bahan atau peralatan yang digunakan dalam bidang mikrobiologi harus dalam keadaan steril

7/25/2019 Bahan Atau Peralatan Yang Digunakan Dalam Bidang Mikrobiologi Harus Dalam Keadaan Steril

1/6

STERILISASI DAN MEDIUM PADA MIKROORGANISME

Bahan atau peralatan yang digunakan dalam bidang mikrobiologi harus dalam keadaan

steril. Steril artinya tidak didapatkan mikroba yang tidak diharapkan kehadirannya baik yang

mengganggu atau yang merusak media atau mengganggu kehidupan dan proses yang sedang

dikerjakan. Setiap proses baik fisika, kimia, maupun mekanik yang membunuh semua bentukkehidupan terutama mikroorganisme disebut dengan sterilisasi (Waluyo, 2005).

etika anda pertama kali melakukan pemindahan biakan se!ara aseptik, sesungguhnya

anda sudah menggunakan salah satu !ara sterilisasi, yaitu pembakaran. Sterilisasi adalah proses

menghan!urkan semua jenis kehidupan sehingga menjadi steril. Sterilisasi seringkali dilakukan

dengan pengaplikasian udara panas. "da dua metode yang sering digunakan, yaitu #anas lembab

dengan uap jenuh bertekanan. Sangat efektif untuk sterilisasi karena menyediakan suhu jauh di

atas titik didih, proses !epat, daya tembus kuat dan kelembaban sangat tinggi sehingga

mempermudah koagulasi protein sel$sel mikroba yang menyebabkan sel han!ur. Suhu efektifnya

adalah %2%& pada tekanan 5 kg'!m2 dengan aktu standar %5 menit. "lat yang digunakan

pressure !ooker, autoklaf (auto!la*e) dan retort. #anas kering, biasanya digunakan untukmensterilisasi alat$alat laboratorium. Suhu efektifnya adalah %+0& selama 2 jam. "lat yang

sering digunakan pada umumnya adalah o*en (adioetomo, %--).

"gar biakan murni dapat dibuat, medium harus steril sebelum inokulasi/ yaitu kita harus

yakin baha tidak ada organismehidup dapat berada dalam medium jika diinokulasi. etode

yang la1im digunakan untuk mensterilkan media ialah menempatkannya dalam otoklaf

(sebetulnya pan!i masak bertekanan besar dan dielaborasi). toklaf menggunakan uap

bertekanan untuk menaikkan suhu barang yang sedang disterilkan sampai suatu taraf yang

mematikan semua bentuk kehidupan. 3ntuk sterilisasi rutin, otoklaf biasanya dioperasikan pada

tekanan uap %5 lb'in2. #ada tekanan ini suhu menjadi %2%&. Waktu yang diperlukan pada suhu

ini adalah %5 sampai 20 menit. "pabila medium berukuran besar disterilkan, maka aktu yang

diperlukan akan lebih panjang, karena panas memerlukan aktu untuk menembus bahan tersebut

(4olk Wheeler, %--).

etode sterilisasi se!ara fisik dapat dipakai bila selama sterilisasi dengan bahan kimia

tidak akan berubah akibat suhu yang tinggi atau tekanan yang tinggi. &ara kerja dari panas

tersebut, baha panas membunuh mikroba karena mendenaturasi protein, terutama en1im dan

membran sel. #anas kering membunuh bakteri karena oksidasi komponen$komponen sel. 6aya

bunuh panas kering tidak sebaik panas basah. al ini dibuktikan dengan memasukkan biakan

mikroba dalam air mendidih akan !epat mematikan daripada dipanasi se!ara kering (Waluyo,

2005).

7aktor yang mempengaruhi keberhasilan sterilisasi sistem bat!h adalah temperatur dan lama

pemanasan. #roses pemusnahan mikroba kontaminan dapat digambarkan sesuai reaksi kimia

orde satu yang memenuhi persamaan kinetika

%. 6imana 8 adalah jumlah sel yang hidup pada aktu t tertentu, t adalah lama sterilisasi

dan d adalah konstanta laju kematian spesifik. 6engan memplot nilai terhadap t, maka

didapat garis lurus dengan kemiringan 9 d. pada kematian mikroorganisme se!ara

sterilisasi juga berlaku persamaan "rhenius yang menunjukkan baha temperatur

mempengaruhi konstanta laju kematian spesifik.

2. 6imana " adalah konstanta "rhenius, :a adalah energi akti*asi, dan ; adalah konstanta

gas dan < adalah temperatur absolut pemanasan. 6ari persamaan ini terlihat baha laju


2/6

reaksi kematian sel akan meningkat jika temperatur sterilisasi meningkat karena

peningkatan temperatur menyebabkan peningkatan d. nilai :a dan d didapat dari

hubungan pada persamaan "rhenius tersebut dengan !ara mengalurkan ln d terhadap

%'< ("!hmad, 200=).

edia adalah suatu bahan yang terdiri dari !ampuran 1at$1at hara (nutrien) yang berguna

untuk membiakkan mikroba. 6engan menggunakan berma!am$ma!am media dapat dilakukanisolasi, perbanyakan, pengujian sifat fisiologis dan perhitungan sejumlah mikroba. Supaya

mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat$

syarat, antara lain

%. harus mengandung semua 1at hara yang mudah digunakan oleh mikroba,

2. harus mempunyai tekanan osmosis,

. tegangan permukaan dan p yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh,

>. tidak mengandung 1at$1at yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba,

5. harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan, agar mikroba yang ditumbuhkan

dapat tumbuh dengan baik (Sutedjo, %--%).

"gar$agar, gelatin atau gel silika merupakan bahan untuk membuat medium menjadi padat.

8amun, yang paling umum digunakan adalah agar$agar. eskipun bahan utama agar$agar adalah

gelatin, yaitu suatu kompleks karbohidrat yang diekstraksi dari alga marin genus ?elidium,

namun sebagian besar mikroorganisme tidak dapat menggunakannya sebagai makanan sehingga

agar$agar dapat berlaku hanya sebagai pemadat (adioetomo, %--).

Saat ini media agar merupakan media yang sangat umum digunakan dalam penelitian$

penelitian mikrobiologi. edia agar ini memungkinkan untuk dilakukannya isolasi bakteri dari

suatu sampel, karakterisasi morfologi, sampai penghitungaan bakteri yang dikenal dengan nama

total plate !ount. Bentuk koloni bakteri dan arna$arninya mudah sekali dikenali dengan media

ini dengan !ara mengubah komposisi nutrien atau menambahkan indikator. omposisi media

bakteri dapat dimodifikasi sehingga dapat digolongkan menjadi media umum, media selektif

(bakteri tertentu saja yang dapat tumbuh) dan media diferensial (bakteri tumbuh dengan

memberikan !iri$!iri tertentu) ("!hmad, 200=).

edia alamiah, misalnya susu skim, tidak begitu sulit di dalam penyiapannya sebagai media

pertumbuhan mikroba, karena hanya !ukup dengan dituang ke dalam adah yang telahdisterilkan. edia dalam bentuk kaldu nutrien atau yang mengandung agar, disiapkan dengan

!ara melarutkan masing$masing bahan yang dibutuhkan atau lebih mudah lagi dengan !ara

menambahkan air pada suatu produk komersial berbentuk medium bubuk yang sudah

mengandung semua nutrien yang dibutuhkan. #ada praktisnya, semua media tersebut se!ara

komersial dalam bentuk bubuk, seperti #&" (#late &ount "gar), 8" (8utrient "gar),


3/6

meskipun akan ada juga jenis yang dapat menjangkau 0. mm dalam diameter (


4/6

>.


5/6

2. 6itambahkan 50 mH akuades.

. 6ipanaskan di atas hot plate hingga mendidih sambil diaduk dengan magneti! stirer

sampai homogen, lalu dibiarkan beberapa saat.

>. 6ipipet sebanyak > mH dan dimasukkan ke dalam tiga buah tabung reaksi.

5. A gr'H).

2.


6/6

Da*tar Pusta!a

"!hmad, 6,. 200=, Media Agar. Ide Besar Istri Peneliti, http''.n*te!h.!om , 6iakses

tanggal % 8o*ember 20%0

adioetomo, ;S, %--, Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium Mikrobiologi. ?ramediaGakarta

;a!hdie, 200+, Mengenal Media Pertumbuhan Mikrobia

,http '' ra!hdie .blogsome .!om '200+'%0'%A' mengenal $ media $ pertumbuhan $ mikrobial 'tra!ba!k ,

6iakses tanggal % 8o*ember 20%0

Sutedjo, %--%,Mikrobiologi Tanah, ;ineka &ipta Gakarta

4olk Wheeler, %--,Mikrobiologi Dasar Jilid 1 Edisi kelima, :rlangga Gakarta

Waluyo, H., 2005,Mikrobiologi Umum, 3 #ress alang

Tnjauan Pusta!a

epala Haboratorium #endidikan imia, 7akultas atematika dan ilmu pengetahuan alam,

3ni*ersitas Fslam Fndonesia, #anduan #enulisan Haporan #raktikum
http://www.nvtech.com/http://www.nvtech.com/http://rachdie.blogsome.com/2006/10/18/mengenal-media-pertumbuhan-mikrobial/tracbackhttp://rachdie.blogsome.com/2006/10/18/mengenal-media-pertumbuhan-mikrobial/tracbackhttp://www.nvtech.com/

bahan atau peralatan yang digunakan dalam bidang mikrobiologi harus dalam keadaan steril

Documents