Download - Pengantar Praktikum Protein
![Page 1: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/1.jpg)
PENGANTAR PRAKTIKUMTEKNIK PEMISAHAN PROTEIN
AndrianiDept. Biokimia dan Biologi Molekuler
FK UNTAN
![Page 2: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/2.jpg)
PROTEIN
- Molekul organik terbanyak dalam sel- Struktur fungsional- Merupakan heteropolimer asam amino- Terikat dengan ikatan peptida
![Page 3: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/3.jpg)
• Sifat protein dapat membentuk koloid • Pengaruh mantel air • Mantel air dihilangkan → protein mengendap • Penghilang mantel air : Garam konsentrasi tinggiEtanol absolut
![Page 4: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/4.jpg)
• Pemberian pereaksi2 tertentu seperti alkaloid dan logam berat juga dapat mengendapkan protein
• Pada kondisi pI protein akan larut• Pemisahan protein juga dapat menggunakan
muatan listrik (elektroforesis) atau juga dengan teknik kromatografi (pemisahan berdasarkan muatan, berat molekul, afinitas)
![Page 5: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/5.jpg)
I. PENGENDAPAN PROTEIN DENGAN LARUTAN GARAM KONSENTRASI TINGGI (SALTING OUT)
• TUJUAN : mengetahui bahwa protein dapat diendapkan dengan garam konsentrasi tinggi
• DASAR TEORI : garam konsentrasi tinggi menyebabkan protein mengendap karena ditariknya mantel air. Dalam serum darah globulin akan mengendap pada garam konsentrasi setengah jenuh sedangkan albumin akan mengendap pada garam konsentrasi jenuh
![Page 6: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/6.jpg)
CARA KERJA • Kepada 25mL serum di dalam gelas kimia ditambahkan kristal
amonium sulfat, sedikit demi sedikit sampai 50% jenuh dengan amonium sulfat. Globulin akan mengendap pada konsentrasi amonium sulfat 50% jenuh. Pisahkan presipitat globulin dengan menyaring dengan kertas saring. Ambil sedikit presipitat globulin, larutkan di dalam NaCl encer dan lakukan uji biuret. Catat hasilnya.
• Kepada supernatan atau filtrat, tambahkan lagi kristal amonium sulfat sehingga menjadi 100% jenuh. Pisahkan presipitat albumin dengan memusing atau menyaring. Ambil sedikit presipitat albumin, larutkan dalam NaCl encer dan lakukan uji biuret. Catat hasilnya.
• Lakukan uji biuret terhadap filtrat amonium sulfat 100%.
![Page 7: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/7.jpg)
Uji Biuret
• Masukkan 2 mL larutan protein ke dalam tabung reaksi
• Tambahkan 2 mL larutan NaOH 10%, kocok• Tambahkan larutan CuSO4 0,1% 2-3 tetes,
kocok• Uji positif bila tampak warna merah
lembayung
![Page 8: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/8.jpg)
TABEL HASILNO TABUNG UJI BIURET (WARNA)
1 SERUM
2 PRESIPITAT 50%
3 FILTRAT 50%
4 PRESIPITAT 100%
5 FILTRAT 100%
![Page 9: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/9.jpg)
II. PEMISAHAN PROTEIN DENGAN ETANOL ABSOLUT
• TUJUAN : protein yang terlarut dapat diendapkan dengan menambahkan etanol absolut
• DASAR TEORI : etanol absolut bersifat higroskopis, dapat menarik mantel air yang menyelubungi protein, sehingga protein mengendap
![Page 10: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/10.jpg)
TABUNG 1 2
Serum 2 mL -
Larutan albumin telur - 2 mL
Etanol absolut 2 mL 2 mL
Endapan : ada/tidak ada
Pisahka endapan dengan menyaringUji Biuret terhadap -Filtrat- Endapan
![Page 11: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/11.jpg)
III. PENGENDAPAN PROTEIN PADA TITIK ISOELEKTRIK (demo)
• TUJUAN : mengetahui bahwa kelarutan protein sangat dipengaruhi oleh pH lingkungan
• DASAR TEORI : pada pH tertentu, muatan positif suatu protein tepat sama dengan muatan negatif sehingga muatan keseluruhan menjadi nol → pI
![Page 12: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/12.jpg)
TABUNG 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Na Asetat 0,1 M (mL)
1 1 2 3 5 6 8 9 15
Asam Asetat 0,1 M (mL)
15 9 8 6 5 3 2 1 1
pH 3,0 3,8 4,1 4,4 4,7 5,0 5,3 5,6 6,5
Larutan kasein (tetes)
3 3 3 3 3 3 3 3 3
kekeruhan
![Page 13: Pengantar Praktikum Protein](https://reader036.vdokumen.com/reader036/viewer/2022082502/549110d8b4795927058b5390/html5/thumbnails/13.jpg)
SELAMAT BEKERJA