33

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Desain Penelitian

Desain penelitian ini adalah non-eksperimental depskriptif, karena

tidak adanya perlakuan terhadap subyek penelitian yang digunakan dan

tidak terdapat manipulasi, hanya dipaparkan peristiwa yang terjadi,

sehingga tidak terdapat hubungan sebab akibat didalamnya. Hanya

mendeskripsikan dan menggambarkan ada atau tidaknya hidrokuinon pada

krim malam pemutih wajah.

B. Subjek Penelitian

Subjek Penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah

6 sampel yang berbentuk kosmetika yaitu krim malam pemutih wajah yang

berada di Klinik Kecantikan daerah Kabupaten Brebes.

C. Pengumpulan Sampel

1. Sampel

Sampel yang akan digunakan pada penelitian ini adalah krim

malam pemutih wajah yang berada pada Klinik kecantikan di Kabupaten

Brebes.

2. Teknik Sampling

Simple Random Sampling, dikatakan simple (sederhana) karena

pengambilan anggota sampel pada populasi dilakukan secara random tanpa

33

34

memperhatikan jenjang yang ada dalam populasi. Cara ini dilakukan

apabila populasi dianggap homogeny (Sugiono., 2016).

D. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

1. Variabel Penelitian

a. Variabel bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah krim malam

pemutih wajah yang beredar di Klinik kecantikan Kabupaten Brebes.

b. Variabel terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah senyawa aktif

hidrokuinon pada krim malam pemutih wajah yang beredar di Klinik

kecantikan Kabupaten Brebes.

2. Definisi Operasional

Berdasarkan variabel penelitian sebagaimana tertera diatas,

definisi operasional sebagai berikut:

Tabel 3.1 Definisi Operasional

No. Variabel Definisi Operasional

1. Hidrokuinon Hidrokuinon adalah bahan kimia yang sering

dijumpai pada beberapa produk kosmetika terutama

pada krim malam pemutih wajah.

2. Krim malam Krim malam adalah salah satu sediaan salep berupa

krim untuk dioleskan pada daerah kulit sebagai

pengobatan maupun pemulihan yang sering di

resepkan oleh dokter untuk pasien pada klinik

kecantikan.

3. Klinik

kecantikan

Klinik kecantikan adalah suatu klinik penyedia jasa

pelayanan estetika kulit dan yang berhubungan

dengan kulit oleh dokter di Kabupaten Brebes.

35

E. Fasilitas yang diperlukan

1. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan 20-25 Juli 2019 di

Laboratorium Kimia Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan

Teknologi Universitas Peradaban Bumiayu.

2. Alat dan Bahan

a. Alat

Alat yang dibutuhkan dalam penelitian ini:

Spektrofotometer Uv-vis Hitachi U-2000, Timbangan Analitik

digital 4 digit, Penangas air, Oven, Pipet volume, Kertas saring

Whatman no.41, Aluminium foil, Plat tetes, Termometer, Mikropipet

10 µL, Plat tetes dan Lampu UV254, Chamber, Labu ukur dan

Alat-alat gelas yang umum di laboratorium.

b. Bahan

Bahan yang dibutuhkan dalam penelitian ini:

Floroglusin (Phloroglusinol 1%), Natrium Hidroksida 0,5 N,

Etanol 70%, Reagent Benedict, Feri klorida (FeCl3 1%), pH universal,

Plat silika gel GF-254 (KLT), Metanol, Kloroform, Aquadest, Batu

Es dan Sampel Penelitian berupa Krim Malam pada Klinik

Kecantikan di Kabupaten Brebes dengan pemberian kode sampel A,

B, C, D, E dan F, serta bahan baku pembanding yang digunakan yaitu

Hidrokuinon dengan Kode Hq.

36

F. Prosedur Penelitian

1. Penyiapan dan Pengambilan Sampel

Dalam Penelitian ini yang perlu disiapkan yaitu 6 buah sampel

krim malam pemutih wajah dengan kode sampel A, B, C, D, E dan F yang

akan diambil dari beberapa Klinik kecantikan di Kabupaten Brebes dan

bahan baku pembanding yaitu hidroquinon dengan kode Hq.

2. Pembuatan NaOH 0,5N

Timbang secara seksama NaOH seberat 1 gram, lalu larutkan

dengan aquadest kedalam gelas beaker secukupnya hingga homogen dan

tercampur sempurna, lalu masukkan kedalam labu ukur 50 mL

tambahkan dengan aquades sampai tanda batas hingga tepat 50 mL

(Dimodifikasi Anonim., 2014a).

3. Pembuatan Floroglusin (Phloroglusinol 1%)

Timbang secara seksama Phloroglusinol seberat 100 mg, lalu

larutkan dengan etanol 70% sebanyak 5 mL kedalam gelas beker.

Masukkan didalam labu ukur 10 mL, dan selanjutnya tambahkan

etanol 70% sampai tanda batas hingga tepat 10 mL (Dimodifikasi Carissa.,

2015).

4. Pembuatan FeCl3 1%

Timbang secara seksama seberat FeCl3 1 mg, lalu larutkan dengan

aquadest sebanyak 5 mL kedalam gelas beaker. Masukkan didalam

labu ukur 10 mL, dan selanjutnya tambahkan aquadest sampai tanda

batas hingga tepat 10 mL.

37

5. Analisis Kualitatif

a. Metode reaksi warna

Ambil hidrokuinon murni dan sampel A, B, C, D, E dan F

lalu letakkan pada plat tetes. Masing–masing sampel yang akan

diujikan kemudian direaksikan dengan FeCl3 1% dan reagent

benedict pada tabung reaksi. Hasil identifikasi positif apabila

dengan FeCl3 1% akan menghasilkan warna endapan hijau

kehitaman dan reagent benedict akan menghasilkan warna merah

bata (Dimodifikasi Carissa., 2015).

b. Pengujian pH sampel

i. Pembuatan larutan uji hidrokuinon

Timbang secara seksama sampel uji dan Hq seberat 300 mg,

lalu masukkan kedalam gelas beker, bungkus menggunakan

aluminium foil, tambahkan 10 mL etanol 70% dan kocok hingga

tercampur sempurna. Dinginkan dalam es selama 15 menit dan

kemudian saring dengan kertas saring Whatman no.41

(Dimodifikasi Anonim., 2011).

ii. Test uji sampel

Simpan larutan uji pada plat tetes, masing–masing

diberikan kertas pH universal. Kemudian periksa pH larutan

uji sampel tersebut, apabila sampel menunjukkan pH asam maka

sampel mengandung senyawa hidrokuinon (Susan dkk., 2015).

38

c. Kromatografi Lapis Tipis

i. Ambil 10 mL eluen yang digunakan yaitu Metanol : Kloroform

(1:1), masukkan kedalam chamber dan tutup. Jenuhkan eluen

dengan memasukkan kertas saring kedalam eluen selama

30 menit.

ii. Timbang sampel krim A, B, C, D, E dan F sebanyak 500 mg,

larutkan menggunakan etanol 70% sebanyak 4 mL serta

timbang hidrokuinon sebanyak 500 mg dan dilarutkan pada

etanol 70% sebanyak 4 mL.

iii. Campuran tersebut dihomogenkan diatas penangas air suhu 60 °C

selama 10 menit. Masukkan ke dalam es sampai terpisah lemak

dan lilin dengan fase cair lalu saring, Hasil saringan dapat

digunakan untuk analisis KLT. Siapkan plat silika gel GF-254

dengan ukuran 1 x 10 cm lalu diaktifkan dengan cara dipanaskan

di dalam oven pada suhu 105 °C selama 1 jam.

iv. Totolkan sampel dengan pembanding yang sudah dilarutkan

pada plat KLT, menggunakan pipa kapiler / mikropipet

berujung runcing (10 µL) dan bervolume (10 µL), pentotolan

dilakukan pada batas garis yang telah dibuat yaitu, bagian atas

dan bawah dengan ukuran 1 cm pada plat KLT menggunakan

pensil.

39

v. Masukan plat silika gel GF-254 (KLT) yang telah ditotolkan

ke dalam chamber yang berisi eluen hingga pelarut naik ke

atas sampai tanda garis yang sudah ditentukan pada plat KLT.

vi. Angkat plat KLT dari chamber dan baca bercak noda

menggunakan lampu UV254, hitung nilai Rf (Dimodifikasi

Roslinda dkk., 2015).

6. Analisis Kuantitatif

a. Pembuatan larutan baku hidrokuinon 100 ppm.

Timbang hidrokuinon murni sebanyak 10 mg kemudian

larutkan pada etanol 70% masukkan kedalam gelas beker. Lalu

pindahkan secara kuantitatif ke dalam labu takar 100 mL,

tambahkan etanol 70% sampai tanda batas hingga volume tepat

100 mL dan larutan digojok sampai tercampur rata. Sehingga

akan didapatkan konsentrasi baku induk hidrokuinon sebesar

100 ppm dalam etanol 70% (Dimodifikasi Sarah., 2014).

b. Pembuatan seri larutan baku hidrokuinon.

Dari konsentrasi 100 ppm tersebut dapat dibuatkan lagi

larutan baku hidrokuinon seri konsentrasi 1, 2, 3, 4 dan 5 ppm dengan

cara mengambil 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 dan 0,5 mL larutan baku

hidrokuinon 100 ppm. Masukkan ke dalam labu takar 10 mL,

tambahkan etanol 70% hingga batas tanda volume tepat 10 mL

(Dimodifikasi Susan dkk., 2015).

40

c. Penentuan panjang gelombang maksimum (λmax) hidrokuinon

Ambil sebanyak 5 mL larutan baku hidrokuinon konsentrasi

3 ppm, masukkan kedalam tabung reaksi dengan menambahkan 1 mL

pereaksi Phloroglusinol 1% dan 1 mL NaOH 0,5 N. Lalu panaskan

kedalam penangas air pada suhu 70°C selama 50 menit. Larutan

tersebut kemudian didinginkan kedalam air bersuhu 25°C dan

tambahkan etanol 70% sampai volume 10 mL didalam labu

takar. Larutan tersebut digojok hingga tercampur rata atau

homogen. Selanjutnya pembacaan absorbansi larutan tersebut pada

spektrofotometri visibel dengan panjang gelombang (λ) 400-800 nm

yang akan diperoleh hasil panjang gelombang maksimum (λmax)

(Dimodifikasi Sarah., 2014).

d. Pembuatan kurva baku hidrokuinon.

Ambil larutan baku hidrokuinon yang sudah dibuat dengan

konsentrasi 1, 2, 3, 4 dan 5 ppm masing-masing sebanyak 5 mL.

Masing-masing masukkan ke dalam tabung reaksidan tambahkan

pereaksi Phloroglusinol 1%, larutan NaOH 0,5 N sebanyak 1 mL, lalu

panaskan kedalam penangas air dengan suhu 70°C selama 50

menit. Larutan tersebut kemudian didinginkan kedalam air suhu

25°C, lalu campuran larutan tersebut ditambahkan etanol 70%

sampai volumenya 10 mL kedalam labu takar. Masing-masing

larutan selanjutnya dilakukan pembacaan absorbansinya dengan

menggunakan spektrofotometri visibel pada panjang gelombang

41

maksimum (λmax). Hasil absorbansi yang telah diperoleh pada

masing-masing konsentrasi diplotkan kedalam persamaan regresi

linier sehingga akan diperoleh persamaan kurva baku yaitu Y = bx + a

(Dimodifikasi Sarah., 2014).

e. Penetapan kadar hidrokuinon dalam sampel.

Timbang sampel krim A, B, C, D, E dan F sebanyak 10 mg,

kemudian larutkan kedalam 100 mL larutan etanol 70%. Saring

menggunakan kertas saring kedalam labu takar 10 mL, tambahkan

etanol 70% hingga tanda batas, sehingga didapatkan larutan dengan

konsentrasi 100 ppm. Kemudian larutan tersebut di pipet

menggunakan pipet volume sebanyak 0,3 mL dan masukkan

kedalam labu takar 10 mL, tambahkan etanol 70% hingga tanda

batas, sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 3 ppm.

Larutan tersebut kemudian diambil sebanyak 5 mL dan masukkan

kedalam tabung reaksi lalu tambahkan pereaksi Phloroglusinol 1%

dan larutan NaOH 0,5 N sebanyak 1 mL. Panaskan dalam

penangas air pada suhu 70°C selama 50 menit. Larutan tersebut

didinginkan kedalam air dengan suhu 25°C. Tambahkan etanol 70%

kedalam campuran tersebut hingga volume 10 mL menggunakan

labu takar. Selanjutnya dilakukan pembacaan absorbansinya dengan

menggunakan spektrofotometri visibel pada panjang gelombang

maksimum (λmax). Masing–masing pengukuran sampel dilakukan

pengulangan sebanyak 3 kali (Dimodifikasi Sarah., 2014).

42

G. Diagram Alir

1. Analisis Kualitatif

pH>7

pH

43

2. Analisis Kuantitatif

Gambar 3.2 Diagram alir analisis kuantitatif

Larutan Baku

Hidrokuinon

100 ppm

10 mg

Hidrokuino

n murni

Etanol

70%

ad.100 mL

Larutan Seri Baku

Hidrokuinon

1, 2, 3, 4 dan 5 ppm

0,1; 0,2; 0,3; 0,4

dan 0,5 mL

Larutan Baku 100

ppm Etanol

70% ad.10

mL

Larutan Seri

Baku dan

Sampel

Berwarna

1 mL

Phloroglucinol

1% dan NaOH

0,5N

5 mL

Larutan Seri

Baku

Pemanasan

70°C

Pendinginan dalam

air 25°C

Etanol

70% ad.10

mL

Larutan

Sampel

100 ppm

10 mg

Sampel Krim

0,3 mL

Larutan

Sampel 100

Larutan Sampel

3 ppm

Larutan Berwarna

Ungu Kompleks

Pengukuran Absorbansi

Hidrokuinon

5 mL Larutan

Sampel 3 ppm

Pengukuran Kadar

Sampel

λ Konsentrasi Sampel

Etanol

70%

ad.100 mL

44

H. Teknik Analisis Data

Teknik analisis data sendiri bertujuan untuk menyusun data hasil

pengujian sehingga dapat mudah dipahami dalam pembacaan hasil.

Sebelum melakukan teknik analisis data kuantitatif terlebih dahulu maka

lakukan teknik analisis data kualitatif untuk mengetahui keberadaan

hidrokuinon dalam sampel. Pengujian yang dapat dilakukan berupa uji

warna, uji pH dan pengujian KLT dengan menghitung nilai Rf yaitu:

Rf = Jarak tempuh komponen

Jarak tempuh eluen

Sampel krim yang mengandung senyawa hidrokuinon setelah

dilakukan pengujian secara kualitatif kemudian telah di analisis

menggunakan Spektrofotometri Uv-vis dan hasil data hidrokuinon yang

telah dilakukan pengujian menggunakan metode Spektrofotometri Uv-vis

akan dipaparkan hasilnya berdasarkan pada analisa kurva kalibrasi

dengan persamaan regresi linier yaitu:

Y = bx + a

Keterangan:

Y = Absorbansi

x = Konsentrasi

b = Koefisien regresi (yang menyatakan slope “kemiringan”)

a = Tetapan regresi ( yang menyatakan intersep)

45

Sampel akan mendapatkan 3 kali perlakuan pada masing-masing

sampel yang sudah disiapkan. Sampel yang diujikan ada 6 merek yang

mewakili produk krim malam pemutih wajah yang ada di klinik

kecantikan. Dimana nama masing-masing merek krim malam pemutih

wajah ini akan diinisialkan menggunakan huruf A, B, C, D, E dan F.

Setelah ditemukan nilai absorbansinya maka dilakukan perhitungan kadar

rata-rata ppm yaitu:

( ) …………………(1)

Setelah ditemukannya hasil K dalam kadar (µg/mL) maka, hasil

tersebut diubah ke dalam (mg/mL) untuk mendapatkan hasil kadar (%)

dengan rumus sebagai berikut:

Mencari (%) = ( )

. 100% …………(2)

Keterangan:

K = Kadar Hidrokuinon dalam Sampel (µg/mL)

X ppm = Konsentrasi sampel (µg/mL)

BS = Bobot Sampel

Fp = Faktor Pengenceran