transformasi gen
Post on 06-Dec-2015
245 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
TRANSFORMASI GEN
Ir. Makhziah, MP
UPN “Veteran” Jawa Timur
1
Transformasi GenMasuknya gen target (DNA rekombinan) ke dalam sel inang.
Proses Transfer Gen:a.Biologisb.Mekanisc.Kimia
2
3
A. TRANSFER GEN SECARA BIOLOGIS
Hasil cloning gen
dikonjugasi, antara: pBR322 + pGV 3850 (E. coli) (Agrobacterium)
Jenis Agrobacterium:1.Agrobacterium Tumefacient2.Agrobacterium Rhizogen
4
1. Agrobacterium tumefaciens (At)
Penyebab tumor “CROWN GALL”
sintesis asam amino “OPINE”
sumber carbon & nitrogen
5
Nama Plasmid : Ti (Tumor inducing)
sifat : stabil dalam At. pada suhu < 30 C
Segmen Ti : Transfer DNA (T-DNA) Virulence (Vir) Konjugasi Replikasi plasmid
6
2. Agrobacterium Rhizogene (Ar)
Penyebab ” Hairy Root “
Nama Plasmid : Ri (Root Inducing)
Segmen : sama dg AtTransfer DNA (T-DNA) Virulence (Vir) Konjugasi Replikasi plasmid
7
MEKANISME TRANSFER DNA
menginfeksi sel tanamanAgrobacterium Eksudate
Asetosyringone (AS) Induksi transkripsi gen-gen vir. Aktifasi: Gen vir. A Gen vir. G Gen vir. D “Single stranded nick” “ Gen vir. E Lepasnya single stranded “T-DNA”
Integrasi dalam sel tanaman
8
9
10
11
MEKANISME TRANSFER GEN MELALUI Ti PLASMID
12
IDENTIFIKASI TRANSFORMASI Plasmid dimasuki gen ketahanan antibiotik (selectable marker)
misal: KANAMYCIN RESISTANCE
b. Analisis DNA
PCR (Polymerase Chain Reaction)
13
B. SECARA MEKANIS a. Microinjection Cara : Immobilisasi : 1. Immobilisasi protoplas Polylisine 2. Holding Pipette mobilization Efisiensi Transformasi tergantung :
Lokasi injeksiBentuk fisik DNAKonsentrasi DNA
14
TEKNIK MIKRO INJEKSI
15
Microinjection into the cell of a potato callus.
Using fine cannulae, DNA that codes for a fluorescent protein was inserted into onion cells. Two days after the injection, the green dye can be seen. The integration of the foreign DNA into the onion genome was successful
MIKRO INJEKSI pada KENTANG & BAWANG MERAH
16
b. Electroporation Listrik tegangan tinggi (± 2500 V) “Reversible Break-Down” membran protoplas DNA masuk ke protoplas Faktor-faktor yang mempengaruhi :1.Voltage2.Waktu3.Umur sel/jaringan4.Bagian tanaman
17
18
19
PROSES TRANSFER GEN CARA ELEKTROPORASI
20
PERALATAN ELEKTROPORASI
21
ELEKTROPORASI PADA JAGUNG
22
Particle BombardmentDigunakan untuk memasukkan DNA/ gen ke dalam tanaman yang sulit diregenerasikan dari protoplas Particle :Gold Coated DNA/GeneTungsten Yang digunakan gas : Helium
23
24
PERALATAN PARTICLE BOMBARDMENT
25
MEKANISME PENEMBAKAN GEN by PARTICLE BOMBARDMENT
26
PENEMBAKAN GEN PADA TANAMAN PISANG
27
The End
top related