Kemampuan perlindungan dari antibodi terhadap virus canine distemper pada anjing kota dengan menggunakan uji plak reduksi netralisasi

Ringkasan dari penelitian ini adalah sebagai berikut

Sampel darah dari 50 anjing dikumpulkan pada tiga klinik hewan di Ibadan dan Abuja, Nigeria dan serum dari masing-masing sampel dievaluasi secara serologis antibodinya terhadap virus canine distemper dengan uji plak reduksi netralisasi yang sangat sensitif. Tiga belas anjing diperoleh titer sebesar 0-100, tujuh diantaranya diperoleh titer sebesar 100-1000 sedangkan 30 sampel diperoleh titer sebesar 1000-6000. Titer pada anjing yang divaksinasi diperoleh hasil yang lebih tinggi daripada anjing yang tidak divaksinasi. Meluasnya penggunaan tes plak reduksi netralisasi untuk evaluasi respon antibodi terhadap virus canine distemper mungkin sangat penting dalam Standar internasional serum positif virus canine distemper yang akan membantu untuk meningkatkan pengujian pra-dan pasca-vaksinasi anjing di seluruh dunia.

Uji Plak Reduksi Netralisasi

Distemper pada anjing disebabkan oleh virus canine distemper dari genus morbillivirus. Merupakan penyakit virus pada anjing yang sangat penting ditandai dengan morbiditas dan mortalitas yang tinggi pada anjing yang tidak divaksinasi diseluruh dunia. Virus ini sangat menular, terjadi demam yang bisa akut atau subakut, penyakit ini menyerang anjing dan karnivora yang lainnya yang sudah diketahui sejak 1760

Vaksinasi masal merupakan metode yang paling efektif untuk mengontrol virus ini. Kebanyakan vaksin dibuat di onderstepoort yang mana strain virus diisolasi dari afrika selatan. Namun strain yang berbeda dari strain onderstepoort juga telah diisolasi. Di nigeria vaksin distemper dijualbelikan di pasaran dan dikombinasikan dengan vaksin hepatitis, leptospirosis, parvovirus dan paraindluenza.

Direkomendasikan bahwa anak anjing diberikan serangkaian vaksinasi untuk merangsang kekebalan aktiv seperti halnya kekebalan maternal. Kemudian vaksinasi ini harus diikuti dengan vaksinasi ulang tahunan untuk mempertahankan tingkat imunitas. Namun vaksinasi ulang ini masih diperdebatkan penggunaannya. Untuk menghemat biaya, dapat dilakukan dengan mengukur titer antibody serum sehingga dapat diketahui apakah perlu dilakukan vaksinasi ulangan apakan tidak.

Ketersediaan dan penggunaan dari vaksin tampaknya telah mengendalikan penyakit distemper ini di berbagai Negara. Dalam survey rutin hewan di Nigeria dilaporkan bahwa prevalensi distemper telah menurun. beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa uji plak reduksi netralisasi (PRN) lebih sensitif, spesifik dan reproduksibel untuk kuantisas dari respon antibodi pada banyak infeksi virus, termasuk anjing distemper. Oleh karena itu penelitian ini dirancang untuk menentukan prevalensi antibody netralisasi terhadap distemper pada anjing dalam sebuah populasi dalam kaitannya untuk mengevaluasi program vaksinasi distemper di Nigeria dan menentukan risiko infeksi.

Materi dan metode yang digunakan oleh peneliti adalah sebagai berikut. Pengambilan sampel darah diambil dari 50 anjing di tiga klinik hewan, yaitu klinik hewan umum di Ibadan dan dua klinik hewan swasta di Ibadan dan Abuja yang merupakan pusat kota besar di Nigeria. Pengambilan darah anjing menggunakan standar venipuncture dan serum yang diperoleh disimpan pada suhu -20 ° C sampai dianalisis. sejarah vaksinasi, diperoleh dari pemilik anjing dan diverifikasi dari klinik catatan.

Stok Virus canine distemper strain Onderstepoort diperoleh dari laboratorium Dr C.P. Muller dari divisi Imunologi, Laboratoire National de Sante, Luksemburg. Virus ditumbuhkan pada tingkal low multiplicity of infection (0.001) pada monolayer sel Vero. Supernatant dari kultur diambil saat puncak sitopatik efek teramati kemudian disentrifuge pada 1200 g selama 5 menit pada suhu 4° C dan disaring melalui jarum suntik 0,2 μm syringe untuk menghilangkan debris sel. Titer virus infektif ditentukan dengan uji plak dan virus disimpan pada -70° C sampai digunakan.

Teknik dari Uji Plak Reduksi Netralisasi secara singkatnya sebagai berikut, serum spesimen diinaktivasi dengan panas pada suhu 56° C selama 30 menit dan diencerkan secara bertahap mulai pukul 01:04 di Eagle’s minimum essential medium (EMEM) dalam plate berisi 96 cukungan (12 ml per cekungan).

Sebuah inokulum standar dari virus distemper ditambahkan ke setiap cekungan [12 ml mengandung 50-70 PFU] dan diinkubasi pada suhu 37° C di 5% CO2 selama 180 menit. Campuran virus-serum kemudian ditambahkan ke duplikat monolayer sel vero ketika terdapat sekitar 90% konfluens pada 24 cekungan (100 ml per plate) dan diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2 selama 60 menit. inokulum kemudian dipindahkan dan monolayer ditutupi dengan selulosa 2% karboksimetil dalam 2x EMEM (1 ml per cekungan). Plate kemudian diinkubasi selama 4 hari pada suhu 3 ° C pada incubator 5% CO2. Kemudian monolayer diwarnai dengan red dan plak dapat dihitung pada hari ke 5. Nilai tes tersebut ditentukan menggunakan rumus Karber dan titer serum yang diperlukan untuk mengurangi jumlah PFU sebesar 90% dapat ditentukan.

Hasil dari penelitian yakni Dua puluh tiga dari 50 anjing yang diuji diverifikasi pernah divaksinasi sementara 27 dari mereka tidak divaksinasi. Dari 23 anjing yang divaksinasi, hanya empat (17,4%) memiliki titer antibodi PRN kurang dari 1:100, tiga diantaranya (13,0%) memiliki titer kurang dari 1:1000, dan 16 anjing (69,6%) memiliki titer lebih dari 1:1000. Dari 27 anjing tanpa vaksinasi catatan, sembilan (33,3%) memiliki PRN titer kurang dari 1:100, empat anjing (14,8%) memiliki titer kurang dari 1:1 000, sementara 14 (51,9%) memiliki titer lebih dari 1:1000.

Hasil pengujian

NO NOMER SAMPEL UMUR JENIS KELAMIN BREED TITER1 N188 3 M Alsation 1 573.9

2 N182 4 F Alsation 3.0

3 N205 4 M Alsation 73.3

4 N247 4 M Alsation 0.0

5 N185 5 F Alsation 5 066.0

6 N230 5 M Cros 2 339.0

7 CD009 6 M Alsation 27.3

8 CD007 9 F Alsation 5 559.7

9 CD008 9 M Alsation 4 377.3

10 N238 10 F Alsation + labrador

5 559.7

11 CD002 11 F Alsation 5 066.0

12 1016/573 12 M Alsation 2 344.5

13 N263 12 F Alsation 910.8

14 CD010 12 M Alsation 1 723.2

15 527 15 M Alsation 4 740.5

16 229 15 F Alsation 4 150.8

17 CD012 15 F Alsation 774.7

18 OLD313 21 F Alsation 5 202.4

19 L/024 30 F Alsation 1 637.9

20 704 32 F Alsation 5 066.0

21 OLD051 34 F Alsation 1 374.8

22 CD004 36 F Alsation 724.9

23 CD001 36 M Alsation 3 492.4