bioassay

Bioassay-Guided Isolasi dan Antioksidan Evaluasi

Senyawa flavonoid dari Aerial Bagian dari Lippia nodiflora L

Penelitian ini dirancang untuk mengidentifikasi DPPH ( 2 2 - difenil - 1 - pikrilhidrazil ) konstituen pemulungan radikal bebas dari ekstrak metanol L nodiflora menggunakan fraksinasi Fraksi etil asetat bioassay - dipandu ( EAF ) mengungkapkan antioksidan yang kuat dibandingkan dengan fraksi lain melalui in vitro DPPH radikal - pemulungan assay Fraksinasi berulang aktif EAF oleh kromatografi kolom silika gel menghasilkan senyawa dengan potensi antioksidan yang kuat Senyawa bioaktif yang terisolasi adalah ditentukan sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) - 5 - hidroksi -7-metoksi-4H-chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy ndash 3rsquo 4rsquo 7 - trimethoxyflavone ) oleh membandingkan data spektral ( UV IR 1H NMR 13C NMR dan MS ) dengan literatur reports Senyawa diisolasi menunjukkan sebuah aktivitas antioksidan yang sangat baik melalui semua tes antioksidan dan juga secara signifikan menghambat peroksidasi lipid pada konsentrasi 50 mg mL Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak dari L nodiflora atau phytocompound turunan dapat digunakan berpotensi sebagai sumber bioaktif antioksidan alami dengan menyumbangkan efek kesehatan yang menguntungkan

1 Pendahuluan

Reaktif Oksigen Spesies ( ROS ) terus dibentuk sebagai produk sampingan dari metabolisme dalam organisme aerobik dan juga diproduksi pada paparan asap tembakau ozon radiasi pelarut organik dan polutan lingkungan lainnya ROS memainkan peran penting dalam berbagai proses fisiologis termasuk produksi energi fagositosis seluler transduksi sinyal proliferasi sel diferensiasi dan apoptosis Di sisi lain semakin banyak bukti highlights bahwa kelebihan produksi ROS dapat menyebabkan kerusakan oksidatif semua biomolekul ( lipid karbohidrat protein enzim DNA dan RNA ) dan bertindak sebagai mediator dari berbagai gangguan misalnya peradangan arthritis diabetes arteriosklerosis kanker genotoxicity dan gangguan neurologis seperti penyakit Alzheimer Antioksidan sangat penting untuk mencegah reaksi degeneratif yang diproduksi oleh radikal bebas dan spesies oksigen reaktif yang telah berkaitan dengan banyak penyakit dan kerusakan makanan dan pembusukan Namun keamanan dari beberapa sintetis antioksidan digunakan dalam industri makanan telah dipertanyakan karena studi terbaru mengakui bahwa mereka mungkin karsinogenik Oleh karena itu ada minat yang muncul dalam alam antioksidan yang dapat membantu untuk mencegah kerusakan oksidatif Tanaman dan produk tanaman merupakan sumber megah dari fitokimia dan telah ditemukan untuk menyimpan array kegiatan biologis termasuk potensi antioksidan Tanaman mensintesis senyawa antioksidan kebanyakan flavonoid dan polifenol yang telah dilaporkan untuk melindungi tubuh manusia dari berbagai penyakit dengan menetralisir ROS Baru-baru ini senyawa fenolik telah menerima peningkatan signifikansi antara berbagai phytochemical karena lebar mereka distribusi di kerajaan tumbuhan dan biologis mereka kegiatan yaitu anti kanker antiatherogenic antiinflamasi kegiatan antimikroba dan antioksidan

Antioksidan dapat digunakan sebagai makanan suplemen makanan atau sebagai obat oleh manusia Beberapa penelitian telah mengungkapkan bahwa peningkatan asupan antioksidan alami seperti sebagai flavonoid dan senyawa fenolik lain hampir hadir pada tanaman menunjukkan efek protektif potensial terhadap banyak penyakit degeneratif Lippia nodiflora Linn ( Verbenaceae ) biasa disebut Poduthalai di Tamil adalah ramuan abadi merayap dan lokal melimpah di daerah basah dan beberapa sifat obat diberikan ke tanaman ini dalam sistem tradisional obat-obatan Infus daun dan

tangkai tender diberikan kepada anak-anak menderita gangguan pencernaan dan perempuan setelah melahirkan Chutney terbuat dari daun dan buah-buahan sering diambil untuk meringankan iritasi tumpukan internal Banyak sifat farmakologi L Nodiflora termasuk anti - inflamasi antipiretik antitusif antidiabetes dan efek antimelanogenesis telah dilaporkan Relevansi ethnopharmacological L Nodiflora untuk penyakit kulit dan kosmetik rakyat seperti jerawat inas luka bakar dan kulit juga telah mengungkapkan konstituen fitokimia L nodiflora seperti flavonoid glikosida flavon alkaloid minyak atsiri resin kinol dan steroid telah sebelumnya dilaporkan Oleh karena itu phytochemical ini dianggap bertanggung jawab atas sifat farmakologi ini tanaman

Meskipun ada bukti antioksidan aktivitas ekstrak metanol L nodiflora utama konstituen antioksidan hadir dalam bagian udara memiliki tidak diteliti secara luas Oleh karena itu penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi senyawa aktif yang bertanggung jawab untuk properti antioksidan ekstrak metanol Lippia nodiflora L melalui bioassay - dipandu fraksinasi menggunakan dalam vitro assay DPPH

2 Bahan dan Metode

21 Umum

Spektrum resonansi magnetik nuklir direkam pada BRUKER Avance 400MHz (Swiss) NMR instrumen beroperasi pada 400MHz untuk 1H dan 100MHz untuk 13C inti di roomtemperature dan dirujuk ke residual sinyal pelarut Pergeseran kimia dan kopling konstanta ( 119869 ) nilai-nilai yang dilaporkan dalam ppm dan Hz masing-masing Analisis HPLC dilakukan dengan menggunakan kolom C - 18 ( 250 times 46 mm 5 μ ) dalam LC - 8A alat kromatografi Shimadzu ( Shimadzu

Singapura) Fase Themobile terdiri ofmethanol -

05 asam fosfat dalam air ( 60 40 v v ) dan aliran

Tingkat diadakan konstan pada 1 mL menit Puncak terdeteksi

pada 280 nm menggunakan variabel detektor panjang gelombang UV Silica gel

60 F254 pelat ( 20 times 20 cm 02mmthick E - Merck Jerman )

digunakan untuk kromatografi lapis tipis ( TLC ) analisis

Spektrum ultraviolet dicatat menggunakan Varian Cary

500 spektrofotometer memindai λmax ( log ε ) di nm sedangkan

Spektrum FTIR diperoleh dengan menggunakan Nicolet 380 ( Thermo

Ilmiah USA ) Kelompok fungsional diidentifikasi menggunakan

kalium bromida ( KBr ) dan dipindai di kisaran 4000 -

400 cm - 1 Sampel dilarutkan dalam metanol dan massa ESI

spectrawere obtainedwith aThermo Ilmiah ExactiveMass

Spektrometer ( Thermo Fisher Scientific USA )

Reagen seperti 2 - deoksi - D - ribosa terbutilasi hidroksil

toluena ( BHT ) 2 2 - difenil - 1 - pikrilhidrazil ( DPPH )

phenazine methosulphate ( PMS ) nitroblue tetrazolium

( NBT ) natrium nitroprusside dan Griess reagen yang

diperoleh dari ( Sigma Kimia St Louis MO USA ) 2 4

6 - Tripyridyl - S - triazina ( TPTZ ) asam thiobarbituric ( TBA )

asam trikloroasetat ( TCA ) etilena asam diaminetetraacetic

( EDTA ) klorida ( FeCl3 ) hidrogen peroksida ( H2O2 )

dan nikotinamida adenin dinukleotida tereduksi ( NADH )

diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian laboratorium

Mumbai India ) Pelarut HPLC dan reagen yang digunakan

untuk ekstraksi dan silika gel ( 0075-015 mm ) untuk kolom

kromatografi diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian

laboratorium Mumbai India ) Semua bahan kimia lainnya dan

reagen yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitis

22 Bahan tanaman Bahan-bahan tanaman segar yang dikumpulkan

antara Agustus dan September 2011 dari Karaikudi

Kabupaten Sivagangai tanaman Tamil NaduThe adalah taksonomi

diidentifikasi dan dikonfirmasi oleh Dr GVS Murthy Joint

Direktur Botanical Survey of India Tamil Nadu Agricultural

Kampus Universitas Coimbatore ( BSISRC5232012-

13Tech-19 ) Sebuah spesimen voucher tanaman L nodiflora

( DBI - HP Spesimen - 1 ) disiapkan dan disimpan di

Biologi Molekuler Lab Departemen Bioinformatika Alagappa

Universitas Karaikudi Tamil Nadu

23 Ekstraksi Fraksinasi dan Isolasi Antioksidan

Compound Bagian udara ( batang daun dan bunga ) yang

dicuci dengan air keran warna - kering dan mengurangi untuk fine

bubuk Bagian udara bubuk L nodiflora ( 15 kg )

diekstraksi dengan metanol 90 ( 45 L times 2 ) di ruang

suhu Campuran disaring melalui Whatman

Nomor l kertas saring dan pelarut dari gabungan

ekstrak terkonsentrasi menggunakan vacuum rotary evaporator

( Superfit India ) pada 60 ∘ C untuk membeli 647 g metanol mentah

ekstrak ( 431 ) Pelarut dipilih berdasarkan hasil nya

dari ekstraksi awal dan penapisan fitokimia

studi Ekstrak dilarutkan dalam 500ml air hangat

dan bagian berair yang dihasilkan dipartisi dengan etil

asetat ( EtOAc ) ( 4 times 200 mL ) menggunakan corong pisah untuk

mampu fraksi etil asetat ( EAF ) dan bagian berair

Fasa berair kemudian berturut-turut dipartisi dengan

n - butanol ( 3 times 200 mL ) sehingga mendapatkan n - butanol larut

fraksi ( BF ) dan fraksi air ( WF ) Semua fraksi

dikumpulkan secara terpisah dan mengurangi menggunakan rotary vacuum

evaporator untuk menghilangkan pelarut dan resultan berair

ekstrak diliofilisasi dalam vakum Sampel kemudian

diuji untuk properti antioksidan dengan menggunakan 2 2 - difenil - 1 -

pikrilhidrazil ( DPPH ) assay ∙

The DPPH aktif EAF ( 172 g ) dimuat sebagai kering∙

bubur silika gel untuk kromatografi kolom ( 45 times 35 cm )

dan dielusi dengan petroleum eter EtOAc gradien elusi

( 100 0-0 100 ) dalam rangka peningkatan polaritas Sebanyak

92 fraksi 100ml masing-masing dikumpulkan dan dianalisis oleh

TLC ( Silica gel F254 pelat 20 times 20cm Merck Jerman )

Analisis KLT dilakukan dengan menggunakan etil asetat kloroform

asam format ( 50401 ) sebagai fase gerak dan

band dipisahkan divisualisasikan menggunakan uap yodium dan

vanillin - asam sulfat reagen Fraksi ini dikumpulkan

untuk membeli tujuh fraksi utama (P A 1-13 Fr B 14-35

Fr C 36-48 Fr D 49-60 Fr E 61-70 Fr F 71-80 dan

Fr G 81-92 ) berdasarkan analisis TLC Fraksi ini adalah

diuji untuk bioaktivitas menggunakan DPPH assay spektrofotometri

Untuk pemurnian lebih lanjut yang sangat aktif Fr B ( 28 g)

dimuat pada kolom silika gel dielusi dengan petroleum eter -

EtOAc gradien dan isi etil asetat dari themixture

meningkat dalam serangkaian langkah 5 Tidak aktif dan kurang

fraksi terbukti aktif dibuang Akhirnya aktif Fr

B2 dielusi dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 ) menghasilkan

117mg senyawa Kemurnian senyawa hasil isolasi adalah

establishedbyHPLCandits structurewas dikonfirmasikan melalui

interpretasi data spektral ( UV FT - IR 1H

13C NMR dan MS ) dan selanjutnya diuji untuk antioksidan

efek

24 Aktivitas antioksidan

241 DPPH Radical Scavenging Assay The DPPH radikal

kegiatan pemulungan ekstrak metanol EAF BF dan WF

diuji menurut Yamaguchi et al [ 27 ] Secara singkat 02mL

dari solusi sampel konsentrasi yang berbeda ditambahkan

untuk 1mL 01mm larutan DPPH baru disiapkan itu

campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan absorbansi pada

517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar

Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama

tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara

DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT

digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu

aktivitas radikal diukur sebagai penurunan

absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙

Efek pembilasan ( ) = [

Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )

di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah

absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar

242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The

efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode

Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )

dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau

tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang

Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar

560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap

kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah

dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH

243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas

ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi

peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg

et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di

KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M

FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke

01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh

100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair

Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi

pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL

dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi

campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam

Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah

baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah

dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan

nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga

244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu

Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan

Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada

kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi

( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -

TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif

yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri

300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl

S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi

solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan

dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan

25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan

37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak

senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi

dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap

kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu

Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan

menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk

kalibrasi

245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis

pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di

larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit

ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat

3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside

dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat

penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi

05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari

pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan

didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian

1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01

w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama

30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan

dan absorbansi diukur secara spektrofotometri

pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal

aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan

sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai

dijelaskan untuk uji DPPH

246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )

assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh

Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan

homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari

homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah

ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil

dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling

air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke

menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama

30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic

( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA

( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut

Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan

5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada

3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik

lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan

sampel uji Penghambatan Persentase dihitung

sesuai dengan rumus berikut

Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)

mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi

25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di

rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi

(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik

pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego

CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi

sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005

dianggap signifikan

3 Hasil dan Diskusi

31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan

Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan

fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh

uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan

pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol

ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya

konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu

efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip

dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol

dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan

Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging

50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe

di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan

ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara

fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙

fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan

nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan

Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF

menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada

kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter

EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut

fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel

akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari

dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu

Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif

yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan

Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90

ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram

senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan

waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel

fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40

v v ) ( Gambar 2 ( b ) )

Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf

bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan

obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )

= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )

- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )

Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan

fraksi udara bagian Lippia nodiflora L

Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )

CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052

BHTa 1912 plusmn 057

aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )

- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )

= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )

1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )

389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H

H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )

14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka

S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online

di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa

menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M

+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )

Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi

telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -

hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840

7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data

dilaporkan [ 34 ]

32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi

Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model

321 DPPH Radical Scavenging Effect

Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]

Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)

Ekstrak metanol mentah

(647 g)

Resuspend dengan air hangat

Ekstraksi dengan etil asetat

fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)

Ekstraksi dengan n-butanol

Kromatografi kolom (CC)

Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)

Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)

Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G

CC pada silika gel

Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5

(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc

Bubuk udara bagian L Nodiflora

(GAMBAR)

highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan

BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing

pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging

aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak

Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal

ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa

ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut

ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif

inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer

yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di

tubuh

322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan

spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen

peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama

karena partisipasi radikal anion superoksida baik

secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis

[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi

Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa

untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan

pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa

dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi

( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan

meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu

kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida

ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol

Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang

ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan

dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu

Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan

menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing

323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil

spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten

untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup

[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid

Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari

membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging

ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil

Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -

trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara

L nodiflora

penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa

menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada

Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk

ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan

7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora

( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa

( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat

mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50

dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa

mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙

sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena

Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙


ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas

digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam

polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya

terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka

dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen

atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan

dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal

Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak

berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP

untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu

senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan

nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL

nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan

7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP

dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan

bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan

kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal

pemulungan kemampuan

325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida

radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙

respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka

bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti

protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan

NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙

pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun

jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi

sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada

4 Kesimpulan

Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan

dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi

dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan

model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan

aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi

Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF

menghasilkan identifikasi senyawa flavon

yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran

aktivitas antioksidan dari senyawa flavon

dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada

menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan

bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi

senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan

membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di

pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini

memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif

agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk

memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain

fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan

mekanisme aksi

Benturan Kepentingan

Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan

Ucapan Terima Kasih

Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu

dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no

SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar

Electro Divisi Organik Central Elektrokimia

Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR

dari senyawa terisolasi

tangkai tender diberikan kepada anak-anak menderita gangguan pencernaan dan perempuan setelah melahirkan Chutney terbuat dari daun dan buah-buahan sering diambil untuk meringankan iritasi tumpukan internal Banyak sifat farmakologi L Nodiflora termasuk anti - inflamasi antipiretik antitusif antidiabetes dan efek antimelanogenesis telah dilaporkan Relevansi ethnopharmacological L Nodiflora untuk penyakit kulit dan kosmetik rakyat seperti jerawat inas luka bakar dan kulit juga telah mengungkapkan konstituen fitokimia L nodiflora seperti flavonoid glikosida flavon alkaloid minyak atsiri resin kinol dan steroid telah sebelumnya dilaporkan Oleh karena itu phytochemical ini dianggap bertanggung jawab atas sifat farmakologi ini tanaman

Meskipun ada bukti antioksidan aktivitas ekstrak metanol L nodiflora utama konstituen antioksidan hadir dalam bagian udara memiliki tidak diteliti secara luas Oleh karena itu penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi senyawa aktif yang bertanggung jawab untuk properti antioksidan ekstrak metanol Lippia nodiflora L melalui bioassay - dipandu fraksinasi menggunakan dalam vitro assay DPPH

2 Bahan dan Metode

21 Umum

Spektrum resonansi magnetik nuklir direkam pada BRUKER Avance 400MHz (Swiss) NMR instrumen beroperasi pada 400MHz untuk 1H dan 100MHz untuk 13C inti di roomtemperature dan dirujuk ke residual sinyal pelarut Pergeseran kimia dan kopling konstanta ( 119869 ) nilai-nilai yang dilaporkan dalam ppm dan Hz masing-masing Analisis HPLC dilakukan dengan menggunakan kolom C - 18 ( 250 times 46 mm 5 μ ) dalam LC - 8A alat kromatografi Shimadzu ( Shimadzu

Singapura) Fase Themobile terdiri ofmethanol -

05 asam fosfat dalam air ( 60 40 v v ) dan aliran

Tingkat diadakan konstan pada 1 mL menit Puncak terdeteksi

pada 280 nm menggunakan variabel detektor panjang gelombang UV Silica gel

60 F254 pelat ( 20 times 20 cm 02mmthick E - Merck Jerman )

digunakan untuk kromatografi lapis tipis ( TLC ) analisis

Spektrum ultraviolet dicatat menggunakan Varian Cary

500 spektrofotometer memindai λmax ( log ε ) di nm sedangkan

Spektrum FTIR diperoleh dengan menggunakan Nicolet 380 ( Thermo

Ilmiah USA ) Kelompok fungsional diidentifikasi menggunakan

kalium bromida ( KBr ) dan dipindai di kisaran 4000 -

400 cm - 1 Sampel dilarutkan dalam metanol dan massa ESI

spectrawere obtainedwith aThermo Ilmiah ExactiveMass










































































efek






























































kalibrasi













































dianggap signifikan

3 Hasil dan Diskusi
































v v ) ( Gambar 2 ( b ) )









CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052






389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H


14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka









dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih
















































































efek






























































kalibrasi













































dianggap signifikan

3 Hasil dan Diskusi
































v v ) ( Gambar 2 ( b ) )









CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052






389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H


14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka









dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih





























































kalibrasi













































dianggap signifikan

3 Hasil dan Diskusi
































v v ) ( Gambar 2 ( b ) )









CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052






389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H


14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka









dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih



























dianggap signifikan

3 Hasil dan Diskusi
































v v ) ( Gambar 2 ( b ) )









CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052






389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H


14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka









dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih

































v v ) ( Gambar 2 ( b ) )









CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052






389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H


14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka









dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih















CME 2466 plusmn 11

EAF 2606 plusmn 095

BF 8362 plusmn 045

WF 6639 plusmn 052






389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )

664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =

63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H


14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682

( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )

15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -

10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka









dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih













dilaporkan [ 34 ]







(647 g)



fase cair

(367 g)

Fraksi etil asetat

(EAF 172 g)




Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih









Fraksi n-Butanol

(BF 153 g)

fraksi air

(WF 186 g)


CC pada silika gel


(25 75)

senyawa

(117mg)

(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)

pada silika gel

(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)

(1-13)

Petether-EtOAc


(GAMBAR)











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih











tubuh





























L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih













L nodiflora









































4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih



























4 Kesimpulan




















mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih













mekanisme aksi



Ucapan Terima Kasih







bioassay

Documents