biuret UjiTes biuret adalah tes kimia yang digunakan untuk mendeteksi adanya ikatan peptida. Dengan adanya peptida, tembaga (II) ion membentuk kompleks koordinasi berwarna ungu dalam larutan alkali. [1] Beberapa varian pada tes telah dikembangkan, seperti tes BCA dan uji Lowry yang dimodifikasi. [2]Reaksi biuret dapat digunakan untuk menilai konsentrasi protein karena ikatan peptida terjadi dengan frekuensi yang sama per asam amino dalam peptida. Intensitas warna, dan karenanya penyerapan pada 540 nm, berbanding lurus dengan konsentrasi protein, menurut hukum Beer-Lambert.Meskipun namanya, reagen tidak sebenarnya berisi Biuret ((H2N-CO-) 2NH). Tes ini dinamakan demikian karena juga memberikan reaksi positif terhadap ikatan peptida-seperti dalam molekul biuret.prosedurSampel air diperlakukan dengan volume yang sama dari 1% dasar yang kuat (natrium atau kalium hidroksida paling sering) diikuti oleh beberapa tetes air tembaga (II) sulfat. Jika larutan berubah ungu, protein terdapat. 5-160 mg / mL dapat ditentukan. Sebuah peptida dari panjang rantai minimal 3 asam amino yang diperlukan untuk, pergeseran warna terukur signifikan dengan reagen ini. [3]biuret reagenThe Biuret reagen terbuat dari natrium hidroksida (NaOH) dan tembaga terhidrasi (II) sulfat, bersama dengan kalium natrium tartrat. [4] Kalium natrium tartrat [5] ditambahkan ke kompleks untuk menstabilkan ion tembaga. Reaksi ion tembaga dengan atom nitrogen yang terlibat dalam ikatan peptida menyebabkan perpindahan atom hidrogen peptida dalam kondisi basa. Sebuah tri atau tetra dentate khelat dari dengan peptida nitrogen menghasilkan "buret" warna. Ini ditemukan dengan dipeptides (Datta, SP, Leberman, R., Dan Rabin, BR, Trans.Farad.Soc. (1959), 55, 2141.)Reagen umumnya digunakan dalam uji protein biuret, tes kolorimetri digunakan untuk menentukan konsentrasi protein oleh UV / VIS pada panjang gelombang 565 nm.Sensitivitas tinggi varian dari tes biuretDua modifikasi utama dari uji biuret umumnya diterapkan dalam analisis modern yang kolorimetri peptida: asam bicinchoninic (BCA) assay dan uji Lowry. Dalam tes ini, Cu + yang terbentuk selama reaksi biuret bereaksi lebih lanjut dengan reagen lainnya, yang mengarah ke warna yang lebih dalam.Pada uji BCA, Cu + membentuk kompleks ungu dengan bicinchoninic asam (BCA), [6] yang menyerap sekitar 562 nm, menghasilkan warna khusus violet. The larut dalam air BCA / kompleks tembaga menyerap jauh lebih kuat daripada kompleks peptida / tembaga, meningkatkan sensitivitas uji biuret dengan faktor sekitar 100: uji BCA memungkinkan untuk mendeteksi protein dalam kisaran ,0005-2 mg / mL) . Additionnally, uji protein BCA memberikan manfaat penting dari kompatibilitas dengan zat seperti sampai 5% surfaktan dalam sampel protein.Dalam uji protein Lowry Cu + teroksidasi kembali ke Cu2 + oleh Movi di reagen Folin-Ciocalteu, yang membentuk molibdenum biru (MoIV). Residu tirosin protein juga membentuk molibdenum biru dalam kondisi ini. Dengan cara ini, protein dapat dideteksi dalam konsentrasi antara 0,005 dan 2 mg / mL [7] Molibdenum biru [8] pada gilirannya dapat mengikat pewarna organik tertentu seperti perunggu hijau dan Auramin O, sehingga amplifikasi lebih lanjut dari sinyal..