artikel mufqi fitra

7/28/2019 Artikel Mufqi Fitra

1/7

AKTIVITAS ANTIJAMUR TERHADAP Candida albicansDARI TEPUNG CACING

TANAH (Lumbri cus rubell us) SECARA I N VITRO

Mufqi Fitra1Tr istia Rinanda

2Fajriah

3

1)

Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Syiah Kuala2)

Bagian Mikrobiologi FakultasKedokteran Universitas Syiah Kuala 3)Bagian Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran

Universitas Syiah Kuala

ABSTRAK

Resistensi antibiotik terhadap mikroorganisme menjadi permasalahan besar di bidang

kesehatan. Salah satu alternatif penanggulangan resistensi antimikroba dengan penggunaan

bahan alam seperti tepung cacing tanah (Lumbricus rubellus). Penelitian ini bertujuan untuk

mengetahui aktivitas antijamur terhadap Candida albicans dari tepung cacing tanah

(L.rubellus) secara in vitro. Jenis Penelitian ini adalah eksperimental laboratorium dengan

menggunakan Rancangan Acak Lengkap ( RAL ) dengan 4 kali pengulangan yang terdiri dari6 kelompok perlakuan yaitu 5 konsentrasi ( 100 mg/5 ml, 200 mg/5 ml, 300 mg/5 ml, 400

mg/5ml dan 500 mg/5ml ) dan kelompok kontrol negatif yaitu asam asetat 50% dan asetonitril

100% yang dinormalisasikan mencapai konsentrasi 1%. Metode uji aktivitas antijamur

menggunakan difusi cakram Kirby-Bauer. Hasil penelitian menunjukkan tepung cacing tanah

(L.rubellus) dengan konsentrasi 100 mg/5ml, 200 mg/5ml, 300 mg/5ml, 400 mg/5ml dan 500

mg/5ml memiliki aktivitas antijamur terhadap Candida albicans dengan diameter rata-rata

zona hambat 16,5 mm, 18 mm, 17,5 mm, 17,75 mm dan 16 mm. Hasil analisis data dengan

ANOVA dilanjutkan dengan uji beda Duncan (p < 0.01) menunjukkan konsentrasi tepung

cacing tanah (L.rubellus) memiliki pengaruh yang sangat nyata dalam menghambat

pertumbuhan Candida albicans secara in vitro melalui aktivitas antimikroba yang dimilikinya.

Konsentrasi 200 mg/5 ml menunjukkan aktivitas antimikroba yang paling optimal.

Kata Kunci : Aktivitas antimikroba,Lumbricus rubellus, Candida albicans, Lumbricin-1

ABSTRACT

The development of antimicrobial resistance has become a major health problem.

Because of this phenomena, the finding and development of new candidates for antimicrobial

substances is strongly encouraging. One of the potential candidate is earthworm Lumbricus

rubellus( L. rubellus) powder. This study aims to determine the antifungal activity against

Candida albicans (C. albicans). This study was conducted by exprerimental method using

Completely Randomized Design (CRD) with 6 treatment groups consist of 100 mg, 200 mg,

300 mg, 400 mg and 500 mg L.rubellus powder per 5 ml solvent (acetic acid and acetonitrile

in normalized concentration) and negative control groups. Antimicrobial activity was

conducted by Kirby Bauee Disc Diffusion method. The results showed that L. rubellus powder

in concentration 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg and 500 mg obtained antimicrobial

activity against C. albicans with average diameter of inhibition zones respectively 16.5 mm,

18 mm, 17.5 mm, 17.75 mm and 16 mm. The results of statistical analysis of ANOVA followed

by Duncan test (p< 0,01) showed that L. rubellus powder obtained very significant

antimicrobial activity against C. albicans in vitro. Lumbricus rubellus powder in

concentration of 200 mg showed the most optimal antimicrobial activity.

Keywords : Antimicrobial activity, Lumbricus rubellus, Candida albicans, Lumbricin-1


2/7

2

PENDAHULUAN

Resistensi antibiotik terhadap

mikroorganisme saat ini masih menjadi

permasalahan besar di bidang kesehatan.

Resistensi terhadap antibiotik adalah

perubahan kemampuan mikroorganisme

sehingga menjadi kebal terhadap

antibiotik. Hal ini terjadi akibat

berubahnya sifat mikroorganisme tersebut

sehingga tidak lagi dapat dimatikan atau

dibunuh. Keampuhan obat menjadi

melemah bahkan menghilang.

Mikroorganisme yang resisten terhadap

antibiotik tidak akan terbunuh oleh

antibiotik, lalu berkembang biak danmenyebar sehingga menjadi lebih

berbahaya (WHO, 2011). Antimikroba

merupakan dasar untuk terapi infeksi

mikroba (bakteri dan jamur), namun

penggunaan yang tidak rasional menjadi

faktor utama terjadinya resistensi

mikroorganisme terhadap antimikroba

(Harbottle et al., 2006).

Salah satu alternatif dalam

menanggulangi masalah resistensi

antimikroba adalah dengan menggunakanbahan alam. Penggunaan bahan alam

semakin dikembangkan oleh para ilmuwan

mulai dari tanaman hingga hewan, salah

satunya adalah tepung cacing tanah

(Lumbricus rubellus). Cacing tanah

(L.rubellus) sangat berperan dalam

kehidupan manusia dikarenakan

kandungan gizinya yang cukup tinggi,

terutama kandungan proteinnya yang

mencapai 64-76%. Kandungan lainnya

yang terdapat dalam tubuh cacing tanahantara lain lemak 7-10%, kalsium 0,55%,

fosfor 1% dan serat kasar 1,08%

(Palungkun, 1999).

Cacing tanah (L. rubellus) memiliki

senyawa antimikroba Lumbricin-1 yang

berfungsi sebagai pertahanan alami

terhadap keberadaan mikroba patogen di

lingkungan mereka (Tasiemski, 2008).

Tepung cacing tanah (L.rubellus) juga

mengandung Lumbricin-1 yang merupakan

senyawa peptida antimikroba

/antimicrobial peptide (AMP). Hasil

penelitian Dafonsa (2013) menunjukkan

bahwa tepung cacing tanah (L.rubellus)

memiliki aktivitas antibakteri terhadap

pertumbuhan bakteri MRSA (Methicilin-

resistant Staphylococcus aureus) secara in

vitro. Oktavia (2013) juga melakukan

penelitian mengenai tepung cacing tanah(L.rubellus) yang memiliki aktivitas

antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri

MDR (Multi Drug Resistant)

Pseudomonas aeruginosa secara in vitro.

Lumbricin-1 bersifat broad spectrum

sehingga tidak hanya dapat menghambat

bakteri Gram positif dan bakteri Gram

negatif, tetapi juga dapat menghambat

pertumbuhan jamur (Cho et al., 1998).

Candida albicans (C. albicans)

adalah mikroorganisme yang merupakanflora normal pada saluran pernapasan,

pencernaan, vagina, kulit dan dibawah

kuku (Simatupang, 2008). Mikroba ini

bersifat oportunistik, dapat menyebabkan

infeksi apabila terjadi perubahan

keseimbangan populasi flora normal dan

menurunnya daya tahan tubuh manusia

(Brooks et al., 2004).

Berdasarkan latar belakang di atas

maka peneliti tertarik untuk membuktikan

aktivitas antijamur spektrum luas yangdimiliki oleh Lumbricin-1 yang terdapat

dalam tepung cacing tanah (L.rubellus).

Aktivitas antimikroba difokuskan pada

sifat antijamur terhadap C.albicans secara

in vitro.


3/7

METODOLOGI

Jenis dan Rancangan PenelitianJenis penelitian ini adalah

penelitian eksperimental laboratorium

dengan menggunakan Rancangan Acak

Lengkap (RAL) yang terdiri dari 6

kelompok perlakuan yaitu 5 kelompok

dengan konsentrasi 100 mg, 200 mg, 300

mg, 400 mg dan 500 mg dalam 5 ml

pelarut asam setat dan asetonitril serta

kelompok kontrol negatif yaitu asam asetat

50% dan asetonitril 100% yang

dinormalisasikan mencapai konsentrasi

1%.

Tempat dan Waktu PenelitianPengujian aktivitas antijamur

tepung cacing tanah (L.rubellus) terhadap

C.albicans secara in vitro dilakukan di

Laboratorium Mikrobiologi Fakultas

Kedokteran Universitas Syiah Kuala.

Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei

2013.

Alat dan Bahan Penelitian

Alat-alat yang digunakan adalah

microwave, labu Erlenmeyer, gelas ukur,pinset, cawan petri, timbangan digital,

autoklaf, oven, inkubator, refrigerator,

ose, tabung reaksi beserta raknya, kapas

lidi, kertas saring, gunting, penggaris,

kertas label, mikropipet, tip, kuvet, vortex,

spektrofotometer, lampu spiritus, batang

pengaduk, spuit kaca objek dan mikroskop.

Bahan-bahan yang digunakan adalah

isolat C.albicans ATCC 10231, tepung

cacing tanah Vermihouse, alumunium foil,

selotip, kertas cakram, alkohol, akuadessteril, larutan Natrium Klorida (NaCl)

0,9%, media Sabouraud Dextrose Agar

(SDA), kristal violet, lugol, alkohol 96%,

Kalium Hidroksida (KOH) 10%, serum,

safranin, asam asetat 50% dan asetonitril.

Prosedur Penelitian

1. Sterilisasi Alat dan Bahan.2. Pembuatan Media PertumbuhanJamur.3. Penanaman Jamur.4. Reidentifikasi Jamur Candida

albicans.

5. Penyiapan Tepung Cacing Tanah(L.rubellus).

6. Penyiapan Larutan Tepung CacingTanah (L.rubellus).

7. Uji Aktivitas Antijamur TepungCacing Tanah (L.rubellus)

terhadap Candida albicans.

ParameterParameter penelitian yang digunakan

adalah besarnya diameter zona hambat

yang terbentuk di sekitar cakram yang

diukur menggunakan jangka sorong. Hasil

pengukuran dinyatakan dalam satuan

milimeter (mm).

Analisis DataData hasil penelitian yang

diperoleh dilakukan uji normalitas dan

homogenitas terlebih dahulu, jika syarat uji

normalitas dan homogenitas terpenuhi

maka data dianalisis dengan Analysis of

Variance (ANOVA). Apabila data tidak

berdistribusi normal dan homogen maka

dilakukan transformasi data dandilanjutkan uji non parametrik. Jika hasil

uji ANOVA menunjukkan adanya

pengaruh maka dilakukan uji beda Duncan.


4/7

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil Reidentifikasi Candida albicans

Hasil pemeriksaan secara makroskopis

pada media SDA memperlihatkan

pertumbuhan koloni C. albicans berbentuk

bulat, halus, berwarna krem dan berbaukhas seperti ragi. Hasil dapat dilihat pada

Gambar 1.

Gambar 1. Morfologi C.albicans

pada media SDA

Berdasarkan gambar 1. didapatkan

hasil pertumbuhan koloni yang berbentuk

bulat, dengan permukaan yang halus,

berwarna krem serta memiliki bau yang

khas seperti ragi. Hal ini sesuai denganpernyataan Brooks et al (2004) yang

menyatakan bahwa pertumbuhan C.

albicans pada media SDA yang diinkubasi

selama 24 jam pada suhu 37oC

menghasilkan koloni halus atau lunak yang

berbentuk bulat, berwarna krem dan

memiliki bau seperti ragi/tape.

Pemeriksaan mikroskopis C.

albicans meliputi uji KOH,germ tube, dan

pewarnaan Gram. Pengamatan secara

mikroskopis jamur C. albicans denganmenggunakan larutan KOH 10%

didapatkan elemen jamur yang berbentuk

seperti yeast cell. Hal ini sesuai dengan

pernyataan Kayser (2005) yang

menyatakan bahwa pada pemeriksaan

secara makroskopis uji KOH 10% terlihat

morfologi C. albicans berupa sel tunas dan

sel yeast, serta terkadang juga dapat

terlihat bagian-bagian seperti sel budding

dan miselium.

Pada ujigerm tube ditemukan bentuk

sel C. albicans yang berkecambah seperti

raket. Hal ini juga sesuai dengan

pernyataan Patrick dan Safitri (2012) yang

menyatakan bahwa pada medium yang

mengandung faktor protein, misalnya putih

telur, serum atau plasma darah dalam

waktu 1-2 jam pada suhu 37C terjadi

pembentukan kecambah dari blastospora.

Uji germ tube merupakan uji yang

membedakan C. albicans dengan jenis

candida lainnya (Brooks et al., 2004).

Pemeriksaan secara mikroskopis

jamur C. albicans dengan menggunakan

metode pewarnaan gram ditemukan bentuksel Candida albicans berupa sel yeastdan

miselium. Hal ini sesuai dengan

pernyataan Kayser (2005) yang

menyatakan bahwa pada pemeriksaan

mikroskopis melalui pewarnaan Gram

positif ditemukan C. albicans dalam

bentuk yeast, berbentuk oval dengan

diameter kurang lebih 5 m dan sering

juga ditemukan dalam bentuk miselium.

Hasil uji reidentifikasi di atas

menunjukkan bahwa mikroba uji yangdigunakan adalah benarC. albicans.

Hasil Aktivitas Antijamur Tepung

Cacing Tanah (L. rubellus) Terhadap

C. albicans.Hasil penelitian menunjukkan

bahwa aktivitas antijamur tepung cacing

tanah (L.rubellus) diperlihatkan pada

konsentrasi 100 mg/5ml, 200 mg/5ml, 300

mg/5ml, 400 mg/5ml dan 500 mg/5ml

dengan diameter rata-rata zona hambatyang terbentuk secara berurutan adalah

16,5 mm, 18 mm, 17,5 mm, 17,75 mm dan

16 mm. Pada kontrol negatif (asam asetat 4

ml dan asetonitril 1 ml yang

dinormalisasikan mencapai konsentrasi

1%) tidak terbentuk zona hambat (0 mm).

Hasil aktivitas antijamur terhadap

C.albicans dari tepung cacing tanah

(L.rubellus) dapat dilihat pada gambar 2.

dan tabel 1.


5/7

Gambar 2. Hasil uji aktivitas antijamur

Tabel 1 Hasil Aktivitas Antijamur terhadap

C.albicans dari Tepung Cacing

Tanah (L.rubellus).

Klmpk Diameter Zona Hambat (mm)

I II III IVRata-rata (mm)

SD

P0 0 0 0 0 0,0 0,00

P1 17 19 15 15 16,5 1,91

P2 17 20 17 18 18,0 1,41

P3 16 20 16 18 17,5 1,91

P4 19 17 17 18 17,7 0,95

P5 16 16 15 17 16,0 0,81Keterangan :

P0 : Kontrol negatif

P1 : Tepung cacing tanah 100 mg/5ml





Data hasil penelitian dilakukan uji

normalitas dan homogenitas dahulu dengan

menggunakan uji Shapiro-Wilk dan uji

Lavene. Hasil uji menunjukkan data

berdistribusi normal dan bervariasi

homogeny. Selanjutnya data dianalisis

dengan Analysis of Variance (ANOVA)

pada taraf kritis 1% (p < 0,01). Hasil

analisis data dengan ANOVA diperoleh

nilai taraf signifikansi adalah 0,000 (p 0,01).

Berdasarkan tabel 2, terlihat bahwa

perlakuan kontrol negatif (asam asetat dan

asetonitril) memiliki perbedaan yang

sangat nyata dibandingkan dengan

perlakuan yang menggunakan larutan

tepung cacing tanah di tiap jenis

konsentrasi uji (konsentrasi 100 mg/5ml,

200 mg/5ml, 300 mg/5ml, 400 mg/5ml dan

500 mg/5ml). Hal ini menunjukkan bahwamasing-masing konsentrasi uji memiliki

aktivitas antijamur. Hasil analisis statistik

juga memperlihatkan bahwa masing-

masing konsentrasi uji tidak menunjukkan

perbedaan yang sangat nyata dalam

menghambat pertumbuhan C. albicans

secara in vitro. Berdasarkan tabel 2. diatas

juga terlihat konsentrasi larutan tepung

cacing tanah yang paling optimal yang

dapat menghambat pertumbuhan Candida

albicans adalah konsentrasi tepung cacingtanah 200 mg dalam 5 ml pelarut.

Hasil analisis lanjutan pada

penelitian ini menggunakan uji Duncan

karena uji ini merupakan uji yang paling

teliti (Hanafiah, 2010). Analisis statistik

dengan uji Duncan pada (p < 0.01) telah

menjawab hipotesis pertama yaitu tepung

cacing tanah (L.rubellus) memiliki

aktivitas antijamur terhadap C.albicans

secara in vitro. Pada hipotesis kedua

peningkatan konsentrasi tidak diikutidengan semakin besarnya aktivitas


6/7

antijamur yang ditunjukkan terhadap

C.albicans secara in vitro. Hal ini

dikarenakan adanya perbedaan rasio antara

zat pelarut di tiap jenis konsentrasi tepung

cacing tanah. Kelarutan peptida sangat

dipengaruhi oleh rasio antara zat terlarut(tepung cacing tanah) dengan pelarut yang

digunakan (asam asetat dan asetonitril).

Pada konsentrasi 300 mg, 400 mg dan 500

mg telah terjadi kejenuhan sehingga

peptida yang terkandung tidak dapat

tertarik secara optimal.

Adanya zona hambat yang

terbentuk pada penelitian ini menunjukkan

bahwa tepung cacing tanah (L.rubellus)

memiliki zat antijamur yang dapat

menghambat pertumbuhan Candidaalbicans secara in vitro. Hal ini sesuai

dengan pernyataan Cho et al (1998) yang

menyatakan bahwa protein yang

terkandung dalam tepung cacing tanah

memiliki zat bioaktif yang dinamakan

lumbricin-1 yang mampu menghambat

pertumbuhan mikroorganisme yang

patogen. Selain itu, tepung cacing tanah

juga mengandung senyawa peptida berupa

coelomocytes (bagian sel darah putih) di

dalamnya terdapat lisozim yang berperan

dalam aktivitas fagositosis serta berfungsi

untuk meningkatkan kekebalan. Senyawa

aktif cacing tanah (L.rubellus) yang lain

yang bersifat sebagai antibakteri adalah

senyawa golongan alkaloid, senyawa

alkaloid pada cacing tanah mengandung

nitrogen dan bersifat basa (pH lebih dari 7)yang juga dimiliki tumbuhan seperti kina

dan tembakau (Zasloff, 2002).

KESIMPULAN

Kesimpulan pada penelitian ini adalah

sebagai berikut :

1. Tepung cacing tanah (L.rubellus)memiliki aktivitas antijamur

terhadap C.albicans secara in vitro.

2. Tepung cacing tanah (L.rubellus)menunjukkan aktivitas antijamur

terhadap C.albicans pada

konsentrasi 100 mg/5ml 500

mg/5ml. Peningkatan konsentrasi

tepung cacing tanah tidak diiringipeningkatan zona hambat. Hal ini

disebabkan karena rasio tepung

cacing tanah dengan pelarut tidak

seimbang sehingga peptida tidak

dapat tertarik sempurna. Aktivitas

antijamur paling optimal

ditunjukkan oleh konsentrasi 200

mg/5ml.

SARANSaran pada penelitian ini adalah

sebagai berikut :

1. Perlu dilakukan isolasi Lumbricin-1 dari tepung cacing tanah

(L.rubellus) yang berasal dari Aceh

dan diuji aktivitas antijamurnya

terhadap C.albicans.

2. Perlu dilakukan penelitian lanjutanuntuk mengatahui Kadar Hambat

Minimum (KHM) dan Kadar

Bunuh Minimum (KBM) dariLumbricin-1 terhadap C.albicans.

UCAPAN TERIMA KASIH

Selama penelitian dan penyusunan

artikel ilmiah ini penulis mendapat bantuan

dari berbagai pihak. Oleh karena itu,

penulis mengucapkan terima kasih kepada

dr. Tristia Rinanda, M.Si., dr. Fajriah,

Sp.PA., dra. Tjut Mariam Zanaria, MS. dan

Dr. Mudatsir, M.Kes. Penulis juga

mengucapkan terimakasih kepada semua

pihak yang telah membantu terlaksananya

penelitian ini.


7/7

DAFTAR PUSTAKA

Brooks, G F; Butel, J S; Morse, S A, 2004.

Mikrobiologi Kedokteran. 23rd ed.

Jakarta: EGC. pp.39-40,58-59.

Cho, J.H., Park, C.B., Yoon, Y.G. & Kim,

S.C., 1998. Lumbricin I, a novel

proline rich antimicrobial peptide

from the earthworm: purification,

cDNA cloning and molecular

characterization. Biochim. Biophys.

Acta, I(408), pp.67-64.

Dafonsa, M., 2013. Uji Aktivitas

Antibakteri Tepung Cacing Tanah(Lumbricus rubellus) Terhadap

Isolat Klinis Methicilin-Resistant

Staphylococcus Aureus Secara in

vitro. Banda Aceh: Universitas Syiah

Kuala. pp.26-34.

Hanafiah, K.A., 2010. Rancangan

Percobaan : Teori dan Aplikasi. 3rd

ed. Jakarta: Rajawali Pers. pp.37-43.

Harbottle, H., Thakur, S., Zhao, S. &

White, D.G., 2006. Genetics ofantimicrobial resistance. Anim.

Biotechnol, (17), pp.111-24.

Kayser, F.H. 2005. General Mycology.

Kayser FH, Bienz KA, Eckert J &

Zinkernagel RM. Medical

Microbiology. Thieme. Stuttgart.

pp.348-356

Oktavia, R., 2013. Uji Aktivitas Antibakteri

Tepung Cacing Tanah (Lumbricusrubellus) Terhadap Isolat Klinis

Multi-Drug Resistant Psedomonas

Aeroginosa Secara in vitro. Banda

Aceh: Universitas Syiah

Kuala.pp.29-36.

Palungkun, R., 1999. Sukses Beternak

Cacing Tanah (Lumbricus rubellus).

Jakarta: Penebar Swadaya. pp.5-20.

Patrick, D., & A. Safitri., 2012. Medicine

at a Glance. Jakarta: Erlangga.

pp.63-64.

Simatupang, M., 2008. Candida albicans.

Medan: Departemen Mikrobiologi

Fakultas Kedokteran, Universitas

Sumatera Utara. pp.3-5.

Tasiemski, A., 2008. Antimicrobial

peptides in Annelids. J. Invertebr.

Surviv, (5), pp.75-82.

World Health Organization (WHO)., 2011.

Use Antibiotic Rationally. WorldHealth Organization, p.2.

Zasloff, M. 2002. Antimicrobial Peptides

of Multicellar organisms.

Biochemistry and Biophysic,

University of Pennsylvania School of

Medicine, Philadelphia,USA. pp.

389-95.

artikel mufqi fitra

Documents