB), perlakuan 2
(Andrografolid 18 mg/kg BB) dan perlakuan 3 (Kombinasi Andrografolid 9
mg/kg BB dan Vitamin E 5 IU/kg BB). Semua kelompok hewan uji kecuali
kontrol normal diberi perlakuan dan diet aterogenik selama 60 hari. Data yang
diperoleh dianalisis dengan statistik metode ANOVA satu arah dengan taraf
kepercayaan 95%.
Pemberian tunggal isolat andrografolid, vitamin E dan kombinasi isolat
andrografolid 9 mg/kg BB dan vitamin E 5 IU/kg BB sama efektif dalam
menurunkan kadar koleseterol total pada tikus yang diinduksi diet aterogenik.
Kata kunci : andrografolid, vitamin E, kadar kolesterol total
xv
ABSTRACT
Andrographolide is a main bioactive component of bitter plant
(Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) and capable to prevent atherosclerosis
by inhibiting the formation of oxidized LDL. Vitamin E is an antioxidant to
prevent atherosclerosis by inhibiting oxidation of LDL in atherosclerotic lesions.
Taking into account the mutual activity of andrographolide and vitamin E, then
the possibility of combination therapy is getting better if the two compounds work
synergistically. The purpose of this study to determine the effectiveness of the
combination of andrographolide isolates and vitamin E in reducing total
cholesterol in the male rat (Rattus norvegicus, L.) wistar strain induced
atherogenic diet.
This study includes several stages: extraction, isolation andrographolide,
purity test and assay andrographolide, as well as testing the effectiveness of the
combination of andrographolide isolates and vitamin E to prevent atherosclerosis.
Testing is done by grouping the animals into 5 groups : normal control, negative
control (CMC Na 0,1%), treatment 1 (Vitamin E 10 IU/kg), treatment 2
(andrographolide 18 mg/kg) and treatment 3 (combination of andrographolide 9
mg/kg and Vitamin E 5 IU/kg). All groups except normal control was treated by
atherogenic diet for 60 days. The data were analyzed with statistical methods one-
way ANOVA with 95% confidence level.
The results showed isolates andrographolide, vitamin E and combination
of both equal potention in lowering total cholesterol in rats induced atherogenic
diet.
Keywords : andrographolide, vitamin E, levels of total cholesterol